一种利用固定化酶改性提高芝麻蛋白凝胶性的方法与流程

文档序号:14692880发布日期:2018-06-15 20:52阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种利用固定化酶改性提高芝麻蛋白凝胶性的方法,其特征在于,包括如下步骤:

1)芝麻粉碎除油:将芝麻粉碎,采用有机溶剂萃取芝麻中的油脂,萃取结束后,收集除油后的芝麻粉,备用;

2)复酶水解:将除油后的芝麻粉与水混合配成5-25%的溶液a并调节pH至3.0-5.5,加入复酶于30-60℃水解反应30-120 min,水解完毕后,冷却、静置、离心,收集沉淀a,备用;

3)固定化酶制备:将壳聚糖与环氧氯丙烷按1g:3-5ml的比例混合后于60-70℃反应10-30 min,然后加入壳聚糖质量1-5倍的多胺,并于70-80℃反应5-25 min,反应结束后,收集固体a备用;

在氮气保护下,在0.05-0.2 mol/L的Fe3O4溶液中加入等体积的浓氨水,在70-80℃下反应0.5-2 h,反应结束后,收集固体Fe3O4微球,储存于pH2-4的蒸馏水中;

将固体a用稀盐酸溶解后,分别加入占壳聚糖质量40-60%、5-20%的固体Fe3O4微球和三聚磷酸钠,搅拌均匀,用磁铁吸附固体颗粒,获得磁性壳聚糖微粒;

将磁性壳聚糖微粒加入到含2-6%戊二醛的磷酸缓冲液中配成浓度0.2-0.5%的悬浊液,室温搅拌反应1-4h,然后加入含2-8%谷氨酰胺转移酶的磷酸缓冲液,继续搅拌反应4-6 h,用磁铁吸附微粒,蒸馏水洗净,获得固定化谷氨酰胺转移酶,备用;其中,含2-8%谷氨酰胺转移酶的磷酸缓冲液加入量为悬浊液体积的1-3倍;

4)固定化酶改性:将步骤2)获得的沉淀a与水混合配成5-20%的溶液b并调节pH至7.5-9.0,然后加入固定化谷氨酰胺转移酶于30-65℃改性20-100min,离心,收集滤液备用;

5)改性蛋白回收:将步骤4)所得滤液中和后,超滤膜处理,浓缩至50%时,加入蒸馏水恢复至初始体积,再次使用超滤膜进行超滤处理,重复上述操作2-5次,用蒸馏水调节固形物浓度至5-15%,然后喷雾干燥,即获得成品。

2.如权利要求1所述利用固定化酶改性提高芝麻蛋白凝胶性的方法,其特征在于,步骤2)中,所述复酶是由纤维素酶、半纤维素酶和果胶酶组成的混合酶,复酶的添加量为除油后芝麻粉质量的0.05-0.50%,其中,复酶中各原料的重量百分比为:纤维素酶30-60%、半纤维素酶15-35%,果胶酶为20-45%。

3.如权利要求1所述利用固定化酶改性提高芝麻蛋白凝胶性的方法,其特征在于,步骤3)中,所述壳聚糖、环氧氯丙烷、多胺的反应在微波反应器中进行;所述的多胺为精胺和/或亚精胺。

4.如权利要求1所述利用固定化酶改性提高芝麻蛋白凝胶性的方法,其特征在于,步骤4)中,固定化谷氨酰胺转移酶的添加量是溶液b的5-15%。

5.如权利要求1所述利用固定化酶改性提高芝麻蛋白凝胶性的方法,其特征在于,步骤5)中,采用的超滤膜截留分子量为8000-50000 Da。

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