专利名称：纳米中药雷公藤/昆明山海棠剂型及其制备方法
技术领域：
本发明涉及一种中药制剂及其制备方法，具体地说涉及一种纳米中药雷公藤/昆明山海棠的新剂型，即一种利用纳米技术制备的中药雷公藤/昆明山海棠制剂。
雷公藤(Tripterygium wilfordii Hook..F)的根、叶、花及果实入药，味苦，有大毒。近年的研究表明，雷公藤具有抗肿瘤、抗炎及免疫抑制等药理活性，临床上主要用来治疗关节炎、红斑狼疮白血病等。临床上毒性主要表现为心律失常、白细胞数下降、肾功能衰竭、休克等。动物静注每日40μg/kg，可引起肝损伤、造血系统和胃肠道的中毒反应。雷公藤地上部位提取物的LD50为157.87mg/kg，根部提取物的LD50为456.25mg/kg。由于其毒性较大而限制了其在临床上的进一步应用。
目前临床上最常用的中药雷公藤产品是雷公藤片和雷公藤多甙片。前者为醋酸乙酯提取物，后者为水-氯仿提取物。近年来报道的其他新剂型，尚处于研究阶段，而未见产品。例如微囊片、缓释片、滴丸、注塑丸等。
微囊片(见“雷公藤微囊片内酯的含量测定”，中药材，1991，14(11)37)是将雷公藤提取物与大分子化合物(如环糊精)，经过重结晶、共沉淀、冷冻干燥、研磨等方法形成包合物而压制成的片剂。具有增加药物稳定性、溶解度、降低毒副作用、调节释药速度等特点。
缓释片(见“雷公藤缓释片治疗类风湿性关节炎32例临床观察”，中药新药与临床药理，1995，6(1)17)内含雷公藤醋酸乙酯提取物，并添加了固体分散剂和阻滞剂，30％药量在胃内吸收(速释部分)，70％药量在肠内缓慢吸收(缓释部分)，从而减少了雷公藤对胃的刺激时间和程度，使其消化道毒副作用显著降低，与普通雷公藤片相比，生物利用度提高约20％。服药次数由每日3次降至2次。
注塑丸(见“雷公藤注塑丸的抗炎免疫作用”，中国药理通讯，1995，12(1)20)是由雷公藤醋酸乙酯提取物加适量的固体分散剂制成，能增加体内吸收度。
但是，以上这些剂型仍然存在毒性较大的问题。如何使药效保持不变，甚至有所提高，而毒性有较大降低，是这一领域倍受关注的问题。
为实现上述发明目的，本发明的纳米中药雷公藤/昆明山海棠的新剂型的组成为雷公藤/昆明山海棠浸膏、总内酯或总碱0.1-0.6wt％，载药体0.1-0.8wt％，表面活性剂0.8-3.8wt％，余量为水。
上述载药体可为硬脂酸、三酸甘油脂、单酸甘油脂、氢化甘油脂、烷基棕榈酸脂或棕榈酸中的任一种。建议优先使用硬脂酸。
上述表面活性剂为聚乙二醇、聚乙二醇脂肪酸酯、卵磷脂或聚氧乙烯/聚氧丙烯共聚物中的任一种或两种以上的复合物。当使用两种或以上的表面活性剂复合使用时，其中量多的一种为主表面活性剂，其余为助表面活性剂。建议优先使用聚乙二醇单硬脂酸酯和卵磷脂的复合表面活性剂。
作为本发明的改进，上述雷公藤/昆明山海棠浸膏、总内酯或总碱0.1-0.6wt％，上述载药体的重量分数为0.2-0.6％，上述表面活性剂的重量分数为0.9-2％，余量为水。
上述剂型可利用冷冻干燥去水分制成冻干粉。
本发明的纳米中药雷公藤/昆明山海棠剂型的制备方法，包括下述步骤①取雷公藤/昆明山海棠浸膏、总内酯或总碱溶于醇类溶剂中；②另将载药体溶于烷烃中，混合搅拌均匀；③在30-60℃恒温水浴中减压旋转蒸发除去有机溶剂，使药物及辅料在烧瓶壁形成均匀脂质薄膜；④置真空干燥器中放置直至除净有机溶剂；⑤另取表面活性剂，搅拌溶解到水中，再加到上述薄膜中；⑥超声处理并定容，得淡黄色透明胶体溶液。
固体脂质体纳米粒(solid lipid nanoparticle，SLN)是近年正在发展的一种新型给药系统。具有控制药物的释放、避免药物的降解或泄露、良好的靶向性以及降低药物的毒副作用等优点。
将纳米技术应用于现代中药，其意义在于第一，提高药物的生物利用度。纳米粒子具有极大的表面积和极高的能量状态，这使药物的分散度极显著地增大，这是任何超细粉碎技术难以达到的。分散度的增大是导致难溶性药物溶出度增大的主要因素。这对于提高药物的生物利用度具有重要的意义。
第二，药物的控制释放(缓释)性。无论是吸附在纳米粒子载体表面还是包封在纳米粒子内部的药物，其释放过程是可控的。这是分子态的药物难以实现的。
第三，药物的靶向性。纳米尺度的SLN进入人体后，易被网状内皮系统细胞作为外来异物所吞噬，进入溶酶体，融合，并被溶酶体消化，裂解释放药物。而肝、脾、肺、骨髓和淋巴等是网状内皮细胞丰富的组织。分子态的和粒径大的难以进入靶区。
第四，降低毒副作用。这对本发明所用的中药雷公藤尤具重要意义。几乎所有相关文献都指出，纳米化的药物比游离态显著降低毒副作用。例如两性霉素B的毒性有急寒、发烧、过敏、慢性肾毒和心肺毒性(见International J.of Pharmaceutics，158，19-27，1997)。抗癌药物阿霉素的毒性有噬中性白血球减少症等(见International J.of Pharmaceutics，181，107-115，1999)。抗癌药物喜树碱的毒性有噬中性白血球减少症、血小板减少症以及其他非血液毒性，如脱发、呕吐、腹泻、皮疹等(见InternationalJ.of Pharmaceutics，159，95-103，1997)。经纳米化处理后，毒副作用均有所降低。文献上关于纳米化药物的降毒机理，有多种解释。但归纳起来，如上所述，一是靶向性(只进入靶区，药物的非特定聚集引起的毒性降低，改善药物在体内的分布)；二是缓、控释性(毒性水平低)；三是纳米化药物的高稳定性(药物在纳米载体中是无定形态，而游离态药物易结晶)；四是改善了药代动力学。
固体脂质纳米粒的制备方法有多种，如热熔分散法、微乳法、高压乳匀法、薄膜—超声分散法、乳化—低温固化法等，经过单因素考察发现以乳化—低温固化法效果较好。本发明通过对硬脂酸、载药体、表面活性剂、水，环己烷的用量等因素进行正交实验，得到各组分的基本用量。
本发明以雷公藤浸膏、雷公藤总碱、雷公藤总类酯为模型药物，以固体脂质体纳米粒为给药系统进行雷公藤固体脂质体纳米粒的研制。
将本发明所制备的SLN纳米中药雷公藤/昆明山海棠作为外用搽剂，通过实验动物(Wistar大鼠，体重150±10g)足趾致炎后的消炎作用来检验药效。
动物随机分为4组(每组10只)，即空白对照组(生理盐水)，纳米组，非纳米组(雷公藤/山海棠提取物细微颗粒的醋酸纤维素混悬液，浓度为24mg/ml)，阳性对照组(醋酸地塞米松软膏，0.05％，芜湖市第三制药厂)。以鲜鸡蛋清致炎(每只足趾0.1ml)，以排水法测定致炎前和致炎后不同时间的足趾体积。计算肿胀百分率，以该值为炎症的评价指标。
实验结果表明(附
图1，附图2)，致炎后纳米组在与空白组和非纳米组有显著性差异，在20min-180min内能够明显抑制炎症反应。说明雷公藤/山海棠外用的SLN体系搽剂具有明显的抗炎作用。其中，雷公藤SLN体系搽剂的药效更明显，其抗炎作用效果优于激素类阳性药醋酸地塞米松软膏。
本发明所制备的SLN纳米中药雷公藤的急性毒性实验是采取小鼠(昆明种小鼠，体重18-22g)灌胃形式进行。
动物随机分为两组，即纳米药物组(雷公藤浸膏的SLN纳米体系)，和雷公藤片剂组(由黄石制药厂生产的雷公藤片，配制成醋酸纤维素的混悬液)，每组设五个剂量，每个剂量组10只小鼠(雌雄各半)。给药后连续观察七天，记录小鼠毒性反应及死亡情况，并计算LD50值(半致死剂量)及95％的可信限。
实验结果如表1、表2所示。纳米组药物半致死剂量大于市售雷公藤片剂，表明SLN纳米中药雷公藤的毒性稍低于雷公藤片剂。
表1.纳米药物组实验数据组别 鼠数(n) 剂量(g/kg)死亡数(n) 死亡率(P)P21 10 1.4400 10 112 10 1.1520 90.9 0.813 10 0.9216 40.4 0.164 10 0.7373 20.2 0.045 10 0.5898 000∑P＝2.5 ∑P2＝2.01LD50＝0.9216g/kg，LD50的95％可信限＝0.8320～1.0259g/kg表2.雷公藤片剂组实验数据组别鼠数(n)剂量(g/kg)死亡数(n)死亡率(P)P2110 1.2000 10 1 1210 0.9600 8 0.8 0.64310 0.7680 6 0.6 0.36
4100.61442 0.20.045100.49150 0 0∑P＝2.3∑P2＝2.04LD50＝0.7511g/kg，LD50的95％可信限＝0.6782～0.8310g/kg。
它是由下述重量配比的原料制成雷公藤浸膏或雷公藤总内酯或雷公藤总碱或昆明山海棠浸膏，载药体，表面活性剂。所述的载药体为硬脂酸、三酸甘油脂、单酸甘油脂、氢化甘油脂、烷基棕榈酸脂或棕榈酸中的任一种。所述的表面活性剂为聚乙二醇、聚乙二醇脂肪酸酯、卵磷脂或聚氧乙烯/聚氧丙烯共聚物中的任一种(或两种以上的复合物)。载药体的作用主要是包埋或吸附药物。用量在0.1-0.8wt％。用量过大会使体系不稳定，用量过少将降低载药量。推荐用量为0.2-0.6wt％。其他可用的材料还有三酸甘油脂、单酸甘油脂、氢化甘油脂、烷基棕榈酸脂、棕榈酸等。表面活性剂的作用主要是将有机相分散在水中，其用量在0.8-3.8wt％。可用的表面活性剂有聚乙二醇、聚乙二醇脂肪酸酯、卵磷脂、聚氧乙烯/聚氧丙烯共聚物等。水在体系中是作为分散介质，其用量在95-99wt％。
图1雷公藤搽剂用于大鼠足趾肿胀率实验(◇空白组；□纳米组；△临床药组；○阳性组；×非纳米组)附图纵坐标为肿胀率(％)附图横坐标为作用时间(min.)图2山海棠搽剂用于大鼠足趾肿胀率实验(●阳性组；◆空白组；■纳米组；▲非纳米组)附图纵坐标为肿胀率(％)
附图横坐标为作用时间(min.)
空白固体脂质纳米粒的制备主要是为其后的药效实验和毒性实验提供参考样本。2.雷公藤固体脂质体纳米粒的制备取雷公藤浸膏200mg，大豆卵磷脂100mg，溶于5ml乙醇中，另取硬脂酸200mg，大豆卵磷脂100mg溶于5ml环己烷中，混合搅拌均匀。于37℃恒温水浴中减压旋转蒸发除去有机溶剂，使药物及辅料在烧瓶壁形成均匀脂质薄膜，然后置真空干燥器中放置过夜，以除净有机溶剂；另取聚乙二醇单硬脂酸酯750mg，搅拌溶解在35ml水中，加到上述薄膜中，然后超声10min，定容至50ml，得淡黄色透明胶体溶液。
这样所获得的固体脂质纳米粒的平均粒径为116nm，多分散指数为0.219。
将此淡黄色透明胶体溶液置于冻干机，经冷冻干燥可得冻干粉。3.雷公藤总内酯固体脂质体纳米粒的制备操作方法同2。以雷公藤总内酯取代雷公藤浸膏。4.雷公藤总碱固体脂质体纳米粒的制备操作方法同2。以雷公藤总碱取代雷公藤浸膏。实施例2取雷公藤浸膏200mg，大豆卵磷脂100mg，溶于5ml乙醇中，另取三油酸甘油脂200mg， 溶于5ml环己烷中，混合搅拌均匀。于45℃恒温水浴中减压旋转蒸发除去有机溶剂，使药物及辅料在烧瓶壁形成均匀脂质薄膜，然后置真空干燥器中放置过夜，以除净有机溶剂；另取聚氧乙烯/聚氧丙烯共聚物750mg，搅拌溶解在35ml水中，加到上述薄膜中，然后超声处理15min，定容至50ml，得深黄色透明胶体溶液。
使用雷公藤总内脂与雷公藤总碱为原料的制备方法与上述实施例相同。上述实施例中的有机溶剂乙醇可以用甲醇等其它醇类溶剂替代，环已烷也可以用正己烷等其它烷烃溶剂代替。
关于纳米中药昆明山海棠剂型及其制备方法的技术效果和实施例与雷公藤的完全一样，故在说明书不再详述。
权利要求
1.一种纳米中药雷公藤剂型，其特征在于它是由下述重量配比的原料制成雷公藤浸膏或雷公藤总内酯或雷公藤总碱0.1-0.6％，载药体0.1-0.8％，表面活性剂0.8-3.8％，余量为水。
2.一种纳米中药昆明山海棠剂型，其特征在于它是由下述重量配比的原料制成昆明山海棠浸膏0.1-0.6％，载药体0.1-0.8％，表面活性剂0.6-3.6％，余量为水。
3.依据权利要求1或2所述的剂型，其特征在于所述载药体的重量分数为0.2-0.6％，所述表面活性剂的重量分数为0.9-2％。
4.依据权利要求1或2或3所述的剂型，其特征在于所述的载药体为硬脂酸、三酸甘油脂、单酸甘油脂、氢化甘油脂、烷基棕榈酸脂或棕榈酸中的任一种。
5.依据权利要求1或2或3所述的剂型，其特征在于所述的表面活性剂为聚乙二醇、聚乙二醇脂肪酸酯、卵磷脂或聚氧乙烯/聚氧丙烯共聚物中的任一种或两种以上的复合物。
6.依据权利要求1或2所述的剂型，其特征在于该剂型为去除水分后的冻干粉。
7.一种纳米中药雷公藤剂型的制备方法，其特征在于①取雷公藤浸膏或雷公藤总内酯或雷公藤总碱溶于醇类中；②另将载药体溶于烷烃中，混合搅拌均匀；③在30-60℃恒温水浴中减压旋转蒸发除去有机溶剂，使药物及辅料在烧瓶壁形成均匀脂质薄膜；④置真空干燥器中放置直至除净有机溶剂；⑤另取表面活性剂，搅拌溶解到水中，再加到上述薄膜中；⑥超声处理并定容，得淡黄色透明胶体溶液。
8.一种纳米中药昆明山海棠剂型的制备方法，其特征在于①取昆明山海棠浸膏或昆明山海棠总内酯或昆明山海棠总碱溶于醇类中；②另将载药体溶于烷烃中，混合搅拌均匀；③在30-60℃恒温水浴中减压旋转蒸发除去有机溶剂，使药物及辅料在烧瓶壁形成均匀脂质薄膜；④置真空干燥器中放置直至除净有机溶剂；⑤另取表面活性剂，搅拌溶解到水中，再加到上述薄膜中；⑥超声处理并定容，得淡黄色透明胶体溶液。
9.如权利要求7或8所述的制备方法，其特征在于所述步骤②将载药体、助表面活性剂溶于烷烃中，混合搅拌均匀。
10.如权利要求7或8所述的制备方法，其特征在于使用冻干机将其所获得的淡黄色透明胶体溶液去除水份，得到该制剂的冻干粉。
全文摘要
本发明公开的纳米中药雷公藤/昆明山海棠的新剂型由雷公藤/昆明山海棠浸膏、总内酯或总碱0.1－0.6wt％，载药体0.1－0.8wt％(如硬脂酸)，表面活性剂(如聚乙二醇单硬脂酸酯和卵磷脂)0.8－3.8wt％及水构成。其制备方法为取雷公藤/昆明山海棠浸膏、总内酯或总碱溶于乙醇中；另将载药体溶于环己烷中，混合搅拌均匀；在30－60℃恒温水浴中减压旋转蒸发除去有机溶剂，使药物及辅料在烧瓶壁形成均匀脂质薄膜；置真空干燥器中放置直至除净有机溶剂；另取表面活性剂，搅拌溶解到水中，再加到上述薄膜中；最后超声处理并定容，得淡黄色透明胶体溶液。该剂型具有药效高、毒性低的特点。
文档编号A61K36/37GK1398612SQ0113351
公开日2003年2月26日 申请日期2001年9月29日 优先权日2001年9月29日
发明者杨亚江, 杨祥良, 徐辉碧, 梅之南, 殷以华, 韩定献, 刘琼 申请人:华中科技大学, 武汉华中科大纳米药业有限公司