过敏反应在植物体中诱导的抗性的制作方法

专利名称：过敏反应在植物体中诱导的抗性的制作方法
技术领域：
本发明涉及赋予植物过敏反应诱导的抗性。
背景技术：
活的有机体进化形成一系列复杂的生化途径使它们能够对环境中的信号进行识别和应答。这些途径包括受体器官、激素、第二信使，和酶的修饰。目前，有关在植物对病原体侵袭而作出应答过程中激活的信号传导途径知之甚少，尽管这种知识对理解疾病的易感性和抗性至关重要。植物抗性的一般形式是限制病原体在围绕感染位点的小范围内增殖。在许多情况中，这种限制伴随有宿主组织的局部死亡(即，坏死)。综合起来，病原体限制和局部组织坏死构成了过敏反应的特征。除了局部防御应答以外，许多植物还通过激活在植物非感染部分的防御而对感染作出应答。结果，整株植物对次级感染更具有抗性。这种整体获得的抗性可持续数周或更长时间( R.E.F.Matternews植物病毒学(学术出版社，纽约，第二版，1981))并且经常赋予对无关病原体的交叉抗性(J.Kuc，植物疾病控制新方法，I.Chet，编(Wiley，纽约，1987)，255-274页，在此引入仅供参考)。
整体获得的抗性的表达与正常毒性病原体侵袭免疫的组织的失败有关(Kuc，J.，“对植物疾病诱导的免疫性”，生物科学，32854-856(1982)，在此引用仅供参考)。整体获得的抗性的建立与细胞壁羟脯氨酸水平和过氧化物酶活性的整体增加(Smith，J.A.，等，“与黄瓜、香瓜及西瓜中诱导的抗性有关的酸性过氧化物酶的比较研究”，分子生理植物病理，14329-338(1988)，在此引用仅供参考)及一套9个家族的所谓整体获得的抗性基因的表达(Ward，E.R.，等，“对诱导整体获得的抗性试剂应答中协同(coordinate)的基因活性”，植物细胞，349-59(1991)，在此引入仅供参考)相互关联。这些防御基因家族中的5个编码其生理功能尚未确定的发病机理相关性蛋白。然而，这些蛋白中有些具有体外抗真菌活性(Bol，J.F.，等，“由病毒感染诱导的植物发病机理相关性蛋白”，植物病理年鉴，28113-38(1990)，在此引入仅供参考)并且在转基因烟草中豆类壳多糖酶基因的组成型表达保护免受真菌Rhizoctonia solani的感染(Broglie，K.，等，“具有对真菌病原体Rhizoctonia solani增强抗性的转基因植物”，科学，2541194-1197(1991)，在此引用仅供参考)，表明这些整体获得的抗性蛋白可有助于免疫状态(Uknes，S.，等，“拟南芥属中的获得的抗性”，植物细胞，4645-656(1992)，在此引用仅供参考)。
水杨酸似乎在诱导整体获得的抗性中起到信号功能的作用因为免疫以后内源性水平增加(Malamy，J.，等，“水杨酸在烟草对病毒感染的抗性应答中一种可能的内源信号”，科学2501002-1004(1990)，在此引入仅供参考)并且外源性水杨酸盐诱导整体获得的抗性基因(Yalpani，N.，等，“水杨酸是一种整体信号和病毒感染的烟草中发病机理相关蛋白的诱导物”，植物细胞3809-818(1991)，在此引用仅供参考)，并且获得抗性(Uknes，S.，等，“拟南芥属中的获得抗性”，植物细胞4645-656(1992)，在此引入仅供参考)。此外，其中的水杨酸盐被编码水杨酸盐羟化酶的细菌转基因作用所破坏的转基因烟草植物中没有显示出整体的获得性抗性(Gaffney，T.，等，“需要水杨酸用于诱导整体性获得抗性”，科学261754-296(1993)在此引入仅供参考)。然而，此效应可能反映局部而不是整体信号功能的抑制，并且黄瓜中信号传递的详细动力学分析表明水杨酸盐对长距离信号传递可能是不必要的(Rasmussen，J.B.，等，“以丁香假单胞菌致病变种(Pseudomonas Syringae pv.Syringae)接种后黄瓜中水杨酸积累的整体诱导”，植物生理，971342-1347)(1991)，在此引用仅供参考)。
用生物活性剂的免疫已进行了广泛研究。通过预先以栽培品种-非病原性种类(Rahe，J.E.，“在普通菜豆(Phaseolus Vulgaris)中诱导的对豆类炭疽病(Anthracnose)的抗性”，植物病理学591641-5(1969)；Elliston，J等，“在距离诱导相互作用位点的一段距离处诱导的对炭疽病的抗性”，植物病理学611110-12(1971)；Skipp.R.等，“豆类炭疽病中交叉保护的研究”，生理学植物病理学3299-313(1973)，在此引用仅供参考)。在症状出现之前在宿主组织中通过加热而毒性减弱的栽培品种-病原性种类(Rahe，J.E.，等，“豆类炭疽病热限制感染效应的代谢性质”，植物病理学601005-9(1970)，在此引用仅供参考)或豆类的非病原体感染，绿豆被整体地免疫以抵抗菜豆毛盘孢(Colletotrichum lindemuthianum)栽培品种病原种类导致的疾病。黄瓜的炭疽病病原体，葫芦科毛盘孢(Colletotrichumlagenarium)作为抗所有种类豆类炭疽病整体保护的诱导物与非病原性种类同样有效。在抗一种或更多种菜豆毛盘孢种类的栽培品种中以及在对所有报导的真菌种类易感且因此称为‘缺乏对病原体的遗传抗性’的栽培品种中(Elliston，J.，等，”豆类非病原性毛盘孢属种类对豆类炭疽病的保护”，Phytopathologische Zeitschrift 88117-26(1976)；Elliston，J.等，“在毛盘孢属种类和Phaseolus Vulgaris之间相容，不相容及诱导不相容相互作用形成的比较研究”，PhytopathologischeZeitschrift 87289-303(1976)，在此引用仅供参考)保护由葫芦科毛盘孢诱导。这些结果表明在报导的“具有”或“缺乏”抗性基因的栽培品种中相同的机制可被诱导(Elliston，J，等，“植保菌素(Phytoalexin)的积累与豆类抗炭疽病局部及整体保护的关系”Phytopathologische Zeitschrift 88114-30(1977)在此引入仅供参考)。对所有种类菜豆毛盘孢易感的栽培品种不缺乏用于抗病原体抗性机制的基因也是显而易见的。
Kuc.J.，等，“通过葫芦科毛盘孢保护黄瓜抵抗葫芦科毛盘孢”，生理学植物病理学7195-9(1975)，(在此引用仅供参考)，表明黄瓜植物可通过事先以相同的真菌接种子叶或第一片真叶而引起整体地保护其抵抗由葫芦科毛盘孢导致的疾病。因此，黄瓜通过事先以真菌、细菌、或病毒的局部感染而被整体地保护其抵抗真菌、细菌及病毒疾病(Hammerschmidt，R.等，“保护黄瓜抵抗葫芦科毛盘孢和黄瓜枝孢(Cladosporium Cucumerinum)”，植物病理学66790-3(1996)；Jenns，A.E.，等，“以烟草坏死病毒的局部感染保护黄瓜抵抗葫芦科毛盘孢”，生理学植物病理学11207-12(1977)；Caruso，F.L.，等，“通过黄瓜角斑病假单胞菌和葫芦科毛盘孢诱导的黄瓜对炭疽病及角叶斑(Angular Leaf Spet)的抗性”，生理学植物病理学14191-201(1979)；Staub，T，等，“通过预先以任一真菌的局部感染整体保护黄瓜植物抵抗由黄瓜枝孢和葫芦科毛盘孢导致的疾病”，生理学植物病理学，17389-93(1980)；Bergstrom，G.C.，等，“由葫芦科毛盘孢，黄瓜角斑病假单胞菌或烟草坏死病毒局部感染黄瓜对黄瓜花叶病毒整体抗性的影响”，植物病理学72922-6(1982)；Gessler，C.，等，“通过根及叶的病原体在黄瓜中诱导对镰孢属枯萎的抗性”，植物病理学721439-41(1982)；Basham，B，等，“烟草坏死病毒在黄瓜中诱导对苍耳单丝壳菌的整体抗性”，生理学植物病理学23137-44(1983)，在此引用仅供参考)。由葫芦科毛盘孢或烟草坏死病毒感染所诱导的非特异性保护有效地抵抗至少13种病原体，包括专一及兼性寄生真菌，局部损伤及整体病毒，枯萎真菌(wilt fungi)及细菌。同样地，保护由根部病原体所诱导并也有效地抵抗根部病原体。其它的葫芦科植物，包括西瓜和香瓜已整体地保护其抵抗葫芦科毛盘孢(Caruso，F.L.，等，“通过葫芦科毛盘孢保护西瓜和香瓜抵抗葫芦科毛盘孢”，植物病理学671285-9(1977)，在此引用仅供参考)。
在烟草中的整体保护也被诱导抵抗多种疾病(Kuc.J.，等，“在烟草中免疫用于疾病的抗性”，烟草科学最新进展9179-213(1983)，在此引入仅供参考)。由烟草花叶病毒造成的坏死性损伤增强了上部叶片对该病毒引起的疾病的抗性(Ross，A.F.，等，“在植物中由局部病毒感染诱导的整体获得的抗性”，病毒学14340-58(1961)；Ross，A.F.，等，“局部损伤形成的整体性影响”，在植物病毒127-50页(1966)，在此引入仅供参考)，即寄生疫霉致病变种(Phytophthoraparasitica var.nicotianae)，P.tabacina和烟草野火病假单胞菌(Pseudomonas tabaci)及降低繁殖的蚜虫(aphid)Myzus persicae(McIntyre，J.L.，等，“通过对病毒过敏的烟草的烟草花叶病毒感染诱导抵抗寄生疫霉(Phytophthora Parasitica var.nicotianae)的局部和整体保护”，生理学植物病理学15321-30(1979)；McIntyre，J.L.，等，“烟草花叶病毒对烟草(Nicotiana Tabacum)的局部感染对抵抗各种病原体和昆虫的整体抗性的影响”，植物病理学71297-301(1981)，在此引用仅供参考)。加热灭活的P.tabaci(Lovrekovich，L.，等，“在以加热灭活的细菌处理的烟草叶中诱导抗烟草野火病的反应”，自然205823-4(1965)，在此引用仅供参考)，和茄假单胞菌(Sequeira，L.等，“细菌和宿主细胞壁的相互作用其与诱导抗性机制之间的关系”，生理植物病理学1043-50(1977)，在此引用仅供参考)，浸入烟草叶片中诱导对用于浸入的相同细菌的抗性。烟草植物也通过线虫Pratylenchus penetrans而保护其抵抗寄生疫霉(Pparasitica var.nicotiana)(McIntyre，J.L.，等，“通过栽培品种-非病原性种类，无细胞超声裂解物及Pratylenchus Penetrans保护烟草抵抗寄生疫霉(Phytophthora Parasitica Var.Nicotianae)”，植物病理学68235-9(1978)，在此引用仅供参考)。
Cruikshank，I.A.M.，等，“以Peronospora Tabacina亚当对烟草的茎部侵入对于叶片对蓝色霉菌反应的影响”，澳大利亚农业科学研究所杂志26369-72(1960)，在此引入仅供参考，是第一个报导通过以真菌茎部注射免疫烟草叶片抗蓝色霉菌(即，P.tabacina)，它也涉及矮化及提前衰老。最近发现从外部至木质部的注射不仅减轻了发育阻滞而且加快了生长和发育。免疫过的烟草植株，无论在温室还是野外的实验中，增高约40％，干重增加40％，鲜重增加30％，并且较对照植株多4-6片叶子(Tuzun，S，等，“以Peronospora Tabacina茎部注射和Metalaxyl处理对野外中烟草的生长及保护其抵抗蓝色霉菌的影响”，植物病理学74804(1984)，在此引入仅供参考)。这些植株开花比对照植株约早2-3周(Tuzun，S.，等，“在以整体保护其抵抗蓝色霉菌的Peronospora Tabacina亚当感染的烟草中因子的活动”，生理植物病理学26321-30(1985)，在此引用仅供参考)。
整体保护并不赋予对感染的绝对免疫，但降低于疾病的严重性并延迟症状的形成。损伤数目、损伤大小、及真菌病原体孢子形成的程度均减小。发病区域可减少超过90％。
当黄瓜在初次接种后的3-6周施以“强化”接种时，由葫芦科毛盘孢诱导的免疫持续到开花和结果(Kuc.J.，等，“通过葫芦科毛盘孢保护黄瓜抵抗葫芦科毛盘孢的方面”，植物病理学67533-6(1977)，在此引用仅供参考)。一旦植物开始形成果实则不能诱导保护。烟草植物在生长季节通过以P.tabacina的孢子囊茎部注射加以免疫。然而，为了防止整体蓝色霉菌的形成，该技术仅当植株高于20cm才有效。
从免疫黄瓜植物中去除诱导叶并不降低以前存在伸展叶的免疫水平。然而，以后从顶芽出现的叶片较其先前的其它叶片渐渐变得不受保护(Dean，R.A.，等，“在黄瓜中诱导的整体保护产生的时间和‘信号’的移动”，植物病理学76966-70(1986)，在此引用仅供参考)。Ross，A.F报导了类似的结果，“局部损伤形成的整体效应”，在植物病毒127-50页(1966)，在此引入仅供参考，免疫的烟草(局部损伤宿主)通过事先以烟草花叶病毒感染而抵抗烟草花叶病毒。相反，从茎部以P.tabacina注射而免疫的烟草植物中切下的幼枝发出的新叶是受高度保护的(Tuzun，S.，等，“通过愈伤组织烟草中诱导的对蓝色霉菌(Peronospora Tabacina亚当，抗性的转移”，植物病理学751304(1985)，在此引入仅供参考)。从免疫植物的叶通过组织培养而再生的植物在蓝色霉菌方面相对于从非免疫母本叶再生的植物表现出显著的减少。年幼的再生体仅表现出减少的孢子形成。随着植物老化，损伤形成及孢子形成均减少。然而，其它研究者没有得到相同的结论，尽管在一个实验中报导了孢子形成的显著减少(Lucas，J.A.，等，“对Peronospora Hyoscyami的诱导抗性从被保护的烟草外植体向再生体的不可传递性”，植物病理学751222-5(1985)，在此引用仅供参考)。
黄瓜和西瓜的保护在温室及野外中是有效的(Caruso，F.L.，等，“通过葫芦科毛盘孢野外保护黄瓜抵抗葫芦科毛盘孢”，植物病理学671290-2(1977)，在此引用仅供参考)。在一次试验中，保护黄瓜上葫芦科毛盘孢的总的损伤面积不到未保护对照植物损伤面积的2％。同样地，66株保护的，受攻击的植物中仅1株死亡，相反69株未保护，受攻击的西瓜中47株死亡。在肯塔基及波多黎各广泛的野外试验中，烟草茎部以P.tabacina的孢子囊注射在控制蓝色霉菌中至少与最好的杀真菌剂，metalaxyl同样有效。根据坏死面积和孢子形成程度，植物95-99％受保护，导致治愈烟草10-25％的产量增加。
抗细菌及病毒的诱导抗性似乎表现为疾病症状或病原体复制的抑制或两者兼而有之(Caruso，F.L.，等，“通过黄瓜角斑病假单孢菌和葫芦科毛盘孢诱导黄瓜对炭疽病及角叶斑的抗性”，生理植物病理学14191-201(1979)；Doss，M.，等，“黄瓜整体获得的对黄瓜角斑病假单孢菌的抗性，表现为症状的抑制，而不是细菌的复制”，AcatPhytopathologia Academiae Sclentiarum Hungaricae16(3-4)，269-72(1981)；Jenns，A.E.等，“通过以烟草坏死病毒、葫芦科毛盘孢或黄瓜角斑病假单胞菌局部感染黄瓜整体诱导的对病原体的非特异性抗性”，Phytopathologia Mediterranea 18129-34(1979)，在此引用仅供参考)。
正如上所述，关于整体获得抗性的研究包括以感染性病原体感染植物。尽管此领域的研究对于理解整体获得抗性是如何起作用的是有用的，以感染性活性剂诱导这样的抗性在商业上是没有用的，因为这样的植物病原体接触能减弱或杀死植物。本发明涉及克服此种缺陷。
发明概述本发明涉及赋予植物病原体抗性的方法。此方法包括在多肽或蛋白接触植物细胞的条件下应用非感染形式的过敏反应诱导物(hypersensitive response elicitor)多肽或蛋白于植物中。
本发明的另一方面涉及病原体抗性植物，其细胞与非感染性过敏反应诱导物多肽或蛋白接触。
本发明的另一方面涉及用于赋予植物病原体抗性的组合物。该组合物包括非感染性、过敏反应诱导多肽或蛋白以及载体。
本发明具有下面的能力治疗以前不可治疗的植物疾病；整体治疗由于费用高人们不想单独治疗的疾病；以及避免使用治疗疾病的感染性活性剂。本发明可赋予抗性而无需使用对被治疗的植物或位于这些治疗植物附近的植物具有病原性的活性剂。由于本发明包括使用可完全生物降解的天然产品，故将不会污染环境。
附图简述

图1显示了编码解淀粉欧文氏杆菌过敏反应诱导物多肽或蛋白(即，hrpN)基因簇的遗传结构。顶部线显示质粒载体pCPP 430的限制性酶图谱，其中E＝EcoRI，B＝BamHI，且H＝HindIII。长方形代表转录单位，且长方形下面的箭头表示转录方向。较大的箭头表示用于过敏反应诱导物多肽或蛋白最终翻译所必需的区域。pCPP 430 hrpN是pCPP430的衍生物，其中的hrpN通过插入转座子TnStac而被突变。
图2为质粒载体pCPP 9的图谱。显著的特征是用于连接的活动化(mob)位点；λ(cos)粘性位点；及用于质粒稳定遗传的分离区域(par)。B，BamHI；E，EcoRI；H，HindIII；P，PstI；S，SaII；Sm，SmaI；oriV，复制起点；Spr，壮观霉素抗性；Smr，链霉素抗性。
发明详述本发明涉及赋予植物病原体抗性的方法。该方法包括在多肽或蛋白接触植物全部或部分细胞的条件下将一种非感染形式的过敏反应诱导物多肽或蛋白应用到全部或部分植物上。
本发明的另一方面涉及其细胞与非感染形式的过敏反应诱导物多肽或蛋白接触的病原体抗性植物。
本发明还有一个方面涉及用于赋予植物病原体抗性的组合物。该组合物包括非感染的过敏反应诱导物多肽或蛋白以及载体。
用于本发明的过敏反应诱导物多肽或蛋白可相应于源自多种病原体的过敏反应诱导物多肽或蛋白。这种多肽或蛋白能够在接触诱导物的植物组织中诱导局部坏死。优选的病原体包括解淀粉欧文氏杆菌(Erwiniaamylovora)，菊欧文氏杆菌(Erwinia chrysanthemi)，丁香假单胞菌(Pseudomonas syringae)，茄假单胞菌(Pseudomonas solancearum)，田野黄单胞菌(Xanthomonas campestris)，或其混合物。
对于本发明的目的，非感染形式的过敏反应诱导物多肽或蛋白可诱导过敏反应而不导致接触此多肽或蛋白的植物中的疾病。这可通过许多方法完成，包括1)应用分离的诱导物多肽或蛋白；2)应用不导致疾病并以编码过敏反应诱导物多肽或蛋白的基因转化的细菌；和3)应用在有些植物种类(但不是要应用此细菌的那些种类)中导致疾病并天然含有编码过敏反应诱导物多肽或蛋白基因的细菌。
在本发明的一个具体实施方案中，过敏反应诱导物多肽或蛋白质可分离自相应的有机体并应用于植物。这种分离方法众所周知，如在以下文献中所述Arlat，M.，F.Van Gijsegem，J.C.Huet，J.C.Pemollet，和C.A.Boucher，“PopA1，一种在特异矮牵牛属基因型中诱导过敏样反应的蛋白通过茄假单胞菌的Hrp途径分泌”，EMBO J.13543-553(1994)；He，S.Y.，H.C.Huang，和A.collmer，“Pseudomonassyringae pv.Syringae Harpinpss一种通过Hrp途径分泌并在植物中诱导过敏反应的蛋白”，细胞731255-1266(1993)；和Wei，Z.-M.，R.J.Laby，C.H.Zumoff，D.W.Bauer，S.-Y.He，A.Collmer，和S.V.Beer，“由植物病原体解淀粉欧文氏杆菌产生的过敏反应Harpin诱导物”，科学25785-88(1992)，在此引用仅供参考。也参见未决的美国专利申请系列Nos.08/200,024和08/062,024，在此引用仅供参考。然而，优选地，本发明分离的过敏反应诱导物多肽或蛋白经重组制备并按下述纯化。
在本发明的其它实施方案中，本发明的过敏反应诱导物多肽或蛋白可通过应用含有编码过敏反应诱导物多肽或蛋白的基因的细菌应用于植物。这种细菌必需能够分泌或输出多肽或蛋白从而使诱导物能够接触植物细胞。在这些实施方案中，过敏反应诱导物多肽或蛋白在植物体中(inplanta)或刚好在细菌导入植物之前通过该细菌而产生。
在本发明细菌应用模式的一个实施方案中，该细菌不导致疾病并以编码过敏反应诱导物多肽或蛋白的基因转化(例如，重组)。例如，在植物中不诱导过敏反应的大肠杆菌，可用编码过敏反应的诱导物多肽或蛋白的基因转化且然后应用于植物。细菌种类(非大肠杆菌)也可用于本发明此实施方案中。
在本发明细菌应用模式的另一实施方案中，该细菌不导致疾病并天然含有编码过敏反应诱导物多肽或蛋白的基因。这种细菌的实例已在前面说明。然而，在此实施方案中这些细菌用于对该细菌传播的疾病不易感的植物中。例如，解淀粉欧文氏杆菌在苹果或梨中导致疾病但在西红柿中不导致疾病。然而，这种细菌将在西红柿中诱导过敏反应。因此，根据本发明的这个实施方案，解淀粉欧文氏杆菌可用于西红柿以赋予病原体抗性而不在该种中导致疾病。
来自菊欧文氏杆菌的过敏反应诱导物多肽或蛋白具有如下的相应于序列鉴定No.1的氨基酸序列Met Gln Ile Thr Ile Lys Ala His Ile Gly Gly Asp Leu Gly Val Ser1 5 10 15Gly Leu Gly Ala Gln Gly Leu Lys Gly Leu Asn Ser Ala Ala Ser Ser20 25 30Leu Gly Ser Ser Val Asp Lys Leu Ser Ser Thr Ile Asp Lys Leu Thr35 40 45Ser Ala Leu Thr Ser Met Met Phe Gly Gly Ala Leu Ala Gln Gly Leu50 55 60Gly Ala Ser Ser Lys Gly Leu Gly Met Ser Asn Gln Leu Gly Gln Ser65 70 75 80Phe Gly Asn Gly Ala Gln Gly Ala Ser Asn Leu Leu Ser Val Pro Lys85 90 95Ser Gly Gly Asp Ala Leu Ser Lys Met Phe Asp Lys Ala Leu Asp Asp100 105 110Leu Leu Gly His Asp Thr Val Thr Lys Leu Thr Asn Gln Ser Asn Gln115 120 125Leu Ala Asn Ser Met Leu Asn Ala Ser Gln Met Thr Gln Gly Asn Met130 135 140Asn Ala Phe Gly Ser Gly Val Asn Asn Ala Leu Ser Ser Ile Leu Gly145 150 155 160Asn Gly Leu Gly Gln Ser Met Ser Gly Phe Ser Gln Pro Ser Leu Gly165 170 175Ala Gly Gly Leu Gln Gly Leu Ser Gly Ala Gly Ala Phe Asn Gln Leu180 185 190Gly Asn Ala Ile Gly Met Gly Val Gly Gln Asn Ala Ala Leu Ser Ala195 200 205Leu Ser Asn Val Ser Thr His Val Asp Gly Asn Asn Arg His Phe Val210 215 220Asp Lys Glu Asp Arg Gly Met Ala Lys Glu Ile Gly Gln Phe Met Asp225 230 235 240Gln Tyr Pro Glu Ile Phe Gly Lys Pro Glu Tyr Gln Lys Asp Gly Trp245 250 255Ser Ser Pro Lys Thr Asp Asp Lys Ser Trp Ala Lys Ala Leu Ser Lys260 265 270Pro Asp Asp Asp Gly Met Thr Gly Ala Ser Met Asp Lys Phe Arg Gln275 280 285Ala Met Gly Met Ile Lys Ser Ala Val Ala Gly Asp Thr Gly Asn Thr290 295 300Asn Leu Asn Leu Arg Gly Ala Gly Gly Ala Ser Leu Gly Ile Asp Ala305 310 315 320Ala Val Val Gly Asp Lys Ile Ala Asn Met Ser Leu Gly Lys Leu Ala325 330 335Asn Ala该过敏反应诱导物多肽或蛋白具有34kDa的分子量，是热稳定的，具有大于16％的甘氨酸含量，并且基本上不含半胱氨酸。菊欧文氏杆菌过敏反应诱导物多肽或蛋白由具有下面的相应于序列鉴定No.2核苷酸序列的DNA分子所编码CGATTTTACC CGGGTGAACG TGCTATGACC GACAGCATCA CGGTATTCGA CACCGTTACG60GCGTTTATGG CCGCGATGAA CCGGCATCAG GCGGCGCGCT GGTCGCCGCA ATCCGGCGTC 120GATCTGGTAT TTCAGTTTGG GGACACCGGG CGTGAACTCA TGATGCAGAT TCAGCCGGGG 180CAGCAATATC CCGGCATGTT GCGCACGCTG CTCGCTCGTC GTTATCAGCA GGCGGCAGAG 240TGCGATGGCT GCCATCTGTG CCTGAACGGC AGCGATGTAT TGATCCTCTG GTGGCCGCTG 300CCGTCGGATC CCGGCAGTTA TCCGCAGGTG ATCGAACGTT TGTTTGAACT GGCGGGAATG 360ACGTTGCCGT CGCTATCCAT AGCACCGACG GCGCGTCCGC AGACAGGGAA CGGACGCGCC 420CGATCATTAA GATAAAGGCG GCTTTTTTTA TTGCAAA CG GTAACGGTGA GGAACCGTTT 480CACCGTCGGC GTCACTCAGT AACAAGTATC CATCATGATG CCTACATCGG GATCGGCGTG 540GGCATCCGTT GCAGATACTT TTGCGAACAC CTGACATGAA TGAGGAAACG AAATTATGCA 600AATTACGATC AAAGCGCACA TCGGCGGTGA TTTGGGCGTC TCCGGTCTGG GGCTGGGTGC 660TCAGGGACTG AAAGGACTGA ATTCCGCGGC TTCATCGCTG GGTTCCAGCG TGGATAAACT 720GAGCAGCACC ATCGATAAGT TGACCTCCGC GCTGACTTCG ATGATGTTTG GCGGCGCGCT 780GGCGCAGGGG CTGGGCGCCA GCTCGAAGGG GCTGGGGATG AGCAATCAAC TGGGCCAGTC 840TTTCGGCAAT GGCGCGCAGG GTGCGAGCAA CCTGCTATCC GTACCGAAAT CCGGCGGCGA 900TGCGTTGTCA AAAATGTTTG ATAAAGCGCT GGACGATCTG CTGGGTCATG ACACCGTGAC 960CAAGCTGACT AACCAGAGCA ACCAACTGGC TAATTCAATG CTGAACGCCA GCCAGATGAC 1020CCAGGGTAAT ATGAATGCGT TCGGCAGCGG TGTGAACAAC GCACTGTCGT CCATTCTCGG 1080CAACGGTCTC GGCCAGTCGA TGAGTGGCTT CTCTCAGCCT TCTCTGGGGG CAGGCGGCTT 1140GCAGGGCCTG AGCGGCGCGG GTGCATTCAA CCAGTTGGGT AATGCCATCG GCATGGGCGT 1200GGGGCAGAAT GCTGCGCTGA GTGCGTTGAG TAACGTCAGC ACCCACGTAG ACGGTAACAA 1260CCGCCACTTT GTAGATAAAG AAGATCGCGG CATGGCGAAA GAGATCGGCC AGTTTATGGA 1320TCAGTATCCG GAAATATTCG GTAAACCGGA ATACCAGAAA GATGGCTGGA GTTCGCCGAA 1380GACGGACGAC AAATCCTGGG CTAAAGCGCT GAGTAAACCG GATGATGACG GTATGACCGG 1440CGCCAGCATG GACAAATTCC GTCAGGCGAT GGGTATGATC AAAAGCGCGG TGGCGGGTGA 1500TACCGGCAAT ACCAACCTGA ACCTGCGTGG CGCGGGCGGT GCATCGCTGG GTATCGATGC 1560GGCTGTCGTC GGCGATAAAA TAGCCAACAT GTCGCTGGGT AAGCTGGCCA ACGCCTGATA 1620ATCTGTGCTG GCCTGATAAA GCGGAAACGA AAAAAGAGAC GGGGAAGCCT GTCTCTTTTC 1680TTATTATGCG GTTTATGCGG TTACCTGGAC CGGTTAATCA TCGTCATCGA TCTGGTACAA 1740ACGCACATTT TCCCGTTCAT TCGCGTCGTT ACGCGCCACA ATCGCGATGG CATCTTCCTC 1800GTCGCTCAGA TTGCGCGGCT GATGGGGAAC GCCGGGTGGA ATATAGAGAA ACTCGCCGGC 1860CAGATGGAGA CACGTCTGCG ATAAATCTGT GCCGTAACGT GTTTCTATCC GCCCCTTTAG 1920CAGATAGATT GCGGTTTCGT AATCAACATG GTAATGCGGT TCCGCCTGTG CGCCGGCCGG 1980GATCACCACA ATATTCATAG AAAGCTGTCT TGCACCTACC GTATCGCGGG AGATACCGAC 2040AAAATAGGGC AGTTTTTGCG TGGTATCCGT GGGGTGTTCC GGCCTGACAA TCTTGAGTTG 2100GTTCGTCATC ATCTTTCTCC ATCTGGGCGA CCTGATCGGT T 2141来自解淀粉欧文氏杆菌的过敏反应诱导物多肽或蛋白具有如下的相应于序列鉴定No.3的氨基酸序列Met Ser Leu Asn Thr Ser Gly Leu Gly Ala Ser Thr Met Gln Ile Ser1 5 10 15Ile Gly Gly Ala Gly Gly Asn Asn Gly Leu Leu Gly Thr Ser Arg Gln20 25 30Asn Ala Gly Leu Gly Gly Asn Ser Ala Leu Gly Leu Gly Gly Gly Asn35 40 45Gln Asn Asp Thr Val Asn Gln Leu A la Gly Leu Leu Thr Gly Met Met50 55 60Met Met Met Ser Met Met Gly Gly Gly Gly Leu Met Gly Gly Gly Leu65 70 75 80Gly Gly Gly Leu Gly Asn Gly Leu Gly Gly Ser Gly Gly Leu Gly Glu85 90 95Gly Leu Ser Asn Ala Leu Asn Asp Met Leu Gly Gly Ser Leu Asn Thr100 105 110Leu Gly Ser Lys Gly Gly Asn Asn Thr Thr Ser Thr Thr Asn Ser Pro115 120 125Leu Asp Gln Ala Leu Gly Ile Asn Ser Thr Ser Gln Asn Asp Asp Ser130 135 140Thr Ser Gly Thr Asp Ser Thr Ser Asp Ser Ser Asp Pro Met Gln Gln145 150 155 160Leu Leu Lys Met Phe Ser Glu Ile Met Gln Ser Leu Phe Gly Asp Gly165 170 175Gln Asp Gly Thr Gln Gly Ser Ser Ser Gly Gly Lys Gln Pro Thr Glu180 185 190Gly Glu Gln Asn Ala Tyr Lys Lys Gly Val Thr Asp Ala Leu Ser Gly195 200 205Leu Met Gly Asn Gly Leu Ser Gln Leu Leu Gly Asn Gly Gly Leu Gly210 215 220Gly Gly Gln Gly Gly Asn Ala Gly Thr Gly Leu Asp Gly Ser Ser Leu225 230 235 240Gly Gly Lys Gly Leu Gln Asn Leu Ser Gly Pro Val Asp Tyr Gln Gln245 250 255Leu Gly Asn Ala Val Gly Thr Gly Ile Gly Met Lys Ala Gly Ile Gln260 265 270Ala Leu Asn Asp Ile Gly Thr His Arg His Ser Ser Thr Arg Ser Phe275 280 285Val Asn Lys Gly Asp Arg Ala Met Ala Lys Glu Ile Gly Gln Phe Met290 295 300Asp Gln Tyr Pro Glu Val Phe Gly Lys Pro Gln Tyr Gln Lys Gly Pro305 310 315 320Gly Gln Glu Val Lys Thr Asp Asp Lys Ser Trp Ala Lys Ala Leu Ser325 330 335Lys Pro Asp Asp Asp Gly Met Thr Pro Ala Ser Met Glu Gln Phe Asn340 345 350Lys Ala Lys Gly Met Ile Lys Arg Pro Met Ala Gly Asp Thr Gly Asn355 360 365Gly Asn Leu Gln His Ala Val Pro Val Val Leu Arg Trp Val Leu Met370 375 380Pro385该过敏反应诱导物多肽或蛋白具有约37kDa的分子量，其pI约4.3，并且其在100℃至少10分钟是热稳定的。该过敏反应诱导物多肽或蛋白基本上没有半胱氨酸。来自解淀粉欧文氏杆菌的过敏反应诱导物多肽或蛋白在下面的文献中被更为详细地描述，即Wei，Z.-m.，R.J.Laby，C.H.ZumofF，D.W.Bauer，S.-Y.He，A.Collmer，和S.V.Beer，“Harpin，由植物病原体解淀粉欧文氏杆菌产生的过敏反应诱导物”，科学25785-88(1992)，在此引用仅供参考。编码此多肽或蛋白的DNA分子具有下面的相当于序列鉴定号4的核苷酸序列ATGAGTCTGA ATACAAGTGG GCTGGGAGCG TCAACGATGC AAATTTCTAT CGGCGGTGCG 60GGCGGAAATA ACGGGTTGCT GGGTACCAGT CGCCAGAATG CTGGGTTGGG TGGCAATTCT 120GCACTGGGGC TGGGCGGCGG TAATCAAAAT GATACCGTCA ATCAGCTGGC TGGCTTACTC 180ACCGGCATGA TGATGATGAT GAGCATGATG GGCGGTGGTG GGCTGATGGG CGGTGGCTTA 240GGCGGTGGCT TAGGTAATGG CTTGGGTGGC TCAGGTGGCC TGGGCGAAGG ACTGTCGAAC 300GCGCTGAACG ATATGTTAGG CGGTTCGCTG AACACGCTGG GCTCGAAAGG CGGCAACAAT 360ACCACTTCAA CAACAAATTC CCCGCTGGAC CAGGCGCTGG GTATTAACTC AACGTCCCAA 420AACGACGATT CCACCTCCGG CACAGATTCC ACCTCAGACT CCAGCGACCC GATGCAGCAG 480CTGCTGAAGA TGTTCAGCGA GATAATGCAA AGCCTGTTTG GTGATGGGCA AGATGGCACC 540CAGGGCAGTT CCTCTGGGGG CAAGCAGCCG ACCGAAGGCG AGCAGAACGC CTATAAAAAA 600GGAGTCACTG ATGCGCTGTC GGGCCTGATG GGTAATGGTC TGAGCCAGCT CCTTGGCAAC 660GGGGGACTGG GAGGTGGTCA GGGCGGTAAT GCTGGCACGG GTCTTGACGG TTCGTCGCTG 720GGCGGCAAAG GGCTGCAAAA CCTGAGCGGG CCGGTGGACT ACCAGCAGTT AGGTAACGCC 780GTGGGTACCG GTATCGGTAT GAAAGCGGGC ATTCAGGCGC TGAATGATAT CGGTACGCAC 840AGGCACAGTT CAACCCGTTC TTTCGTCAAT AAAGGCGATC GGGCGATGGC GAAGGAAATC 900GGTCAGTTCA TGGACCAGTA TCCTGAGGTG TTTGGCAAGC CGCAGTACCA GAAAGGCCCG 960GGTCAGGAGG TGAAAACCGA TGACAAATCA TGGGCAAAAG CACTGAGCAA GCCAGATGAC 1020GACGGAATGA CACCAGCCAG TATGGAGCAG TTCAACAAAG CCAAGGGCAT GATCAAAAGG 1080CCCATGGCGG GTGATACCGG CAACGGCAAC CTGCAGCACG CGGTGCCGGT GGTTCTTCGC 1140TGGGTATTGA TGCCATGA 1158
来自丁香假单胞菌的过敏反应诱导物多肽或蛋白具有如下的相应于序列鉴定号5的氨基酸序列Met Gln Ser Leu Ser Leu Asn Ser Ser Ser Leu Gln Thr Pro Ala Met1 5 10 15Ala Leu Val Leu Val Arg Pro Glu Ala Glu Thr Thr Gly Ser Thr Ser20 25 30Ser Lys Ala Leu Gln Glu Val Val Val Lys Leu Ala Glu Glu Leu Met35 40 45Arg Asn Gly Gln Leu Asp Asp Ser Ser Pro Leu Gly Lys Leu Leu Ala50 55 60Lys Ser Met Ala Ala Asp Gly Lys Ala Gly Gly Gly Ile Glu Asp Val65 70 75 80Ile Ala Ala Leu Asp Lys Leu Ile His Glu Lys Leu Gly Asp Asn Phe85 90 95Gly Ala Ser Ala Asp Ser Ala Ser Gly Thr Gly Gln Gln Asp Leu Met100 105 110Thr Gln Val Leu Asn Gly Leu Ala Lys Ser Met Leu Asp Asp Leu Leu115 120 125Thr Lys Gln Asp Gly Gly Thr Ser Phe Ser Glu Asp Asp Met Pro Met130 135 140Leu Asn Lys Ile Ala Gln Phe Met Asp Asp Asn Pro Ala Gln Phe Pro145 150 155 160Lys Pro Asp Ser Gly Ser Trp Val Asn Glu Leu Lys Glu Asp Asn Phe165 170 175Leu Asp Gly Asp Glu Thr Ala Ala Phe Arg Ser Ala Leu Asp Ile Ile180 185 190Gly Gln Gln Leu Gly Asn Gln Gln Ser Asp Ala Gly Ser Leu Ala Gly195 200 205Thr Gly Gly Gly Leu Gly Thr Pro Ser Ser Phe Ser Asn Asn Ser Ser210 215 220Val Met Gly Asp Pro Leu Ile Asp Ala Asn Thr Gly Pro Gly Asp Ser225 230 235 240Gly Asn Thr Arg Gly Glu Ala Gly Gln Leu Ile Gly Glu Leu Ile Asp245 250 255Arg Gly Leu Gln Ser Val Leu Ala Gly Gly Gly Leu Gly Thr Pro Val260265 270Asn Thr Pro Gln Thr gly Thr Ser Ala Asn Gly Gly Gln Ser Ala Gln275 280 285Asp Leu Asp Gln Leu Leu Gly Gly Leu Leu Leu Lys Gly Leu Glu Ala290 295 300Thr Leu Lys Asp Ala Gly Gln Thr Gly Thr Asp Val Gln Ser Ser Ala305 310 315 320Ala Gln Ile Ala Thr Leu Leu Val Ser Thr Leu Leu Gln Gly Thr Arg325 330 335Asn Gln Ala Ala Ala340该过敏反应诱导物多肽或蛋白具有34-35kDa的分子量。其富含甘氨酸(约13.5％)并缺乏半胱氨酸及酪氨酸。有关来自丁香假单胞菌过敏反应诱导物的进一步信息发现于He，S.Y.，H.C.Huang，和A.Collmer，“Pseudomonas syringae pv.Syringae Harpinpss一种通过Hrp途径分泌并在植物中诱导过敏反应的蛋白”，细胞731255-1266(1993)，在此引用仅供参考。编码来自丁香假单胞菌的过敏反应诱导物的DNA分子具有如下的相应于序列鉴定号6的核苷酸序列ATGCAGAGTC TCAGTCTTAA CAGCAGCTCG CTGCAAACCC CGGCAATGGC CCTTGTCCTG60GTACGTCCTG AAGCCGAGAC GACTGGCAGT ACGTCGAGCA AGGCGCTTCA GGAAGTTGTC 120GTGAAGCTGG CCGAGGAACT GATGCGCAAT GGTCAACTCG ACGACAGCTC GCCATTGGGA 180AAACTGTTGG CCAAGTCGAT GGCCGCAGAT GGCAAGGCGG GCGGCGGTAT TGAGGATGTC 240ATCGCTGCGC TGGACAAGCT GATCCATGAA AAGCTCGGTG ACAACTTCGG CGCGTCTGCG 300GACAGCGCCT CGGGTACCGG ACAGCAGGAC CTGATGACTC AGGTGCTCAA TGGCCTGGCC 360AAGTCGATGC TCGATGATCT TCTGACCAAG CAGGATGGCG GGACAAGCTT CTCCGAAGAC 420GATATGCCGA TGCTGAACAA GATCGCGCAG TTCATGGATG ACAATCCCGC ACAGTTTCCC 480AAGCCGGACT CGGGCTCCTG GGTGAACGAA CTCAAGGAAG ACAACTTCCT TGATGGCGAC 540GAAACGGCTG CGTTCCGTTC GGCACTCGAC ATCATTGGCC AGCAACTGGG TAATCAGCAG 600AGTGACGCTG GCAGTCTGGC AGGGACGGGT GGAGGTCTGG GCACTCCGAG CAGTTTTTCC 660AACAACTCGT CCGTGATGGG TGATCCGCTG ATCGACGCCA ATACCGGTCC CGGTGACAGC 720GGCAATACCC GTGGTGAAGC GGGGCAACTG ATCGGCGAGC TTATCGACCG TGGCCTGCAA 780TCGGTATTGG CCGGTGGTGG ACTGGGCACA CCCGTAAACA CCCCGCAGAC CGGTACGTCG 840GCGAATGGCG GACAGTCCGC TCAGGATCTT GATCAGTTGC TGGGCGGCTT GCTGCTCAAG 900GGCCTGGAGG CAACGCTCAA GGATGCCGGG CAAACAGGCA CCGACGTGCA GTCGAGCGCT 960GCGCAAATCG CCACCTTGCT GGTCAGTACG CTGCTGCAAG GCACCCGCAA TCAGGCTGCA 1020
来自茄假单孢菌的过敏反应诱导物多肽或蛋白具有如下的相应于序列鉴定号7的氨基酸序列Met Ser Val Gly Asn Ile Gln Ser Pro Ser Asn Leu Pro Gly Leu Gln1 5 10 15Asn Leu Asn Leu Asn Thr Asn Thr Asn Ser Gln Gln Ser Gly Gln Ser20 25 30Val Gln Asp Leu Ile Lys Gln Val Glu Lys Asp Ile Leu Asn Ile Ile35 40 45Ala Ala Leu Val Gln Lys Ala Ala Gln Ser Ala Gly Gly Asn Thr Gly50 55 60Asn Thr Gly Asn Ala Pro Ala Lys Asp Gly Asn Ala Asn Ala Gly Ala65 70 75 80Asn Asp Pro Ser Lys Asn Asp Pro Ser Lys Ser Gln Ala Pro Gln Ser85 90 95Ala Asn Lys Thr Gly Asn Val Asp Asp Ala Asn Asn Gln Asp Pro Met100 105 110Gln Ala Leu Met Gln Leu Leu Glu Asp Leu Val Lys Leu Leu Lys Ala115 120 125Ala Leu His Met Gln Gln Pro Gly Gly Asn Asp Lys Gly Asn Gly Val130 135 140Gly Gly Ala Asn Gly Ala Lys Gly Ala Gly Gly Gln Gly Gly Leu Ala145 150 155 160Glu Ala Leu Gln Glu Ile Glu Gln Ile Leu Ala Gln Leu Gly Gly Gly165170 175Gly Ala Gly Ala Gly Gly Ala Gly Gly Gly Val Gly Gly Ala Gly Gly180 185 190Ala Asp Gly Gly Ser Gly Ala Gly Gly Ala Gly Gly Ala Asn Gly Ala195 200 205Asp Gly Gly Asn Gly Val Asn Gly Asn Gln Ala Asn Gly Pro Gln Asn210 215 220Ala Gly Asp Val Asn Gly Ala Asn Gly Ala Asp Asp Gly Ser Glu Asp225 230 235 240Gln Gly Gly Leu Thr Gly Val Leu Gln Lys Leu Met Lys Ile Leu Asn245 250 255Ala Leu Val Gln Met Met Gln Gln Gly Gly Leu Gly Gly Gly Asn Gln260 265 270Ala Gln Gly Gly Ser Lys Gly Ala Gly Asn Ala Ser Pro Ala Ser Gly275 280 285Ala Asn Pro Gly Ala Asn Gln Pro Gly Ser Ala Asp Asp Gln Ser Ser290 295 300Gly Gln Asn Asn Leu Gln Ser Gln Ile Met Asp Val Val Lys Glu Val305 310 315 320Val Gln Ile Leu Gln Gln Met Leu Ala Ala Gln Asn Gly Gly Ser Gln325 330 335Gln Ser Thr Ser Thr Gln Pro Met340其由如下的具有相应于序列鉴定号8的核苷酸序列的DNA分子所编码ATGTCAGTCG GAAACATCCA GAGCCCGTCG AACCTCCCGG GTCTGCAGAA CCTGAACCTC 60AACACCAACA CCAACAGCCA GCAATCGGGC CAGTCCGTGC AAGACCTGAT CAAGCAGGTC120GAGAAGGACA TCCTCAACAT CATCGCAGCC CTCGTGCAGAAG GCCGCACA GTCGGCGGGC180GGCAACACCG GTAACACCGG CAACGCGCCG GCGAAGGACG GCAATGCCAA CGCGGGCGCC240AACGACCCGA GCAAGAACGA CCCGAGCAAG AGCCAGGCTC CGCAGTCGGC CAACAAGACC300GGCAACGTCG ACGACGCCAA CAACCAGGAT CCGATGCAAG CGCTGATGCA GCTGCTGGAA360GACCTGGTGA AGCTGCTGAA GGCGGCCCTG CACATGCAGC AGCCCGGCGG CAATGACAAG420GGCAACGGCG TGGGCGGTGC CAACGGCGCC AAGGGTGCCG GCGGCCAGGG CGGCCTGGCC480GAAGCGCTGC AGGAGATCGA GCAGATCCTC GCCCAGCTCG GCGGCGGCGG TGCTGGCGCC540GGCGGCGCGG GTGGCGGTGT CGGCGGTGCT GGTGGCGCGG ATGGCGGCTC CGGTGCGGGT600GGCGCAGGCG GTGCGAACGG CGCCGACGGC GGCAATGGCG TGAACGGCAA CCAGGCGAAC660GGCCCGCAGA ACGCAGGCGA TGTCAACGGT GCCAACGGCG CGGATGACGG CAGCGAAGAC720CAGGGCGGCC TCACCGGCGT GCTGCAAAAG CTGATGAAGA TCCTGAACGC GCTGGTGCAG780ATGATGCAGC AAGGCGGCCT CGGCGGCGGC AACCAGGCGC AGGGCGGCTC GAAGGGTGCC840GGCAACGCCT CGCCGGCTTC CGGCGCGAAC CCGGGCGCGA ACCAGCCCGG TTCGGCGGAT900GATCAATCGT CCGGCCAGAA CAATCTGCAA TCCCAGATCA TGGATGTGGT GAAGGAGGTC960GTCCAGATCC TGCAGCAGAT GCTGGCGGCG CAGAACGGCG GCAGCCAGCA GTCCACCTCG 1020ACGCAGCCGA TGTAA1035关于来自茄假单胞菌过敏反应诱导物多肽或蛋白的进一步信息在下面的文献中阐述Arlat，M.，F.Van Gijsegem，J.C.Huet，J.C.Pemollet，和C.A.Boucher，“PopA1，一种在特异的矮牵牛属基因型中诱导过敏样反应的蛋白，通过茄假单胞菌的Hrp途径分泌”，EMBD杂志.13543-533(1994)，在此引用仅供参考。
来自田野黄单胞菌致病变种甘氨酸的过敏反应诱导物多肽或蛋白具有如下的相应于序列鉴定号9的氨基酸序列Thr Leu Ile Glu Leu Met Ile Val Val Ala Ile Ile Ala Ile Leu Ala1 5 10 15Ala Ile Ala Leu Pro Ala Tyr Gln Asp Tyr20 25此序列是氨基末端序列，仅具有来自田野黄单胞菌致病变种甘氨酸过敏反应诱导物多肽或蛋白的26个残基。它与在其它田野黄单胞菌致病变种中测定的菌毛亚基蛋白相匹配。
上面的诱导物是例举性的。其它的诱导物可通过在编码诱导物基因表达的情况下培养诱导过敏反应的细菌加以鉴定。培养上清中的无细胞制品可通过用它们浸入适当的植物组织检测其诱导物活性(即，局部坏死)。
将上面的过敏反应诱导物多肽或蛋白的片段以及其它病原体全长诱导物片段用于本发明的方法中也是可能的。
适当的片段可通过几种方法制备。在第一种方法中，编码已知诱导物蛋白基因的亚克隆通过亚克隆基因片段的常规分子遗传操作制备。该亚克隆然后在体外或细菌细胞体内表达以产生可根据下述方法测试诱导物活性的更小蛋白或肽。
作为选择，诱导物蛋白片段可通过以蛋白水解酶如胰凝乳蛋白酶或葡萄球菌蛋白酶A或胰蛋白酶酶切全长诱导物蛋白而制备。不同的蛋白水解酶可能根据诱导物蛋白的氨基酸序列在不同的位点切割诱导物蛋白。蛋白水解得到的有些片段可以是抗性的活性诱导物。
在另一种方案中，根据蛋白的一级结构知识，诱导物蛋白基因的片段可通过用PCR技术及挑选的代表该蛋白特定部分的具体引物套一起而合成。然后这些片段将克隆入适当的载体用于增加及表达截短的肽或蛋白。
变异体也可(或作为选择)通过，例如，缺失或添加对多肽特性、二级结构及水疗性质具有最小影响的氨基酸来加以修饰。例如，多肽可在蛋白的N-末端连接到信号(或前导)序列上，该序列共翻译或反翻译，介导蛋白的转运。多肽也可连接到连接物或其它序列上以便于多肽的合成、纯化或鉴定。
本发明的蛋白或多肽优选通过常规技术以纯化的形式(优选至少约80％，更优选90％纯度)制备。一般地，本发明的蛋白或多肽分泌进入重组大肠杆菌的生长培养基。为了分离该蛋白，繁殖带有重组质粒的大肠杆菌宿主细胞、匀浆，并离心匀浆产物以去除细菌碎片。然后将上清进行随后的硫酸铵沉淀。将含有本发明多肽或蛋白的部分在适当孔径的葡聚糖或聚丙烯酰胺柱中进行凝胶过滤以分离蛋白。如果必要，蛋白部分可通过HPLC进一步纯化。
编码过敏反应诱导物多肽或蛋白的DNA分子可用常规的重组DNA技术掺入细胞中。一般来说，这包括将DNA分子插入该DNA分子对其是异源性的(即，不是正常存在的)表达整体中。该异源DNA分子以适当有意义的方向和正确的阅读框架插入表达整体。该载体含有用于插入的蛋白编码序列转录和翻译所必需的元件。
Cohen和Boyer的美国专利No.4,237,224，在此引用仅供参考，描述了用限制性酶切割和以DNA连接酶连接的以重组质粒形式的表达整体的制备。这些重组质粒然后通过转化方法导入并在包括生长于组织培养物中的原核生物及真核细胞的单细胞培养物中复制。
重组基因也可导入病毒，如牛痘病毒。重组病毒可通过将质粒转染进以病毒感染的细胞中而产生。
合适的载体包括，但不限于下面的病毒载体如λ载体整体gt11，gtWES.tB，Charon 4，和质粒载体如pBR 322，pBR 325，pACYC 177，pACYC 184，pUC 8，pUC 9，pUC 18，pUC 19，pLG 339，pR 290，pKC 37，pKC 101，SV 40，pBluescript II SK+/-或KS+/-(参见“Stratagene的克隆整体”目录(1993)，Stratagene，La Jolla，Calif，在此引用仅供参考)，pQE，pIH 821，pGEX，pET系列(参见F.WStudier等，“用T7 RNA聚合酶介导克隆基因的表达”，基因表达技术185卷(1990)，在此引用仅供参考)，及其任何衍生物。重组分子可通过转化、尤其转导、接合、移动或电穿孔导入细胞。DNA序列用本领域标准的克隆方法克隆入载体，如Maniatis等所述，分子克隆实验指南，冷泉港实验室，冷泉港，纽约(1982)，在此引用仅供参考。
许多宿主载体整体可被利用以表达蛋白编码序列。主要地，载体整体必需与所用的宿主细胞是可相容的。宿主-载体整体包括但不限于如下以噬菌体DNA、质粒DNA、或粘粒DNA转化的细菌；诸如含有酵母载体的酵母的微生物；以病毒(例如牛痘病毒，腺病毒等)感染的哺乳动物细胞整体；以病毒(如，杆状病毒)感染的昆虫细胞整体；及以细菌感染的植物细胞。这些载体表达元件的长度和特性是不同的。依据所用的宿主-载体整体，可使用许多合适的转录及翻译元件中的任何一个。
不同的遗传信号和加工事件控制基因表达的多个水平(如，DNA转录及信使RNA(mRNA)翻译)。
DNA转录依赖于启动子的存在，后者为一种DNA序列，指导RNA聚合酶的结合并因此启动mRNA合成。真核启动子的DNA序列不同于原核启动子的DNA序列。此外，真核启动子及伴随的遗传信号不可在原核整体中被识别或不发挥作用，且此外，原核启动子在真核细胞中不被识别并且不发挥作用。
同样地，mRNA在原核生物中的翻译依赖于适当的不同于真核生物的原核生物信号的存在。mRNA在原核生物中有效的翻译需要mRNA上称为Shine-Dalgarno(“SD”)序列的核糖体结合位点。此序列为位于起始密码子之前的短的mRNA核苷酸序列，起始密码子常为AUG，编码蛋白氨基末端的甲硫氨酸。SD序列与16srRNA(核糖体RNA)的3′-末端互补并可能通过与rRNA形成双螺旋以允许校正核糖体的定位而启动mRNA与核糖体的结合。对于使基因表达最大化的综述，见Roberts和Lauer，酶学方法，68473(1979)，在此引入仅供参考。
启动子的“强度”(即它们启动转录的能力)有所不同。为达到克隆基因表达的目的，为了获得基因高水平的转录及，因此的表达，使用强启动子是必要的。依据所用的宿主细胞整体，可使用许多合适启动子中的任何一个。例如，当克隆于大肠杆菌中，其噬菌体或质粒中时，可使用如下启动子，如T7噬菌体启动子，lac启动子，trp启动子，recA启动子，核糖体RNA启动子，大肠杆菌噬菌体λ的PR及PL启动子以及其它启动子，包括但不限于，lacUV5，ompF，bla，lpp等，以指导相邻DNA片段的高水平转录。此外，可使用通过重组DNA或其它合成DNA技术而制备的杂合体trp-lacUV5(tac)启动子或其它大肠杆菌启动子以提供用于插入基因的转录。
如果无需特别诱导可挑选抑制启动子功能的细菌宿主细胞菌株及表达载体。在某些操作中，添加特异的诱导物对插入DNA的有效转录是必需的。例如，lac操纵子通过添加乳糖或IPTG(异丙基硫代-β-D-半乳糖苷)加以诱导。许多种其它的操纵子，如trp，pro，等，在不同的控制之下。
在原核细胞中特异的起始信号也是需要的以用于有效的基因转录和翻译。这些转录及翻译起始信号的“强度”可不相同，该“强度”通过定量基因特异性信使RNA及合成的蛋白而分别加以测定。含有启动子的DNA表达载体也可含有各种“强”转录和/或翻译起始信号的任意组合。例如，在大肠杆菌中有效的翻译需要起始密码子(ATG)5′的约7-9个碱基的Shine-Dalgarno(SD)序列以提供核糖体结合位点。因此，可利用可被宿主细胞核糖体利用的任何SD-ATG组合。这样的组合包括但不限于来自大肠杆菌噬菌体λ的cro基因或N基因，或来自大肠杆菌色氨酸(tryptophan)E.D.C.B或A基因的SD-ATG组合。此外，可使用由重组DNA或包括掺入合成核苷酸的其它技术所制备的任何SD-ATG组合。
一旦编码过敏反应诱导物多肽或蛋白的分离的DNA分子被克隆入表达整体，其便容易地掺入到宿主细胞。这样的掺入可根据载体/宿主细胞整体通过上述的各种形式的转化来完成。合适的宿主载体细胞包括，但不限于细菌、病毒、酵母、哺乳动物细胞、昆虫、植物等。
本发明方法可用于处理多种植物以赋予病原体抗性。合适的植物包括双子叶及单子叶植物。更为特别地是，有用的庄稼植物可包括水稻、小麦、大麦、黑麦、棉花、向日葵、花生、玉米、土豆、甘薯、蚕豆、豌豆、菊苣、莴苣、苣荬菜、卷心菜、花椰菜、硬花球花椰菜、萝卜、小萝卜、菠菜、洋葱、大蒜、茄子、胡椒、芹菜、胡萝卜、西葫芦、南瓜、夏南瓜、黄瓜、苹果、梨、甜瓜、草莓、葡萄、悬钩子、菠萝、黄豆、烟草、西红柿、高粱、及甘蔗。合适的装饰植物的实例有拟南芥菜(Arabidopsis thaliana)、非洲紫苣苔属(Saintpaulia)，矮牵牛属、天竺葵属、一品红属、菊属、石竹属、以及百日菊属。
根据本发明赋予植物病原体抗体的方法在赋予对多种病原体包括病毒、细菌及真菌的抗性中是有用的。
特别地对下面病毒的抗性可通过本发明的方法完成烟草花叶病毒和西红柿花叶病毒。
特别地对下面细菌的抗性也可根据本发明赋予植物茄假单孢菌，丁香假单胞菌致病变种，tabaci，及田野黄单胞菌变种pelargonii。
通过使用本发明的方法可使植物特别地对以下真菌具有抗性尖孢镰孢和蔓延疫霉。
本发明的方法可通过应用过敏反应诱导物多肽或蛋白至全部或部分的待处理植物的各种方法加以完成。这可以(但不必)包括侵入过敏反应诱导物多肽或蛋白进入植物。合适的使用方法包括高压或低压喷施，注射以及邻近进行诱导物施用时的叶片损伤。本领域的技术人员可设想出其它合适的使用方法，只要它能使过敏反应诱导物多肽或蛋白与植物细胞有效地接触。
过敏反应诱导物多肽或蛋白可根据本发明单独或以与其它物质的混合物应用于植物。
本发明的一个方面包括用于赋予植物病原体抗性的含有在载体中的过敏反应诱导物多肽或蛋白的组合物。合适的载体包括水或水溶液。在此实施方案中，组合物含有大于500nM过敏反应诱导物多肽或蛋白。
尽管不是必需，该组合物可含有额外的添加剂包括肥料、杀虫剂、杀真菌剂及其混合物。合适的肥料包括(NH4)2NO3。合适杀虫剂的例子为马拉硫磷。有用的杀真菌剂包括克菌丹。
其它合适的添加剂包括缓冲剂、加湿剂、及摩擦剂。可使用这些物质以辅助本发明的方法。
实施例实施例1-Harpin-诱导的西红柿抗南方细菌性枯萎病(茄假单胞菌)的抗性种植于温室中8×15cm平地上的2周龄西红柿幼苗作以下处理20株植物用于以下六种处理中的一种，该处理命名为A至F，且描述如下(A)约100μl的200μg/ml粗harpin(即过敏反应诱导物多肽或蛋白)制品(Z-M.Wei，“Harpin，通过植物病原体解淀粉欧文氏杆菌制备的过敏反应诱导物”，科学25785-88(1992)，在此引入仅供参考)浸入每株幼苗的最低真叶中。
(B)与用于(A)中相同的harpin制品以400-网眼的金刚砂喷撒至幼苗的叶片表面并且然后用大拇指轻轻摩擦。
(C)大肠杆菌DH5(pCPP 430)(质粒载体pCPP 430的图谱见图1)培养于LB培养基至OD260＝0.7。离心培养物且然后重悬于pH 6.5的5mM的磷酸钾缓冲液中。约100μl的细胞悬液浸入到幼苗的每个叶片中。
(D)与(C)中一样使用大肠杆菌DH5(pCPP 430∷hrpN)(质粒载体pCPP 430∷hrpN的图谱见图1)。培养细胞，并且所用的悬液及接种量与(C)中描述的相同。
(E)对于大肠杆菌DH5(pCPP9)(见图2)，培养细胞并且所用的悬液及接种量与(C)中所述相同。
(F)将叶片以5mM磷酸钾缓冲液浸入如(C)中所述。
将攻击的病原细菌，茄假单胞菌菌株K60培养于King氏培养基B至OD260＝0.7(约108cfu/ml)。离心培养物并重悬于100体积5mM的磷酸钾缓冲液中至终浓度约1×106cfu/ml。
在西红柿幼菌以harpin或细菌处理三天以后，将其拔出并用剪刀切下约1厘米的根。然后将幼苗浸入茄假单胞菌K60中3分钟。接种过的植物重新种植于相同的小罐中。将植物置于温室，并在接种后的7天记录疾病发生率。A.以harpin处理的影响24小时以后，仅那些以harpin或大肠杆菌DH5(pCPP 430)浸入的叶片部分萎缩。以harpin和金刚砂喷撒的叶片仅显示出斑点状坏死。B.以harpin处理对南方细菌枯萎形成的影响。
20株浸入harpin的植物中没有一株在接种茄假单胞菌K60一周后表现出任何症状(表1)。20株中的一株植物显示出矮化症状。然而，20株浸入缓冲液的植物中有7株表现出矮化症状。与以缓冲液处理的植物相比以大肠杆菌DH5(pCPP 430-)(一种不能诱导过敏性萎缩的转座子-诱导突变子)或大肠杆菌DH5(pCPP9)处理没有显示出显著的差异。这些结果表明harpin或产生harpin的大肠杆菌DH5(pCPP 430)在西红柿植物中诱导对茄假单胞菌K60引起的南方细菌性枯萎的抗性。表1.以茄假单胞菌K60接种7和14天后西红柿幼苗的疾病发生率。
植物数目7天 14天处理矮化 健康 矮化健康A.Harpin浸入 0 202 18B.Harpin喷撒 1 193 17C.大肠杆菌DH5(pCPP430) 2 183 17D.大肠杆菌DH5(pCPP430) 4 167 13E.大肠杆菌DH5(pCPP9) 5 15 6+1枯萎13F.缓冲液 7 13 8+1枯萎11无病原体 0 200 20接种后4周，以harpin或大肠杆菌DH5(pCPP 430)处理的植物比以缓冲液处理的植物高和宽。被harpin或缓冲液浸入的10株植物的平均高度列于表2。表2.以harpin或缓冲液处理以后，以茄假单胞菌K60接种4周后西红柿植物的高度(cm)。
浸入缓冲液 浸入Harpin 浸入缓冲液未接种 以K60接种 以K60接种36 32 1141 29 2135 38 3334 35 1239 37 1535 33 3236 22 2535 35 1541 40 3737 29 38平均 36.9 33 23.9实施例2-Harp-诱导的西红柿对南方细菌性枯萎病茄假单胞菌的抗性除了茄假单胞菌K60浓度约为5×44cfu/ml以外，用于浸入及接种的所有方法均与实施例1中描述的相同。
以茄假单胞菌K60接种15天后，浸入有缓冲液的植物表现出症状。20株植物中的六株15天后表现出矮小症状；21天后2株植物枯萎。枯萎的植物最终死亡。然而，20株harpin处理的植物中没有一个表现出矮化症状。接种3周后，20株harpin处理的植物中3株表现出矮化症状。三周以后，植物可能丧失其诱导抗性是可能的。与在第一个实验中一样，harpin处理植物的整体干围(girth)及高度大于以缓冲液处理的植物。实施例3-Harpin-诱导的西红柿对南方细菌性枯萎病茄假单孢菌的抗性除了向含有处理的西红柿植物的小罐中加入额外的茄假单孢菌K60接种物以外，此实验与实施例1类似。
Harpin浸入到2周龄的西红柿幼苗中。两组植物中的每组浸入将约200μl的harpin以约200μg/ml的浓度悬浮于5mM的磷酸钾缓冲液的溶液中。共浸入20株西红柿幼苗，相同数目的西红柿幼苗用缓冲液浸入。两天后，通过根部浸入将植物用茄假单孢菌K60接种。将harpin-或缓冲液-浸入的植物从土壤混合物中拔出并用剪刀剪去少量的根且然后将剩余的根浸入茄假单孢菌K60的悬液中3分钟。细菌细胞悬液的浓度约5×108cfu/ml。幼苗重新种植于相同的小罐中。将额外3ml的细菌悬液加入到每个4-英寸直径小罐的土壤中。一周后计数疾病发生率。所有的实验均在具有限制的温度控制的温室中进行。
3周后，20株缓冲液浸入的西红柿植物中的11株死亡并且2株枯萎的植物恢复，但保持严重矮化。与没有接种的西红柿相比仅4株植物生长正常。然而，harpin处理的植物中15株似乎是健康的；接种后3周三株植物矮化且2株植物枯萎。这些结果总结于下表3中。表3.Harpin诱导的西红柿对茄假单孢菌导致的细菌性枯萎病的抗性接种后的周数处理1 2 3Harpin健康 20 17 15枯萎 0 1 2矮化 0 2 3缓冲液健康 8 5 4枯萎 8 12 13矮化 4 3 3实施例4-Harpin诱导的烟草对烟草花叶病毒的抗性一组4周龄烟草幼苗(栽培品种，Xanthi，具有N基因)的低位叶浸入浓度为200μg/ml的解淀粉欧文氏杆菌harpin中。三天以后，用烟草花叶病毒(“TMV”)攻击植物。使用2种浓度的病毒(5μg和100μg/ml)。约50μl的病毒悬液置于一上位烟草烟片上。该叶片撒以400-目的金刚砂并轻轻地摩擦叶片。每种浓度于三株植物上进行测试。于接种后4天及随后的2天计数坏死性损伤并报告三个叶片上的平均数(表4)。在第10天难以区分单个的损伤因为有些坏死性损伤融合到一起。因此，记录到的损伤数似乎少于在第7天记录到的数目。以缓冲液处理的叶片中坏死性损伤的范围大于harpin处理的叶片。表4.Harpin诱导的烟草对来自以5μg/ml病毒接种的TMV的抗性损伤/叶片的平均数处理 4天7天10天Harpin 21 32 35缓冲液 67 10276当烟草花叶病毒接种浓度为100μg/ml时，harpin处理和缓冲液处理的烟草中形成的局部损伤数目之间无明显差异。实施例5-Harpin诱导的西红柿对镰孢霉属枯萎病的抗性六周龄的西红柿植物按实施例3所述以harpin处理。真菌病原体，尖孢镰孢，于27℃培养于利马豆琼脂培养基中5天。具有网状菌丝体的两个完整琼脂板于20ml 5mM的磷酸钾缓冲液中混合2分钟。harpin或缓冲液处理的西红柿植物的根部通过插入一木桩至小罐土壤中加以损伤。然后，将3ml的真菌悬液倒入4英寸的每只小罐的土壤中。接种的植物保持于24℃控制环境的温室中并每天光照16个小时。接种7天后记录疾病发生率。每种处理应用于10株植物。结果列于下表5。表5. harpin或缓冲液处理对西红柿镰孢霉属枯萎病的影响在所示的接种后时间表现出枯萎症状的植株数目(在10株中)处理 7天 10天15天20天Harpin1 2 4 4(死亡1)缓冲液3 6 7 7(死亡4)实施例6-Harpin诱导的烟草对野火病(丁香假单胞菌致病变种tabaci)的抗性Harpin浸入到4周龄烟草植物(20cm高)的单组低位叶中。3天以后，丁香假单胞菌致病变种tabaci的悬液浸入到单组上位叶中。4天以后，记录疾病发生率，如表6中所列。表6.低位叶以harpin处理以后用丁香假单胞菌致病变种tabaci接种的烟草叶片中野火病的感染症状p.s.tabaci浓度 以Harpin处理 没有以Harpin处理104cfu/m 无症状 坏死并浸透水105cfu/ml无症状 坏死并浸透水106cfu/ml无症状 坏死并浸透水107cfu/ml无症状 坏死并浸透水108cfu/ml坏死坏死并浸透水实施例7-Harpin-诱导的牻牛儿苗属(Pelargonium hortorum)对细菌性叶斑(田野黄单胞菌致病变种pelargonii)的抗性此实验以培养于温室中单个4“或6”小罐中的人工土壤混合物中的去根牻牛儿苗属来进行。每株植物上的2片低位叶以0.05M的磷酸钾缓冲液pH 6.5(对照)，或harpin或大肠杆菌DH5(pCPP 430)(完整克隆的解淀粉欧文氏杆菌基因簇)悬液浸入。浸入后的2～7天，所有的植物以细菌性叶斑病原体，田野黄单胞菌致病变种pelargonii的纯培养物接种。细菌悬液(5×106cfu/ml)以低压喷雾至植物上位及下位的叶表面。每种处理应用于2组植物(在表7中命名为“A”和“B”)。植物维持于密闭室中48小时并通过冷雾喷雾器补充喷雾。然后，在分析疾病发生前将植物维持于温室小凳上10天，控制周围的湿度及23℃～32℃的温度。表7.harpin和解淀粉欧文氏杆菌hrp基因簇对牻牛儿苗属细菌性叶斑形成的影响。
处理和以田野黄单胞菌致病变种pelargonii接种之间的时间处理 7天5天 4天 3天 2天植物 植物 植物 植物 植物A B A B A B A B A B缓冲液3*5 5 4 3 2 4 3 4 5Harpin0 0 0 0 0 0 1 0 0 0DH5(pCPP430) 0 0 NT NT 0 0 0 1 1 0*表中的数字为接种后10天表现出疾病症状(显著的坏死、缺绿病、或枯萎)叶片的数目。实施例8-几种harpins在诱导对丁香假单胞菌致病变种tabaci引起的野火病抗性中的活性烟草植物(Nicotiana tabacum var.Xanthi)种植于温室中。在4周龄时，harpin制品浸入到每株植物单一组的两个低位叶片中。12株植物以每种harpin制品处理，并且三株以用于制备harpins的相同磷酸钾缓冲液处理。在以harpin制品浸入叶片的组中24小时内形成过敏性坏死，但以缓冲液处理的组中没有形成过敏性坏死。
在harpin处理后的7、10、11、和12天，所有植物通过浸入每组中的上位叶而接种104-106细胞/ml的丁香假单胞菌致病变种tabaci悬液。在评估疾病形成之前植物于温室中培养7天。结果列于下表8表8Harpin来源处理和接种之间的天数12 11 10 7log[接种] 4 5 6 4 5 6 4 5 6 4 5 6无(缓冲液) + + ++ + + ++ + + ++ + + ++丁香假单胞菌 - - +- - +- - +- - +菊欧文氏杆菌 - - +- - +- - +- - +解淀粉欧文氏杆菌 - - +- - -- - +- - +
-＝没有症状，+＝坏死并具有黄晕，典型野火病++＝严重坏死并具有黄晕，典型野火病结果表明来自三种细菌的harpin制品在诱导对野火病原体的抗性中均是有效的。以任何一种harpin处理的植物在使用两种较低接种浓度后未表现出任何症状。以更高的浓度接种后，以缓冲液处理的植物中症状较harpin处理的植物中症状更为严重。实施例9-Harpin诱导的对蔓延疫霉引起的晚疫病的抗性。
晚疫病病原体主要影响土豆和西红柿。其导致臭名昭著的爱尔兰土豆饥荒。harpin在诱导对该病原体抗性中的活性用种植于温室中的西红柿幼苗加以测定。三周龄的幼苗(栽培品种“Mama Mia”，约6～8英寸高)以harpin处理且随后以蔓延疫霉接种。每株植物的两组低位叶片以harpin溶液、产生和分泌harpin的大肠杆菌DH5(pCPP 430)悬液或磷酸钾缓冲液浸入。
浸入2、3或4天后，植物以蔓延疫霉的菌丝体悬液接种。使用对西红柿高度有毒的菌株美国7号。菌丝体悬液通过轻轻混合于21℃在2只大麦一面琼脂平板上培养2天的真菌而制备。用画家的粗画刷将该悬液刷至每株处理过的植物的叶片上表面及下表面。
处理及接种过的植物于温室中设计成维持20-23℃温度的特别构建的有雾小室中培养，同时维持高的相对湿度。湿度通过几台在纯水上以最大速度操作的冷雾喷雾器提供。以蔓延疫霉接种13天后计算疾病的发生率，并将结果列于下表9。每种处理应用于4株单个植物。表9.接种13天后存在于西红柿叶片中晚疫病损伤的数目。处理 处理和接种之间的天数43 2植物A B C DA B C D A B C D缓冲液3 2 0 01 2 2 0 0 0 4 1Harpin0 0 1 00 0 0 1 2 1 0 0DH5(pCPP430) 0 0 0 10 2 2 1 0 1 1 0以harpin的处理在处理和接种的所有间隔中减少了植物中形成损伤的数目。通过预先以产生和分泌harpin的DH5(pCPP 430)处理，形成的晚疫病损伤数目也减少。
尽管为了说明的目的详细描述了本发明，应该明白这种细节仅是为了说明的目的，并且本领域的技术人员在不偏离由下面权利要求所限定的本发明的精神和范围的情况下可作出改变。
序列表(1)一般信息(i)申请人康奈尔研究基金，公司(ii)发明题目过敏反应在植物中诱导的抗性(iii)序列数目9(iv)通讯地址(A)地址Nixon，Hargrave，Devans & Doyle LLP(B)街道Clinton Square，P.O.Box 1051(C)城市Rochester(D)州纽约(E)国家美国(F)邮编14603(v)计算机可读形式(A)介质类型软盘(B)计算机IBM PC兼容机(C)操作系统PC-DOS/MS-DOS(D)软件专利释放#1.0，#1.3版(vi)当前申请数据(A)申请号(B)提交日期(C)分类(vii)优先申请数据(A)申请号美国08/475,775(B)提交日期1995年6月7日(viii)律师/代理信息(A)姓名Goldman，Michael L.
(B)注册号30,727(C)参考/备审案目录号19603/10051(ix)电信信息(A)电话(716)263-1304(B)电传(716)263-1600(2)序列鉴定号1信息(i)序列特征(A)长度338个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型(D)拓扑学线性(ii)分子类型蛋白(xi)序列描述序列鉴定号1Met Gln Ile Thr Ile Lys Ala His Ile Gly Gly Asp Leu Gly Val Ser1 5 10 15Gly Leu Gly Ala Gln Gly Leu Lys Gly Leu Asn Ser Ala Ala Ser Ser20 25 30Leu Gly Ser Ser Val Asp Lys Leu Ser Ser Thr Ile Asp Lys Leu Thr35 40 45Ser Ala Leu Thr Ser Met Met Phe Gly Gly Ala Leu Ala Gln Gly Leu50 55 60Gly Ala Ser Ser Lys Gly Leu Gly Met Ser Asn Gln Leu Gly Gln Ser65 70 75 80Phe Gly Asn Gly Ala Gln Gly Ala Ser Asn Leu Leu Ser Val Pro Lys85 90 95Ser Gly Gly Asp Ala Leu Ser Lys Met Phe Asp Lys Ala Leu Asp Asp100 105 110Leu Leu Gly His Asp Thr Val Thr Lys Leu Thr Asn Gln Ser Asn Gln115120 125Leu Ala Asn Ser Met Leu Asn Ala Ser Gln Met Thr Gln Gly Asn Met130 135 140Asn Ala Phe Gly Ser Gly Val Asn Asn Ala Leu Ser Ser Ile Leu Gly145 150 155 160Asn Gly Leu Gly Gln Ser Met Ser Gly Phe Ser Gln Pro Ser Leu Gly165 170 175Ala Gly Gly Leu Gln Gly Leu Ser Gly Ala Gly Ala Phe Asn Gln Leu180 185 190Gly Asn Ala Ile Gly Met Gly Val Gly Gln Asn Ala Ala Leu Ser Ala195 200 205Leu Ser Asn Val Ser Thr His Val Asp Gly Asn Asn Arg His Phe Val210 215 220Asp Lys Glu Asp Arg Gly Met Ala Lys Glu Ile Gly Gln Phe Met Asp225 230 235240Gln Tyr Pro Glu Ile Phe Gly Lys Pro Glu Tyr Gln Lys Asp Gly Trp245 250 255Ser Ser Pro Lys Thr Asp Asp Lys Ser Trp Ala Lys Ala Leu Ser Lys260 265 270Pro Asp Asp Asp Gly Met Thr Gly Ala Ser Met Asp Lys Phe Arg Gln275 280 285Ala Met Gly Met Ile Lys Ser Ala Val Ala Gly Asp Thr Gly Asn Thr290 295 300Asn Leu Asn Leu Arg Gly Ala Gly Gly Ala Ser Leu Gly Ile Asp Ala305 310 315 320Ala Val Val Gly Asp Lys Ile Ala Asn Met Ser Leu Gly Lys Leu Ala325 330 335Asn Ala(2)序列鉴定号2信息(i)序列特征(A)长度2141个碱基对(B)类型核酸(C)链型单链(D)拓扑学线性(ii)分子类型 DNA(基因组)(xi)序列描述序列鉴定号2CGATTTTACC CGGGTGAACG TGCTATGACC GACAGCATCA CGGTATTCGA CACCGTTACG 60GCGTTTATGG CCGCGATGAA CCGGCATCAG GCGGCGCGCT GGTCGCCGCA ATCCGGCGTC120GATCTGGTAT TTCAGTTTGG GGACACCGGG CGTGAACTCA TGATGCAGAT 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Asn Asp Asp Ser130 135 140Thr Ser Gly Thr Asp Ser Thr Ser Asp Ser Ser Asp Pro Met Gln Gln145 150 155 160Leu Leu Lys Met Phe Ser Glu Ile Met Gln Ser Leu Phe Gly Asp Gly165 170175Gln Asp Gly Thr Gln Gly Ser Ser Ser Gly Gly Lys Gln Pro Thr Glu180 185 190Gly Glu Gln Asn Ala Tyr Lys Lys Gly Val Thr Asp Ala Leu Ser Gly195 200 205Leu Met Gly Asn Gly Leu Ser Gln Leu Leu Gly Asn Gly Gly Leu Gly210 215 220Gly Gly Gln Gly Gly Asn Ala Gly Thr Gly Leu Asp Gly Ser Ser Leu225 230 235 240Gly Gly Lys Gly Leu Gln Asn Leu Ser Gly Pro Val Asp Tyr Gln Gln245 250 255Leu Gly Asn Ala Val Gly Thr Gly Ile Gly Met Lys Ala Gly Ile Gln260 265 270Ala Leu Asn Asp Ile Gly Thr His Arg His Ser Ser Thr Arg Ser Phe275 280 285Val Asn Lys Gly Asp Arg Ala Met Ala Lys Glu Ile Gly Gln Phe Met290 295 300Asp Gln Tyr Pro Glu Val Phe Gly Lys Pro Gln Tyr Gln Lys Gly Pro305 310 315 320Gly Gln Glu Val Lys Thr Asp Asp Lys Ser Trp Ala Lys Ala Leu Ser325 330 335Lys Pro Asp Asp Asp Gly Met Thr Pro Ala Ser Met Glu Gln Phe Asn340 345 350Lys Ala Lys Gly Met Ile Lys Arg Pro Met Ala Gly Asp Thr Gly Asn355 360 365Gly Asn Leu Gln His Ala Val Pro Val Val Leu Arg Trp Val Leu Met370 375 380Pro385(2)序列鉴定号4信息(i)序列特征(A)长度1158个碱基对(B)类型核酸(C)链型单链(D)拓扑学线性(ii)分子类型DNA(基因组)(xi)序列描述序列鉴定号4ATGAGTCTGA ATACAAGTGG GCTGGGAGCG TCAACGATGC AAATTTCTAT CGGCGGTGCG60GGCGGAAATA ACGGGTTGCT GGGTACCAGT CGCCAGAATG CTGGGTTGGG TGGCAATTCT 120GCACTGGGGC TGGGCGGCGG TAATCAAAAT GATACCGTCA ATCAGCTGGC TGGCTTACTC 180ACCGGCATGA TGATGATGAT GAGCATGATG GGCGGTGGTG GGCTGATGGG CGGTGGCTTA 240GGCGGTGGCT TAGGTAATGG CTTGGGTGGC TCAGGTGGCC TGGGCGAAGG ACTGTCGAAC 300GCGCTGAACG ATATGTTAGG CGGTTCGCTG AACACGCTGG GCTCGAAAGG CGGCAACAAT 360ACCACTTCAA CAACAAATTC CCCGCTGGAC CAGGCGCTGG GTATTAACTC AACGTCCCAA 420AACGACGATT CCACCTCCGG CACAGATTCC ACCTCAGACT CCAGCGACCC GATGCAGCAG 480CTGCTGAAGA TGTTCAGCGA GATAATGCAA AGCCTGTTTG GTGATGGGCA AGATGGCACC 540CAGGGCAGTT CCTCTGGGGG CAAGCAGCCG ACCGAAGGCG AGCAGAACGC CTATAAAAAA 600GGAGTCACTG ATGCGCTGTC GGGCCTGATG GGTAATGGTC TGAGCCAGCT CCTTGGCAAC 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Asp Val65 70 75 80Ile Ala Ala Leu Asp Lys Leu Ile His Glu Lys Leu Gly Asp Asn Phe85 90 95Gly Ala Ser Ala Asp Ser Ala Ser Gly Thr Gly Gln Gln Asp Leu Met100 105 110Thr Gln Val Leu Asn Gly Leu Ala Lys Ser Met Leu Asp Asp Leu Leu115 120 125Thr Lys Gln Asp Gly Gly Thr Ser Phe Ser Glu Asp Asp Met Pro Met130 135 140Leu Asn Lys Ile Ala Gln Phe Met Asp Asp Asn Pro Ala Gln Phe Pro145 150155 160Lys Pro Asp Ser Gly Ser Trp Val Asn Glu Leu Lys Glu Asp Asn Phe165 170 175Leu Asp Gly Asp Glu Thr Ala Ala Phe Arg Ser Ala Leu Asp Ile Ile180 185 190Gly Gln Gln Leu Gly Asn Gln Gln Ser Asp Ala Gly Ser Leu Ala Gly195 200 205Thr Gly Gly Gly Leu Gly Thr Pro Ser Ser Phe Ser Asn Asn Ser Ser210 215 220Val Met Gly Asp Pro Leu Ile Asp Ala Asn Thr Gly Pro Gly Asp Ser225 230 235 240Gly Asn Thr Arg Gly Glu Ala Gly Gln Leu Ile Gly Glu Leu Ile Asp245 250 255Arg Gly Leu Gln Ser Val Leu Ala Gly Gly Gly Leu Gly Thr Pro Val260 265 270Asn Thr Pro Gln Thr Gly Thr Ser Ala Asn Gly Gly Gln Ser Ala Gln275 280 285Asp Leu Asp Gln Leu Leu Gly Gly Leu Leu Leu Lys Gly Leu Glu Ala290 295 300Thr Leu Lys Asp Ala Gly Gln Thr Gly Thr Asp Val Gln Ser Ser Ala305 310 315 320Ala Gln Ile Ala Thr Leu Leu Val Ser Thr Leu Leu Gln Gly Thr Arg325 330 335Asn Gln Ala Ala Ala340(2)序列鉴定号6信息(i)序列特征(A)长度1026个碱基对(B)类型核酸(C)链型单链(D)拓扑学线性(ii)分子类型DNA(基因组)(xi)序列描述序列鉴定号6ATGCAGAGTC TCAGTCTTAA CAGCAGCTCG CTGCAAACCC CGGCAATGGC CCTTGTCCTG60GTACGTCCTG AAGCCGAGAC GACTGGCAGT ACGTCGAGCA AGGCGCTTCA GGAAGTTGTC 120GTGAAGCTGG CCGAGGAACT GATGCGCAAT GGTCAACTCG ACGACAGCTC GCCATTGGGA 180AAACTGTTGG CCAAGTCGAT GGCCGCAGAT GGCAAGGCGG GCGGCGGTAT TGAGGATGTC 240ATCGCTGCGC TGGACAAGCT GATCCATGAA AAGCTCGGTG ACAACTTCGG CGCGTCTGCG 300GACAGCGCCT CGGGTACCGG ACAGCAGGAC CTGATGACTC AGGTGCTCAA TGGCCTGGCC 360AAGTCGATGC TCGATGATCT TCTGACCAAG CAGGATGGCG GGACAAGCTT CTCCGAAGAC 420GATATGCCGA TGCTGAACAA GATCGCGCAG TTCATGGATG ACAATCCCGC ACAGTTTCCC 480AAGCCGGACT CGGGCTCCTG GGTGAACGAA CTCAAGGAAG ACAACTTCCT TGATGGCGAC 540GAAACGGCTG CGTTCCGTTC GGCACTCGAC ATCATTGGCC AGCAACTGGG TAATCAGCAG 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Ser Gln Ile Met Asp Val Val Lys Glu Val305 310 315 320Val Gln Ile Leu Gln Gln Met Leu Ala Ala Gln Asn Gly Gly Ser Gln325 330 335Gln Ser Thr Ser Thr Gln Pro Met340(2)序列鉴定号8信息(i)序列特征(A)长度1035个碱基对(B)类型核酸(C)链型单链(D)拓扑学线性(ii)分子类型DNA(基因组)(xi)序列描述序列鉴定号8ATGTCAGTCG GAAACATCCA GAGCCCGTCG AACCTCCCGG GTCTGCAGAA CCTGAACCTC 60AACACCAACA CCAACAGCCA GCAATCGGGC CAGTCCGTGC AAGACCTGAT CAAGCAGGTC120GAGAAGGACA TCCTCAACAT CATCGCAGCC CTCGTGCAGA AGGCCGCACA GTCGGCGGGC180GGCAACACCG GTAACACCGG CAACGCGCCG GCGAAGGACG GCAATGCCAA CGCGGGCGCC240AACGACCCGA GCAAGAACGA CCCGAGCAAG AGCCAGGCTC CGCAGTCGGC CAACAAGACC300GGCAACGTCG ACGACGCCAA CAACCAGGAT CCGATGCAAG CGCTGATGCA GCTGCTGGAA 360GACCTGGTGA AGCTGCTGAA GGCGGCCCTG CACATGCAGC AGCCCGGCGG CAATGACAAG 420GGCAACGGCG TGGGCGGTGC CAACGGCGCC AAGGGTGCCG GCGGCCAGGG CGGCCTGGCC 480GAAGCGCTGC AGGAGATCGA GCAGATCCTC GCCCAGCTCG GCGGCGGCGG TGCTGGCGCC 540GGCGGCGCGG GTGGCGGTGT CGGCGGTGCT GGTGGCGCGG ATGGCGGCTC CGGTGCGGGT 600GGCGCAGGCG GTGCGAACGG CGCCGACGGC GGCAATGGCG TGAACGGCAA CCAGGCGAAC 660GGCCCGCAGA ACGCAGGCGA TGTCAACGGT GCCAACGGCG CGGATGACGG CAGCGAAGAC 720CAGGGCGGCC TCACCGGCGT GCTGCAAAAG CTGATGAAGA TCCTGAACGC GCTGGTGCAG 780ATGATGCAGC AAGGCGGCCT CGGCGGCGGC AACCAGGCGC AGGGCGGCTC GAAGGGTGCC 840GGCAACGCCT CGCCGGCTTC CGGCGCGAAC CCGGGCGCGA ACCAGCCCGG TTCGGCGGAT 900GATCAATCGT CCGGCCAGAA CAATCTGCAA TCCCAGATCA TGGATGTGGT GAAGGAGGTC 960GTCCAGATCC TGCAGCAGAT GCTGGCGGCG CAGAACGGCG GCAGCCAGCA GTCCACCTCG 1020ACGCAGCCGA TGTAA 1035(2)序列鉴定号9信息(i)序列特征(A)长度26个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型(D)拓扑学线性(ii)分子类型肽(xi)序列描述序列鉴定号9Thr Leu Ile Glu Leu Met Ile Val Val Ala Ile Ile Ala Ile Leu Ala1 5 10 15Ala Ile Ala Leu Pro Ala Tyr Gln Asp Tyr20 2权利要求
1.一种赋予植物病原体抗性的方法，包括在多肽或蛋白与植物细胞接触的条件下将非感染形式的过敏反应诱导物多肽或蛋白施加于植物。
2.根据权利要求1的方法，其中的过敏反应诱导物多肽或蛋白相应于来自选自解淀粉欧文氏杆菌，菊欧文氏杆菌，丁香假单胞菌，茄假单胞菌，田野黄单胞菌，及其混合物的病原体的诱导物多肽或蛋白。
3.根据权利要求2的方法，其中的过敏反应诱导物多肽或蛋白相应于来自菊欧文氏杆菌的过敏反应诱导物多肽或蛋白。
4.根据权利要求3的方法，其中的过敏反应诱导物多肽或蛋白具有相应于序列鉴定号1的氨基酸序列。
5.根据权利要求3的方法，其中的过敏反应诱导物多肽或蛋白具有34kDa的分子量。
6.根据权利要求2的方法，其中的过敏反应诱导物多肽或蛋白相应于来自解淀粉欧文氏杆菌的过敏反应诱导物多肽或蛋白。
7.根据权利要求6的方法，其中的过敏反应诱导物多肽或蛋白具有相应于序列鉴定号3的氨基酸序列。
8.根据权利要求6的方法，其中的过敏反应诱导物多肽或蛋白具有37kDa的分子量。
9.根据权利要求2的方法，其中的过敏反应诱导物多肽或蛋白相应于来自丁香假单胞菌的过敏反应诱导物多肽或蛋白。
10.根据权利要求9的方法，其中的过敏反应诱导物多肽或蛋白具有相应于序列鉴定号5的氨基酸序列。
11.根据权利要求9的方法，其中的过敏反应诱导物多肽或蛋白具有34-35kDa的分子量。
12.根据权利要求2的方法，其中的过敏反应诱导物多肽或蛋白相应于来自茄假单胞菌的过敏反应诱导物多肽或蛋白。
13.根据权利要求12的方法，其中的过敏反应诱导物多肽或蛋白具有相应于序列鉴定号7的氨基酸序列。
14.根据权利要求2的方法，其中的过敏反应诱导物多肽或蛋白相应于来自田野黄单胞菌的过敏反应诱导物多肽或蛋白。
15.根据权利要求14的方法，其中的过敏反应诱导物多肽或蛋白具有相应于序列鉴定号9的氨基酸序列。
16.根据权利要求1的方法，其中的植物选自双子叶和单子叶植物。
17.根据权利要求16的方法，其中的植物选自水稻、小麦、大麦、黑麦、棉花、向日葵、花生、玉米、土豆、甘薯、蚕豆、豌豆、菊苣、莴苣、苣荬菜、卷心菜、花椰菜、硬花球花椰菜、萝卜、小萝卜、菠菜、洋葱、大蒜、茄子、胡椒、芹菜、胡萝卜、西葫芦、南瓜、夏南瓜、黄瓜、苹果、梨、甜瓜、草莓、葡萄、悬钩子、菠萝、黄豆、烟草、西红柿、高粱及甘蔗。
18.根据权利要求16的方法，其中的植物选自拟南芥菜(Arabidopsisthaliana)、非洲紫苣苔属(Saintpaulia)、矮牵牛属、天竺葵属、一品红属、菊属、石竹属、以及百日菊属。
19.根据权利要求1的方法，其中的植物抵抗的病原体选自病毒、细菌、真菌及其组合。
20.根据权利要求1的方法，其中所述的应用通过喷撒、注射或在邻近所述的应用发生时的时间擦伤叶片而实现。
21.根据权利要求1的方法，其中的过敏反应诱导物多肽或蛋白作为进一步包括载体的组合物应用于植物。
22.根据权利要求21的方法，其中的载体选自水和水溶液。
23.根据权利要求21的方法，其中的组合物含有大于500nM的过敏反应诱导物多肽或蛋白。
24.根据权利要求21的方法，其中的组合物进一步含有选自肥料、杀虫剂、杀真菌剂及其组合物的添加剂。
25.根据权利要求1的方法，其中的过敏反应诱导物多肽或蛋白是。以分离的形式。
26.根据权利要求1的方法，其中的过敏反应诱导物多肽或蛋白作为不导致疾病并以编码过敏反应诱导物多肽或蛋白的基因转化的细菌而施用。
27.根据权利要求1的方法，其中的过敏反应诱导物多肽或蛋白作为细菌而应用，该细菌在有些植物种类中导致疾病，但在那些欲进行所述的施用的种类中不导致疾病，并且含有编码过敏反应诱导物多肽或蛋白的基因。
28.根据权利要求1的方法，其中所述的应用导致多肽或蛋白浸入植物中。
29.病原体抗性植物，其细胞与非感染性过敏反应诱导物多肽或蛋白接触。
30.根据权利要求29的病原体抗性植物，其中的过敏反应诱导物多肽或蛋白相应于来自选自解淀粉欧文氏杆菌，菊欧文氏杆菌，丁香假单胞菌，茄假单胞菌，田野黄单胞菌，及其混合物的病原体的过敏反应诱导物多肽或蛋白。
31.根据权利要求30的病原体抗性植物，其中的过敏反应诱导物多肽或蛋白相应于来自菊欧文氏杆菌的过敏反应诱导物多肽或蛋白。
32.根据权利要求31的病原体抗性植物，其中的过敏反应诱导物多肽或蛋白具有相应于序列鉴定号1的氨基酸序列。
33.根据权利要求30的病原体抗性植物，其中的过敏反应诱导物多肽或蛋白相应于来自解淀粉欧文氏杆菌的过敏反应诱导物多肽或蛋白。
34.根据权利要求33的病原体抗性植物，其中的过敏反应诱导物多肽或蛋白具有相应于序列鉴定号3的氨基酸序列。
35.根据权利要求30的病原体抗性植物，其中的过敏反应诱导物多肽或蛋白相应于来自丁香假单胞菌的过敏反应诱导物多肽或蛋白。
36.根据权利要求35的病原体抗性植物，其中的过敏反应诱导物多肽或蛋白具有相应于序列鉴定号5的氨基酸序列。
37.根据权利要求30的病原体抗性植物，其中的过敏反应诱导物多肽或蛋白相应于来自茄假单胞菌的过敏反应诱导物多肽或蛋白。
38.根据权利要求37的病原体抗性植物，其中的过敏反应诱导物多肽或蛋白具有相应于序列鉴定号7的氨基酸序列。
39.根据权利要求30的病原体抗性植物，其中的过敏反应诱导物多肽或蛋白相应于来自田野黄单胞菌的过敏反应诱导物多肽或蛋白。
40.根据权利要求39的病原体抗性植物，其中的过敏反应诱导物多肽或蛋白具有相应于序列鉴定号9的氨基酸序列。
41.根据权利要求29的病原体抗性植物，其中的植物选自单子叶和双子叶植物。
42.根据权利要求41的病原体抗性植物，其中的植物选自水稻、小麦、大麦、黑麦、棉花、向日葵、花生、土豆、甘薯、蚕豆、豌豆、菊苣、莴苣、苣荬菜、卷心菜、花椰菜、硬花球花椰菜、萝卜、小萝卜、菠菜、洋葱、大蒜、茄子、胡椒、芹菜、胡萝卜、西葫芦、南瓜、夏南瓜、黄瓜、苹果、梨、甜瓜、草莓、葡萄、悬钩子、菠萝、黄豆、烟草、西红柿、高粱及甘蔗。
43.根据权利要求41的病原体抗性植物，其中的植物选自拟南芥菜(Arabidopsis thaliana)、非洲紫苣苔属(Saintpaulia)、矮牵牛属、天竺葵属、一品红属、菊属、石竹属、以及百日菊属。
44.根据权利要求30的病原体抗性植物，其中的植物对其具有抗性的病原体选自病毒、细菌、真菌及其组合。
45.根据权利要求29病原体抗性植物，其中的过敏反应诱导物多肽或蛋白为分离的形式。
46.根据权利要求29的病原体抗性植物，其中的植物细胞与不导致疾病并以编码过敏反应诱导物多肽或蛋白的基因转化的细菌接触。
47.根据权利要求29的病原体抗性植物，其中的植物细胞与细菌接触，该细菌在此植物中不导致疾病，但的确在其它植物种类中导致疾病，并含有编码过敏反应诱导物多肽或蛋白的基因。
48.根据权利要求29的病原体抗性植物，其中的植物以多肽或蛋白渗入。
49.一种用于赋予植物病原体抗性的组合物，包括非感染性的过敏反应诱导物多肽或蛋白以及载体。
50.根据权利要求49的组合物，其中的过敏反应诱导物多肽或蛋白相应于来自选自解淀粉欧文氏杆菌，菊欧文氏杆菌，丁香假单胞菌，茄假单胞菌，田野黄单胞菌，以及其混合物的病原体的过敏反应诱导物多肽或蛋白。
51.根据权利要求50的组合物，其中的过敏反应诱导物多肽或蛋白相应于来自菊欧文氏杆菌的过敏反应诱导物多肽或蛋白。
52.根据权利要求50的组合物，其中的过敏反应诱导物多肽或蛋白相应于来自解淀粉欧文氏杆菌的过敏反应诱导物多肽或蛋白。
53.根据权利要求50的组合物，其中的过敏反应诱导物多肽或蛋白相应于来自丁香假单胞菌的过敏反应诱导物多肽或蛋白。
54.根据权利要求50的组合物，其中的过敏反应诱导物多肽或蛋白相应于来自茄假单胞菌的过敏反应诱导物多肽或蛋白。
55.根据权利要求50的组合物，其中的过敏反应诱导物多肽或蛋白相应于来自田野黄单胞菌的过敏反应诱导物多肽或蛋白。
56.根据权利要求49的组合物，其中的载体选自水和水溶液。
57.根据权利要求49的组合物，其中的组合物含有大于500nM的过敏反应诱导物多肽或蛋白。
58.根据权利要求49的组合物，其中的组合物进一步含有选自肥料、杀虫剂、杀真菌剂及其混合物的添加剂。
59.根据权利要求49的组合物，其中的过敏反应诱导物多肽或蛋白为分离的形式。
60.根据权利要求49的组合物，其中的过敏反应诱导物多肽或蛋白由组合物中的细菌产生或能由其产生，所述的细菌不导致疾病并以编码过敏反应诱导物多肽或蛋白的基因转化。
61.根据权利要求49的组合物，其中的过敏反应多肽或蛋白由能够在植物中导致疾病并含有编码过敏反应诱导物多肽或蛋白的基因的细菌产生或能够由此产生。
全文摘要
本发明涉及赋予植物病原体抗性的方法。其包括在多肽或蛋白接触植物细胞的条件下给植物施用非感染形式的过敏反应诱导物多肽或蛋白质。本发明也涉及病原体抗性植物和用于赋予植物病原体抗性的组合物。
文档编号C12R1/38GK1192647SQ96196146
公开日1998年9月9日 申请日期1996年6月5日 优先权日1995年6月7日
发明者魏钟民, S·V·比尔 申请人:康乃尔研究基金会有限公司