专利名称：鸡新城疫、鸡传染性支气管炎(h120、h52)二联冻干疫苗耐热冻干保护剂及制备工艺的制作方法
技术领域：
本发明涉及生物制品的冷冻干燥技术，保藏辅助剂及其制造方法。
背景技术：
我国目前常用的兽医生物制品保护剂主要为5％蔗糖脱脂牛奶和5-10％蔗糖，1.5-3％明胶，制品要求低温保存(-15℃以下)，2-8℃条件的保存期仅3-9个月，在常温下必须尽快用完。这就为兽医生物制品的保存、运输、使用等带来许多困难和不便，同时由于必需低温保存造成能源消耗及储存成本大。
目前，国际上发达的国家兽医生物冻干制品几乎全部是2-8℃保存24个月以上。但未见方法的详细报道。中国专利CN1176827A“一种动物用冻干活疫苗的制造方法”提出采用以聚乙烯吡咯烷酮、羧甲基纤维素钠，罗望子胶，谷氨酸钠，海藻糖等为主要基质冻干保护剂的配方配制成的冻干保护剂，采用与之相适应的冻干曲线与新城疫疫苗病毒抗原制成鸡新城疫冻干活疫苗的方法，该苗在2-8℃条件下可长期保存。
发明内容
本发明的目的是提供一种鸡新城疫、鸡传染性支气管炎(H120、H52)二联干疫苗耐热冻干保护剂及制备工艺，降低保护条件，延长使用期并降低使用成本。
鸡新城疫、鸡传染性支气管炎(H120、H52)二联冻干疫苗，包括常用的明胶、蔗糖，其特征是耐热冻干保护剂的组份配比是明胶2％、糊精6％、牛血清白蛋白1-2％、蔗糖5-6％、PVP(K90)3％、酪蛋白胨1-2％、山梨醇2％、谷氨酸钠1％、Vc 0.2-0.3％；制剂中为干物质组份，百分比剩余份均为蒸馏水。
上述疫苗的耐热冻干保护剂的制备工艺，按组份、比例混合，其特征是对保护剂的有效组份分别处理除菌对可高压灭菌的明胶、糊精、蔗糖、PVP(K90)、酪蛋白胨；按制剂比例溶于蒸馏水中，116℃灭菌30-40分钟；将不耐高温的组份牛血清白蛋白、山梨醇、谷氨酸钠、Vc也按制剂比例溶于蒸馏水中用孔径0.22μm滤膜过滤除菌；分别完成除菌后把两种成分混合，即为冻干耐热保护剂，使用时按1∶1比例加入病毒抗原液中，分装后进行冷冻干燥。
本发明的制备工艺制备的制剂在2-8℃条件下可保存24个月以上，能达到《中华人民共和国兽医生物制品质量标准》中规定的各项指标。
具体实施例方式
鸡新城疫、鸡传染性支气管炎(H120、H52)二联冻干疫苗耐热冻干保护剂，包括常用的明胶、蔗糖，其特征是耐热冻干保护剂的组份配比是明胶2％、糊精6％、牛血清白蛋白1-2％、蔗糖5-6％、PVP(K90)3％、酪蛋白胨1-2％、山梨醇2％、谷氨酸钠1％、Vc 0.2-0.3％；制剂中为干物质组份，百分比剩余份均为蒸馏水。
鸡新城疫、鸡传染性支气管炎(H120、H52)二联冻干疫苗耐热冻干保护剂的制备工艺，包括将上述耐热冻干保护剂的干物质组份按比例混合，其特征是对保护剂的有效组份进行除菌处理对可高压灭菌的明胶、糊精、蔗糖、PVP(90)、酪蛋白胨，按各自比例溶于蒸馏水中，116℃灭菌30-40分钟；将不耐高温的组份山梨醇、牛血清白蛋白、谷氨酸钠、Vc，也按比例溶于蒸馏水中用孔径0.22μm的滤膜过滤除菌；分别完成除菌后把两种成分混合，即为冻干耐热保护剂，使用时按1∶1比例加入病毒抗原液中，分装后进行冷冻干燥。
技术参数及检测方法1.产品的物理性状、无菌检验、支原体检验、外源病毒检验、特异性检验、安全检验、剩余水分测定和真空度测定按《中华人民共和国兽医生物制品规程》的方法及标准进行。
2.冻干周期不超过48h。
3.保护剂的毒性试验禽类疫苗按产品当中含保护剂量的10倍量，对7日龄健康雏鸡分别进行滴鼻、点眼、饮水及皮下注射各20只，观察20d，雏鸡全部健活；无任何不良反应。
4.病毒含量测定及标准
(1)测定方法A.将疫苗用生理盐水稀释至1羽份/0.5mL，分别装入2支试管内，每管1mL。第1管加入等量的鸡新城疫抗血清，第2管加入等量的鸡传染性支气管炎抗血清。在室温下中和1h，此时病毒含量为1羽份/0.1mL，即10-1。第1管继续10倍系列稀释，测定鸡传染性支气管炎部分。第2管继续10倍系列稀释，测定鸡新城疫部分，其方法同鸡传染性支气管炎及鸡新城疫冻干苗。
B.将疫苗用生理盐水按实含组织量稀释至500倍，分别装入两支试管中，每管1mL，第1管加入等量的鸡新城疫抗血清，第2管加入等量鸡传染性支气管炎抗血清。此时即为10-3，在室温下中和1h后再作10倍系列稀释，其它方法同上。
(2)达到标准一.鸡新城疫弱毒冻干苗的标准A、冻干后病毒损失率小于0.4个滴度。
B.冻干后每羽份病毒含量≥106.7EID50。
C.冻干后的产品放37℃保存10d及30d进行病毒含量测定，病毒含量下降率前者在1个滴度之内，后者在2个滴度之内。
D.冻干后产品放25℃保存30d，病毒含量下降率在0.6个滴度之内。
E.产品放2-8℃保存24个月，每羽份病毒含量≥106.17EID50。
二.鸡传染性支气管炎冻干苗的标准A、冻干后病毒损失率小于0.4个滴度。
B.冻干后H52每羽份病毒含量≥104.5EID50。
C.产品放37℃保存10d及30d，病毒含量下降率分别为1个至2个滴度之内。
D.产品放25℃保存30d，病毒含量下降率不超过1个滴度。
E.产品放2-8℃保存24个月，H52每羽份病毒含量≥103.5EID50。
权利要求
1.一种鸡新城疫、鸡传染性支气管炎(H120、H52)二联冻干疫苗耐热冻干保护剂，包括常用的明胶、蔗糖、脱脂奶粉，其特征是耐热冻干保护剂的组份配比是明胶2％、糊精6％、牛血清白蛋白1-2％、蔗糖5-6％、PVP(K90)3％、酪蛋白胨1-2％、山梨醇2％、谷氨酸钠1％、Vc 0.2-0.3％；制剂中为干物质组份，百分比剩余份均为蒸馏水。
2.制备权利要求1所述的鸡新城疫、鸡传染性支气管炎(H120、H52)二联冻干疫苗耐热冻干保护剂的工艺，包括将上述耐热冻干保护剂的干物质组份按比例混合，其特征是对保护剂的有效组份进行除菌处理对可高压灭菌的明胶、糊精、蔗糖、PVP(90)、酪蛋白胨，按各自比例溶于蒸馏水中，116℃灭菌30-40分钟；将不耐高温的组份山梨醇、牛血清白蛋白、谷氨酸钠、Vc，也按比例溶于蒸馏水中用孔径0.22μm的滤膜过滤除菌；分别完成除菌后把两种成分混合，即为冻干耐热保护剂，使用时按1∶1比例加入病毒抗原液中，分装后进行冷冻干燥。
全文摘要
鸡新城疫、鸡传染性支气管炎(H120、H52)二联冻干疫苗耐热冻干保护剂及制备工艺，其特征是制备工艺对保护剂的有效组份分别进行除菌处理对可高压灭菌的按制剂比例溶于蒸馏水中，116℃灭菌30－40分钟；将不耐高温的组份也按制剂比例溶于蒸馏水中用孔径0.22μm滤膜过滤除菌；再将两种成分混合，即为冻干耐热保护剂，使用时按1∶1比例加入病毒抗原液中，分装后进行冷冻干燥。产品在2－8℃保存24个月，仍保持冻干后的外形，病毒含量均超过国家兽医生物制品规程的标准。本发明是一种低成本、长效制品及制备方法，为兽医生物制品使用解决了长久以来运输、储存的高成本问题。
文档编号A61K39/295GK1528458SQ20041002958
公开日2004年9月15日 申请日期2001年12月21日 优先权日2001年12月21日
发明者卫广森, 王文成, 张万林 申请人:卫广森