专利名称：基因重组人干扰素α2b脂质体及其注射剂、栓剂、滴眼剂、喷雾剂、膏剂的制作方法
技术领域：
本发明属于药物制剂领域。具体地说，属于基因重组人干扰素α2b的制剂领域。
背景技术：
我国乙型肝炎发病率及病死率均较高，严重危害着病人的健康和生命。临床应用已证实基因重组人干扰素具有抗病毒、抗肿瘤和免疫调节作用，在古巴、美国和我国都已被批准，用于治疗乙型肝炎、丙型肝及其他病毒性疾病和肿瘤。临床应用结果表明基因重组人干扰素α用于治疗乙型肝炎，存在着临床有效率低，毒副作用大，给药次数多的缺点。
目前干扰素治疗中主要存在以下问题1)进入体液后易被体内的酶系统破坏失活，体内生物半衰期短。转运中途耗损大，真正产生疗效的干扰素太少。2)干扰素吸收后体内分布于全身，到达病灶部位的干扰素的量很有限。因此，干扰素肌注后到达肝脏并发挥疗效的有效药量很少，达不到干扰素治疗肝脏疾病应有的疗效。3)长期应用产生抗体，降低疗效。
脂质体作为药物载体具有以下特点1、靶向性和淋巴定向性；2、缓释性；3、细胞亲和性与组织相容性；4、降低药物毒性；5、保护药物提高稳定性。制剂均不同程度具备上述特点。存在的问题是现有的脂质体包封率仍有待于提高；且药物在生产、储存过程中即有部分渗漏，因此失去了脂质体固有的保护药物，提高稳定性的作用；最终导致药物疗效下降。
近年来，国内外已有制剂采用明胶、胶原蛋白、琼脂与水介质为内相制成的凝胶型脂质体为载体；其包封率可高达80％，20℃，半年可保证药物稳定，12个月以上药物有部分渗漏。其缺点在于稳定性仍然较差，不利于制成的注射剂、栓剂、滴眼剂、喷雾剂、膏剂等制成品的贮存。
发明内容
本发明针对目前干扰素脂质体制剂中主要存在的问题，利用一种新型脂质体为载体，其基因重组人干扰素α 2b脂质体在贮存过程中包封率更高，氧化程度更低，药物渗出更少。由此制备的基因重组人干扰素α2b脂质体的注射剂、栓剂、滴眼剂、喷雾剂、膏剂也具有稳定的特性。
本发明的目的是通过以下方法实现的基因重组人干扰素α2b脂质体，包括以下组分物质注射用大豆磷脂45~150mg，胆固醇5~50mg，脂肪油10~200μg，胶体硅10~200μg，干扰素2×106IU~8×107IU。
基因重组人干扰素α2b脂质体的制法，称取处方量的注射用大豆磷脂、胆固醇，置于圆底烧瓶中，加入氯仿∶乙醇为1∶1的混合溶剂适量，溶解，在旋转蒸发仪上减压蒸发除去溶剂，继续真空干燥12小时，在烧瓶壁上形成脂质膜，加入脂肪油和胶体硅凝胶(含药)，于40℃水浴中水化1小时，磁力搅拌1小时，冷却至室温，即得。
基因重组人干扰素α2b脂质体注射剂，包括以下组分物质注射用大豆磷脂70~150mg，胆固醇5~50mg，脂肪油20~150μg，胶体硅35~150μg，基因重组人干扰素α 2b 4×106IU~8×107IU。脂质体制法同上。再加入一般的注射剂辅料及注射用水，采用通常的注射剂制法取得。
基因重组人干扰素α2b脂质体栓剂，包括以下组分物质注射用大豆磷脂70~135mg，胆固醇10~45mg，脂肪油20~150μg，胶体硅35~125μg，基因重组人干扰素α2b4×106IU~5×107IU。脂质体制法同上，再加入一般的栓剂辅料，采用通常的栓剂制法取得。
基因重组人干扰素α2b脂质体滴眼剂，包括以下组分物质注射用大豆磷脂45~125mg，胆固醇10~45mg，脂肪油20~100μg，胶体硅20～100μg，重组人干扰素α2b 6×106IU~2×107IU。脂质体制法同上，再加入一般的滴眼剂辅料，采用通常的滴眼剂制法取得。
基因重组人干扰素α2b脂质体喷雾剂，包括以下组分物质注射用大豆磷脂50~150mg，胆固醇10~50mg，脂肪油20~100μg，胶体硅20~100μg，基因重组人干扰素α2b4×106IU~2×107IU。脂质体制法同上，再加入一般的喷雾剂辅料，采用通常的喷雾剂制法取得。
基因重组人干扰素α2b脂质体膏剂，包括以下组分物质含有注射用大豆磷脂50~150mg，胆固醇10~50mg，脂肪油20~125μg，胶体硅10~200μg，基因重组人干扰素α2b 2×106IU~4×107IU。脂质体制法同上，再加入一般的膏剂辅料，采用通常的膏剂制法取得。
本发明采用脂肪油与胶体硅为内相的凝胶脂质体。其内相更加稳定，药物可被网罗在胶体硅形成的立体结构中，不易被外界物质破坏；特别是可使生物活性物质(如干扰素)空间构象得以保持，不易渗漏。25℃贮存24个月以上仍很稳定；稳定性大幅提高，同时生物活性不变，缓释作用更强。无论脂质体粒径大小，室温条件下，24个月贮存，无渗漏。因此，本发明的脂质体可以用作多种药物，可以成为多种药物制剂的载体。
稳定性实验数据将本发明制成的基因重组人干扰素α2b脂质体封装于安瓶中，于25℃恒温箱中放置24个月，分别于0、3、6、9、12、18、24个月取样，采用细胞病变抑制法测定其生物活性结果见表1
说明在贮存24个月后其生物活性基本保持不变。
实施例例1、基因重组人干扰素α2b脂质体处方注射用大豆磷脂125mg，胆固醇15.25mg，脂肪油75μg，胶体硅40μg，基因重组人干扰素α2b 6×106IU。
制法，称取注射用大豆磷脂、胆固醇，置于圆底烧瓶中，加入氯仿∶乙醇为1∶1的混合溶剂适量，溶解，在旋转蒸发仪上减压蒸发除去溶剂，继续真空干燥12小时，在烧瓶壁上形成脂质膜，加入脂肪油和胶体硅凝胶(含药)，于40℃水浴中水化1小时，磁力搅拌1小时，冷却至室温，即得。无菌条件下，0.45μg的微孔滤膜过滤，游离药物用高速离心法分离(250000r/m，30min)，取清液采用CPE法测定游离药物生物活性，计算包封率包封率＝(6×106-0.3×106)/6×106＝95％。
例2、基因重组人干扰素α2b脂质体处方注射用大豆磷脂150mg，胆固醇50mg，脂肪油200μg，胶体硅200μg，基因重组人干扰素8×107IU。
制法同上。
例3、基因重组人干扰素α2b脂质体处方注射用大豆磷脂45mg，胆固醇5mg，脂肪油10μg，胶体硅10μg，基因重组人干扰素2×106IU。
制法同上。
例4、基因重组人干扰素α2b脂质体注射剂处方基因基因重组人干扰素α2b(rhIFNα-2b) 1.32×107IU注射用大豆磷脂 125mg胆固醇 19.5mg脂肪油 80μg胶体硅 45μg维生素E 50mg甘油适量注射用水加至5g制法脂质体制法同前从略，将脂质体在40℃水浴中水化50分钟，再加入注射用水30℃继续水化20分钟，匀化5分钟，加入维生素E、甘油匀化5分钟，40℃保温，用0.22μm微孔滤膜无菌过滤，无菌分装。
稳定性考察结果将本发明制成的基因重组人干扰素α2b脂质体注射液装于安瓶中，于37℃恒温箱中放置，不同时间取样，用丙二醛(MDA)法测定脂质体氧化的程度，结果见表2表2
结果表明37℃放置3天，本发明所制得的注射液氧化稳定性较好，有利于贮存。
例5基因重组人干扰素α2b脂质体注射剂处方基因基因重组人干扰素α2b(rhIFNα-2b) 8×107IU注射用大豆磷脂150mg胆固醇50mg脂肪油150μg胶体硅150μg维生素E 70mg甘油 适量注射用水加至 5g制法同前。
例6、基因重组人干扰素α2b脂质体注射剂处方基因基因重组人干扰素α2b(rhIFNα-2b) 4×106IU注射用大豆磷脂70mg胆固醇5mg脂肪油20μg胶体硅35μg维生素E 40mg甘油 适量注射用水加至 5g制法同前。
例7、基因重组人干扰素α2b脂质体栓剂处方基因基因重组人干扰素α2b(rhIFNα-2b) 6×106IU注射用大豆磷脂125mg胆固醇15.25mg脂肪油75μg胶体硅40μg维生素E 10g维生素A 100000U羟苯乙酯 0.25g50％乙醇 50ml聚山梨酯805ml甘油明胶加至 1000g共制240枚制法脂质体制法同前从略；取脂质体加乙醇煮沸溶解，加入羟苯乙酯搅拌溶解，缓缓加入明胶甘油基质中，保温待用。
另取维生素E、维生素A混合后加入聚山梨酯80，搅拌均匀后，缓慢搅拌下加入上述基质中，充分搅拌。保温55℃，灌模。
稳定性考察结果将本发明制成的α-2b干扰素脂质体栓剂于37℃恒温箱中放置，不同时间取样，用丙二醛(MDA)法测定脂质氧化的程度，结果见表3表3
结果表明37℃放置，本发明所制得的α-2b干扰素脂质体栓剂脂质氧化程度基本不变。
例8、基因重组人干扰素α2b脂质体栓剂处方基因基因重组人干扰素α2b(rhIFNα-2b) 4×106IU注射用大豆磷脂 70mg胆固醇 10mg脂肪油 20ug胶体硅 35ug维生素E 80g维生素A 80000U羟苯乙酯 0.25g50％乙醇 50ml聚山梨酯80 5ml甘油明胶加至 1000g共制240枚制法同前。
例9、基因重组人干扰素α2b脂质体栓剂处方基因基因重组人干扰素α2b(rhIFNα-2b) 5×107IU注射用大豆磷脂 135mg胆固醇 45mg脂肪油 150ug胶体硅 125ug维生素E 1200g维生素A 120000U羟苯乙酯 0.25g50％乙醇 50ml聚山梨酯80 5ml甘油明胶加至 1000g制法同前。
例10、基因重组人干扰素α2b脂质体滴眼剂处方基因基因重组人干扰素伐α2b(rhIFNα-2b) 1.30×107IU注射用大豆磷脂 125mg
并且，汇总初始图像浓度、打印100,000页后的图像浓度、色粉飞散水平的评估结果，进行显影剂的性能评估。综合评估的评估标准如下所示。
◎良好。全部◎。
○实际使用上没有问题。评估项目中没有不良评估(×)，即使有一个评估(○)的。
×不可实际使用。评估项目中只要有一个不良评估(×)的。
以上评估结果如表3所示。
(表3)
蒸馏水加至1000ml例13基因重组人干扰素α2b脂质体喷雾剂处方基因基因重组人干扰素α2b(rhIFNα-2b) 1.30×107IU注射用大豆磷脂125mg胆固醇18mg脂肪油25μg胶体硅50μg三油酸山梨坦 5gF114 495gF12 495g制法脂质体制法如前，将制得的脂质体物溶于乙醇，加三油酸山梨坦、F114、F12混溶，分装，装阀门轧紧，压入抛射剂，摇匀即得。
本发明基因重组人干扰素α2b脂质体喷雾剂过氧化程度测定方法同上，结果见表5表5
结果表明37℃放置，本发明所制得的基因重组人干扰素α2b脂质体包裹物喷雾剂脂质氧化程度基本不变。
例14基因重组人干扰素α2b脂质体喷雾剂处方基因重组人干扰素α2b(rhIFNα-2b) 2×107IU注射用大豆磷脂150mg胆固醇50mg脂肪油100μg胶体硅100μg三油酸山梨坦 5gF114 500gF12 500g制法同前。
例15基因重组人干扰素α2b脂质体喷雾剂处方基因基因重组人干扰素α2b(rhIFNα2b) 4×106IU注射用大豆磷脂 50mg胆固醇 10mg脂肪油 20μg胶体硅 20μg
三油酸山梨坦 5gF114 480gF12 480g制法同前。
例16基因重组人干扰素α2b脂质体膏剂处方基因基因重组人干扰素α2b(rhIFNα2b) 2.52×106IU注射用大豆磷脂 110mg胆固醇 40mg脂肪油 50μg胶体硅 12.5μg液状石蜡 250g白凡士林 25g单硬脂酸甘油酯 60g羟苯乙酯 0.5g聚山梨酯80 5g蒸馏水加至 1000g制法取单硬脂酸甘油酯、白凡士林及液状石蜡加热熔化为油相。另将羟苯乙酯、聚山梨酯80及蒸馏水加热至90℃为水相。将水相缓缓倒入油相中，边加边搅直至冷凝。将依前法制成的脂质体加入上述基质中，搅拌均匀即得膏剂。
将本发明制成的基因重组人干扰素α2b脂质体膏剂无菌分装于5ml安瓶中，于室温(25℃)保存，并分别于0、1、3、6、9、12个月取样，采用细胞病变抑制法测定其生物活性(中国生物制品检定规程)结果见表6表6
结果表明本发明制成的基因重组人干扰素α2b脂质体膏剂(膏剂I)在25℃条件下贮存，生物活性无明显变化。说明本发明滴眼剂贮存稳定性较高，有利于该制剂产品的保存。
例17基因重组人干扰素α2b脂质体膏剂处方基因基因重组人干扰素α2b(rhIFNα-2b) 2×106IU注射用大豆磷脂50mg胆固醇10mg脂肪油20μg胶体硅10μg
液状石蜡 250g白凡士林 25g单硬脂酸甘油酯60g羟苯乙酯 0.5g聚山梨酯805g蒸馏水加至1000g制法同前。
例18基因重组人干扰素α2b脂质体膏剂处方基因基因重组人干扰素α2b(rhIFNα-2b) 4×107IU注射用大豆磷脂150mg胆固醇100mg脂肪油125μg胶体硅200μg液状石蜡 250g白凡士林 25g单硬脂酸甘油酯60g羟苯乙酯 0.5g聚山梨酯805g蒸馏水加至1000g制法同前。
权利要求
1.基因重组人干扰素α2b脂质体，包括以下组分物质注射用大豆磷脂50~150mg，胆固醇5~50mg，脂肪油10~200μg，胶体硅10~200μg，基因重组人干扰素α2b2×106IU~8×107IU。
2.基因重组人干扰素α2b脂质体注射剂，包括注射剂常用辅料和注射用水，其特征在于，还包括以下组分物质注射用大豆磷脂70~150mg，胆固醇5~50mg，脂肪油20~150μg，胶体硅35～150μg，基因重组人干扰素α2b4×106IU~8×107IU。
3.基因重组人干扰素α2b脂质体栓剂，包括栓剂常用辅料，其特征在于，还包括以下组分物质注射用大豆磷脂70~135mg，胆固醇10~45mg，脂肪油20~150μg，胶体硅35～125μg，基因重组人干扰素α2b4×106IU~5×107IU。
4.基因重组人干扰素α2b脂质体滴眼剂，包括滴眼剂常用辅料和蒸馏水，其特征在于，还包括以下组分物质注射用大豆磷脂45~125mg，胆固醇10~45mg，脂肪油20~100μg，胶体硅20～100μg，基因重组人干扰素6×106IU~2×107IU。
5.基因重组人干扰素α2b脂质体喷雾剂，包括喷雾剂常用辅料，其特征在于，还包括以下组分物质注射用大豆磷脂50~150mg，胆固醇10~50mg，脂肪油20~100μg，胶体硅20～100μg，基因重组人干扰素α2b4×106IU~2×107IU。
6.基因重组人干扰素α2b脂质体膏剂，包括膏剂常用辅料，其特征在于，还包括以下组分物质注射用大豆磷脂50~150mg，胆固醇10~100mg，脂肪油20~125μg，胶体硅10～200μg，基因重组人干扰素α2b2×106IU~4×107IU。
全文摘要
基因重组人干扰素α2b脂质体及其注射剂、栓剂、滴眼剂、喷雾剂、膏剂。本发明属于药物制剂领域。本发明针对目前干扰素制剂中主要存在的问题，利用一种新型脂质体为载体，其基因重组人干扰素α2b包裹物在贮存过程中包封率更高，氧化程度更低，药物渗出更少。由此制备的基因重组人干扰素α2b脂质体的注射剂、栓剂、滴眼剂、喷雾剂、膏剂也具有稳定的特性。基因重组人干扰素α2b脂质体，包括以下组分物质豆磷脂50~150mg，胆固醇5~50mg，脂肪油10~200μg，胶体硅10~200μg，干扰素2×10
文档编号A61K38/21GK1704117SQ20041001945
公开日2005年12月7日 申请日期2004年5月31日 优先权日2004年5月31日
发明者曾群 申请人:天津市衡天生物技术有限公司