单菌落于IOmL TSB(0.5%NaCl，pH 8.0)试管中，在37°C转速为180r/min的摇床中培养 1她，获得稳定初期的菌体培养液。将等量的每株单增李斯特菌培养液混合于离屯、管中，离 屯、10min(25°C，3000g)，用PBS缓冲溶液对菌体进行重悬，调整菌体浓度为约化Og CFU/mL。 将混合菌株悬液添加到500mL 2.5%NaCl溶液中，获得单增李斯特菌菌体悬浮液。
[0036] 1.3.2样品制备及接种
[0037] 将鲜活的市售南美白对邮去头去尾去壳去肠线后置于4°C条件下备用。使用时将 邮仁置于生物安全柜中，待其溫度恢复至室溫(25±2°C)。部分邮仁作为自然污染的样品直 接用于后续实验，另一部分邮仁置于紫外下照射30min去除本底微生物，然后，运用浸泡接 种法将无菌邮仁样品（7 ± Ig/只）分别浸没于1.3.1中所制备的副溶血性弧菌和单增李斯特 菌菌体悬浮液中，震荡摇晃30min。接种后的样品置于生物安全柜中静置30min，W使菌体更 好的附着于邮体中。最终接种于邮仁中菌体浓度约为约化Og CFU/mL。
[003引1.3.3酸性电解水的制备
[0039] 采用二槽隔膜电解水装置，将化Cl浓度分别为0.10%、0.15%和0.20%的去离子 水电解15min，获得抑值范围为2.28~2.39,氧化还原电位(ORP)范围为1077~1168mV和有 效氯(ACC)含量范围为36~73mg/L的酸性电解水。
[0040] 1.3.4不同方式处理邮仁
[0041] 超高压处理:将每只邮仁样品（接种副溶血性弧菌、接种单增李斯特菌及自然污 染)分别置于常规超高压（200、300和400MPa，溫度为室溫~25°C)中保压lOmin。放入含 0.85g/100mL灭菌生理盐水90mL的无菌匀质袋中拍打2min，获得均质液。然后选择合适稀释 度用0.85g/100mL灭菌生理盐水进行稀释。取I(K)化的稀释液进行涂布，副溶血性弧菌实验 处理组涂布于TCBS琼脂平板上，单增李斯特菌涂布于PALCAM琼脂平板上，自然污染的总微 生物涂布于TSA平板上，将平板在37°C条件下培养24~4她计算菌落数。每个处理均做2个平 行样本，每个稀释度重复2次。
[0042] 酸性电解水结合超高压技术处理:将备用的酸性电解水替换普通水作为液体介质 用于超高压杀菌技术。将每只邮仁样品（接种副溶血性弧菌、接种单增李斯特菌及自然污 染）分别置于更换了液体介质的超高压中保压lOmin。放入含0.85g/100mL灭菌生理盐水 90mL的无菌匀质袋中拍打2min，获得均质液。同超高压处理中平板计数方法计算菌落数。
[0043] 1.4数据分析
[0044] 运用SPSS17.0软件包(SPSS Inc.，化icago，USA)对实验数据进行处理和分析。采 用最小显著极差法化SD)对数据间的显著性进行比较(P = O.05)。
[0045] 2 结果
[0046] 2.1酸性电解水结合超高压技术处理对副溶血性弧菌的杀灭效果
[0047] 在生物安全柜内接种并干燥化后，邮仁中副溶血性弧菌的最初接种量为7.12Log CFU/g。图2中显示了不同方式处理后副溶血性弧菌的失活情况。在不同压力下，酸性电解水 结合超高压技术的杀菌效果均显著大于单纯超高压技术的杀菌效果(P<〇.05)，其中，酸性 电解水结合超高压技术在200、300和400M化压力下最多分别能减少副溶血性弧菌量为 3.32、4.56和6. OSLog CFU/g。说明，将酸性电解水作为一种新的压力介质用于超高压技术 比单纯超高压技术对副溶血性弧菌(革兰氏阴性细菌)的杀灭效率有明显的增强效果。
[0048] 2.2酸性电解水结合超高压技术处理对单增李斯特菌的杀灭效果
[0049] 邮仁中单增李斯特菌的最初接种量为6.94Log CFU/g。不同方式处理后单增李斯 特菌的失活情况如表1所示。显然，单纯超高压和酸性电解水结合超高压技术处理均能减少 邮仁中的单增李斯特菌。然而，通过显著性分析可知，加入化Cl浓度为0.15%制备的酸性电 解水后的超高压技术处理对邮仁中单增李斯特菌的杀菌能力均显著高于单纯超高压杀菌 技术(p<0.05)。因此，酸性电解水结合超高压技术对单增李斯特菌(革兰氏阳性细菌)具有 显著地杀灭效果。
[0050] 表1不同方式处理后单增李斯特菌与自然污染微生物失活情况
[0化2 ] 注:A不同的上标字母表示根据LSD检验得出地显著性差异，P = 0.05
[0053] 2.3酸性电解水结合超高压技术处理对自然污染微生物的杀灭效果
[0054] 为了进一步验证酸性电解水能有效提高超高压技术的杀菌效果，本实验对自然污 染的邮仁也进行了研究。不同方式处理后邮仁中自然污染微生物的失活情况如表1所示。在 未经处理的新鲜邮仁中初始微生物数量为6.72Log CFU/g。酸性电解水结合超高压技术处 理在200、300和400MPa下分别可降低 1.47 ±0.05，4.33±0.11 和5.66±0.06Log CFU/g邮仁 中自然污染微生物。与单纯超高压技术相比，酸性电解水结合超高压技术处理能显著(P< 0.05)减少总微生物群落。
[0055] 通过W上分析可知，将酸性电解水作为一种新的介质，是一种可有效提升超高压 技术杀菌效率的方法。
【主权项】
1. 一种提升超高压杀菌效果的方法，其特征在于，所述方法包括以酸性电解水为超高 压液体介质，对水产品进行超高压杀菌处理。2. 根据权利要求1所述的提升超高压杀菌效果的方法，其特征在于，所述酸性电解水的 pH值范围为2.28~2.39,氧化还原电位范围为1077~1168mV，有效氯含量范围为36~73mg/ L〇3. 根据权利要求2所述的提升超高压杀菌效果的方法，其特征在于，所述酸性电解水是 通过将含0. lwt%~0.2wt%NaCl的去离子水电解5~15min制备而得。4. 根据权利要求3所述的提升超高压杀菌效果的方法，其特征在于，所述所述酸性电解 水是通过将含〇.15wt%NaCl的去离子水电解15min制备而得。5. 根据权利要求1所述的提升超高压杀菌效果的方法，其特征在于，所述超高压杀菌处 理的压力为2〇〇~400MPa。6. 根据权利要求1所述的提升超高压杀菌效果的方法，其特征在于，所述超高压杀菌处 理的时间为5~15min。7. 根据权利要求1所述的提升超高压杀菌效果的方法，其特征在于，所述水产品包括南 美白对虾、牡蛎或鱼。8. 根据权利要求1所述的提升超高压杀菌效果的方法，其特征在于，所述超高压杀菌处 理前还包括对水产品进行前处理的步骤。9. 根据权利要求8所述的提升超高压杀菌效果的方法，其特征在于，所述前处理为紫外 福照10~30min。
【专利摘要】本发明公开了一种提升超高压杀菌效果的方法，所述方法包括以酸性电解水为超高压液体介质，对水产品进行超高压杀菌处理。所述酸性电解水的pH值范围为2.28～2.39，氧化还原电位范围为1077～1168mV，有效氯含量范围为36～73mg/L。本发明创新地将酸性电解水作为一种新的压力传导介质用于超高压技术，构建了一种全新的杀菌技术，以服务于食品工业；为降低致病菌的患病风险，维护公共卫生提供强有力的技术支持。
【IPC分类】A23L5/20, A23L5/30
【公开号】CN105661264
【申请号】CN201610015367
【发明人】赵勇, 杜苏萍, 张昭寰, 娄阳, 肖莉莉, 潘迎捷
【申请人】上海海洋大学
【公开日】2016年6月15日
【申请日】2016年1月11日