动物饲料组合物和饲料添加剂的制作方法

相关的申请本申请要求于2014年7月29日提交的临时申请ussn62/030,460和于2014年12月11日提交的临时申请ussn62/090,756的优先权，其内容通过引用以其整体并入本文。发明领域本发明涉及动物饲料组合物和饲料添加剂，其包含益生元、益生菌和益生菌代谢物(post-biotic)材料的混合物，及其在促进动物生长、健康和营养中的应用。技术实现要素：益生元、益生菌和益生菌代谢物是相对新的术语，其用于描述一系列已证实在动物健康和营养中的益处的材料。通常地，术语益生元是指刺激动物消化系统中的细菌的生长和/或活性的材料，其产生有益的健康效果。益生元可以是选择性发酵的成分，其允许胃肠道微生物群落的组成和/或活性二者中的特异性变化，这赋予宿主健康益处。益生菌通常是指有助于肠道微生物平衡的微生物，其进而在维持健康中发挥作用。很多种类的乳酸菌(lab)例如乳杆菌属(lactobacillus)和双歧杆菌属(bifidobacterium)通常被视为益生菌，但还发现一些芽孢杆菌属(bacillus)的物种，以及一些酵母为适合的候选者。益生菌代谢物是指来自在宿主中具有生物活性的益生菌生物的非活细菌产物或代谢副产物。益生菌用于改善动物健康和营养的用途详实记载于文献中。此外，益生元和益生菌代谢物提供了活微生物应用的潜在替代或辅助治疗。人们愈发了解益生元、益生菌和益生菌代谢物对免疫反应调节的影响，更具体地，它们在调节细胞因子的表达中的作用，所述细胞因子调控在局部和全身水平上的炎症反应。益生菌的摄取，例如，可以潜在地通过减少局部促炎性细胞因子的生成而稳定肠粘膜中的免疫屏障。通过益生菌治疗改变固有微生物群落的性质显示逆转人的克罗恩病，食物过敏和特应性湿疹的特征中的一些免疫紊乱[4,7-10]。多种益生菌物种或其后益生产物在健康人类患者，具有炎性肠病的人类患者和小鼠模型中诱导保护性细胞因子，包括il-10和tgf-β，并且抑制促炎性细胞因子，例如tnf[1,2,11]。假设在动物中可实现相当的益处。尽管对这些主张的每一条都有提示性证据，但这些机制后的分子细节仍几乎完全未确定。不希望受到理论束缚，认为这些机制允许使用包含益生元、益生菌和益生菌代谢物的饲料饲养动物，以将用于保持强大的免疫系统的能量转移，并将其重新导向用于生长和发育。因此，有相当大的兴趣使动物饲料包含含益生元、益生菌和后益生材料。例如，俄罗斯专利2018313公开了粉状喷雾干燥的动物饲料，其基于乳并且包含某些双歧杆菌和链球菌。尽管其提及饲料可饲喂给宠物，但所述动物饲料的主要目标是牲畜。尽管对各种“益生”治疗的益处的兴趣不断增长，组合的益生元、益生菌和后益生治疗对动物健康和营养的有益作用并没有多少记载。对于将这些治疗组合以提供在商业牲畜和伴侣宠物护理行业二者中的一些列益处的组合物，仍有机会。
发明内容包含益生元、益生菌和益生菌代谢物的混合物的动物饲料组合物，及其制备方法，如通过特定生化标记物(例如，血糖水平、脂质化学、肝功能、全血计数、甲状腺功能和炎症标记物如esr和c反应蛋白)，总生理指标(例如体重增加，死亡率百分比)和/或饲料转化率所示，其在整体健康和营养中有用。在多个方面，本发明提供了动物饲料组合物，其包含可用于促进动物生长、健康和营养的微生物的混合物。所述动物饲料组合物包含益生元；益生菌(其包含由固相基质和深层液体发酵生产的乳杆菌属微生物的混合物)；芽孢杆菌属益生菌（其通过深层液体发酵生产）；源自乳杆菌属物种的液体发酵培养基的益生菌代谢物；和填料材料的混合物。所述益生元是菊粉、低聚果糖或低聚葡糖。所述乳杆菌属的混合物包含乳酸片球菌(pediococcusacidilactici)、戊糖片球菌(pediococcuspentosaceus)和植物乳杆菌(lactobacillusplantarum)。在一些方面，所述乳杆菌属的混合物是通过将固相基质发酵的乳酸片球菌、戊糖片球菌和植物乳杆菌混合制备；并且通过深层液体发酵生产单个乳杆菌属物种，其中所述乳杆菌属细菌的每一种单独地厌氧发酵，收获，干燥并研磨，以产生具有295微米的平均粒径的粉末，所述混合物的60%的大小范围在175-900微米之间。优选地，将来自固相基质和液体发酵的乳杆菌属以相等的重量比例混合。在一些方面，枯草芽孢杆菌(bacillussubtilis)具有seqidno:l的16s核酸序列。通过从单独厌氧发酵的乳酸片球菌、戊糖片球菌和植物乳杆菌的每一种的离心收集上清；将从步骤(a)获得的上清组合；将混合的上清冷冻干燥至小于约5重量%的含水量；并将干燥的混合上清研磨至295微米的平均粒径，并且所述混合物的60%的大小范围在175-900微米之间，从而制备益生菌代谢物。所述填料是例如米糠、大豆麸或麦麸，米粉、大豆粉或小麦粉，玉米粉，黑麦，大麦，高粱，葡萄糖，蔗糖，果糖，麦芽糖糊精，淀粉，或其任意组合。将益生元，乳杆菌属益生菌和益生菌代谢物组分以相等的重量比例组合。在其他方面，将芽孢杆菌属益生菌与益生元、乳杆菌属益生菌和益生菌代谢物混合物以1:1至1:20的比例混合。益生元、益生菌和益生菌代谢物组分与谷物颗粒填料的比例在约1:1至约3:1的范围。最终细菌浓度在约106和1011菌落形成单位(cfu)/克之间。本发明还包括动物饲料组合物，其包被0.01至0.5%的本发明的组合物。在一些方面，使用蜡、脂肪、糖或多糖粘合剂将所述益生元、益生菌和益生菌代谢物混合物包被到饲料颗粒上。可选地，将所述益生元、益生菌和益生菌代谢物混合物整合到饲料颗粒，浆饲料中，或溶解到动物的饮用水供应中。例如，将所述益生元、益生菌和益生菌代谢物混合物以约0.1至1kg/1000升，供料到水供应中。本发明进一步提供了通过向动物施用根据本发明的动物饲料、饲料添加剂或补充剂，改善动物的健康和疾病抗性的方法。所述方法通过提高增重、减少废气或增加饲料蛋白的利用，来改善动物的健康。所述动物是例如虾、鱼类（finfish）、家禽、猪、反刍动物或伴侣宠物。除非另有定义，本文使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属领域的一位普通技术人员通常所理解的相同含义。尽管下文描述了适合的方法和材料，但与本文所述那些相似或等效的方法和材料也可以用于本发明的实践。本文中提及的所有出版物、专利申请、专利和其他文献均通过引用以其整体明确并入。在矛盾的情况下，以本说明书(包括定义)为准。此外，本文描述的材料、方法及实例仅为说明性的且无意限制。本发明的其他特征和优点将体现并涵盖在以下具体说明和权利要求书中。附图说明图1显示了每种处理的平均生长的结果。图2显示了每种处理的平均重量变化。图3显示了fcr改善%与剂量的比较。发明详述本发明提供了由特定益生元、益生菌和益生菌代谢物的混合物组成的组合物，其用作动物饲料、饲料添加剂或饲料补充剂。除非另有说明，否则本文中提及的所有百分比均为基于组合物的总重量的重量百分比。所述组合物的益生菌组分包含益生菌枯草芽孢杆菌、乳酸片球菌、戊糖片球菌和植物乳杆菌的混合物。在优选的实施方式中，本发明的组合物包含10-20重量%之间的乳酸片球菌、戊糖片球菌和植物乳杆菌的每一种，和1至约5wt%的枯草芽孢杆菌。在优选的实施方式中，所述枯草芽孢杆菌具有以下的16s序列：根据本发明，待使用的益生细菌的水平将取决于其类型。优选本产品包含105至1011菌落形成单位(cfu)/克之间的量的益生细菌。在本发明的特别优选的组合物中，乳杆菌属和芽孢杆菌属生物体以至少1x108cfu/g的水平存在。如本文使用的术语“益生细菌”或“益生菌”是指在以足够的量施用时赋予健康或营养益处的微生物。根据本发明的益生菌可以是活的或非活的。在益生菌是非活的情况下，它们必须是在结构上基本完整的，这意味着这些非活的微生物仍足够完整以避免或延迟在远端肠道中的分解，从而使得所述非活的微生物(的保守结构)能够与免疫系统，特别是面膜免疫系统相互作用。所述非活的益生菌在代谢上是有活性的。所述“在代谢上是有活性的”是指它们展现出对该类型的益生菌为特征性的至少一些残余酶活性。如本文使用的术语“非活的”是指在任何已知条件下不能复制的细菌的群体。然而应理解，由于群体中正常的生物变化，小比例的群体(即5%或更少)可仍然是活的，并且因此能够在其他情况下定义为非活的群体中，在适合的生长条件下复制。如本文使用的术语“活细菌”是在可以复制的适合条件下，能够复制的细菌的群体。不满足“非活的”定义(如上文给出的)细菌的群体被认为是“活的”。如本文使用的术语“生物活性组分”是指在以足够的量服用时，具有对动物的生理作用的组分。在本发明的一些实施方式中，所采用的益生细菌是活益生细菌。活益生细菌的应用提供了以下优点，即这些益生细菌可成为肠道微生物群落的一部分，从而提供额外的健康益处。根据本发明的益生细菌可使用本领域中已知的任何标准发酵方法生产。例如，固态或深层液体发酵。发酵的培养物可以是混合的培养物或单独的分离物。益生菌代谢物组分组分源自在乳杆菌属生物体离心后剩余的发酵上清，并且包含5至约20重量%的所述组合物。所述益生元组分包含葡糖-和/或果糖-低聚糖(例如蔗果三糖、蔗果四糖、果糖基蔗果四糖、bifurcose、菊粉二糖、菊粉三糖、菊粉四糖)，包括来自菊粉代谢的发酵产物。在优选的实施方式中，所述后益生组分占所述配方的0.1至10wt%。此外，所述制剂可包含高至约50重量%的谷物颗粒填料，例如nutri-sure™，葡萄糖，或其他适合的填料材料。本发明的组合物经配制用于在动物饲料中施用，包括浆剂和颗粒，但也可送给饮用水供应递送。在一个优选的实施方式中，将所述组合物配制到饲料浆中。在另一个优选的实施方式中，将所述组合物配制到饲料颗粒中。在又另一个优选的实施方式中，将所述组合物直接配制到动物的饮用水供应中。这些组合物改善动物的健康，包括提高增重、减少废气或增加饲料蛋白的利用。在配制用于动物饲料时，所述组合物通常以0.1至1kg/公吨饲料之间供料。优选地，所述饲料组合物以50、100、200、300、400、500、600、700、800、900或更多克/公吨饲料供料。在饮用水中供料时，所述组合物通常以0.1至1kg/1000升之间供料。对于水生应用，即虾或鱼类，所述组合物通常以0.1至10ppm供料。例如，对于水生应用，所述饲料组合物以0.1、0.2、0.25、0.5、1、1.5、2、2.5、3、3.5、4、4.5、5、5.5ppm供料。优选地，所述饲料组合物以0.25或2.5ppm供料。在一些方面，将所述饲料组合物以约0.05%至5%添加到饮食上面。优选以0.05、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、2.0、3.0、4.0或5.0%。所述组合物的益生元、益生菌和益生菌代谢物组分优选为粉末、干燥形式，特别是对于形成孢子的那些益生菌微生物，为孢子形式。根据本发明的组合物已经冷冻干燥至水分含量小于20%、15%、10%、9%、8%、7%、6%、5%、4%、3%、2%或1%。优选地，根据本发明的组合物已经冷冻干燥至水分含量小于5%。在一些实施方式中，将冷干粉研磨以降低粒径。例如，所述粒径是小于1000、900、800、700、600、500、400、300、200微米或更小。优选地，将所述冷干粉研磨以降低粒径，从而使所述粒径小于800微米。在各个实施方式中，将所述冻干粉均质化。进一步地，如果需要，可将组合物包封或结块以进一步提高存活的可能性；例如，在蜡基质、糖基质、脂肪基质或多糖基质中。本发明的组合物用于生产动物饲料产品和补充剂，或作为动物饲料添加剂使用。尽管可以通过将所述益生元、益生菌和后益生组合物与动物饲料简单混合，或通过将所述组合物作为饲料补充剂使用，而达到本发明的益处，但本发明的目标是提供包含均衡饮食配给和本发明组合物二者的即食型饲料产品。可将所述饲料补充剂作为干燥粉末或液体提供。或者，可将本发明的组合物配制成“舔块”。可以通过使用益生元、益生菌和后益生混合物包被预生产的即食型动物饲料产品，而生产所述饲料产品。可以通过本领域中已知的方法完成动物饲料产品的包被。例如，可将本发明的干燥组合物分散在添加动物饲料产品的低熔点油脂或蜡中，或可选地，将包含益生元、益生菌和后益生混合物的熔融油脂或蜡喷到动物饲料产品上。此外，可通过将益生元、益生菌和后益生混合物与任何适合的成分，例如常用于动物饲料产物中的那些，来制备包含本发明组合物的饲料产物。随后，根据需要，可以很多不同的方式生产动物饲料。然而，用于生产本发明的饲料产品的特别适合的方式是通过挤压蒸煮。这可以通过本领域中熟知的方法完成。例如，在一个适合的方法中，将饲料混合物送入预处理器中。所述饲料混合物由淀粉源和其他成分，例如糖、盐、香料、调味剂、维生素、矿物质、调味剂、着色剂、抗氧化剂、蛋白质源、酵母提取物、脂肪等构成。适合的淀粉源是例如玉米、水稻、小麦、甜菜、大麦、藻类、大豆和燕麦。所述淀粉源可以是谷物、膳食、谷蛋白或面粉。适合的蛋白质源可选自任何适合的动物或植物蛋白质源；例如肉粉、骨粉、鱼粉、大豆蛋白浓缩物、乳蛋白、谷蛋白、酵母提取物，乳清等。蛋白质源的选择可以在很大程度上由营养需求、适口性考虑以及所生产的饲料产品的类型决定。当然，淀粉源也可以是蛋白质源。如果需要，也可包括不溶纤维源，例如麦麸、玉米糠、米糠、黑麦麸等。如果需要，也可包括可溶纤维源，例如菊苣纤维、燕麦麸浓缩物、瓜尔胶、角豆胶、黄原胶等。取决于饲料产品的期望形式，饲料混合物的淀粉含量可以改变。例如，对于膨化谷物产品，饲料混合物优选包括高至约40重量%的淀粉。然而，对于片状产品，不必在饲料混合物中使用大量的淀粉，诶，可以将非膨化产品压片。在预处理器，将水或蒸汽或二者混合到饲料混合物中。将足够的水或蒸汽混合到饲料混合物中，以润湿所述饲料混合物。如果需要，可在预处理器中将饲料混合物的温度提高至约60-90℃。不必对饲料混合物进行预处理，但进行预处理是有利的。随后，将离开预处理器的润湿饲料与益生元、益生菌和后益生组合物一起进料至挤出机。挤出机可以是任何适合的单螺杆或双螺杆蒸煮挤出机。适合的挤出机可以得自wengermanufacturinginc,clextralsa,buhlerag等。在通过挤出机期间，润湿的饲料通过蒸煮区，在此对其进行机械剪切和加热，例如高达最高至约150℃的最高温度，和成形区。根据需要，成形区的表压为约300kpa至约10mpa。如果需要，可将水或蒸汽或二者引入到蒸煮区中。如果需要，可将少量的食用油与润湿的饲料一起进料至挤出机中，以促进挤出过程或作为油溶性添加剂的载体。可以使用任何适合的油，例如植物油，如向日葵油、红花油、玉米油等。如果使用油，则特别优选单不饱和物高的油。还优选氢化油或脂肪。优选所使用的油的量保持低于约1重量%。用力使离开挤出机的食品基质通过适合的模具。具有对应于模具孔的横截面形状的成形的挤出物离开模具。如果要生产片状产品，随后可将小块转移到压片装置。适合的装置是熟知的并且广泛用于谷物工业中，并且可以购自例如瑞士的buhlerag。如果需要，可以在压片前，将小块部分干燥。随后，将小块干燥至低于约10重量%的含水量。如常规地，这在热风干燥剂中方便地进行。干燥的即食型产品包含约105至约1011个菌落形成单位(cfu)/克(g)的干燥饲料产品；优选约106至约109cfu/g。干燥的饲料产品可包含0.01至0.5重量%的益生元、益生菌和益生菌代谢物的混合物。可对上述实施方式进行多种改变。例如，不必通过挤出蒸煮生产谷物产品。相反，谷物产品可以通过生产干燥的即食型谷物小块的任何适合方法生产。例如，可以用水蒸煮饲料材料以提供蒸煮的糊。随后，将所述糊辊式干燥以生产干燥的片，通常厚度为约0.6至约1mm。以下实施例给出了对本发明的更好的理解，所描述的实施例是用于说明性的但不应被解释为限定本发明。实施例实施例1：组合物的制备本发明的组合物通过深层液体发酵和固相基质发酵的组合而制备。预混物a：乳杆菌属的固相基质发酵：使用标准厌氧深层液体发酵方案，在分离的发酵罐中培养乳酸片球菌、戊糖片球菌和植物乳杆菌的单独的纯化分离物。通过离心从发酵罐回收单独的生物体，以基于重量的相等比例混合在一起，随后添加至以下混合物：1份菊粉、2.2份分离的大豆蛋白、8份大米粉和0.25%w/w氯化钠、0.045%w/w碳酸钙、0.025%w/w硫酸镁、0.025%w/w磷酸钠、0.012%w/w硫酸亚铁和29.6％水。允许这种混合在30ºc下发酵达5天。在发酵完成后，将整个混合物冷冻干燥至含水量小于5%，研磨至295微米的平均粒径，且60%的产物粒径范围在175-840微米之间，并均质化。粉末化产品的最终微生物浓度在109和1011cfu/g之间。预混物b：乳杆菌属的深层发酵：使用标准厌氧深层液体发酵方案，在菊粉的存在下，在分离的发酵罐中培养乳酸片球菌、戊糖片球菌和植物乳杆菌的单独的纯化分离物。发酵后，将单独的培养物过滤、离心并冷冻干燥至含水水平小于约5%，随后研磨至295微米的平均粒径，且60%的产物粒径范围在175-840微米之间，并均质化。粉末化产品的最终微生物浓度在109和1011cfu/g之间。预混物c：发酵上清：收集从上文预混物b的深层发酵物生产的，生物体离心后剩余的上清，混合在一起，冷冻干燥至含水水平小于约5%，随后研磨至295微米的平均粒径，且60%的产物粒径范围在175-840微米之间，并均质化。预混物d：芽孢杆菌属的深层发酵：将枯草芽孢杆菌(34klb)的样品添加到250ml锥形烧瓶，其还包含100ml蒸馏的去离子水、2克营养肉汤、2克amberferm(酵母提取物)和4克麦芽糖糊精的无菌溶液。将烧瓶密封并放置在30ºc的轨道摇床上。允许培养物生长3-5天。通过向具有900ml蒸馏的去离子水的1升烧瓶添加18克营养肉汤、18克amberferm和36克麦芽糖糊精制备更大的培养物。将烧瓶密封并灭菌，如上文所述。冷却后，添加100ml的来自所述250ml锥形烧瓶的微生物培养物。将所述1升烧瓶密封，放置在定轨摇床上，并允许在30ºc生长另外的3-5天。在引入到发酵罐之前的最终培养期中，将来自1升烧瓶的培养物在无菌条件下转移到无菌的6升容器，并在30ºc持续通气发酵直到达到稳定期。将所述6升培养烧瓶的内容物转移到发酵罐中，其还装有由1份酵母提取物和2份葡萄糖制成的无菌生长培养基。所述发酵罐在ph7.0和35ºc的有氧条件下运行，直到细胞密度达到1011cfu/ml。对于干燥的产物，通过滤器清空所述发酵罐，离心并回收细胞团块。将细胞团真空干燥直至含水水平降至低于约5%。干燥产品的最终微生物活性通常在约108和1011cfu/g之间。通过将预混物a、b和c以相同的重量比例组合，并混合至均匀，随后在预混物d和填料中混合来制备最终的组合物。通常，最终的益生元、益生菌和后益生组合物包含50重量%的组合的预混物a、b和c，3.33重量%的预混物d，和46.67重量%的nutri-sure™。在此制剂中的乳杆菌属的最终活性是6.9x109cfu/g，并且芽孢杆菌属的最终活性是3.7x108cfu/g。实施例2：动物饲料产品的配制——包被通过以下方法，将来自实施例1的混合物配制到动物饲料颗粒(虾、家禽、猪和牛)上：a.将1千克的低熔点油脂(例如，具有47-48oc熔点的氢化大豆油)加热至稍高于所述熔点(50oc)。一旦所有的油脂都熔化，在快速搅拌下，将来自实施例1的1千克的干燥粉末化组合物分散至所述熔化物中。随后，快速地向此熔化物添加999千克的动物饲料颗粒，并快速搅拌以获得均匀的包衣。允许所述颗粒在室温下风干过夜。包衣颗粒的最终微生物活性在107和109cfu/g之间。b.可选地，将低熔点油脂(例如，具有47-48oc熔点的氢化大豆油)添加至罐中，并在搅拌下加热至50oc。将熔化的油脂喷到由增压空气加热至约45oc的饲料颗粒的搅拌床上。油脂的最终重量在1至5%w/w的范围。将来自实施例的干燥组合物以0.01和1%w/w的重量添加至包被饲料，关闭加热气流，并允许所述床混合和干燥，直到其达到室温。c.在剧烈搅拌下，将来自实施例1的1千克的干燥粉末组合物分散到10千克的沙丁鱼油中。在持续搅拌下，以1kg/分钟的速率将此混合物喷洒到饲料颗粒的床上，在以60赫兹操作的带式掺合器中混合，以达到1%w/w的最终装载。实施例3：动物饲料产品的配制——挤出制备以下的干燥混合组合物：成分干燥混合物中的水平(%)经研磨的玉米(200微米)64.0经研磨的大豆粉(200微米)29.5与足够的水混合，以制备100%组合物，并在高温(120-150oc)下，混合20分钟。在此过程期间，可向此混合物添加脂肪(2.6%w/w)。在蒸煮后，将混合物输送到wengertx52双螺杆挤出机中，并将螺杆设置在输送配置(低剪切，低摩擦)中，并以23.5kg/hr的速率添加水。通过accurate螺杆进料器，以足以达到0.1wt%的最终组合物的速率，将来自实施例1的粉末组合物称量到挤出机中。将所产生的糊料推过具有3mm开口的模具。使用四刃转刀将挤出物切成3mm长度。收集所得的颗粒，并输送通过35oc的加压气流，对流干燥炉，直到含水水平低于10%。最终组合物的微生物活性在106-108cfu/g之间。实施例4：虾饲养试验在德克萨斯州阿兰萨斯港的texasa&magrilife海洋养殖实验室进行53天的虾饲养研究。将具有0.005克的平均初始重量的pl10动物平均分在三个处理罐中：•对照(仅蔗糖)•0.25ppm剂量的来自实施例1的组合物•2.5ppm剂量的来自实施例1的组合物。每个罐中的放养密度为3384只虾/m2。对所有罐，经过0-5天，以基于降低fcr的40%蛋白质饮食进行饲养。在0-3天，除fcr中所需的饲料之外，每天添加9g的45%蛋白标准参考饮食(srd)。考虑罐中的剩余饲料，水质和生物絮凝水平，每天评估饲料蛋白率和fcr。每天在早晨喂养期间，添加作为液体(溶解在水中的干燥组合物)的实施例1组合物。使用软水交换管道系统。在53天后，研究终止，并测定每个管中的平均虾重量。(图1和图2)。实施例5：家禽饲养研究在环境受控的禽舍进行研究。鸟圈养在畜栏中(17只鸡/m2)。将落地畜栏分配至6种处理：1.对照浆饲料2.对照颗粒饲料3.100g实施例1组合物/吨浆饲料4.1,000g实施例1组合物/吨浆饲料5.100g实施例1组合物/吨颗粒饲料6.1,000g实施例1组合物/吨颗粒饲料。安排实验畜栏的分布以避免禽舍中位置的任何影响。所述畜栏在它们之间具有双层丝网，以放置不同畜栏中的鸟之间的物理接触，并且使芽孢杆菌属孢子的交叉污染的风险最小化。鸟可自由获得饲料和水。每个畜栏装备将以每天手动填充的料斗进料器。使用新刨花作为垫物。在前三天，将初始孵化温度保持在30ºc，并且随后到实验结束时，逐渐降低至20ºc。在生活的前两天，提供24小时的光照，其在随后的12天减少至22小时，并且在试验的剩余时间降低至20小时。根据所提供的指示，在第一天进行艾美球虫疫苗接种(通过在孵化所中喷洒球虫活疫苗)。不对鸡进行针对其他疾病的疫苗接种。在试验的1至42天期间，使用没有抗生素和球虫抑制剂的基本饮食。成分(g/kg)为：玉米450、大豆粉48％185、全脂大豆135，小麦200和维生素-矿物质起动预混物30。营养分析(g/kg)为：粗蛋白200；醚提取物72；粗纤维41；灰分64；赖氨酸11_5；甲硫氨酸4_6；胱氨酸4_4。以100g/t和1000g/t饲料向浆饲料和颗粒饲料添加实施例1的组合物。在从孵化场到达后，以及在7、14、21、28、35和42天，对所有鸟单独称重。以畜栏为基础记录饲料消耗，同时作为活重记录。调整的饲料转化率(fcr)结果显示在图3中。包含实施例1的组合物的颗粒饲料显示相对于对照fcr的显著改善。实施例6：家禽饲养研究在具有粘土底板的煤渣块结构中进行研究。提供持续的光照。将鸟圈养在畜栏(27只/畜栏)中，其提供0.74ft2/只鸟的放养密度。将落地畜栏分配至6种处理(每个处理10个重复畜栏)：1.对照浆饲料2.对照颗粒饲料3.50克的5%剂量的组合物1/mt浆饲料中4.500克的5%剂量的组合物1/mt浆饲料中5.500克的2%剂量的组合物1/mt颗粒饲料中6.500克的4%剂量的组合物1/mt颗粒饲料中。在第0天使用新刨花，并在第4天以每个畜栏相等的量(4lb./畜栏)引入使用过的垫物。在放置之前，将第4天添加的垫物均一化，并且包含足够水平的大肠杆菌(e.coli)、沙门氏菌和梭菌，以允许对未经治疗的鸡的适度攻击。在试验开始之前，对所有畜栏仔细检查以确保没有允许肉鸡在畜栏之间移动的开口。鸟可自由获得饲料和水。在第0天放置和称重之前，使用coccivac®-b对鸟进行针对球虫病的喷雾疫苗接种。在研究期间，每天检查所有畜栏。观察包括饲料和水的可得性，以及孵化器控制，以达到期望的温度。以0-14、15-28和29-42天分别为起始、生长和终止饲料的方案投放浆形式的饲料。如附件a中所示，从大基础饮食制备每种饲料类型，并分成等分试样，并随后与测试物混合，此后如上文所述将三份的饮食粒化。附件a–饲料配方如上文所述，向浆饮食和颗粒饮食添加实施例1的组合物。按照畜栏，在第0、35和42天对所有鸟称重，并且在第14、28和42天称量所有畜栏饲料。下文显示了第42天的体重(bw)和调整的饲料转化率(fcr)结果。包含实施例1的组合物的颗粒饲料显示超过对照饮食的5.44%的增重改善，和3.2%的fcr改善。对饲料转化率(fcr)进行重量调整。实施例7：猪饲养研究–美国方案从伊利诺伊大学进口猪研究实验室获得总计144只断奶仔猪(72只阉公猪、72只小母猪；18-21日龄)。每个畜栏两只阉公猪和两只小母猪，并且在整个试验中，猪随意获得饲料和水。根据随机完全分隔设计，在断奶时，根据体重和世系分隔猪。采用标准的三期饲养方案：项目，%1期2期3期经研磨的玉米31.2647.3457.90干乳清25.0020.005.00大豆粉20.2423.6931.18乳糖10.00--appetein7.503.00-choicewhite油脂3.003.003.00石灰石1.141.090.90磷酸二钙0.630.851.35氯化钠0.100.10-矿物预混物0.350.350.35维生素预混物0.200.200.20l-赖氨酸hcl0.040.050.02d,l-甲硫氨酸0.140.070.02氧化锌0.400.26-硫酸铜--0.08以0、0.05或0.5%将实施例1的组合物添加到各期饮食的上部，以产生三种实验饮食处理。1期和2期各饲喂1周，并且在研究的最后两周饲喂3期饮食。对3种处理的每一种有12个重复的畜栏，并且每个畜栏包含4只猪。配制饮食以满足或超出基于nrc(2012)的生长期的营养需求。在4周的时期中每周记录猪和饲料重量以测定体重(bw)、平均日增重(adg)和平均日采食量(adfi)，由此计算每周和整体的f:g。相对于对照腿的饲料转化改善百分比显示在图3中。实施例8：猪饲养研究–泰国在90天的生长实验中，使用养殖棚中的8个畜栏，每个畜栏安置45只猪(总计360只，8周龄，初始平均bw=19.5kg)。在试验过程中，以典型的浆饮食饲养猪，其包含实施例1的组合物。根据完全随机的设计分配猪，每个畜栏45只猪，并且有4个重复。处理为：1.对照(无添加的biology)2.实施例1的组合物，200克/吨浆饲料。在90天后，平均每天体重增重为15%，并且相对对照的饲料转化改善百分比为6.3%。实施例9：奶牛饲养研究对1200头奶牛，以5%的成品饲料配给的当量，向液体饲料添加剂添加实施例1的组合物。以这种饮食饲喂奶牛30天的时期。在这段时间记录奶生产，并与前一月比较。观察到与前一月相比奶生产增加1.9%且奶油含量提高3.8%。当前第1页12