本发明属于饲料添加剂领域，特别涉及一种抗应激饲料添加剂及其应用方法。
背景技术：
应激是指动物对外界或内部的各种非常刺激所产生的非特异性应答反应的总和。随着集约化和工业畜牧业的发展畜禽生产性能和饲养密度大大增加，应激给畜牧业造成了巨大损失。动物的应激反应是动物机体对受到体内及外界环境变化刺激时的一种适应性反应。 应激反应受多种因素刺激而产生，包括内在的遗传因素、生产繁殖因素、外界的环境因素等，这些应激因素 “应激原” 刺激动物都会给动物机体造成危害。其表现为动物精神委顿，食欲废绝，或极度兴奋，狂躁不安，采食减少；合成代谢减弱，饲料转化率降低，生长发育缓慢， 生产性能下降，产品质量降低，免疫力减弱，过敏甚至死亡等临床症状。免疫接种疫苗是控制传染病的有效方法之一。但免疫过于频繁，程序混乱，操作粗暴，驱赶抓捕，特别是外来品种的畜禽，如猪，在上述因素的影响下会发生呼吸急促，皮肤发红，倒地，口吐白沫，搐动等应激反应。仔猪断奶是一个综合应激，包括断奶本身，隔圈，饲料改变，环境改变等。仔猪断奶发生后，出现采食量下降，烦躁不安，攻击行为加强，生长受阻，腹泻并发水肿病等应激反应。家畜家禽是恒温动物，一般汗腺不发达，热应激是动物处于极端高温的环境中机体对热环境所做出的非特异性的生理反应总和。 表现为母猪掉膘严重，发情间隔延长，公猪性欲下降，精液品质差，奶牛产奶量和乳脂率下降。高产奶牛由于产热量大，则更为严重，肉鸡会发生猝死， 蛋鸡产蛋减少，蛋重减轻，蛋体变小，蛋壳变薄。而冷应激同样会出现畜禽身体不适多种表现。在装卸和运输过程中，许多强刺激作用于动物，会降低动物的防御机制导致发烧。生猪呼吸急促，就会发生严重的运输应激。中国专利申请CN101313731A公开了一种抗应激饲料添加剂，其组成为：黄芪多糖15～30％、黄岑甙15～30％、薄荷油包裹物10～20％、金银花提出物10～20％、维生素C 0.5～5％、维生素E 0.5～5％、吡啶甲酸铬0.001～0.02％、氧化锌0.05～0.3％、精氨酸0.1～1％、色氨酸1～5％、谷氨酰氨1～5％、硫酸钠1～5％、碘酸钙1～3％、亚硒酸钠1～3％、磷酸二氢钾1～3％，余量为辅料。按照0.1～0.3％的比例将本发明添加到禽畜饲料中即可。该发明可增强禽畜的抗应激能力，但黄芪多糖比例高达30%，提高了添加剂的成本，此外，该发明适于应激方面有局限性，仅适于抗冷应激和热应激，对于运输过程和其他方面的应激没有提及，而畜禽运输过程及免疫的应激是很重要的方面。
技术实现要素：
本发明的目的是针对现有的抗应激饲料添加剂的不足之处，提供一种可抗多种应激状态的禽畜抗应激饲料添加剂及其应用方法。
本发明的具体技术方案是这样的：
一种抗应激饲料添加剂，其特征在于，该抗应激饲料添加剂，各组分重量百分比如下：黄芪多糖提取物1.9-2.1%，低聚木糖 24-26%，维生素C 39-41%，维生素B1 0.9-1.1%，维生素B2 1.2-1.3%，氟尼辛葡甲胺 0.7-0.8%，葡萄糖29-31%。将所述抗应激的饲料添加剂中的各组分混合均匀、干燥后即可制得所述抗应激的饲料添加剂。所述干燥的温度为30℃~36℃；所述干燥的时间为10min~30min。
一种抗应激饲料添加剂的应用方法，其特征在于：其应用包括如下步骤：（1）将所述抗应激的饲料添加剂按0.1%~0.2%的重量百分比加入到畜禽饲料中，混合均匀即可，鸡用最好在饲料中加入少量水；（2）使用时在热应激情况下连续15天，间隔5天再连续应用；（3）在免疫应激过程中避免应激产生的不良反应建议免疫前5天开始使用，连续使用20天；（3）在运输应激过程中全程添加，连续使用。
本发明具有如下显著效果：
1. 本发明通过中草药提取物、维生素和氟尼辛葡甲胺配伍组合，在抗应激条件下，能综合增强机体免疫功能、营养需求的动力学变化，从而改善动物机体抗应激效果，通过将所述抗应激的饲料添加剂直接投予畜禽饲料中即能达到良好的效果。
2.与现有技术相比，本发明可增强畜禽的多种抗应激能力，尤其适用于燥热天气的产蛋和产奶畜禽抗应激，热天的长途运输，能缓解和治疗运输应激如紧张情绪、躁动、拥挤产生的热应激；对缓解冷应激出现的不适也有较好的效果；同时对免疫过程产生的疼痛应激和断奶对环境不适应应激和运输过程的应激都有效果。
3.本发明生产成本低，通过合理使用可获得较高的经济效益。
4.本发明可促进畜禽对碳水化合物的吸收，增强畜禽的免疫力。
具体实施方式
下面通过具体实施例对本发明的方法进行说明，但本发明并不局限于此，凡在本发明的精神和原则之内所做的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
下述实施例中所述实验方法，如无特殊说明，均为常规方法所述试剂和材料，如无特殊说明，均可从商业途径获得。
实施例1：抗应激饲料添加剂的制备及对猪瘟抗体水平影响。
抗应激饲料添加剂的制备：按照如下质量取各组分：黄芪多糖提取物20g、低聚木糖250g、维生素C 400g、维生素B1 10g、维生素B2 12.5g、氟尼辛葡甲胺7.5g、葡萄糖300g然后，将上述各组分按照上述比例称取后，再放入搅拌器进行充分搅拌混合后，经干燥（干燥温度为35℃）后即可得本发明的抗应激的饲料添加剂。
猪瘟又称古典猪瘟，是由猪瘟病毒（ Classical swine fever virus,CSFV）引起猪以高热、 出血和高死亡率为特征的接触性传染病。我国的猪瘟发病率呈上升趋势，有关猪瘟的持续性感染、胎盘垂直感染、妊娠母猪带毒综合征以及新生仔猪的免疫耐受等报道也不断增多，给猪瘟防治工作带来新的困难， 也严重威胁着我国养猪业的发展。通过加入免疫增强剂或饲喂促进免疫功能提升的饲料添加剂是解决问题的一个很好的途径。为了解抗应激饲料添加剂对抗体水平和免疫保护的影响，通过检测试验猪场猪瘟抗体水平，为该饲料添加剂的推广应用提供依据。
1 材料与方法
1.1实验动物和饲料添加剂添加方法
选取宁夏中宁某猪场进行试验，育肥猪50头，为前后出生的猪，体重几乎无相差，分为2组各25头，对照组为正常饲喂组，免疫猪瘟疫苗40天后取样；实验组在正常饲料中添加0.2%的抗应激饲料添加剂，在免疫前5天开始饲喂，连续使用20天，换成正常组饲料饲喂，与免疫猪瘟疫苗40天后取样。
1.2 被检血清
2016年6月15日猪免疫猪瘟疫苗，7月30日由宁夏中宁试验猪场采集血样50份。 血样经离心后分离血清，进行猪瘟抗体检测。
1.3检测试剂
猪瘟 ELISA 检测试剂盒为美国 IDEXX 公司产品，购自北京爱德士元亨生物科技有限公司。
1.4试验步骤
（ 1 ）每孔加入 50 μL 样品稀释液。
（ 2 ）分别将 50 μL 的阳性对照和阴性对照加入到相应的对照孔中。
（ 3 ）分别将 50 μL 的被检样品加入到检测孔中，注意每个样本都使用不同吸头。
（ 4 ）轻弹微量反应板或用振荡器振荡，将反应板中的溶液混匀。
（ 5 ）在18～26 ℃ 孵育 2 h 或过夜孵育（ 12～18 h ）。
（ 6 ）用 300 μL 左右的洗涤溶液洗涤每个板孔3次。 在每一次洗涤后，甩去每个板孔中的液体，在最后一次甩掉后，在吸水材料上用力扣板，吸去剩余的液体。
（ 7 ）在每孔中加入 100 μL 酶标抗体，用封条封闭反应板或置于湿盒中在 18～26 ℃ 下孵育 30 min 。
（ 8 ）重复步骤（ 6 ）。
（ 9 ）每个反应孔中加入 100 μL 的底物溶液并于避光、 18～26 ℃ 条件下放置 10 min 。 加完第一孔后即可计时。
（ 10 ）在 10 min 后每个反应孔中加入 100 μL 的终止液终止反应。 加终止液的顺序同步骤（ 9 ），与底物的加入顺序相同。
（ 11 ）在 450 nm 处测定样本以及对照的吸光度值，测定样本以及对照的吸光度值，空气调零。
1.5结果判定
只有当阴性对照的 OD 450nm 大于 0.500 ，阳性对照的阻断率大于 50％，该检测结果才有效。如果被检样本的阻断率大于或等于 40％，该样本就可以被判为阳性（有 CSFV 抗体存在）。 如果被检样本的阻断率小于或等于 30％ ，该样本就可以被判为阴性（无抗CSFV 抗体存在）。 如果被检样本的阻断率在 30％～40％ ，就应在数日后再对该动物进行重测。 如果重测结果仍为可疑，可使用血清中和试验确认。
2 结果与分析
2.1 试验猪场猪瘟抗体检测结果 对宁夏中宁某猪场血清进行猪瘟抗体检测。送检的50份血清，添加了抗应激饲料添加剂试验组25头抗体阳性22头，抗体阳性率达88%。对照组25头抗体阳性19头，抗体阳性率达76%。血清抗体监测是目前对免疫质量进行评价或对疫情进行预警预报和风险评估的常用方法， 定期对猪场猪瘟进行抗体监测，对于了解猪场猪瘟抗体水平变化和进行免疫效果评估， 制定科学合理的免疫程序，指导生猪养殖十分有利的。从本次试验看出添加抗应激饲料添加剂确实能够对免疫有益，能够促进抗体生成，有利于防治疾病的发生。
实施例2：抗应激饲料添加剂的制备及宁夏滩羊长途运输后血液指标比较试验。
（1）抗应激饲料添加剂的制备：按照如下质量取各组分：黄芪多糖提取物20g、低聚木糖250g、维生素C 400g、维生素B1 10g、维生素B2 12.5g、氟尼辛葡甲胺7.5g、葡萄糖300g然后，将上述各组分按照上述比例称取后，再放入搅拌器进行充分搅拌混合后，经干燥（干燥温度为35℃）后即可得本发明的抗应激的饲料添加剂。
（2）滩羊长途运输前后血液指标比较试验：
a）饲料配方：
对照组饲料：玉米55%、麸皮17%、豆粕8%、棉粕8%、菜粕8%。
试验组饲料：将上述实施例1的中所制备得到的抗应激饲料添加剂按照0.2%的比例加入到上述对照组饲料中混合均匀即可。
b)实验分组及方法：
实验分组： 购买体重相近的宁夏盐池滩羊24只，公母各半，由宁夏盐池县运送到内蒙古阿拉善左旗牧场。随机分为2组，每组12头，管理方式一致，一组为对照组，另一组为试验组。
饲喂方法：与运输前5天实验组开始饲喂添加0.2%抗应激饲料添加剂的普通饲料，对照组饲喂普通饲料。
运输当天：当日最高气温为27℃，车速50~70km/h。运输前分别对试验组和对照组中的每只羊测量体温后并经颈静脉采血。然后，再用相同的车辆进行相同距离的长距离运输，长途运输过程中提供饮水和饲料，给对照组中的每头羊提供等量的普通饲料，给试验组中的每头羊提供等量的添加0.2%抗应激饲料添加剂的普通饲料，其中，对照组中的每头羊所饲喂的普通饲料和试验组中的每头羊所饲喂的添加0.2%抗应激饲料添加剂的普通饲料的量相等。
指标检测：经过近7小时长距离运输到达目的地后采血，并用试剂盒测定血液中皮质醇、超氧化物歧化酶、还原型谷胱甘肽、谷草转氨酶、碱性磷酸酶升高等5项生化指标的变化。试验数据使用SPSS19.0进行统计分析。
结果：如表1所示，表中试验组和对照组中皮质醇浓度各为12只羊体内血液中皮质醇浓度的平均值，皮质醇是衡量应激的可靠指标。一般而言，应激程度越大，皮质醇浓度越高。因为应激刺激激活了羊的下丘脑一垂体一肾上腺轴，导致垂体分泌肾上腺皮质激素（ACTH）上升，ACTH促进肾上腺皮质分泌皮质醇，从而导致体内的一些内环境，免疫机能发生变化，通过这种变化来抵抗应激。超氧化物歧化酶、还原型谷胱甘肽是构成机体清除自由基的酶系统，在各种应激原作用下动物机体产生大量自由基。血清谷草转氨酶是肝脏器官功能反映的重要指标，如果其指标水平过高，说明相应的器官可能受到一定损伤。血清碱性磷酸酶活性和机体生长紧密相关，碱性磷酸酶水平的升高就表示成骨细胞活性提高，骨质生成旺盛。从表1可知经过7h运输以后，实验组羊血液中的皮质醇含量还原型谷胱甘肽和谷草转氨酶显著低于对照组（P<0.05)。说明运前饲喂含有抗应激饲料添加剂的饲料可以有效的缓解运输对山羊造成的应激。
表1
实施例3：抗应激饲料添加剂的制备及蛋用鸡热应激前后产蛋质量比较实验。
抗应激饲料添加剂的制备：按照如下质量取各组分：黄芪多糖提取物20g、低聚木糖250g、维生素C 400g、维生素B1 10g、维生素B2 12.5g、氟尼辛葡甲胺7.5g、葡萄糖300g然后，将上述各组分按照上述比例称取后，再放入搅拌器进行充分搅拌混合后，经干燥（干燥温度为35℃）后即可得本发明的抗应激的饲料添加剂。
蛋鸡慢性热应激前后产蛋质量比较实验：
a．抗应激饲料添加剂的制备：按照如下质量取各组分：黄芪多糖提取物20g、低聚木糖250g、维生素C 400g、维生素B1 10g、维生素B2 12.5g、氟尼辛葡甲胺7.5g、葡萄糖300g然后，将上述各组分按照上述比例称取后，再放入搅拌器进行充分搅拌混合后，经干燥（干燥温度为35℃）后即可得本发明的抗应激的饲料添加剂。
对照组饲料：玉米58.4%、麸皮3%、豆粕28%、磷酸氢钙1.3%、石粉8%、食盐0.3%。
试验组饲料：将上述实施例2的中所制备得到的抗应激饲料添加剂按照0.2%的比例加入到上述对照组饲料中混合均匀即可。
b.实验分组及方法：
实验分组： 选取体重相近的宁夏银川某公司养殖的280日龄健康海兰褐蛋鸡360只，随机分为2组，每组180只。A组为对照组，B组为试验组。
试验方法：试验期为15天，实验中鸡舍平均气温为33℃，空气湿度35%。试验期间鸡自由采食、饮水，自然通风结合人工排气，每日早晨7时30分人工加料，下午4时匀料1次，人工拾蛋，每日机械清粪1次。试验期间每日给料前饲料称重，下午匀料后余料称重，记录各组实际耗料量。每日中午13时30分人工拾蛋，称取各组蛋重并记录各组产蛋数、破损数及死亡淘汰鸡数。根据记录，计算平均产蛋率、蛋重、蛋料比、每日每只产蛋重，每日每只耗料量、死淘率试验数据使用SPSS19.0进行统计分析。结果如表2所示。从表2可以看出，抗热应激添加能在高温 (30 ℃以上)条件下显著提高蛋鸡的平均产蛋率和每枚蛋重，显著降低蛋料比，减少死淘率。
表2
实施例4：抗应激饲料添加剂的制备及肉鸡慢性热应激前后比较实验。
a饲料配方：（1）抗应激饲料添加剂的制备：按照如下质量取各组分：黄芪多糖提取物20g、低聚木糖250g、维生素C 400g、维生素B1 10g、维生素B2 12.5g、氟尼辛葡甲胺7.5g、葡萄糖300g然后，将上述各组分按照上述比例称取后，再放入搅拌器进行充分搅拌混合后，经干燥（干燥温度为35℃）后即可得本发明的抗应激的饲料添加剂。
对照组饲料：玉米55.3%、豆粕38%、磷酸氢钙1.4%、石粉1%、食盐0.3%，油3%。
试验组饲料：将上述实施例2的（1）中所制备得到的抗应激饲料添加剂按照0.2%的比例加入到上述对照组饲料中混合均匀即可。
b 实验分组及方法：
实验分组：选取体重相近的宁夏银川某养鸡场养殖的1日龄六合AA肉雏鸡，正常饲养至十日龄。选用体重无明显差异的120只肉仔鸡随机分为两组，雌雄各半。一组为实验组，一组为对照组。
试验方法：10天中鸡舍气温为37~42℃，空气湿度27%。实验前记录每只鸡体重，试验期间鸡自由采食、饮水,自然通风结合人工排气, 每日早晨7时30分人工加料,下午4时匀料1次,每日机械清粪1次。试验期间每日给料前饲料称重，下午匀料后余料称重，记录各组实际耗料量，每日统计死亡数。实验结束后5天检测肉鸡血清中促肾上腺皮质激素（ACTH）、皮质酮（CORT）的含量。试验数据使用SPSS19.0进行统计分析。结果如表3所示。表中ACTH、CORT浓度是衡量应激的可靠指标。当肉鸡处于慢性热应激条件下，应激源刺激机体神经系统，肾上腺功能亢进，抗应激激素分泌增多以抵抗应激增强免疫力，肉鸡体内抗应激激素如ACTH、CORT等的含量升高。从表3可知经过10d饲喂以后，实验组肉鸡血液中的ACTH、CORT含量显著低于对照组（P<0.01)。说明通过饲喂肉鸡含有抗应激饲料添加剂的饲料可以有效的缓解高温对肉鸡造成的应激。
表3