专利名称：一种猪用生长激素脂质体及其制备方法
技术领域：
本发明涉及一种猪用生长激素脂质体及其制备方法。猪用生长激素脂质体是一种新剂型的猪用生长激素缓释制剂，属于生物医药技术领域。
背景技术：
生长激素(Growth Hormone或Somatotropin，ST)是动物垂体前叶嗜酸性细胞产生的多肽类激素，能提高家畜生产力，对猪有明显而稳定的增产效果。近年来利用生物技术，猪用生长激素(Porcine Somatotropin，PST)已能进行商品化生产，用于养猪业将极大地影响生产技术、经济效益及消费模式。
目前生长激素制剂和使用技术有如下三种。
1.制成缓冲剂，使用注射法。
将生长激素冻干剂保存于-20℃以下，每次使用时，用碳酸氢盐缓冲液(PH9.4)先配成浓度为5mg/ml的溶液，注射时再稀释，需每天注射。
2.制成缓释剂，使用埋植法。
通过包埋等措施将生长激素制成缓释剂，再进行耳后皮下埋植，可每隔几周埋植一次，如美国孟山都公司，就有生产PST长效缓释埋植制剂，将其埋植在猪耳部缓慢释放4周。
3.免疫法。
先将一种动物的生长激素注入另一种动物体内，使其产生对这种生长激素的抗体，再将这种抗体注射给原来的动物，使其体内产生这种抗体的抗体，即抗抗体，这种抗抗体可在动物体内保持数月之久，持续发挥生长激素的作用。
上述三种方法费时费工，而且还要手术，使用难度较大，难以大规模推广。
发明内容
本发明的目的是提供一种猪用生长激素(PST)脂质体及其制备方法。PST脂质体是一种新剂型的生长激素缓释制剂具有长效缓释作用，使用注射法，简易实用，便于大规模推广。
PST脂质体是PST用类脂质构成的双分子层为膜材包封而成。作为脂质体膜材的主要成分是磷脂。磷脂分子是典型的双亲分子，使脂质体具有亲油亲水性，因此，脂质体作为药物的载体，其包封范围是很广的，亲脂性物质，两性物质以及水溶性物质都可以被包封。又因磷脂是生物膜的组成成分，生物体内存在有分解酶，很容易代谢。因而脂质体又具有生物降解性和生物相容性。研究表明，脂质体进入体内主要被网状内皮系统(reticularenolothelial system，RES)吞噬而激活机体的自身免疫功能并改变被包封药物的动力学性质和体内分布。使用注射法，将PST脂质体静脉注射入猪体后，使生长激素发挥缓释和长效的作用。
本发明所述PST脂质体，其特征在于PST用类脂质构成的双分子层为膜材包封而成，膜材的主要成分是卵磷脂、胆固醇和十八胺的混合体，其组成PST∶膜材为1∶180-200(重量比)，膜材主要成分组成∶卵磷脂∶胆固醇∶十八胺的重量百分比为65-85％∶10-35％∶2-5％，脂质体中还可添加或不添加磷脂酰胆碱(DPPC)。DPPC与卵磷脂的重量配比为0.25∶1，添加或不添加维生素E(VE)，VE与卵磷脂的重量配比为5∶1，添加或不添加海藻糖和/或蔗糖，海藻糖、蔗糖与卵磷脂的重量配比均为2∶1。添加VE和糖，能提高脂质体的抗氧化性和稳定性。糖同时也是冷冻干燥过程中的保护剂和支持剂。本PST脂质体粒径≤500nm，包封率≥90％，猪体内缓释时间≥30天，10℃生物活性有效期≥1年。
本PST脂质体的制备方法为A.膜材配制按65-85％∶10-35％∶2-5％重量比称取卵磷脂、胆固醇、十八胺转移到园底烧瓶，按每克膜材约加30ml乙醚的比例加入乙醚，待其完全溶解。
B.PST溶液配制按膜材量的1/180-200(重量比)称取PST，溶于磷酸氢二钠缓冲溶液(PBS)中，每5毫克PST溶于约25mlPBS中，溶解后倒入园底烧瓶中。
C.超声乳化将园底烧瓶中物料超声乳化5分钟。
D.逆相减压蒸发超声之后的乳液在30-40℃下减压蒸发至胶状，成膜，再加同样量的PBS使膜完全洗下，再减压蒸发至完全抽去乙醚。
E.冷冻干燥将逆相减压蒸发后所得产物在-65—-70℃下冷冻干燥3-4天，冻干后形成细小白色粉针状结晶，即得产品PST脂质体。为防吸湿返潮，需密闭保存。
本发明的优点是PST脂质体的类脂质膜材，容易被生物体内分解酶代谢，因而具有生物降解性和生物相容性，被生物体网状内皮系统吞唾后能激活机体自身免疫功能，并改变被包封药物的动力学性质和体内分布，能优化释药特征，使之具有猪所特需的释药速度和释药时间等，使生长激素发挥缓释和长效的作用。
采用逆相蒸发过程，可除去所含有机溶剂，使具有很高的包封率，并能经受灭菌，该制备方法适合于工业化生产。
采用冷冻干燥过程，使脂质体以固体形态存在，克服了液态脂质体的不稳定性，保证长期贮存中的稳定性而且便于运输，也适合于工业化生产。
总之，本制剂具有长效缓释作用，包封率高，使用注射法，简易实用，便于大规模推广。
通过注射PST(每天注射一次4mg/头)和注射PST脂质体(30天注射一次，120mg/头)与对照组比较，结果表明PST与PST脂质体对育肥猪生产性能接近，与对照组相比，均可显著提高育肥猪的日增量、饲料报酬和改善猪的胴体品质，完全证明PST脂质体可代替PST用于育肥猪的生产实践。
具体实施例方式
实施例1(1)称取卵磷脂0.7325g，胆固醇0.1474g，十八胺0.0326g，转移至园底烧瓶；(2)加30ml乙醚，待其完全溶解；(3)加5mgPST溶于25mlPBS中，倒入园底烧瓶中；(4)超声5min；(5)减压蒸发至胶状，成膜，加25mlPBS使膜完全洗下；(6)减压蒸发至完全抽取乙醚；(7)在-65—-70℃冷冻干燥3-4天，冻干后即得白色粉针状结晶PST脂质体产品。
实施例2(1)称取卵磷脂2.918g，胆固醇0.589g，十八胺0.134g，海藻糖0.584g，VE14.59g，转移至园底烧瓶；(2)加乙醚80ml，待其完全溶解；(3)加0.020gPST溶于100mlPBS中，倒入园底烧瓶中；(4)40％强度超声5min；(5)30℃减压处理后，再加120mlPBS使膜完全洗下，再减压处理除去余下的微量溶剂；(6)放置30分钟后，置入-65—-70℃冰箱3-4天。得产品。
权利要求
1.一种猪用生长激素脂质体，其特征在于猪用生长激素用类脂质构成的双分子层为膜材包封而成，膜材的主要成分是卵磷脂、胆固醇和十八胺的混合体，其组成猪用生长激素∶膜材为1∶180-200(W/W)，膜材主要成分组成卵磷脂∶胆固醇∶十八胺的重量百分比为65％-85％∶10-35％∶2-5％(W/W)，脂质体中还添加或不添加磷脂酰胆碱，磷脂酰胆碱与卵磷脂的配比为0.25∶1(W/W)，添加或不添加维生素E，维生素E与卵磷脂的配比为5∶1(W/W)，添加或不添加海藻糖和/或蔗糖，海藻糖与卵磷脂的配比为2∶1(W/W)，蔗糖与卵磷脂的配比为2∶1(W/W)，本猪用生长激素脂质体粒径≤500nm，包封率≥90％，猪体内缓释时间≥30天，10℃生物活性有效期≥1年。
2.一种猪用生长激素脂质体的制备方法，其特征在于A、膜材配制按65-85％∶10-35％∶2-5％重量比称取卵磷脂、胆固醇、十八胺转移至园底烧瓶，按每克膜材约加30ml乙醚的比例加入乙醚，待其完全溶解；B、猪用生长激素溶液配制按膜材量的1/180-200(W/W)称取猪用生长激素，溶于磷酸氢二钠缓冲溶液(PBS)中，每5毫克激素约溶于25ml缓冲溶液中，溶解后倒入园底烧瓶中；C、超声乳化将园底烧瓶中物料超声乳化5分钟；D、逆相减压蒸发超声之后的乳液在30-40℃下减压蒸发至胶状，成膜，再加同样量的PBS使膜完全洗下，再减压蒸发至完全抽去乙醚；E、泠冻干燥将逆相减压蒸发后所得产物在-65—-70℃下冷冻干燥3-4天，冻干后形成细小白色粉针状结晶，即得产品猪用生长激素脂质体，为防吸湿返潮，需密闭保存。
全文摘要
一种猪用生长激素脂质体及其制备方法,属于生物医药技术领域。猪用生长激素脂质体是一种新剂型的猪用生长激素缓释制剂。其制备方法是将猪用生长激素用类脂质构成的双分子层为膜材包封而成,膜材的主要成分是卵磷脂、胆固醇和十八胺。本产品包封率高,具有长效缓释作用。猪体内缓释时间≥30天。使用注射法,操作简易实用,便于大规模推广。实践证明PST脂质体可代替PST用于育肥猪的生产实践。
文档编号A61K9/127GK1380097SQ02112910
公开日2002年11月20日 申请日期2002年4月18日 优先权日2002年4月18日
发明者胥传来, 乐国伟, 李相前, 姚惠源, 詹斌, 施用辉, 朱建平, 孟旭 申请人:江南大学