专利名称：高纯度植物磷脂酰肌醇化合物的制备方法
技术领域：
本发明是以豆科植物种子为原料，建立一套简便有效、提取、分离纯化，大批量制备高纯度植物磷脂酰肌醇(Phosphatidylinositol(简称PI)的生产工艺，并用此工艺制备的化合物，制成针剂及口服液乳剂、微囊或脂质体。
我们是国内外第一次将PI进行了荷瘤动物抑瘤注射及口服试验，并与环磷酰胺、紫杉醇等做了联合用药，均取得非常显著的抑瘤效果(见附表1，2，3)。我们多年科研实践证明，本发明的生产方法正确、合理，产品安全有效。
背景技术：
植物PI是磷脂类化合物最重要的成分之一，它不仅是细胞膜的重要结构物质，而且具有重要的生物活性，美国科学家(1983)首次发现高纯度植物PI具有靶向、广谱、杀伤多种癌细胞的活性[1]，2003年日本科学家首次发现植物PI化合物，还可能用于治疗、预防老年痴呆症(AD)[2]。
United States Patent 4，999.344Jett-Tilton，et al.March 12，1991(包括美国科学家1983第一篇文献)。
Neuros Lett.350105-8，2003.
至今，在PI的研究专利中，尚无大批量制备高纯度PI的方法专利。
二十多年来，科研工作所用PI化合物，不论天然或化学合成的，几乎都是从大型生化试剂公司购买，PI化合物商品已知都是用制备型TLC或与之相当的干柱层析技术，再经分离纯化获取小量产品(mg级)，仅限于癌细胞和脑细胞科研用，至今尚无大批量制备高纯度PI化合物的技术，也没有用于动物，更无口服实验的报道。
发明内容
本发明的目的是，根据植物磷脂类各组分化合物的物理、化学性质的差异，建立了一套简便有效的提取工艺；再用新型大孔树脂柱层析技术，建立制备PI化合物的精制工艺，使之能达到大批量工业化生产PI纯品的目的。
本发明的主要目的是，应用该方法生产PI化合物，为制备适于临床口服或注射用药物制剂提供基本原料。
本发明制备生产PI化合物的方法的特征是，应用植物豆科种子，经粉碎，有机溶剂浸提、水洗、有机溶剂转溶、酒精沉淀、离心、再经大孔树脂分离纯化、在惰性气体环境中，减压干燥即可获得PI化合物纯品，纯度大于96％。
本发明的优点及效果(1)本发明的生产工艺简便、有效，不需特殊设备；(2)生产中使用的大部分有机溶剂，尚可回收、套用，污染极小，大大降低成本；(3)应用本发明的生产方法所制备的PI化合物与SIGMA标准品Rf值相同；(4)抑瘤生物活性极显著，联合用药增效也极显著；(5)应用本发明的生产方法所制备的PI化合物符合针剂制剂的标准；(6)证明本发明工艺设计方法科学、合理，产品质量、生物活性都达到药用制剂标准。
具体实施例方式通过下述实例，可有助于理解本发明的基本内容一.PI化合物初级纯品的制备本发明是利用生物细胞膜总磷脂的各组分的化学组成、结构、性质的差异，在不同溶剂(氯仿、甲醇、乙醇、水)，在不同温度下(-20～50℃)，利用各化合物溶解度选择性的差异，可有效分离出植物PI初级纯品(TLC检查，PI含量大于85％)。
实施例1.优质黑豆粉1Kg，加入氯仿∶甲醇∶水(1∶1∶1v/v)，(1∶2∶1v/v)，5-20倍体积，50C°以下浸泡24-72小时时，分出提取液，分层后减压浓缩，若溶剂显灰色，可加入药业活性炭(3-5g)回流一小时，脱色、过泸，泸液再减压浓缩，回收溶剂，得黑豆总磷脂(纯度约85％)。
实施例2.优质黄豆粉1Kg，加入氯仿∶甲醇∶水(1∶1∶1v/v)，(1∶2∶1v/v)，5-20倍体积，50C°以下浸泡24-72小时时，分出提取液，分层后减压浓缩，过泸，泸液再减压浓缩，回收溶剂，得黄豆总磷脂(纯度约85％)。黄豆得率高于黑豆。
二.PI化合物精品的制备实施例3.初级纯品进一步精制本发明是根据PI化合物总磷脂的组成、结构及化学性质的不同，为了进一步提高PI纯度，首次选用新型大孔树脂柱层析技术，包括大孔强酸型树脂，也可用大孔弱碱型树脂，进一步进行纯化，溶剂用氯仿∶甲醇(1∶1v/v)，(1∶2v/v)，或(2∶1v/v)；洗脱液在惰性气体环境中，进行减压浓缩、真空干燥，即可有效分离、纯化，获得PI化合物纯品，其纯度大于96％。每Kg黄豆粉PI得率大于500mg，每克成本约200元RMB。
鉴别方法取上述方法获得的PI纯品，与SIGMA公司PI纯品进行对照实验，使用高效硅胶板，溶剂系统为氯仿∶甲醇∶水∶氨水(65∶25∶4∶0.5v/v)，用磷钼酸显色剂喷雾显色，结果显示，本方法制备的PI纯品，与进口PI标准品Rf值一致。
对本发明制备的PI纯品做了多次抑瘤生物活性验证，现列举三个有代表性的抑瘤实验结果，列表如下
附表1，2，3，表1PI对小鼠S180实体瘤的抑瘤作用 2001/12
PI给药剂量为1500mg/Kg表2紫杉醇、PI及二者合用对小鼠S180抑瘤实验 2002/3/12
1.紫杉醇5mg/Kg×7d ip2.PI500mg/Kg×7dip3.联合用药紫杉醇 5mg/Kg+PI 500mg/Kg×7d ip表3环磷酰胺、PI对小鼠宫颈癌U14实体瘤的抑制作用 2003/1
(1)对照组给蒸馏水0.2ml只，PO×7d；(2)PI口服组500mg/kg×7d；*(3)PI腹腔注射组500mg/kg×3d(第三天意外死亡5只)；(4)CTX组20mg/kg×1d；(5)联合用药组PI 500mg/kg Po×7d+CTX 20mg/kgi p×1d*第(3)组实验动物仅给PI三天，七天后检查抑瘤效果，P值仍＜0.05，证明PI活性在体内可维持很长时间。
权利要求
1.一种适于大批量、提取、分离、纯化，制备磷脂酰肌醇(Phosphatidylinositol，PI)的方法，其特征是，植物豆科种子为原料，经粉碎、有机溶剂浸提、分溶，有机溶剂转换，乙醇沉淀、离心，真空干燥，即可获得PI化合物初级纯品，纯度约90％。
2.根据权利要求1所述的PI制备方法，其特征是，由此制备方法所获得的初级纯品，再经大孔树脂处理，选用不同溶剂系统，达到进一步分离、纯化的目的，所制备的产品为高纯度PI，纯度大于96％。
3.根据权利要求2.其特征是，我们首次应用高纯度PI制成乳剂、脂质体，用于荷瘤动物抑瘤实验，口服、注射抑瘤效果极显著，与临床常用抗癌药联合使用，增效作用也极显著(见附表1，2，3)。
全文摘要
本发明以大豆为原料，经溶剂提取、分离纯化，制备磷脂酰肌醇(Phosphatidylinositol，PI)，初级品纯度约85％，再利用大孔树脂柱层析技术，建立一套简便、高效、低成本、少污染，大批量制备高纯度PI的新工艺，PI纯度大于96％。大量实验证明，已知PI具有极显著的选择性杀伤多种人源癌细胞的活性(文献1)，最新报道PI有望成为预防、治疗老年痴呆症的有效天然化合物(文献2)。本发明可为开发危害人类健康的新药研究提供基本原料。我们首次应用本发明制备的高纯度PI，制成乳剂、脂质体，对荷瘤动物进行注射、口服抑瘤实验，证明单独使用PI或与临床常用抗癌药物紫杉醇、环磷酰胺等联用，皆显示安全、有效、靶向、广谱及增效的优异特性。
文档编号A61K9/50GK1727351SQ20041002010
公开日2006年2月1日 申请日期2004年7月26日 优先权日2004年7月26日
发明者商宗一 申请人:商宗一