本发明涉及畜禽饲料
技术领域：
，尤其涉及一种奶牛用中草药益生菌复合生物制剂及其制备方法。
背景技术：
：奶牛隐性乳房炎是一种常见的、复杂的、造成奶牛业严重损失的严重疾病，不仅严重影响乳牛的利用年限、产乳数量和乳品质量，而且有害于食品卫生和人类健康。长期以来，养牛户大多采用向奶牛长期喂食抗生素的方式来预防奶牛隐性乳房炎。抗生素具有杀灭细菌和抑制致病微生物的作用，因此这种喂养方式在实际生产中起到了一定的预防奶牛隐性乳房炎的效果。但是，这些抗生素会随着人们食用牛奶以及各种牛奶制品进入人体，这就间接导致了抗生素的滥用，有可能引发多种药源性疾病，甚至会产生新的“超级耐药菌”，因而这种喂养方式严重威胁着人类的生命健康。技术实现要素：本发明的目的是为了克服现有技术的不足，提供一种奶牛用中草药益生菌复合生物制剂，通过益生菌与中草药的相互协调作用，在中草药存在的情况下，益生菌的生长力增强，益生菌对中草药的代谢有促进作用，益生菌能有效补充、调节或维持动物肠道内微生态平衡，提高奶牛采食量，可以激活全身血液中的免疫细胞，促进机体产生免疫球蛋白，提高奶牛乳汁中免疫球蛋白G和M水平，增强奶牛的免疫力；中草药组分具有行血通经，催生下乳，消肿敛等功效，还能够分泌抗菌类物质，有效预防和治疗奶牛乳房炎等炎症，将益生菌和中草药进行复配能够实现协同效应，大大增强奶牛的免疫能力，促进奶牛泌乳及提高奶水质量；增强治病性能和促生长性能，有效治疗和预防奶牛隐性乳房炎，进而完全取代抗生素的使用。为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：一种奶牛用中草药益生菌复合生物制剂，包括中草药和复合益生菌，按重量份计，所述中草药由以下组分组成：昆布30-40份、熟地30-40份、麦蓝菜30-40份、通草30-40份、党参20-30份、益母草20-30份、板蓝根20-30份、红景天20-30份、蒲公英10-18份、柴胡10-18份、大青叶10-18份、龙胆草5-8份、山楂5-8份、石菖蒲5-8份；所述复合益生菌由以下菌种组成：枯草芽孢杆菌5-10份、苏云金芽孢杆菌3-5份、嗜酸乳杆菌3-5份、啤酒酵母菌5-10份。所述的奶牛用中草药益生菌复合生物制剂的制备方法，包括以下步骤：(1)按重量份比例取各中草药，将中草药分别粉碎后，过筛，混合，加水浸泡，蒸煮三次，将蒸煮后的滤液和药渣混匀，冻干，制得中药冻干粉；(2)将枯草芽孢杆菌、苏云金芽孢杆菌、嗜酸乳杆菌、啤酒酵母菌分别放在培养基中进行培养，然后进行纯化培养，分别得到枯草芽孢杆菌菌液、苏云金芽孢杆菌菌液、嗜酸乳杆菌菌液、啤酒酵母菌菌液；将枯草芽孢杆菌菌液、苏云金芽孢杆菌菌液、嗜酸乳杆菌菌液、啤酒酵母菌菌液混合，得到混合菌液；(3)按重量份计，将中药冻干粉20-30份放入发酵罐内，然后加入生物酶5-7份、低聚半乳糖10-15份、安琪酵母5-10份，再加入混合菌液5-10份，密闭，发酵；发酵采取厌氧发酵的方式，连续发酵时间为30-40小时，PH为3.8-4.0。步骤(2)中所述枯草芽孢杆菌菌液的制备方法为：称取枯草芽孢杆菌用无菌水配制成质量体积比为3-5％的菌液，然后量取菌液0.1ml接种于LBG液体培养基上于37℃培养24h，芽孢率达到75％以上时，使发酵液降温至20℃，即得枯草芽孢杆菌菌液。步骤(2)中所述苏云金芽孢杆菌菌液的制备方法为：称取苏云金芽孢杆菌用无菌水配制成质量体积比为3～5％的菌液，然后量取菌液0.1ml接种于TPY液体培养基上于37℃培养24h，芽孢率达到75％以上时，使发酵液降温至20℃，即得苏云金芽孢杆菌菌液。步骤(2)中所述嗜酸乳杆菌菌液的制备方法为：称取嗜酸乳杆菌用无菌水配制成质量体积比为3-5％的菌液，然后量取菌液0.1ml接种于DMRS液体培养基上于37℃培养24h，芽孢率达到75％以上时，使发酵液降温至20℃，即得嗜酸乳杆菌菌液。步骤(2)中所述啤酒酵母菌菌液的制备方法为：称取啤酒酵母菌用无菌水配制成质量体积比为3-5％的菌液，然后量取菌液0.1ml接种于马铃薯葡萄糖液体培养基上于37℃培养24h，芽孢率达到75％以上时，使发酵液降温至20℃，即得啤酒酵母菌菌液。步骤(3)中所述生物酶选自淀粉酶、纤维素酶、果胶酶、氯化溶菌酶中的至少一种。本发明中所述中草药组分各药物的药理特性如下：昆布：滋阴平肝、抑气散结，有机碘含量高并富含通乳因子可提高产奶量。熟地：具有补血滋阴的功效。麦蓝菜：含有多种皂甙，具有活血通经，消肿止痛，催生下乳的功能。通草：味甘、淡，性微寒，具有清热利水，下乳通窍等功效。党参：味甘性平、补中益气、和脾胃，其活性成分皂甙能提高机体免疫力。益母草：活血祛瘀，含多种生物碱和有机硒，可提高机体的免疫力。板蓝根：具有清热解毒，凉血消炎，其活性成分靛蓝、靛玉红等具有抗病原微生物、增强免疫功能。红景天：主要活性成分为黄酮和红景天苷不仅能提高机体免疫力并使机体抗缺氧。蒲公英：性平味甘可清热解毒，消肿散结含蒲公英甾醇、胆碱、菊糖等成分和黄芩共同抑制乳房炎有害菌(金黄色葡萄球菌和化脓性链球菌)。柴胡：味苦、性微寒，归肝胆经，有舒肝和胃，升阳之功能，抗菌抗病毒并具有免疫调节功能。大青叶：活性成分为靛玉红，其作用抗病毒和增强免疫力。龙胆草：具有健胃作用，其活性成分龙胆苦甙有直接的保肝作用。山楂：消食化积，行气散瘀，止泻痢。石菖蒲：具有化湿开胃，开窍豁痰，醒神益智的功效。本发明所用的中草药是根据奶牛的生长特点、奶牛隐性乳房炎的治疗和预防机理以及奶牛养殖过程中的养殖需求，采用君、臣、佐、使的中药配伍原则，分别选取能够催乳和提高奶水质量、能够增强奶牛机体免疫力、能够提高奶牛抗病能力、促进奶牛消化和生长的几味中药配制而成：首先选用昆布、熟地、麦蓝菜、通草为君药，可以活血化瘀、通乳和提高产奶量；选用党参、益母草、板蓝根、红景天提高奶牛机体免疫力，达到补气养血的目的；同时选用蒲公英、柴胡、大青叶提高奶牛抗菌抗病毒能力；最后选用龙胆草、山楂、石菖蒲提高奶牛消化能力。由此可见，本发明所提供的中草药组分不仅能够提升奶牛的生长速度，而且能够增强奶牛的防病抗病能力，因而能有效治疗和预防奶牛隐性乳房炎。与已有技术相比，本发明的有益效果如下：本发明的奶牛用中草药益生菌复合生物制剂，通过益生菌与中草药的相互协调作用，在中草药存在的情况下，益生菌的生长力增强，益生菌对中草药的代谢有促进作用，益生菌能有效补充、调节或维持动物肠道内微生态平衡，提高奶牛采食量，可以激活全身血液中的免疫细胞，促进机体产生免疫球蛋白，提高奶牛乳汁中免疫球蛋白G和M水平，增强奶牛的免疫力；中草药组分具有行血通经，催生下乳，消肿敛等功效，还能够分泌抗菌类物质，有效预防和治疗奶牛乳房炎等炎症，将益生菌和中草药进行复配能够实现协同效应，大大增强奶牛的免疫能力，促进奶牛泌乳及提高奶水质量；增强治病性能和促生长性能，有效治疗和预防奶牛隐性乳房炎，进而完全取代抗生素的使用。具体实施方式以下结合实施例对本发明作进一步的说明，但本发明不仅限于这些实施例，在未脱离本发明宗旨的前提下，所作的任何改进均落在本发明的保护范围之内。实施例1：一种奶牛用中草药益生菌复合生物制剂，包括中草药和复合益生菌，按重量份计，所述中草药由以下组分组成：昆布30份、熟地40份、麦蓝菜30份、通草40份、党参20份、益母草20份、板蓝根30份、红景天30份、蒲公英10份、柴胡10份、大青叶18份、龙胆草5份、山楂5份、石菖蒲8份；所述复合益生菌由以下菌种组成：枯草芽孢杆菌5份、苏云金芽孢杆菌3份、嗜酸乳杆菌5份、啤酒酵母菌10份。所述的奶牛用中草药益生菌复合生物制剂的制备方法，包括以下步骤：(1)按重量份比例取各中草药，将中草药分别粉碎后，过筛，混合，加水浸泡，蒸煮三次，将蒸煮后的滤液和药渣混匀，冻干，制得中药冻干粉；(2)将枯草芽孢杆菌、苏云金芽孢杆菌、嗜酸乳杆菌、啤酒酵母菌分别放在培养基中进行培养，然后进行纯化培养，分别得到枯草芽孢杆菌菌液、苏云金芽孢杆菌菌液、嗜酸乳杆菌菌液、啤酒酵母菌菌液；将枯草芽孢杆菌菌液、苏云金芽孢杆菌菌液、嗜酸乳杆菌菌液、啤酒酵母菌菌液混合，得到混合菌液；(3)按重量份计，将中药冻干粉20份放入发酵罐内，然后加入生物酶5份、低聚半乳糖10份、安琪酵母5份，再加入混合菌液10份，密闭，发酵；发酵采取厌氧发酵的方式，连续发酵时间为30小时，PH为4.0。步骤(2)中所述枯草芽孢杆菌菌液的制备方法为：称取枯草芽孢杆菌用无菌水配制成质量体积比为3-5％的菌液，然后量取菌液0.1ml接种于LBG液体培养基上于37℃培养24h，芽孢率达到75％以上时，使发酵液降温至20℃，即得枯草芽孢杆菌菌液。步骤(2)中所述苏云金芽孢杆菌菌液的制备方法为：称取苏云金芽孢杆菌用无菌水配制成质量体积比为3～5％的菌液，然后量取菌液0.1ml接种于TPY液体培养基上于37℃培养24h，芽孢率达到75％以上时，使发酵液降温至20℃，即得苏云金芽孢杆菌菌液。步骤(2)中所述嗜酸乳杆菌菌液的制备方法为：称取嗜酸乳杆菌用无菌水配制成质量体积比为3-5％的菌液，然后量取菌液0.1ml接种于DMRS液体培养基上于37℃培养24h，芽孢率达到75％以上时，使发酵液降温至20℃，即得嗜酸乳杆菌菌液。步骤(2)中所述啤酒酵母菌菌液的制备方法为：称取啤酒酵母菌用无菌水配制成质量体积比为3-5％的菌液，然后量取菌液0.1ml接种于马铃薯葡萄糖液体培养基上于37℃培养24h，芽孢率达到75％以上时，使发酵液降温至20℃，即得啤酒酵母菌菌液。步骤(3)中所述生物酶选自淀粉酶。实施例2：一种奶牛用中草药益生菌复合生物制剂，包括中草药和复合益生菌，按重量份计，所述中草药由以下组分组成：昆布35份、熟地35份、麦蓝菜35份、通草35份、党参25份、益母草25份、板蓝根25份、红景天25份、蒲公英15份、柴胡15份、大青叶15份、龙胆草6份、山楂6份、石菖蒲6份；所述复合益生菌由以下菌种组成：枯草芽孢杆菌7份、苏云金芽孢杆菌4份、嗜酸乳杆菌4份、啤酒酵母菌7份。所述的奶牛用中草药益生菌复合生物制剂的制备方法，包括以下步骤：(1)按重量份比例取各中草药，将中草药分别粉碎后，过筛，混合，加水浸泡，蒸煮三次，将蒸煮后的滤液和药渣混匀，冻干，制得中药冻干粉；(2)将枯草芽孢杆菌、苏云金芽孢杆菌、嗜酸乳杆菌、啤酒酵母菌分别放在培养基中进行培养，然后进行纯化培养，分别得到枯草芽孢杆菌菌液、苏云金芽孢杆菌菌液、嗜酸乳杆菌菌液、啤酒酵母菌菌液；将枯草芽孢杆菌菌液、苏云金芽孢杆菌菌液、嗜酸乳杆菌菌液、啤酒酵母菌菌液混合，得到混合菌液；(3)按重量份计，将中药冻干粉25份放入发酵罐内，然后加入生物酶6份、低聚半乳糖12份、安琪酵母7份，再加入混合菌液7份，密闭，发酵；发酵采取厌氧发酵的方式，连续发酵时间为35小时，PH为3.8。步骤(2)中所述枯草芽孢杆菌菌液的制备方法为：称取枯草芽孢杆菌用无菌水配制成质量体积比为3-5％的菌液，然后量取菌液0.1ml接种于LBG液体培养基上于37℃培养24h，芽孢率达到75％以上时，使发酵液降温至20℃，即得枯草芽孢杆菌菌液。步骤(2)中所述苏云金芽孢杆菌菌液的制备方法为：称取苏云金芽孢杆菌用无菌水配制成质量体积比为3～5％的菌液，然后量取菌液0.1ml接种于TPY液体培养基上于37℃培养24h，芽孢率达到75％以上时，使发酵液降温至20℃，即得苏云金芽孢杆菌菌液。步骤(2)中所述嗜酸乳杆菌菌液的制备方法为：称取嗜酸乳杆菌用无菌水配制成质量体积比为3-5％的菌液，然后量取菌液0.1ml接种于DMRS液体培养基上于37℃培养24h，芽孢率达到75％以上时，使发酵液降温至20℃，即得嗜酸乳杆菌菌液。步骤(2)中所述啤酒酵母菌菌液的制备方法为：称取啤酒酵母菌用无菌水配制成质量体积比为3-5％的菌液，然后量取菌液0.1ml接种于马铃薯葡萄糖液体培养基上于37℃培养24h，芽孢率达到75％以上时，使发酵液降温至20℃，即得啤酒酵母菌菌液。步骤(3)中所述生物酶选自淀粉酶、纤维素酶。实施例3：一种奶牛用中草药益生菌复合生物制剂，包括中草药和复合益生菌，按重量份计，所述中草药由以下组分组成：昆布40份、熟地40份、麦蓝菜30份、通草30份、党参30份、益母草30份、板蓝根20份、红景天200份、蒲公英18份、柴胡18份、大青叶10份、龙胆草8份、山楂8份、石菖蒲5份；所述复合益生菌由以下菌种组成：枯草芽孢杆菌10份、苏云金芽孢杆菌5份、嗜酸乳杆菌5份、啤酒酵母菌5份。所述的奶牛用中草药益生菌复合生物制剂的制备方法，包括以下步骤：(1)按重量份比例取各中草药，将中草药分别粉碎后，过筛，混合，加水浸泡，蒸煮三次，将蒸煮后的滤液和药渣混匀，冻干，制得中药冻干粉；(2)将枯草芽孢杆菌、苏云金芽孢杆菌、嗜酸乳杆菌、啤酒酵母菌分别放在培养基中进行培养，然后进行纯化培养，分别得到枯草芽孢杆菌菌液、苏云金芽孢杆菌菌液、嗜酸乳杆菌菌液、啤酒酵母菌菌液；将枯草芽孢杆菌菌液、苏云金芽孢杆菌菌液、嗜酸乳杆菌菌液、啤酒酵母菌菌液混合，得到混合菌液；(3)按重量份计，将中药冻干粉30份放入发酵罐内，然后加入生物酶7份、低聚半乳糖15份、安琪酵母10份，再加入混合菌液10份，密闭，发酵；发酵采取厌氧发酵的方式，连续发酵时间为40小时，PH为4.0。步骤(2)中所述枯草芽孢杆菌菌液的制备方法为：称取枯草芽孢杆菌用无菌水配制成质量体积比为3-5％的菌液，然后量取菌液0.1ml接种于LBG液体培养基上于37℃培养24h，芽孢率达到75％以上时，使发酵液降温至20℃，即得枯草芽孢杆菌菌液。步骤(2)中所述苏云金芽孢杆菌菌液的制备方法为：称取苏云金芽孢杆菌用无菌水配制成质量体积比为3～5％的菌液，然后量取菌液0.1ml接种于TPY液体培养基上于37℃培养24h，芽孢率达到75％以上时，使发酵液降温至20℃，即得苏云金芽孢杆菌菌液。步骤(2)中所述嗜酸乳杆菌菌液的制备方法为：称取嗜酸乳杆菌用无菌水配制成质量体积比为3-5％的菌液，然后量取菌液0.1ml接种于DMRS液体培养基上于37℃培养24h，芽孢率达到75％以上时，使发酵液降温至20℃，即得嗜酸乳杆菌菌液。步骤(2)中所述啤酒酵母菌菌液的制备方法为：称取啤酒酵母菌用无菌水配制成质量体积比为3-5％的菌液，然后量取菌液0.1ml接种于马铃薯葡萄糖液体培养基上于37℃培养24h，芽孢率达到75％以上时，使发酵液降温至20℃，即得啤酒酵母菌菌液。步骤(3)中所述生物酶选自果胶酶、氯化溶菌酶。试验例：(一)毒性试验选用SD大鼠，给予本发明的生物制剂，溶水后每天灌胃一次，连续90天。试验期间观察动物的外观、一般行为、摄食量、体重变化，给药后90天和停药2周进行血液学(RBC、HB、网织红细胞、PLT、CT、WBC及分类)和血液生化(AST、ALT、ALP、Glu、BUN、Crca、TP、T.BIL、ALB、CHOL)、尿液生化、脏器系数、病理组织学等指标检查。试验结果表明：本发明的制剂饲喂的大鼠状态良好，外观体征、行为活动、进食量和体重增长均无异常变化；血液学检查、血液生化学、尿液生化检查均在正常范围，组间无显著差异；各组主要脏器组织病理学检查未见明显异常。上述指标停药2周后也未见改变。根据试验结果本发明的制剂连续90天给药对大鼠无明显影响，无明确的毒性靶器官和敏感指标，恢复期观察也未见延迟性毒性反应，提示本发明的药物制剂临床应用的剂量安全性较高。(二)治疗试验1、对奶牛临床型乳房炎的治疗结果(1)试验方法：试验动物选自某奶牛场的临床型乳房炎患病奶牛，症状为乳腺患病区红、肿，表面温度升高，触之敏感，体积增大，泌乳量显著减少或停止，乳汁质量异常，呈浅黄或浅红色，乳汁稀薄或粘稠，或出现絮状物。选择出现此类症状的牛作为本试验治疗对象，但伴有严重全身感染症状的、超急性或复发的病牛除外。选出符合上述标准的50例病牛，随机平均分为5组，每组10例病牛。第1组采用实施例1的制剂，每天饲喂1次；第2组采用实施例2的制剂，每天饲喂1次；第3组采用实施例3的制剂，每天饲喂1次；第4组采用抗生素，每天1次；第5组不用药对照，不作任何治疗处理。(2)疗效标准：痊愈：乳房红、肿、热、痛、硬结消失，乳汁肉眼观察乳汁均匀，无结块，奶产量回升；食欲、体温、精神等均恢复正常。有效：乳房红肿热痛明显好转，乳房肿块显著减少，发热症状消失，乳汁性状基本正常，乳汁无凝块或少量奶块，奶产量回升但没有达到发病前水平。无效：乳房红、肿、热、痛、硬结无明显改善或更严重，乳汁异常，奶产量下降；在治疗过程中病程未减。(3)根据临床症状和乳汁质量的改变综合判断药物的疗效，并计算各组乳房炎奶牛50天内的治愈数、有效数和无效数，见表1：表1本发明制剂治疗临床型奶牛乳房炎的效果组别病牛数(例)治愈数(例)有效数(例)无效数(例)治愈率(％)11074070％21091090％31083080％41033430％51000150由表1可知，本发明制剂对临床型奶牛乳房炎的治愈率达到90％，其中实施例2的治疗效果最好。2.对奶牛产奶量的影响对上述5组牛的奶产量情况进行观察，结果如表2所示。表2本发明制剂对奶牛产奶量的影响(单位：kg/组)注：用药前产奶量即为用药前一天所测的产奶量，药后指从第一次用药后开始计数*代表极显著性差异，P＜0.05；从表2结果表明，本发明制剂饲喂的奶牛产奶量明显增加，实施例2的制剂效果最好。当前第1页1 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