本发明涉及畜牧养殖饲料技术领域，具体来说是一种含柠檬酸铜的仔猪微量元素预混料及其应用。
背景技术：
铜作为一种必须的微量元素，参与机体的构成，同时也是多种酶(铜锌超氧化物歧化酶、铜蓝蛋白等)的重要组成成分。研究表明高剂量的铜具有促进仔猪生长，提高饲料转换效率的作用。在现代化、规模化的养猪生产中，仔猪腹泻比较常见，而高铜对降低仔猪的腹泻具有一定的作用。然而饲料中高剂量的铜会在猪体内残留，可能会对猪带来危害。
目前常用的无机铜饲料添加剂在体内的吸收率很低，这会造成大量铜被排放到环境中，造成环境中铜的富集。相比之下，有机铜相对比较稳定、呈电中性、高度可溶，在动物消化道内能维持其结构完整性而到达小肠吸收部位，从而可被有效吸收。这就意味着可以用较少剂量的有机铜达到与高剂量无机铜相似的生长性能的同时，减少对环境污染，降低对猪的有害作用，提高猪肉的安全性。
技术实现要素：
本发明的目的是针对上述技术存在的问题，提供一种含柠檬酸铜的仔猪微量元素预混料及其应用。
为实现上述目的，本发明采用的技术方案是：一种含柠檬酸铜的仔猪微量元素预混料，所述预混料中含有柠檬酸铜，且所述柠檬酸铜在预混料中的重量份数为4.412-35.294份。
进一步的，还包括下列重量份数的原料：一水硫酸亚铁16.667份、一水硫酸锌11.594份、一水硫酸锰47.17份、亚硒酸钠1.667份、碘化钾0.329份和沸石粉29.732-60.615份。
在本发明的一些具体实施方案中，本发明提供的微量元素预混料组分包括：一水硫酸亚铁16.667份、一水硫酸锌11.594份、柠檬酸铜4.412份、一水硫酸锰47.17份、亚硒酸钠1.667份、碘化钾0.329份和沸石粉60.615份。
在本发明的一些具体实施方案中，本发明提供的微量元素预混料组分包括：一水硫酸亚铁16.667份、一水硫酸锌11.594份、柠檬酸铜8.824份、一水硫酸锰47.17份、亚硒酸钠1.667份、碘化钾0.329份和沸石粉56.203份。
在本发明的一些具体实施方案中，本发明提供的微量元素预混料组分包括：一水硫酸亚铁16.667份、一水硫酸锌11.594份、柠檬酸铜17.647份、一水硫酸锰47.17份、亚硒酸钠1.667份、碘化钾0.329份和沸石粉47.379份。
在本发明的一些具体实施方案中，本发明提供的微量元素预混料组分包括：一水硫酸亚铁16.667份、一水硫酸锌11.594份、柠檬酸铜35.294份、一水硫酸锰47.17、亚硒酸钠1.667份、碘化钾0.329份和沸石粉29.732份。
本发明还提供一种含柠檬酸铜的仔猪微量元素预混料在制备仔猪配合饲料中的应用。
本发明还提供一种仔猪配合饲料，含有所述微量元素预混料。
进一步的，所述微量元素预混料的质量百分含量为0.2％。
本发明中，一水硫酸亚铁中铁含量≥30.0％、一水硫酸锌中锌含量≥34.5％份、柠檬酸铜中铜含量≥34.0％、一水硫酸锰中锰含量≥31.8％、亚硒酸钠中硒含量≥0.5％、碘化钾中碘含量≥3.8％。
本发明的有益技术效果是：本发明微量元素预混料有助于提高仔猪平均日增重(ADG)、平均日采食量(ADFI)和料重比(F/G)，前期(0～14天)日粮添加60、120和240mg/kg柠檬酸铜的ADG和ADFI显著高于阴性对照组(P<0.05)，240mg/kg柠檬酸铜的ADFI显著高于对照组(P<0.05)。后期(15～28天)日粮添加30和60mg/kg柠檬酸铜的ADG和ADFI显著高于对照组和阴性对照组(P<0.05)，全期(0～28天)日粮添加30和60mg/kg柠檬酸铜的ADG和ADFI显著高于阴性对照组，60mg/kg柠檬酸铜的ADFI显著高于对照组(P<0.05)；
此外本发明还能提高仔猪血清中HDL-C、干扰素γ和INS，同时降低盲肠、结肠大肠杆菌数。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1
一种含柠檬酸铜的仔猪微量元素预混料包括组分：一水硫酸亚铁16.667份、一水硫酸锌11.594份、柠檬酸铜4.412份、一水硫酸锰47.17、亚硒酸钠1.667份、碘化钾0.329份和沸石粉60.615份。
实施例2
一种含柠檬酸铜的仔猪微量元素预混料包括组分：一水硫酸亚铁16.667份、一水硫酸锌11.594份、柠檬酸铜4.412份、一水硫酸锰47.17、亚硒酸钠1.667份、碘化钾0.329份和沸石粉60.615份。
实施例3
一种含柠檬酸铜的仔猪微量元素预混料包括组分：一水硫酸亚铁16.667份、一水硫酸锌11.594份、柠檬酸铜17.647份、一水硫酸锰47.17、亚硒酸钠1.667份、碘化钾0.329份和沸石粉47.379份。
实施例4
一种含柠檬酸铜的仔猪微量元素预混料包括组分：一水硫酸亚铁16.667份、一水硫酸锌11.594份、柠檬酸铜35.294份、一水硫酸锰47.17、亚硒酸钠1.667份、碘化钾0.329份和沸石粉29.732份。
实施例5
材料与方法
1.1受试物
柠檬酸铜：柠檬酸铜≥98.5％，铜≥34.0％，实测值为34.4％，由四川省畜科饲料有限公司生产。
五水硫酸铜：五水硫酸铜≥98.0％，铜≥24.0％，实测值为24.5％，由四川省畜科饲料有限公司提供。
1.2试验动物与分组
本试验采用单因子试验设计，选用216头35日龄健康的杜长大三元杂交断奶仔猪，初始体重为8.98±1.21kg，按体重一致、公母各半的原则，随机分为6个处理，每个处理6个重复，每个重复6头猪，试验期28天。基础日粮为玉米-豆粕型，对照组在基础日粮中添加180mg/kg硫酸铜，5个处理组分别在基础日粮中添加0(阴性对照组)、30mg/kg(实施例1)、60mg/kg(实施例2)、120mg/kg(实施例3)和240mg/kg(实施例4)柠檬酸铜(以铜计)。
1.3试验日粮
试验采用玉米-豆粕型基础日粮，基础日粮营养水平参考NRC猪饲养标准(2012版)配合而成，试验基础日粮的组成及营养水平见 表1。配合日粮时，用玉米粉对硫酸铜或柠檬酸铜进行逐级稀释放大，混匀后与其他原料混合。
表1试验基础日粮组成及营养水平(％)
注：1预混料给每千克配合饲料提供：维生素A，12KIU；维生素D3，2KIU；维生素E，30.00IU；维生素K3，2.50mg；维生素B1，2.50mg；维生素B2，4.00mg；维生素B6，3.00mg；维生素B12，20.00ug；烟酸，40.00mg；泛酸，12.50mg；叶酸，0.70mg；生物素，0.07mg；铁，100mg；铜，10mg(以硫酸铜形式添加)；锌，80mg；锰，30mg；碘，0.25mg；硒，0.15mg。
2营养水平除消化能外均为实测值。
1.4饲养管理
试验前对猪舍进行彻底消毒，并清洗料槽、饮水器，同时对试验猪进行常规免疫与驱虫。猪舍温度控制在23-27℃，自由采食和饮水。 消毒按常规程序进行。严格遵循猪场饲养和管理制度，每日注意观察猪采食、粪便和精神状况。
1.5样品采集
于试验第14和28天，每处理每重复选取1头体重接近该圈平均值的猪(每处理6头猪)进行前腔静脉采血10mL，于室温下倾斜放置0.5h，2000rpm离心10min制备血清，于-20℃保存备用。于试验第28天，每处理每重复选取1头体重接近该圈平均值的猪(每处理6头猪)屠宰，采集肝脏样品，液氮处理后于-20℃保存备用；采集盲肠、结肠食糜，液氮处理后于-80℃保存备用。
1.6测定指标及方法
1.6.1生长性能
于试验开始、第14天和第28天对猪进行空腹称重，结算耗料量，在整个试验期记录死亡情况。以重复为单位，计算平均日采食量(ADFI)、平均日增重(ADG)、耗料增重比(F:G)和死亡率。
1.6.2血脂指标
血脂指标包括血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL-C)、低密度脂蛋白(LDL-C)和极低密度脂蛋白(VLDL-C)含量。血脂含量检测方法为比色法，按照南京建成生物工程研究所试剂盒的说明进行测定，使用仪器为日立7600生化仪。
1.6.3免疫指标
血清免疫指标包括血清免疫球蛋白A(IgA)、免疫球蛋白G(IgG)、免疫球蛋白M(IgM)含量、白细胞介素-1(IL-1β)和干扰素γ(IFN-γ)含量。血清IgM、IgA和IgG含量检测方法为比色法，按照南京建成生物工程研究所试剂盒的说明进行测定，使用仪器为日立7600生化仪；血清IL-1β和IFN-γ含量检测方法为酶联免疫分析法，试剂盒厂家为eBioscience，CA，美国。使用仪器为Multiskan MK3酶标仪(Thermo Fisher Scientific公司)。
1.6.4抗氧化指标
血清和肝脏抗氧化指标包括丙二醛(MDA)含量、铜锌超氧化物歧化酶(Cu/Zn-SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和铜蓝蛋白(CuP)活性。按照南京建成生物工程研究所试剂盒的说明进行测定，使用仪器为日立7600生化仪。
1.6.5血清激素
血清激素包括三碘原甲状腺素(T3)、甲状腺素(T4)、类胰岛素生长因子(IGF-1)、生长激素(GH)和胰岛素(INS)含量。血清激素检测方法为放射免疫分析法，使用仪器为Sn-69513型免疫计数器(上海核所日环光电仪器有限公司)。
1.6.6血清微量元素
血清微量元素包括铜、铁、锌含量。血清Cu、Fe和Zn含量采用电感耦合等离子体质谱仪(安捷伦7500，安捷伦科技有限公司，美国)测定。
1.6.7肠道微生物
微生物测定指标包括总菌(好氧菌和厌氧菌)，大肠杆菌和乳酸杆菌数量，检测方法为涂布平板计数法。
1.7数据处理与统计分析
试验数据以重复(圈)为统计单位，采用SAS 9.2统计软件处理，进行GLM分析、Duncan多重比较。柠檬酸铜添加水平的一次和二次效应分析采用正交多项式比较，P<0.05时差异显著。
2.结果与分析
2.1生长性能
表2日粮添加不同水平柠檬酸铜对断奶仔猪生长性能的影响1
注：1同行数据中肩标不同小写字母表示差异显著(P<0.05)；未标明字母或相同字母表示差异不显著(P>0.05)。
2 ADG为平均日增重，ADFI为平均日采食量，F:G为耗料增重比。
日粮添加不同水平柠檬酸铜对断奶仔猪生长性能的影响见表2。由表2可知，前期(0～14天)日粮添加60、120和240mg/kg柠檬酸铜的ADG和ADFI显著高于阴性对照组(P<0.05)，240mg/kg柠檬酸铜的ADFI显著高于对照组(P<0.05)。其他各组间的ADG、ADFI 与对照组比均无显著差异(P>0.05)。试验各组间的F:G和死亡率差异不显著(P>0.05)。
后期(15～28天)日粮添加30和60mg/kg柠檬酸铜的ADG和ADFI显著高于对照组和阴性对照组和240mg/kg柠檬酸铜组(线性和二次，P<0.05)。其他各组间的ADG、ADFI与对照组比均无显著差异(P>0.05)。F:G和死亡率各组间均无显著差异(P>0.05)。
全期(0～28天)，日粮添加30和60mg/kg柠檬酸铜的ADG和ADFI显著高于阴性对照组，60mg/kg柠檬酸铜的ADFI显著高于对照组(线性，P<0.05)。F:G和死亡率各组间均无显著差异(P>0.05)。
全期断奶仔猪获得最大平均日增重的日粮柠檬酸铜添加量预测值为48.11mg/kg。
结果表明，前期(0～14天)日粮添加60、120和240mg/kg的柠檬酸铜，后期(15～28天)添加30和60mg/kg的柠檬酸铜，全期(0～28天)添加30和60mg/kg的柠檬酸铜改善了断奶仔猪的生长性能。表明在断奶仔猪日粮中柠檬酸铜适宜的添加剂量为30～60mg/kg。
2.2血脂含量
表3日粮添加不同水平柠檬酸铜对断奶仔猪血脂含量的影响1
注：1同行数据中肩标不同小写字母表示差异显著(P<0.05)；未标明字母或相同字母表示差异不显著(P>0.05)。
2 TC为总胆固醇，TG为甘油三酯，HDL-C为高密度脂蛋白，LDL-C为低密度脂蛋白，VLDL-C为极低密度脂蛋白。
日粮添加不同水平柠檬酸铜对断奶仔猪血脂含量的影响见表3。由表3可知，14天时，血清TC、TG、HDL-C、LDL-C和VLDL含量各组间均无显著差异(P>0.05)。
28天时，日粮添加60mg/kg柠檬酸铜血清HDL-C含量显著高于其他组(线性，P<0.05)。血清TC、TG、LDL-C和VLDL含量各组间均无显著差异(P>0.05)。
表明日粮中添加不同剂量的柠檬酸铜对血清TC、TG、HDL-C、LDL-C和VLDL含量影响较小。日粮中添加60mg/kg的柠檬酸铜可以提高断奶仔猪后期(15～28天)的血清HDL-C含量，有助于改善断奶仔猪的脂质代谢。
2.3血清免疫性能
表4日粮添加不同水平柠檬酸铜对断奶仔猪免疫性能的影响1
注：1同行数据中肩标不同小写字母表示差异显著(P<0.05)；未标明字母或相同字母表示差异不显著(P>0.05)。
2 IgM为免疫球蛋白M，IgA为免疫球蛋白A，IgG为免疫球蛋白G，IL-1β为白细胞介素-1，IFN-γ为干扰素γ。
日粮添加不同水平柠檬酸铜对断奶仔猪免疫性能的影响见表4。由表4可知，14天时，日粮添加30mg/kg柠檬酸铜的血清IgA含量显著高于对照组和120、240mg/kg柠檬酸铜组(P<0.05)。30和60mg/kg柠檬酸铜组的血清干扰素γ含量显著高于对照组和阴性对照组(线性和二次，P<0.05)。
28天时，血清IgM、IgA、IgG、白细胞介素-1和干扰素γ含量各组间均无显著差异(P>0.05)。
表明前期(0～14天)日粮中添加30mg/kg柠檬酸铜提高了血清IgA和干扰素γ含量，提高了断奶仔猪的免疫性能。
2.4抗氧化性能
表5日粮添加不同水平柠檬酸铜对断奶仔猪抗氧化性能的影响1
注：1同行数据中肩标不同小写字母表示差异显著(P<0.05)；未标明字母或相同字母表示差异不显著(P>0.05)。
2 MDA为丙二醛，Cu/Zn-SOD为铜锌超氧化物歧化酶，GSH-Px为谷胱甘肽过氧化物酶，CuP为铜蓝蛋白。
日粮添加不同水平柠檬酸铜对断奶仔猪抗氧化性能的影响见表5。由表5可知，14天时，日粮添加240mg/kg柠檬酸铜的血清Cu/Zn-SOD活性显著高于对照组、0、60和120mg/kg柠檬酸铜组(P<0.05)。血清MDA含量、GSH-Px、CuP活性各组间均无显著差异(P>0.05)。
28天时，日粮添加30、60和120mg/kg柠檬酸铜的血清MDA含量显著低于阴性对照组(线性，P<0.05)，但与对照组比差异不显著(P>0.05)。30和60mg/kg柠檬酸铜组的血清Cu/Zn-SOD活性显著高于其他组(线性，P<0.05)。30、60和120mg/kg柠檬酸铜组和对照组血清GSH-Px活性显著高于阴性对照组(线性，P<0.05)。血清CuP含量各组间无显著差异(P>0.05)。
日粮添加30、60和120mg/kg柠檬酸铜和对照组肝脏MDA含量显著低于0和240mg/kg柠檬酸铜组(线性和二次，P<0.05)。肝脏Cu/Zn-SOD、GSH-Px和CuP活性各组间均无显著差异(P>0.05)。
表明日粮添加240mg/kg柠檬酸铜可以提高14天血清Cu/Zn-SOD活性，30和60mg/kg柠檬酸铜降低了28天血清MDA含量，30～120 mg/kg柠檬酸铜提高了28天血清GSH-Px和Cu/Zn-SOD活性，降低了肝脏MDA含量，减少了肝脏的过氧化程度，改善了断奶仔猪的抗氧化性能。
2.5血清激素
表6日粮添加不同水平柠檬酸铜对断奶仔猪血清激素含量的影响1
注：1同行数据中肩标不同小写字母表示差异显著(P<0.05)；未标明字母或相同字母表示差异不显著(P>0.05)。
2 T3为三碘原甲状腺素，T4为甲状腺素，IGF-1类胰岛素生长因子，GH为生长激素，INS为胰岛素。
日粮添加不同水平柠檬酸铜对断奶仔猪血清激素含量的影响见表6。由表6可知，14天时，日粮添加30和60mg/kg柠檬酸铜的血清INS含量显著高于对照组和阴性对照组(线性，P<0.05)。血清T3、T4和GH含量各组间均无显著差异(P>0.05)。28天时，血清T3、T4、IGF1、GH和INS含量各组间均无显著差异(P>0.05)。表明，日粮添加30和60mg/kg柠檬酸铜提高了血清胰岛素含量，增强对血清葡萄糖的利用，促进断奶仔猪的生长。
2.6血清微量元素
表7日粮添加不同水平柠檬酸铜对断奶仔猪血清微量元素含量的影响1(mg/L)
注：1同行数据中肩标不同小写字母表示差异显著(P<0.05)；未标明字母或相同字母表示差异不显著(P>0.05)。
日粮添加不同水平柠檬酸铜对断奶仔猪血清微量元素的影响见表7。由表7可知，14天时，日粮添加120和240mg/kg柠檬酸铜的血清Cu含量显著高于0和30mg/kg柠檬酸铜组(P<0.05)，240mg/kg柠檬酸铜组的血清Cu含量显著高于除120mg/kg柠檬酸铜组外的其他处理组(P<0.05)。120、240mg/kg柠檬酸铜组和对照组的血清Fe含量显著低于0、30和60mg/kg柠檬酸铜组(P<0.05)。血清中Zn含量各组间均无显著差异(P>0.05)。
28天时，日粮添加240mg/kg柠檬酸铜和对照组血清Cu含量显著高于0和30mg/kg柠檬酸铜组(P<0.05)。血清中Fe、Zn含量各组间均无显著差异(P>0.05)。
表明日粮添加120～240mg/kg的柠檬酸铜时，显著升高了血清Cu含量，降低了Fe含量。添加30和60mg/kg柠檬酸铜对血清微量元素无影响。
2.7肠道微生物
表8日粮添加不同水平柠檬酸铜对断奶仔猪肠道微生物的影响1(lg(CFU/g))
注：1同行数据中肩标不同小写字母表示差异显著(P<0.05)；未标明字母或相同字母表示差异不显著(P>0.05)。
日粮添加不同水平柠檬酸铜对断奶仔猪肠道微生物的影响见表8。由表8可知，日粮添加柠檬酸铜组的盲肠、结肠大肠杆菌数均显著低于阴性对照组(P<0.05)，但与对照组比差异不显著(P>0.05)。对照组的结肠大肠杆菌数显著低于阴性对照组(P<0.05)。盲肠和结肠的总菌和乳酸杆菌数各组间均无显著差异(P>0.05)。表明，日粮添加柠檬铜或硫酸铜对盲肠、结肠的总菌群和乳酸杆菌数无影响，但添加30～240mg/kg的柠檬酸铜可以减少盲肠、结肠的大肠杆菌数，改善肠道菌群。
3.小结
3.1前期(0～14天)日粮添加60、120和240mg/kg柠檬酸铜的ADG和ADFI显著高于阴性对照组(P<0.05)，240mg/kg柠檬酸铜的ADFI显著高于对照组(P<0.05)。后期(15～28天)日粮添 加30和60mg/kg柠檬酸铜的ADG和ADFI显著高于对照组和阴性对照组(P<0.05)，全期(0～28天)日粮添加30和60mg/kg柠檬酸铜的ADG和ADFI显著高于阴性对照组，60mg/kg柠檬酸铜的ADFI显著高于对照组(P<0.05)。
3.2 28天时日粮添加60mg/kg柠檬酸铜的血清HDL-C含量显著高于其他组(P<0.05)；
3.3 14天时日粮添加30和60mg/kg柠檬酸铜的血清干扰素γ含量显著高于对照组和阴性对照组(P<0.05)；
3.4 28天时日粮添加30、60和120mg/kg柠檬酸铜与阴性对照组比血清和肝脏MDA含量显著降低(P<0.05)，血清GSH-Px活性显著升高，但与对照组比差异不显著(P>0.05)。30和60mg/kg柠檬酸铜组的血清Cu/Zn-SOD活性显著高于其他组(P<0.05)；
3.5 14天时日粮添加30和60mg/kg柠檬酸铜的血清INS含量显著高于对照组和阴性对照组(P<0.05)；
3.6 14天时日粮添加120和240mg/kg柠檬酸铜与阴性对照组比血清Cu含量显著增高(P<0.05)。血清Fe含量显著降低(P<0.05)，但与对照组比差异不显著(P>0.05)。28天时240mg/kg柠檬酸铜组的血清Cu含量显著高于阴性对照组(P<0.05)；
3.7日粮添加30、60、120和240mg/kg柠檬酸铜的盲肠、结肠大肠杆菌数显著低于阴性对照组(P<0.05)；
3.8断奶仔猪日粮中柠檬酸铜推荐的适宜添加量为30～60mg/kg。
本技术领域技术人员可以理解，除非另外定义，这里使用的所有术语(包括技术术语和科学术语)具有与本发明所属领域中的普通技术人员的一般理解相同的意义。还应该理解的是，诸如通用字典中定义的那些术语应该被理解为具有与现有技术的上下文中的意义一致 的意义，并且除非像这里一样定义，不会用理想化或过于正式的含义来解释。
最后所应说明的是：以上实施例仅用以说明而非限制本发明的技术方案，尽管参照上述实施例对本发明进行了详细说明，本领域的普通技术人员应该理解：依然可以对本发明进行修改或者等同替换，而不脱离本发明的精神和范围的任何修改或局部替换，其均应涵盖在本发明的权利要求范围当中。