专利名称：胆汁酸的硝酸酯衍生物及其医药用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及胆汁酸的硝酸酯衍生物及其药学上可接受的盐、含有这些化合物作为活性成分的药物组合物以及所述化合物在制备治疗肝病的药物方面的应用。本发明还涉及胆汁酸的硝酸酯衍生物及其药学上可接受的盐的制备方法。
背景技术：
一氧化氮分子是体内重要的调控分子，参与众多生理病理过程，具有多种生物学功能。研究表明适量的一氧化氮能够保护肝细胞，防止肝细胞凋亡，抑制肝内炎症的形成与发展，修复肝损伤，并具有改善肝内血液循环，降低肝内压及改善肝纤维化等多种作用。
研究表明，一氧化氮释放药物可通过释放一氧化氮分子抑制肝脏炎症的发展及肝纤维化的形成、降低门静脉高压，进而产生治疗肝硬化和门静脉高压的疗效。但是目前临床用于治疗肝硬化的有机硝酸酯类的一氧化氮释放药物，由于其体内分布的非特异性，从而产生比较广泛的全身副作用。通过肝靶向给药的途径能够减少或避免常规硝酸酯类药物的副作用。
胆汁酸在肝细胞中由胆固醇生物合成而来，然后与甘氨酸或牛磺酸结合，随食物糜进入消化道，超过95％的胆汁酸在终端回肠被重吸收，然后通过下腔静脉再回到肝脏，如此不断地进行肝肠循环；成人体内肝肠循环每天重复6至15次，参与循环的胆汁酸总量达到17-40g，因此胆汁酸具有较高的转运能力；胆汁酸是通过主动转运的途径被吸收，以胆汁酸为靶向载体能够提高药物的生物利用度；作为内源性的天然配基，胆汁酸具有良好的生物兼容性。因而，胆汁酸及其与甘氨酸或牛磺酸结合物可以作为肝靶向给药的载体。
理想的靶向偶合物药物的设计必须保持靶向载体的特异性，在血液中保持稳定，到达靶细胞后充分解离，释放出活性药物。
国际专利WO 03095471公开了如下结构的含有硝酸酯的熊去氧胆酸的衍生物 在上述衍生物的结构中，作为一氧化氮释放组分的硝酸酯是通过连接子与胆汁酸分子中的羧基偶联的。胆汁酸的构效关系研究结果表明胆汁酸的24位游离羧基为保持其肝特异性的关键基团，因此通过24位羧基与NO释放组分偶联，将影响其靶向性。
发明内容
本发明涉及由结构式Ia或Ib所示的胆汁酸的硝酸酯衍生物及其药学上可接受的盐，它们的制备方法，含有这些化合物的药物组合物，以及所述化合物在制备治疗肝病的药物方面的应用。本发明还涉及通过给予治疗有效量的胆汁酸的硝酸酯衍生物及其药学上可接受的盐治疗肝脏疾病的方法。
因此，本发明的第一个方面提供了式Ia或Ib所示的胆汁酸的硝酸酯衍生物及其可药用盐
其中，R1和R2代表-OH或-O-NO2；R3代表氢，-OH或-O-NO2；R4代表-OH，-NHCH2COOH或-NHCH2CH2SO3H；R5代表氢或-OH；L代表C2-6-烷基、C2-6-链烯基、C2-6-炔基、C1-3-取代烷基，C3-6环烷基、二-C2-6-烷基芳香基，所述的芳香基选自苯、吡啶等，所述的取代基选自卤素、羟基、C1-6烷基；条件是，R1、R2和R3可以相同或不同，但其中至少有一个为-OH，并且至少有一个为-O-NO2。
本发明的第二个方面涉及药物组合物，其包括至少一种式Ia或Ib所代表的胆汁酸的硝酸酯衍生物或其可药用盐以及一种或多种药学上可接受的载体或赋形剂。
本发明的第三个方面涉及式Ia或Ib所代表的胆汁酸的硝酸酯衍生物或其可药用盐的制备方法。
本发明的第四个方面涉及式Ia或Ib所代表的胆汁酸的硝酸酯衍生物或其可药用盐用于制备治疗肝脏疾病的药物的用途。
本发明的第五个方面涉及治疗肝脏疾病的方法，所述方法包括给予有此需要的患者治疗有效量的至少一种式Ia或Ib代表的胆汁酸的硝酸酯衍生物或其可药用盐。
根据本发明的一个实施方式，本发明提供了式Ia或Ib所示的胆汁酸的硝酸酯衍生物及其可药用盐
其中，R1和R2代表-OH或-O-NO2；R3代表氢，-OH或-O-NO2；R4代表-OH，-NHCH2COOH或-NHCH2CH2SO3H；R5代表氢或-OH；L代表C2-6-烷基、C2-6-链烯基、C2-6-炔基、C1-3-取代烷基，C3-6环烷基、二-C2-6-烷基芳香基，所述的芳香基选自苯、吡啶等，所述的取代基选自卤素、羟基、C1-6烷基；条件是，R1、R2和R3可以相同或不同，但其中至少有一个为-OH，并且至少有一个为-O-NO2。
以胆酸衍生物的合成为例，化合物Ia可以按照如下合成路线制备
首先将胆酸与盐酸甲醇反应，将24位羧基成酯；然后将胆酸甲酯与乙酸酐反应形成三乙酰基衍生物；三乙酰基衍生物在盐酸甲醇溶液中选择性的脱去3位乙酰基游离出羟基，与硝酸反应形成硝酸酯，最后脱保护得到目标化合物Ia-1；胆酸甲酯与乙酰氯反应，选择性的将3-位羟基乙酰化，7，12位上的羟基与硝酸反应形成硝酸酯，最后脱保护得到目标化合物Ia-2。
以熊去氧胆酸衍生物的合成为例，化合物Ib可以按照如下合成路线制备 7-O-乙酰基熊去氧胆酸甲酯与甲磺酰氯反应，将3位羟基转化为甲磺酸酯，再与其中的L同式Ib所定义的具有通式HO-L-OH的二醇反应成醚键，然后将末端羟基硝化制成硝酸酯，最后脱保护得到目标化合物。
上述本发明合成路线中所使用的原料均商购可得。
本发明中的术语“可药用盐”可以是药用无机或有机盐。本发明式Ia或Ib中具有碱性基团的化合物可以与无机酸形成药用盐，例如硫酸盐、盐酸盐、氢溴酸盐、磷酸盐；也可与有机酸形成药用盐，例如乙酸盐、草酸盐、柠檬酸盐、葡萄糖酸盐、琥珀酸盐、酒石酸盐、对甲苯磺酸盐、甲磺酸盐、苯甲酸盐、乳酸盐、马来酸盐等。本发明式Ia或Ib中具有酸性基团的化合物可以与碱金属或碱土金属如钠离子、钾离子、铵离子、钙离子、锌离子、镁离子等形成药用盐，优选但不限于钠盐、钾盐、镁盐或钙盐。
本发明化合物或其可药用盐可以形成溶剂化物，例如水合物、醇合物等。上述化合物还可以是前药或可在体内代谢代谢后释放出所述活性成分的形式。选择和制备适当的前药衍生物是本领域技术人员公知技术。
如上所述，本发明化合物可用于制备治疗肝脏疾病的药物，所述的肝脏疾病包括肝炎、肝纤维化或肝硬化等。
本发明化合物或其可药用盐可以单独或以药物组合物的形式给药。本发明药物组合物可根据给药途径配成各种适宜的剂型。使用一种或多种生理学上可接受的载体，包含赋形剂和助剂，它们有利于将活性化合物加工成可以在药学上使用的制剂。适当的制剂形式取决于所选择的给药途径，可以按照本领域熟知的常识进行制造。
给药途径可以是口服、非肠道或局部给药，优选口服和注射形式给药。可以口服的药物制剂包括胶囊剂和片剂等。病人吞咽有困难时，也可以采用舌下片或者其他非吞咽的方式给药。本发明化合物也可以配制用于肠胃外给药或者透皮给药或者经粘膜给药。或者采用栓剂或者埋植剂的方式给药。本领域技术人员可以理解，本发明化合物可以采用合适的药物释放系统(DDS)以得到更有利的效果。
另外需要指出，本发明化合物使用剂量和使用方法取决于诸多因素，包括患者的年龄、体重、性别、自然健康状况、营养状况、化合物的活性强度、服用时间、代谢速率、病症的严重程度以及诊治医师的主观判断。优选的使用剂量介于0.01～100mg/kg体重/天。
具体实施例方式
通过下面的实施例可以对本发明进行进一步的描述，然而，本发明的范围并不限于下述实施例。
实施例1 3-O-硝基-胆酸(Ia-1)的制备1.1胆酸甲酯的合成取11克胆酸溶于110毫升的盐酸甲醇溶液中，室温下搅拌过液；反应毕，将反应液倾入200毫升的水中，用乙醚(35毫升×4)提取，合并乙醚液，用饱和碳酸氢钠、饱和食盐水依次洗涤，无水硫酸镁干燥，滤除干燥剂，减压除去溶剂，得白色固体10.9克，熔点69-73℃，收率96％。
1H NMR(CDCl3)3.96(s，1H)；3.84(s，1H)；3.66(s，3H)；3.44(br，s，1H)；3.11-2.90(br，m，3H)；2.38(m，2H)；2.21br m，2H)；1.90-1.04(br m，甾体CH2和CH)；0.99(d，3H，J＝5.9)；0.89(s，3H)；0.67(s，3H)。
1.2 3，7，12-三-O-乙酰基胆酸甲酯的合成将10克胆酸甲酯(0.0245摩尔)溶于20毫升乙酸酐中，然后加入30毫升吡啶和1.80克4-二甲氨基吡啶，室温下搅拌6小时，反应毕，反应混和物倾入300毫升乙醚中，用0.15M盐酸、饱和碳酸氢钠、饱和食盐水依次洗涤，无水硫酸镁干燥，过滤，减压下除去溶剂，得无色液体。用硅胶柱层析分离(洗脱剂石油醚∶乙酸乙酯＝9∶1)，得白色固体11.9克。熔点103-105℃，收率92％。
1H NMR(CDCl3)5.08(s，1H)；4.92(s，1H)；4.59(br，s，1H)；3.66(s，3H)；2.39(br，m，1H)；2.23(s，3H)；2.14(s，3H)；2.08(s，3H)；2.05(s，3H)；2.25-1.04(br m，甾体CH2和CH)；0.92(s，3H)；0.82(d，3H，J＝6.2)；0.73(s，3H)。
1.3 7，12-二-O-乙酰基胆酸甲酯的合成将1克3，7，12-三-O-乙酰基胆酸甲酯溶于10.5毫升盐酸甲醇溶液中。室温下反应1-3小时，薄层监测反应完毕。将反应液倾入100毫升的冰水中，用乙醚(50毫升×4)提取，合并乙醚层，用饱和碳酸氢钠、饱和食盐水依次洗涤，用无水硫酸镁干燥，过滤，减压下除去溶剂，得无色液体。用硅胶柱层析分离(洗脱剂石油醚∶乙酸乙酯＝7∶3)，得白色固体0.72克，熔点59-63℃，收率78％。
1H NMR(CDCl3)5.08(s，1H)；4.90(s，1H)；3.66(s，3H，3.50(br，s，1H)；2.38(br，m，1H)；2.25(br，m，1H)；2.13(s，3H)；2.09(s，3H)；2.06-0.97(br m，甾体CH2和CH)；0.91(s，3H)；0.82(d，3H，J＝6.5)；0.73(s，3H) 。
1.4 3-O-硝基-7，12-二-O-乙酰基胆酸甲酯的合成将150毫升的醋酐和42毫升发烟硝酸混合溶液冷却至-5℃。搅拌下滴入15克7，12-二-O-乙酰基胆酸甲酯溶于75毫升二氯甲烷的溶液。滴毕，-5℃下反应1小时。反应毕，将反应液滴至200毫升的冷却水中，分离有机层，水层用二氯甲烷(70毫升×4)提取，合并有机层，用饱和碳酸氢钠、饱和食盐水依次洗涤，无水硫酸镁干燥，过滤，减压除去溶剂，得白色固体15.7克，熔点93-94℃，收率96％。
1H NMR(CDCl3)5.08(s，1H)；4.92(s，1H)；4.79(br，s，1H)；3.66(s，3H)；2.39(br，m，1H)；2.14(s，3H)；2.08(s，3H)；2.25-1.04(brm，甾体CH2和CH)；0.94(s，3H)；0.82(d，3H，J＝6.4)；0.73(s，3H)。
1.5 3-O-硝基-胆酸(Ia-1)的合成将12克3-O-硝基-7，12-二-O-乙酰基胆酸甲酯溶于100毫升5％氢氧化钾的甲醇溶液中，加热回流2-4小时，薄层监测，反应毕，将反应液滴至400毫升盐酸冰水液中(含40毫升浓盐酸)，析出白色沉淀，滤干，蒸馏水洗涤，真空干燥后，用硅胶柱层析分离(洗脱剂石油醚∶乙酸乙酯＝9∶1)，得白色固体6.65克，熔点217-220℃，收率67％。MS(FAB m/e)452.5(M-1)。
1H NMR(DMSO-d6)11.93(s，1H)；4.85(br，s，1H)；3.79(s，1H)；3.63(s，1H)；2.22(br，m，1H)；2.13(s，br，m，1H)；2.02-0.97(brm，甾体CH2和CH)；0.93(d，3H，J＝6.5)；0.85(s，3H)；0.59(s，3H)。
实施例2 7，12-二-O-硝基胆酸(Ia-2)的制备2.1 3-O-乙酰基胆酸甲酯的合成将10克(23.7毫摩尔)胆酸甲酯溶于75毫升吡啶中，冰浴下将混合液降至0℃。搅拌下将2.03毫升(1当量)的乙酰氯慢慢滴入至反应液中，在冰浴下反应1小时，除去冰浴，室温下搅拌2小时。反应毕，将反应混和物倾到300毫升乙酸乙酯中，依次用0.5M盐酸、饱和食盐水、饱和碳酸氢钠、饱和食盐水洗涤，无水硫酸镁干燥，过滤，减压下除去溶剂，得无色液体。用硅胶柱层析分离(洗脱剂石油醚∶乙酸乙酯＝4∶1)，得白色固体9.2克，收率84％。
1H NMR(CDCl3)4.58(br m，1H)；3.99(s，1H)；3.86(br，s，1H)；3.66(s，3H)；2.39(br，m，2H)；2.00(s，3H)；2.05(s，3H)；2.25-1.04(br m，甾体CH2和CH)；0.97(d，3H，J＝6.2)；0.91(s，3H)；0.70(s，3H)。
2.2 3-O-乙酰基-7，12-二-O-硝基胆酸甲酯的合成将80毫升的醋酐和22毫升发烟硝酸混合溶液冷却至-5℃。搅拌下滴入8克3-O-乙酰基胆酸甲酯溶于75毫升二氯甲烷的溶液。滴毕，-5℃下反应1小时。反应毕，将反应液滴至200毫升的冷却水中，分离有机层，水层用二氯甲烷(50毫升×4)提取，合并有机层，用饱和碳酸氢钠、饱和食盐水依次洗涤，无水硫酸镁干燥，过滤，减压除去溶剂，用硅胶柱层析分离(洗脱剂石油醚∶乙酸乙酯＝9∶1)，得白色固体8.9克，熔点83-87℃，收率93％。
1H NMR(CDCl3)5.3(s，1H)；5.01(s，1H)；4.58(br m，1H)；3.68(s，3H)；2.39(br，m，2H)；2.04(s，3H)；2.25-1.04(br m，甾体CH2和CH)；0.95(s，3H)；0.86(d，3H，J＝6.4)；0.82(s，3H)。
2.3 7，12-二-O-硝基胆酸的合成将5克3-O-乙酰基-7，12-二-O-硝氧基胆酸甲酯溶于120毫升5％氢氧化钾甲醇溶液中，加热回流1小时，薄层监测反应完毕，将反应液滴至400毫升盐酸冰水液中(含40毫升浓盐酸)，析出白色沉淀，滤干，蒸馏水洗涤，真空干燥后，用硅胶柱层析分离(洗脱剂石油醚∶乙酸乙酯＝9∶1)，得白色固体3.4克，熔点191-195℃，收率76％。MS(FAB m/e)497.7(M-1)。
1H NMR(DMSO-d6)11.98(s，1H)；5.39(br，s，1H)；5.09(s，1H)；4.56(d，1H)；3.24(br s，1H)；2.23-0.97(br m，甾体CH2和CH)；0.93(d，3H，J＝6.5)；0.85(s，3H)；0.78(s，3H)。
实施例3 3-O-硝基-熊去氧胆酸(Ia-3)的制备3.1熊去氧胆酸甲酯的合成用熊去氧胆酸代替胆酸，按照1.1的方法，制备熊去氧胆酸甲酯，熔点65-68℃。
1H NMR(CDCl3)3.66(s，3H)；3.60(br m，2H)；2.35(br，s，1H)；2.24(br，s，1H)；2.02-0.99(br m，甾体CH2和CH)；0.94(s，3H)；0.93(d，3H，J＝6.4)；0.68(s，3H)。
3.2 3，7-二-O-乙酰基熊去氧胆酸甲酯的合成用熊去氧胆酸甲酯代替胆酸甲酯，按照1.2的方法，制备3，7-二-O-乙酰基熊去氧胆酸甲酯，熔点97-99℃。
3.3 7-O-乙酰基熊去氧胆酸甲酯的合成用3，7-二-O-乙酰基熊去氧胆酸甲酯代替3，7，12-三-O-乙酰基胆酸甲酯，按照1.3的方法，制备7-O-乙酰基熊去氧胆酸甲酯，熔点129-132℃。
1H NMR(CDCl3)4.78(br m，1H)；3.66(s，3H)；3.59(br，m，1H)；2.35(br，s，1H)；2.24(br，s，1H)；1.98(s，3H)；1.85-0.98(br m，甾体CH2和CH)；0.96(s，3H)；0.92(d，3H，J＝6.4)；0.67(s，3H)。
3.4 3-O-硝基-7-O-乙酰基熊去氧胆酸甲酯的合成用7-O-乙酰基熊去氧胆酸甲酯代替7，12-二-O-乙酰基胆酸甲酯，按照1.4的方法，制备3-O-硝基-7-O-乙酰基熊去氧胆酸甲酯，熔点138-139℃。
3.5 3-O-硝基熊去氧胆酸(Ia-3)的合成用3-O-硝基-7-O-乙酰基熊去氧胆酸甲酯代替3-O-硝基-7，12-二-O-乙酰基胆酸甲酯，按照1.5的方法，制备3-O-硝基熊去氧胆酸甲酯，熔点186-188℃。
1H NMR(DMSO-d6)11.84(s，1H)；4.85(br，s，1H)；3.60(br，m，1H)；2.24(br，s，1H)；2.02-0.97(br m，甾体CH2和CH)；0.94(s，3H)；0.85(d，3H，J＝6.4)；0.63(s，3H)。
实施例4 N-(3-O-硝基-胆酰)-甘氨酸(Ia-4)的制备取实施例1制备的3-O-硝基-胆酸1克溶于10毫升二甲基甲酰胺；然后加入二环己基碳二亚胺0.4克，N-羟基琥珀酰亚胺0.3克，搅拌反应过夜；向反应液中加入甘氨酸0.2克，继续反应8小时。过滤，将滤液减压蒸干，于残留物中加入20毫升乙酸乙酯和10毫升1N盐酸，萃取；分出有机层，水层再用乙酸乙酯20毫升提取2次，合并乙酸乙酯提取液，用饱和氯化钠水溶液洗，无水硫酸钠干燥，减压蒸干。将残留物用硅胶柱层析分离(洗脱剂石油醚∶乙酸乙酯＝8∶2)，得白色固体0.34克，熔点大于200℃。
1H NMR(DMSO-d6)11.47(s，1H)；4.38(br，s，1H)；3.96(d，2H)；3.66(s，1H)；3.52(s，1H)；3.34(m，2H)；2.20(br，m，1H)；2.08(s，br，m，1H)；2.01-0.97(br m，甾体CH2和CH)；0.90(d，3H，J＝6.5)；0.81(s，3H)；0.62(s，3H).
实施例5 N-(3-O-硝基-胆酰)-牛磺酸(Ia-5)的制备用牛磺酸代替甘氨酸，参照实施例4的方法制备N-(3-O-硝基-胆酰)-牛磺酸，熔点大于200℃。
1H NMR(DMSO-d6)12.64(s，1H)；4.51(br，s，1H)；4.02(d，2H)；3.66(s，1H)；3.52(s，1H)；3.34(m，2H)；2.20(br，m，1H)；2.08(s，br，m，1H)；2.01-0.97(br m，甾体CH2和CH)；0.90(d，3H，J＝6.5)；0.81(s，3H)；0.62(s，3H)。
实施例6 3-O-(4-硝基氧基-丁基)-熊去氧胆酸(Ib-1)的制备6.1 3-O-甲磺酰基-7-O-乙酰基熊去氧胆酸甲酯的合成将3克7-O-乙酰基熊去氧胆酸甲酯溶于20毫升吡啶中，冰浴下将混合液降至0℃。搅拌下将1毫升(2eq)的甲基磺酰氯慢慢滴入至反应液中，在冰浴下反应30分钟，撤去冰浴，室温下搅拌2小时。反应毕，将反应混和物倾到150毫升乙酸乙酯中，依次用0.5M盐酸、饱和碳酸氢钠、饱和食盐水洗涤，无水硫酸镁干燥，过滤，减压下除去溶剂，得白色固体3.4克，熔点124-127℃，收率97％。
1H NMR(CDCl3)4.75(br m，1H)；4.62(br s，1H)；3.66(s.3H)；3.01(s，3H)；2.34(br，m，2H)；2.05(s，3H)；2.25-1.04(br m，甾体CH2和CH)；0.92(s，3H)；0.82(d，3H，J＝6.2)；0.68(s，3H)。
6.2 3-O-(4-羟基丁基)-7-O-乙酰基熊去氧胆酸甲酯的合成取4.3克3-O-甲磺酰基-7-O-乙酰基熊去氧胆酸甲酯溶于25毫升1，4-丁二醇与5毫升吡啶的混合液中，于100℃下反应2小时。反应毕，将反应混和物倾到250毫升乙酸乙酯中，加入150毫升蒸馏水，萃取分出乙酸乙酯层，水层用乙酸乙酯提取三次，合并乙酸乙酯层，依次用0.5M盐酸、饱和食盐水、饱和碳酸氢钠、饱和食盐水依次洗涤，无水硫酸镁干燥。过滤，减压下除去溶剂，用硅胶柱层析分离(洗脱剂石油醚∶乙酸乙酯＝4∶1)，得无色粘稠液体4.1克。
6.3 3-O-(4-硝基氧基-丁基)-7-O-乙酰基熊去氧胆酸甲酯的合成将40毫升的醋酐和12毫升发烟硝酸混合溶液冷却至-5℃。搅拌下滴入由4克3-O-(4-羟基丁基)-7-O-乙酰基熊去氧胆酸甲酯溶于20毫升二氨甲烷的溶液。滴毕，于-5℃下反应1小时。反应毕，将反应液滴至100毫升的冰水中，分出有机层，水层用二氯甲烷(30毫升×4)提取，合并有机层，用饱和碳酸氢钠、饱和食盐水依次洗涤，无水硫酸镁干燥，过滤，减压除去溶剂，用硅胶柱层析分离(洗脱剂石油醚∶乙酸乙酯＝9∶1)，得无色粘稠液体4.1克。
6.4 3-O-(4-硝基氧基-丁基)-熊去氧胆酸(Ib-1)的合成将4.1克3-O-(4-硝基氧基-丁基)-7-O-乙酰基熊去氧胆酸甲酯溶于100毫升5％氢氧化钾甲醇溶液中，加热回流2-4小时，薄层监测，反应毕，将反应液滴至270毫升盐酸冰水液中(含27毫升浓盐酸)，析出白色沉淀，过滤，用蒸馏水洗涤，真空干燥。用硅胶柱层析分离(洗脱剂石油醚∶乙酸乙酯＝4∶1)，得白色固体2.6克，熔点185-189℃。
1H NMR(CDCl3，)11.96(s，1H)；4.56(t，2H)；3.84(d，1H，J＝7.0)；3.48(br，s，1H)；3.34(t，2H)；3.26(br，m，1H)；2.22(br，m，1H)；2.11(br，m，1H)；2.25-1.04(br m，甾体CH2和CH)；0.94(s，3H)；0.88(d，3H，J＝6.4)；0.62(s，3H)。
实施例7 3-O-(2-硝基氧基-乙基)-熊去氧胆酸(Ib-2)的制备用乙二醇代替丁二醇，参照实施例6的方法，制备3-O-(2-硝基氧基-乙基)-熊去氧胆酸(Ib-2)。熔点172-180℃。MS(FAB m/e)480.5(M-1)。
1H NMR(CDCl3，)12.05(s，1H)；4.56(t，2H)；3.90(d，1H)；3.47(br，s，1H)；3.37(t，2H)；3.24(br，m，1H)；2.28(br，m，1H)；2.13(br，m，1H)；2.26-1.04(br m，甾体CH2和CH)；0.97(s，3H)；0.89(d，3H，J＝6.4)；0.61(s，3H)。
实施例8 3-O-(4-硝基氧基-丁基)-胆酸(Ib-3)的制备用7，12-二-O-乙酰基胆酸甲酯代替7-O-乙酰基熊去氧胆酸甲酯，参照实施例6的方法，制备3-O-(4-硝基氧基-丁基)-胆酸。
熔点186-195℃。MS(FAB m/e)524.8(M-1)。
1H NMR(CDCl3，)11.92(s，1H)；4.53(t，2H)；3.84(d，1H，J＝7.0)；3.46(br，s，1H)；3.36(t，2H)；3.21(br，m，1H)；2.25(br，m，1H)；2.11(br，m，1H)；2.25-1.04(br m，甾体CH2和CH)；0.93(s，3H)；0.85(d，3H，J＝6.4)；0.61(s，3H)。
实施例9 N-[3-O-(4-硝基氧基-丁基)-熊去氧胆酰]-甘氨酸(Ib-4)的制备用3-O-(4-硝基氧基-丁基)-熊去氧胆酸代替3-O-硝基-胆酸，按照实施例4的方法制备N-[3-O-(4-硝基氧基-丁基)-熊去氧胆酰]-甘氨酸。熔点187-195℃。
1H NMR(CDCl3，)11.74(s，1H)；4.41(t，2H)；3.74(d，1H，J＝7.0)；3.52(br，s，1H)；3.43(t，2H)；3.30(m，2H)；3.22(br，m，1H)；2.16(br，m，1H)；2.08(br，m，1H)；2.25-1.04(br m，甾体CH2和CH)；0.91(s，3H)；0.85(d，3H，J＝6.4)；0.69(s，3H)。
实施例10 3-O-(3-硝基氧基-丁基)-熊去氧胆酸(Ib-5)的制备用1，3-丁二醇代替1，4-丁二醇，参照实施例6的方法，制备3-O-(3-硝基氧基-丁基)-熊去氧胆酸(Ib-5)。
1H NMR(CDCl3，)12.04(s，1H)；4.13(m，1H)；3.90(d，1H)；3.47(br，s，1H)；3.40(t，2H)；3.24(br，m，1H)；2.28(br，m，1H)；2.13(br，m，1H)；2.26-1.04(br m，甾体CH2和CH)；0.97(s，3H)；0.89(d，3H，J＝6.4)；0.61(s，3H)。
实施例11 3-O-(4-硝基氧基-2-丁烯基)-熊去氧胆酸(Ib-6)的制备用顺式-2-丁烯-1，4-二醇代替1，4-丁二醇，参照实施例6的方法，制备3-O-(4-硝基氧基-2-丁烯基)-熊去氧胆酸(Ib-6)。
1H NMR(CDCl3，)12.05(s，1H)；4.65(d，2H)；4.32(d，2H)；3.94(d，1H)；3.45(br，s，1H)；3.21(br，m，1H)；2.30(s，1H)；2.28(br，m，1H)；2.18(m，1H)；2.15(br，m，1H)；2.25-1.06(br m，甾体CH2和CH)；0.96(s，3H)；0.92(d，3H，J＝6.4)；0.63(s，3H)。
实施例12 3-O-(4-硝基氧基-环己基)-熊去氧胆酸(Ib-7)的制备用1，4-环己二醇代替1，4-丁二醇，参照实施例6的方法，制备3-O-(4-硝基氧基-环己基)-熊去氧胆酸(Ib-7)。
1H NMR(DMSO-d6)11.87(s，1H)；4.83(br，s，1H)；4.10(m，1H)；3.92(m，1H)；3.61(br，m，1H)；2.25(br，s，1H)；2.00-0.90(m，甾体及环己烷CH2和CH)；0.94(s，3H)；0.92(d，3H，J＝6.4)；0.61(s，3H)。
实施例13 3-O-[(6-硝基氧基甲基-吡啶-2-基)-甲基]-熊去氧胆酸(Ib-8)的制备用2，6-吡啶二甲醇代替1，4-丁二醇，参照实施例6的方法，制备3-O-[(6-硝基氧基甲基-吡啶-2-基)-甲基]-熊去氧胆酸(Ib-7)。
1H NMR(DMSO-d6)11.84(s，1H)；8.12(m，1H)；7.61(d，1H)；7.45(d，1H)；4.85(br，s，1H)；3.86(s，2H)；3.68(s，2H)；3.60(br，m，1H)；2.24(br，s，1H)；2.02-0.97(br m，甾体CH2和CH)；0.94(s，3H)；0.84(d，3H，J＝6.4)；0.62(s，3H)。
实施例14 抗CCl4中毒所致小鼠肝损伤的药效学评价取体重大约20-25g的Baclb/c小鼠，随机分组，每组10只小鼠。通过口服给予不同剂量的待测化合物；1h后，按照10mL/kg的剂量，皮下注射100mL/L％的CCl4，制备肝损伤模型；皮下注射生理盐水作为正常对照组。造模后12小时后，再次口服给予不同剂量的待测化合物。第二次给药后24小时，处死动物，留取血清标本，统一用全自动生化仪对于血清中的ALT，AST水平进行检测。评价结果见表1。
实施例15抗对乙酰氨基酚所致小鼠肝损伤的药效学评价取体重大约20-25g的Baclb/c小鼠，随机分组，每组10只小鼠。通过口服给予不同剂量的待测化合物；1h后，用100mg/kg的对乙酰氨基酚皮下注射制备肝损伤模型，皮下注射生理盐水作为正常对照组。造模1h后，通过口服再次给予不同剂量的待测化合物。第二次给药后24小时，处死动物，留取血清标本，统一用全自动生化仪对于血清中的ALT和AST水平进行检测。评价结果见表2。
表1、抗CCl4中毒所致小鼠肝损伤的治疗作用
表2、抗对乙酰氨基酚所致小鼠肝损伤的治疗作用
权利要求
1.式Ia或Ib所示的胆汁酸的硝酸酯衍生物或其药学上可接受的盐 其中，R1和R2代表-OH或-O-NO2；R3代表氢，-OH或-O-NO2；R4代表-OH，-NHCH2COOH或-NHCH2CH2SO3H；R5代表氢或-OH；L代表C2-6-烷基、C2-6-链烯基、C2-6-炔基、C1-3-取代烷基，C3-6环烷基、二-C2-6-烷基芳香基，所述的芳香基选自苯、吡啶等，所述的取代基选自卤素、羟基、C1-6烷基；条件是，R1、R2和R3可以相同或不同，但其中至少有一个为-OH，并且至少有一个为-O-NO2。
2.药物组合物，其包括至少一种式Ia或Ib所代表的胆汁酸的硝酸酯衍生物或其可药用盐以及一种或多种药学上可接受的载体或赋形剂。
3.权利要求1所述的式Ia或Ib胆汁酸的硝酸酯衍生物或其可药用盐用于制备治疗肝脏疾病的药物的用途。
4.权利要求3的用途，所述的肝脏疾病为肝炎、肝纤维化或肝硬化。
5.治疗肝脏疾病的方法，所述方法包括给予有此需要的患者治疗有效量的至少一种权利要求1所述的式Ia或Ib胆汁酸的硝酸酯衍生物或其可药用盐。
全文摘要
本发明涉及式Ia或Ib所示的胆汁酸的硝酸酯衍生物及其药学上可接受的盐，含有所述化合物的药物组合物以及所述化合物在制备治疗肝脏疾病的药物方面的应用，其中，R
文档编号A61P1/00GK1948331SQ20051010836
公开日2007年4月18日 申请日期2005年10月13日 优先权日2005年10月13日
发明者仲伯华, 李宏武, 靳雪原, 陈兰福, 吴波 申请人:中国人民解放军军事医学科学院毒物药物研究所