专利名称：穿琥宁在制备外用药物中的应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及穿琥宁的用途，特别涉及穿琥宁在制备外用药物中的用途。
本发明解决其技术问题所采用的技术方案是穿琥宁在制备外用药物中的应用；所述外用药物是治疗病毒引起的皮肤病的外用药物；所述皮肤病是疱疹；具体的说是生殖器疱疹、带状疱疹；并且，所述外用药物是由穿琥宁加上药学上可接受的辅料制备而成的药物组合物；所述药物组合物含有重量比为0.001％～35.664％的穿琥宁；优选的上述药物组合物含有重量比为0.01％～10.94％的穿琥宁；更优选的上述药物组合物含有重量比为0.1％～5.5％的穿琥宁；所述药物组合物被制备成外用的液体、半固体或固体制剂；优选的制剂是外用的液体制剂；最优选的是喷雾剂。
本发明的有益效果是制备工艺简单，用药方便安全，药物直接作用于患处，见效快，进一步拓展了穿琥宁的药用领域。
本发明实施例中使用的穿琥宁是四川省宜宾五粮液集团宜宾制药厂生产的穿心莲内酯琥珀酸半酯单钾盐，白色粉末，其他原料无特殊要求。对于本专业的普通技术人员来说，采用常规的方法，将本发明的药物组合物，制备成其他外用剂型是容易的。药理试验1、穿琥宁体外抗单纯疱疹病毒试验1.1试验材料一、药物穿心莲内酯琥珀酸半酯单钾盐，白色粉末，由四川省宜宾五粮液集团宜宾制药厂提供。以注射液批准文号川卫药准字(1985)第003181号，批号0007011，200mg/10ml支作为应用液。二、病毒单纯疱疹病毒II型(HSV-II)Sav株，购自卫生部药品生物制品检定所。HSV-II9705株系临床分离株。三、细胞Vero细胞，购自卫生部药品生物制品检定所。四、试剂及仪器RPMI-1640美国Gibco公司胎牛血清 英国进口分装细胞培养板 美国Corning公司CO2培养箱 美国Shel-Lab公司1.2试验方法首先测定穿琥宁对Vero细胞的最大无毒浓度(TD0)；然后采用组织细胞病变观测法(CPE)测定HSV-II的毒力。最后再用穿琥宁作用于感染了病毒的单层细胞，根据抑制细胞病变的效果，来确定穿琥宁抗病毒的药效。一、药物对细胞的最大无毒浓度(TD0)的测定用RPMI-1640液把穿琥宁(0.4mg/ml)按比例稀释在96孔培养板的Vero单层细胞中，分别加入不同浓度的穿琥宁药液，置37℃，5％CO2培养箱中96h，观察细胞病变，测定其对Vero细胞的最大无毒浓度。二、病毒的毒力测定采用96孔细胞培养Vero单层细胞，接种不同稀释度的HSV-II病毒液(10-1～10-8)，每一稀释度接种4孔，置37℃培养96h，观察细胞病变，以出现2孔细胞病变的最高稀释度定为该病毒半数细胞感染浓度(1个TCID50)。三、穿琥宁体外抗病毒试验细胞病变(CPE)抑制法在96孔细胞培养板的Vero单层细胞内，先加不同稀释度的穿琥宁液2h后倾去药液，每孔内再加入100TCID50HSV-II，置37℃，5％CO2培养箱中，96h后观察细胞病变。试验中设立病毒对照空白细胞孔。用Reed-Muench法计算得半数细胞病变抑制的药物浓度(IC50)。1.3试验结果一、穿琥宁对Vero细胞的最大无毒浓度(TD0)结果见表1，穿琥宁对Vero细胞的最大无毒浓度为1mg/ml。
表1穿琥宁、ACV对Vero细胞的最大无毒浓度(TD0)浓度(mg/ml)药物 孔号2 10.50.25 0.125 0.062 0.031 0.015细胞对照穿琥宁 1 ++-- - - - - --2 ++-- - - - - --3 ++-- - - - - --4 ++++ - - - - - --注“-”无细胞病变，“+”25％细胞病变，“++”50％细胞病变。二、病毒毒力测定结果细胞病变(CPE)抑制法测定HSV-IISav株和HSV-II9705株的毒力，结果见表2。
表2HSV病毒毒力测定结果病毒 CPE法(TCID500.ml)HSV-II Sav 10-6HSV-II 9705 10-5三、穿琥宁体外抗HSV-II试验结果应用CPE法，检测穿琥宁对不同毒力的HSV-II的体外抑制活性。通过两个批次的试验表明CPE法测定穿琥宁的半数细胞病变抑制浓度(IC50)为0.14±0.02mg/ml，结果见表3。
表3穿琥宁体外抗HSV-II活性(CPE法)穿琥宁病毒批次 剂量(mg/ml) 病变程度(％) IC50(mg/ml)1 1 00.5 12.500.2531.25 0.150.125 56.250 100HSV-IISav2 1 00.5 12.500.2525.00 0.130.125 62.500 93.7平均值0.14±0.021 1 00.5 25.000.2531.25 0.280.125 56.250 100HSV-197052 1 00.5 18.750.2531.25 0.280.125 56.250 100平均值0.28±0.032、穿琥宁体内抗单纯疱疹病毒试验2.1穿琥宁喷雾剂治疗小鼠HSV-IISav株阴道炎的药效试验2.1.1试验材料一、药物重量比2％穿琥宁喷雾剂、重量比5％穿琥宁喷雾剂和空白喷雾剂由五粮液集团宜宾制药厂提供批号分别为010103和010104。二、病毒株HSV-IISav株与1.1项相同。三、细胞株、试剂及仪器同1.1项四、试验动物BALB/C小鼠，雌性，体重18～20g/只，购自华西医科大学实验动物管理中心，动物合格证(1996)川实动质管第75号。2.1.2试验方法一、HSV-IISav感染小鼠阴道的毒力(ID50)测定采用10-3、10-4、10-5、10-6TCID50/0.1ml的HSV-IISav株病毒稀释液0.05ml，分别滴入小鼠阴道内，观察并记录小鼠阴道有无红肿、阴道炎，连续追踪七天，计算ID50。二、穿琥宁喷雾剂小鼠阴道炎的药效试验对BALB/C小鼠阴道内滴入10ID50HSV-IISav株病毒液，第二天开始用重量比2％、5％穿琥宁喷雾剂局部治疗，每日一次，连续用药三天，对照组不用任何药物治疗。总共观察六天，根据阴道炎的程度分为轻度、中度和重度，各计为3分、6分、和10分2.1.3试验结果一、HSV-IISav株感染小鼠阴道后，毒力(ID50)测定结果见表4，在10-4与10-5两个稀释度之间的距离比为0.5，则10-4.5TCID500.1ml相当于1ID50，该稀释度的HSV-IISav病毒液，能引起半数的BALB/C小鼠发生阴道炎。
在随后的试验中，每只小鼠阴道内均滴入10ID50病毒液，即采用10-3.5TCID50/0.1mlHSV-IISav病毒液0.01ml滴入小鼠阴道内感染。
表4HSV-II sav滴入小鼠阴道内测定ID50Hsv-II滴度 小鼠阴道炎病变 累积累积百分比阴道炎(TCID50/0.1ml) (只)(只)病变数 正常数 (％)10-4 10 10 20 0 20/2010010-5 10 6 10 4 10/1471.410-6 10 4 4 10 4/10 28.510-7 10 0 0 20 0/20 0二、穿琥宁喷雾剂治疗小鼠阴道炎的试验结果见表5。各治疗组明显减轻了HSV-IISav所致的小鼠阴道炎病变程度，皮损处疱疹数量减少。其中以重量比5％穿琥宁喷雾剂疗效最好，用药五天后，小鼠阴道炎治愈，病变抑制率达到75.6％。
表5穿琥宁喷雾剂治疗小鼠阴道炎的药效试验小鼠 每日小鼠阴道炎的病变程度(X) 均值抑制率组别(只) 1 2 3 4 5 6(％)2％穿琥宁 10 0 2.73.94.23.0 3.0 2.8 54.45％穿琥宁 10 0 2.42.12.11.5 0.9 1.5 75.6病毒对照10 0 3.05.48.99.6 10 6.15-空白喷雾剂 10 0 3.05.18.59.6 10 6.030.023试验结论3.1穿琥宁有体外抗HSV-II活性，CPE法测定其IC50值为0.14±0.02mg/ml。3.2重量比5％穿琥宁喷雾剂对HSV-IISav株所致的小鼠阴道炎有较好疗效，皮损病变抑制率达75.6％。
综上试验可知穿琥宁具有明显的体外抗病毒活性，对病毒引起的皮肤病变，如疱疹、生殖器疱疹、单纯疱疹病毒引起的阴道炎等具有较好疗效。上述试验也证明穿琥宁在制备外用药物中的应用，是合适的，采用常规的方法，将穿琥宁制备成各种外用剂型，如涂敷剂、喷雾剂等，直接对病灶部位施药，即可达到治疗目的。特别是重量比5％的穿琥宁喷雾剂对阴道炎有较好疗效，其皮肤病变抑制率达75.6％。药物组合物实施例
防腐剂苯甲醇80ml 助溶剂水杨酸钠20gPH调节剂磷酸氢二钠15g 磷酸二氢钠25g抗氧剂L-半胱氨酸盐5g表面活性剂十二烷基硫酸钠500g稳定剂75％乙醇1700ml 金属络合剂乙二胺四乙酸10g制备成规格为15ml/支的喷雾剂1000支。
权利要求
1.穿琥宁在制备外用药物中的应用。
2.如权利要求1所述的穿琥宁在制备外用药物中的应用，其特征是，所述外用药物是治疗病毒引起的皮肤病的外用药物。
3.如权利要求2所述的穿琥宁在制备外用药物中的应用，其特征是，所述皮肤病是疱疹。
4.如权利要求2或3所述的穿琥宁在制备外用药物中的应用，其特征是，所述皮肤病是生殖器疱疹。
5.如权利要求2或3所述的穿琥宁在制备外用药物中的应用，其特征是，所述皮肤病是带状疱疹。
6.如权利要求1所述的穿琥宁在制备外用药物中的应用，其特征是，所述外用药物是由穿琥宁加上药学上可接受的辅料制备而成的药物组合物。
7.如权利要求6所述的穿琥宁在制备外用药物中的应用，其特征是，所述药物组合物含有重量比为0.001％～35.664％的穿琥宁。
8.如权利要求6所述的穿琥宁在制备外用药物中的应用，其特征是，所述药物组合物含有重量比为0.01％～10.94％的穿琥宁。
9.如权利要求6所述的穿琥宁在制备外用药物中的应用，其特征是，所述药物组合物含有重量比为0.1％～5.5％的穿琥宁。
10.如权利要求6所述的穿琥宁在制备外用药物中的应用，其特征是，所述药物组合物被制备成外用的液体、半固体或固体制剂。
11.如权利要求10所述的穿琥宁在制备外用药物中的应用，其特征是，所述药物组合物被制备成外用的液体制剂。
12.如权利要求11所述的穿琥宁在制备外用药物中的应用，其特征是，所述液体制剂被制备成喷雾剂。
全文摘要
本发明涉及穿琥宁的用途。本发明公开了穿琥宁在制备外用药物中的应用，本发明的外用药物为穿琥宁喷雾剂，它是由穿琥宁加上药学上可接受的辅料制备而成的。主要用于治疗疱疹。本发明的有益效果是配制工艺简单，用药方便安全，药物直接作用于患处，见效快，进一步拓展了穿琥宁的药用领域。
文档编号A61P31/00GK1433758SQ0311733
公开日2003年8月6日 申请日期2003年2月21日 优先权日2003年2月21日
发明者丁志勇, 苏小斌, 张华 , 石兆勇, 张涛, 詹成武, 王正发 申请人:四川省宜宾五粮液集团有限公司