专利名称：银杏内酯软胶囊及其制备方法
技术领域：
本发明是关于银杏内酯的制剂，特别是含有银杏内酯的软胶囊，该制剂以中药银杏叶的提取物银杏内酯为有效成份制备而成，具体说是以银杏内酯A，B和K为活性成分制成的药物，属于药物领域。
本发明所述的银杏内酯软胶囊是以高纯度的银杏内酯为有效成份制备而成。
本发明银杏内酯软胶囊当中所含银杏内酯包括银杏内酯A、B、K，其中银杏内酯A、B、K的总含量不低于90％，最佳含量为96.05％，其中银杏内酯A的含量为30-40％，银杏内酯B的含量为50％-65％，银杏内酯K的含量为0.5-5％。优选各单体的比例为银杏内酯A35.59％、银杏内酯B58.39％、银杏内酯K2.07％。
因此，本发明的银杏内酯软胶囊可以按照上述比例，以银杏内酯A、B、K单体为活性成分，配制成组合物，加入赋形剂，制备成软胶囊。
在本发明软胶囊的制备过程当中，根据银杏内酯的理化特性选择了甘油、PEG6000和PEG400作为赋形剂，制备成软胶囊。
以银杏内酯A、B、K单体为活性成分，配制成组合物，制备软胶囊的方法之一如下所述。
按照下述比例选取原料，配制成活性成分组合物银杏内酯A30-40％银杏内酯B50-65％银杏内酯K0.5-5％在上述组合物当中，加入赋形剂甘油、PEG6000和PEG400，制备成软胶囊，以100克上述组合物原料总量计，药物组合物与加入赋形剂甘油、PEG6000和PEG400的用量比是100∶18∶6∶276。
本发明的银杏内酯软胶囊也可以通过提取或者购买含有银杏内酯A、B、K单体的总银杏内酯，加入赋形剂制备成软胶囊。按照这种方法制备的银杏内酯软胶囊含有10-40％的总银杏内酯，优选含有20-30％的总银杏内酯，所含总银杏内酯当中含有银杏内酯A、B、K，银杏内酯A、B、K在所制成软胶囊当中的总含量为9-36％，其中银杏内酯A的含量为3-16％，银杏内酯B的含量为5-26％，银杏内酯K的含量为0.01-4％，而银杏内酯A、B、K的最佳含量分别为8.89％、14.59％、0.52％。
以总银杏内酯为活性原料制备本发明银杏内酯软胶囊的制备方法之一如下所述。
按照下述比例选取原料银杏内酯 100g甘油 18.0gPEG60006.0gPEG400276.0g取PEG400276.0g置适宜容器内，加入PEG60006.0g，水浴加热至PEG6000溶解，搅匀，加入甘油18.0g，加入银杏内酯100.0g，用胶体磨研磨成均匀膏体，转移至软胶囊机的贮料桶，用0.3ml的模具压制成软胶囊，制成软胶囊1000粒，粒重约0.4g，定型4小时，用95％乙醇洗去表面润滑剂等，于20～30％相对湿度，28℃条件下干燥至平衡，取出，质检，包装制备本发明银杏内酯软胶囊所使用的总银杏内酯原料，可以通过已知的提取方法提取，或者通过市售购得，但是，该原料需符合按如下方法测定的指纹图谱标准。
银杏内酯的指纹图谱测定1.供试品溶液制备精密称取于105℃干燥至恒重的银杏内酯样品30.0mg置10.0mL量瓶中，以50％丙酮溶液溶解并稀释至刻度，混匀，经0.45μm微孔滤膜滤过，即得。
2.参照物溶液制备以银杏内酯B对照品适量，加50％丙酮溶液制成每1mL含1mg的溶液，即得。
3.测定方法照高效液相色谱法(中国药典2000版一部附录VID)测定。
4.色谱条件与系统适应性试验以十八烷基键合硅胶为填充剂(Hypersil C185μm 250×4.6mm)；柱温30℃；流动相A为水-甲醇-四氢呋喃(重蒸馏)(85∶10∶5，V/V)，流动相B为水-甲醇-四氢呋喃(重蒸馏)(35∶60∶5，V/V)；梯度0～5min，5％B；5～55min，5％B～55％B；55～56min，55％～100％B，100％B保持10min；流速1.0mL/min；检测波长220nm，理论塔板数以内酯B计应不低于7000。
5.测定方法吸取供试品溶液20μL注入液相色谱仪，即得。
6.指纹图谱及技术参数用高效液相色谱法测定，记录时间为60分钟。银杏内酯的指纹图谱见
图1，记录2小时的指纹图谱见图2。经检查空白(图3)无干扰。
本品指纹图谱中，有4个共有指纹峰。以银杏内酯B的保留时间为1计，其余共有指纹峰以相对保留时间标定，指纹图谱中，以银杏内酯B的峰面积为1，计算各共有指纹峰的面积比值，相对保留时间和相对峰面积技术参数见表1。
表1 银杏内酯指纹图谱技术参数共有峰 相对保留时间相对峰面积允许范围10.560.0220.870.56 ±20％31 1/41.711.0±20％
上述4个共有峰当中，共有峰1是银杏内酯C，共有峰2是银杏内酯A，共有峰3是银杏内酯B，共有峰4是银杏内酯K。
非共有峰面积供试品的测定结果，非共有峰面积不得大于5％。
本发明银杏内酯软胶囊当中的银杏内酯包括银杏内酯A、B、C、K，其中银杏内酯A、B、K的总含量不低于90％，银杏内酯软胶囊内容物所含银杏内酯的量不低于0.18g/g。
为了使制备本发明银杏内酯软胶囊的银杏内酯原料纯度达到90.0％以上，将市售或自制的银杏内酯原料，溶于温热(35-45摄氏度)的乙醇中，过滤，50摄氏度减压回收部分乙醇，放置、冷却、析晶，过滤，残液另行处理，取析出的晶体进行检测，如纯度未达90％以上，按上述方法重复精制步骤，直至达到含量要求。
在银杏内酯原料达到纯度要求后，取样品100g，加入冷乙醇或丙酮100ml，搅拌，静置，抽滤，按指纹图谱检测方法检测，如银杏内酯原料未达到指纹图谱要求，重复上述处理步骤直至样品达到要求。亦即银杏内酯A、B、K及其他成分的比例范围达到指纹图谱要求。
本发明银杏内酯软胶囊所含的银杏内酯K是发明人新发现的一种化合物，该化合物已另案申请专利，其提取分离方法如下取银杏内酯粗品3g置索氏提取器中，加乙酸乙酯(或丙酮)2500ml回流24小时，回收乙酸乙酯至浸膏状，用硅藻土拌样，烘干，研细，用石油醚∶乙酸乙酯/9∶1湿法装于低压硅胶柱(压力0.2-0.3k/cm2)，以石油醚∶乙酸乙酯梯度递增洗脱，当石油醚∶乙酸乙酯/6∶4时，97～121流分，经TCL检查(甲苯∶乙酸乙酯∶丙酮∶甲醇/5∶2.5∶2.5∶0.3，4％NaAc硅胶H板)出现银杏内酯斑点(与银杏内酯对照品比较)，将其合并浓缩，放置出现沉淀，母液留用。将沉淀以丙酮溶解，以制备型高效液相纯化，可得银杏内酯K。122～127流分经薄层检查(条件同上)斑点相同，将其合并，浓缩，放置，析出白色针晶，过滤得白色针晶，TCL检查与银杏内酯A对照品Rf值(0.64)一致，乙醇重结晶得银杏内酯A纯品(GA)。将所得母液与上述留用母液合并，浓缩后用少量硅胶拌样，烘干，研细，用氯仿湿法装入硅胶柱(100-140目硅胶)，氯仿∶丙桐/9∶1洗脱，得5-10流分，TCL检查(条件同上)后斑点Rf值相同，合并，浓缩至小体积，放置得菊花状结晶(Rf值0.62)经乙醇多次重结晶得无色棱形结晶，用银杏内酯B为对照品，经TCL检查与银杏内酯B的Rf值相同，初步确定为银杏内酯B(GB)。柱层析继续洗脱至15-22流分，TCL检查斑点相同，合并，浓缩，放置得白色针状结晶，经TLC用银杏内酯C对照品检查，Rf值相同，初步确定为银杏内酯C(GC)。
银杏内酯K的确证白色针晶(MeoH)，mp＞300℃(分解)，易溶于醇、丙酮、微溶于水。略显淡黄色(空气中放置渐变为白色)。
IRVkBrmax(cm-1)3500，3385，3130，2960，2915，2857，1783，1757，1700，1600，1465，1437，1400，1376，1368，1356，1340，1305，1280，1260，1243，1231，1215，1183，1174，1150，1124，1110，1087，1063，1037，1021，957，750；ECI-MS(m/z)405[M-H]-。
该化合物通过理化分析和近代波谱技术(C-H相关、H-H相关、HMQC和HMBC谱)对化合物的碳氢信号进行全归属，并确定其化学结构式如下 本发明所说的银杏内酯K的化学名称为1，10-二羟基-3，14-二去氢银杏内酯(1，10-Dihydroxy-3，14-didehydroginkgolide)。分子式C20H22O9，分子量为406。
本发明的银杏内酯软胶囊具有很好的药理活性，其药理实验研究结果表明(1)、银杏内酯软胶囊可使局灶性脑缺血大鼠再灌注损伤的脑组织内的MDA，LA等含量降低(P＜0.01)，表明脑组织缺血缺氧和过氧化程度受到明显抑制；同时SOD和GSH含量增加(P＜0.01)，反映了药物对机体抗氧化能力和清除自由基的能力有提高。
(2)、银杏内酯软胶囊可明显保护局灶性脑缺血大鼠再灌注损伤的脑组织结构，大脑皮质锥体细胞和脑实质神经细胞的核固缩、核溶解程度比缺血对照组明显减轻，软化灶减少。
(3)、银杏内酯软胶囊可使弥漫性全脑缺血大鼠的EEG恢复正常时间和翻正反射恢复时间明显缩短(P＜0.01)，使伊文思蓝通透性显著降低(P＜0.01)。
(4)、银杏内酯软胶囊能够明显增加急性不完全性脑缺血小鼠的存活数。
(5)、银杏内酯软胶囊可显著延长小鼠在缺氧状态下的存活时间(P＜0.01)。
(6)、银杏内酯软胶囊对PAF诱导家兔体外血小板聚集均有明显抑制作用(P＜0.01)，并有明显解聚作用(P＜0.01)。对PAF诱导的家兔体内血小板聚集均有明显抑制作用(P＜0.01)，中、高剂量组还有明显解聚作用(P＜0.01)。对兔血小板数无明显作用(P＞0.05)。
(7)、银杏内酯软胶囊可明显降低兔红细胞压积(P＜0.01)和全血粘度(比)尤其对高切变速率的全血粘度(比)作用更明显(P＜0.01)。
(8)、银杏内酯软胶囊能明显延长小鼠凝血时间(P＜0.01)。
上述实验表明，本发明的银杏内酯软胶囊可用于缺血性中风的预防和临床治疗。
权利要求
1.一种银杏内酯软胶囊，其特征在于该软胶囊含有10-40％的总银杏内酯。
2.根据权利要求1所述的软胶囊，其特征在于该软胶囊含有20-30％的总银杏内酯。
3.根据权利要求1所述的软胶囊，其特征在于该软胶囊含银杏内酯A、B、K，其总量为9-36％。
4.根据权利要求1所述的软胶囊，其特征在于该软胶囊含银杏内酯A3-16％、银杏内酯B5-26％、银杏内酯K0.01-4％。
5.根据权利要求1所述的软胶囊，其特征在于该软胶囊含银杏内酯A8.89％、银杏内酯B14.59％、银杏内酯K0.52％。
6.一种银杏内酯软胶囊，其特征在于该软胶囊含有下述药物组合物银杏内酯A30-40％银杏内酯B50％-65％银杏内酯K0.5-5％。
7.根据权利要求6的软胶囊，其特征在于含有下述药物组合物银杏内酯A35.59％银杏内酯B58.39％银杏内酯K2.07％。
8.根据权利要求6的软胶囊，其特征在于还含有赋形剂甘油、PEG6000和PEG400，药物组合物与赋形剂甘油、PEG6000和PEG400的用量比是100∶18∶6∶276。
9.一种银杏内酯软胶囊，其特征在于该软胶囊是以下述方法制备的按照下述比例选取原料银杏内酯 100g甘油 18.0gPEG60006.0gPEG400276.0g取PEG400276.0g置适宜容器内，加入PEG60006.0g，水浴加热至PEG6000溶解，搅匀，加入甘油18.0g，加入银杏内酯100.0g，用胶体磨研磨成均匀膏体，转移至软胶囊机的贮料桶，用0.3ml的模具压制成软胶囊，制成软胶囊1000粒，定型，洗去表面润滑剂，于20～30％相对湿度，28℃条件下干燥，即得。
10.根据权利要求9的银杏内酯软胶囊，其特征在于制备该软胶囊的原料总银杏内酯采用高效液相色谱法测定其指纹图谱，记录时间为60分钟，得4个共有峰，以银杏内酯B的保留时间1为自身参照物，此4个共有峰的相对保留时间为0.56、0.87、1、1.71，以银杏内酯B的峰面积为1，此4个共有峰的峰面积比值是0.02、0.56±20％、1、1.0±20％。
全文摘要
本发明公开了一种银杏内酯软胶囊，该软胶囊含有10－40％的总银杏内酯，其中含银杏内酯A 3－16％、银杏内酯B 5－26％、银杏内酯K 0.01－4％。该软胶囊还含有赋形剂甘油、PEG
文档编号A61K31/365GK1476832SQ0212896
公开日2004年2月25日 申请日期2002年8月23日 优先权日2002年8月23日
发明者萧伟, 楼凤昌, 戴翔翎, 凌娅, 王颖, 李明慧, 毕宇安, 萧 伟 申请人:江苏康缘药业股份有限公司