本发明属于食品、饮料或食药用菌技术领域，特别涉及一种修复肝损伤、增强免疫力的蛹虫草组合物及制备方法与应用。
背景技术：
随着生活水平的提高，人们保健意识的增强，保健品特别是药食两用资源得到了普遍的关注。药食兼用的蛹虫草(Cordyceps Militaris(L.)Link)又名北虫草，是真菌寄生于昆虫的蛹形成的虫菌复合体，为我国传统滋补性中药。现代研究表明，蛹虫草富含虫草多糖、腺苷、虫草素等多种生物活性成分，具有止咳、镇痛、降压、抗疲劳、抗菌消炎、抗癌、增强免疫力、延缓衰老等多种生理活性。目前围绕蛹虫草的研究主要集中在蛹虫草无性型代谢产物的活性成分、药理作用层面以及对蛹虫草高产栽培技术的系统研究，而对蛹虫草深加工技术及深加工制品的生物活性分析研究尚少，以致于蛹虫草及蛹虫草深加工制品的应用受到局限。
环磷酰胺又名环磷氮芥、安道生、癌得星或癌得散，是临床上治疗恶性肿瘤最常用的烷化剂代表药物，其体外无活性，但在体内经肝细胞色素P-450氧化生成中间产物醛磷酰胺，再在肿瘤细胞内分解出磷酰胺氮芥与细胞的DN发生烷化作用，形成交叉联结，从而抑制肿瘤细胞的生长繁殖。环磷酰胺具有广谱抗癌作用，对恶性淋巴瘤疗效显著，对多发性骨髓瘤、急性淋巴细胞白血病、卵巢癌、乳腺癌等也有效。而在抗肿瘤治疗中，环磷酰胺会引起受治患者药物性肝损伤以及免疫抑制等不良反应，影响化疗的正常进程。
为此，本发明提供一种蛹虫草组合物及其制备方法，以解决修复环磷酰胺诱导的肝损伤，并增强机体免疫力，以缓解病者身体状况，辅助免疫力功能低下患者进行治疗，并稳定工艺、高效生产，很好地将蛹虫草深加工及其制品进行了实际应用。
技术实现要素：
本发明针对上述技术问题，提供一种修复肝损伤、增强免疫力的蛹虫草组合物。
为实现上述技术目的，修复肝损伤、增强免疫力的蛹虫草组合物采取的技术方案为：
一种修复肝损伤、增强免疫力的蛹虫草组合物，由以下质量分数的原料组成：蛹虫草提取物9-20％，低聚果糖25-40％，乳糖醇20-30％，麦芽糊精25-35％，红茶速溶粉2-3％，柠檬酸0.01-0.1％，苹果酸0.01-0.1％，甜菊糖苷0.01-0.1％。
作为优选，所述的一种修复肝损伤、增强免疫力的蛹虫草组合物，由以下质量分数的原料组成：蛹虫草提取物9-10％、低聚果糖25-30％、乳糖醇25-30％，麦芽糊精25-30％，红茶速溶粉2-2.5％，柠檬酸0.01-0.05％，苹果酸0.01-0.05％，甜菊糖苷0.01-0.05％。
本发明还提供了一种上述修复肝损伤、增强免疫力的蛹虫草组合物的制备方法。
修复肝损伤、增强免疫力的蛹虫草组合物的制备方法采用的技术方案为：
一种修复肝损伤、增强免疫力的蛹虫草组合物的制备方法，包括以下步骤：
1)将蛹虫草子实体破碎成10-50mm后放入提取罐中，加入20-30倍蛹虫草子实体质量的水，50-55℃温度下提取2-4h，再经过滤、浓缩、干燥，得到蛹虫草提取物；
2)将所述蛹虫草提取物与低聚果糖，乳糖醇，麦芽糊精，红茶速溶粉，柠檬酸，苹果酸，甜菊糖苷调配、混合、制粒、干燥、压片或不压片、分装。
其中，上述过滤步骤采取连续离心的方式进行过滤，即先经卧式离心机离心后，再经由碟式离心机进行离心。
所述卧式离心机和碟式离心机分别在转速4000-5000r/min和6000-7000r/min条件下进行离心过滤。
本发明还提供了上述修复肝损伤、增强免疫力的蛹虫草组合物在制备食品和饮料方面的应用
相对于现有技术，本发明具备以下优点：
1)本发明的修复肝损伤、增强免疫力的蛹虫草组合物对于环磷酰胺导致的小鼠肝损伤及免疫低下具有明显的修复及增强作用。
2)本发明的修复肝损伤、增强免疫力的蛹虫草组合物合理搭配原料组成，相互促进、相互协同，安全无任何副作用，麦芽糊精易消化吸收，甜菊糖苷能降血压降血糖，同时其他辅料对于胃肠消化、促肠道益菌的增殖等也有较好的功效。
3)本发明的修复肝损伤、增强免疫力的蛹虫草组合物适用性广泛，热值低，对于糖尿病、肥胖病等患者依旧具有很好的适用性。
4)本发明的修复肝损伤、增强免疫力的蛹虫草组合物用水冲调后无沉淀、不浑浊，口感清爽，易于消费者广泛接受；蛹虫草提取物为水溶性，其中虫草素等活性成分易高效吸收，有效保证了产品的功效性。
5)本发明的修复肝损伤、增强免疫力的蛹虫草组合物制备方法工艺稳定，各工序衔接畅通，制粒工序不易结团，成膜性较好，生产高效，很好促进蛹虫草深加工系列产品工业化发展。
6)本发明的修复肝损伤、增强免疫力的蛹虫草组合物，能够用于制备食品和饮料。
具体实施方式
实施例1
一种修复肝损伤、增强免疫力的蛹虫草组合物，由以下质量分数的原料组成：蛹虫草提取物12.3％，低聚果糖33.8％，乳糖醇21％，麦芽糊精31％，红茶速溶粉2％，柠檬酸0.07％，苹果酸0.07％，甜菊糖苷0.06％。
上述的一种修复肝损伤、增强免疫力的蛹虫草组合物的制备方法，包括以下步骤：
1)将蛹虫草子实体破碎成10-50mm后放入提取罐中，加入20-30倍蛹虫草子实体质量的水，55℃温度下提取3h，经卧式离心机转速4000r/min、碟式离心机7000r/min条件下离心过滤，再浓缩、干燥，得到蛹虫草提取物；
2)按照质量分数，将12.3％蛹虫草提取物与33.8％低聚果糖、21％乳糖醇、31％麦芽糊精、2％红茶速溶粉、0.07％柠檬酸、0.07％苹果酸、0.06％甜菊糖苷调配、混合、制粒、干燥、压片或不压片、分装，即得。
上述的修复肝损伤、增强免疫力的蛹虫草组合物与开水按照1：50的比例冲调后直接饮用。
上述的修复肝损伤、增强免疫力的蛹虫草组合物与面粉及其它食品添加剂混合后制备出保健食品。
实施例2
一种修复肝损伤、增强免疫力的蛹虫草组合物，由以下质量分数的原料组成：蛹虫草提取物10％，低聚果糖27.4％，乳糖醇30％，麦芽糊精30％，红茶速溶粉2.5％，柠檬酸0.02％，苹果酸0.03％，甜菊糖苷0.05％。
上述的一种修复肝损伤、增强免疫力的蛹虫草组合物的制备方法，包括以下步骤：
1)将蛹虫草子实体破碎成10-50mm后放入提取罐中，加入20-30倍蛹虫草子实体质量的水，50℃温度下提取4h，经卧式离心机转速4500r/min、碟式离心机6500r/min条件下离心过滤，再浓缩、干燥，得到蛹虫草提取物；
2)按照质量分数，将10％蛹虫草提取物与27.4％低聚果糖、30％乳糖醇、30％麦芽糊精、2.5％红茶速溶粉、0.02％柠檬酸、0.03％苹果酸、0.05％甜菊糖苷调配、混合、制粒、干燥、压片或不压片、分装，即得。
上述的修复肝损伤、增强免疫力的蛹虫草组合物与开水按照1：50的比例冲调后直接饮用。
上述的修复肝损伤、增强免疫力的蛹虫草组合物与面粉及其它食品添加剂混合后制备出保健食品。
实施例3
一种修复肝损伤、增强免疫力的蛹虫草组合物，由以下质量分数的原料组成：蛹虫草提取物20％，低聚果糖40％，乳糖醇30％，麦芽糊精35％，红茶速溶粉3％，柠檬酸0.1％，苹果酸0.1％，甜菊糖苷0.1％。
上述的一种修复肝损伤、增强免疫力的蛹虫草组合物的制备方法，包括以下步骤：
1)将蛹虫草子实体破碎成10-50mm后放入提取罐中，加入20-30倍蛹虫草子实体质量的水，55℃温度下提取4h，经卧式离心机转速5000r/min、碟式离心机6000r/min条件下离心过滤，再浓缩、干燥，得到蛹虫草提取物；
2)按照质量分数，将20％蛹虫草提取物与30％低聚果糖、21％乳糖醇、25.7％麦芽糊精、3％红茶速溶粉、0.1％柠檬酸、0.1％苹果酸、0.1％甜菊糖苷调配、混合、制粒、干燥、压片或不压片、分装，即得。
上述的修复肝损伤、增强免疫力的蛹虫草组合物与开水按照1：50的比例冲调后直接饮用。
上述的修复肝损伤、增强免疫力的蛹虫草组合物与面粉及其它食品添加剂混合后制备出保健食品。
实验例
1实验方法
1.1实验动物分组及给药
20只小鼠雌雄各半分开饲养。雌雄小鼠分别随机分为正常对照组(10只)、模型组(50只)。模型组小鼠每天按照80mg/kg的剂量腹腔注射环磷酰胺，正常对照组使用生理盐水代替，连续注射3d。造模后的小鼠随机分为5组，每组10只，分别为肝损伤模型组、阳性对照组(150mg/kg水飞蓟宾)、蛹虫草组合物高剂量组(80mg/kg)、中剂量组(40mg/kg)、低剂量组(20mg/kg)，小鼠连续灌胃14d，肝损伤模型组和正常对照组每天等量给予生理盐水。末次给药后禁食24h后采取挖眼取血的方法收集小鼠血液并于4℃3000r/min的条件下离心10min收集血清-20℃保存备用。另取肝匀浆(10％)上清液-20℃保存备用。
1.2小鼠的给药
小鼠分组后，给予对照组和模型组小鼠灌胃生理盐水，蛹虫草组合物高、中、低剂量组按照蛹虫草日摄入剂量换算分别给予0.6mg、0.5mg和0.33mg蛹虫草组合物进行灌胃处理。各组均灌胃14d。
1.3血清中ALT、AST、IL-2、TNF-ɑ测定
操作步骤按照试剂盒的要求操作。
1.4肝匀浆的制备及肝指数、生化指标的测定
小鼠颈椎脱臼处死后对死亡小鼠进行解剖，取出小鼠肝脏并用已预冷的生理盐水进行漂洗，再用滤纸吸干脏器上的水分，称取肝脏质量，用手术剪取0.1g肝脏制成10％组织匀浆，于3000r/min的条件下离心15min后，收集上清液-20℃保存备用。肝匀浆中SOD、MDA、GSH、GSH-Px的测定按照试剂盒要求操作。
1.5统计学分析
采用DPS7.05版软件对实验结果进行统计分析，所有数据均采用均值±标准差表示。
2结果与分析
2.1蛹虫草组合物对肝损伤小鼠血清AST、ALT活性的影响
蛹虫草组合物对环磷酰胺致肝损伤小鼠血清中ALT和AST的影响结果如表1(雄)、1(雌)所示。
表1蛹虫草组合物对环磷酰胺致肝损伤小鼠(雄)血清AST、ALT的影响
*P<0.05，**P<0.01与模型组小鼠对比；#P<0.05，##P<0.01与正常组小鼠对比。
表1为蛹虫草组合物对环磷酰胺致肝损伤小鼠(雄)血清AST、ALT的影响。模型组小鼠血清AST和ALT酶活分别为62.43±0.33和69.76±0.48U/L，而正常组的AST和ALT酶活仅为18.21±0.19和15.59±0.31U/L，两组之间的差异达到极显著水平(p<0.01)，表明环磷酰胺的摄入造成了小鼠肝细胞的损伤，这也说明环磷酰胺性肝损伤小鼠造模成功。蛹虫草组合物低、中、高剂量组小鼠血清AST酶活分别为47.39±0.48、34.21±0.19和26.21±0.19U/L，ALT酶活分别为45.59±0.31、38.30±0.36和26.32±0.36U/L，均极显著低于模型组(p<0.01)。
表2蛹虫草组合物对环磷酰胺致肝损伤小鼠(雌)血清AST、ALT的影响
*P<0.05，**P<0.01与模型组小鼠对比；#P<0.05，##P<0.01与正常组小鼠对比。
表2为蛹虫草组合物对环磷酰胺致肝损伤小鼠(雌)血清AST、ALT的影响。蛹虫草组合物低、中、高剂量组小鼠血清AST酶活分别为38.99±0.38、29.10±0.33和13.10±0.33U/L，ALT酶活分别为47.47±0.31、32.47±0.31和14.22±0.37U/L，均极显著低于模型组(p<0.01)。
对比表1、2的数据，结果显示：蛹虫草组合物都可以显著降低雌雄小鼠血清AST、ALT的酶活。但雌性小鼠血清AST、ALT的酶活随着剂量的加大降低速度均比雄性小鼠要快。在高剂量为80mg/kg时，雌、雄性小鼠血清AST、ALT酶活分别为13.10±0.33、14.22±0.37U/L和26.21±0.19、26.32±0.36U/L。
2.2蛹虫草组合物对小鼠血清IL-2、TNF-ɑ的影响
蛹虫草组合物对环磷酰胺致肝损伤小鼠血清中IL-2、TNF-ɑ的影响结果如表3(雄)、4(雌)所示。
表3蛹虫草组合物对环磷酰胺致肝损伤小鼠(雄)血清IL-2、TNF-ɑ的影响
*P<0.05，**P<0.01与模型组小鼠对比；#P<0.05，##P<0.01与正常组小鼠对比。
表3为蛹虫草组合物对环磷酰胺致肝损伤小鼠(雄)血清IL-2、TNF-ɑ含量的影响。正常对照组的IL-2的含量39.04±0.75pg/mL极显著高于模型对照组25.19±0.81pg/mL(p<0.01)，说明注射环磷酰胺从而引起的免疫抑制小鼠血清中的IL-2含量会下降，从而使小鼠的免疫能力的削弱。环磷酰胺同样使小鼠体内的TNF-α含量降低，模型对照组的TNF-α含量低于正常对照组，具有极显著的差异(p<0.01)。蛹虫草组合物剂量高、中、低组测得的TNF-α的含量分别为15.56±0.06、14.49±0.49、12.85±0.99pg/mL。蛹虫草组合物低剂量组TNF-α的含量高于模型组，具有极显著的差异(p<0.01)。剂量组的血清IL-2、TNF-α含量都随着蛹虫草组合物剂量的提高而增加，呈现一定的正相关性。
表4蛹虫草组合物对环磷酰胺致肝损伤小鼠(雌)血清IL-2、TNF-ɑ的影响
*P<0.05，**P<0.01与模型组小鼠对比；#P<0.05，##P<0.01与正常组小鼠对比。
表4为蛹虫草组合物对环磷酰胺致肝损伤小鼠(雌)血清IL-2、TNF-ɑ含量的影响。结果与雄性小鼠类似。剂量组的血清IL-2、TNF-α含量都随着蛹虫草组合物剂量的提高而增加，呈现一定的正相关性。蛹虫草组合物低剂量组IL-2、TNF-α的含量高于模型对照组，具有极显著水平差异(p<0.01)。
对比表3、4的数据可知，剂量组的血清IL-2、TNF-α含量与蛹虫草组合物剂量呈现一定的正相关性。蛹虫草组合物在同一剂量组下，对环磷酰胺致肝损伤雌性小鼠血清IL-2、TNF-ɑ含量的影响较大。
2.3蛹虫草组合物对环磷酰胺致肝损伤小鼠肝匀浆中生化指标的影响
SOD、CAT、GSH-Px等抗氧化酶是机体抗氧化防御体系的重要组成部分，蛹虫草组合物对环磷酰胺致肝损伤小鼠肝匀浆中抗氧化酶及丙二醛含量的影响结果如表5(雄)、6(雌)所示。
表5蛹虫草组合物对环磷酰胺致肝损伤小鼠(雄)肝组织SOD、CAT、GSH-Px、GSH、MDA的影响
*P<0.05，**P<0.01与模型组小鼠对比；#P<0.05，##P<0.01与正常组小鼠对比。
表5为蛹虫草组合物对环磷酰胺致急性肝损伤小鼠(雄)的肝组织SOD、CAT、GSH-Px、GSH活性和MDA含量的影响。模型组小鼠肝脏SOD、CAT、GSH-Px、GSH活性分别为305.86±0.40、78.41±0.65、230.30±1.14和0.35±0.09U/mg pro，均极显著低于正常组(p<0.01)，模型组的脂质过氧化产物MDA含量为3.82±0.01nmol/mg pro，极显著高于正常组(p<0.01)。表明环磷酰胺摄入造成了小鼠(雄)肝脏抗氧化防御系统的损伤。蛹虫草组合物低剂量组小鼠肝脏中SOD、CAT、GSH-Px、GSH活性分别为346.96±0.78、85.81±0.74、341.68±1.74和3.70±0.07U/mg pro，均极显著高于模型组(p<0.01)，蛹虫草组合物低剂量组的MDA含量为1.94±0.01nmol/mg pro，极显著低于模型组(p<0.01)。试验组蛹虫草组合物剂量越高，抗氧化酶水平上升与MDA含量下降的程度亦越高。150mg/kg水飞蓟宾亦能极显著提高抗氧化酶活性(p<0.01)，降低MDA含量(p<0.01)。
表6蛹虫草组合物对环磷酰胺致肝损伤小鼠(雌)肝组织SOD、CAT、GSH-Px、GSH、MDA的影响
*P<0.05，**P<0.01与模型组小鼠对比；#P<0.05，##P<0.01与正常组小鼠对比。
表6为蛹虫草组合物对环磷酰胺致急性肝损伤小鼠(雌)的肝组织SOD、CAT、GSH-Px、GSH活性和MDA含量的影响。模型组小鼠肝脏SOD、CAT、GSH-Px、GSH活性分别为(334.11±1.08)、(65.79±0.31)、(454.11±1.21)和(5.44±0.42)U/mg pro，均极显著低于正常组(p<0.01)，模型组的脂质过氧化产物MDA含量为(3.81±0.01)nmol/mg pro，极显著高于正常组(p<0.01)。试验组蛹虫草组合物剂量越高，抗氧化酶活力提高与MDA含量下降的程度也越大。
对比表5、表6发现：无论雌雄小鼠，蛹虫草组合物都能显著提高环磷酰胺诱导的小鼠肝脏SOD、CAT、GSH-Px、GSH活性，降低MDA含量，表明蛹虫草组合物可提高机体抗氧化能力，减少脂质过氧化的发生。在高剂量组中，雄性小鼠肝组织的SOD、CAT和GSH-Px活性要比雌性小鼠肝组织的活性要高，MDA含量比雌性小鼠肝组织低。
3小结
以上实验中，研究本发明实施例2的蛹虫草组合物对环磷酰胺诱导的小鼠肝损伤的修复作用。将昆明种小鼠随机分为正常组、模型组、蛹虫草组合物高剂量组、中剂量组、低剂量组，采用腹腔注射环磷酰胺构建小鼠肝损伤模型并灌胃给予不同剂量蛹虫草组合物，取肝脏、脾脏计算脏器指数；采用试剂盒法分别测定各组小鼠血清中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、白细胞介素-2(IL-2)、肿瘤坏死因子(TNF-ɑ)及肝组织匀浆中超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、过氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)水平。实验结果显示：蛹虫草组合物高剂量组极显著(P<0.01)降低环磷酰胺致肝损伤小鼠血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)的酶活，极显著(P<0.01)提高血清白细胞介素-2(IL-2)、肿瘤坏死因子(TNF-ɑ)的含量，极显著(P<0.01)提高肝组织匀浆中超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、过氧化物酶(GSH-Px)酶活，极显著(P<0.01)降低丙二醛(MDA)含量。其中，蛹虫草组合物对雌性小鼠血清中的ALT、AST酶活以及IL-2、TNF-ɑ的含量影响比雄性小鼠要大。表明蛹虫草组合物对环磷酰胺导致的小鼠肝损伤具有修复作用，且显著增强免疫抑制小鼠的免疫能力。
以上所述实施例仅表达了本发明的几种优选实施方式，其描述较为具体和详细，但不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。