专利名称：槐属苷的抗肿瘤作用及其药物制剂的制作方法
技术领域：
本发明是关于槐属苷(Sophoricoside，染料木素-4’-葡萄糖苷)在抗肿瘤药物方面的应用及其药物制剂，属于中药领域。
槐属苷(Sophoricoside)的化学结构式染料木素-4′-葡萄糖苷(genistein-4′-glucoside) R＝β-D-Glu
本发明的目的之一是提供了槐属苷的药物制剂；本发明的目的之二是提供了槐属苷的抗肿瘤新用途。
本发明的目的是通过以下技术方案实现的本发明的药物制剂含有1％-99％的槐属苷和99％-1％的赋形剂(包括其它配用的药物)，优选含有30％-80％的槐属苷和70％-20％的赋形剂(包括其它配用的药物)，最好含有60％-70％的槐属苷和40％-30％的赋形剂(包括其它配用的药物)。
按药剂学方法，可以将本发明的槐属苷制备成多种临床药物剂型作为抗肿瘤药物，包括口服制或非肠道给药的剂型。所说的口服制剂选于片剂、胶囊剂、丸剂、颗粒剂、混悬剂、滴丸、口服液体制剂中的任何一种；所说的非肠道给药剂型选自于注射剂、气雾剂、栓剂或皮下给剂型当中的一种。
本发明的抗肿瘤药物中的辅料是指常规的赋形剂，如溶剂、崩解剂、矫味剂、防腐剂、着色剂、粘合剂等。本发明的抗肿瘤药物中的其它配伍用的药物，指的是以有效剂量的槐属苷为一定的药物原料，再配伍其它已允许合用的中药或化学药品。
本发明的槐属苷药物制剂具有抗肿瘤作用，是通过以下的药效学试验得到证实的。实验例1槐属苷对体外肿瘤细胞的抑制作用细胞 人胃低分化粘液腺癌细胞(MGC-803)、人宫颈癌细胞(Hela)、人黑色素瘤细胞(A375-S2)、人小细胞肺癌(NCI-H446)、人乳腺癌细胞(MCF-7)、人结肠癌细胞(SWILLC)、人星形胶质瘤细胞(U251)、人胃癌细胞(SGC-7901)、人红白血病细胞(K562)、人肝癌细胞(BEL-7402)、早幼粒白血病细胞(HL-60)等十一种细胞系均购自长春肿瘤医院。
药品及试剂槐属苷(Sophoricoside)由吉林天药科技股份有限公司天然药物所中药化学室提供，淡黄色粉末状结晶；四甲基偶氮唑盐(MTT)为Sigma公司产品；青霉素G钾盐为Sigma公司产品；硫酸链霉素Sigma公司产品；HEPES为Sigma公司产品；DMSO为Sigma公司产品；胰酶为Difco公司；新生牛血清(FBS)为北京元亨圣马生物技术研究所产品；RPMI-1640培养基为Hyclone公司产品。
仪器CK2TRC-3荧光倒置显微镜，日本OLYMPUS产品；D-63450-CO2培养箱，德国Hera公司产品；FCANF129004酶标仪，澳大利亚TECAN公司产品。
实验方法MTT法 十一种人的肿瘤细胞株按常规方法培养传代，取对数生长期细胞用于实验。将细胞以1×105个/mL浓度接种于96孔板(100μL/孔)，培养12h后，实验组加入各浓度槐属苷(或5-FU作为阳性对照组)100μL/孔，阴性对照组加入培养液100μL/孔，每组各设4个平行孔，并分别设空白孔(即只加入药液和培养液，不加细胞)以调零。槐属苷组分别培养20、44(由于5-FU是抗代谢抗肿瘤药物，故培养44h)、68h后，加入5mg/mLMTT 20μL，继续培养4h，弃上清，每孔加入DMSO150μL，混匀，酶标仪(λ＝492nm)测定吸光度(A492)，利用SPSS统计软件，计算细胞死亡率，求取IC50。
实验结果结果表明，经SPSS软件统计，槐属苷对A375-S2、SGC-7901、BEL-7402、MCF-7、K562、Hela、MGC-803、NCI-H446、SWILLC、U251、HL-60等十一种肿瘤细胞均有不同程度的抑制作用，不同浓度槐属苷对十一种肿瘤细胞的抑瘤率、IC50和5-FU对各细胞的IC50值详见表1和2。从表1和表2中可以看出，槐属苷对A375-S2、SGC-7901、MCF-7、Hela和MGC-803细胞的生长抑制作用较强，而对U251、SWILLC细胞的敏感性较差，表明槐属苷对肿瘤细胞有一定的选择性抑制作用。此外，比较槐属苷和5-FU对各细胞的生长抑制曲线，从曲线斜率可见5-FU对细胞的作用较缓和(即曲线的坡度较小)，而槐属苷对细胞的作用较急剧(即曲线的坡度较大)，槐属苷和5-FU可能具有不同抗肿瘤的作用机制。
表1不同浓度的槐属苷对十一种肿瘤细胞的抑瘤率
表2 MTT法测定槐属苷和5-FU对十种肿瘤细胞的IC50
实验例2槐属苷对实体肿瘤细胞的抑制作用动物 昆明种小白鼠，动物合格证编号10-1023；C57BL/6纯系小鼠，动物合格证编号10-1025。均由白求恩医科大学实验动物室提供，体重18-22g，雌雄兼用。
瘤株 S180、Hep·A22、ESC、Lewis均由中国医学科学院药物所引进，中药所传代保存瘤株。
药品 环磷酰胺，南通第二制药厂生产，批号980301-1。替加氟片(呋喃氟尿嘧啶片)济南制药厂生产，批号990412。槐属苷由吉林天药科技股份公司天然药物研究所提供。
实验方法 取荷瘤传代鼠脱颈椎处死，固定于板上。用碘酊及酒精消毒动物皮肤切开皮肤，选择肿瘤生长良好，无坏死或液化的瘤组织，按一定比例加入无菌生理盐水，用组织匀浆器制成含2500万以上/ml的细胞悬液，于小鼠腋窝皮下接种0.2ml/只，接种部位皮肤先用碘酊及酒精消毒。每个瘤株，每次试验接种60只雄性鼠，重复试验时改用雌性，接种后次日随机分组，每组12只，试验设高、中、低三个剂量及试验对照组和阳性药组，其中高、中、低剂量组分别给予槐属苷0.8、0.4、0.2g/kg体重，阳性药组按20mg/kg体重给予环磷酰胺，试验对照组给相应体积的常水。灌胃给药，每天一次，给药10天后处死，称体重，摘瘤称重，计算抑瘤率，实验结果见表3-6。
结果上述实验结果表明槐属苷对小鼠S180、Hep·A22、ESC及Lewis等实体瘤均有明显的抑制作用，荷瘤小鼠给药后，对体重增长无影响，表明该药无明显毒副作用。
表3槐属苷对小鼠S180的抑制作用三次重复实验结果(X±SD)给药剂量及天数 动物数 荷瘤鼠体重 平均瘤重实验次数 组别 瘤重抑制率(％)(g/kg×天) (只) (g)(g)第 对照组1226.0±3.4 1.90±0.65一 环磷酰胺 20mg/kg×10 1122.7±3.6 0.75±0.3360.53***次 槐属苷 0.8×10 1225.6±3.7 1.02±0.5146.32**试 槐属苷 0.4×10 1225.8±3.6 1.10±0.4542.11**验 槐属苷 0.2×10 1225.9±3.2 1.28±0.6232.63*第 对照组 1226.1±3.9 1.90±0.62二 环磷酰胺 20mg/kg×10 1223.0±3.7 0.73±0.3061.58***次 槐属苷 0.8×10 1225.9±3.8 0.96±0.4049.47***试 槐属苷 0.4×10 1225.6±3.8 1.24±0.4934.74**验 槐属苷 0.2×10 1226.0±3.4 1.38±0.5427.37*第 对照组 1225.4±2.9 1.89±0.61三 环磷酰胺 20mg/kg×10 1222.4±2.7 0.78±0.2858.73***次 槐属苷 0.8×10 1225.3±3.5 1.08±0.5242.86**试 槐属苷 0.4×10 1225.0±3.2 1.10±0.44 41.80**验 槐属苷 0.2×10 1225.1±3.4 1.31±0.58 30.69*注与对照组比较，***P＜0.001，**P＜0.01，*P＜0.05，以下表同表4 槐属苷对小鼠Hep.A22的抑制作用三次重复实验结果(X±SD)给药剂量及天数 动物数 荷瘤鼠体重 平均瘤重 瘤重抑制率实验次数 组别 (g/kg×天)(只) (g) (g) (％)第对照组 1225.1±3.3 1.93±0.58一环磷酰胺 20mg/kg×101222.5±2.1 0.77±0.26 60.10***次槐属苷 0.8×10 1224.5±3.5 0.95±0.40 50.78***试槐属苷 0.4×10 1224.1±3.9 1.26±0.40 34.72**验槐属苷 0.2×10 1224.0±3.8 1.43±0.61 25.91第对照组 1225.0±3.0 1.92±0.61二环磷酰胺 20mg/kg×101221.9±3.0 0.71±0.31 63.02***次槐属苷 0.8×10 1224.5±3.0 1.00±0.43 47.92***试槐属苷 0.4×10 1224.2±3.4 1.15±0.52 40.10**验槐属苷 0.2×10 1225.1±4.3 1.40±0.58 27.08*第对照组 1225.2±4.5 1.95±0.64三环磷酰胺 20mg/kg×101122.6±3.1 0.75±0.31 61.54***次槐属苷 0.8×10 1224.0±3.7 0.96±0.50 50.77***试槐属苷 0.4×10 1225.8±3.1 1.26±0.57 35.38*验槐属苷 0.2×10 1225.5±4.2 1.37±0.56 29.74*表5槐属苷对小鼠ESC的抑制作用三次重复实验结果(X±SD)给药剂量及天数 动物数 荷瘤鼠体重 平均瘤重 瘤重抑制率实验次数 组别(g/kg×天) (只)(g) (g) (％)第对照组12 24.6±4.0 2.02±0.67一环磷酰胺 20mg/kg×10 12 21.7±2.3 0.70±0.22 65.35***次槐属苷 0.8×10 12 25.3±3.6 1.02±0.45 49.50***试槐属苷 0.4×10 12 24.8±3.3 1.16±0.50 42.57**验槐属苷 0.2×10 12 24.6±3.7 1.43±0.61 29.21*第对照组12 25.3±3.5 2.11±0.65二环磷酰胺 20mg/kg×10 11 23.5±3.2 0.85±0.44 59.72***次槐属苷 0.8×10 11 25.3±2.9 1.02±0.43 51.66***试槐属苷 0.4×10 12 25.6±3.2 1.19±0.48 43.60**验槐属苷 0.2×10 12 26.2±3.0 1.33±0.57 36.97**第对照组12 25.3±3.1 2.01±0.71三环磷酰胺 20mg/kg×10 12 22.4±2.7 0.79±0.34 60.70***次槐属苷 0.8×10 12 25.0±2.9 1.22±0.66 39.30**试槐属苷 0.4×10 12 24.9±3.5 1.22±0.51 39.30**验槐属苷 0.2×10 12 25.1±3.5 1.44±0.61 28.36*
表6槐属苷对C57小鼠Lewis的抑制作用三次重复实验结果(X±SD)给药剂量及天数 动物数 荷瘤鼠体重 平均瘤重 瘤重抑制率实验次数 组别 (g/kg×天) (只)(g) (g) (％)第对照组12 22.4±2.4 1.69±0.54一环磷酰胺 20mg/kg×10 12 20.9±2.0 0.58±0.17 65.68***次槐属苷 0.8×10 10 22.6±2.4 0.74±0.31 56.21***试槐属苷 0.4×10 11 22.0±2.5 0.86±0.36 49.11***验槐属苷 0.2×10 12 22.7±2.1 0.98±0.37 32.01**第对照组12 22.3±2.0 1.77±0.60二环磷酰胺 20mg/kg×10 12 21.6±2.3 0.53±0.13 70.06***次槐属苷 0.8×10 11 23.1±2.2 0.76±0.28 57.06***试槐属苷 0.4×10 12 22.3±2.0 0.92±0.38 48.02***验槐属苷 0.2×10 11 22.9±2.1 1.05±0.50 40.68**第对照组12 22.9±2.3 1.65±0.55三环磷酰胺 20mg/kg×10 12 22.3±2.0 0.58±0.16 64.85***次槐属苷 0.8×10 12 22.8±2.1 0.77±0.31 53.33***试槐属苷 0.4×10 12 22.4±2.1 0.93±0.37 43.64**验槐属苷 0.2×10 12 22.5±2.0 1.05±0.43 36.36**上述离体试验和整体试验表明，槐属苷对离体和整体肿瘤细胞均具有明显的抑制作用。
具体实施例方式
实施例1片剂的制备槐属苷1000g，药用淀粉100g，混合均匀，用适量乙醇作为粘合剂制粒，干燥，经整粒机整粒，压片，每片0.25g，口服，每次1-2片，每日二次。实施例2胶囊剂的制备槐属苷1000g，药用淀粉100g，混合均匀，用乙醇作用为粘合剂制湿颗粒，干燥，过120目筛整粒，装0#胶囊，每粒0.35g，每次口服1-2粒，每日二次。实施例3滴丸制的制备聚乙二醇4000300g，在水浴上熔化，加入槐属苷原料200g，搅拌均匀，倾入保温管中，调节恒温装置，使药液在80-90℃下滴入冷却过的液体石蜡中(温度±4℃)，滴完后，将药丸倾入滤纸上吸干石蜡油，再加入少量滑石粉，混匀，得槐属苷滴丸10000粒。口服，一次四粒，一日三次，饭后服用。实施例4注射剂的制备槐属苷30g，丙二醇40ml，聚乙二醇400100ml，注射用水500ml，混合，水浴加热30分钟，加苯甲醇80ml，再用注射用水加至1500ml，在超声波中处理10分钟，再在水浴上加热30分钟，调PH值为5.5-6.5，过滤，灌封，灭菌即得。每支3ml，肌肉注射，一次3ml，一日2次。
权利要求
1.一种药物制剂，其特征在于含有治疗有效剂量的槐属苷和一种或多种药学上可接受的药用赋形剂，或可与槐属苷组方的其它药物。
2.根据权利要求1所述的药物制剂，其特征在于含有1％-99％的槐属苷和99％-1％的药用赋形剂或其它可组方的药物。
3.根据权利要求2所述的药物制剂，其特征在于含有30％-80％的槐属苷和70％-20％的药用赋形剂或其它可组方的药物。
4.根据权利要求3所述的药物制剂，其特征在于含有60％-70％的槐属苷和40％-30％的药用赋形剂或其它可组方的药物。
5.根据权利要求1所述的药物制剂，其特征在于所说的药物是口服制剂或非肠道给药的剂型。
6.根据权利要求5所述的药物制剂，其特征在于所说的口服制剂选自于片剂、丸剂、胶囊剂、颗粒剂、混悬剂、滴丸、口服液体制剂当中的任何一种。
7.根据权利要求5所述的药物制剂，其特征在于所说的非肠道给药剂型选自于注射剂、气雾剂、栓剂或皮下给药剂型当中的任何一种。
8.槐属苷在制备抗肿瘤药物中的应用。
9.根据权利要求8的用途，其特征在于所说的抗肿瘤是指抑制肿瘤细胞和实体瘤的生长。
10.根据权利要求9的用途，其特征在于所说的肿瘤细胞和实体瘤分别为肿瘤细胞是人黑色素瘤细胞、人胃癌细胞、人肝癌细胞、人乳腺癌细胞、人红白血病细胞、人宫颈癌细胞、人胃癌细胞、人小细胞肺癌、人结肠癌细胞、人神经胶质瘤细胞和早幼粒白血病细胞；实体瘤是肉瘤180、肝癌腹水型、艾氏腹水癌或肺癌。
全文摘要
本发明公开了从槐角等植物中获得的槐属苷(Sophoricoside)在抗肿瘤方面的医药新用途，同时也公开了以槐属苷为制药原料制备成片剂、胶囊剂、滴丸、注射剂等临床上可接受的药物制剂。
文档编号A61K31/7048GK1437951SQ0310241
公开日2003年8月27日 申请日期2003年1月27日 优先权日2003年1月27日
发明者赵全成, 刘威, 曲文, 赫玉芳 申请人:吉林天药科技股份有限公司