本申请是申请日为2012年05月02日，国际申请号PCT/US2012/036035，国家申请号为201280021553.4，发明名称为“包含葡萄糖抗代谢物和硒的组合物”的申请的分案申请。
技术领域
本发明的实施例涉及包含葡萄糖抗代谢物和硒的组合物。更具体地，但是非排他性的，本发明的实施例涉及用于伴侣动物的包含葡萄糖抗代谢物和硒的组合物。
背景技术：
生物学理论已正确地预测了在实验动物中，通过食物剥夺限制热量摄取减缓了某些不可取的细胞过程的发现，这些细胞过程很多与老化以及老化相关的疾病相关联。
具体地，热量限制已显示一贯地在许多系统中延长寿命、延迟肿瘤发作并减缓肿瘤进展、以及延迟生理老化。实际上，跨度超过七十年的研究已显示，热量限制是一种一贯地在动物中延长寿命的营养干预。参见Weindruch和Walford，“The Retardation of Aging and Disease by Dietary Restriction，”Springfield，IL：Charles C.Thomas(1988)；Yu，“Modulation of Aging Processes by Dietary Restriction，”Boca Raton：CRC Press(1994)；和Fishbein，“Biological Effects of Dietary Restriction，”Springer，New York(1991)。热量限制对寿命跨度和肿瘤发生的这些效应自从McKay的早期研究以来已被报道过多次。参见McKay等人，“The Effect of Retarded Growth Upon the Length of Lifespan and Upon Ultimate Body Size，”J.Nutr.，第10卷，第63-79页(1935)。实际上，在过去的二十年中，在老年医学中对热量限制的兴趣恢复已经导致人们普遍接受，饮食操纵减缓许多系统中的生理老化。参见Weindruch和Walford，“The Retardation of Aging and Disease by Dietary Restriction，”Springfield，IL：Charles C.Thomas(1988)；Yu，“Modulation of Aging Processes by Dietary Restriction，”Boca Raton：CRC Press(1994)；和Fishbein，“Biological Effects of Dietary Restriction，”Springer，New York(1991)和Masoro，E.J.“Overview of Caloric Restriction and Ageing，”Mech.Aging Dev.，第126卷，第913-922页(2005)。
空腹血糖和胰岛素含量的降低和胰岛素敏感度的提高是易于测量的热量限制的生物指标。热量限制的啮齿类表现出更低的空腹血糖和胰岛素含量，并且葡萄糖试验期间达到的血糖峰值和胰岛素含量在进行热量限制的那些中也降低。参见Kalant等人，“Effect of Diet Restriction on Glucose Metabolism and Insulin Responsiveness and Aging Rats，”Mech.Aging Dev.，第46卷，第89-104页(1988)。也已知高胰岛素血症是与包括心脏病和糖尿病的多种此类疾病过程相关联的危险因素(Balkau和Eschwege，Diabetes Obes.Metab.1(Suppl.1)：S23-31，1999)。降低的胰岛素含量和体温是这种改变的代谢特征图的最可靠指标中的两种(Masoro等人，J.Gerontol.Biol.Sci.47：B202-B208，1992)；Koizumi等人，J.Nutr.117：361-367，1987；Lane等人，Proc.Nat.Acad.Sci.93：4154-4164，1996)。
葡萄糖抗代谢物如2-脱氧-D-葡萄糖是与葡萄糖相关的化合物。然而，由于与葡萄糖的结构差异，此类化合物阻碍或抑制碳水化合物代谢的某些方面，并从而可模拟热量限制的效应(Rezek等人，J.Nutr.106：143-157，1972)。这些抗代谢物发挥许多生理效应，包括减轻体重、降低血浆胰岛素含量、降低体温、延迟肿瘤形成和发展、以及提高循环糖皮质素激素浓度。(综述参见Roth等人，Ann.NY Acad.Sci.928：305-315，2001)。这些生理效应是由抑制碳水化合物代谢造成的。
硒是动物中的一种基本微量营养素，其用作还原多种抗氧化酶的辅因子，所述抗氧化酶包括谷胱甘肽过氧化物酶和某些形式的硫氧还蛋白还原酶。它也是氨基酸硒代半胱氨酸和硒代蛋氨酸的一种组分。硒也是甲状腺功能需要的，它用作三种甲状腺激素脱碘酶的辅因子，其活化然后灭活各种甲状腺激素和它们的代谢物。在人体中，硒与半胱氨酸结合以形成25种不同的包含硒代半胱氨酸的化合物，它们统称为硒蛋白。包含硒的酶也称为硒酶。
当以适当的范围提供时，在饮食中递送的硒具有许多潜在的类似于能量限制效应的健康有益效果。不受理论的约束，据认为它的抗癌和抗糖尿病作用可能通过其作用用于减少氧化应激反应和炎症，并且这些作用能够协同地与那些葡萄糖抗代谢物相互作用并为硒提供附加的有益效果(当二者均为伴侣动物的饮食的一部分时)。
因此，特别是对于伴侣动物，提供营养如葡萄糖抗代谢物与硒的组合将是有益的。因此，本发明的实施例涉及此类组合物。
技术实现要素：
在一个实施例中，公开了包含葡萄糖抗代谢物和添加的硒的宠物食物组合物。该组合物可以约0.05至约10.0μg/g组合物包含添加的硒。该组合物可以按所述组合物的重量计少于约5％包含葡萄糖抗代谢物。添加的硒可为无机来源或有机来源。添加的硒可为选自以下来源的硒：亚硒酸钠、硒酸钠、氧化硒、硒化物、硒代半胱氨酸、硒代蛋氨酸、富硒酵母、富硒大蒜、富硒卷心菜以及它们的组合和混合物。所述葡萄糖抗代谢物可选自2-脱氧-D-葡萄糖；5-硫代-D-葡萄糖；3-O-甲基葡萄糖；1，5-无水-D-葡萄糖醇；2，5-无水-D-葡萄糖醇；2，5-无水-D-甘露糖醇；甘露庚酮糖；以及它们的混合物和组合。该组合物可选自润湿组合物、半潮湿组合物、干燥组合物、以及它们的组合。该组合物可为营养平衡的宠物食物组合物。
在另一个实施例中，该宠物食物组合物可包含葡萄糖抗代谢物和硒，其中硒由内源性硒和添加的硒构成。内源性硒可以约0.30至约0.60μg/g组合物的量存在，并且添加的硒可以约3.0至约6.0μg/g组合物存在。
附图说明
该图是由葡萄糖抗代谢物方法产生的积分安培波形。
具体实施方式
定义
如本文所用，当用于权利要求或说明书中时，包括“所述”、“一个”和“一种”的冠词被理解为是指一个或多个受权利要求书保护或受说明书保护的物质。
如本文所用，术语“包括”、“包含”和“含有”旨在为非限制性的。
如本文所用，术语“多个”是指多于一个。
如本文所用，术语“动物”或“宠物”是指家畜，包括但不限于家犬(犬科动物)、猫(猫科动物)、马、牛、雪貂、兔、猪、大鼠、小鼠、沙鼠、仓鼠、马等。家犬和家猫是宠物的具体例子，并且在本文中称为“伴侣动物”。应当理解的是，在本公开的全文中，当使用术语动物、宠物、或伴侣动物时，所述动物、宠物、或伴侣动物为非患病的状态，除非另外指明。
如本文所用，术语“动物饲料”、“动物饲料组合物”、“动物饲料粗磨食物”、“宠物食物”、或“宠物食物组合物”均指旨在被宠物摄取的组合物。宠物食物可无限制地包括适于日常饲养的营养平衡的组合物，以及可为或可不为营养平衡的补充剂和/或犒赏食物。
如本文所用，术语“营养平衡的”是指基于宠物营养领域中的公认权威人士，包括政府机构(例如但不限于Unites States Food and Drug Administration’s Center for Veterinarian Medicine，the American Feed Control Officials Incorporated)的推荐，该组合物，例如宠物食物，除对水的附加需求之外，以适当的量和比例具有已知维持生命所需的营养素。
本发明的全部口服剂量均是按伴侣动物的每千克体重计算的，除非另外指明。
应当理解的是，在本说明书全文中给出的每一最大数值限度包括每一更低数值限度，如同此类更低数值限度在本文中被明确表示。在本说明书全文中给出的每一最小数值限度将包括每一更高数值限度，如同此类更高数值限度在本文中被明确表示。在本说明书全文中给出的每一数值范围将包括落入此类更宽数值范围内的每一更窄数值范围，如同此类更窄数值范围全部在本文中被明确表示。
全部项目的列表，例如成分的列表，均旨在作为并应当被解释为马库什(Markush)群组。因此，全部列表均可被理解和解释为“选自”…项目的列表…“以及它们的组合和混合物”的项目。
本文所引用的是本发明的实施例中利用的包括各种成分的组分的商品名。本文的发明者不旨在限于某一商品名的材料。在本文的描述中与以商品名引用的那些等同的材料(如以不同的名称或参考标号从不同来源获得的那些)可被取代和利用。
本文的工艺、方法、组合物和装置可包括如本文所述的任何特征或实施例，基本上由如本文所述的任何特征或实施例组成，或由如本文所述的任何特征或实施例组成。
在本公开的各种实施例的描述中，公开了各种实施例或各个特征。对于普通技术从业者将显而易见的是，此类实施例和特征的全部组合是可能的，并且可导致本公开的优选实施。虽然已举例说明和描述了本发明的各种实施例和各个特征，但在不脱离本发明的实质和范围的情况下可作出各种其它的改变和变型。还将显而易见的是，前述公开中提出的实施例和特征的全部组合是可能的，并且可导致本发明的优选实施。
本发明的实施例
本发明的实施例涉及包含硒和葡萄糖抗代谢物组分的组合物，所述葡萄糖抗代谢物组分选自：2-脱氧-D-葡萄糖；5-硫代-D-葡萄糖；3-O-甲基葡萄糖；1，5-无水-D-葡萄糖醇；2，5-无水-D-葡萄糖醇；2，5-无水-D-甘露糖醇；甘露庚酮糖；以及它们的混合物和组合。不旨在受理论的限制，这些组分被接受为葡萄糖抗代谢物。在另一个实施例中，所述组分可在所述组合物中以植物物质的组分如鳄梨、或其它富集甘露庚酮糖的来源如苜蓿、无花果、樱草等存在。
葡萄糖抗代谢物
如本文所公开的葡萄糖抗代谢物组分包括2-脱氧-D-葡萄糖、5-硫代-D-葡萄糖、3-O-甲基葡萄糖、脱水糖包括1，5-无水-D-葡萄糖醇、2，5-无水-D-葡萄糖醇和2，5-无水-D-甘露糖醇、甘露庚酮糖、以及它们的混合物和组合。甘露庚酮糖是一种具体的葡萄糖抗代谢物。在一个实施例中，甘露庚酮糖可在所述组合物中作为植物物质如鳄梨、鳄梨提取物、鳄梨粗粉、鳄梨浓缩物的组分、或其它富集甘露庚酮糖的来源存在。富集甘露庚酮糖的来源的非限制性例子包括苜蓿、无花果、或樱草。植物物质可包括果实、种子(或核)、枝、叶、或相关植物的任何其它部分或它们的组合。
鳄梨(Avocado)(通常也称为牛油梨(alligator pear)、牛油果(aguacate)或油梨(palta))包含异常富集的甘露庚酮糖来源，以及相关的糖和其它碳水化合物。鳄梨是一种亚热带常青树果实，最成功地生长在以下地区中：加利福尼亚、佛罗里达、夏威夷、危地马拉、墨西哥、西印度群岛、南非和亚洲。
鳄梨的种类包括，例如，Persea Americana和Persea nubigena，在这些示例性种类中包括全部栽培品种。栽培品种可包括‘Anaheim’、‘Bacon’、‘Creamhart’、‘Duke’、‘Fuerte’、‘Ganter’、‘Gwen’、‘Hass’、‘Jim’、‘Lula’、‘Lyon’‘Mexicola Grande’、‘Murrieta Green’、‘Nabal’、‘Pinkerton’、‘Queen’、‘Puebla’、‘Reed’、‘Rincon’、‘Ryan’、‘Spinks’、‘Topa Topa’、‘Whitsell’、‘Wurtz’和‘Zutano’。鳄梨果实尤其优选用于本文，该鳄梨果实可包含核或者其中所述核被移除或至少部分地移除。来自鳄梨(Persea Americana)的果实，以及来自产生更大果实(例如，当果实成熟时为约12盎司或以上)的栽培品种例如Anaheim、Creamhart、Fuerte、Hass、Lula、Lyon、Murrieta Green、Nabal、Queen、Puebla、Reed、Ryan和Spinks的果实尤其优选用于本文。
来自苜蓿、无花果、或樱草的植物物质据报道也提供相对高含量的甘露庚酮糖。苜蓿也被称为紫花苜蓿(Medicago sativa)。也可使用无花果(Fig或Ficus carica)(包括例如丛生无花果(Cluster fig)或西克莫无花果(Sycamorefig))，以及樱草或黄花九轮樱草(Primula officinalis)。
已发现特定含量的选自以下的组分可用于本文：2-脱氧-D-葡萄糖；5-硫代-D-葡萄糖；3-O-甲基葡萄糖；1，5-无水-D-葡萄糖醇；2，5-无水-D-葡萄糖醇；2，5-无水-D-甘露糖醇；甘露庚酮糖；以及它们的混合物和组合。具体地，已经发现相对低含量，以及相对高剂量的所述组分，虽然是有用的，但对于期望的目的可能提供不太理想的功效。剂量将根据所使用的葡萄糖抗代谢物组分，并且将根据葡萄糖抗代谢物将被施用的伴侣动物的大小和状况而变化。约0.0001或约0.001克/千克至约1克/千克范围内的剂量在一些实施例中可为有益的。如本文所用，当使用以mg/kg为单位的剂量时，“mg”是指组分如甘露庚酮糖的含量，并且“kg”是指伴侣动物如犬或猫的体重的千克数。当在大型动物中使用2-脱氧-D-葡萄糖时，更低范围的剂量也可为适当的。更高的剂量，尤其是例如5-硫代-D-葡萄糖或2，5-无水-D-甘露糖醇的化合物，也可易于接纳。在一个实施例中，向伴侣动物提供的组分的剂量基于每天可为约0.1、0.5、1、2、或5mg/kg至约15、20、50、100、150、或200mg/kg、以及这些范围的全部组合，其中“mg”是指所述组分的含量，并且“kg”是指所述伴侣动物的体重的千克数。在一个实施例中，向伴侣动物提供的剂量基于每天可为约1mg/kg至约15mg/kg、约2mg/kg至约10mg/kg、或约2mg/kg至约5mg/kg。在一个实施例中，向伴侣动物提供的剂量基于每天可为约1mg/kg至约5mg/kg、约1.5mg/kg至约5mg/kg、约2mg/kg至约5mg、或约2mg/kg。在某些实施例中，这些量可转化为包含少于约5％、或少于约2％、或约0.0001％至约0.5％、或约0.1％至约10％、或约0.1％至约5％的组分的组合物，全部按所述组合物的重量计。预期了其间的全部范围。组分的含量可由本领域的普通技术人员基于各种因素确定，例如，组合物的形式(例如，是否为干燥组合物、半潮湿组合物、湿润组合物、或补充剂、或任何其它形式或它们的混合物)。普通技术人员将能够利用优选的剂量，并且确定给定组合物内的组分的最佳含量。
类似地，可基于每天提供向伴侣动物提供所述组分的总剂量。此类日剂量可为约0.1mg/天至约1000mg/天。此类日剂量可根据消耗所述组合物的伴侣动物的大小。例如，在一个实施例中，较大的伴侣动物可比较小的伴侣动物消耗更多。当然，这与本文所公开的关于按伴侣动物的剂量/质量是相符的。因此，在一个实施例中，随着伴侣动物的大小增加，更多的组合物可被施用。
相应地，在一个实施例中，此类日剂量可相当于按伴侣动物的基于每天/质量的剂量，如本文所述。具体地，基于伴侣动物的大小和如上所述的日剂量，在一些实施例中，日剂量可在约0.1mg/天至约1000mg/天、或甚至更多的范围内。在其它实施例中，日剂量可为约1mg/天至约500mg/天，或约1mg/天至约200mg/天，或约1mg/天至约100mg/天，或约5mg/天至约100mg/天，或约5mg/天至约80mg/天，或约10mg/天至约50mg/天，或约40mg/天。还预期了其间的全部范围。
相似地，其中植物物质的提取物或粗粉在本文的组合物中被利用，提取物或粗粉的含量可取决于此类提取物或粗粉内的有效组分的含量。本文已发现了包含约0.5％至约99％的葡萄糖抗代谢物组分、或者约0.5％至约75％的葡萄糖抗代谢物组分、或者约0.5％至约50％的葡萄糖抗代谢物组分、或者约0.5％至约25％的葡萄糖抗代谢物组分的提取物和/或粗粉，全部按所述提取物或粗粉的重量计。本文已发现了其中葡萄糖抗代谢物可为约0.5、1、2、5、或10％至约15、25、50或75％(按所述提取物和/或粗粉的重量计)的提取物和/或粗粉。
硒
根据描述，本发明实施例的组合物可包含硒。在一个实施例中，硒可为添加的硒或内源性硒。在一个实施例中，该组合物可包含添加的硒和内源性硒两者。
如本文所用，当提及组合物中的硒时，“添加的”硒是指添加到组合物的任何成分，并且每100g的所述成分具有至少100μg硒(不考虑其起源/来源)。“添加的”硒也指如下文所列的任何硒的无机来源。因此，为清楚起见，添加的任何无机硒被认为是本文添加的硒。如本文所用，当提及组合物中的硒时，“内源性”硒是指天然存在于植物来源(不包括坚果)和/或动物来源中的硒，它们主要用作宠物食物组合物中的能量、蛋白、脂肪等的来源。例如，内源性硒可存在于谷物和动物及植物基蛋白来源中。
硒可存在于包括任何数目来源的组合物中。硒的来源可包括但不限于无机和有机来源、以及它们的组合。
硒的无机来源可包括但不限于亚硒酸钠、硒酸钠、氧化硒、硒化物、富硒土壤、以及它们的组合和混合物。
硒的有机来源可包括但不限于坚果、谷类、肉、蘑菇、鱼、蛋、硒代蛋氨酸、二甲基硒、硒代半胱氨酸、甲基硒代半胱氨酸、富硒酵母(可以Sel-Plex商购获得)、富硒大蒜、富硒卷心菜、以及其它已知的硒来源。巴西坚果是一种富硒普通饮食来源，但是高含量也可存在于肾、金枪鱼、蟹和龙虾中。例如，已知坚果包含超过100μg硒/100g坚果，并且已知巴西坚果包含超过1000μg/100g巴西坚果。
该组合物可包含不同量的添加的硒。在一个实施例中，添加的硒可以约0.05至约10.0μg硒/克饮食存在。在其它实施例中，添加的硒可以约1.25至约10.0μg/g饮食，或约1.25至约9.0μg/g饮食，或约1.25至约8.0μg/g饮食，或约1.25至约7.0μg/g饮食，或约1.25至约6.0μg/g饮食，或约2.0至约6.0μg/g饮食，或约2.0至约5.0μg/g饮食，或约2.0至约4.0μg/g饮食，或约3.0至约6.0μg/g饮食，或约3.0至约4.0μg/g饮食，或约2μg/g饮食，或约3μg/g饮食，或约4μg/g饮食，或约5μg/g饮食，或约6μg/g饮食，或约7μg/g饮食存在。
该组合物可包括不同量的内源性硒。在一个实施例中，内源性硒可以至少0.10μg/g饮食的含量存在。在其它实施例中，内源性硒可以约0.10至约1.00μg/g饮食，或约0.10至约0.90μg/g饮食，或约0.10至约0.80μg/g饮食，或约0.10至约0.70μg/g饮食，或约0.10至约0.60μg/g饮食，或约0.20至约0.60μg/g饮食，或约0.20至约0.50μg/g饮食，或约0.20至约0.40μg/g饮食，或约0.30至约0.60μg/g饮食，或约0.30至约0.40μg/g饮食，或约0.2μg/g饮食，或约0.3μg/g饮食，或约0.4μg/g饮食，或约0.5μg/g饮食，或约0.6μg/g饮食，或约0.7μg/g饮食存在。
本文组合物中可包含添加的硒和内源性硒的任何组合。因此，组合物中包含任何添加的硒和任何内源性硒的硒的总量在一个实施例中可为约0.150至约11.0μg/g饮食。在其它实施例中，硒的总量可以约0.15至约9.0μg/g饮食，或约0.15至约8.0μg/g饮食，或约0.15至约7.0μg/g饮食，或约0.15至约6.0μg/g饮食，或约0.20至约6.0μg/g饮食，或约0.20至约5.0μg/g饮食，或约0.20至约4.0μg/g饮食，或约0.30至约6.0μg/g饮食，或约0.30至约4.0μg/g饮食，或约2μg/g饮食，或约3μg/g饮食，或约4μg/g饮食，或约5μg/g饮食，或约6μg/g饮食，或约7μg/g饮食存在。
组合物
因此，如本文所述，本发明的实施例涉及旨在被伴侣动物摄取并包含葡萄糖抗代谢物和硒的组合物。组合物包括旨在供给必要的饮食需求的食物，以及犒赏食物(例如，饼干)或其它食物补充剂。任选地，本文的组合物可为干燥组合物(例如，粗磨食物)、半潮湿组合物、润湿组合物、或它们的任何混合物。作为另外一种选择或除此之外，所述组合物为补充剂，例如肉汁、饮用水、酸奶、粉末、悬浮液、咀嚼物、犒赏食物(例如，饼干)或任何其它递送形式。
此外，在一个实施例中，所述组合物可为营养平衡的，例如宠物食物粗磨食物。在另一个实施例中，所述组合物是非营养平衡的，例如补充剂、犒赏食物、或用于宠物的其它递送形式。营养平衡的宠物食物和补充剂以及它们的制造方法是本领域中所熟知的。
本文使用的组合物可任选地包含一种或多种其它组分。其它组分对本文使用的组合物中的内含物是有益的，但是对于本发明目的而言是任选的。在一个实施例中，所述组合物基于干燥物质可包含按所述组合物的重量计约10％至约90％的粗蛋白，或者约20％至约50％的粗蛋白，或者约20％至约40％的粗蛋白，或者约20％至约35％的粗蛋白。所述粗蛋白材料可包括植物基蛋白例如大豆、谷类(玉米、小麦等)、棉籽和花生，或动物基蛋白例如酪蛋白、白蛋白和肉蛋白。用于本文的肉蛋白的非限制性例子包括选自牛肉、猪肉、羊羔肉、家禽、鱼、以及它们的混合物的蛋白源。
此外，所述组合物基于干燥物质可包含按所述组合物的重量计约5％至约40％的脂肪，或者约10％至约35％的脂肪。
涉及本发明组合物的实施例还可包含碳水化合物来源。在一个实施例中，所述组合物可包含按所述组合物的重量计约35％至按所述组合物的重量计至多约50％的碳水化合物来源。在其它实施例中，所述组合物可包含按所述组合物的重量计约35％至约45％，或按所述组合物的重量计约40％至50％的碳水化合物来源。谷物或谷类如稻、玉米、蜀黍、高粱、大麦、小麦等是示例性的碳水化合物来源。
所述组合物还可包含其它材料，例如但不限于，乳清粉和其它乳品副产品、甜菜浆、纤维素、纤维、鱼油、亚麻、维生素、矿物质、风味剂、抗氧化剂和牛磺酸。
所述组合物还可包含其它任选的成分。任选的成分可包括益生素组分(双歧杆菌和/或乳杆菌)和益生元(低聚果糖)组分。可被包括的益生素组分和益生元组分的例子和量公开于，例如，美国公布2005/0158294中。其它可被包括的任选的成分是ω6和ω3脂肪酸、肉毒碱、六偏磷酸盐、葡糖胺、硫酸软骨素、类胡萝卜素(包括β胡萝卜素、维生素E和叶黄素)、以及如下文表1中所示的那些成分。
实例
提供以下实例来举例以示出本发明的实施例，并且不旨在以任何方式限制其范围。
包含甘露庚酮糖的鳄梨粗粉的制备
从Fresh King Incorporated(Homestead，FL)获得新鲜的鳄梨(Lula品种)。手动分离开鳄梨，并且移除并丢弃核。使用121/4筛网，通过Hobart商业食物制备机(序列号11-10410235)研磨剩余的果皮和果肉。然后将经研磨的鳄梨转移至Edwards冷冻干燥机(Super Modulyo Model，Crawely，Sussex，England)。将冷冻干燥机第一个24小时设定为-20℃，随后的24小时设定为-5℃，并且最后的72小时设定为5℃。从冷冻干燥机移除后，使用Straub研磨机(4E型，Philadelphia，PA)将粗粉研磨为粉末。分析鳄梨粗粉，并且发现其包含按所述粗粉的重量计约10.35％的甘露庚酮糖。应当注意的是，存在于鳄梨中的甘露庚酮糖的量是随着具体的品种和成熟状态变化的。
鳄梨提取物的制备
包含高含量甘露庚酮糖的鳄梨提取物根据以下任选方法制备，并在本发明实施例的组合物中利用。
提供完整的鳄梨果实(约900千克)。部分地或完全地分离所述果实并移除核，提供约225千克去核的鳄梨半块。将未加工的鳄梨加入粉碎机，这时进行一些搅拌，进一步加入水(约3000千克)和CELLUBRIX(可从NovozymesA/S商购获得)(约1升)。进一步搅拌混合物，并同时加热至约66℃。加入完成时，进一步添加CELLUBRIX(约1升)，于约5.5的受控pH下，将整个混合物保持在搅拌下约12小时。然后将温度进一步增加至约80℃，然后保持至少约2小时。然后将所得经消化的植物混合物在80℃下过滤，以作为滤液提供碳水化合物提取物。然后在80℃下在简单的再循环系统中将所述碳水化合物提取物真空蒸发，以提供具有约10％至约20％的固体和约5.5的pH的碳水化合物提取物。然后使用折射窗烘干机将所述提取物进一步浓缩，以提供约100千克作为结晶或粉末的提取物(基于所述完整鳄梨果实的起始质量，约11％的碳水化合物提取物收率，其经分析为基于所述完整鳄梨果实的起始质量的约0.25％至约4.5％的甘露庚酮糖收率)。应当注意的是，存在于鳄梨中的甘露庚酮糖的量随着具体的品种和果实的成熟状态变化。所述提取物可在本发明实施例的组合物中使用。
粗磨食物
表1示出了使用本领域的标准方法，包括挤出，可以近似指示量制备具有以下组分的两种粗磨组合物，并且可作为日常饲料饲喂给犬和/或猫：
表1
*可用具有高的甘露庚酮糖含量的其它植物物质取代鳄梨。甘露庚酮糖来源的掺入可能在所述组合物中替代相似量的谷物来源。
**维生素和矿物质可包括：维生素E、β-胡萝卜素、维生素A、抗坏血酸、泛酸钙、生物素、维生素B12、维生素B1、烟酸、维生素B2、维生素B6、维生素D3、维生素D2、叶酸、氯化胆碱、肌醇、碳酸钙、磷酸二钙、氯化钾、氯化钠、氧化锌、硫酸锰、硫酸铜、氧化锰、硫酸亚铁、碘化钾、碳酸钴。
***微量组分可包括：鱼油、亚麻籽、亚麻粗粉、纤维素、风味剂、抗氧化剂、牛磺酸、酵母、肉毒碱、硫酸软骨素、葡糖胺、叶黄素、迷迭香提取物。
施用
八十(n＝80)只拉布拉多猎犬可随机地按年龄、性别和同窝接受与Eukanuba高龄大型品种相似的完全且营养平衡的对照饮食，或除了包括如下文所公开的甘露庚酮糖和硒之外与对照饮食相同的实验饮食。可将犬分离成两个研究组。
研究1：总计39只较老的拉布拉多猎犬可被饲喂营养平衡的组合物，该组合物分别以0或约2mg/kg犬体重的含量提供甘露庚酮糖并且以0μg/g饮食或约3.5μg/g饮食提供添加的硒。在为期4年的研究开始时，犬(12只阉割的雄性，27只切除卵巢的雌性)的平均年龄是6.7岁，其中就群体内最年轻和最老的犬而言，分别为5.1至8.2岁的年龄范围。对照组合物可作为营养平衡的组合物被饲喂，并且其不包含甘露庚酮糖(0mg/kg)、添加的硒(0μg/g饮食)、鳄梨提取物、鳄梨粗粉、或鳄梨浓缩物。该测试组合物可为用鳄梨提取物、鳄梨粗粉、或鳄梨浓缩物配制的营养平衡的对照组合物，以提供约2mg/kg犬体重的剂量的甘露庚酮糖和约3.5μg/g饮食的添加的硒。可每天在0730和1430以较老的犬每天食物分配量的二分之一饲喂它们。可饲喂犬以维持体重和2-4分范围内的身体组成评分(BCS)。如果进行食物调节，它们应基于季度进行。对于全部免疫测量，全部犬可被通宵禁食，并且早餐可被推迟直至可进行血液采集。水被任意提供。
研究2：总计41只较年轻的拉布拉多猎犬可被饲喂营养平衡的组合物，该组合物分别以0或约2mg/kg犬体重的含量提供甘露庚酮糖并且以0μg/g饮食或约3.5μg/g饮食提供添加的硒。在为期36个月的饲喂研究开始时，犬(12只阉割的雄性，29只切除卵巢的雌性)的平均年龄是4.0岁，其中就群体内最年轻和最老的犬而言，分别为2.0至6.1岁的年龄范围。对照组合物可作为营养平衡的组合物(Eukanuba Senior Maintenance Formula)被饲喂，并且其不包含甘露庚酮糖(0mg/kg)、添加的硒(0μg/g饮食)、鳄梨提取物、鳄梨粗粉、或鳄梨浓缩物。该测试组合物可为用鳄梨提取物、鳄梨粗粉、或鳄梨浓缩物配制的营养平衡的对照组合物，以提供约2mg/kg犬体重的剂量的甘露庚酮糖和约3.5μg/g饮食的添加的硒。可每天在0730和1430以较年轻的犬每天食物分配量的二分之一饲喂它们。可饲喂犬以维持体重和2-4分范围内的身体组成评分(BCS)。如果进行食物调节，它们应基于季度进行。然而，对于全部免疫测量，全部犬可被通宵禁食，并且早餐可被推迟直至可进行血液采集。水被任意提供。
方法
可如下测量宠物食物或补充剂中的葡萄糖抗代谢物如甘露庚酮糖。
程序(仅使用去离子水)：
称重大约0.1g饲料/成分置于15mL塑料离心管中。
将10mL水添加到管中并振荡5分钟。
以最大速度(2440g)将所述管离心5分钟。
将上清液中的一些分配到0.2μm尼龙离心过滤器中并以最大速度(14000g)旋转5分钟。样品为注射准备就绪。
在1L水中溶解10mg的每种碳水化合物来制备10μg/mL的碳水化合物标准物。
在900μL水中溶解100μL的10μg/mL溶液来制备1μg/mL的碳水化合物标准物。
在990μL水中溶解10μL的10μg/mL溶液来制备0.1μg/mL的碳水化合物标准物。
IC条件：洗脱液净化：Ionpac ATC-3(Dionex P/N 059661)，Boratetrap(Dionex P/N 047078)。柱：CarboPac PA20(Dionex P/N 060142)，2mm Aminotrap预柱(Dionex P/N 046122)。柱温：30℃
泵
流量：0.4mL/min
洗脱液：A＝水，B＝0.2M NaOH，D＝1M NaOH。
注意：在使用前用1M NaOH 30-60分钟，随后用95％水冲洗30-60分钟来再生所述柱可能是必需的：5％0.2M NaOH。按照由Dionex推荐的程序制备洗脱液。
自动取样机
注射体积：10μL满环
积分安培波形
注意：使用峰面积定量全部峰。积分安培波形的一个实例可见于图中。
参考文献：
1.Shaw，P.E.；Wilson，C.W.；Knight，R.J.J.Agric.Food Chem.1980，28，379-382。
2.Dionex CarboPac20 Document No.031844-01。
硒
A.饲料的硒含量可通过以下的AOAC法定方法996.16(G)：Selenium in Feeds and Premixes：Fluorometry method 2000测量。
B.装置：
a.荧光计-具有在375nm的激发波长和在525nm的发射波长。如果可能的话，将荧光计调节为1标度单位＝1ng。
b.通风柜-适于处理HClO2
c.消化系统-21×26×7.4cm的铝块，其具有设置在30×30cm热板(如果测试和标准溶液可被同时加热，则为任何可商购获得的热板)上的80个孔(22mm直径)。作为另外一种选择，可使用微量凯氏定氮法(Kjeldahl)消化系统，其能够固定30mL的烧瓶或直壁管。
d.消化容器-用于消化系统。带螺旋盖(特氟隆内衬的)的20×150mm测试管；30mL的微凯氏定氮烧瓶或直壁管是可接受的。
e.机械化的提取器旋转单元-保持60-70rpm/min。手持式包含允许混合物的管架(每行10个管的4行)是合适的。
f.移液器-递送5mL(+/-1％)。
g.H2O浴-1)保持60°+/-2°，以及2)沸腾的H2O。
h.涡旋混合器。
i.容量瓶-100和1000mL。
j.锥形瓶-250-1000mL和2L。
k.滤纸-定性纸，11μm保留
C.试剂：
全部试剂应为至少分析级的。使用在玻璃制去离子水蒸馏器制备溶液和稀释液。
a.环己烷。
b.盐酸溶液-0.1M。将8.3mL浓HCl吸移到1L容量瓶中并用水稀释至容量体积。可使用与任何方便的体积成比例的量。
c.硝酸-70％。
d.高氯酸-70％。
e.2，3-二氨基萘(DAN)试剂-重量为1.0g的DAN粉末(97％纯度)，并转移到2L锥形瓶中。添加500m 0.1M HCl并用60C水浴加热15分钟。搅拌以帮助溶解粉末。用0.1M HCl稀释至1L。用40-50mL环己烷提取溶液3-5分钟并丢弃环己烷层。重复提取三次。通过用0.1M HCl预润湿的滤纸过滤DAN试剂。当在冷藏机中避光保存时，DAN试剂在至少两周内是稳定的。
f.(乙二胺)四乙酸(EDTA)标准溶液。(1)EDTA标准原液-0.1M。将37.2g(乙二胺)四乙酸二钠盐置于1L容量瓶中并用水稀释至容量瓶体积。(2)EDTA工作标准溶液-0.01M。根椐待分析的管的数目，用水稀释足够体积的EDTA标准原液(1+9)以提供15mL/管。
g.亚硒酸盐标准溶液。(1)亚硒酸盐标准原液-0.4μg Se/mL。将100mL亚硒酸盐标准溶液(1000μg Se/mL1％HNO3；可商购获得的原子吸收标准溶液是合适的)吸移到1L容量瓶中并用0.1M HCL稀释至容量瓶体积。从该溶液中吸移40mL至100mL容量瓶中并用0.1M HCl稀释至容量瓶体积。(注意：作为另外一种选择，在1L容量瓶中将0.400g Se溶解在HNO3中并用0.1M HCl稀释至容量瓶体积；在容量瓶中用0.1M HCl将10.0mL的该溶液稀释至1L。最后，在容量瓶中用0.1M HCl将10mL的该溶液稀释至100mL并直接使用。)(2)亚硒酸盐校准标准溶液。吸移0.00(空白试剂)、0.200、0.500、1.00和1.50mL亚硒酸盐标准原液至单独的消化容器中以获得0.00、0.08、0.200、0.400和0.600μg Se/容器。
h.亚硒酸钠标准溶液-0.4μg Se/mL。将0.1915g无水Na2SeO4转移到1L容量瓶中，用水稀释至容量瓶体积。均匀混合。从该溶液中吸移5.00mL至1L容量瓶中并用水稀释至容量瓶体积。
D.质量保证：
开始用每组测试溶液消化，运行两个空白试剂和至少四个亚硒酸盐标准溶液，C(g)(2)，(例如0.080、0.200、0.400和0.600μg Se/容器)；并且一个管包含0.500mL亚硒酸钠溶液，C(h)，(0.2μg Se/容器)以检查还原步骤的充分性，因为亚硒酸盐不与DAN反应。期望95-105％的回收率。否则，再分析整个组。
可在分析中包括适当的NIST标准参照物质(SRM)，例如NIST 1643c，水中的痕量元素(最方便使用)，NIST 1567a，面粉；和NIST 1577b，牛肝。可省略SRM的预消化步骤。将适量的SRM直接转移或称重到消化管中。
E.测定：
a.预消化-称重大约10g预混物或饲料到250-1000mL锥形瓶中并记录重量，精确至10mg(Wa)。(使用可行的最小化发泡问题的最大烧瓶。)缓慢并且小心地添加75m：HNO3和沸石(或多个玻璃小珠)。(注意：当添加HNO3时，具有大量石灰石或易氧化材料的基质可能引起发泡。)在热板上加热直至尽可能多的材料在溶液中并且一氧化氮烟雾消失(通常15分钟是足够的)。冷却溶液并用水定量稀释，使得Se含量降低到0.04和0.60μg/mL之间。记录稀释的预消化溶液的最终体积，精确至mL(V1)。
b.消化-如下进行：
1.充分混合来自A.的预消化溶液以使全部未溶解的材料悬浮。吸移1.00mL等分试样至测试管(消化容器)中。如果预消化溶液的Se含量低(＜0.02μg/mL)，则可使用至多10mL的等分试样。记录体积，精确至0.01mL(Va)。
2.将多孔沸石添加到每个管，包括空白、亚硒酸盐校准标准溶液和Na2SeO4标准溶液。如果使用玻璃小珠，则添加2-3个小珠。
3.将4mL HNO3和1mL HClO4[或5mL HClO4-HNO3混合物(1+4，v/v)]添加到每个管。
4.将管置于加热铝块中。缓慢升温至210C(大约2h)。在完成消化时，在管中应可见到HClO4的白色烟雾。在达到白色烟雾状态后，再加热15分钟。
5.从加热块中移除管。将管冷却至室温并将加热块冷却至110-150C。
c.还原-将0.5mL浓HCl添加到来自b5的管。再次将管置于加热块中并加热30分钟。确保整个周期的温度保持在110-150C之间。
d.衍生和定量：
1.从加热块中移除管并使其冷却。在该步骤时使管在室温下是关键的。(注意-程序可在任何时间中断、继续并包括该步骤。)
2.将15mL EDTA工作标准溶液，C(f)(2)和2mL DAN试剂，C(e)，添加到测试管。(注意-可同时添加两种溶液；然而，它们不应在紧接着使用前混合在一起超过10分钟，否则将形成沉淀。)在涡旋混合器上均匀混合各个管，至少两次将涡旋置于管的底部。
3.将管架置于60C水浴中并保持30分钟。确保水平面在反应混合物的平面上方。
4.从水浴中移除架并在流动自来水中使管冷却5分钟。
5.将5mL环己烷添加到每个管。具有特氟隆内衬顶盖的管在旋转提取单元中提取大约5-10分钟(60-70rpm/min)。(注意-可通过振荡(颠倒)管架提供最大提取的一段时间来进行手动提取。)
6.将环己烷层转移到荧光计比色皿中。确保溶液不含任何悬浮的水滴，所述水滴可能附着到光路中的比色皿壁。
7.将荧光计的激发波长设定在375nm并将发射波长设定在525nm。用环己烷使荧光计归零并读取空白值以判断DAN试剂的质量。如果读数大于2-3个荧光单位，则DAN试剂应用环己烷再次提取。用空白使荧光计归零。
8.测定亚硒酸盐校准标准溶液的荧光(F)并计算标准曲线的回归公式。使用比降(k)计算测试溶液中的Se浓度。根椐可用的设备，这可通过内置的校准程序自动完成。(注意-当以C(g)(2)中描述的浓度使用亚硒酸盐校准标准溶液时，荧光响应是线性的。包含高达2μg Se/容器的标准物可保持线性关系。)
9.测定测试溶液的荧光。
F.计算：
根椐所用荧光计的支持软件，校准数据、稀释因数和测试部分重量可存储在计算机中，并且可打印出Se的最终含量[μg/g(ppm)]。报告μg Se/g，精确至三位有效数字。
当使用手动系统时，如下计算测试样品中的Se含量：
μg Se/g＝(F/g)(V1/VA)(1/Wa)
本文所公开的尺寸和值不应被理解为严格限于所述确切数值。相反，除非另外指明，每个上述尺寸旨在表示所述值以及围绕该值的功能上等同的范围。例如，所公开的尺寸“40mm”旨在表示“约40mm”。
除非明确地不包括在内或换句话讲限制，本文所引用的每篇文献，包括任何交叉引用的或相关的专利或专利申请，均特此以引用方式全文并入本文。任何文献的引用不是对其作为本文所公开的或受权利要求书保护的任何发明的现有技术，或者其单独地或者与任何其它参考文献的任何组合，或者参考、提出、建议或公开任何此类发明的认可。此外，当本发明中术语的任何含义或定义与以引用方式并入的文件中术语的任何含义或定义矛盾时，应当服从在本发明中赋予该术语的含义或定义。
虽然已经举例说明和描述了本发明的特定实施例，但是对于本领域的技术人员来讲显而易见的是，在不脱离本发明的精神和范围的情况下可做出各种其它改变和变型。因此，随附权利要求书旨在涵盖本发明范围内的全部这些改变和变型。