专利名称：：一种从文蛤肉中提取海洋贝类活性物质文蛤提取物的方法
技术领域：
：本发明提供了一种从海洋贝类文蛤肉中提取文蛤核酸等活性物质的方法。文蛤是产于沿海的贝类海洋生物。现代研究表明，文蛤肉中含有多种氨基酸、维生素及微量元素。由于文蛤肉不易保存，运输困难，目前只作食品使用，限制了该资源的开发，未能发挥文蛤肉的医疗保键作用。文蛤肉中含有的文蛤核酸(MNA)是具有抗肿瘤、升白作用的药理活性物质。《中国药用海洋生物》记载文蛤组织液有抑菌作用，蛤肝提取物对染有Moloney白血病毒的动物，使其平均存活期延长。组织提取液对肉瘤180抑制率在30％以上，对艾瘤腹水型抑制率达96.1～262.5％以上，对肝癌腹水型和肝癌实体型的抑制率分别在40％和50％以上。有人曾以盐析及色谱层析分离提取文蛤肉中的蛋白质，虽证明其提取物具有抗肿瘤作用，但因其有致敏作用，故未能用于癌症病人。以上研究仅限于文蛤肉成份的药理作用，未能实现大批量提取文蛤活性物质的工业生产。本发明的目的是提供一种从文蛤肉中提取海洋贝类活性物质文蛤提取物方法，以充分发挥海洋贝类活性物质的药物治疗作用。本发明是这样实现的，在100kg纹碎后的文蛤肉中加入0.14mol/l的食盐溶液100-200kg、皂土0.05-0.1kg，胶体磨研磨后装入反应罐，加入十二烷基磺酸钠溶液10-20kg，在搅拌下加入90％浓度的苯酚20-30kg，在离心沉淀后上清液中加60％浓度的乙醇，搅拌后在离心得到的沉淀物中加入乙醚洗去苯酚，回收乙醚，将沉淀物晾干，所得物质即为海洋贝类活性物质文蛤提取物。这种提取方法工艺简单，文蛤提取物中的主要有效成份文蛤核酸的收率高(达2-3％)，文蛤核酸含量达30-40％，蛋白质为8-16％，含糖量小于1％，这种文蛤提取物对肿瘤生长有抑制作用，对化疗过程中环磷酰胺所致的白细胞下降具有显著的升白作用，能提高机体免疫力。上述方法也可以用于从与文蛤相类似的海洋贝类肉中提取海洋贝类活性物质。以下提供了文蛤提取物药理作用的实验结果。一、文蛤提取物的抗肿瘤作用研究1、动物纯种小鼠C57BL/6J，18-22g，DBA/2，18-22g，由中国医学科学院肿瘤研究所动物场提供。2、瘤源Lewis肺癌，P388白血病均由中国医学科学院药物研究所传代保种，提供实验用瘤源。3、实验方法取带瘤种鼠，在无菌条件下剥离或吸取瘤液，以生理盐水1∶3(g/ml)制成匀浆，皮下或腹腔接种正常动物腋下或腹腔，接种后次日分组(每组12只)称体重，开始灌胃或腹腔注射给药，每天一次，连续给药12天，环磷酰胺均一次腹注射给药，在开始给药及停止给药时称动物体重，停药后剥离肿瘤，称重记录抑制率，腹水型肿瘤停药后则观察动物死亡并记录生命延长率及进行统计学处理。4、实验结果文蛤提取物对Lewis肺癌动物肿瘤生长有抑制作用(表1)，能延长P388白血病动物的存活时间(表2)。表1文蛤提取物对Lewis肺癌动物瘤重的影响<tablesid="table1"num="001"><tablewidth="764">项目体重(克)平均瘤重抑制率P值组别给药前给药后克(％)空白对照22.6±1.120.3±1.62.1±0.5环磷酰胺(60mg/kg)23.2±1.219.3±0.70.6±0.366％文蛤提取物(100mg/kg)23.3±1.619.4±1.41.8±0.614％文蛤提取物(200mg/kg)23.7±1.819.8±1.51.3±0.838％∠0.05</table></tables>表2文蛤提取物对P388白血病小鼠生存时间的影响<tablesid="table2"num="002"><tablewidth="698">项目体重(克)平均生存生命延长率P值组别给药前给药后天数(％)空白对照18.3±1.225.5±1.812.8±3.1环磷酰胺(60mg/kg)18.3±1.018.2±1.315.8±5.2+3天23.4％∠0.05文蛤提取物(100mg/kg)18.6±1.223.9±1.713.1±2.6+0.3天文蛤提取物(200mg/kg)18.6±1.119.4±1.216.8±4.1+4天31％∠0.05</table></tables>二、文蛤提取物的升高白细胞作用研究1、动物昆明种小鼠，雄性，18-22g，随机分为五组，每组9-11只。2、药物(1)环磷酰胺，用生理盐水配成50ng/10ml/kg，腹腔注射。(2)茜草双酯阳性对照药，用蒸馏水配成，300mg/10ml灌胃。(3)文蛤提取物小剂量以蒸馏水配成50mg/10ml/kg灌胃。大剂量以蒸馏水配成100mg/10ml/kg灌胃。3、方法小鼠分别灌胃阳性药及文蛤提取物连续三天，自第四日起每次给药后，腹腔注射环磷酰胺，连续四天。第八天停止给予环磷酰胺，连续给药一天。第九天从小鼠眼眶后静脉丛取血，计白细胞总数。取血后将小鼠处死，取出胸腺和脾脏，称重。4、结果对环磷酰胺所致白细胞下降，文蛤提取物具有显著的升白作用(表3)表3文蛤提取物对环磷酰胺致小鼠白细胞减少的影响</tables>通过实验还表明，文蛤提取物能显著促进动物免疫器官的发育成熟，促进抗体形成细胞的形成，促进抗体的生成，提高淋巴细胞转化率，能促进白介素-2的产生，具有免疫调节作用，对血循环免疫复合物形成无影响，即无致免疫复合物病作用。权利要求一种从文蛤肉中提取海洋贝类活性物质文蛤提取物的方法，其特征在于，在100kg绞碎后的文蛤肉中加入0.14mol/l的食盐溶液100-200kg、皂土0.05-0.1kg，胶体磨研磨后装入反应罐，加入十二烷基磺酸钠溶液10-20kg，在搅拌下加入90％浓度的苯酚20-30kg，在离心沉淀后的上清液中加入60％浓度的乙醇搅拌后，在离心得到沉淀物中加入乙醚洗去苯酚，回收乙醚，将沉淀物晾干，所得物质即为海洋贝类活性物质文蛤提取物。全文摘要本发明提供了一种从文蛤肉中提取海洋贝类活性物质文蛤提取物的方法，在绞碎后的文蛤肉中加入食盐和皂土，胶体磨研磨后装入反应罐，加入十二烷基磺酸钠溶液，搅拌下加入苯酚，在离心沉淀后的上清液中加入乙醇洗去苯酚，回收乙醚，所得沉淀物即为海洋贝类活性物质文蛤提取物，该方法工艺简单，有效成分文蛤核酸收率高，文蛤核酸含量达30-40％，文蛤提取物具有抑制肿瘤，升高白细胞，提高免疫力的作用。文档编号A23L1/333GK1157139SQ9611566公开日1997年8月20日申请日期1996年2月12日优先权日1996年2月12日发明者王克柳,张汉华,石梅占,屈永堂,王美海,都丰新申请人:山东鲁北制药厂