专利名称：(a)c－abl激酶活性的ATP－竞争性抑制剂和(b)两种或多种其它抗肿瘤剂的组合的制作方法
技术领域：
本发明涉及用于同时、单独或相继使用的，特别是用于治疗增殖性疾病或延缓其恶化的(a)c-abl激酶活性的ATP-竞争性抑制剂和(b)两种或多种其它抗肿瘤剂的组合；涉及治疗患有增殖性疾病的温血动物、特别是人类的方法，包括将包含(a)c-abl激酶活性的ATP-竞争性抑制剂和(b)两种或多种其它抗肿瘤剂的组合施与动物；包含这种组合的药物组合物；该组合在制备用于治疗增殖性疾病或延缓其恶化的药物中的用途；和包含所述组合的商业包装或产品。
背景技术：
已知嘌呤和嘧啶类似物的单个化合物以及选择性的组合可增加缓解率，特别是对于患有复发性白血病的儿科患者。
例如，Ara-C，一种嘧啶类似物，是脱氧胞苷的2’-α-羟基核糖(阿拉伯糖苷)衍生物。该化合物的抗白血病活性已被长期确立并且它是治疗患有急性或慢性白血病以及非-何杰金氏淋巴瘤的儿童和成年患者的重要药剂。6-巯基嘌呤(6-MP)是一种次黄嘌呤的嘌呤类似物，它与次黄嘌呤竞争次黄苷酸磷酸化酶。6-MP和ara-C的组合可降低急性成髓细胞白血病(AML)患者中白血病细胞的存活，其方式与在氟达拉滨磷酸盐和ara-C的组合中观察到的类似。
伊达比星(4-脱甲氧基柔红菌素)，一种拓扑异构酶II抑制剂，也已知在急性非-淋巴细胞性白血病中是有用的，而且在慢性粒细胞白血病原始细胞危象或者在抗急性淋巴细胞性白血病(ALL)中也是有用的。
这些药物和其它化疗剂通常组合使用，主要是成对的使用。
另外，c-abl激酶活性的ATP-竞争性抑制剂近来被发现在治疗白血病，特别是慢性髓细胞性白血病(CML)中是有用的。以前主要包括使用羟基脲、单独或与ara-C一起使用的α-干扰素或干细胞移植的CML的疗法并不令人满意，因为患者不耐受或者缺乏对这种疾病的效果。
在大多数CML病例中，一种典型的t(9；22)易位将bcr基因的5’端和abl基因的3’端并置，得到一种独特的210kDa融合蛋白p210bcr/abl。这种组成型活性细胞质激酶不仅能够转化鼠科纤维原细胞和造血细胞系，而且在转导进入老鼠骨髓时能引起一种类似CML的慢性骨髓增殖疾病。
p210bcr/abl激酶在大多数CML病例中的存在，加上这种激酶牵连于CML发病机理中的证据，使这种融合蛋白成为治疗CML的一个有吸引力的靶。以前的努力确定了多种p210bcr/abl激酶抑制剂。
研究的最为广泛的p210bcr/abl抑制剂是STI571(以前称作CGP 57148，化学名)。针对ATP-结合位点的试剂STI571目前已经上市，例如，在美国以商标名为Gleevec的产品面市。这种试剂是一种可逆抑制剂，它占据p210bcr/abl的ATP结合袋且以一种无活性的构象稳定该激酶。临床前研究证明了STI571也抑制c-abl的激酶活性、血小板衍生的生长因子受体和c-kit受体。I期研究表明STI571具有强烈的抗慢性期CML的活性，但具有有限的抗表达p190bcr/abl的急性淋巴细胞性白血病和CML的原始细胞危象期的活性。STI571单独和与常规的细胞毒性试剂结合的其它临床前和临床研究目前正在进行之中。
考虑到用诸如上面提到的那些化疗剂治疗增殖性疾病、特别是白血病所伴随的相对高的毒性，因此设计新的治疗计划或者新的组合仍然是个目标，它们原则上可以低剂量的单个化合物进行治疗，从而使与单独使用高毒性化合物有关的毒性降低。另外，用于治疗增殖性疾病的具改良功效的新的治疗方案和组合仍然有长期存在的需要。此外，特定的增殖性疾病/和或特定的患者群(例如，与性别或特别是与年龄有关的，如在用于儿童或老人的情况下，或者用已知的化疗剂或它们的组合难以医治其增生性细胞的患者)可能需要更特别的甚至是单独的治疗方案。
发明概述令人惊讶的是，现已经发现同时、分别或相继使用的(a)c-abl激酶活性的ATP-竞争性抑制剂和(b)两种或多种其它的抗肿瘤剂的组合，特别是用于治疗增殖性疾病或延缓其恶化，显示出上面提到的所期望的许多优点。
出乎意料地，已经发现在此所定义的组合的抗肿瘤效果，即特别是延缓增殖性疾病恶化或治疗增殖性疾病、特别是治疗肿瘤或者更特别是治疗白血病，比单独使用组合伙伴中的任意一种所达到的效果更好，即比仅使用在以所定义的组分(a)或组分(b)的两种或多种组合伙伴的治疗效果更好。另一个益处是可以使用更低剂量的活性成分，例如，所需要的剂量不仅通常更少而且应用的频率更低，或者使用所述剂量以减小副作用的发生率，从而可提高生活质量，降低死亡率和/或降低发病率。这符合待治疗患者的期望和要求。
具体而言，所述的组合可显示出协同作用，因而与只用两种或多种其它抗肿瘤剂(b)的组合相比，可提高疗效和/或降低各个组分的使用剂量。
图1表示对于CEM/0细胞的联合指数(CI)-Fa(受累分数)图，其源自N-{5-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基-甲基)-苯甲酰氨基]-2-甲基苯基}-4-(3-吡啶基)-2-嘧啶-胺单甲磺酸盐(STI571)加氟达拉滨加ara-C的中值效应图，条件是这些药物被认为不相互排斥(在相互排斥的情况下获得相同的曲线)。CI＝1时的直线代表相加作用，在该直线下面发现协同作用，在该直线上面发现拮抗作用。治疗48小时，首先给予STI571，4小时后给予氟达拉滨并在24小时时增加ara-C。
图2表示对于CEM/0细胞的联合指数(CI)-Fa(受累分数)图，其源自N-{5-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基-甲基)-苯甲酰氨基]-2-甲基苯基}-4-(3-吡啶基)-2-嘧啶-胺单甲磺酸盐(STI571)加氟达拉滨加ara-C的中值效应图，条件是这些药物被认为不相互排斥(在相互排斥的情况下获得相同的曲线)。CI＝1时的直线代表相加作用，在该直线下面发现协同作用，在该直线上面发现拮抗作用。治疗48小时，首先给予氟达拉滨，然后4小时后给予STI571并在24小时时给予ara-C。
图3表示对于CEM/0细胞(圆点)或CEM/ara-C/I/ASNase-0.5-2(三角形)的联合指数(CI)-Fa(受累分数)图，其源自N-{5-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基-甲基)-苯甲酰氨基]-2-甲基苯基}-4-(3-吡啶基)-2-嘧啶-胺单甲磺酸盐(STI571)加氟达拉滨加ara-C的中值效应图，条件是这些药物被认为不相互排斥(在相互排斥的情况下获得相同的曲线)。CI＝1时的直线代表相加作用，在该直线下面发现协同作用，在该直线上面发现拮抗作用。治疗48小时，首先给予氟达拉滨，然后在4小时后给予STI571，然后在24小时时给予ara-C。
图4表示对于CEM/0细胞的联合指数(CI)-Fa(受累分数)图，其源自N-{5-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基-甲基)-苯甲酰氨基]-2-甲基苯基}-4-(3-吡啶基)-2-嘧啶-胺单甲磺酸盐(STI571)加伊达比星加ara-C的中值效应图，条件是这些药物被认为是相互不排斥(在相互排斥的情况下获得相同的曲线)。CI＝1时的直线代表相加作用，在该直线下面发现协同作用，在该直线上面发现拮抗作用。治疗72小时，首先给予STI571，4小时后给予伊达比星并在24小时时增加ara-C。
发明详述在一项优选实施方案中，本发明涉及(a)c-abl激酶活性的ATP-竞争性抑制剂和(b)两种或多种其它的抗肿瘤剂的组合，用于同时、分别或相继使用，其特别用于是在温血动物、特别是人中延缓增殖性疾病或治疗增殖性疾病。
在另一项优选实施方案中，本发明涉及治疗患有增殖性疾病的温血动物、特别是人的方法，该方法包括将包含(a)c-abl激酶活性的ATP-竞争性抑制剂和(b)两种或多种其它抗肿瘤剂的组合施用于所述动物，优选以组分(a)和(b)在治疗所述疾病中具有联合治疗活性的方式组合；特别地以在治疗所述疾病中药学上有效的剂量施用。
本发明的另一项实施方案涉及包含(a)c-abl激酶活性的ATP-竞争性抑制剂和(b)两种或多种其它的抗肿瘤剂的组合以及任选地至少一种可药用载体的药物组合物，优选同时、分别或相继使用，其特别用于在需要所述治疗的温血动物、特别是人中治疗增殖性疾病或延缓其恶化。
本发明的另一项实施方案涉及同时、相继或分别使用的(a)c-abl激酶活性的ATP-竞争性抑制剂和(b)两种或多种其它的抗肿瘤剂的组合的用途，用于治疗增殖性疾病或延缓其恶化；和/或用于制备延缓增殖性疾病恶化或治疗所述疾病的药物制剂。
本发明的另一项实施方案涉及包含同时、按时间顺序交错或(次优选地)分别使用的(a)c-abl激酶活性的ATP-竞争性抑制剂和(b)两种或多种其它抗肿瘤剂的市售成套包装成产品，其特别用于治疗增殖性疾病或延缓其恶化。
在本公开内容中上下文中所用的通用术语，除非另外指明，优选具有以下含义义关于组分(a)和(b)，非常优选下列含义组分(a)c-abl激酶活性的ATP-竞争性抑制剂优选为c-abl激酶、特别是p210bcr/abl210kDa融合蛋白的小分子量(Mr<1500)抑制剂，或其药用盐，特别是2-苯基氨基嘧啶类的所述抑制剂，优选EP 0 564 409中所述的化合物，最优选(N-{5-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基-甲基)-苯甲酰氨基]-2-甲基苯基}-4-(3-吡啶基)-2-嘧啶-胺，尤其是其甲磺酸盐(单甲磺酸盐)形式(以下称为“STI571”)；或者在本发明的一个更宽方面，是2-噻吩-喹喔啉类的所述抑制剂，优选6，7-二甲氧基-2-噻吩-3-基-喹喔啉，特别是其盐酸盐形式(RPR101511A)，其也可以抑制VEGF、PDGF、EGF和相关上皮分泌的生长因子的分泌。
c-abl激酶、特别是例如bcr/abl激酶的抑制可根据本领域已知的方法(参见，例如Nature Medicine，2，561-566(1996)或Gombacorti等，BloodCeus，Mdecules and disence，23，380-394(1997))测定，该抑制测定可鉴别c-abl激酶抑制剂。
组分(b)组分(b)优选包含两种或多种、更优选两种或三种、最优选两种不同于组分(a)的抗肿瘤剂，在后一种情况中导致三种药物的组合。
在此所用的术语“抗肿瘤剂”包括但不限于芳香酶抑制剂、抗雌激素药、拓扑异构酶I抑制剂、微管活性剂、烷基化剂、抗肿瘤性抗代谢药、铂化合物、降低蛋白激酶活性的化合物或其它抗血管生成化合物、促性腺激素释放因子激动剂、抗雄激素药、双膦酸盐和曲妥单抗、核苷酸还原酶、抑制剂，优选拓扑异构酶II抑制剂或嘧啶或嘌呤核苷类似物。
在此所用的术语“嘧啶或嘌呤核苷类似物”包括但不限于氟达拉滨和/或阿糖胞苷(ara-C)(它是优选的)，还有6-硫鸟嘌呤、5-氟尿嘧啶、克拉屈滨、6-巯基嘌呤(特别是和抗ALL的ara-C组合)和/或喷司他了。
在此所用的术语“拓扑异构酶II抑制剂”包括但不限于蒽环类(antracycline)的阿霉素、表阿霉素、伊达比星和奈蒽柔比星、蒽醌类的米托蒽醌和洛索蒽醌，以及鬼臼霉素类的依托泊苷和替尼泊苷。依托泊苷可以例如以其市售形式、例如商标名为ETOPOPHOSTM的形式施用。替尼泊苷可以例如以其市售形式、例如商标名为VM 26-BRISTOLTM的形式施用。阿霉素可以例如以其市售形式、例如商标名为ADRIBLASTINTM的形式施用。表阿霉素可以例如以其市售形式、例如商标名为FARMORUBICINTM的形式施用。伊达比星可以例如以其市售形式、例如商标名为ZAVEDOSTM的形式施用。米托蒽醌可以例如以其市售形式、例如商标名为NOVANTRONTM的形式施用。优选伊达比星。
在此所用的术语“芳香酶抑制剂”涉及抑制雌激素产生，所抑制底物雄烯二酮和睾酮分别转化雌酮和雌二醇的化合物。该术语包括但不限于甾族化合物，尤其是依本类坦和福类司坦以及特别是非甾族化合物，尤其是氨鲁米特、伏罗唑、法曲唑、阿那曲唑和，非常特别地，来曲唑。
在此所用的术语“抗雌激素”涉及在雌激素受体水平上对抗雌激素作用的化合物。该术语包括但不限于他莫者芬、氟维司群、雷洛苷芬和盐酸雷洛昔芬。
在此所用的术语“拓扑异构酶I抑制剂”包括但不限于拓扑替康、伊立替康、9-硝基喜树碱和大分子喜树碱共轭物PNU-166148(WO 99/17804中的化合物A1)。
术语“微管活性剂”涉及微管稳定剂和微管去稳定剂，包括但不限于紫烷烷类的紫杉醇和多西他赛、长春花生物碱，例如长春碱，特别是硫酸长春碱、长春新碱，特别是硫酸长春新碱，以及长春烯碱、discodermolide和埃博霉素(epothilone)。Discodermolide可以例如US 5,010,099中所公开的那样获得。
在此所用的术语“烷基化剂”包括但不限于环磷酰胺、异环碎酰胺和苯丙氨酸氮芥。
术语“抗肿瘤性抗代谢药”包括但不限于5-氟尿嘧啶、卡培他滨、吉西他滨、甲氨喋呤和依达曲沙。
在此所用的术语“铂化合物”包括但不限于碳铂、顺铂和草酸铂。
在此所用的术语“降低蛋白激酶活性的化合物和其它抗血管生成化合物”包括但不限于降低表皮生长因子(EGF)、血管内皮生长因子(VEGF)、血小板衍生生长因子(PDGF)和/或蛋白激酶C活性的化合物和对它们的活性具有另一种机理的抗血管生成化合物。优选地，该术语涉及不同于c-abl激酶活性的蛋白激酶活性的抑制剂或者涉及酪氨酸磷酸化抑制剂，在后一种情况中优选具附加条件，即至少一种其它抗肿瘤剂不同于c-abl抑制剂或酪氨酸磷酸化抑制剂。
降低VEGF活性的化合物特别是抑制VEGF受体酪氨酸激酶的化合物、抑制VEGF受体的化合物和与VEGF结合的化合物，具体而言，是在WO 98/35958、WO 00/09495、WO 00/27820、WO 00/59509、WO98/11223、WO 00/27819和EP 0 769 947中一般性和详细公开的那些化合物、蛋白和单克隆抗体；M.Prewett等在Canler Research 59(1999)5209-5218中、F.Yuan等在Proc.Natl.Acad.Sci.USA，93卷，14765-14770页，1996年12月中、Z.Zhu等在Cancer Res.58，1998，3209-3214中，和J.Mordenti等在Toxicologic Pathology，27卷，第1期，14-21页，1999中所述的那些化合物、蛋白和单克隆抗体；在WO 00/37502和WO 94/10202中所述的化合物、蛋白和单克隆抗体；M.S.O’Reilly等，Cell79，1994，315-328中所述的AngiostatinTM，和M.S.O’Reilly等，Cell88，1997，277-285中所述的EndostatinTM；降低表皮生长因子(EGF)活性的化合物特别是抑制EGF受体酪氨酸激酶的化合物、抑制EGF受体的化合物和与EGF结合的化合物，具体而言，是在WO 97/02266、EP 0 564409、WO 99/03854、EP 0520722、EP 0 566 226、EP 0 787 722、EP 0 837063、US 5,747,498、WO 98/10767、WO 97/30034、WO 97/49688、WO97/38983和特别是WO 96/33980中一般性和详细公开的那些化合物；或者，降低蛋白激酶C活性的化合物特别是EP 0 296 110中所公开的那些星孢素衍生物(WO 00/48571中所述的药物制剂)，所述化合物是蛋白激酶C抑制剂。
酪氨酸磷酸化抑制剂优选为小分子量(Mr＜1500)化合物或其药用盐，特别是选自亚苄基丙二腈类或S-芳基苯丙二腈或双底物喹啉类化合物的化合物(参见Levitzki，FASEB J.6，3275-82(1992))，更特别是选自下组的任一种化合物酪氨酸磷酸化抑制剂A23/RG-50810；AG99；酪氨酸磷酸化抑制剂AG213；酪氨酸磷酸化抑制剂AG1748；酪氨酸磷酸化抑制剂AG490；酪氨酸磷酸化抑制剂B44；酪氨酸磷酸化抑制剂B44(+)对映体；酪氨酸磷酸化抑制剂AG555；AG494；酪氨酸磷酸化抑制剂AG556(参见Levitsky等，TiPS12，171(1991)；Ohmichi，Biochem.32，4650(1993)；Gazit等，J.Med.Chem.32，2344；Levitski等，Scienle267，1782(1995)；Gazit等，J.Med.Chem.39，4905(1996)；Gazit等，J.Med.Chem.34，189(1991)；Wang等，J.Immunol.162，3897(1999)，以及特别是下式的AG957
和最特别是下式的adaphostin(4-{[(2，5-二羟基苯基)甲基]氨基}-苯甲酸余刚烷基酶；NSC680410，Adaphostin) 或者(对于所提及的每种化合物，当存在成盐基团时)它们的盐。
在每种引用了专利申请和科学出版物的情况下，特别是关于各个化合物权利要求以及其工作实施例的最终产物、最终产物中的目标物质、药物制剂和权利要求书的，在此将这些出版物引入本申请作为参考。也包括其中所公开的相应的立体异构体以及相应的结晶变体，如溶剂合物和多晶型物。在此公开的组合物中用作活性成分的化合物可分别如所引用的文献所述进行制备和施用。
其它抗血管生成化合物有沙立度胺(THALOMID)、SU5416和塞来昔布(西乐葆)。
在此所用的术语“促性腺激素释放因子激动剂”包括但不限于阿巴瑞克、性瑞林和醋酸性瑞林。在此所用的术语“抗雄激素药”包括但不限于比卡鲁胺。
在此所用的术语“双膦酸盐”包括但不限于依替膦酸、氯膦酸、替鲁膦酸、帕米膦酸、阿仑膦酸、伊班膦酸、利塞膦酸和唑来膦酸。
“曲妥单抗”可以例如以其市售形式、例如商标名为HERCEPTINTM的形式施用。
核苷酸还原酶抑制剂特别是羟基脲或2-羟基-1H-异吲哚-1，3-一酮衍生物，如P.Nandy等，Acta Oncologica 33(8)，953-961(1994)中提到的PL-1、PL-2、PL-3、PL-4、PL-5、PL-6、PL-7或PL-8。
由代码号、通用名或商标名确定的活性剂的结构可得自标准纲要“TheMerck Index”的现行版本或者得自数据库，如专利国际(如IMS世界出版物)，或者上下文中提到的出版物。其相应内容在此引入作为参考。
需要了解的是对组分(a)和(b)的提及意指也包括所包含的任意一种活性物质(c-abl激酶抑制剂或抗肿瘤剂)的可药用盐。如果组分(a)和/或(b)所包含的活性物质具有例如至少一个碱性中心，则它们可形成酸加成盐。如果需要，也可以形成具有另外存在的碱性中心的相应的酸加成盐。具有酸性基团(如羧基)的活性物质可以与碱成盐。包含在组分(a)和/或(b)中的活性物质或者其药用盐也可以以水合物形式被使用或包含用于结晶的其它溶剂。N-{5-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基-甲基)-苯甲酰氨基]-2-甲基苯基}-4-(3-吡啶基)-2-嘧啶-胺，即最优选的组合伙伴(a)，优选以其单甲磺酸盐形式(STI571)用于本发明。
增殖性疾病特别是白血病或淋巴瘤，优选急性白血病或慢性白血病的急性期，特别是急性T-淋巴细胞白血病，但也可涉及表达VEGF和相关的生长因子并因此依赖于自分泌生长环的实体瘤，如人恶性胶质瘤、人成神经管细胞瘤，和/或起源于分泌VEGF、PDGF、EGF和/或相关的生长因子的神经元嵴衍生细胞、器官或组织的相关的实体瘤。
术语“实体瘤”尤指乳腺癌、结肠癌和通常地胃肠道癌、肺癌，特别是小细胞肺癌和非小细胞肺癌症、头和颈部癌、泌尿生殖系统癌，如宫颈癌、子宫癌、卵巢癌、睾丸癌、前列腺癌或膀胱癌；霍奇金病或卡波西肉瘤。取决于肿瘤类型和所用的具体组合，肿瘤体积可被减小。在此公开的组合也适于预防肿瘤的转移性扩散和微转移的生长或发展。
同时施用可以例如以两种或多种活性成分的固定组合形式进行，或者通过同时施用独立配制的两种或多种活性成分进行。相继使用(施用)优选意指在一个时间点施用组合中的一个(或多个)成分，在不同的时间点施用其它成分，即以按时间顺序交错的方式施用，优选这样的方式组合使得所述比独立施用单个化合物显示更高的功效(尤其是显示协同作用)。分别使用(施用)优选意指在不同的时间点彼此独立地施用组合中的各组分，优选意指组分(a)和(b)这样施用使两种化合物的可测量的血药浓度不以交迭的方式(同时)出现交迭。
两种或多种相继、分别或同时施用的组合也是可能的，优选这样组合使组合的组药物显示的联合疗效超过组合的组药物被独立使用时得到的效果，所述的组药物被独立使用的时间间隔足够长以致于它们的疗效不存在相互作用，特别优选不存在协同作用。
因此，根据本发明的制剂可以是(a)c-able激酶抑制剂和(b)两种或多种其它抗肿瘤剂的固定组合，或者一种以上单独的药物制剂的组合，其中各药物制剂分别以单独形式包含一种(或一种以上)这些活性成分(例如组分包)。
在另一方面，本发明提供了包含(a)c-able激酶抑制剂和(b)两种或多种其它抗肿瘤剂，以及可药用载体的药物制剂。
在此所用的术语“延缓恶化”意指将所述组合施用于处于前期或早期的、待治疗疾病的首次表现或复发的患者，其中所述患者被诊断为例如相应疾病的前兆或所述患者处于如在医疗期间的一种状态或处于由意外事件引发的一种状态，在该状态下可能将发展为相应的疾病。
“联合治疗活性”意指各化合物以这样的时间间隔被单独(以按时间顺序交错的方式，特别是以特定顺序的方式)施用即它们优选地在待治疗的温血动物、特别是人中仍然显示出(优选协同的)相互作用(联合疗效)。情况是否如此可特别通过监测血药浓度来测定，显示两种化合物至少在某些时间间隔中都存在于所治疗的患者的血液中。
“药学上有效的”优选涉及治疗上或在更宽意义上即还有预防上可有效对抗增殖性疾病、特别是白血病、优选以上所定义的白血病的量。“药学上有效的”药物组合特别是那些可导致患有骨髓和淋巴增殖性疾病如白血病和淋巴瘤的患者的疾病的完全缓冲期(CR)延长的组合。
在此所用的术语“市售成套包装”或“产品”特别定义“组分包”，含义是以上所定义的组分(a)和(b)可独立地给药或者通过使用含有不同量的组分(a)和(b)的不同的固定组合给药，即同时或在不同的时间点给药。另外，这些术语包括包含(特别是组合了)作为活性成分的组分(a)和(b)以及它们的同时、相继(按时间顺序交错的，以特定的时间顺序，优先地)或(次优选)分别使用以延缓增殖性疾病恶化或治疗增殖性疾病的说明书的市售成套包装。组分包的各组分可以例如同时或按时间顺序交错，即对于组分包中的任何组分在不同的时间点并且以相等或不等的时间间隔施用。非常优选地，时间间隔这样选择使组分联合使用对所治疗的疾病的效果大于仅使用组合伙伴(a)和(b)任何一种所获得的效果(如根据标准方法、例如在实施例中描述的联合指数测定或利用isobolograms所测定的那样)。在联合制剂中用于进行给药的联用成分(a)与联用成分(b)的总量的比例可以进行变化，例如，为了符合所治疗的患者亚人群的需要或单个患者的需要(这些患者由于具体的疾病、年龄、性别、体重等的不同而具有不同的需要)而进行变化。优选至少可以获得一种有益效果，例如联用成分(a)和(b)的作用相互增强，特别是高于相加的作用，从而使该效果可以在每一种联用药物的较低剂量下达到，该剂量低于在没有进行联合的单个药物进行治疗时所能耐受的剂量，产生额外增加的有利作用，例如较少的副作用、以联用成分(a)和(b)中一种或两种的非有效剂量获得联合治疗效果，并且十分优选联用成分(a)和(b)具有强的协同作用(联合指数大于4)。
在使用组分(a)和(b)的组合和商业包装的两种情况中，同时、相继或分开使用的任一种组合都是可能的，意指组分(a)和(b)可以在一个时间点同时施用，接着施用具有更低宿主毒性的仅仅一种组分，既可以在随后的时间点长期地(如超过3至4周的每日给药)施用并接着施用另一种组分，也可以在更后的时间点施用两种组分的组合(在后来的药物联合治疗过程以达到最佳的抗肿瘤效果)等等。
以上定义或提到的组分(a)和(b)的组合，治疗温血动物的包括施用这些两种组分的方法，包含用于同时、分开或相继使用的这两种组分的药物组合物，该组合用于治疗增殖性疾病或延缓其恶化的用途或在制备用于这些目的的药物制剂中的用途或含有所述组分(a)和(b)的组合的商业产品，在下文中也被称为本发明的组合(因而这个术语指每个能合适地取代该术语的可以通过已确定的测试模型、尤其是这里描述的如在实施例中的测试模型证实，与仅用单独的联用成分或仅用组分(b)的组合(两种或多种不同于c-abl激酶抑制剂的抗肿瘤剂)所观察到的效果相比，本发明的组合导致更有效地治疗增殖性疾病或延缓其恶化。本领域技术人员完全能够选择一种相关的测试模型去证明上下文提到的治疗适应症和有益效果。本发明的组合的药理学活性可以，例如，用临床实验或下文具体描述的测试方法来测定。
适宜的临床实验是，例如，开放标签的、非随机化的、对具有恶化的实体瘤的患者的剂量增加实验(I期)。这样的实验证明了本发明的组合的(A)安全性和(B)活性成分的协同作用。对于增殖性疾病的有益效果可以直接通过这些实验结果或通过本领域技术人员已知的试验设计的改变而确定。具体地讲，这些实验适合于比较单一疗法或仅使用两种或多种非c-abl激酶抑制剂(组分(b))的抗肿瘤剂的疗法的效果和使用本发明的组合产生的效果。优选将联合成分(a)以固定的剂量给药，而联合成分(b)的剂量逐渐增大直到达到组合疗法的最大耐受剂量，或者相反。在本实验的一个优选的实施方案中，每个患者接受联合成分(a)的每日剂量。可在例如4至8周后通过评估增殖性疾病的状况来测定这些实验的治疗效果，例如，在白血病的情况下，通过测定异常白细胞的数量，和通过单核细胞染色和/或通过例如利用FACS-LPC MRD或PCR测定最小残余疾病(MRD)。或者，当该治疗方案的安全性被确立后，可以采用安慰剂对照的双盲实验来证明这里提到的本发明的组合的益处。
本发明的组合也可与其它疗法，如外科介入疗法、过热疗法和/或放射疗法结合使用。
本发明的优选的实施方案在下面的本发明的优选实施方案中，更多的通用术语可被上面给出的更具体的定义独立地或完全地取代，因而导致本发明的更优选的实施方案。
优选的本发明的组合包含(a)N-{5-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基-甲基)-苯甲酰氨基]-2-甲基苯基}-4-(3-吡啶基)-2-嘧啶-胺，或其药用盐，和(b)至少两种其它的抗肿瘤剂，可独立地为游离形式或为药用可接受盐形式，优选以上所定义的抗肿瘤剂。
更优选的本发明的组合包含(a)N-{5-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基-甲基)-苯甲酰氨基]-2-甲基苯基}-4-(3-吡啶基)-2-嘧啶-胺，或其药用盐，和(b)两种或三种、优选两种选自嘌呤核苷类似物和拓扑异构酶II抑制剂的其它抗肿瘤剂，可独立地为游离形式或为可药用盐形式。
还更优选的本发明的组合包含(a)N-{5-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基-甲基)-苯甲酰氨基]-2-甲基苯基}-4-(3-吡啶基)-2-嘧啶-胺，或其药用盐，和(b)两种选自伊达比星、氟达拉滨和ara-C的其它抗肿瘤剂，可独立地为游离形式或为可药用盐形式。
最优选地，本发明涉及本发明的包含以下组分的组合(a)N-{5-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基-甲基)-苯甲酰氨基]-2-甲基苯基}-4-(3-吡啶基)-2-嘧啶-胺，或其药用盐，和(b)两种其它的抗肿瘤剂，特别是选自嘌呤核苷类似物和拓扑异构酶II抑制剂，最特别是选自伊达比星、氟达拉滨和ara-C，可独立地为游离形式或为可药用盐形式，其中的组合是这样的组合组分(a)在组分(b)之前、特别是2至48小时之前施用。
在前面描述本发明的优选实施方案的任一段中，最优选的是其中用在组分(a)和组分(b)中的活性化合物被单独地配制或者为组分包形式的那些本发明的组合，在所述的两种情况下都基于已经(如市售)可获得的药物制剂。
药物制剂和方法包含组分(a)和/或(b)的药物制剂、就组分(b)而言，其中包含的抗肿瘤剂的固定组合或用于组合使用的一种或多种这些抗肿瘤剂的独立制剂可以是本领域已知的这些组分的标准制剂。
药物组合物包含约0.00002至约95％、尤其是(如在准备好使用的输液稀释液中)0.0001到0.02％、或(例如在注射或灌输浓缩物或尤其是肠胃外配方情况下)约0.1％至约95％、优选约1％至约90％的活性成分(重量/重量，在每种情况中)。本发明的药物组合物可以是例如单位剂量形式，如是安瓿剂、小瓶、糖锭剂、片剂、输液袋包或胶囊剂形式。
本发明的组合中所用的每种组合伙伴的有效剂量可以根据所用的具体化合物或药物组合物、施用方式、所治疗的疾病、所治疗的病症的严重性而变化。因此，本发明的组合的剂量范围可根据多种因素进行选择，包括施用途径和患者的肾功能及肝功能。具有普通技能的内科医生、临床医生或兽医能容易地确定和开具预防、逆转或阻止病情恶化所需的单个活性成分的有效量。实现活性成分浓度在产生功效且无毒的范围内的最佳精确度需要基于活性成分对靶位点有效性的动力学的掌握。
c-abl激酶抑制剂和构成组分(a)和(b)部分的另外的(其它)抗肿瘤剂在下面的药物制剂/组合物的定义中被称为“活性成分”本发明的药物组合物以本身已知的方法制备，例如通过常规的溶解、冻干、混合、制粒或成型方法和与适宜的载体材料组合制备。
活性成分的溶液剂和混悬剂，以及尤其是等张水性溶液剂或混悬剂可用于活性成分的胃肠外施用，也可以是例如只包含活性成分或包含活性成分和药用载体如甘露醇的冻干组合物，使用前制备所述的溶液剂或混悬剂。药物组合物可以被灭菌和/或可以包含赋形剂如防腐剂、稳定剂、润湿剂和/或乳化剂、增溶剂、调节渗透压剂的盐和/或缓冲，并以本身已知的方法、例如通过常规的溶解或冻干方法被制备。溶液剂或混悬剂可以包含增加粘度的物质，如羧甲基纤维素钠、羧甲基纤维素、右旋糖苷、聚乙烯吡咯烷酮或明胶。于油中的混悬剂包含常规用于注射目的的植物油、合成油或半合成油作为油组分。
注射或输液组合物可在无菌条件下用常规方法制备；也用同样的方式将组合物导入安瓿或小瓶中并密封容器。
输液剂优选必须具有与体液相等或基本相等的渗透压。因此，水性介质优选含有具有使输液剂的渗适压体液相等或基本上相等的作用的等张剂。
等张剂可选自本领域已知的那些等张剂中的任一种，例如甘露醇、右旋糖、葡萄糖和氯化钠。输液制剂可以用水性介质稀释。用作稀释液的水性介质的量根据输液剂中所需的活性成分浓度选择。
输液剂可以包含其它通常用于静脉内施用的制剂中的赋形剂。所述赋形剂包括抗氧剂。输液剂可以如下制备将安瓿或小瓶的制剂与水性介质，如在适合的容器如输液袋或瓶中的5％w/v的葡萄糖的WFI溶液或特别是0.9％的氯化钠溶液混合。输液剂一旦制成，优选立即使用或在制成的短时间内如6小时内使用。盛装输液剂的容器可以选自于不与输液剂反应的任何常规容器。虽然优选使用塑料容器例如塑料输液袋，但用在前面提到的玻璃类制得的玻璃容器也是适合的。
用于胃肠外例如口服施用的药物组合物可通过如下方法获得将活性成分和固态载体混合，如果需要，将得到的混合物制粒，并且如果需要或必要，加入适宜的赋形剂后将混合物加工成片剂、糖锭剂芯或将所述药物组合物装入粉末吸入器中以通过吸入施用。也可能将药物掺入可使活性成分以所标定的量扩散或被释放的塑料载体中。
合适的载体尤其是填充剂如糖例如乳糖、蔗糖、甘露醇或山梨醇、纤维素制品，和/或磷酸钙例如磷酸三钙或磷酸氢钙，还有粘合剂如淀粉例如玉米淀粉、小麦淀粉、水稻淀粉或马铃薯淀粉、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羧甲基纤维素钠和/或聚乙烯吡咯烷酮，和/或如果需要，删解剂如上面提到的淀粉，还有羧甲基淀粉、交联聚乙烯吡咯烷酮、海藻酸或其盐如藻酸钠。另外的赋形剂特别是流动调节剂和润滑剂，例如硅酸、滑石粉、硬脂酸或其盐如硬脂酸镁或硬脂酸钙，和/或聚乙二醇，或其衍生物。
片芯可具有合适的、任选肠溶的包衣，方法是通过使用特别是可包含阿拉伯胶、滑石粉、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇和/或二氧化钛的浓缩糖溶液或者在适宜的有机溶剂或溶剂混合物中的包衣溶液，或者，对制备肠溶衣，使用合适的纤维素制品的溶液，如醋酸纤维邻苯二甲酸酯或羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯。可向片剂或片剂包衣中加入染料或色素，例如为了识别目的或为了指示不同剂量的活性成分。
用于口服施用的药物组合物还包括由明胶组成的硬胶囊剂，和由明胶与增塑剂如甘油或山梨醇组成的密封的软胶囊剂。硬胶囊可含有颗粒形式的活性成分，例如与填充剂如玉米淀粉、粘合剂和/或助流剂如滑石粉或硬脂酸镁以及任选地稳定剂的混合物的颗粒。在软胶囊中，活性成分优选溶解或混悬于适宜的液体赋形剂如脂肪油、石蜡油或液体聚乙二醇或乙二醇或丙二醇的脂肪酸酯中，也可以向其中加入稳定剂和洗涤剂，例如聚氧乙烯失水山梨糖醇脂肪酸酯类稳定剂和洗涤剂。
在与一种或多种其它活性成分组合的情况下，两种或多种组分或两种或多种独立制剂(例如在组分包中)的固定组合可如上所述进行制备，或者使用市售的且本领域技术人员公知的标准制剂中的其它活性成分，且本发明的化合物和任何其它的化学疗法间隔地施用，所述间隔可使得在治疗增殖性疾病、尤其是白血病(特别是以上所定义的白血病)中产生联合的、特别是平行的、额外的或优选协同的效应。
与长效的β-2肾上腺素受体激动剂组合的化学疗法的剂量是例如本领域已知的标准疗法中所用的那些剂量，例如在R.T.Skeel，Handtook ofCanler Chemotherapy，第5版，Lippincott Williams & Wilkins，Philadelphia等，1999中所述的剂量，或者，考虑到协同作用，稍微低一些的剂量例如分别为不组合剂量的5至60％；每种情况的剂量取决于患者的状态、年龄、性别、体重和其它相关特性。它们可被单独配制，尤其是用在已知的药物组合物中，优选以包含每种活性化合物的药物制剂的成套组件(组分包)形式或者以固定组合物形式组合。
以下列出了一些优选剂量的实例
C-abl激酶抑制剂、特别是N-{5-[4-(4-甲基-哌嗪1-基-甲基)-苯甲酰氨基]-2-甲基苯基}-4-(3-吡啶基)-2-嘧啶-胺单甲磺酸盐施用于人的剂量优选为约2.5至1500mg/天，更优选5至900mg/天且最优选400mg/天。除非在此另外声明，所述化合物优选以每天1至4个剂量施用。可以长期进行施用，例如数年，优选不超过三个月，并且优选与组分(b)平行施用。
对于嘧啶或尤其是嘌呤核苷，特别地，日剂量可以是60mg/d/m2至400mg/m2时，例如在2至7天中使用，对于喷司他丁，每两周使用。例如，对于氟达拉滨，特别是对于儿科白血病患者，优选的剂量为在5至30分钟中给予一个大剂量5至11mg/m2，然后连续滴注15至45、例如30.5mg/m2/天48小时，优选地，之后在5至30分钟中施用ara-C的负荷剂量300至400、例如390mg/m2，然后连续输注40至110、例如101mg/m2h72小时。对于成年白血病患者，(可耐受的)ara-C总剂量不应超过500至1000mg/m2/dx 3-4天。高度建议对这些患者不使用ara-C的大剂量或仅使用大量减量的大剂量。
在本发明的一项优选实施方案中，特别是对在急性白血病(尤其是T-淋巴细胞白血病)的情况下，作为组分(a)以100至800mg/天(在较长一段时间如3个月中每天施用)的剂量口服施用STI571，与施用氟达拉滨平行进行，氟达拉滨与ara-C(以及组分(b)平行施用或优选地在其之前(例之前1至2天)施用，例如在施用ara-C前施用两天(例如使用前面段落中所优选的氟达拉滨和Ara-C的施用方案。
在本发明的另一项优选实施方案中，作为组分(a)以100至800mg/天(在较长一段时间如3个月内每天施用)的剂量口服施用STI571，与下面段落中提供的优选剂量的伊达比星平行施用，与前面段落中提供的优选剂量的ara-C平行施用。
在拓扑异构酶II抑制剂中，阿霉可以以约10至100mg/m2天、例如25或75mg/m2天的剂量例如作为单剂量施用于人；表阿霉素可以以约10至200mg/m2天的剂量施用于人；伊达比星可以以约0.5至50mg/m2天、例如8mg/m2天的剂量施用于人，施用三天；和米托蒽醌可以以约2.5至25mg/m2天、例如10-14mg/m2天的剂量施用于人，施用5至8天。
法曲唑可以以约0.5至约10mg/天、优选约1至约2.5mg/天的剂量口服施用于人。依西美坦可以以约5至约200mg/天、优选约10至约25mg/天的剂量口服施用于人，或以约50至500mg/天、优选约100至约250mg/天的剂量经胃肠外施用于人。如果药物以单独的药物组合物被施用，那么它可以以GB2,177,700中公开的形式被施用。福美司坦可以以约100至500mg/天、优选约250至约300mg/天的剂量经胃肠外施用于人。阿那曲唑可以以约0.25至20mg/天、优选约0.5至约2.5mg/天的剂量口服施用于人。氨鲁米特可以以约200至500mg/天的剂量施用于人。枸橼他莫昔芬可以以约10至40mg/天的剂量施用于。长春碱(非高度推荐，因为可能发生继发性恶性病)可以以约1.5至10mg/m2天的剂量施用于人。硫酸长春新碱可以以约0.025至0.05mg/千克体重*周的剂量经胃肠外施用于人。长春烯碱可以以约10至50mg/m2天的剂量施用于人。磷酸依托泊苷可以以约25至115mg/m2天、例如56.8或113.6mg/m2天的剂量施用于人。替尼泊苷可以以约每两周约75至150mg的剂量施用于人。紫杉醇可以以约50至300mg/m2天的剂量施用于人。多西他赛可以以约25至100mg/m2天的剂量施用于人。环磷酰胺可以以约50至1500mg/m2天的剂量施用于人。苯丙氨酸氮芥可以以约0.5至10mg/m2天的剂量施用于人。5-氟尿嘧啶可以以约50至1000mg/m2天、例如500mg/m2天的剂量口服施用于人。卡培他滨可以以约10至1000mg/m2天的剂量施用于人。盐酸吉面他滨(非高度推荐，因为可能发生继发性恶性病)可以以约1000mg/周的剂量施用于人。甲氨喋呤可以以约5至500mg/m2天的剂量施用于人。拓扑替康可以以约1至5mg/m2天的剂量施用于人。伊立替康可以以约50至350mg/m2天的剂量施用于人。碳铂可以以约每四周约200至400mg/m2的剂量施用于人。顺铂可以以约每三周约25至75mg/m2的剂量施用于人。草酸铂可以以每两周约50至85mg/m2的剂量施用于人。阿仑膦酸可以以约5至10mg/天的剂量口服施用于人。氯膦酸可以例如以约750至1500mg/天的剂量施用于人。依替膦酸可以以约200至400mg/天的剂量施用于人。伊班膦酸可以以每三至四周约1至4mg的剂量施用于人。利塞膦酸可以以约20至30mg/天的剂量施用于人。帕米膦酸可以以每三至四周约15至90mg的剂量施用于人。替鲁膦酸可以以约200至400mg/天的剂量施用于人。曲妥单抗可以以约1至4mg/m2周的剂量施用于人。比卡鲁胺可以以约25至50mg/m2天的剂量施用于人。
酪氨酸磷酸化抑制剂、特别是Adaphostin施用于温血动物尤其是人的剂量优选为约1至6000mg/天，更优选25至5000mg/天，最优选50至4000mg/天。除非在此另外声明，该化合物优选每天施用1至5次，特别是1至4次。
组分(a)和(b)可根据本领域已知的方法制备，例如在此引用的任一参考文献中所述的方法，和/或它们是市售可得的。最优选的组合物伙伴(a)STI571可以如WO 99/03854中所述进行制备和施用。
实施例下面的例子帮助阐述本发明而不限制它的范围材料和方法CCRF-CEM/0人白血病细胞系由DCT、Tumor Bank、NCI、NIH、Fredrick、MD获得。CEM/ara-C/I/ASNase细胞系(抗ara-C和L-天冬酰胺酶的药物)通过用几种高剂量的ara-C连续处理而获得并部分抗ara-C。简言之，在我们的实验室中抗ara-C系通过将CEM/0(野生型)系暴露于0.1或者1uM ara-C 24小时而形成。温育后，将存活细胞进行洗涤并制成每10厘米400个细胞的软琼脂平板用于细胞集落生长。处理过程用高一个对数的(one-log higher)ara-C浓度(1至10uM)在24小时内在选择的菌落中重复一次或两次，接着做软琼脂平板。另外，从软琼脂中分离培养出的CEM细胞菌落被培养在加富的RPMI-1640(10％FCS+1％氨基酸+1％HEPES缓冲液)中且每天用Coulter计数器和显微镜/血球计对细胞培养物的等分试样进行细胞计数。在用Trypan排出试验核验生命力后，将细胞计数对时间作图。一旦开始生长，动力学(细胞系生长的斜面)与亲代细胞系重叠，表明复制半衰期(通过外推细胞循环周期)没有改变。这些细胞培养物在开始对数线性生长前的延滞期与ara-C-抗性程度有关。用低浓度ara-C处理三次的细胞生长中没有时间延滞，并且对药物的抗性增大多个数量级，从2倍至大于108倍抗性(CEM/ara-C/I单克隆)(Martin-Aragon S等，Anticancer Res.，20卷139-150页，2000年)。没有对这些细胞系进行进一步的ara-C处理，且它们似乎维持抗ara-C的相关度而与处理的持续时间无关(持续的药物抗性克隆归因于ara-C对DNA高甲基化的后生效应)。上面提到的细胞系对ara-C的敏感度约比野生型CEM/0细胞系对ara-C的敏感度小1％(Yee等，Am.Assoc.Cancer Res.，34卷，416页(摘要#2484)和Antonsson等，Cancer Research，47卷3672-8页(1978年))。最后，用0.5至1IU/ml(白血病患者的治疗水平)天然大肠杆菌天冬酰胺酶处理CEM/ara-C/I克隆24小时而筛选可进一步抗天冬酰胺酶(Capizzi II方案)的双重抗性克隆CEM/ara-C/I/ASNase。洗涤细胞并制成软琼脂平板用于菌落生长。得到的克隆中，有一种是用于后续实验的CEM/ara-C/I/ASNase克隆(也参见Majlessipour等，Anticancer Res.，21卷，11-22页(2001年))。药理学和酶学的脱氧胞苷激酶(dCk)测定在单克隆衍生的培养物中进行。进行这些测定以按照Antonsson等，Cancer Res.47卷3672-8页(1987年)和Avramis等，Cancer Res.49卷241-7页(1989年)中所描述的方法测定与野生型CEM/0细胞相比对ara-C的敏感度和dCk活性的相对百分比。
测定测试化合物(STI571、ara-C、氟达拉滨、伊达比星)对CEM/0或CEM/ara-C/I/ASNase的IC50。采用24-孔平板(2ml/孔，Costar，Mark II，No.3424)检测IC50值。将化合物溶解于二甲亚砜(DMSO)且最终浓度不超过1％。药物溶液经0.22微米×13毫米微孔过滤器(Millipore GSWP)除菌。储备液(10-2M)用加富的RPMI1640生长培养基稀释。进行适当的对照以解释DMAO的任何影响。每孔接受0.9ml的包含2×105个细胞的细胞混悬液。处理孔接受包含药物STI571的DMSO含量低于1％的0.1毫升的培养液RPMI，以致当用量被加至1ml时(0.9+0.1ml)其将达到所需的1ml细胞混悬液中10或0.1μM的所需浓度。每种残留药物浓度(10-4至10-9M)被制成三份平板且在具有95％空气和5％CO2的气流中于37℃温育，对于氟达拉滨+STI571然后是ara-C，温育48小时；或对于伊达比星+ara-C、STI571+氟达拉滨+ara-C或伊达比星(在更低的药物浓度)或其它任何组合，温育72h。在所需的温育期后细胞用Coulter计数器计数。另外进行MTT试验。在用台盼蓝染料排出试验校正细胞生命力后，用控制百分比评估细胞等分试样中的结果。
简言之，用恒定比率的“药物A”(任何单一药物或具有已确定的协同作用的两种药物的组合)和“药物B”(任何单一药物或具有已确定的协同作用的两种药物的组合)进行检测。在一种方法中，药物A和药物B间(如果一种或两种都是药物组合，它们在最后的计算中作为一个药物来表示)所有可能的药物比率均被测定。用中值效应原理(MEP)检测药物A或药物B单独以及它们以恒定的比率组合的对角组合，如对照(C)，0.01、0.05、0.1、0.5、1μM或nM单位和0.01∶0.01、0.05∶0.05、0.1∶0.1、0.5∶0.5和1∶1的按1∶1的组合比率。组合比率是恒定的，但不仅仅是1∶1，也可以是1∶10或10∶1等。
采用由下表显示的两个平板(每一格相当于一个孔)作为例子
A药物A，浓度(A后面的数字)单位为μM或nMB药物B，浓度(B后面的数字)单位为μM或nM
其代表两个24孔平板，它被用于一式三份(单独的)测定。当发现药物组合在杀伤细胞方面很有效时，设置更高或在大部分情况下更低的药物浓度的额外的平板。另外，药物温育时间可被改变(例如如果发现高的细胞毒性可缩短时间)。有利地，细胞杀伤超过50％，但由于评估ED50值的程序仅从低于(0至49)或高于50％(51至99％)细胞杀死的值中进行评估的局限，并不是所有值都超过50％。导致细胞程序死亡起效很快的药物组合(如STI+Fludara+ara-C)在48小时被中止，其它持续至72小时(见图)。没有细胞培养被维持超过72小时(因为那时生长培养基营养物变得有限)。数据经由MEP标准程序分析。
该模型的一个变通模型用下表显示，其中，每一24孔板被用于6种浓度的每种药物或一式三份的药物组合加上对照(6x)。第三个平板用于测定恒定比率的药物组合药物A加上药物B，两个分别以药物A和药物B命名。结果通过MEP以同样的方式处理。
A药物A，浓度(A后面的数字)单位为μM或nMB药物B，浓度(B后面的数字)单位为μM或nM所用的药物组合在下文的实施例中详细给出进行概率分析以获得ED50值。在2至3天的时间内用每孔的活细胞数对时间作图。采用Isobologram和中值效应原理获得ED50值(参见Avramis等，Cancer Res.49卷241-7页(1989年)；和Chou，用于定量协同作用及拮抗作用的中值效应原理和联合指数，Chou，T.C.，和Rideout，D.C.(编著)，“化疗剂中的协同作用和拮抗作用”，科学出版社，Orlando(1991年)，61-90页)。对彼此不排斥和/或只有协同作用的情况，通过将CI标于Y轴并将fa(受累分数)标于X轴而绘制中值效应图(见图1至图4)。
Isobologram方法Isobologram方法包括使用下面的方程式CI＝(Ac/Ae)+(Bc/Be)其中CI是联合指数，Ae和Be是药物A和药物B单独使用时对某体系的抑制达到x％(例如50％)所需的剂量，而Ac和Bc是抑制系统的x％的组合中的化合物浓度。
中值效应方程式中值效应原理包括使用下面的方程式fa/fu(D/Dm)m其中D是剂量，fa是受剂量D影响的体系的分数，fu是不受剂量D影响的体系的分数，Dm是产生中值效应(与IC50类似)所需的剂量，m是表示剂量-效果曲线的S型的Hill-型系数，fa+fu＝1，D＝Dm[fa/(1-fa)]1/m，log(fa/fu)＝mlog(D)+mlog(Dm)。
对彼此排斥的药物(具有同样的作用机理)的CI的计算CI＝(D)1/(Dx)1+(D)2/Dx)2对彼此不排斥的药物(具有不同的作用机理)的CI(联合指数)的计算CI＝(D)1/Dx)1+(D)2/Dx)2+(D)1x(D2/(Dx)1x(Dx)2对于彼此排斥或不排斥的药物，当CI＜1时，表明有协同作用；当CI＝1时，表明相加作用；和当CI＞1时，表明拮抗作用。
在下表中，处于“协同作用”的任何值若在1和2之间则被认为是相加的，高于2.5被认为是中度协同的，高于4至5被认为是高度协同的。低于1的任何值被认为是拮抗的(意指组合药物攻击同样的靶或意指(通常在用高的药物浓度时发现)在诱导细胞毒性中存在饱和步骤)。
实施例1N-{5-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基-甲基)-苯甲酰氨基]-2-甲基苯基}-4-(3-吡啶基)-2-嘧啶-胺单甲磺酸盐(STI571)与氟达拉滨和阿糖胞苷(ara-C)组合-对CEM/0细胞的作用如果在总计48小时的处理过程中，对CEM/O细胞施用STI571并且在4小时后施用氟达拉滨和ara-C，得到图1中图形所示的联合指数(CI)-受累分数关系。假设药物之间没有相互排斥作用，与氟达拉滨加ara-C的组合对相比，三种药物的组合获得了以下的协同系数
由这些数据可见在ED50和ED70下STI571和氟达拉滨和ara-C之间发现协同作用，但在ED90下未发现协同作用。
实施例2N-{5-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基-甲基)-苯甲酰氨基]-2-甲基苯基}-4-(3-吡啶基)-2-嘧啶-胺单甲磺酸盐(STI571)与氟达拉滨和阿糖胞苷(ara-C)组合且先给予氟达拉滨-对CEM/0细胞的作用如果在总计48小时的处理过程中，对CEM/O细胞施用氟达拉滨并且在4小时后施用STI571和ara-C，得到图2中图形所示的联合指数(CI)-受累分数关系。假设药物之间没有相互排斥作用，与氟达拉滨加ara-C的组合对相比，三种药物的组合获得了以下的协同系数
可见与实施例1相比，在ED50和ED70时，氟达拉滨处理先于STI处理4小时，发现更小的药物协同作用，在ED90下，没有发现协同作用。
实施例3N-{5-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基-甲基)-苯甲酰氨基]-2-甲基苯基}-4-(3-吡啶基)-2-嘧啶-胺单甲磺酸盐(STI571)与氟达拉滨和阿糖胞苷(ara-C)组合且先给予氟达拉滨-对耐药性CEM/ara-C/I/ASNase-0.5-2细胞的作用为了比较对野生型CEM/0细胞的作用和对ara-C耐药性CEM/ara-C/I/ASNase-0.5-2细胞的作用，测定了先施用氟达拉滨、然后在4小时后施用STI571和ara-C的加合物的效果被测出。图3(三角形)表示本实验的CI/Fa图(为了对比，也包括图2中的数据并用圆点表示)。计算协同作用，在ED50下测得111.2-倍的作用，证明在耐药性细胞系中存在药物协同作用。
实施例4N-{5-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基-甲基)-苯甲酰氨基]-2-甲基苯基-4-(3-吡啶基)-2-嘧啶-胺单甲磺酸盐(STI571)与伊达比星和ara-C组合-对CEM/0细胞的作用如果将STI571和伊达比星加ara-C被施用于CEM/0-细胞以进行总计72小时的处理，得到图4中图形所示的联合指数(CI)-受累分数关系。假设药物没有相互排斥作用，与氟达拉滨加ara-C的组合对相比，三种药物的组合获得了以下的协同系数
因此，已经高度协同的伊达比星加ara-C方案增强了STI571的作用，尤其是在ED90下药物协同作用显著增加。
由以上实施例可知STI571与其它细胞毒性组合不仅对Ph+-有效，而且对其它白血病也有效。
实施例5用STI/氟达拉滨/ara-C或STI/伊达比星/ara-C组合进行的临床试验的概况用急性粒细胞白血病(AML)、急性淋巴细胞白血病(ALL)或特别是慢性粒细胞白血病(CML)患者进行临床实验。获得了所要求的许可。
方案变体a)对于用STI571/氟达拉滨/ara-C组合进行的治疗，从第1天起，以递增方式以200、400或600mg/天的剂量每天口服施用STI571。剂量水平1第1天口服施用200mgSTI，30分钟后在15分钟中施用负荷大剂量的氟达拉滨(10mg/m2)，然后以30mg/m2/24小时连续输注(CI)48小时。
第2天再次口服施用200mgSTI571，并以与第一天相同的剂量继续施用氟达拉滨CI。
第3天(48.1小时)，再次口服施用200mgSTI571被经口施用，并施用负荷大剂量的ara-C(最大耐受剂量(＝MTD，例如对于儿童为390mg/m2/天)的75％)，然后以MTD(对于儿童MTD＝100mg/m2/天的75％)连续输注24小时。
第4天，再次口服施用仍是200mgSTI571，并以第三天所给定的剂量继续施用ara-CCI。
第5天，再次口服施用200mgSTI571，并以第三天所给定的剂量继续施用ara-CCI。
在以后各天中，继续每天口服施用，STI571(200mg/天)，施用较长一段时间(至少30天)。
剂量水平2进行与剂量水平1下给出的同样的治疗，不同的是每天口服施用400mgSTI。
剂量水平3进行与剂量水平1下给出的同样的治疗，不同的是每天口服施用600mg STI。
剂量水平4进行与剂量水平1下给出的同样的治疗，不同的是ara-C的剂量现在是100％的MTD(大剂量和CI均如此)。
剂量水平5进行与剂量水平1下给出的同样的治疗，不同的是STI571的剂量是400mg(口服施用)且ara-C的剂量现在是100％的MTD。
剂量水平6进行与剂量水平1下给出的同样的治疗，不同的是STI571的剂量是600mg(口服施用)且ara-C的剂量现在是100％的MTD。
对于每个剂量水平，开始时考察至少4名患者以确保每项研究结束时至少3名患者是可评价的。
在治疗前和在72小时(或ara-C施用后24小时)检测骨髓抗击物(参见下面)，并在24-28天检查骨髓应答和进行MRD检测。
如果评价未提供任何禁忌症，则在约28天后在适宜水平上重复进行治疗。
在开始施用负荷大剂量和连续输注后4小时和停用ara-C后20小时和48小时采集用于ara-C稳态浓度测定的血浆样品。
对于成年患者，静脉内输注时将ara-C的剂量减少至500mg/m2/天并在安全评价的基础上逐步增加至750和1000mg/m2/天。继续以上述剂量口服施用STI571。
方案变体b)对于用STI571/伊达比星/氟达拉滨/ara-C组合进行的治疗，以200、400或600mg/天的剂量每天口服施用STI571，在第“0”、“1”和“2”天，然后静脉内施用8mg/m2/天的大剂量伊达比星并如方案变体a)中那样施用氟达拉滨。平行地，在第“0”天，在15分钟中施用250mg/m2的ara-C的负荷剂量，然后以65mg/m2/h连续输注ara-C72小时。继续以上述剂量口服施用STI571。大体上可类似于方案变体b)逐步增加剂量。
常识应答标准在ALL或AML患者的下列任一种情况中认为已发生完全应答(CR)(a)患者具有有外周计数回收(ANC 1,000/mm3且血小板计数100,000/mm3)的M1骨髓(＜5％胚细胞)；或者(b)治疗前患者具有无外周计数回收的M1骨髓。在下列任一种情况中认为已发生部分应答(PR)(a)患者具有有外周计数回收(ANC 1,000/mm3且血小板计数100,000/mm3)的M2骨髓；或者(b)治疗前患者具有无外周计数回收的M1骨髓。将临床毒性根据国家癌症研究所的癌症治疗的一般毒性划分量表划分等级。这是一种I-IV等级的量表，其中IV被定义为威胁生命。各种毒性的具体限度取决于器官系统。
对于骨髓检测，获得两组骨髓抽出物，一份在STI571治疗开始前获得(对照)而第二份在治疗后节三天获得。应该在第24至28天抽取第三份抽出物以用于评价CR、PR或无应答(NR)。骨髓抽吸物应在局部麻醉下从所治疗的患者中获得，置于涂有肝素的试管中并放在冰浴中。应用此限制是因为胚细胞在由患者获得样本后1-2小时内被分离、提取和测试，不依赖于提取样本的时间，目的是保持白血病细胞的完整的酶活性。用两种浓度的ara-C，即200μM和1mM对治疗前的样本体外测试，并且用高氯酸提取细胞用于ara-CTP测定。
ara-C、氟达拉滨、伊达比星和STI571血药浓度的测定遵循标准方法(参见，例如Avramis等，Clin.Carcer Res.4，45-52，1998；和Dinndorf等，J.Clin.Oncol.15(8)，2780-85，1997)。
权利要求
1.用于同时、分别或相继使用的(a)c-abl激酶活性的ATP-竞争性抑制剂和(b)两种或多种其它抗肿瘤剂的组合。
2.根据权利要求1的组合，其中c-abl激酶活性的ATP-竞争性抑制剂(a)是N-{5-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基-甲基)-苯甲酰氨基]-2-甲基苯基}-4-(3-吡啶基)-2-嘧啶-胺或其药用盐。
3.根据权利要求1的组合，其中c-abl激酶活性的ATP-竞争性抑制剂(a)是N-{5-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基-甲基)-苯甲酰氨基]-2-甲基苯基}-4-(3-吡啶基)-2-嘧啶-胺或其药用盐，且(b)两种或多种其它抗肿瘤剂选自彼此独立地为游离形式或可药用盐形式的嘌呤核苷类似物和拓扑异构酶II抑制剂。
4.根据权利要求1的组合，其中c-abl激酶活性的ATP-竞争性抑制剂(a)是N-{5-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基-甲基)-苯甲酰氨基]-2-甲基苯基}-4-(3-吡啶基)-2-嘧啶-胺或其药用盐，且(b)两种或多种其它抗肿瘤剂选自彼此独立地为游离形式或可药用盐形式的伊达比星、氟达拉滨和ara-C。
5.治疗患有增殖性疾病的温血动物的方法，包括向动物施用包含(a)c-abl激酶活性的ATP-竞争性抑制剂和(b)两种或多种其它抗肿瘤剂的组合，其中(a)和/或(b)中所包括的活性化合物彼此独立地为游离形式或可药用盐形式，所施用的剂量是治疗所述疾病的药学有效剂量。
6.根据权利要求5的方法，其中组分(a)是N-{5-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基-甲基)-苯甲酰氨基]-2-甲基苯基}-4-(3-吡啶基)-2-嘧啶-胺或它其药用盐。
7.根据权利要求5的方法，其中组分(a)是N-{5-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基-甲基)-苯甲酰氨基]-2-甲基苯基}-4-(3-吡啶基)-2-嘧啶-胺或其药用盐，且组分(b)是两种或多种选自彼此独立地为游离形式或可药用盐形式的嘌呤核苷类似物和拓扑异构酶II抑制剂的化合物。
8.根据权利要求5的方法，其中组分(a)是N-{5-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基-甲基)-苯甲酰氨基]-2-甲基苯基}-4-(3-吡啶基)-2-嘧啶-或其药用盐，且组分(b)包括两种或多种选自去甲柔红霉素、氟达拉滨和ara-C的化合物，它们彼此独立地以游离形式或可药用盐的形式存在。
9.根据权利要求5的方法，其中的增殖性疾病是白血病。
10.药物组合物，其包含(a)c-abl激酶活性的ATP-竞争性抑制剂和(b)两种或多种其它抗肿瘤剂的组合以及任选地至少一种可药用载体，其用于在需要所述治疗的温血动物特别是人中治疗增殖性疾病或延缓其恶化。
11.根据权利要求10的药物组合物，其中组分(a)是N-{5-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基-甲基)-苯甲酰氨基]-2-甲基苯基}-4-(3-吡啶基)-2-嘧啶-胺或其药用盐。
12.根据权利要求10的药物组合物，其中组分(a)是N-{5-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基-甲基)-苯甲酰氨基]-2-甲基苯基}-4-(3-吡啶基)-2-嘧啶-胺或其可药用盐，且组分(b)包括两种或三种、优选两种选自嘌呤核苷类似物和拓扑异构酶II抑制剂或其可药用盐的其它抗肿瘤剂。
13.根据权利要求10的药物组合物，其中组分(a)是(N-{5-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基-甲基)-苯甲酰氨基]-2-甲基苯基}-4-(3-吡啶基)-2-嘧啶-胺或其可药用盐，且组分(b)包括两种或多种彼此独立地为游离形式或可药用盐形式的选自伊达比星、氟达拉滨和ara-C的化合物。
14.一种市售成套包装，其包含(a)c-abl激酶活性的ATP-竞争性抑制剂和(b)两种或多种其它抗肿瘤剂的商业包装，其中落入(a)和/或(b)项下的活性化合物是彼此独立地为游离形式或以可药用盐的形式，作同时的、按时间顺序交错的或(次优选)分开使用，以延缓恶化或治疗增殖性疾病。
全文摘要
本发明涉及用于同时、分别或相继使用，尤其是用于治疗增殖性疾病或延缓其恶化的(a)c－abl激酶活性的ATP－竞争性抑制剂和(b)两种或多种其它抗肿瘤剂的组合。
文档编号A61K45/06GK1713922SQ03804899
公开日2005年12月28日 申请日期2003年2月27日 优先权日2002年2月28日
发明者I·A·阿夫拉米斯, V·I·阿夫拉米斯 申请人:诺瓦提斯公司, 洛杉矶儿童医院