本发明涉及聚磷菌在饲料中的应用及添加剂、饲料和饲料的制备方法。
背景技术：
现有饲料中脂肪含量较高，普遍达到8%以上，虽然可以较快地提高禽类、畜类和水产的生长速度，但也容易造成禽类、畜类和水产的肝胆、肠道中脂肪的过度蓄积，造成脂肪肝、鱼腹肥大等问题。脂肪在体内的过度蓄积会使禽类、畜类和水产的营养代谢失调，影响营养物质的代谢、吸收，影响禽类、畜类和水产生长，造成饵料系数增大；还会使禽类、畜类和水产的免疫系统紊乱，造成禽类、畜类和水产的抗病能力下降，更容易暴发大规模的传染性疾病如出血病和肠炎等，从而引发大面积的死亡。
胆酸汁、植酸、抗坏血酸和苹果酸等有机酸在动物机体内乳化脂肪扩大与脂肪酶的接触面积；调控胰脂肪酶和脂蛋白酯酶的活性提高其对脂肪的水解代谢；在肠道内转运脂肪，促进脂肪的吸收。另外，有机酸通过调控激素敏感脂肪酶的活性，明显减少了自体脂肪的分解代谢。综上所述，有机酸能够节约能量原料，提高能量利用率，改善生长性能及屠宰性能，是节约资源的“正能量”。
由于动物长期食用加入胆酸汁、植酸、抗坏血酸和苹果酸的饲料，因此，有部分动物体内长期有机酸超标，身体环境失衡，易引起肝脏、肠胃疾病，如胆汁酸过高所引起的肝硬化、胆汁郁积、妊娠性胆汁郁积、胃溃疡、小肠污浊综合症、小肠炎疾病和结肠疾病，进而造成动物生长缓慢，甚至死亡。
市场上缺少能够抑制动物体内有机酸过高的产品；市场上也没有既可以促进动物生长，又可以避免动物体内有机酸过高的产品。
我司与招远市畜牧兽医总站联合招远市齐山畜牧兽医站和招远市夏甸畜牧兽医站，针对动物肝胆肠胃疾病问题共同开发了此产品。
技术实现要素：
本发明提供饲料及其制备方法，解决技术问题：（1）有机酸过高引起的肝胆肠胃疾病；（2）既能促进动物生长，又能避免动物体内有机酸过高。
为了解决上述技术问题，本发明采用以下技术方案：
聚磷菌在饲料中的应用。
一种饲料添加剂，包含聚磷菌。
所述聚磷菌及其产物对动物无害。
优选地，还含有产酸菌、有机酸和酶中的一种或任意比例的两种及其以上；
所述产酸菌包括乳酸菌、梭菌、酵母菌和芽孢杆菌中的一种或任意比例的两种以上；所属酶包括植酸酶、纤维素酶、蛋白酶和7α羟化酶中的一种或任意比例的两种及其以上；所述有机酸包括胆汁酸、氨基酸、乳酸和苹果酸中的一种或任意比例的两种及其以上。
优选地，所述聚磷菌按照以下步骤培养：
将聚磷菌种子菌接种至液体培养基中培养一段时间，即得液体聚磷菌；或
将液体聚磷菌干燥后，得固体聚磷菌；
所述液体培养基的ph为7.0～7.4；所述培养时间为20～48h；培养为好氧培养；聚磷菌种子菌和液体培养基的质量比为1～10:100；所述干燥温度为30～80℃；
所述液体培养基中含有磷；
所述磷是磷酸盐缓冲液，磷酸盐缓冲液ph为7.0～7.4。
优选地，液体培养基为蛋白胨3～5份，牛肉浸取物3～5份，磷酸二氢钾缓冲溶液800～1000份，琼脂12～15份。
一种饲料，包含聚磷菌。
优选地，还含有产酸菌、有机酸和酶中的一种或任意比例的两种及其以上；
所述产酸菌包括乳酸菌、梭菌、酵母菌和芽孢杆菌中的一种或任意比例的两种以上；所属酶包括植酸酶、纤维素酶、蛋白酶和7α羟化酶中的一种或任意比例的两种及其以上；所述有机酸包括胆汁酸、氨基酸、乳酸和苹果酸中的一种或任意比例的两种及其以上。
优选地，所述聚磷菌按照以下步骤培养：
将聚磷菌种子菌接种至液体培养基中培养一段时间，即得液体聚磷菌；或
将液体聚磷菌干燥后，得固体聚磷菌；
所述液体培养基的ph为7.0～7.4；所述培养时间为20～48h；培养为好氧培养；聚磷菌种子菌和液体培养基的质量比为1～10:100；所述干燥温度为30～80℃；
所述液体培养基中含有磷；
所述磷是磷酸盐缓冲液，磷酸盐缓冲液ph为7.0～7.4。
优选地，液体培养基为蛋白胨3～5份，牛肉浸取物3～5份，磷酸二氢钾缓冲溶液800～1000份，琼脂12～15份。
一种饲料的制备方法，将饲料添加剂加入到饲料中，即得饲料。
发明具有以下有益技术效果：
1.本发明聚磷菌在好氧条件下培养，其将无机磷以聚磷的形式积聚于体内，当聚磷菌进入动物体内后，此时条件为厌氧，聚磷菌将体内积聚的聚磷分解，分解产生的能量（adenosinetriphosphateatp）一部分供聚磷菌生存，另一部分能量（还原型辅酶nadh）供聚磷菌主动吸收有机酸，并将有机酸以聚-β-羟丁酸的形式储藏于体内，分解产生的无机磷释放到动物体内，从而达到降低动物体内有机酸过高的目的。
2.本申请液体培养基采用磷酸盐缓冲溶液，聚磷菌好氧条件下吸收无机磷，将磷酸盐缓冲溶液吸于体内；聚磷菌进入动物体内后，此时条件为厌氧，聚磷菌将体内积聚的聚磷分解，释放无机磷，无机磷在动物体内形成微环境缓冲体系，从而降低动物体内有机酸含量，避免有机酸过高引起的肝胆肠胃疾病。
3.本申请可以通过调节聚磷菌和产酸菌或/和有机酸的质量比，从而达到既能促进动物生长，又能避免动物体内有机酸过高的效果。
具体实施方式
下面结合具体实例进一步说明本发明。
实施例1
饲料，含有聚磷菌和胆汁酸的组合物；
聚磷菌采购于中国工业微生物菌种保藏管理中心编号cicc22102。
所述聚磷菌按照以下步骤培养：
将聚磷菌种子菌接种至液体培养基中培养一段时间，即得液体聚磷菌，将液体聚磷菌干燥后，得固体聚磷菌。
所述液体培养基的ph为7.0；所述培养时间为24h；培养为好氧培养；聚磷菌种子菌和液体培养基的质量比为10:100。液体培养基为蛋白胨4份，牛肉浸取物4份，磷酸二氢钾缓冲溶液1000份，琼脂14份；磷酸盐缓冲液ph为7.0。
将聚磷菌、胆汁酸和预混料按照质量比1:0.007:998.993混匀后，即得饲料。
预混料配比：豆粕60份、骨粉10份、鱼粉15份、虾粉5份、鱼油3份、玉米粉6份、氯化胆碱0.1份、复合维生素0.3份、复合氨基酸0.2份和黄连素0.4份。
实施例2
饲料，含有聚磷菌和胆汁酸的组合物；
聚磷菌采购于中国工业微生物菌种保藏管理中心编号cicc22102。
所述聚磷菌按照以下步骤培养：
将聚磷菌种子菌接种至液体培养基中培养一段时间，即得液体聚磷菌，将液体聚磷菌干燥后，得固体聚磷菌。
所述液体培养基的ph为7.0；所述培养时间为24h；培养为好氧培养；聚磷菌种子菌和液体培养基的质量比为10:100。液体培养基为蛋白胨4份，牛肉浸取物4份，磷酸二氢钾缓冲溶液1000份，琼脂14份；磷酸盐缓冲液ph为7.0。
将聚磷菌、胆汁酸和预混料按照质量比1:0.006:998.994混匀后，即得饲料。
预混料配比：玉米65份、豆粕15份、石粒5份、棉粕10分、水解羽毛粉3份、磷酸氢钙1份、米糠油0.8份、赖氨酸0.15份、氯化胆碱0.15份、复合维生素0.3份、微量元素0.1份、复合氨基酸0.2份和小苏打0.1份。
实施例3
饲料，是猪预混料、液体聚磷菌和胆汁酸按照质量比998:1:1的组合物；
所述液体聚磷菌按照以下步骤培养：
将聚磷菌种子菌接种至液体培养基中培养一段时间，即得液体聚磷菌。
所述液体培养基的ph为7.0；所述培养时间为24h；培养为好氧培养；聚磷菌种子菌和液体培养基的质量比为10:100。液体培养基为蛋白胨4份，牛肉浸取物4份，磷酸二氢钾缓冲溶液1000份，琼脂14份；磷酸盐缓冲液ph为7.0。
将胆汁酸加入到液体聚磷菌溶解，然后加入的预混料中，即得饲料。
猪预混料采购于河北大午农牧集团有限公司。
实施例4
饲料，是预混料、植酸酶、苹果酸和聚磷菌按照质量比993:1:2:4的组合物；
所述聚磷菌按照以下步骤培养：
将聚磷菌种子菌接种至液体培养基中培养一段时间，即得液体聚磷菌，将液体聚磷菌干燥后，得固体聚磷菌。
所述液体培养基的ph为7.2；所述培养时间为24h；培养为好氧培养；聚磷菌种子菌和液体培养基的质量比为10:100。液体培养基为蛋白胨3份，牛肉浸取物5份，磷酸二氢钾缓冲溶液900份，琼脂12～15份；磷酸盐缓冲液ph为7.2；干燥温度为60℃。
将预混料、植酸酶、苹果酸和聚磷菌混匀，包装后，即得饲料。
所述预混料采购于河北大午农牧集团有限公司。
实施例5
饲料，是预混料、液体聚磷菌和液体产酸菌按照质量比999:0.5:0.5的组合物；
所述液体聚磷菌按照以下步骤培养：
将聚磷菌种子菌接种至液体培养基中培养一段时间，即得液体聚磷菌。
所述液体培养基的ph为7.3；所述培养时间为20h；培养为好氧培养；聚磷菌种子菌和液体培养基的质量比为10:100。液体培养基为蛋白胨3～5份，牛肉浸取物3～5份，磷酸二氢钾缓冲溶液800～1000份，琼脂12～15份；磷酸盐缓冲液ph为7.3。
液体产酸菌按照以下步骤进行：
将产酸菌种子菌接种至液体培养基中培养一段时间，即得液体产酸菌；
所述液体培养基的ph为6.8；所述培养时间为24h；培养为厌氧培养；产酸菌种子菌和液体培养基的质量比为10:100。液体培养基为玉米粉3～5份，蛋白胨0.1～0.3份，葡萄糖1～2份份，琼脂12～15份，蒸馏水1l。
所述聚磷菌采购于中国工业微生物菌种保藏管理中心编号cicc22102。
所述产酸菌采购于中国工业微生物菌种保藏管理中心编号cicc10350。
将预混料、液体聚磷菌和液体产酸菌混匀后加入甲酸钙，即得饲料。
所述预混料采购于河北大午农牧集团有限公司。
实施例6
饲料，含有产酸菌和聚磷菌；
所述聚磷菌按照以下步骤培养：
将聚磷菌种子菌接种至液体培养基中培养一段时间，即得液体聚磷菌，将液体聚磷菌干燥后，得固体聚磷菌。
所述液体培养基的ph为7.4；所述培养时间为30h；培养为好氧培养；聚磷菌种子菌和液体培养基的质量比为10:100。液体培养基为蛋白胨5份，牛肉浸取物3份，磷酸二氢钾缓冲溶液1000份，琼脂12份；磷酸盐缓冲液ph为7.4；干燥温度为50℃。
将预混料、产酸菌和聚磷菌混匀，包装后，即得饲料。
所述预混料采购于河北大午农牧集团有限公司。
实施例7
饲料，含有谷氨酸和聚磷菌；
所述聚磷菌及其产物对动物无毒害；
所述聚磷菌培养基中含有磷。
饲料的制备方法，将谷氨酸和聚磷菌加入到预混料中混匀后，即得饲料；或
将谷氨酸和聚磷菌与预混料混匀，经造粒后，即得饲料。
实施例8
饲料，含有聚磷菌和苹果酸；
所述聚磷菌及其产物对动物无毒害。
饲料的制备方法，将聚磷菌、苹果酸与预混料混匀，即得饲料；聚磷菌、苹果酸和预混料的质量比为2:0.8:997.2。
所述预混料采购于山东六和饲料股份有限公司。
实施例9
饲料，含有聚磷菌。
所述聚磷菌及其产物对动物无毒害。
实施例10
饲料，含有聚磷菌和苹果酸；
所述聚磷菌及其产物对动物无毒害；
所述聚磷菌的培养基中含有焦磷酸钠。
饲料的制备方法，将聚磷菌、苹果酸与预混料混匀，即得饲料；聚磷菌、苹果酸和预混料的质量比为2:0.8:997.2。
所述预混料采购于山东六和饲料股份有限公司。
实施例11
饲料添加剂，是液体聚磷菌；
采购于中国工业微生物菌种保藏管理中心编号cicc22102。
所述液体聚磷菌按照以下步骤培养：
将聚磷菌种子菌接种至液体培养基中培养一段时间，即得液体聚磷菌。
所述液体培养基的ph为7.0；所述培养时间为24h；培养为好氧培养；聚磷菌种子菌和液体培养基的质量比为10:100。液体培养基为蛋白胨4份，牛肉浸取物4份，磷酸二氢钾缓冲溶液1000份，琼脂14份；磷酸盐缓冲液ph为7.0。
将液体聚磷菌包装后，即得饲料添加剂。
实施例12
饲料添加剂，是液体聚磷菌和胆汁酸按照质量比1:1的组合物；
所述液体聚磷菌按照以下步骤培养：
将聚磷菌种子菌接种至液体培养基中培养一段时间，即得液体聚磷菌。
所述液体培养基的ph为7.0；所述培养时间为24h；培养为好氧培养；聚磷菌种子菌和液体培养基的质量比为10:100。液体培养基为蛋白胨4份，牛肉浸取物4份，磷酸二氢钾缓冲溶液1000份，琼脂14份；磷酸盐缓冲液ph为7.0。
将胆汁酸加入到液体聚磷菌溶解，即得饲料添加剂。
实施例13
饲料添加剂，是甲酸钙、双乙酸钠、七水硫酸锌和聚磷菌按照质量比1:1:1:2的组合物；
所述聚磷菌按照以下步骤培养：
将聚磷菌种子菌接种至液体培养基中培养一段时间，即得液体聚磷菌，将液体聚磷菌干燥后，得固体聚磷菌。
所述液体培养基的ph为7.2；所述培养时间为24h；培养为好氧培养；聚磷菌种子菌和液体培养基的质量比为10:100。液体培养基为蛋白胨3份，牛肉浸取物5份，磷酸二氢钾缓冲溶液900份，琼脂12～15份；磷酸盐缓冲液ph为7.2；干燥温度为60℃。
将甲酸钙、双乙酸钠、七水硫酸锌和聚磷菌混匀，包装后，即得饲料添加剂。
实施例14
饲料添加剂，是液体聚磷菌、液体产酸菌、植酸酶和甲酸钙按照质量比1:1:1:1的组合物；
所述液体聚磷菌按照以下步骤培养：
将聚磷菌种子菌接种至液体培养基中培养一段时间，即得液体聚磷菌。
所述液体培养基的ph为7.3；所述培养时间为20h；培养为好氧培养；聚磷菌种子菌和液体培养基的质量比为10:100。液体培养基为蛋白胨3～5份，牛肉浸取物3～5份，磷酸二氢钾缓冲溶液800～1000份，琼脂12～15份；磷酸盐缓冲液ph为7.3。
液体产酸菌按照以下步骤进行：
将产酸菌种子菌接种至液体培养基中培养一段时间，即得液体产酸菌；
所述液体培养基的ph为6.8；所述培养时间为24h；培养为厌氧培养；产酸菌种子菌和液体培养基的质量比为10:100。液体培养基为玉米粉3～5份，蛋白胨0.1～0.3份，葡萄糖1～2份份，琼脂12～15份，蒸馏水1l。
所述聚磷菌采购于中国工业微生物菌种保藏管理中心编号cicc22102。
所述产酸菌采购于中国工业微生物菌种保藏管理中心编号cicc10350。
将液体聚磷菌和液体产酸菌混匀后加入植酸酶和甲酸钙，即得饲料添加剂。
实施例15
饲料添加剂，是甲酸钙、双乙酸钠、七水硫酸锌和聚磷菌按照质量比1:3:1:2的组合物；
所述聚磷菌按照以下步骤培养：
将聚磷菌种子菌接种至液体培养基中培养一段时间，即得液体聚磷菌，将液体聚磷菌干燥后，得固体聚磷菌。
所述液体培养基的ph为7.4；所述培养时间为30h；培养为好氧培养；聚磷菌种子菌和液体培养基的质量比为10:100。液体培养基为蛋白胨5份，牛肉浸取物3份，磷酸二氢钾缓冲溶液1000份，琼脂12份；磷酸盐缓冲液ph为7.4；干燥温度为50℃。
将甲酸钙、双乙酸钠、七水硫酸锌和聚磷菌混匀，包装后，即得饲料添加剂。
实施例16
饲料添加剂，含有聚磷菌；
所述聚磷菌及其产物对动物无毒害。
饲料添加剂的制备方法，将聚磷菌包装后，即得饲料添加剂；或
将聚磷菌与其它饲料添加剂混匀，即得饲料添加剂。
实施例17
饲料添加剂，含有聚磷菌；
所述聚磷菌及其产物对动物无毒害。
所述聚磷菌培养基中含有磷；
饲料添加剂的制备方法，将聚磷菌与其它饲料添加剂混匀，即得饲料添加剂；聚磷菌和其它饲料添加剂的质量比为1:8。
所述其它饲料添加剂是胆汁酸、甲酸钙、双乙酸钠、七水硫酸锌、维生素b按照质量比2:1:2:3:1的组合物。
实施例18
饲料添加剂，含有聚磷菌；
所述聚磷菌及其产物对动物无毒害；
所述聚磷菌培养基中含有焦磷酸钠。
饲料添加剂的制备方法，将聚磷菌包装后，即得饲料添加剂；或
将聚磷菌与其它饲料添加剂混匀，即得饲料添加剂。
上述磷酸盐缓冲溶液配置：
ph7.0：取磷酸二氢钾6.8g，加0.1mol/l氢氧化钠溶液291ml，用水稀释至1000ml，即得；
ph7.2：取0.2mol/l磷酸二氢钾溶液250ml与0.2mol/l氢氧化钠溶液175ml，加新沸过的冷水，稀释至1000ml，摇匀即得；
ph7.3：取磷酸氢二钠1.9734g与磷酸二氢钾0.2245g，加水使溶解成1000ml，调节ph至7.3，即得；
ph7.4：取磷酸二氢钾6.8g，加0.1mol/l氢氧化钠溶液395ml，用水稀释至1000ml，即得。
下面结合实验数据进一步说明本发明的有益效果：
实验一
1材料与方法：
1.1试验地点：烟台市长岛；
1.2实验检测：增重率、死亡率、肥满度、脏体比、脂体比；实验结束后检测总胆汁酸、丙二醛、总抗氧化能力和总超氧化歧化酶；
1.3供试材料：实施例1的预混料、对比1（由实施例1中的预混料和700ppm胆汁酸组成）、实施例1和对比2（除聚磷菌培养时培养基中磷酸盐缓冲溶液以水替代外，其它配比和实施例1均一致）；
实施例1预混料配比豆粕60份、骨粉10份、鱼粉15份、虾粉5份、鱼油3份、玉米粉6份、氯化胆碱0.1份、复合维生素0.3份、复合氨基酸0.2份和黄连素0.4份；
1.4实验方法：将初始条件相近的鱼塘围隔成6个50平方米的小塘，每两个小塘为一组，每塘放养200条黑鱼，鱼苗放养后，隔天早8点对每组小塘进行喂养，每次喂养1kg，实验时间为12周；
1.5检测方法：增重率（%）=（末重-初重）/初重×100；
肥满度=100×鲜鱼重（克）/体长3cm3；
脏体比=100×内脏重/体重；
肝体比=100×肝重/体重；
肠脂比=100×肠脂重/体重；
检测血液中总胆汁酸、丙二醛、总抗氧化能力和总超氧化歧化酶。
本实验除检测物质不同外，其它检测方式均一致
2结果与分析
增重率、死亡率、肥满度、脏体比、脂体比；实验结束后检测总胆汁酸、丙二醛、总抗氧化能力和总超氧化歧化酶检测结果，见表1
由总胆汁酸检测可以看出，加入胆汁酸的对比1虽然可以刺激黑鱼的生长，但是喂养12周后，黑鱼体内总胆汁酸含量过高，已经有肝炎和肝硬化的趋势，而加入胆汁酸和聚磷菌的实施例1则相对比较健康，无论是增重还是其体内的抗氧化程度均有提高，说明其生命力更旺盛；对比2虽然加入了聚磷菌，但是其培养基中不含磷酸盐缓冲液，由表1数据可以看出，其数据优于对比1，但明显差于培养基中含有磷酸盐缓冲液的实施例1，可见加入的聚磷菌的培养基中含有磷也是本申请的关键。
实验二
1材料与方法：
1.1试验地点：招远市齐山镇立家墰村养鸡大棚；
1.2实验检测：平均蛋重、产蛋率、破（软）蛋率；检测蛋鸡血清中总蛋白、总胆固醇、甘油三酯和总胆汁酸；
1.3供试材料：实施例2预混料、对比3（由实施例2中的预混料和700ppm胆汁酸组成）、实施例2和对比4（除聚磷菌培养时培养基中磷酸盐缓冲溶液以水替代外，其它配比和实施例2均一致）；
实施例2预混料配比玉米65份、豆粕15份、石粒5份、棉粕10分、水解羽毛粉3份、磷酸氢钙1份、米糠油0.8份、赖氨酸0.15份、氯化胆碱0.15份、复合维生素0.3份、微量元素0.1份、复合氨基酸0.2份和小苏打0.1份；
1.4实验方法：将180只刚孵化出的海兰褐蛋鸡随机分为3组，每组60只，采用实验所选用的饲料分别对海兰褐蛋鸡进行喂养，喂养至400天，实验结束前连续收集3天鸡蛋，每组每天收集20个，统计数据。
本实验除检测物质不同外，其它检测方式均一致
2结果与分析
平均蛋重、产蛋率、破（软）蛋率；检测蛋鸡血清中总蛋白、总胆固醇、甘油三酯和总胆汁酸检测结果，见表2
由总胆汁酸检测可以看出，对比3加入胆汁酸可以提高蛋鸡的产蛋率，但是蛋鸡体内总胆汁酸含量偏高，而加入胆汁酸和聚磷菌的对比4和实施例2则总胆汁酸含量相对较低，且加入胆汁酸的对比3和加入胆汁酸和聚磷菌的对比4和实施例2与普通饲料相比均可以降低鸡血液中甘油三酯和血糖的含量；对比4虽然加入了聚磷菌，但是其培养基中不含磷酸盐缓冲液，由表2数据可以看出，其数据优于对比3，但明显差于培养基中含有磷酸盐缓冲液的实施例2，可见加入的聚磷菌的培养基中含有磷也是本申请的关键。