vt%的乙醇，并于6°C冷藏12小时；然后在8°C下于10000r/min冷 冻离心8min，收集多糖沉淀，用5ml无菌蒸馏水复溶获得浓度为lg/10ml的老鹰茶茶多糖浓 缩物。
[0030] 2、冠突散囊菌孢子悬浮液的制备
[0031] ①冠突散囊菌的驯化
[0032] 将冠突散囊菌接种于含老鹰茶茶多糖浓缩物的PDA培养基试管斜面上，老鹰茶茶 多糖浓缩物的初始浓度为〇. 2g/10ml，于25~28°C培养3~5天，选取菌落半径最大的冠突 散囊菌接种于含浓度为0. 5g/10ml老鹰茶茶多糖浓缩物的PDA培养基试管斜面上，于25~ 28°C培养3~5天，选取菌落半径最大的冠突散囊菌继续驯化；以此类推，按照0. 2g/10ml、 0. 5g/10ml、0. 8g/10ml、l. 2g/10ml、l. 5g/10ml的浓度梯度逐步提高PDA试管斜面中老鹰茶 茶多糖浓缩物的浓度进行驯化，最后选取能在含浓度为1. 2~I. 5g/10ml老鹰茶茶多糖浓 缩物的PDA培养基试管斜面上形成最大菌落半径的冠突散囊菌即为已驯化的冠突散囊菌， 用来制备冠突散囊菌孢子。
[0033] ②孢子收集
[0034] 将已驯化的冠突散囊菌按0. 5~Img菌丝每支试管的接种比，接种于PDA培养基 试管斜面上，在28°C下培养7天，然后用浓度为lg/10ml的老鹰茶茶多糖浓缩物5ml洗涤冠 突散囊菌孢子斜面，收集洗涤液获得冠突散囊菌孢子悬浮液。
[0035] 3、老鹰茶金花干酪成熟剂的制备：将冠突散囊菌孢子悬浮液在_80°C下速冻 6min，然后在-30°C，-20Pa条件下冷冻干燥12h至粉末状，即得老鹰茶金花干酪成熟剂。
[0036] 4、冠突散囊菌孢子计数：取0.1 g老鹰茶金花干酪成熟剂，用Iml无菌水溶解，移取 0.1 ml于血球计数板上，用显微镜计数得冠突散囊菌孢子数为I. 4X IOltl个。
[0037] 5、金花干酪的制作及老鹰茶金花干酪成熟剂的抑菌效果
[0038] 将1000ml鲜羊乳在75°C下杀菌25s后冷却至28°C，得到处理乳；在1000ml处理乳 中加入市售乳酸菌发酵剂2g，在30°C恒温培养至pH值降低到6. 8,加入市售凝乳酶2g，凝 乳30min，得凝乳，并切割凝块，65°C搅拌排乳，在圆形模具中压制成型，将成型乳块以20% 食盐水盐渍30min，然后在成型乳块的表面喷洒步骤3制备得到的老鹰茶金花干酪成熟剂， 老鹰茶金花干酪成熟剂的喷洒质量为成型乳块质量的0. 06% ;随后在20°C、相对湿度为 85%条件下成熟7天，在12°C、相对湿度为90%条件下成熟10天，在8°C、相对湿度为90% 条件下继续成熟25天至完全成熟。
[0039] 以市售沙门柏干酪青霉成熟的干酪作为对照。按照GB 4789. 3平板计数法、GB 4789. 10平板计数法、GB 4789. 4和GB 4789. 30规定的方法对干酪中的大肠菌群、金黄色葡 萄球菌、沙门氏菌和李斯特氏菌进行计数，结果见表1。金花干酪中的大肠菌群和金黄色葡 萄球菌数显著低于对照干酪。
[0040] 表1干酪中微生物数（？，n=20)
[0042] 注：a、b表示金花干酪中的微生物指标与相应列的对照干酪的微生物指标有显著 性（P〈0. 01)差异。
【主权项】
1. 一种老鹰茶金花干酪成熟剂，其特征在于：所述老鹰茶金花干酪成熟剂是由冠突散 囊菌孢子分散于老鹰茶茶多糖浓缩物中并经冷冻干燥后得到的，其中每克老鹰茶金花干酪 成熟剂中含冠突散囊菌孢子I X IOltl~6 X 10 1(1个。2. 根据权利要求1所述的老鹰茶金花干酪成熟剂的制备方法，其特征在于包括如下步 骤： 1) 老鹰茶茶多糖浓缩物的制备 将老鹰茶茶叶按10~12g/50ml的比例加入水中，浸提并过滤获得茶汤，然后加入茶汤 3倍体积的95vt%乙醇，并于4~8°C冷藏12~24小时，随后在4~8°C下冷冻离心6~ lOmin，收集多糖沉淀，用5~IOml无菌蒸馏水复溶获得浓度为lg/10ml的老鹰茶茶多糖浓 缩物； 2) 冠突散囊菌的驯化 将冠突散囊菌接种于含老鹰茶茶多糖浓缩物的PDA培养基试管斜面上，逐步提高老鹰 茶茶多糖浓缩物的浓度进行驯化，得到已驯化的冠突散囊菌；驯化的过程中，老鹰茶茶多糖 浓缩物的初始浓度为〇. 2g/10ml，最终驯化浓度为1. 2~I. 5g/10ml ; 3) 孢子收集 将已驯化的冠突散囊菌接种于PDA培养基试管斜面上，在28~30°C下培养5~7天， 然后用浓度为lg/l〇ml的老鹰茶茶多糖浓缩物5~IOml洗涤冠突散囊菌孢子斜面，收集洗 涤液获得冠突散囊菌孢子悬浮液； 4) 冷冻干燥 将冠突散囊菌孢子悬浮液在-80~-60°C下冷冻6~lOmin，然后冷冻干燥至粉末状， 即得老鹰茶金花干酪成熟剂。3. 根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于： 所述冠突散囊菌的驯化是将冠突散囊菌接种于含老鹰茶茶多糖浓缩物的PDA培养基 试管斜面上，老鹰茶茶多糖浓缩物的初始浓度为0. 2g/10ml，于25~28°C培养3~5天，选 取菌落半径最大的冠突散囊菌接种于含浓度为0. 5g/10ml老鹰茶茶多糖浓缩物的PDA培 养基试管斜面上，于25~28°C培养3~5天，选取菌落半径最大的冠突散囊菌继续驯化； 以此类推，按照 0. 2g/10ml、0. 5g/10ml、0. 8g/10ml、l. 2g/10ml、l. 5g/10ml 的浓度梯度逐步 提高PDA试管斜面中老鹰茶茶多糖浓缩物的浓度进行驯化，最后选取能在含浓度为I. 2~ I. 5g/10ml老鹰茶茶多糖浓缩物的PDA培养基试管斜面上形成最大菌落半径的冠突散囊菌 即为已驯化的冠突散囊菌。4. 根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于： 步骤1)中所述浸提是于90~100°C浸提5~lOmin。5. 根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于： 所述冠突散囊菌孢子悬浮液中含冠突散囊菌孢子IX 101°~6X10 1(1个。6. 根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于： 所述冷冻干燥的条件为-30~_20°C、-20~-IOPa下，冷冻干燥的时间为12~24h。7. 根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于： 步骤3)中已驯化的冠突散囊菌接种于PDA培养基试管斜面上的接种比例为0. 5~Img 菌丝每支试管。
【专利摘要】本发明公开了一种老鹰茶金花干酪成熟剂及其制备方法，其中老鹰茶金花干酪成熟剂是由老鹰茶茶多糖浓缩物和冠突散囊菌孢子构成，每克老鹰茶金花干酪成熟剂中含冠突散囊菌孢子1×1010～6×1010个。本发明老鹰茶金花干酪成熟剂可作为霉菌干酪成熟使用，并具有老鹰茶独特的茶香和冠突散囊菌菌体金黄的色泽。本发明丰富了干酪成熟剂的种类和霉菌成熟干酪的品种，同时可抑制大肠菌群、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌和李斯特氏菌等有害微生物在干酪中的滋生。
【IPC分类】A23C19/032
【公开号】CN104982540
【申请号】CN201510430479
【发明人】刘冬, 毕璋友, 李萍, 吴成方
【申请人】刘冬
【公开日】2015年10月21日
【申请日】2015年7月20日