调制激素或其受体活性的肽、抗体、疫苗及其用途的制作方法

专利名称：调制激素或其受体活性的肽、抗体、疫苗及其用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及肽、对所述肽特异性的免疫反应分子(IRM)、加入所述肽或IRM的药用组合物，包括疫苗，并涉及这些在动物中的用途。
背景在过去的三十年，除了遗传选择和日粮操纵外，已经寻找可供选择的方法来提高/调节动物生产的效率；例如增重、提高食物的利用效率、产奶量、羊毛产量、存活率和体躯成分。实现获得这类结果的技术是基于外源激素的给予和/或转基因动物的产生。
动物保护的问题和增加的消费者以及政府对外源激素处理和转基因技术使用的反感已导致研究者探索可供选择的提高动物产生效率的“无药物”方法。在过去的十年中，已将注意力集中在利用对操纵内分泌系统的免疫反应的可能性。
在抗体介导的促进或抑制生长、体躯成分、食欲和生殖生理学的科学文献中已有报道的例子。这些包括黄体生成素(LH)、促甲状腺素(TSH；Melmed等，1980)、抑制素(Scanlon等，1993)、生长激素(Pell和James,1995)、胰岛素样生长因子(Pell和Aston,1995)、催乳素(Lindstedt,1994)、生长激素释放因子(Moore等，1992)、后叶加压素(Kamoi等，1977)、促生长素抑制素(Westbrook等，1993)、胃泌素(Dockray和Taylor,1976)、缩胆囊素(CCK；Pekas和Trout,1993)、睾甾酮(Thomson等，1985)、孕酮(Kaushansky等，1977)、前列腺素F2α(PGF2α；Crowe等，1995)和促肾上腺皮质激素(ACTH；Wynn等，1995)。
尝试诱出对“自身”激素的免疫反应的原因是多种多样的。这包括提高家畜产量的努力；通过提高肉品质量、减少背脂、增进食欲、提高增重、提高产奶量、改变奶成分以及操纵增殖力。另外还有兴趣减少与农场经营有关的劳动需求、克服疾病和获得更多的内分泌和自分泌相互作用的认识。
在所有以上列出的肽、蛋白和类固醇抗原中，只有两种基于内源激素的免疫操纵的商用制剂似乎是可用的。它们是Fecundin_和Vaxtrate_，前者为一种雄甾烯二酮抗原，导致生殖力的提高(Scaramuzzi等，1977)，后者为一种LHRH抗原，诱导LHRH的免疫中和作用并导致在牛的卵巢和睾丸中抑制类固醇生成(Hoskinson等，1990)。
发明概述在逐渐通向本发明的工作中，本发明人生产了一些基于天然激素的肽或天然激素的受体，并将这些给予动物。与佐剂一起给予的所述肽在动物中产生一些显著的经济效果，诸如提高增重、提高产奶量、提高羊毛产量、肉品质量、食物利用效率等。
因此，本发明提供一系列肽，它们具有不同氨基酸序列，能诱出特异性抗体，所述特异性抗体在动物中改变一系列生理功能。这些生理功能包括消化、营养吸收和吸收底物的代谢，导致免疫动物的生产能力的提高。特别值得注意的是，胃肠道的改变导致消化的增强以及与此相关的益处。
在第一方面，本发明提供一种非天然产生的肽，它具有得自或类似于天然的动物激素、载体蛋白、结合蛋白或所述激素受体的氨基酸序列，其中所述的肽在体内能诱出一种或多种能调制所述激素或受体活性的抗体。
术语“非天然产生的”指该肽与通过坦然蛋白合成产生的肽不同，而是由人工产生的肽。可通过标准的肽合成技术、或通过重组DNA技术等生产肽。
术语“肽”指形成至少部分氨基酸的任何分子，其中所述氨基酸通过肽键连接。所述肽可能仅由几个氨基酸组成或可能是多肽。因此，该术语也包括蛋白和微蛋白。构成所述肽的氨基酸可以是天然产生的肽或合成的氨基酸。所述的肽可基本上是氨基酸序列，也可包括诸如碳水化合物或脂肪酸的非氨基酸成分，或包括非天然氨基酸样结构。
以上用的术语“得自或类似的氨基酸序列”指可能是基于天然序列或类似于天然序列的氨基酸序列的事实。术语“得自”并不表示该肽的实际来源(因为它可能是合成或重组来源)，而是表示肽与所述天然激素或受体至少部分同源。该肽当然是与该天然的激素或受体不同，在于它可以包括其一个片段、或其两个或更多的非邻近片段。它也可以包括不存在于天然激素或受体中的其它氨基酸。
术语“天然的动物激素、载体蛋白、结合蛋白或所述激素的受体”指在动物中产生的激素、载体蛋白、结合蛋白或受体。这可以是任何类型的动物，但优选脊椎动物，更优选哺乳动物。
术语“能诱出一种或多种抗体”指所述肽诱出或刺激似乎主要是抗体介导的免疫应答的能力。也可以有涉及某些细胞介导的免疫。该肽可能本身不能刺激免疫应答，特别是在可能需要存在于载体分子上的小肽的情况下。尽管如此，这种肽仍然落在“能诱出一种或多种抗体”的定义中。
术语“在体内能调制所述的激素或受体的活性”指该抗体在活动物中改变、调节或变化激素或其受体的活性的能力。这种改变、调节或变化通常将以下调或抑制激素或受体的形式，虽然也设想诸如激素或受体活性增加的其它作用。
该肽最好没有生物学活性。虽然它是基于天然激素或受体，但该肽最好没有那种激素或受体的生物活性。
该肽可以基于任何参与调节生理功能的激素或受体。
最好是，该肽能诱出对以下激素或激素受体的活性促生长素抑制素、胰高血糖素、胃泌素、缩胆囊素、促生长素抑制素受体、胰岛素样生长因子结合蛋白(IGFBP)。在一个实施方案中，该肽诱出对以下激素的抗体生殖道激素，特别是黄体生成素释放激素(LHRH)；肾上腺激素，如促肾上腺皮质激素(ACTH)；或胃的激素，如胃泌素和缩胆囊素。
本发明人已产生了一些基于部分的促生长素抑制素(Patel,1992)、促生长素抑制素受体(SSTR)(Resme & Bell,l995)和胰岛素样生长因子结合蛋白1至4(IGFBP)(Cohick & Clemmons,1993)的肽。
在一个特别优选的方面，本发明提供一种氨基酸序列基于促生长素抑制素的非天然产生的肽(SRIF)。该推荐的序列产生优先将SSTR2、SSTR3和SSTR5作为靶的抗体，这与促生长素抑制素相反，后者产生与包括SSTR1至6的受体结合的抗体。
本发明的肽在动物中能增加循环的胰岛素、IGF-Ⅰ和IGF-Ⅱ的水平，并且增加合成代谢的水平、减少胃的活性、和/或促进消化。
更特别的是，本发明提供具有由单字母氨基酸密码代表的以下序列的肽LCFWKTC(SEQ ID NO:1)该肽结合促生长素抑制素受体的SSTR2、SSTR3和SSTR5，并产生显示出对它们有亲和力的抗体。对观察到的优点不希望被任何提出的机制所束缚，但它显示序列F-W-K-T是阻断SSTR2、SSTR3和SSTR5的关键。
本发明也涉及SEQ ID NO:1的衍生物或变体，其中该抗原暴露环的大小和形状是可能的最小直径。
SEQ ID NO:1在无菌生理盐水中是相对可溶的肽。
最好是，该肽以环化序列存在，如
(SEQ ID NO:2)或
(SEQ ID NO:3)包含核心序列FWKT的该肽也可以通过包括形成二硫键的半胱氨酸残基以外的方式环化。本发明环状肽的一种特别优选的形式是其中连接基团或序列尽可能短的肽，并且该结构的构型是允许包含FWKT的分子的部分与促生长素抑制素受体结合的构型。在一个更特别优选的实施方案中，在该环状肽中，对应于FWKT序列的空间构型是它占据最小的空间。理想的是，在由序列FWKT形成的环状肽中的弧尽可能的小，并且互补其靶受体。
特别推荐的是刺激对SSTR2、SSTR3和SSTR5具备亲和力的抗体产生的环状肽。
该肽也可以线性肽单独存在，如F-W-K-T-S-G-G(SEQ ID NO:4)或以二聚体存在，如F-W-K-T-S-T-K-T-S-T-K-W-F(SEQ ID NO:5)而在再一个实施方案中，本发明提供免疫原性蛋白或分子，该蛋白或分子包含产生对SSTR2、SSTR3和SSTR5具备特殊亲和力的抗体的序列。该蛋白或分子可以是任何类型，只要刺激抗体与受体结合即可。
在另一个推荐的方面，本发明提供一种非天然产生的肽，其氨基酸序列与天然动物激素受体至少部分同源，其中所述的肽在体内能诱出一种或多种能调制所述受体活性的抗体。
在一个特别推荐的方面，本发明提供一种非天然产生的肽，其氨基酸序列与促生长素抑制素受体(SSTR)的氨基酸序列至少部分同源。这类肽具有提高选自以下的至少一种生物学活性的能力增重；初生重；生长速率；产奶量；循环胰岛素、IGF-Ⅰ和IGF-Ⅱ的水平；纤维产量；产奶量和肌肉重量。
更特别优选的是这样一种肽，其氨基酸序列与SSTR氨基酸残基1-11、30-57和/或第六与第七跨膜域同源。已报道所述跨膜域发生在残基274-305。对于所有的脊椎动物物种，SSTR的该氨基酸位置对应于SSTR的NH3+末端。最好是基于来自人、猪、牛、小鼠和大鼠的SSTR的肽。所述肽可以基于来自诸如绵羊、山羊、骆驼、马驼、羊驼、鸡、鸭、火鸡、鸵鸟、鸸鹋和鱼的其它物种。
更特别的是，本发明提供具有以下由单字母氨基酸密码代表的序列的肽和其衍生物以及变体SEQ 肽 基于 残基号ID NO6 MFPNGTASSPS 人 SSTR1 1-117 QNGTLSEGQGS 人 SSTR1 47-578 AEQDDATV人 SSTR1 297-3059 MFPNGTASSPS 小鼠 SSTR1 1-1110QNGTLSEGQGS 小鼠 SSTR1 47-5711AEQDDATV小鼠 SSTR1 297-30512MFPNGTAPSPT 大鼠 SSTR1 1-1113QNGTLSEGQGS 大鼠 SSTR1 47-5714AEQDDATV大鼠 SSTR1 297-30515MDMADEPL人 SSTR2 1-816QTEPYYDLTSN 人 SSTR2 32-4217AISPTPAL人 SSTR2 282-29018MDLVSEL 牛 SSTR2 1-719QTEPYYDLASN 牛 SSTR2 31-4120AISPTPAL牛 SSTR2 281-28921MDMAYELL猪 SSTR2 1-822QTEPYYDLTSN 猪 SSTR2 32-4223AISPTPAL猪 SSTR2 282-29024MEMSSEQL小鼠 SSTR2 1-825QTEPYYDMTSN 小鼠 SSTR2 31-4126AISPTPAL小鼠 SSTR2 282-29027MELTSEQF大鼠 SSTR2 1-828QTEPYYDMTSN 大鼠 SSTR2 30-4029AISPTPAL大鼠 SSTR2 283-29130MDMLHPS 人 SSTR31-71-731AGPSPAGLAVS 人 SSTR3 31-4132PLPEEPAF人 SSTR3 283-29133MATVTYPS小鼠 SSTR3 1-834AGTSLAGLAVS 小鼠 SSTR3 32-4235PLPEEPAF小鼠 SSTR3 284-29236MAAVTYPS大鼠 SSTR3 1-837AGTSLAGLAVS 大鼠 SSTR3 32-4238PLPEEPAF大鼠 SSTR3 284-29239MSAPSTLPP 人 SSTR4 1-940GPGDARAAGMV 人 SSTR4 31-4141TSLDATV 人 SSTR4 282-29042MNTPATLPL 大鼠 SSTR4 1-943SDGTGTAGMV 大鼠 SSTR4 31-4144TSLDATV 大鼠 SSTR4 282-29045MEPLFPA 人 SSTR5 1-746VGPAPSAGAR 人 SSTR5 30-4047ALPQEPAS人 SSTR5 282-29048MEPLSLA 大鼠 SSTR5 1-749VGSASPMGAR 大鼠 SSTR5 33-4350TLPEEPTS大鼠 SSTR5 283-291术语其“衍生物和变体”指基本相同或相似的抗原活性、具有不同氨基酸序列的肽。这类衍生物或变体与以上所列的优选序列相比，可以具有氨基酸置换、插入或缺失。典型的置换是那些按照以下表1制备的置换。
表1用于氨基酸置换的适合残基原始残基 典型的置换AlaSerArgLysAsnGln；HisAspGluCysSerGlnAsnGluAlaGlyProHisAsn；GlnIleLeu；ValLeuIle；ValLysArg；Gln；GluMetLeu；IlePheMet；Leu；TyrSerThrThrSerTrpTyrTyrTrp；PheValIle；Leu当通过氨基酸置换衍生所述肽时，所述氨基酸通常被其它具有类似特性(如疏水性、亲水性、电负性、大侧链等)的氨基酸取代。氨基酸置换通常是单个残基的置换。氨基酸插入通常是按照大约1-10氨基酸残基的顺序，而缺失的范围是大约1-20残基。最好是，以邻近对制作缺失或插入，即两个残基的缺失或两个残基的插入。
例如，通过用相似氨基酸或氨基酸样结构置换某些关键氨基酸，可变化成环化或环状形式的本发明的肽。一个特别推荐的序列是NMe-Y-D-T-K-V-F-C-S(SEQ ID NO:51)虽然该序列在无菌的生理盐水溶液中是非常难溶的。
在怀孕的最后三个月内，用这种分子接种的母畜哺乳的小猪从出生至断奶比对应的非免疫哺乳障碍的小猪生长平均快40％。
可以以单独的活性药剂给予本发明的肽和免疫活性分子，或与一种或多种其它药剂一起给予。例如，SEQ ID NO:1可与胃泌素和/或缩胆囊素、连同一种合适的载体一起给予。
在一个实施方案中，诸如SEQ ID NO:2至5的这种序列可以以单独的肽或以包含特异性导向其它激素(如胃的激素)的序列的一种肽分子共同存在。这种序列的一个例子是A-Y-M-G-W-S-C-T-K-W-F(SEQ ID NO:52)当将该抗原以推荐的传递载体(油)注射到生长的羔羊3次时，在84天龄时可检测到抗-SRIF和抗-缩胆囊素抗体。到此时，免疫羊羔已经比未免疫羊羔生长平均多20％。
也可以导向生殖激素，与本发明推荐的肽一起给予的一个序列的例子是F-W-K-T-S-K-H-W-S-Y-G-L-R-D-G-C(SEQ ID NO:53)用这种肽免疫3次的公猪从12周龄至24周龄比未免疫猪生长平均快12周，并且免疫猪的睾丸大小是那些未免疫动物的睾丸大小的大约50％。
在一个特别优选的方面，本发明提供一种非天然产生的肽，其氨基酸序列与胰岛素样生长因子结合蛋白(IGFBP)至少部分同源。这种肽能调制碳水化合物代谢并因此促进动物的生长。所述肽在糖尿病的预防或治疗中也可能有用。
更特别优选的是一种肽，该肽在其序列中包括天然IGFBP结合胰岛素样生长因子的部分，最好是至少天然IGFBP的残基1-10或1-13的某些区域。所述氨基酸残基相应于IGFBP的NH3+端。最好是该肽基于来自人、猪、牛、小鼠或大鼠的IGFBP。该肽也可以基于来自其它物种的IGFBP，如绵羊、山羊、骆驼、马驼、羊驼、鸡、鸭、鹅、火鸡、鸵鸟、鸸鹋和鱼。
而更特别的是本发明提供具有由单字母氨基酸密码代表的以下序列中一个的肽或其衍生物或变体。SEQ ID NO. 肽 基于 残基号54 FRCPPCTERLAA 大鼠IGFBP 11-1255 EVLFRCPPCTPE 大鼠IGFBP2 1-1256 GAGAVGAPVV 大鼠IGFBP3 1-1257 DEAIHCPPCSEE 大鼠IGFBP4 1-12本发明的肽在本文中可以称为例如“基于SSTR的肽或基于IGFBP的肽”。肽可以基于一种或多种激素、载体蛋白或激素受体。
此处考虑的肽可以是例如通过固相肽合成化学合成的，或可以通过将所述天然肽经受水解或其它化学分裂方法以产生所述分子的片段。或者，所述肽可以通过体内或体外重组DNA合成制备。在这种情况下，所述肽可能需要与其它蛋白一起合成，然后通过化学或酶切割进行后续分离，或可以多个重复单位合成所述肽或多价肽。产生题述肽的特定方法的选择将取决于诸如需要的类型、肽的质量和纯度以及生产的容易和方便程度等因素。
优选本发明的肽是至少部分纯化的。更优选该肽为大体上纯化的形式。
第二方面，本发明提供一种对本发明的第一方面的肽特异性的免疫学活性分子(IRM)。
术语“免疫学活性分子”指能与例如抗原的另一分子或当存在载体上时能作为抗原起作用的肽结合的分子。免疫学活性分子通常是抗体，包括天然产生的抗体、重组抗体、scantibody、包括抗体的融合物或嵌合物的合成抗体以及任何前述抗体的功能片段，例如Fab和F(ab’)2。当抗体IRM是重组形式时，该分子可以由天然产生的或合成的核苷酸序列编码并在任何方便的表达系统中表达。当该分子是合成的，可通过分步加入单个氨基酸组或抗体的氨基酸片段的方便地制备。至于后者，该合成的抗体可以是包含得自其它抗体的轻链或重链的融合抗体或嵌合抗体。
本发明的抗体和其它IRM可以是任何动物来源的，包括来自哺乳动物如人、家畜、同伴动物(compamon animals)、野生动物和实验室实验动物(如小鼠、大鼠、兔和几内亚猪)。“动物”抗体也可延伸至来自如鸟类的非哺乳动物物种的抗体，所述鸟类例如为鸡和其它家禽、鸸鹋和鸵鸟。
所述肽或IRM的结合可以发生在靶激素受体位点(通常通过生物学活性抗原序列的使用)、或结合在邻近靶受体位点的细胞膜区域，在这种情况下该抗原片段无生物学活性。
第三方面，本发明提供偶联于一个适合载体以致形成肽/载体复合物的本发明第一方面的肽。
该肽/载体复合物是特别有利的，该肽相对较小(分子量不到10,000)并且当单独给予时无特别的免疫原性。
合适的载体通常是能与所述肽偶联的大分子。为了诱出免疫应答，所述肽通常需要与载体蛋白偶联，以使该抗原具有显著的“外来”性，并且以增加该抗原的分子量。通常，似乎载体蛋白对疫苗受者的外源性或免疫原性越强，则抗体应答似乎越大(Meloen,1995)。通常将大蛋白分子，特别是匙孔_血蓝蛋白、牛血清白蛋白、细菌毒素、卵清蛋白和甲状腺球蛋白(见Meloen,1995)用于与小分子量抗原缀合；然而，最好的是多重抗原提呈(MAP)系统，例如聚-L-赖氨酸。
第四方面，本发明提供药用组合物，它包含免疫原性有效量的本发明第一方面的肽或足以赋予被动免疫量的本发明第二方面的IRM以及药学上或兽医上可接受的载体或赋形剂，并且可选择地包含佐剂。
在以下的描述中，本发明的肽称为“活性成分”。
预期该药用组合物的活性成分当根据特定情况的量给予时，在刺激、增强或者促进动物中体液免疫应答方面显示极好的活性。例如，可以以每天、每周或每月一次或多次或以其它合适的时间间隔给予每公斤体重每目大约0.5μg至大约20mg可以考虑的蛋白，或可以由病情的紧急性显示的按比例减少剂量。该活性化合物可以通过以方便的方式注射给与、或病毒载体或细菌载体中的遗传序列给予。
该活性成分也可以以在无菌生理盐水、甘油、液体聚乙二醇和/或其混合物中、以及在油中制备的分散体给予。在通常的贮存和使用条件下，这些制剂含防腐剂以防止微生物生长。
适合体内给予的药用形式包括无菌水溶液(当可溶于水时)或分散体，以及为用于无菌注射液或分散体的临时制剂的无菌粉末。在所有情况下，所述剂型必须是无菌的并且必须是存在容易注射性能的流体。它在生产和贮存的条件下必须是稳定的，并且必须防止诸如细菌和真菌等微生物的污染作用。所述载体可以是溶剂或含例如水、乙醇、多元醇(例如甘油、丙二醇和液体聚乙二醇等)的分散介质、其合适的混合物以及植物油。例如通过使用诸如卵磷脂的包衣、通过在分散体情况下维持所需颗粒大小以及通过使用表面活性剂，可以维持适当的流动性。通过各种抗菌剂和抗真菌剂，例如对羟基苯甲酸酯类、氯丁醇、苯酚、山梨酸、硫柳汞(thormerosal)等可以产生防止微生物的作用。在许多情况下，最好包括等渗剂，例如蔗糖或氯化钠；或胶凝剂，例如环糊精、明胶、海藻等。例如通过以药物延迟吸收组合物使用，可以达到延长注射组合物的吸收作用。
通过在合适的溶剂加入需要量的活性成分与所需的以上列举的各种其它成分制备无菌注射液，接着进行过滤除菌。通常，通过将各种灭菌的活性成分加入含基本分散介质和以上列举的所需其它成分的无菌溶媒中制备分散体。在用于制备无菌注射液的无菌粉末的情况中，优选的制备方法是真空干燥和冻干技术，它产生活性成分加上来自其预先无菌过滤的溶液的任何另外需要成分的粉末。
此处用的“药学上或兽医上可接受的载体和/或稀释剂”包括任何和所有的溶剂、分散介质、水溶液、包衣、抗菌剂和抗真菌剂、等渗剂和延迟吸收剂等。用于药学上或兽医上活性物质的这类介质和药剂的用法是本领域公知的。除了在任何常规的介质或药剂都与该活性成分不相容的情况下，设想了其在组合物的使用。也可以在组合物中加入辅助的活性成分。
优选所述药用组合物含与载体偶联的所述蛋白。更优选该药用组合物为疫苗制剂形式。
许多物质都可用于运送本发明的肽或分子。用生理盐水、弗氏完全佐剂(FCA)、胞壁酰二肽(MDP)、弗氏不完全佐剂(FIA和MDP)、DEAE-葡聚糖和Quill A中的SRIF免疫后，已产生了高水平的抗SRIF的循环体液抗体。
本发明也提供本发明肽的新的传递载体，它包含一种得自深海鲨鱼的油。因此，在第五方面，本发明提供一种兽医上或药学上可接受的载体，包含具有免疫佐剂活性的鲨鱼油。
所希望的该油是在肺、呼吸道、胃肠道或泌尿生殖道等的上皮表面刺激抗体产生的类型。在一个特别推荐的实施方案中，该油在乳腺粘膜中增强抗体分泌，因此产生免疫活性的初乳或奶。
该油通常包含以下成分烃类 0-2％蜡酯 0-2％游离脂肪酸 2％以下极性脂质 10-15％二酰甘油醚 30-50％三酰甘油 40-70％接近80％的存在的脂肪酸为单不饱和形式。典型的油的脂肪酸的碳链长度和比例如下典型分析C141％-2％C15＞1％C1618％-20％C171％-4％C1842％-65％C190.1％-2％C205％-15％C21＞1％C220.1％-18％C230C240％-5％该油最好富含烷氧基甘油，因为它包含通式为CH2OH.CHOH.CH2OR的三酰甘油，其中R是长链基，首先并优选C16和C18。
在该一般结构中，特别推荐以下的甘油醚20-70％十八碳-9-烯基·甘油基醚3-25％ 十六烷基·甘油基醚1-15％ 十六碳-7-烯基·甘油基醚15-20％十八烷基·甘油基醚1-15％ 二十碳-9-烯基·甘油基醚以下是最好加入该油的成分1-25％ 卵磷脂1-25％ DLα-生育酚醋酸酯0-3％ 1,2,5-二羟基胆钙化醇0-5％ 维生素A0-40％非矿物油(一般具有三酰甘油结构)第六方面，本发明提供产生致免疫组合物的方法，包含将能诱出免疫应答的肽与油接触并且使所述的肽和油产生适于给予形式的步骤，其中所述的油含30-50％的二酰甘油醚。最好是，该醚包括20-70％十八碳-9-烯基·甘油基醚3-25％ 1-十六烷基·甘油基醚1-15％ 十六碳-7-烯基·甘油基醚15-20％十八烷基·甘油基醚1-15％ 二十碳-9-烯基·甘油基醚1-25％ 卵磷脂1-25％ DLα-生育酚醋酸酯0-3％ 1,2,5-二羟基胆钙化醇0-5％ 维生素A0-40％ 非矿物油在一个特别推荐的实施方案中，该致免疫组合物包含用该油乳化的一号肽(“FEEDMIZA”)。
术语“致免疫组合物”指能诱出免疫应答的药用或兽医用组合物。这包括疫苗等。可以将该组合物配制为各种给药的形式，如注射(腹膜内、皮下、肌内或乳房内)、口服、鼻喷雾、皮肤贴剂等。
术语“能诱出免疫应答的肽”指在该组合物中自身为免疫原性的或一旦给予能诱导免疫应答的任何肽。最好是在组合物中使用本发明第一方面的肽，但诸如细菌和病毒抗原的其它肽也可考虑。
那些本领域的技术人员熟悉可以用来产生免疫原性组合物的方法。该组合物可以包括诸如其它活性成分、药物或需要的佐剂的其它组分。
第七方面，本发明提供将能诱出免疫应答的肽输送到动物的方法，包含给予所述的肽与含下列成分的有效量的油20-70％ 十八碳-9-烯基·甘油基醚3-25％ 1-十六烷基·甘油基醚1-15％ 十六碳-7-烯基·甘油基醚1.5-20％十八烷基·甘油基醚1-15％ 二十碳-9-烯基·甘油基醚1-25％ 卵磷脂1-25％ DLα-生育酚醋酸酯0-3％ 1,2,5-二羟基胆钙化醇0-5％ 维生素A0-40％ 非矿物油该肽最好用有效量的所述油乳化。
术语“有效量的油”指使该肽能诱出免疫应答、特别是当该肽本身不是免疫原性的或仅诱导低水平的免疫时的有效油量。这个量通常为组合物总体积的大约50至80％，优选总体积的60-70％，更优选组合物总体积的大约66至67％。
第八方面，本发明提供在动物中调制一种或多种激素应答的方法，包含给予所述动物激素调制有效量的本发明第一方面的肽或本发明第二方面的IRM的步骤。
所述激素应答包括内分泌和/或旁分泌应答。
术语“调制一种或多种激素应答”指在涉及的动物中改变、调节或变化激素应答。
该动物可以是任何动物，优选是脊椎动物，更优选哺乳动物。术语动物包括人、反刍动物、鸟类和爬行动物。最好该动物是诸如猪、山羊、骆驼、绵羊、羊驼、马驼、鸡、鹅、鸭、火鸡、鸵鸟、鸸鹋、鱼的家畜或生产动物或其它经济上重要的动物。
优选给予的肽是以上讨论的该肽的复合物，优选具有多于一个抗原。更优选该肽以药用制剂的形式给予该动物，再更优选疫苗制剂。
在一个推荐的方面，本发明涉及通过给予本发明的肽或IRM调制对一种或多种的促生长素抑制素、胃泌素、胰岛素、胰高血糖素、催乳素、molitin、缩胆囊素、促胰液素、前列腺素、IGF-Ⅰ、IGF-Ⅱ、生长激素和甲状腺激素的激素应答的方法。
在另一方面，本发明涉及在动物中增强胃肠功能的方法，包含给予所述动物有效量的基于SSTR和/或IGFBP的肽的步骤。
术语“增强胃肠功能”指促进关键代谢底物的消化和吸收。
在另一方面，本发明提供在动物中增加合成代谢和/或体重的方法，包含给予所述动物有效量的基于SSTR和/或IGFBP的肽的步骤。
该肽最好是本发明先前描述的肽。
在另一个推荐的方面，本发明提供在动物中增加循环的胰岛素、IGF-Ⅰ和/或IGF-Ⅲ的方法，包含给予所述动物有效量的基于SSTR和/或IGFBP的肽的步骤。
在另一个推荐的方面，本发明提供在动物中抑制胃酶的方法，包含给予所述动物有效量的基于SSTR的肽的步骤。
优选该肽是本发明先前描述的肽。更优选该肽是基于SSTR的肽。
在另一个推荐的方面，本发明提供在产纤维动物中增加纤维产量并且可选择地进一步改变次级毛囊与初级毛囊的比例的方法，包含给予所述动物有效量的基于SSTR和/或IGFBP的肽的步骤。
该肽最好是本发明先前描述的肽。
术语“产纤维动物”指任何产生诸如毛等有用的纤维的动物，并且包括绵羊、山羊、马驼和羊驼。
在另一个推荐的方面，本发明提供在产奶动物中增加产奶量的方法，包含给予所述动物有效量的基于SSTR和/或IGFBP的肽的步骤。
该肽最好是本发明先前描述的肽。
术语“产奶动物”指任何产生奶为人类消费或为哺乳其幼仔的动物，包括牛、山羊、绵羊、骆驼等。
在另一个推荐的方面，本发明提供在动物中降低c-fos基因的性和/或增加c-jun基因活性的方法，包含给予所述动物有效量的基于SSTR的肽的步骤。
该肽最好是本发明先前描述的肽。
在另一个推荐的方面，本发明提供在动物中改变钙代谢的方法，包含给予所述动物有效量的基于SSTR的肽的步骤。
该肽最好是本发明先前描述的肽。
我们不希望结合理论，但基于SSTR的肽的给予似乎影响c-fos和c-jun基因的活性并因此影向钙代谢。这导致改变肌肉功能。例如，用该肽处理的动物在肌肉组织中显示出保存水能力的提高。提高约为20％。
在一个相关的方面，本发明提供在动物中刺激对激素、载体蛋白、结合蛋白或激素受体的免疫应答的方法，其中所述的免疫应答调制激素活性，所述方法包含给予所述动物免疫应答诱导有效量的本发明第一方面的肽的步骤。
在另一个相关的方面，本发明提供在动物中刺激对激素、载体蛋白、结合蛋白或激素受体的抗体应答的方法，其中所述的应答调制激素或受体的活性，并且其中所述抗体应答导致抗体被分泌到该动物的粘膜上和/或分泌到所述动物的奶中，所述方法包含给予所述动物抗体刺激有效量的本发明的肽的步骤。
抗体分泌到的粘膜最好是肺、乳房、胃肠道或泌尿生殖道的粘膜。
在又一方面，本发明提供一种试剂盒，它包含本发明的新的肽或分子，还可选择地包含本发明的免疫佐剂油。本发明的详细描述现在将参考以下非限制性附图和实施例来描述本发明。


图1是显示具有肽抗原的7个分支赖氨酸的多抗原肽(MAP)的图解表示。
图2是显示具有36个肽抗原的16个分支赖氨酸的MAP的图解表示。
图3是实施例6中在怀孕和哺乳期的猪的体重的图解。
图4是实施例6中小猪体重的图解。
图5是实施例9中奶牛的产奶量的图解。
图6是实施例10中鸡的体重的图解。
图7是实施例11中猪的体重的图解。
图8是实施例14中鸡的体重的图解。
图9是实施例15中公猪的体重的图解。
图10是实施例15中母猪的体重的图解。
图11是实施例16中猪的体重的图解。
图12是实施例17中母猪的净增重、总增重的图解。
图13是实施例17中母猪的体重的图解。
图14是实施例18中小猪的体重的图解。
图15是实施例19中孪生羊羔的体重的图解。
图16是实施例19中母羊产奶量的图解。
图17是实施例20中奶牛的体重的图解。
图18是实施例20中牛犊体重的图解。
实施例1所述肽的制备用固相自动化肽合成仪(例如Advanced ChemTech ACT 396型、348型或90型)合成肽。
通过分析型HPLC和氨基酸分析仪测定这些肽的纯度。通过氨基酸组成分析进一步保证本发明肽的质量。然后将所述肽冻干，并贮存在-20℃。实施例2酶联免疫吸附测定开发酶联免疫吸附测定(ELISA)测定在生物学液体；血浆、无脂肪的初乳、奶和胃粘膜中的抗-SSTR或抗-IGFBP抗体。用100μl的含5μgmL-1的SSTR和/或IGFBP抗原和卵清蛋白(Sigma Chemical Co.,StLouis,U.S.A)复合物的磷酸缓中盐溶液(PBS；pH7.4)在4℃包被多孔板16小时。然后将该抗原包被的板用含5％(w/v)脱脂奶(“咖啡伴侣”；Camation,Nestle,Sydney,Australia)的PBS冲洗三次。为防止偶然的非特异性结合，在室温下通过每孔分装100μL的PBS加5％脱脂奶溶液封闭剩余的吸附位点2小时。在“封闭”期终止(2小时)时和以后的步骤中，用含0.1％(v/v)吐温-20的PBS溶液(PBST)洗所述板三次。向每个孔加入100μL等份的稀释样品(1/400 v/v；在PBST中的血浆、无脂肪的初乳或胃粘膜)，并将所述板在室温下再孵育2小时。然后，向每孔加入100μL等份的山羊抗猪IgG-Fc片段或山羊抗猪IgA-Fc片段(在PBST中1/400(v/v)；Nordic Immunological Laboratories,Tilburg，荷兰)并将平板在室温下再孵育2小时。每孔用辣根过氧化物酶缀合的兔抗山羊IgG-H+L片段(Nordic Immunological Laboratories,Tilburg,TheNetherands)在PBS中的100μL的1/400稀释液加5％脱脂奶终止孵育2小时。在加入底物前，最好的洗涤包括用PBST洗2次然后用蒸馏水洗1次。每孔用100μL的底物[1mM 2,2’连氮基-双(乙基苯并噻唑啉磺酸酯)的结晶二胺盐(ABTS；Sigma Chemical Co.,St Louis，美国)和在10mL柠檬酸盐缓冲液(0.1M柠檬酸，用0.5M Na2HPO4调pH至4.2)中的2.5mM H2O2]使所述板显色，30分钟和60分钟后用Titertek MC读板仪在450nm读吸收值。每个样品重复测试2次，并且每个ELISA板均应包括阳性和阴性对照。
以阳性对照样品的光密度(OD)读数对测试血清的OD读数的比值表示在血浆、初乳、奶和消化道粘膜中的抗-SSTR或IGFBP抗体的效价(Steward和Lew,1985；Reynolds等，1990)。将该比值乘以每个样品的稀释系数建立每个产生的同型的相对量。
抗体效价=(测试血清的OD450)×(标准OD450)-1×样品稀释度-1用Hoist等(1992a)提出的scatchard图分析测定抗-SSTR或IGFBP抗体的亲和力。实施例3所述肽复合物的制备推荐将多抗原肽(MAP)系统用于将所述抗原提呈/携带给免疫系统。这种制备相对小分子量肽免疫原的方法克服了常规载体系统(即KLH、BSA甲状腺球蛋白等)的不确定性(ambiguity)。MAP方法产生具有高度均一性的化学定义的肽抗原。结果通过MAP方法制备的免疫原在免疫动物中诱出高的和均一的对该免疫原的抗体应答。这样，在本申请中描述的提呈抗原的MAP方法特别适于诱出均一的和位点特异性的、对需要的抗原的抗体应答。
历史上，MAP系统由一个寡聚分支赖氨酸核心组成，通常包括3至7个赖氨酸、和4或8对树状臂的肽抗原(见图1)。然而，在本申请中使用的MAP系统最好是由产生36至40对树状臂的肽抗原的18至20个分支赖氨酸核心组成(见图2)。由于每个肽臂可以由5-20个氨基酸组成，因此该MAP系统的整体外观是具有高密度表面肽抗原并且分子量超过40,000的大分子。
该MAP系统可用于提呈单独的单个抗原或其任何抗原组合物。
此外，该抗原/载体系统没有显示出明显的生物学活性，即使活性注射。
用固相自动化肽合成仪(例如Advanced ChemTech ACT 396型、348型或90型)合成在本申请中描述的MAP系统。
然后将该MAP/抗原悬浮于(理想的是乳化)非炎性传递载体或免疫刺激物(编码为NSB-050)。以这种形式，通常通过腹膜内注射或皮下注射给予该产品。该产品也可以乳房内注射、肌内注射或通过口服传递。皮下或腹膜内注射后，淋巴系统快速吸收所述乳液，并且提呈给免疫系统。在这一点，在免疫系统的提呈细胞上有各种抗原附着于受体位点，导致产生高效价和亲和力的特异性抗体。实施例4传递载体已鉴定了一种透明油状液体在产生抗体中特别有用，所述抗体是在主动免疫动物的肺、胃肠道和泌尿生殖道的表皮表面、乳房的粘膜上分泌的，并且因此随后在初乳和奶中分泌。而且，当尝试同时诱出对许多不同抗原的免疫应答时，该传递系统(NSB-050)是一种特别有效的免疫刺激剂。
通常，该油具有以下组成二酰甘油醚 30-50％三酰甘油 40-70％极性脂质 10-15％游离脂肪酸 ＞2％烃类 ＞2％蜡酯 ＞2％特别是，该油是以下典型分析的油十八碳-9-烯基·甘油基醚45％(20-70)1-十六烷基·甘油基醚 11％(3-25)十六碳-7-烯基·甘油基醚5％(1-15)十八烷基·甘油基醚 7％(15-20)二十碳-9-烯基·甘油基醚5％(1-15)卵磷脂 13％(1-25)DLα-生育酚醋酸酯 7％(1-25)1,2,5-二羟基胆钙化醇1％(0-3)维生素A 1％(0-5)非矿物油(植物或动物来源)5％(0-40)该传递载体，除了卵磷脂和非矿物油(植物或动物来源)，都是从深海鲨鱼的肝中提取的油，特别是从太平洋睡鲨(Somniosus pacificus)和Plunket鲨鱼(Centroscymnus plunketi)提取的油。在小于或等于125℃和压力小于等于666.6Pa下从这些鲨鱼的肝中回收所述油。
理想的是，最好从这些鲨鱼中新鲜收集肝，因为所述油没有或含最少量的烃和蜡酯。将切下的肝在新鲜海水或自来水中清洗，然后浸解。将该浸解的团块放置在室温(最好是25℃)3小时，然后轻轻倒出该油。通过首先离心，然后用水洗，接着通过用膨润土或类似材料去蛋白作用的步骤进行油的澄清。再洗该油，然后将其贮存在4℃几周以沉淀出任何可冻的材料。然后将透明的上清液轻轻倒出，与卵磷脂乳化剂混合，并与任何需要的油溶性维生素混合形成油性传递载体。将其贮存在适当的容器中并用氮气处理以防止氧化。实施例5疫苗的制备将构建的蛋白分子用超声波搅拌分散到磷酸缓冲盐溶液(pH7.4)中。(如果该抗原在水相中不溶，并且如果将该蛋白在液体中分散成单个分子，这有助于免疫原的实现)。最好将该抗原在盐水(水相)中混合并用油相以2份油对1份水的比例乳化以产生稳定的油包水乳液。理想的是，抗原在水相中的浓缩液是含100μg抗原大分子的3ml剂量的乳液。通常在该剂量中油的量是2ml(大约是疫苗总体积的66.6％)，剩余的1ml是由含磷酸缓冲盐溶液和抗原的水相构成。实施例6疫苗的给予可通过腹膜内或皮下途径注射该疫苗(喜欢的话)，但也可以通过乳房内、肌内或口服途径给予。通常在初次接种后的2周或更长时间给予加强注射(最好为2次)。实施例7给予猪SEQ ID NO:12、14、21、22、36、38、42和44的肽小母猪将30只初产的猪(当地品种×大白猪)与杂种公猪自然交配。在分娩前近10天，将小母猪转移到维持在接近24℃的封闭的小屋中的产小猪箱中，并通过以12小时黑/光周期的荧光灯人工照明。小猪在尝试减少一窝产仔数对产奶量和未成熟小猪随后生长(King等，1993)的影响，将每窝小猪数标准化为8只。实验方法交配前，将小母猪随机分为六组，每组5只，第一组小母猪接受安慰剂注射，而第2、3、4、5和6组分别对SSTR1(12号和14号肽)、SSTR2(21号和22号肽)、SSTR3(26号和38号肽)、SSTR4(42号和44号肽)和SSTR5(48号和50号肽)免疫。在怀孕期，免疫组和非免疫组在交配后约40、65和90天均在颈部皮下注射3ml对应的疫苗(与MAP偶联并在NBS-050中乳化的SSTR1(12号和14号肽)、2(21号和22号肽)、3(26号和38号肽)、4(42号和44号肽)和5(48号和50号肽))。
从交配到分娩，从那时起至分娩后3周出现的断奶，每周测定小母猪/大母猪的体重。分娩后，立即记录小猪的初生重，并且此后以每周间隔测定体重直至断奶，由此至5周龄。
在分娩后第3天通过母畜将8只小猪被动免疫，而将另外8只对照小猪用外科手术修正以确定胃的酸度、入口血流、血浆激素和响应以10μg体重-1小时的速度静脉内输注的五肽胃泌素的MCA。来自每组的另外8只小猪在分娩后第21天作类似的处理。结果对大母猪免疫的作用在注射部位没有明显的损伤或任何可能导致影响免疫组或对照组大母猪的接种方式损害的副作用。体重大母猪如图3所示，那些对SSTR2(21号和22号肽)、SSTR3(36号和38号肽)、SSTR4(42号和44号肽)和SSTR5(48号和50号肽)抗原免疫的小母猪在分娩时明显比对应的对照组大母猪更重并且在接着的哺乳期趋于失去更多的体重。小猪对免疫的或对照的大母猪，小猪的总数(死的或活的)和每窝中生下的雌性和雄的数量没有明显区别。
来自用SSTR2(21号和22号肽)、SSTR3(36号和38号肽)和SSTR5(48号和50号肽)免疫的大母猪的小猪，出生时明显比对应的来自对照组大母猪或用SSTR1(12号和14号肽)和SSTR4(42号和44号肽)免疫的大母猪的小猪重(见表2)。
小猪生长的数据总结在表2和图4。从出生3周后，来自在怀孕期用SSTR1(12号和14号肽)、SSTR2(21号和22号肽)、SSTR3(36号和38号肽)、SSTR4(42号和44号肽)和SSTR5(48号和50号肽)免疫的大母猪的小猪比对应的来自未免疫母畜的小猪明显生长快。这种来自免疫大母猪的小猪在生长速率上的区别在整个实验过程中维持，以致于在五周龄时，来自免疫母畜的小猪比那些来自对应的对照大母猪的小猪重20-30％。
在整个实验过程中，对两种性别小猪的上述区别都是明显的。因此，免疫大母猪的雄性和雌性小猪比来自对照大母猪的小猪的生长明显快(P＜0.01)。在血液、初乳和消化道刮屑中的抗体免疫和对照的大母猪初乳中抗SSTR1(12号和14号肽)、SSTR2(21号和22号肽)、SSTR3(36号和38号肽)、SSTR4(42号和44号肽)和SSTR5(48号和50号肽)抗体的平均效价显示在表3中。表3总结了在胃灌注前和后收集的小猪的血浆和消化道刮屑中，在第3天和第21天研究的抗-SSTR抗体的效价。在整个研究中，在未免疫大母猪的初乳中或在对照母畜哺乳的小猪的血浆和胃粘膜中均未检测到对SSTR的抗体。相反，在分娩后第3天和第21天，在所有免疫大母猪的初乳和免疫母畜哺乳的小猪的血浆和粘膜的刮屑中均检测到高效价的SSTR抗体。
在分娩时或接近分娩时，从免疫大母猪收集的初乳中的抗-SSTRIgG抗体的效价明显比检测到的抗-SSTR IgA抗体的水平高(P＜0.01)。在免疫母畜哺乳的小猪的粘膜刮屑中记录到与IgA抗-SSTR抗体相比的IgG抗SSTR抗体水平具有相似的差异；这在21天龄的小猪比3天龄的小猪更明显。相反，在第3天第21天免疫的小猪的血浆中测定的IgG和IgA抗-SSTR抗体的效价没有明显的区别。而且，在分娩后的3天和21天，在免疫小猪胃粘膜中测定的IgG抗体的水平与在血浆中检测的水平没有明显不同(P＞0.1)。然而在所有的时间，对那些来自免疫大母猪的小猪血浆中的抗-SSTR IgA抗体的效价均比在胃粘膜中检测的水平高(P＜0.05)。大母猪的饲料吸收从分娩到断奶的全过程，免疫的和对照的大母猪均吃完了所有提供的饲料。因此，免疫大母猪用于哺乳小猪生长和/或产奶量的食物利用效率明显比对照组大母猪高(P＜0.05)。激素和胃的功能收集的来自超过3周直至断奶的小猪的血浆样品显示免疫的或对照的大母猪哺乳的小猪在生长激素、甲状腺激素或胰高血糖素的浓度上没有明显区别。然而，免疫小猪的胰岛素和IGFⅠ和Ⅱ的循环浓度的水平明显比相应的对照组小猪高。
对那些免疫大母猪哺乳的小猪，观察到的五肽胃泌素刺激后的胃酸分泌量的水平明显比对照的母畜哺乳的小猪延迟。而且，在这些小猪中，关键的胃酶的活性被抑制。从这些研究中获得的结果提示阻断SSTR1至5的抗体改变消化道功能并因此增强消化。实施例8给予绵羊SEQ ID NO:18、20、36、38、48和50的肽在怀孕的40天随机选择20只怀孕的美利奴羊，并划分成10只的两组；免疫组和对照组。在怀孕过程中，在怀孕的约第90、110和132天在颈部皮下给予免疫母羊3m1的NSB-050中的抗原乳液。对对照组母羊在相应的时间给予安慰剂注射。包含SSTR2(#18和20号肽)、SSTR3(36号和38号肽)和SSTR5(48号和50号肽)的用于免疫的抗原分别与MAP系统偶联并相伴给予。
在断奶时(分娩后3个月)，对免疫母羊和相应的对照的母羊，在体重上没有明显区别。那些免疫母羊哺乳的羊羔的体重比那些对照母羊哺乳的羊羔的体重重大约20％。
在怀孕期和以后的哺乳期，免疫母羊的羊毛产量比对照的母羊高大约10％。而且，吃来自免疫母畜的初乳/奶的羊羔的羊毛产量比相应的对照组羊羔提高大约20％。另外，从免疫羊羔的收获的羊毛明显比从对照组的羊羔收获的羊毛细。假设那些免疫母畜哺乳的羊羔的营养状态的改善导致初级和次级毛囊的群体更大，从而导致在羊毛特征上的变化(见表4)。实施例9给予牛SEQ ID NO:18、20、36、38、48和50的肽从一个牧群选择20只怀孕的肉用小母牛，并分为10只的两组；免疫组和对照组。在怀孕的约5、7和8个月，在免疫母牛的颈部皮下注射与在NSB-050中乳化的MAP系统偶联的SSTR2(#18和20号肽)、SSTR3(36号和38号肽)和SSTR5(48号和50号肽)抗原的复合物。剩余的10只牛在相应的时间在颈部皮下给予安慰剂注射。在出生时，来自免疫母牛的小牛明显比对应的来自未免疫母牛的小牛重(38对46kg；P＜0.05)。在10周中，对SSTR 2(18号和20号肽)、SSTR3(36号和38号肽)和SSTR5(48号和50号肽)免疫母畜哺乳的小牛明显比来自对照母牛的小牛生长快(达约10-15％)。实施例10给予绵羊SEQ ID NO:18、20、36、38、48和50的肽将24只杂种母羊(美利奴羊×陶赛特有角羊)分为2个处理组；免疫的(n=12)和对照的(n=12)。在免疫母羊的颈部皮下注射与在NSB-050中乳化的SSTR2(#18和20号肽)、SSTR3(36号和38号肽)和SSTR5(48号和50号肽)肽的复合物和MAP，剩余的母羊接受安慰剂注射。在怀孕的大约90、110和130天给予母羊相应的注射。在从分娩时起的6周时间内，免疫母羊明显比未免疫母羊产生更多的奶(20％)(见图5)。÷增加的食欲不能引起对免疫母羊观察到的产奶量的增加，因此免疫母羊比对照的母羊能更有效地利用它们的饲料。实施例11给予鸡SEQ ID NO:27、29、36、38、48和50的肽将40天大的鸡随机分成2个处理组；免疫组和对照的。免疫鸡在1天龄进行腹膜内注射，接着在7天龄和14天龄口服给予加强接种的与在NSB-050中乳化的MAP系统偶联的SSTR2(#27和29号肽)、SSTR3(36号和38号肽)和SSTR5(48号和50号肽)的复合物。对照组的鸡在对应的部位和时间接受安慰剂注射。
在初次接种后的前4周，免疫鸡明显比对应的对照组鸡重，以至在实验终止时免疫鸡比对照的鸡重约24％(见图6)。
在21天龄和42天龄从每组鸡中随机选择代表部分的鸡(n=5)安乐死以进行肌肉分析。解剖来自每只鸡的翼部肌肉。在21天龄和42天龄从免疫鸡获得的湿肌肉的产量比对照的鸡分别重23％和30％。虽然观察到的免疫鸡的翼肌质量比对应的对照鸡重，但每克其肌肉组织的RNA的总得率明显低于相应的对照鸡。当对来自两组鸡翼肌的等量回收的DNA测定c-fos和c-jun基因时，观察到相对于对照组的鸡，c-fos基因的拷贝数被明显抑制，而c-jun基因增加。
本研究的结果表明，抗SSTR2(27号和29号肽)、SSTR3(36号和38号肽)和SSTR5(48号和50号肽)的接种增加免疫鸡的增重。而且，显然免疫后明显改变了关键肌肉系统的细胞间机制。所述免疫方法导致转录调节基因c-fos的抑制并放大c-jun基因的活性。假设对相对于对照组的免疫组观察到的这些基因活性的变化与导致信号转导途径变化的蛋白转录与蛋白结合关系的改变相关，并因此增加钙代谢。实施例12给予猪SEQ ID NO:21、23、36和38的肽将20只6周大的杂种公猪随机分成2个处理组，免疫组和对照的组。在42天龄、63天龄和84天龄在猪的颈部皮下或者注射与在NSB050中乳化的MAP系统偶联的SSTR2(21号和23号肽)、SSTR3(36号和38号肽)和SSTR5(48号和50号肽)抗原的混合物，或者注射安慰剂。在实验终止时(20周龄)，对SSTR免疫的猪明显比对应的对照的猪重(91.5对83.5kg)(见图7)。实施例13给予大鼠SEQ ID NO:54至57的肽将20只实验室大鼠随机分成2个处理组；免疫组和对照的组。将免疫大鼠在股内侧皮下注射与悬浮在NSB050中的MAP系统偶联的3ml含100μg的本专利描述的IGFBP1(47号肽)、IGFBP2(55号肽)、IGFBP3(56号肽)和IGFBP4(57号肽)抗原混合物的乳液。对照的大鼠接受在股内侧皮下给予的安慰剂注射。所述大鼠以21天的间隔用相应的疫苗给予3次加强注射。在该研究期间收集血液样品，进行抗体效价测定和关键代谢物和激素浓度的测定。在该研究期间，那些用IGFBP抗原免疫的大鼠明显比对应的对照的大鼠生长快，并且葡萄糖(2.5对4mM)和胰岛素(20对30ng/ml)的浓度被抑制。以上的接种疫苗制度可能对Ⅰ型和Ⅱ型糖尿病的葡萄糖代谢具有意义深远的影响。实施例14给予鸡SEQ ID NO:1(LCFWKTC)的肽所述肽和传递载体在下文称为FEEDMIZA方案将刚出壳1天大的小鸡随机分成以下的组。A组未免疫的(n=30)B组皮下免疫(n=30)C组腹膜内免疫(n=30)在出壳时和21天龄时进行免疫。该FEEDMIZA剂量是在0.1ml乳液中的80μg的肽。
在49天，将每个实验组的动物处死。除收集血液外，还收集胆汁和消化道刮屑进行以下的抗体分析。结果在实验的终末记录小鸡的最重平均体重。对C组，该重量为2.19±0.057kg。对B组和A组平均体重分别为2.07±0.049kg和1.95±0.047kg。每组间的差异为统计学显著的(P＜0.05)。通过腹膜内途径免疫的鸡比未免疫鸡大约重12.3％。那些通过皮下途径免疫的鸡比未免疫鸡平均重7.2％。分别在100％和60％的得自C组和B组的胆汁样品中检测到对FEEDMIZA抗原的抗体。在A组鸡的胆汁中没有检测到对该抗原的抗体。在100％的C组鸡和50％的B组鸡的消化道刮屑中检测到抗体，而在A组鸡的消化道刮屑中没有检测到抗体。
在100％的B组鸡和40％的C组鸡的血液中检测到抗体，而在A组鸡的血液中没有检测到抗体。结论和讨论用FEEDMIZA制剂免疫后在宰杀时，观察到体重明显增加，最重的组是那些通过腹膜内途径接受免疫接种的组。所有来自腹膜内免疫组的测试鸡在胆汁和消化道刮屑中均显示有抗体，但在血液中只有其中40％显示有抗体，这具有潜在的重要性。
相反来自B组的鸡明显比未免疫鸡增重多，但明显比通过腹膜内注射免疫的鸡增重少，所有的组的鸡在血液中都显示有抗体，但仅其中的半数在胆汁和消化道刮屑中有抗体。
这提示通过腹膜内途径免疫的鸡具有与那些通过皮下途径接种的鸡不同的免疫应答。腹膜内免疫刺激抗体通过胆汁(分泌的抗体)流到肠的表面。需注意的是在肠粘膜的表面有许多由FEEDMIZA靶向的激素的受体，并且这些受体比在血液中循环的抗体更适合于或有利于抗体阻断。
这个实验强调，在血液中依赖于对特定激素的高水平抗体的测定的免疫调节可能是把重点放在错误测定上。如果在本实验中仅收集血液样品来监测免疫刺激，那么可能可论证在腹膜内免疫的鸡中没有免疫刺激的争论，因为没有测定到循环的抗体。然而，在胆汁和消化道刮屑中存在的抗体则表明结果正相反。值得注意的是，在具有100％阳性发生率的抗体的组中在宰杀时体重最重，而在接近50％的鸡胆汁和消化道刮屑中显示抗体的组介于两组的中间，而没有消化道和胆汁抗体的未免疫组表现出最低的重量。实施例15给予猪SEQ ID NO:1的肽方案将来自12窝的小猪在4周龄断奶并随机分成4个处理组，每组包括12只雄性和12只雌性小猪。每只小猪单独在耳朵标记并称重。处理组是A组对照组-传递载体的安慰剂注射B组通过皮下途径免疫C组通过腹膜内途径免疫D组通过肌内途径免疫用于以下实验的抗原是与实施例14中用的抗原相同的抗原。在有机化学实验室构建微蛋白。将它保持在-20℃直至将它溶解在pH=7的磷酸缓冲盐溶液(PBS)中，在用于猪前将其乳化在油性佐剂中。
用于本实验疫苗的所有剂量均是含80μg抗原的3ml乳液。随意选择该剂量，并且坚持使用，由于照这样已获得成功。
免疫组接受含80μg抗原的FEEDMIZA。安慰组接受无抗原的3ml乳液。在5、8和12周龄给猪注射。
将猪在常规断奶、生长和肥育猪圈中饲养。给它们无限量地提供断奶期、生长期和肥育期饲料。
该实验进行至猪达到161天龄(21周)。在4、8、10、12、15、16和21周龄将猪单独称重。结果各处理组在21周龄的体重和平均每日增重列在表5(雄性)和表6(雌性)中。
图9和10显示在实验过程中不同龄的公猪和母猪的各自的体重。讨论与安慰剂注射的猪比较，通过皮下途径免疫的猪在21周龄的体重更重(公猪21.69％，母猪13.04％)，在统计学上是显著的。从图9和10显示，对公猪直至12周龄左右在每日增重上都没有可检测的倾向。在6周龄时，通过肌内和腹膜内途径免疫的猪明显比通过皮下免疫的或安慰剂注射的组轻。然而，到了10周龄时，在任何组的重量上均没有明显差别。
在母猪的情况中观察到相同的倾向，除了在6周龄(第一次免疫/注射2周后)时安慰剂组猪明显比所有其它处理组均重。在10周龄时，皮下免疫组明显比肌内和腹膜内免疫组重，就象它们相应处理的公猪一样，与安慰剂组重量相似。在12周龄时，所有的雌性处理组重量几乎相同，在公猪中发生这一现象要早几周。
结论是，用FEEDMIZA疫苗对猪的免疫，特别是通过皮下和腹膜内途径免疫在公猪和母猪中均产生统计学显著的应答，主要在该实验的最后6-8周测定到该益处。实施例16SRIF和SEQ ID NO:1肽在小母猪中的作用设计该实验以测定在首次怀孕时，通过皮下途径用FEEDMIZA接种怀孕的猪的作用。利用机会比较对FEEDMIZA的应答与对SRIF缀合疫苗的应答，SRIF缀合疫苗在与No.1肽相同的传递载体中传递。对这个比较，抗原的量标准化为100μg的以SRIF缀合物的SRIF，和100μg的FEEDMIZA抗原。方案选择24只当地品种×大白母猪杂交的猪，交配并置于常规的干燥猪圈中。将它们随机分成3个处理组，即A组未免疫对照组B组用FEEDMIZA免疫组C组用SRIF缀合物免疫组在交配时将小母猪通过在颈部皮下注射3ml相应的抗原免疫。
将所述动物置于常规的单个干燥猪圈中。在怀孕30天时，处理组减少至每组5个证实怀孕的动物。在怀孕的第6、9和12周进行随后接种。从交配至分娩，每只小母猪每天喂3kg饲料(Breedmore大母猪日粮，Barastoc,Melbourne)。每只动物在交配时及以3周的间隔称重直至分娩。结果任何的免疫不论是作为在注射点的组织反应还是在健康和行为上的一般影响，均未发现不良的作用。用FEEDMIZA免疫的猪到怀孕中期(mid-pregnancy)时基本上更大，特别是更高。
不同处理组的平均重量和标准差见图11。直至怀孕的12周在任何组间没有统计学差异。在12和15周，B组的动物在统计学上明显比未免疫的和SRIF免疫的组重(P＜0.05)。从怀孕的9周起，SRIF免疫组有比未免疫大母猪重的倾向，但在任何点，该区别都没有显著的统计学差异(更大量的动物可能监测到统计学差异)。
在分娩时，未免疫大母猪平均每头增加60kg，已吃了115×3kg的饲料(345kg)，并且以5.75∶1的比例将饲料转换为增重。FEEDMIZA免疫的大母猪也消耗了345kg饲料，但在怀孕中平均每头增加138kg，效率比为2.5∶1。SRIF免疫组在试验期间平均每头增加75kg，饲料转换为增重的效率比为4.6∶1。讨论和结论SRIF结合的疫苗不能成功地调制有统计学意义的生长，但FEEDMIZA制剂明显提高增重。显然FEEDMIZA抗原和SRIF结合抗原在调制怀孕大母猪生长的作用上非常不同。
用FEEDMIZA制剂免疫的大母猪基本上比SRIF免疫的和未免疫的大母猪更好地将饲料转化为增加。
这个实验显示，在尚未达到成熟体重的怀孕母猪中主动产生的对FEEDMIZA的抗体，诱导对增重速率和饲料转化率的改善。值得注意的是，在每日基础上喂这些猪测定量的饲料，因此这些抗体对自动饲料摄入的作用将不影响观察的结果。这个改善必须或者来自增强的消化或吸收，或者来自吸收营养的利用。
提供给这些大母猪的4种免疫可能多于取得成功的免疫调节的需要。选择该制度以保证在所有的时间在所有动物中均存在高水平的抗体，因为目的是测定在调节所述性能中抗体的效力。一个更实际的制度可能是在选择、在怀孕的证实和在转移至产房时接种。进一步的实验可以表明每次怀孕少于3次的接种产生可接受的结果。实施例17SRIF和SEQ ID NO:1肽对小猪的作用这个实验是实施例16的实验的继续。它设法观察在哺乳期直至断奶小猪增重的速率，所述小猪是那些在怀孕时用FEEDMIZA免疫或用SRIF结合疫苗免疫的母畜的小猪，用未免疫大母猪饲养的小猪作为对照。方案来自实施例16的大母猪没有任何进一步的免疫或操纵继续饲养，除了a)从分娩至断奶21天后，每日提供的饲料增加至每头6kg。
b)分娩后3天，将每头大母猪的小猪数目减至8只，以保证在实验中的每窝猪得益于产奶量和吸收可能存在于奶中的任何抗体的联合作用，避免不同的一窝产仔数、社交相互作用和乳头的竞争的混杂影响。在断奶时给大母猪称重。
在出生时分别鉴别小猪，在出生时和每7天称重直至在21天龄断奶。在3天龄所有小猪接受常规口服剂量的广谱抗菌素(Tribrissen小猪悬液，Intervet,Melbourne)，以及肌内补充铁注射(Pignaemia,Intervet,Melbourne)。
在所有时间无限量地给予大母猪和小猪水。结果在3周的哺乳期内未免疫的大母猪的平均体重下降10.8kg，与之相比，在怀孕期间用SRIF结合疫苗免疫的大母猪同样下降12kg。在怀孕期间用FEEDMIZA免疫的组平均丧失33.8kg，具有显著的统计学差异，结果见图12。
在分娩和断奶时大母猪的重量为
断奶时的重量(kg) 产仔时的重量(kg)重量损失未免疫大母猪 157.6±24.2 146±33.3 6.8SRIF免疫大母猪 166.4±26154±27.68 7.2FEEDMIZA免疫大母猪 219.8±20.44 186±18.05 15.4
该结果也表示在图13a和13b。
注意到用FEEDMIZA疫苗免疫的大母猪产奶量多，如乳头不断地漏出大量的奶证明的，特别是在哺乳的第一周。讨论和结论在哺乳期大母猪失去重量，不管在怀孕期间它们是否被接种。这明显是对哺乳要求的反应，这与供给的增加的日粮不充分符合。然而，在怀孕期间用FEEDMIZA免疫并如先前实验报道的在怀孕期体重明显增加的哺乳期大母猪，失去的重量大小是在未免疫的或SRIF结合免疫的大母猪的两倍。如图13所示，这是一个与用任何其它两种处理制度观察到的形式惊人不同的形式。对这种重量的显著丧失的一个可能的解释是，通过作用于脑垂体或乳腺的抗-FEEDMIZA抗体、或通过正常存在的抑制机制的抑制、或通过这两者激发另外的哺乳刺激。在本实验中不可能测定这些大母猪的产奶量，但是乳房的观察提示产生了大量的奶。在绵羊中的平行研究已证实，因为在哺乳期间测定到奶输出量增加20％是与在怀孕期间用FEEDMIZA免疫的种相关。怀孕期间用FEEDMIZA免疫可能导致在所述动物中从分娩至断奶的3周期间产生抗体，并且这是通过直接或间接的方式造成刺激产奶量增加的原因，因此在大母猪从保留的储备再分配营养到奶产品中时产生生理需要。
怀孕/哺乳的猪潜在的生产特征(增重或产奶量)的提高似乎与所述FEEDMIZA抗体相关。因为这些功能都涉及钙、碳水化合物和特别是蛋白质的代谢，这些结果表明，产生的对SRIF-缀合物的抗体在促进增重方面不如抗-FEEDMIZA抗体有效。假设用FEEDMIZA对怀孕的猪免疫，导致涉及这些关键代谢物正常代谢途径效率的提高。尚不清楚所述抗体的作用是否是刺激，或它是否通过正常抑制机制的消除而发生。实施例18分娩前的大母猪免疫后SRIF和SEQ ID NO:1肽的作用本实验设法研究分娩前大母猪用SRIF缀合疫苗或FEEDMIZA疫苗免疫，对随后其吃奶仔猪至3周龄断奶时和断奶后时期增重形式的作用。
本实验监测先前实验的被试小猪。方案将处理组(未免疫需、SRIF缀合物免疫组和FEEDMIZA免疫组)中的5只大母猪中每头的小猪(每窝8只)单独耳朵标记以便识别，在出生时、7、14、21天(断奶的天数)和35天龄(断奶后2周)称重。
在哺乳期间，小猪已准备利用由红外线灯温暖的爬行区，在18-21天龄期间利用无限量的饮水和爬行饲料颗粒(Barastoc,Melboume)。在哺乳期间它们没有利用它们母亲的饲料。
在断奶时，将每窝小猪放在50％的地板作睡眠区和50％编织丝网的平板断奶笼中。给该笼装备含与断奶前3天提供给小猪的饲料同样的爬行/断奶饲料的小筒喂食器。无限量供给饲料和新鲜的饮水。结果小猪的平均初生重为ⅰ)未免疫大母猪产下的1.22±0.61kgⅱ)SRIF免疫大母猪产下的1.40±0.29kgⅲ)FEEDMIZA免疫大母猪产下的1.58±0.21kg由FEEDMIZA免疫大母猪产下的小猪在统计学上比其它组大母猪产下的那些小猪(彼此无统计学差异)重(P＜0.05)。
在断奶时小猪的体重为ⅰ)未免疫大母猪哺乳的小猪6.05±0.63kgⅱ)SRIF-免疫大母猪哺乳的小猪7.32±1.30kgⅲ)FEEDMIZA免疫大母猪哺乳的小猪8.30±1.13kg每个处理组间平均体重的差别为统计学显著性的(P＜0.05)。
断奶后2周小猪的体重为ⅰ)未免疫大母猪哺乳的小猪7.58±0.66kgⅱ)SRIF-免疫大母猪哺乳的小猪8.89±1.33kgⅲ)FEEDMIZA免疫大母猪哺乳的小猪10.62±0.81kg这些平均体重相互间都有统计学差异(P＜0.05)。
每个处理组小猪的平均体重见图14。讨论和结论与未免疫大母猪比较，用SRIF缀合抗原或用FEEDMIZA免疫怀孕的大母猪，导致由这些母畜哺乳的小猪的增重速率增加。这提示以增加产奶量为目的的动物的免疫操纵是可能的。在出生、断奶和断奶后2周的观察点，用FEEDMIZA疫苗对怀孕大母猪免疫，产生的哺乳3周的小猪比由或者未免疫大母猪或者SRIF-免疫大母猪哺乳的小猪更重，具有统计学显著性。这个观察提示，用FEEDMIZA取得的免疫操纵方法比用SRIF缀合物的方法更有效。实施例19给予绵羊SEQ ID NO:1的肽绵羊已成为用种类繁多的激素免疫调控的大量公开尝试的被试者。绵羊具有许多类似于猪生产周期的生产特征，即相对短的怀孕期、吃奶幼仔增重速率快、以及相对短的哺乳期。它们是相对容易测定产奶量的动物，并且它们容易屈从为测定抗体、循环激素或代谢物的血液收集。
以下的实验比较FEEDMIZA免疫动物与未免疫对照动物的应答。
由于奶排出的刺激(因此可测定产奶量)依赖于用力的吸吮和所产生的奶完全排出，因此最好是用有孪生羊羔的母羊。在一种已知高孪生系的成年母羊中进行涉及测定产奶量的研究，保证有足够数目的怀双胞胎的母羊可用于实验。实验1设计本实验以测定在怀孕期间免疫3次怀孕的美利奴母羊的影响，并与未被免疫相应母羊羊羔比较在第一次免疫时、产羔时和在产羔后6周“断奶”时母羊的重量。方案将在用阴道内海绵(Repromap；Upjohn,Australia)同步化后预先交配的20只美利奴母羊，给予肌内注射的孕马血清促性腺激素(Folligon,Intervet,Melbourne，澳大利亚)。取出海绵时，在怀孕60天时随机将动物分成10只的两组(待免疫组和保持不免疫的组)。用超声波扫描仪证明动物怀双胞胎羊羔。
怀孕期间将怀孕的母羊作为单群羊保持在草地上。在怀孕的最后4周期间，提供紫花苜蓿干草自由选择。所述羊产羔后立即将它们移至室内，并提供每天2.5Kg的4∶1的切细的紫花苜蓿秸秆和碾碎大麦的混合物直至6周龄，在这时总结实验并将母羊和羊羔放到牧场。
在怀孕的90、110和132天将待免疫母羊在胁腹皮下注射3ml的FEEDMIZA。
在第一次免疫时、出生时和6周龄断奶时记录母羊的体重。在出生时和断奶时记录羊羔的体重。
如Wynn等(1988)描述的，在母羊的第一次免疫、产羔和断奶时，以及羊羔断奶时以中间一侧小块收集羊毛样品(100平方厘米)。通过组织学检查在出生、1周龄和断奶时收集的核心样品，分析毛囊密度和类型。
在哺乳的最初6周每周1天通过将阻止羊羔接近母羊6小时，测定产奶量。阻止羊羔6小时后，将母羊人工挤奶，记录奶的总量。取10ml该奶样品用于分析，并且将剩余的奶用与连接到排出含该奶小袋的猪圈的乳头人工喂给羊羔。结果免疫组在第一次免疫时母羊的重量是57.3±2.4kg，而未免疫对照组母羊重量为57.5±2.7kg。在出生时，免疫母羊重53.2±3.0kg，而未免疫组重51.8±2.7kg。在断奶时，免疫母羊重55 2±3.1kg，而未免疫组重52.7kg。在本实验的任何阶段，所述母羊重量之间没有统计学显著的差异，在羊羔的初生重上也没有任何显著差异(免疫组为4.4±0.11kg，与之比较那些未免疫组为4.4±0.08kg)。在断奶时，未免疫母羊的羊羔重量为6.72±0.8kg，而免疫母羊的羊羔重量为8.07±1.0kg，如图15所示。这个体重上的差异为统计学显著(P＜0.05)。
记录的母羊产奶量表示在图16，并且显示免疫母羊的产奶量在每个观察中都多大约20％。
每次收集奶时，在从处理组收集的样品中测定的奶脂肪、奶乳糖或奶蛋白水平均没有显著的统计学差异。在分析上一周一周地有微小的差异。
在怀孕期和哺乳期间，来自免疫母羊的羊毛产量比来自未免疫母羊的羊毛产量重大约10％。吃免疫母羊奶的羊羔的羊毛产量比吃未免疫母羊奶的羊羔产生的多20％。另外，从免疫母羊的羊羔收获的羊毛明显比未免疫母羊的羊羔观察到的细。免疫母羊的羊羔具有更大密度的次级和初级毛囊。讨论和结论用FEEDMIZA免疫怀孕母羊，导致羊羔以比观察到的通过未免疫母羊产生的羊羔更快的增重速率生长。这明显与通过母羊产生的奶量更大有关。免疫母羊产生的奶与未免疫母羊的奶比较分析正常，并且因此营养价值相等。在怀孕期和哺乳期，免疫母羊产生更多的净毛，提示在怀孕期(提高羊毛产量)和哺乳期(提高羊毛产量和产奶量)免疫母羊的营养状态得到有效的提高。这些对生产率有利的改变与免疫母羊产生的抗体对羊毛毛囊和生乳的乳房细胞施加作用是一致的。
免疫母羊哺育的羊羔生长速率的提高可以解释为这些羊羔可得到更多的奶，因此假设它们喝了更多的奶。因为这些奶是分析正常的，因此这些羊羔得到更多的营养并因而接受的营养水平更高。这可能不是完全的解释，因为初乳和奶也含有更多的对FEEDMIZA的抗体。这些抗体可能对通过羊羔的饲料利用具有调节作用。
对美利奴绵羊具有巨大的商业重要性的观察是，免疫母羊哺育的羊羔显示出在皮肤内羊毛毛囊的密度明显增加。这个变化可能是持续一生的变化。甚至更明显地提高有利于次级毛囊的次级毛囊对初级毛囊的比例，次级毛囊是那些已报道与产生细(fine)羊毛纤维有关的毛囊。这可能提示，这些羊羔已被永久地改良有利于产生质量更好的羊毛，仅仅因为它们在生命的最初6周吃了大量含抗-FEEDMIZA抗体的奶。实施例20给予牛SEQ ID NO:1的肽设计本实验是作一个简单的测试，看看在怀孕期间接种放牧区繁育的(range-bred)饲养肉用牛是否导致体重更重的。又一个观察是了解在怀孕期间用FEEDMIZA免疫的母牛哺乳的小牛的生长。方案选择一个品系的50只海福特牛×安格斯牛的小母牛并放到活跃生长的牧场。用Lutalyse(Upjohn,Rydalmere，澳大利亚)注射使小母牛发情期同步化，并与海福特公牛自然交配。在同步化的时候，将这些动物随机划分为2组，20只动物的一组为免疫组，而第二组的20只动物是未免疫小母牛。
在交配时、怀孕3个月和分娩前2周，将待免疫动物在颈部皮下注射3ml的乳液。
在交配时、分娩时和分娩后3个月将动物称重。产出的小牛在出生时和此后每28天称重直至3个月大。结果在交配时，未免疫组小母牛的平均重量为360±8.5kg，而待免疫组为355±12.8kg。
在分娩时，未免疫对照组动物的平均重量为385±15.5kg，免疫组免疫母牛的平均重量为440kg(平均有22％的差别)。分娩后3个月，未免疫母牛的平均重量为375±20.5kg，免疫母牛重415±24.5kg(平均相差10.6％)。结果显示于图17。
未免疫小牛的平均初生重为35±3.5kg，免疫组小牛为40±4.5kg(平均相差14％)。出生后3个月，未免疫对照组小牛的平均重量为116.2±6.4kg，免疫组为145.0±7.5kg(平均相差20％)。1-84天未免疫小牛的平均增重为81.2kg，免疫组为105kg(平均相差23.8kg，或29.3％)，如图18所示。
从交配至产犊后84天，对于总的净增重(母牛+小牛)，未免疫组为131.2Kg，免疫组为205Kg。讨论和结论在怀孕期间用FEEDMIZA对放牧区繁育和放牧区饲养的肉用小母牛免疫已导致这些动物在怀孕期间增重更多的发生，并且导致在出生时产下更重的小牛。在出生时，不论免疫母牛产下的小牛还是未免疫母牛产下的小牛都是母牛重量的大约9％。接种疫苗的母畜哺乳的小牛在出生后的最初84天以更快的速度生长。这与在怀孕大母猪或怀孕母羊免疫后观察到的形式相似，并提供进一步的旁证，证明FEEDMIZA具有有益地改变肉用牛育种效率的潜力。实施例21不同类型的佐剂的作用在35kg体重时将羊羔用各种传递载体(佐剂)中的0.5mg与BSA(牛血清白蛋白)缀合的SRIF在第0、21和42天免疫(n=6只动物每组)。
在84天期间测定的生长反应为未免疫对照2.0±1.37kgFCA免疫的 4.5±1.60kgMDP免疫的 7.0±1.3kgFIA和MDP免疫的5.0±1.3kgDEAE免疫的3.5±0.6kgQill A免疫的 4.0±1.5kg油免疫的 7.5±1.2kg结论是，使用的佐剂类型可能与产生的抗体的效力有关(baring)。
当本发明的油用作佐剂时观察到明显的反应。免疫动物没有显示出任何脓肿形成的迹象，表明它是一种潜在的商业制剂。
可想象的能用作佐剂、或用作传递载体中作为佐剂的添加物的其它材料是铝盐、脂多糖、山梨聚糖三油酸酯、Pluronics、Tetronics、角鲨烯、脂质体、免疫刺激复合物、霍乱毒素、大肠杆菌的热不稳定毒素、白细胞介素等。实施例22抗原结果变化的作用对产生的抗三种提呈产生的超免疫绵羊和猪的血清测定抗体对SRIF、推荐序列(SEQ ID No2-3)的环状形式和线性形式(SEQ ID No.4)的亲和力。对促生长素抑制素的抗血清的抗体亲和力用以前由Holst JJ,Jorgensen PN,Rasmussen TN和Schmidt P(1992)描述的Scatchard图分析(“单克隆抗体免疫中和揭示的在猪中胃泌素分泌的促生长素抑制激素抑制”American journal of Physiology263:G908-G912)，确立抗体对促生长素抑制激素的亲和力。识别并结合促生长素抑制素的绵羊抗体和猪抗体的亲和力总结在下面抗原 抗体 对促生长素抑制素的亲和力抗-SRIF绵羊 1.5×1011±1.2×101lmol-1抗-SRIF猪 2.0×1010±1.4×101lmol-1环状 绵羊 1.9×108±2.2×101lmo1-1环状 猪 3.0×108±1.0×101lmol-1线性 绵羊 1.3×107±0.2×102lmol-1线性 猪 1.4×107±1.6×101lmol-1从这些数据证实，在绵羊和猪中产生的抗-SRIF抗血清比用该构建物的环状或线性等价物免疫的动物中产生的抗血清的缔合常数更高。
用SRIF和胰高血糖素的抗体研究，揭示在两个分子间发生某些交换作用。SRIF的结构包含与胰高血糖素分子部分同源的序列S-T-F-T。对推荐的肽产生的抗体与胰高血糖素没有交叉反应。
在怀孕的最后三个月用与推荐油一起提呈的SEQ ID No3、4、5和SRIF14(天然的促生长素抑制激素)缀合物免疫2次的怀孕猪全部在大母猪的初乳和奶中、以及在3天龄和21天龄小猪的血液和消化道刮屑中产生抗-SRIF抗体。
从出生至断奶小猪的绝对生长速率为来自未免疫对照大母猪的小猪每天165gn=40来自用SEQ ID No:3免疫的大母猪的小猪 每天275gn=42来自用SEQ ID No:4免疫的大母猪的小猪 每天240gn=44来自用SRIF缀合物免疫的大母猪的小猪 每天180gn=42实施例23 SEQ ID No3在小猪中的作用在对推荐的油中传递的环状肽应答产生的抗体类型与以同样方式传递的SRIF14缀合物相比，对免疫动物的生长具有意义。
在怀孕的最后3个月用SEQ ID No3免疫2次的大母猪产下的小猪在断奶时(在21天龄)比用SRIF结合疫苗免疫的大母猪的子代平均重27％。测定的抗-SRIF抗体的水平如下处理第3天 第21天消化道IgG(OD @ 405nm±SD)SRIF/BSA 0.684±0.5480.259±0.18SEQ ID NO:3 0.51±0.21 0.123±0.09消化道IgASRIF/BSA 0.189±0.1330.037±0.05SEQ ID NO:3 0.12±0.157 0.10±0.087血浆IgGSRIF/BSA 1.38±0.44 1.779±0.13SEQ ID NO:3 0.9±0.13 2.12±0.23血浆IgASRIF/BSA 1.067±0.4690.798±0.49SEQ ID NO:3 1.43±0.217 0.567±0.21母猪的奶IgGSRIF/BSA 1.6±0.22SEQ ID NO:3 1.4±0.162
奶/初乳IgASRIF/BSAO.029±0.035SEQ ID NO:3 O.026±O.028在用乳化于本发明油中的SRIF/BSA或SEQ ID No:3免疫的大母猪哺乳的小猪的血浆和消化道刮屑中检测到大量的对SRIF的抗体。
所述结果表明，虽然在初乳、奶、消化道刮屑或直至断奶的小猪血清中测定的对SRIF的抗体量是相似的，但是抗体的功能性是不同的，正如在生长速率中观察到的差异的证明的。
当与或不与任何佐剂或免疫刺激系统联合给予(通过肌内、皮下、乳房内、口服或腹膜内)疫苗接受者的该肽时，将诱出直接或间接改变与消化和随后的营养代谢相关的内分泌系统的特定抗体。然而，抗原传递的优选形式涉及在一种非巨噬细胞刺激系统中将免疫原混合、悬浮或最好是乳化，或可通过皮下注射，或可腹膜内注射。推荐的传递系统的重要特征是它促进对多抗原的体液免疫应答的表达，好象单独提呈每个抗原一样。而且，由于该传递系统主要诱出体液应答，不涉及巨噬细胞刺激，所以所述抗体极有效(高效价和亲和力)，并且包括整套同种型，特别是那些与粘膜表面有关的抗体(IgA和IgM)。
通过本发明提高动物生产量的机制极其复杂并且尚不完全清楚。然而，已确定所述抗体改变特别是促生长素抑制激素、胃泌素、胰岛素和胰高血糖素的代谢；并且增加胰岛素样生长因子(IGF-Ⅰ和Ⅱ)的循环浓度。与改变这些激素代谢相关的内分泌分支是庞大的，并且包括在至少胃泌素、缩胆囊素、motilin、促胰液素、甲状腺激素、胰高血糖素、胰岛素、IGF-Ⅰ和Ⅱ、促生长素抑制素、前列腺素、组胺和血管活性肠肽的循环浓度的变化。从得自我们实验室的结果已证实对所述肽的免疫诱导胃肠功能和代谢功能的变化。例如对免疫后的化学和生理刺激应答而明显阻滞胃酸分泌速率和许多胃蛋白酶的活性。另外，明显改变通过胃肠道各段消化的能动性，并且必然增强关键代谢物的吸收和代谢。而且，所述抗体使许多细胞特别是那些与内分泌系统有关的细胞对Ca2+离子的应答性更强，因此增加与促生长轴(somatotropic axis)和胃肠道有关的激素的分泌。对于细胞有一种提高的能力以最佳实施，即使Ca2+水平是次佳的。这个的作用是增加在细胞中、特别是增强肌肉纤维中的mRNA产生、促乳腺和促生长。
假设观察到的对免疫应答中的事件组合增强食料的消化和吸收，以及随后的关键代谢物的代谢，导致免疫动物生产能力的提高。
虽然为清楚的目的已详细描述了本发明，但应当理解，本领域技术人员可以进行各种修改而不脱离本发明的范围。
表2来自怀孕期间用SSTR1、SSTR2、SSTR3、SSTR4和SSTR5抗原免疫、或用安慰剂注射液免疫的大母猪的小猪的初生重处理 初生重SSTR11.5±0.2kSSTR21.65±0.1kgSSTR31.7±0.15kgSSTR41.5±0.2kgSSTR51.7±0.1kg对照 1.35±0.2kg
表3在免疫大母猪的初乳和在21天龄的吃奶仔猪的血浆和消化道刮屑中抗-SSTR抗体的平均效价样品对照SSTR1 SSTR2SSTR3 SSTR4 SSTR5血浆 0 3025 5412 256412486458消化道 0 2000 1895 365414784785初乳 0 5002 8425 784557848563表4在出生和6周龄时用SSTR2、3和或安慰剂注射液免疫的母羊哺乳的羔羊的初级和次级毛囊的平均数量年龄 测定 对照 免疫的次级毛囊 57 67B初级毛囊 13 17i总毛囊 70 84r次级密度 36cm-238cm-2t初级密度 8cm-210cm-2h总密度 44cm-248cm-2S/P比值 5 4.56次级毛囊 95 118初级毛囊 5 10w总毛囊 100128e次级密度 55 70e初级密度 3 4k总密度 58 74sS/P比值 17 20
表5用FEEDMIZA通过不同注射途径免疫母猪和安慰剂注射的猪(雄性)的增重和平均每日增重处理(kg) n 在21周的体重安慰剂注射90.8±3.21 12 583±24.1皮下免疫110.5±3.22 12 650±24.2腹膜内免疫104±2.7912 625±21.0肌内免疫96±2.61 12 600±19.6最重的组是皮下免疫组。它们明显比所有其它处理组重(P＜0.05)。通过腹膜内途径免疫的猪明显比那些肌内免疫的猪和给予安慰剂注射液的猪重(P＜0.05)。在肌内免疫组和安慰剂组之间没有明显区别。
表6用FEEDMIZA通过不同注射途径免疫母猪和安慰剂注射的猪的增重和平均每日增重处理 n 在21周的体重(kg)平均每日增重(克)安慰剂注射92±2.49 12575±18.79皮下免疫104±2.79 12650±21.05腹膜内免疫9.5±2.1 12597±15.79肌内免疫98.7±2.4912617±18.79在通过皮下途径免疫的组中记录到最重的体重。它们明显比肌内免疫组的体重重(P＜0.05)。这些组的体重均明显比注射安慰剂的组重(P＜0.05)。在其它处理组重量间没有明显差异。
参考文献Cohick,W.S.和Clemmons,D.R.生理学年鉴和评论，1993,55,131-153。Crowe,M.A.,Enright,W.J.,和Roche,J.F.动物科学杂志，1995,73,2406-2417。Dockray,G.J.和Taylor,I.L.胃肠病学，1976,71,971-977。HoskinsOn,R.M.,Rigby,R.D.G.,Mattner,P.E.,Huynh,V.L.,D＇Occhio,M.,Neish,A.,Trigg,T.E.,Moss,B.A.,Lindsey,M.J.,Coleman,G.D.,和Schwartzkoff,C.L.澳大利亚生物技术杂志，1990,4,166-176。Kamoi,K.,Hama,H.,Ito,S.,和Matsuoka,M.日本内分泌学，1977,24,239-243。Kaushansky,A,Bauminger,S.,Koch,Y.,和Lindner,H.R.内分泌学学报，1977,84,795-803。Lindstedt,G.欧洲内分泌学杂志，1994,130,429-432。Melmed,S.,Harada,A.,Hershman,J.M.,Krishnamurthy,G.T.和Blahd,W.H.临床内分泌学和新陈代谢杂志，1980,51,358-363。Meloen,R.H.家畜产品科学，1995,42,135-145。Moore,K.L.,Armstrong,J.D.,Harvey,R.W.,Campbell,R.M.,和Heimer,E.P.驯养动物内分泌学，1992,9,125-139。Patel,Y.C.选自《神经科学基础和临床概况，第4卷，促生长素抑制素》，C.Weil,E.E.,Müller和M.O.Thorner编，1992,1-16,Springer Verlag,Berlin。Pekas,J.C.和Trout,W.E.动物科学杂志，1993,71,2499-2505。Pell,J.M.和Aston,R.家畜产品科学，1995,42,123-133。Pell,J.M.和James,S.内分泌学杂志，1995,146,535-541。Reisine,T.和Bell,G.I.内分泌学评论，1995,16,427-442。Scanlon,A.R.,Sunderland,S.J.,Martin,T.L.,Goulding,D.,O′Callaghan,D.,Williams,D.H.,HeadOn,D.R.,Boland,M.P.,Ireland,J.J.和Roche,J.F.生殖和生育力杂志，1993,97,213-222。Scaramuzzi,R.J.,Davidson,W.G.,和Van Look,P.F.A.自然，1997,269,807-808。Thomson,D.L.,Jr,Southern,L.L.,St.George,R.L.,Jones,L.S.和Garza,F.,Jr动物科学杂志，1985,61,1498-1504。Westbrook,S.L.,Chandler,K.D.和McDowell,G.H．澳大利亚农业研究杂志，1993,44,229-238。Wynn,P.C.,Shahneh,A.Z,Rigby,R.D.G.,Behrendt,R.,Giles,L.R.,Gooden,J.M.,和Jones,M.R.家畜产品科学，1995,42,247-254。Wynn,P.C.,Wallace,A.L.C.,Kirby,A.C.,AnnisOn,E.F.生长激素的给与对美利奴羊羊毛生长的作用。澳大利亚生物科学杂志，41,177-187。
序列表(1)一般资料(ⅰ)申请人NORTHSTER BIOLOGICALS PTY LTD(ⅱ)发明名称肽、抗体、疫苗及其用途(ⅲ)序列数57(ⅳ)通信地址(A)收信人GRIFFITH HACK(B)街道509 ST KILDA ROAD(C)城市MELBOURNE(D)州VICTORIA(E)国家澳大利亚(F)邮政编码3004(ⅴ)计算机可读形式(A)媒体类型软盘(B)计算机IBM PC兼容机(C)操作系统PC-DOS/MS-DOS(D)软件PatentIn Release#1.0，版本1.30(ⅵ)当前申请数据(A)申请号AU PN9990(B)提交日期1996年5月22日(C)分类(ⅷ)代理律师/代理人资料(A)姓名SANTER,VIVIEN(C)参考/档案号JMW/SW:FP4656(ⅸ)电讯资料(A)电话+61392438300(B)传真+61392438333
(2)SEQ ID NO:1的信息(ⅰ)顺序特征(A)长度7个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型无相关的(D)拓扑学线性(ⅱ)分子类型肽(ⅲ)假设否(ⅳ)反义否(ⅴ)片段类型N-末端(ⅹⅰ)顺序描述SEQ ID NO:1:
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Phe Cys Phe Trp Lys Thr Cys Phe Cys1 5(2)SEQ ID NO:3的信息(ⅰ)顺序特征(A)长度8个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型无相关的(D)拓扑学线性
(ⅱ)分子类型肽(ⅲ)假设否(ⅳ)反义否(ⅴ)片段类型N-末端(ⅹⅰ) 顺序描述SEQ ID NO:3:
Cys Phe Trp Lys Thr Cys Ser Gly1 5(2)SEQ ID NO:4的信息(ⅰ)顺序特征(A)长度7个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型无相关的(D)拓扑学线性(ⅱ)分子类型肽(ⅲ)假设否(ⅳ)反义否(ⅴ)片段类型N-末端(ⅹⅰ)顺序描述SEQ ID NO:4:
Phe Trp Lys Thr Ser Gly Gly1 5(2)SEQ ID NO:5的信息(ⅰ)顺序特征(A)长度13个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型无相关的(D)拓扑学线性(ⅱ)分子类型肽(ⅲ)假设否(ⅳ)反义否(ⅴ)片段类型N-末端(ⅹⅰ)倾序描述SEQ ID NO:5:
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Met Phe Pro Asn Gly Thr Ala Ser Ser Pro Ser1 5 10(2)SEQ ID NO:7的信息(ⅰ)顺序特征(A)长度11个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型无相关的(D)拓扑学线性(ⅱ)分子类型肽(ⅲ)假设否(ⅳ)反义否(ⅴ)片段类型内部的(ⅹⅰ)顺序描述SEQ ID NO:7:
Gln Asn Gly Thr Leu Ser Glu Gly Gln Gly Ser1 5 10(2)SEQ ID NO:8的信息(ⅰ)顺序特征(A)长度8个氨基酸(B)类型氨基酸
(C)链型无相关的(D)拓扑学线性(ⅱ)分子类型肽(ⅲ)假设否(ⅳ)反义否(ⅴ)片段类型C-末端(ⅹⅰ)顺序描述SEQ ID NO:8:
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Met Phe Pro Asn Gly Thr Ala Ser Ser Pro Ser1 5 10(2)SEQ ID NO:10的信息(ⅰ)顺序特征(A)长度11个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型无相关的(D)拓扑学线性(ⅱ)分子类型肽(ⅲ)假设否(ⅳ)反义否(ⅴ)片段类型内部的
(ⅹⅰ)顺序描述SEQ ID NO:10:
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Ala Glu Gln Asp Asp Ala Thr Val1 5(2)SEQ ID NO:12的信息(ⅰ)顺序特征(A)长度11个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型无相关的(D)拓扑学线性(ⅱ)分子类型肽(ⅲ)假设否(ⅳ)反义否(ⅴ)片段类型N-末端(ⅹⅰ) 顺序描述SEQ ID NO:12:
Met Phe Pro Asn Gly Thr Ala Pro Ser Pro Thr1 5 10(2)SEQ ID NO:13的信息(ⅰ)顺序特征
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Ala Glu Gin Asp Asp Ala Thr Val1 5(2)SEQ ID NO:15的信息(ⅰ)顺序特征(A)长度8个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型无相关的(D)拓扑学线性(ⅱ)分子类型肽(ⅲ)假设否
(ⅳ)反义否(ⅴ)片段类型N-末端(ⅹⅰ)顺序描述SEQ ID NO:15:
Met Asp Met Ala Asp Glu Pro Leu1 5(2)SEQ ID NO:16的信息(ⅰ)顺序特征(A)长度11个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型无相关的(D)拓扑学线性(ⅱ)分子类型肽(ⅲ)假设否(ⅳ)反义否(ⅴ)片段类型内部的(ⅹⅰ)顺序描述SEQ ID NO:16:
Gln Thr Glu Pro Tyr Tyr Asp Leu Thr Ser Asn1 5 10(2)SEQ ID NO:17的信息(ⅰ)顺序特征(A)长度8个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型无相关的(D)拓扑学线性(ⅱ)分子类型肽(ⅲ)假设否(ⅳ)反义否(ⅴ)片段类型C-末端(ⅹⅰ)顺序描述SEQ ID NO:17:
Gln Ile Ser Pro Thr Pro Ala Leu1 5(2)SEQ ID NO:18的信息
(ⅰ)顺序特征(A)长度7个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型无相关的(D)拓扑学线性(ⅱ)分子类型肽(ⅲ)假设否(ⅳ)反义否(ⅴ)片段类型N-末端(ⅹⅰ)顺序描述SEQ ID NO:18:
Met Asp Leu Val Ser Glu Leu1 5(2)SEQ ID NO:19的信息(ⅰ)顺序特征(A)长度11个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型无相关的(D)拓扑学线性(ⅱ)分子类型肽(ⅲ)假设否(ⅳ)反义否(ⅴ)片段类型内部的(ⅹⅰ)顺序描述SEQ ID NO:19:
Gln Thr Glu Pro Tyr Tyr Asp Leu Ala Ser Asn1 5 10(2)SEQ ID NO:20的信息(ⅰ)顺序特征(A)长度8个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型无相关的(D)拓扑学线性
(ⅱ)分子类型肽(ⅲ)假设否(ⅳ)反义否(ⅴ)片段类型C-末端(ⅹⅰ)顺序描述SEQ ID NO:20:
Ala Ile Ser Pro Thr Pro Ala Leu1 5(2)SEQ ID NO:21的信息(ⅰ)顺序特征(A)长度8个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型无相关的(D)拓扑学线性(ⅱ)分子类型肽(ⅲ)假设否(ⅳ)反义否(ⅴ)片段类型N-末端(ⅹⅰ)顺序描述SEQ ID NO:21:
Met Asp Met Ala Tyr Glu Leu Leu1 5(2)SEQ ID NO:22的信息(ⅰ)顺序特征(A)长度11个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型无相关的(D)拓扑学线性(ⅱ)分子类型肽(ⅲ)假设否(ⅳ)反义否(ⅴ)片段类型内部的(ⅹⅰ) 顺序描述SEQ ID NO:22:
Gln Thr Glu Pro Tyr Tyr Asp Leu Thr Ser Asn1 5 10
(2)SEQ ID NO:23的信息(ⅰ)顺序特征(A)长度8个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型无相关的(D)拓扑学线性(ⅱ)分子类型肽(ⅲ)假设否(ⅳ)反义否(ⅴ)片段类型C-末端(ⅹⅰ)顺序描述SEQ ID NO:23:
Ala Ile Ser Pro Thr Pro Ala Leu1 5(2)SEQ ID NO:24的信息(ⅰ)顺序特征(A)长度8个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型无相关的(D)拓扑学线性(ⅱ)分子类型肽(ⅲ)假设否(ⅳ)反义否(ⅴ)片段类型N-末端(ⅹⅰ)顺序描述SEQ ID NO:24:
Met Glu Met Ser Ser Glu Gln Leu1 5(2)SEQ ID NO:25的信息(ⅰ)顺序特征(A)长度11个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型无相关的
(D)拓扑学线性(ⅱ)分子类型肽(ⅲ)假设否(ⅳ)反义否(ⅴ)片段类型内部的(ⅹⅰ)顺序描述SEQ ID NO:25:
Gln Thr Glu Pro Tyr Tyr Asp Met Thr Ser Asn1 5 10(2)SEQ ID NO:26的信息(ⅰ)顺序特征(A)长度8个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型无相关的(D)拓扑学线性(ⅱ)分子类型肽(ⅲ)假设否(ⅳ)反义否(ⅴ)片段类型C-末端(ⅹⅰ)顺序描述SEQ ID NO:26:
Ala Ile Ser Pro Thr Pro Ala Leu1 5(2)SEQ ID NO:27的信息(ⅰ)顺序特征(A)长度8个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型无相关的(D)拓扑学线性(ⅱ)分子类型肽(ⅲ)假设否(ⅳ)反义否(ⅴ)片段类型N-末端(ⅹⅰ)顺序描述SEQ ID NO:27:
Met Glu Leu Thr Ser Glu Gln Phe1 5(2)SEQ ID NO:28的信息(ⅰ)顺序特征(A)长度11个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型无相关的(D)拓扑学线性(ⅱ)分子类型肽(ⅲ)假设否(ⅳ)反义否(ⅴ)片段类型内部的(ⅹⅰ)顺序描述SEQ ID NO:28:
Gln Thr Glu Pro Tyr Tyr Asp Met Thr Ser Asn1 5 10(2)SEQ ID NO:29的信息(ⅰ)顺序特征(A)长度8个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型无相关的(D)拓扑学线性(ⅱ)分子类型肽(ⅲ)假设否(ⅳ)反义否(ⅴ)片段类型C-末端(ⅹⅰ)顺序描述SEQ ID NO:29:
Ala Ile Ser Pro Thr Pro Ala Leu1 5(2)SEQ ID NO:30的信息(ⅰ)顺序特征(A)长度7个氨基酸
(B)类型氨基酸(C)链型无相关的(D)拓扑学线性(ⅱ)分子类型肽(ⅲ)假设否(ⅳ)反义否(ⅴ)片段类型N-末端(ⅹⅰ)顺序描述SEQ ID NO:30:
Met Asp Met Leu His Pro Ser1 5(2)SEQ ID NO:31的信息(ⅰ)顺序特征(A)长度11个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型无相关的(D)拓扑学线性(ⅱ)分子类型肽(ⅲ)假设否(ⅳ)反义否(ⅴ)片段类型内部的(ⅹⅰ)顺序描述SEQ ID NO:31:
Ala Gly Pro Ser Pro Ala Gly Leu Ala Val Ser1 5 10(2)SEQ ID NO:32的信息(ⅰ)顺序特征(A)长度8个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型无相关的(D)拓扑学线性(ⅱ)分子类型肽(ⅲ)假设否(ⅳ)反义否(ⅴ)片段类型C-末端
(ⅹⅰ)顺序描述SEQ ID NO:32:
Pro Leu Pro Glu Glu Pro Ala Phe1 5(2)SEQ ID NO:33的信息(ⅰ)顺序特征(A)长度8个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型无相关的(D)拓扑学线性(ⅱ)分子类型肽(ⅲ)假设否(ⅳ)反义否(ⅴ)片段类型N-末端(ⅹⅰ)顺序描述SEQ ID NO:33:
Met Ala Thr Val Thr Tyr Pro Ser1 5(2)SEQ ID NO:34的信息(ⅰ)顺序特征(A)长度11个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型无相关的(D)拓扑学线性(ⅱ)分子类型肽(ⅲ)假设否(ⅳ)反义否(ⅴ)片段类型内部的(ⅹⅰ)顺序描述SEQ ID NO:34:
Ala Gly Thr Ser Leu Ala Gly Leu Ala Val Ser1 5 10(2)SEQ ID NO:35的信息(ⅰ)顺序特征
(A)长度8个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型无相关的(D)拓扑学线性(ⅱ)分子类型肽(ⅲ)假设否(ⅳ)反义否(ⅴ)片段类型C-末端(ⅹⅰ)顺序描述SEQ ID NO:35:
Pro Leu Pro Glu Glu Pro Ala Phe1 5(2)SEQ ID NO:36的信息(ⅰ)顺序特征(A)长度8个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型无相关的(D)拓扑学线性(ⅱ)分子类型肽(ⅲ)假设否(ⅳ)反义否(ⅴ)片段类型N-末端(ⅹⅰ)顺序描述SEQ ID NO:36:
Met Ala Ala Val Thr Tyr Pro Ser1 5(2)SEQ ID NO:37的信息(ⅰ)顺序特征(A)长度11个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型无相关的(D)拓扑学线性(ⅱ)分子类型肽(ⅲ)假设否
(ⅳ)反义否(ⅴ)片段类型内部的(ⅹⅰ)顺序描述SEQ ID NO:37:
Ala Gly Thr Ser Leu Ala Gly Leu Ala Val Ser1 5 10(2)SEQ ID NO:38的信息(ⅰ)顺序特征(A)长度8个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型无相关的(D)拓扑学线性(ⅱ)分子类型肽(ⅲ)假设否(ⅳ)反义否(ⅴ)片段类型C-末端(ⅹⅰ)顺序描述SEQ ID NO:38:
Pro Leu Pro Glu Glu Pro Ala Phe1 5(2)SEQ ID NO:39的信息(ⅰ)顺序特征(A)长度9个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型无相关的(D)拓扑学线性(ⅱ)分子类型肽(ⅲ)假设否(ⅳ)反义否(ⅴ)片段类型N-末端(ⅹⅰ)顺序描述SEQ ID NO:39:
Met Ser Ala Pro Ser Thr Leu Pro Pro1 5(2)SEQ ID NO:40的信息
(ⅰ)顺序特征(A)长度11个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型无相关的(D)拓扑学线性(ⅱ)分子类型肽(ⅲ)假设否(ⅳ)反义否(ⅴ)片段类型内部的(ⅹⅰ)顺序描述SEQ ID NO:40:
Gly Pro Gly Asp Ala Arg Ala Ala Gly Met Val1 5 10(2)SEQ ID NO:41的信息(ⅰ)顺序特征(A)长度7个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型无相关的(D)拓扑学线性(ⅱ)分子类型肽(ⅲ)假设否(ⅳ)反义否(ⅴ)片段类型C-末端(ⅹⅰ)顺序描述SEQ ID NO:41:
Thr Ser Leu Asp Ala Thr Val1 5(2)SEQ ID NO:42的信息(ⅰ)顺序特征(A)长度9个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型无相关的(D)拓扑学线性
(ⅱ)分子类型肽(ⅲ)假设否(ⅳ)反义否(ⅴ)片段类型N-末端(ⅹⅰ)顺序描述SEQ ID NO:42:
Met Asn Thr Pro Ala Thr Leu Pro Leu1 5(2)SEQ ID NO:43的信息(ⅰ)顺序特征(A)长度10个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型无相关的(D)拓扑学线性(ⅱ)分子类型肽(ⅲ)假设否(ⅳ)反义否(ⅴ)片段类型内部的(ⅹⅰ)顺序描述SEQ ID NO:43:
Ser Asp Gly Thr Gly Thr Ala Gly Met Val1 5 10(2)SEQ ID NO:44的信息(ⅰ)顺序特征(A)长度7个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型无相关的(D)拓扑学线性(ⅱ)分子类型肽(ⅲ)假设否(ⅳ)反义否(ⅴ)片段类型C-末端(ⅹⅰ)顺序描述SEQ ID NO:44:
Thr Ser Leu Asp Ala Thr Val1 5
(2)SEQ ID NO:45的信息(ⅰ)顺序特征(A)长度7个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型无相关的(D)拓扑学线性(ⅱ)分子类型肽(ⅲ)假设否(ⅳ)反义否(ⅴ)片段类型N-末端(ⅹⅰ)顺序描述SEQ ID NO:45:
Met Glu Pro Leu Phe pro Ala1 5(2)SEQ ID NO:46的信息(ⅰ)顺序特征(A)长度10个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型无相关的(D)拓扑学线性(ⅱ)分子类型肽(ⅲ)假设否(ⅳ)反义否(ⅴ)片段类型内部的(ⅹⅰ)顺序描述SEQ ID NO:46:
Val Gly Pro Ala Pro Ser Ala Gly Ala Arg1 5 10(2)SEQ ID NO:47的信息(ⅰ)顺序特征(A)长度8个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型无相关的
(D)拓扑学线性(ⅱ)分子类型肽(ⅲ)假设否(ⅳ)反义否(ⅴ)片段类型C-末端(ⅹⅰ)顺序描述SEQ ID NO:47:
Ala Leu Pro Gln Glu Pro Ala Ser1 5(2)SEQ ID NO:48的信息(ⅰ)顺序特征(A)长度7个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型无相关的(D)拓扑学线性(ⅱ)分子类型肽(ⅲ)假设否(ⅳ)反义否(ⅴ)片段类型N-末端(ⅹⅰ)顺序描述SEQ ID NO:48:
Met Glu Pro Leu Ser Leu Ala1 5(2)SEQ ID NO:49的信息(ⅰ)顺序特征(A)长度10个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型无相关的(D)拓扑学线性(ⅱ)分子类型肽(ⅲ)假设否(ⅳ)反义否(ⅴ)片段类型内部的(ⅹⅰ)顺序描述SEQ ID NO:49:
Val Gly Ser Ala Ser Pro Met Gly Ala Arg1 5 10(2)SEQ ID NO:50的信息(ⅰ)顺序特征(A)长度8个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型无相关的(D)拓扑学线性(ⅱ)分子类型肽(ⅲ)假设否(ⅳ)反义否(ⅴ)片段类型C-末端(ⅹⅰ)顺序描述SEQ ID NO:50:
Thr Leu Pro Glu Glu Pro Thr Ser1 5(2)SEQ ID NO:51的信息(ⅰ)顺序特征(A)长度8个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型无相关的(D)拓扑学环状(ⅱ)分子类型肽(ⅲ)假设否(ⅳ)反义否(ⅴ)片段类型无相关的(ⅹⅰ)顺序描述SEQ ID NO:51:
X Tyr Asp Thr Lys Val Phe Cys Ser1 5其中X为Nme(2)SEQ ID NO:52的信息(ⅰ)顺序特征(A)长度11个氨基酸
(B)类型氨基酸(C)链型无相关的(D)拓扑学线性(ⅱ)分子类型肽(ⅲ)假设否(ⅳ)反义否(ⅴ)片段类型N-末端(ⅹⅰ)顺序描述SEQ ID NO:52:
Ala Tyr Met Gly Trp Ser Cys Thr Lys Trp Phe1 5 10(2)SEQ ID NO:53的信息(ⅰ)顺序特征(A)长度16个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型无相关的(D)拓扑学线性(ⅱ)分子类型肽(ⅲ)假设否(ⅳ)反义否(ⅴ)片段类型N-末端(ⅹⅰ)顺序描述SEQ ID NO:53:
Phe Trp Lys Thr Ser Lys His Trp Ser Tyr Gly Leu Arg1 5 10Asp Gly Cys15(2)SEQ ID NO:54的信息(ⅰ)顺序特征(A)长度12个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型(D)拓扑学线性(ⅱ)分子类型肽(ⅲ)假设否
(ⅳ)反义否(ⅴ)片段类型N-末端(ⅹⅰ)顺序描述SEQ ID NO:54:
Phe Arg Cys Pro Pro Cys Thr Glu Arg Leu Ala Ala1 5 10(2)SEQ ID NO:55的信息(ⅰ)顺序特征(A)长度12个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型无相关的(D)拓扑学线性(ⅱ)分子类型肽(ⅲ)假设否(ⅳ)反义否(ⅴ)片段类型N-末端(ⅹⅰ)顺序描述SEQ ID NO:55:
Glu Val Leu Phe Arg Cys Pro Pro Cys Thr Pro Glu1 5 10(2)SEQ ID NO:56的信息(ⅰ)顺序特征(A)长度10个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型无相关的(D)拓扑学线性(ⅱ)分子类型肽(ⅲ)假设否(ⅳ)反义否(ⅴ)片段类型N-末端(ⅹⅰ)顺序描述SEQ ID NO:56:
Gly Ala Gly Ala Val Gly Ala Pro Val Val1 5 10
(2)SEQ ID NO:57的信息(ⅰ)顺序特征(A)长度12个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型(D)拓扑学线性(ⅱ)分子类型肽(ⅲ)假设否(ⅳ)反义否(ⅴ)片段类型N-末端(ⅹⅰ)顺序描述SEQ ID NO:57:
Asp Glu Ala Ile His Cys Pro Pro Cys Ser Glu Glu1 5 10
权利要求
1．一种非天然产生的肽，其氨基酸序列得自或类似于天然动物激素、载体蛋白、结合蛋白或所述激素的受体，其中所述的肽能诱出一种或多种在体内能调制所述激素或受体活性的抗体。
2．按照权利要求1的肽，其中所述天然动物激素是促生长素抑制激素。
3．按照权利要求1或权利要求2的肽，选自一种或多种本文定义的No.1至53的肽。
4．按照权利要求3的肽，其中所述肽是选自SEQ ID NO:1、SEQID NO:2、SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:51的一种肽。
5．按照权利要求2至4的任何一项的肽，其中所述抗体调制选自SSTR2、SSTR3和SSTR5的一种或多种激素受体的活性。
6按照权利要求1的肽，其中所述结合蛋白是胰岛素样生长因子结合蛋白(IGFBP)。
7．按照权利要求6的肽，所述肽选自No.54至57的肽。
8．按照权利要求1至7的任何一项的肽，其中所述的激素、载体蛋白结合蛋白或其受体是人类来源的。
9．按照权利要求1至8的任何一项的肽，所述肽与载体偶联形成肽/载体复合物。
10．按照权利要求9的肽，其中所述载体是多抗原肽(MAP)系统。
11．按照权利要求10的肽，其中所述MAP系统包含寡聚分支赖氨酸核心。
12按照权利要求11的肽，其中所述MAP系统包含至少18个分支赖氨酸核心。
13．对权利要求1至12的任何一项的肽特异性的免疫反应分子(IRM)。
14．按照权利要求13的免疫反应分子，所述分子选自天然产生的抗体、重组抗体、scantibodies、合成抗体、融合抗体、嵌合抗体和其功能片段。
15．药用组合物，包含免疫原性有效量的按照权利要求1至14的任何一项的肽或分子以及药学上或兽医上可接受的载体。
16．疫苗制剂，包含按照权利要求1至15的任何一项的肽或分子。
17．兽医或药学上可接受的载体，包含具有免疫佐剂活性的鲨鱼油。
18．按照权利要求17的载体，其中所述的油是来自深海鲨鱼，并且在上皮表面或粘膜表面刺激抗体产生。
19．按照权利要求17或18的载体，其中所述的油包含30-50％的二酰甘油醚。
20．按照权利要求19的载体，包含20-70％ 十八碳-9-烯基·甘油基醚3-25％ 1-十六烷基·甘油基醚1-15％ 十六碳-7-烯基·甘油基醚1.5-20％十八烷基·甘油基醚1-15％ 二十碳-9-烯基·甘油基醚1-25％ 卵磷脂1-25％ DLα-生育酚醋酸酯0-3％ 1,2,5-二羟基胆钙化醇0-5％ 维生素A0-40％ 非矿物油
21．一种生产免疫原性组合物的方法，包含将能诱出免疫应答的肽与按照权利要求17至20的任何一项的载体接触的步骤。
22．按照权利要求21的方法，其中所述的肽是按照权利要求1至12的任何一项的肽。
23．传递给动物能诱出免疫应答的肽的方法，包含与给予所述的肽以及有效量的按照权利要求17至20的任何一项的载体的步骤。
24．在动物中调制一种或多种激素应答的方法，包含给予所述动物激素调制有效量的按照权利要求1至15的任何一项的肽或分子的步骤。
25．按照权利要求24的方法，其中所述的激素应答是对选自促生长素抑制素、胃泌素、胰岛素、胰高血糖素、催乳素、molitin、缩胆囊素、促胰液素、前列腺素、IGFBP、IGF-Ⅰ、IGF-Ⅱ、生长激素、甲状腺激素、黄体生成素(LHRM)和肾上腺激素的一种或多种激素的应答。
26．在动物中增强胃肠功能的方法，包含给予所述动物有效量的基于SSTR和/或IGFBP的肽的步骤。
27．在动物中增加合成代谢和/或体重的方法，包含给予所述动物有效量的基于SSTR和/或IGFBP的肽的步骤。
28．在动物中增加循环的胰岛素、IGF-Ⅰ和/或IGF-Ⅲ的方法，包含给予所述动物有效量的基于SSTR和/或IGFBP的肽的步骤。
29．在动物中抑制胃酶的方法，包含给予所述动物有效量的基于SSTR的肽的步骤。
30．在产纤维动物中增加纤维产量并可选地进一步改变次级毛囊对初级毛囊的比例的方法，包含给予所述动物有效量的基于SSTR和/或IGFBP的肽的步骤。
31．在产奶动物中增加产奶量的方法，包含给予所述动物有效量的基于SSTR和/或IGFBP的肽的步骤。
32．在动物中降低c-fos基因活性和/或增加c-jun基因活性的方法，包含给予所述动物有效量的基于SSTR的肽的步骤。
33．在动物中改变钙代谢的方法，包含给予所述动物有效量的基于SSTR的肽的步骤。
34．在动物中刺激对激素、载体蛋白、结合蛋白或激素受体的免疫应答的方法，其中所述的免疫应答调制激素活性，所述的方法包含给予免疫应答诱导有效量的按照权利要求1至13的任何一项的肽。
35．刺激对激素、载体蛋白、结合蛋白或激素受体的抗体应答的方法，其中所述的抗体应答在动物中调制激素或受体活性，并且其中所述的抗体应答导致抗体被分泌到所述动物的粘膜和/或所述动物的奶中，所述方法包括给给予抗体刺激有效量的本发明肽。
36．包含按照权利要求1至13的任何一项的肽的试剂盒。
37．包含按照权利要求13或14的分子的试剂盒。
38．按照权利要求36或权利要求37的试剂盒，还包含具有免疫佐剂活性的鲨鱼油。
全文摘要
本发明涉及非天然产生的免疫原性肽和免疫反应分子,它们调制激素或其受体的活性。这些肽基于促生长抑制素、促生长抑制素受体和胰岛素样生长因子结合蛋白的部分。也设想了在动物中调制激素活性的方法和用于它们的组合物。
文档编号C12N15/09GK1226896SQ97196524
公开日1999年8月25日 申请日期1997年5月22日 优先权日1996年5月22日
发明者N·L·格雷蒂, S·L·韦斯特布鲁克, D·J·金斯顿 申请人:北星生物有限公司