专利名称：一种治疗子宫内膜异位的中药组合物及其制备方法
技术领域：
本发明涉及一种中药组合物及该组合物的制备方法和质量控制方法，特别涉及一种用于治疗子宫内膜异位的中药组合物，同时涉及该组合物的制备方法和质量控制方法。
背景技术：
子宫内膜异位症是妇科常见病、多发病之一，近年来发病率明显增加，育龄妇女中发病率为10-20％，约40％的子宫内膜异位症合并不孕。子宫内膜异位症严重影响着妇女的身心健康。虽然子宫内膜异位症发现已有一百多年的历史，但其病因病机还不十分清楚，治疗也无理想的方法。近几十年来，西医一直在探索应用性激素类药物治疗子宫内膜异位症。目前有假孕疗法、假绝经疗法、促性腺激素释放激动剂疗法及在此基础上予以反向添加治疗的方法。这些治疗方法对近期缓解症状，有一定疗效。但复发率高，副作用大，且价格昂贵不易推广。手术治疗中的保守手术，术后易复发，根治手术对年轻妇女不合适，绝经期综合症发生率较高。由于上述种种原因，治疗上比较棘手。中医药治疗子宫内膜异位症优于西药，疗效确切，未发现明显毒副作用，且中药不抑制排卵，对妊娠有利。而且安全、服用方便，价格便宜，质量稳定。
发明内容
本发明的一个目的在于公开一种治疗子宫内膜异位的中药组合物；本发明的另一个目的在于公开一种治疗子宫内膜异位的中药组合物的制备方法；本发明的第三个目的在于公开该治疗子宫内膜异位的中药组合物的质量控制方法。
本发明目的是通过如下技术方案实现本发明药物组合物的原料药组成及配比如下赤芍7-8重量份当归5-7重量份蒲黄4-6重量份川芎4-6重量份桂枝2-4重量份胡索7-8重量份柴胡4-6重量份生黄芪9-11重量份补骨脂4-6重量份细辛1-2重量份制没药2-4重量份上述原料药的优选配比为赤芍7.5重量份当归6重量份生蒲黄5重量份川芎5重量份 桂枝3重量份 延胡索7.5重量份柴胡5重量份 生黄芪10重量份 补骨脂5重量份细辛1.5重量份制没药3重量份上述原料药的优选配比还可以为赤芍7重量份 当归7重量份 生蒲黄4重量份川芎6重量份 桂枝2重量份 延胡索8重量份柴胡4重量份 生黄芪11重量份 补骨脂4重量份细辛2重量份 制没药2重量份上述原料药的优选配比还可以为赤芍8重量份 当归5重量份 生蒲黄6重量份川芎4重量份 桂枝4重量份 延胡索7重量份柴胡6重量份 生黄芪9重量份补骨脂6重量份细辛1重量份 制没药4重量份按药剂学方法，可以将上述原料药制备成各种临床可接受的剂型，包括但不限于如下剂型当中的一种如片剂、丸剂、胶囊剂、颗粒剂、滴丸剂、软胶囊剂及栓剂等固体制剂，混悬剂、口服液、灌肠剂等液体制剂，优选胶囊剂型、片剂或颗粒剂型。
本药物组合物的制备方法按配比剂量取药物组合物原料药十一味，当归、川芎、补骨脂、延胡索用5-8倍量50-70％的乙醇加热回流，提取2-4次，每次1.5-3小时，合并乙醇提取液，药液备用；桂枝、细辛、没药加3-7倍量水，浸泡0.5-3小时，水蒸汽蒸馏提取2-8小时，收集挥发油，水溶液和药渣备用；取挥发油用4-8倍量的倍他环糊精及40-80倍量的水进行包结，30-60℃搅拌0.5-1.5小时，冷藏10-18小时，滤过，包结物30-55℃低温干燥，粉碎成细粉，备用；柴胡、赤芍、蒲黄及黄芪加7-10倍量水，提取2-4次，每次0.5-1.5小时，将末次提取液与上述桂枝等药渣合煎，合并煎液，滤过，滤液与上述水溶液合并，合并液浓缩至50℃时测相对密度1.10-1.15，加乙醇使含醇量达60-80％，冷藏过夜，滤过，滤液与上述当归等药液分别回收乙醇至50℃时测相对密度1.15-1.20，干燥，与上述挥发油β环糊精包结物细粉及糊精按重量比1∶0.5-1.5混匀，制成颗粒，干燥，制成胶囊剂、片剂或颗粒剂。
本组合物制成药剂的质量控制方法包括鉴别和/或含量测定。
质量控制方法的鉴别方法包括如下方法中的一种和/或几种A.取相当日服用剂量1/6倍的本药物组合物制剂，研细，加甲醇15-25ml，超声处理10-30分钟，滤过，滤液作为供试品溶液；另取芍药苷对照品，加甲醇制成每1ml含0.3-0.6mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液5-15μl、对照品溶液5-15μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G预制薄层板上，以35-45∶4-6∶8-12∶0.15-0.25的氯仿—醋酸乙酯—甲醇—甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，喷以3-6％香草醛的45-55％磷酸乙醇溶液，在100-110℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；B.取补骨脂素和异补骨脂素对照品，分别加甲醇制成每1ml含0.2-0.4mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述鉴别A项下的供试品溶液5-15μl、对照品溶液4-10μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G预制薄层板上，以7-9∶1.5-2.5正己烷—醋酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5-15％氢氧化钠甲醇溶液，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；C.取相当日服用剂量5/24倍的本药物组合物制剂，研细，加入乙醇10-20ml，超声处理0.5-1.5小时，滤过，滤液作为供试品溶液；另取当归对照药材、川芎对照药材各1.5-2.5g，各加入乙醇8-12ml，分别超声处理0.5-1.5小时，滤过，滤液作为对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液及对照药材溶液各5-15μ1，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以8-10∶0.8-1.2环己烷—醋酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；D.取相当日服用剂量1/2倍的本药物组合物制剂，研细，加入氨试液1.5-2.5ml和氯仿25-35ml，超声处理30-50分钟，滤过，滤液回收氯仿至干，残渣加入乙醇4-6ml使溶解，作为供试品溶液；另取延胡索乙素对照品，加甲醇制成每1ml含0.15-0.25mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10-15μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G预制薄层板上，以4-6∶3-5∶0.3-0.5正己烷—醋酸乙酯—氨水为展开剂，展开，取出，晾干，以碘蒸气熏至斑点显色清晰，日光下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；E.取相当日服用剂量的本药物组合物制剂，研细，置200-300ml的圆底烧瓶中，加入水40-60ml，连接挥发油提取器，自测定器上端加水使充满刻度，60～90℃加入石油醚1.0-2.0ml，然后连接回流冷凝管；将烧瓶内容物加热至沸，并保持1.5-2.5小时，停止加热，取石油醚层作为供试品溶液；另取细辛对照药材8-12g提取挥发油，加氯仿25-35ml使溶解，作为对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液10-20μl、对照品溶液2-5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以92-98∶4-6苯—醋酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，喷以0.8-0.12％香草醛硫酸溶液，在100-110℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；F.取相当日服用剂量1/4倍的本药物组合物制剂，研细，加入硅藻土1.5-2.5g，混匀，加入2％氢氧化钠的甲醇溶液15-25ml，加热回流提取0.5-1.5小时，滤过，滤液蒸干，加水25-35ml使溶解，每次用35-45ml水饱和的正丁醇提取，提取2-4次，合并正丁醇液，以水洗涤1-3次，弃去水液，再以0.8-1.2％磷酸二氢钾溶液洗涤1-2次，弃去水液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇1.5-2.5ml使溶解，作为供试品溶液；另取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1ml含0.2-0.4mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液10-15μl、对照品溶液5-7μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以18-22∶6-8∶1.5-2.5氯仿—甲醇—水的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％的硫酸乙醇溶液，在100-110℃烘烤至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
本药物组合物含量测定方法包括如下方法色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；65-75∶425-435乙腈—水为流动相；检测波长为220-240nm；理论塔板数按芍药苷计算应不低于3000；对照品溶液的制备称取芍药苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.2-1.0mg的溶液，即得；供试品溶液的制备取本药物组合物制剂装量差异项下内容物，研细，取1.0-1.5g，置具塞锥形瓶中，称定，加入甲醇15-25ml，称定重量，超声处理20-30分钟，取出，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，用0.40-0.50um微孔滤膜滤过，取续滤液，即得；测定法分别吸取上述对照品溶液5-15μl、供试品溶液14-20μl，注入液相色谱仪，测定，即得；本药物组合物按日服用剂量含赤芍以芍药苷C23H28O11计，不得少于69.0mg。
其中在质量控制方法中所述的本发明药物组合物制剂的日服用剂量相当于日服用生药量约61.5g。
在本药物组合物的制备工艺研究实验中，通过对饮片浸泡时间、加水量对细辛挥发油优选实验，保证提取挥发油含量高；以补骨脂素、异补骨脂素的含量作为考察指标，从正交试验结果表中选择醇提条件的优选实验；以芍药苷为考察指标，选择水煎提取的最佳工艺为；在乙醇不同醇浓度条件下测定各浸膏粉中的芍药苷含量，选择分离、纯化及醇沉最佳实验；通过不同的干浸膏粉与糊精的比例、不同浓度乙醇溶液作润湿剂进行制粒，选择优选比例及浓度。
本药物组合物制剂含量测定中超声提取比加热回流节省时间和能源，操作简单。含量测定的空白试验显示空白溶液在与芍药苷对照品相应的保留时间处未显色谱峰，分离无干扰。精密度试验计算芍药苷的RSD为0.9948％，说明仪器的精密度良好；稳定性考察得芍药苷在24小时内稳定。重复性试验计算RSD为1.5880％，说明含量测定方法稳定，重现性较好；回收率试验计算平均回收率为99.05％，RSD为0.9356％。说明含量测定方法可行。线性关系的考察说明芍药苷的峰面积和进样量呈良好的线性关系。
通过对兔子子宫内膜异位症动物模型的影响试验，发现卵泡刺激素(FSH)含量显著降低、黄体生成素(LH)有降低、催乳素(PRL)、雌二醇(E2)含量显著降低、异位内膜体积明显缩小及异位内膜重量明显减轻、子宫内膜异位病变程度轻于模型组、改善动物血液流变学的趋势；通过对大鼠子宫内膜异位症动物模型的影响试验，同样发现FSH含量明显降低、LH、PRL、E2含量均有下降趋势、异位内膜体积均明显缩小及异位内膜重量明显减轻、子宫异位内膜病变程度轻于模型组；通过对大鼠在体子宫收缩的影响试验，发现本药物组合物颗粒剂对催产素引起子宫强烈收缩有抑制作用、降低子宫活动幅度及抑制子宫活动力的作用；通过微循环作用试验，发现本药物组合物颗粒剂改善小鼠肠系膜微循环的作用、对局部血液循环障碍有保护作用；通过抗炎作用试验，发现本药物组合物颗粒剂对大鼠肉芽肿炎症模型有明显抑制作用、明显抑制足跖肿胀作用；通过镇痛作用试验，发现本药物组合物颗粒剂能提高痛阈值，有明显的镇痛作用；通过对免疫功能低下小鼠吞嗜功能的影响试验，发现本药物组合物颗粒剂对免疫功能低下小鼠单核细胞吞嗜功能有明显的增强作用；通过对免疫功能低下小鼠迟发性变态反映的影响试验，发现本药物组合物颗粒剂对免疫功能低下小鼠的细胞免疫反应有增强作用。
下面实验例用于进一步说明但不限于本发明。
实验例1粉碎度及提取时间的确定实验根据药物组合物配比剂量称取桂枝60g、细辛30g、制没药60g各三份，三份的规格分别为饮片、10目、20目。分别加入6倍量水，进行水蒸汽蒸馏。结果见表1表1 细辛挥发油提取时间的考察
由以上结果可以看出，10目提油量最少，20目药材粉在生产中容易造成糊锅，饮片的提油率和20目相比，已达到85.7％，且少一道工序，节省能源，故选择以饮片直接提油。提取8小时已经基本提尽，加热蒸馏1小时出油最快，达到总量的30％，8小时能基本提尽，所以挥发油的最佳提取时间选为8小时。
实验例2细辛挥发油包结工艺优选实验以挥发油和β-环糊精的比例(A)、加水量(B)、包合温度(C)、搅拌时间(D)为考察因素，选择不同水平，按照L9(34)正交表进行包结，再分别用微量挥发油提取器提取，计算挥发油利用率，进行方差分析，方差分析采用正交多项式回归法。
表2 挥发油包结因素水平表
表3 挥发油包结工艺正交实验结果
表4 挥发油包结工艺方差分析结果
F1-0.05(1，3)＝10.13 F1-0.01(1，3)＝34.12注“△”项合并作为试验误差平方和。“**”表示有非常显著性差异，“*”表示有显著性差异。由表4中可知，A因素、B因素、C因素有非常显著性影响，从正交试验结果表中选择A2B1C1为最佳条件，D因素为不显著性因素，选择搅拌时间为1小时。由上述试验可知挥发油包结的最佳条件为即将6g β-CD加入60ml水中充分溶解，在40℃条件下，加入1ml挥发油进行包结，搅拌时间为1小时。
实验例3药物组合物制剂的鉴别试验赤芍的薄层特征鉴别，芍药苷购于中国药品生物制品检定所，编号为0736-9811。曾采用赤芍的薄层展开系统氯仿—醋酸乙酯—甲醇—甲酸(40∶5∶10∶0.2)和醋酸乙酯—甲醇—水(8∶3∶2.5)的上层溶液进行展开，发现后者展开效果不理想，而前者得到的芍药苷斑点清晰集中，同法制备的阴性对照品无干扰。显色剂原来采用5％香草醛硫酸溶液，但该显色剂加热时间稍长斑点即变黑，显色时间不好掌握，后改为5％香草醛的50％磷酸乙醇溶液，显色剂灵敏、专属性强，长时间加热斑点不发黑。按照此方法经样品及阴性对照试验，确认技术方案中方法可行。
补骨脂的薄层鉴别补骨脂素购于中国药品生物制品检定所，编号为0739-9706。异补骨脂素购于中国药品生物制品检定所提供，编号为738-8802。在试验的过程中，由于实验室没有氢氧化钾，用氢氧化钠代替，发现显色效果亦不错，故显色剂使用10％氢氧化钠甲醇溶液。同法制备的阴性对照品无干扰。按照此方法经样品及阴性对照试验，确认技术方案中方法可行。
当归、川芎的薄层鉴别当归对照药材购于中国药品生物制品检定所，编号为927-9303，川芎对照药材购于中国药品生物制品检定所提供，编号为918-9202。在实验中发现以乙醇提取当归、川芎对照药材以及样品时，斑点很明显，比乙醚和乙酸乙酯好。同法制备的当归阴性、川芎阴性及当归川芎阴性对照品无干扰。经样品及阴性对照试验，确认技术方案中方法可行。
延胡索的薄层鉴别延胡索乙素购于中国药品生物制品检定所，编号为0726-9605。曾采用正己烷—氯仿—甲醇(10∶6∶1)、正丁醇—浓盐酸—水(4∶1∶0.5)等展开系统进行展开，发现展开效果不理想，又用正己烷—醋酸乙酯—氨水(5∶4∶0.4)为展开系统，发现斑点清晰集中。同法制备的阴性对照品无干扰。经样品及阴性对照试验，确认技术方案中方法可行。
细辛挥发油的薄层鉴别细辛对照药材购于中国药品生物制品检定所，编号为121204-0101。曾经用25ml氯仿为溶剂对成品进行超声处理，取滤液作为供试品溶液，但是在挥去氯仿的同时挥发油也有较大量的损失，所以改用同法制备的阴性对照品无干扰。经样品及阴性对照试验，确认技术方案中方法可行。
黄芪甲苷的薄层鉴别黄芪甲苷购于中国药品生物制品检定所，编号为781-200009。曾采用药典所载黄芪的薄层鉴别方法进行薄层层析，但薄层板上样品色谱成带状，掩盖了黄芪甲苷的斑点，且黄芪甲苷对照品的Rf值较小。所以用碱提法处理样品，得到的黄芪甲苷斑点清晰，为橙黄色斑点，同法制备的阴性对照品无干扰，确认技术方案中方法可行。
实验例4含量测定流动相的选择实验比较了甲醇-0.05mol/L磷酸二氢钾溶液(药典法)、甲醇—水—冰醋酸(30∶70∶0.5)及乙睛—水(14∶86)等，甲醇—水—冰醋酸(30∶70∶0.5)系统下芍药苷峰拖尾，药典法及乙睛—水系统芍药苷峰分离尚好，但前者和后者相比，有一定的酸度，对色谱柱易造成损坏，而乙睛—水(14∶86)峰形对称，基线平稳，保留时间也合适，故最佳流动相选用乙睛—水14∶86。
实验例5含量测定超声处理时间的选择实验称取样品4份，称定，加入甲醇20ml，称定重量，分别超声处理15分钟、20分钟、25分钟、30分钟。
表5 甲醇超声时间的选择
以上结果表明，超声处理25分钟，含量相对较高，故选择甲醇超声处理25分钟。
样品含量测定按照技术方案含量测定的方法，测定三批成品，称取3份样品，每袋重8g，结果见表6。
表6 样品测定结果
实验例6本药物组合物颗粒剂对兔子宫内膜异位症动物模型内分泌水平的影响取健康新西兰大白兔用3％戊巴比妥钠静脉麻醉，背位固定，腹部去毛，以2％碘酒及75％酒精常规消毒腹部皮肤。打开腹腔，找出子宫，切下左侧子宫一段，行端断端吻合术。将切下的子宫用卡尺测量，切成0.5cm×0.5cm，分别种植于左、右卵巢及左、右子宫角附近，缝合线为3号锦纶单丝线，假手术组打开腹腔不种植子宫内膜，然后缝合腹壁。1个月后随机取出12只动物处死，打开腹腔，找出子宫，剥离种植内膜，以10％甲醛溶液固定，石蜡包埋，HE染色，在光学显微镜下观察，病理组织学检查证实。
(1)对卵泡刺激素(FSH)含量的影响经子宫内膜移植建立模型1个月后，各组FSH明显升高，与假手术组比较有显著性差异(P＜0.001)；手术4个月后，模型组FSH升高更为显著，与术前、术后1个月比较有显著性差异。本药物组合物颗粒剂三个剂量组及丹那唑均有明显抑制FSH升高的作用，给药3个月后，三个剂量组的FSH含量与模型组比较差异显著(P＜0.05～0.001(2)对黄体生成素(LH)含量的影响手术造模1个月后LH含量明显升高，模型组与手术前比较有显著性差异(P＜0.001)。4个月后LH仍维持较高水平；给药3个月后，本药物组合物颗粒剂三个剂量组有抑制LH值升高的作用，大剂量组抑制LH升高的作用较为明显，与手术前比较无明显差异。与模型组比较亦无明显差异(3)对催乳素(PRL)含量的影响手术后1个月PRL含量明显升高，各组与造模前比较均有显著性差异(P＜0.01)。手术4个月后模型组PRL含量显著升高，与造模前比较(P＜0.001)。给药3个月后，本药物组合物颗粒剂中、大剂量组及丹那唑组PRL含量明显降低，与模型组比较有显著性差异均(P＜0.001)。造模1个月自身比较，本药物组合物颗粒剂中、大剂量组及丹那唑组PRL含量亦明显降低均(P＜0.001)。
(4)对雌二醇(E2)含量的影响手术造模后E2值升高，各组与造模前比较均有显著性差异(P＜0.001)。造模4个月后模型组E2含量显著升高，与造模前比较有显著性差异(P＜0.001)。给药3个月后，与模型组比较，本药物组合物颗粒剂中、大剂量组及丹那唑组E2含量明显降低(P＜0.01～＜0.001)。与造模1个月后比较，本药物组合物颗粒剂中、大剂量组及丹那唑组E2含量亦见明显降低(P＜0.05～0.0001)。
表7本药物组合物颗粒剂对兔子宫内膜异位症模型内分泌水平的影响(X±SD)
注与模型组比较*P＜0.05；**P＜0.01；***P＜0.001。与造模前比较#P＜0.05；##P＜0.01；###P＜0.001。
与造模后1个月比较△P＜0.05；△△P＜0.01；△△△P＜0.001。
实验例7本药物组合物颗粒剂对兔子宫内膜异位症动物模型血液流变学的影响实验本药物组合物颗粒剂大剂量组高切变率下的全血粘度明显低于模型组(P＜0.05)。本药物组合物颗粒剂三个剂量组中切1中切2低切变率下的全血粘度有降低趋势。
表8.本药物组合物颗粒剂对兔血液流变学的影响(n＝10 X±SD)
注与模型组比较*P＜0.05。
实验例8本药物组合物颗粒剂对兔子宫内膜异位体积及重量的影响本药物组合物颗粒剂中、大剂量组及丹那唑组异位内膜体积明显缩小，重量明显减轻，与模型组比较分别(P＜0.05、P＜0.01、P＜0.001)。
表9.本药物组合物颗粒剂对兔子宫异位内膜体积及重量的影响(X±SD)
注与模型组比较*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001。
实验例9本药物组合物颗粒剂对兔子宫内膜异位病理组织学检查实验假手术组子宫、卵巢及输卵管周围未见异位的内膜。模型组纤维脂肪组织中可见部分纤维、平滑肌和内膜成分。内膜上皮可见形态不一，有扁平、立方、低柱状或高柱状。内膜层腺体大小不等，部分密集，部分稀疏，有些内膜层由于增生过度突入腔内，呈片状或岛屿状，个别腺体扩张呈束状。
丹那唑组大部分异位腺体可见，局部密集，异位的内膜上皮扁平、破碎、脱落，个别异位腺体固缩。
本药物组合物颗粒剂小剂量组异位内膜区域内，内膜层较薄，部分区域上皮可见锯齿状，上皮有破碎、脱落，内膜层腺体大部分不明显，个别可见固缩、破碎。
本药物组合物颗粒剂中剂量组异位内膜可见，但内膜层较薄，腺上皮部分长势尚可，呈巨齿状结构，部分上皮脱落，内膜层腺体不明显。本药物组合物颗粒剂大剂量组镜下同中、小剂量组，内膜层变薄，上皮细胞立方或扁平，部分有脱落，纤维组织内可见单个腺体。
实验例10本药物组合物颗粒剂对大鼠在体子宫收缩的影响实验取健康大鼠70只，随机分组，实验前24-48小时取健康未孕雌性大鼠皮下注射己烯雌酚(2mg/kg体重)，人工促使动物处在动情前期或动情期，以提高子宫对药物的敏感性。实验时用戊巴比妥钠腹腔麻醉(50mg/kg)，背位固定，打开腹腔找出子宫，用线将一侧子宫提起与压力换能器连接，局部保温。记录一段正常曲线后(10分钟)，从股静脉注入催产素(3u/只)，同时由十二指肠给予受试药物，模型组(既催产素组给生理盐水10ml/kg)，观察给药前后子宫收缩的频率、幅度和子宫活动力(频率×幅度)。
表10本药物组合物颗粒剂对正常子宫活动力的影响(n＝10，X±SD)
注与对照组比较△△P＜0.01。与模型组比较*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001。
自身比较#P＜0.05；，##P＜0.01，###＜0.001。
本药物组合物颗粒剂小、中、大三个剂量组、消炎痛组及丹那唑组给药后30、40、50、60分钟时均有明显抑制催产素引起子宫活动力的作用，与模型组(催产素组)比较(P＜0.05～P＜0.001)。
实验例11本药物组合物颗粒剂对小鼠肠系膜微循环的影响实验健康小鼠60只随机分组，每天灌胃给药1次，连续给药7天。盐酸消旋山莨菪碱注射液组(65-42组)肌肉注射给药1次，给药后15分钟，其它各给药组末次给药后30分钟用戊巴比妥钠腹腔麻醉(50mg/kg)，打开腹腔，拉出一段肠袢，平铺于平皿上，肠系膜上滴加温热生理盐水，以防干燥，局部保温，尾静脉注射15％高分子右旋糖苷(10ml/kg)，注射后10、20、30分钟时在体表微循环观测仪，观察给药后不同时间的血液流态，统计学处理采用参比差值法进行组间比较。
模型组尾静脉给于注射高分子右旋糖苷后血流流态由+级变化至+++级，流速由快逐渐减慢，造成血流障碍，直至血流停止。本药物组合物颗粒剂小剂量组尾静脉注射高分子右旋糖苷后10min时与模型组比较有明显差异(u＜0.05)，中、大剂量组及丹那唑组尾静脉注射高分子右旋糖苷后10、20、30min时，小鼠肠系膜微循环的流态明显改善，血流流态多为++级以下，与模型组比较有显著性差异分别(u＜0.05～u＜0.01)。
表11.对小鼠肠系膜微循环障碍血液流态的影响 (n＝10)
注与模型组比较*u＜0.05.**u＜0.01结果表明，本药物组合物颗粒剂中、大剂量组对局部血液循环障碍有一定保护作用。
实验例12本药物组合物颗粒剂抗炎作用——对大鼠肉芽肿的影响实验动物随机分为5组，实验时大鼠以1％戊巴比妥钠腹腔麻醉，常规消毒腋窝皮肤，打开切口，将称重棉球(每个棉球重30mg)经高压灭菌后，每棉球加胺苄青霉素1mg/0.1ml，50℃烘箱烘干后分别植入左、右侧腋窝部皮下。手术当天开始灌胃给药，每日给药1次，连续7天，7天后颈椎脱臼处死，取出棉球用电子天平称湿重，然后在60度烘箱放置12小时后再称干重。计算比较致炎后各组肉芽肿的平均湿重及干重(均减去原棉球重量)，用t检验进行组间比较。
本药物组合物颗粒剂中、大剂量组及阿斯匹林组肉芽肿棉球的干重及湿重均明显低于模型组(P＜0.05～0.01)，本药物组合物颗粒剂有明显抑制棉球肉芽肿的作用。小剂量组肉芽肿棉球的干重、湿重亦比模型组轻，但与模型组比较无明显差异。
表12.本药物组合物颗粒剂对棉球所致大鼠肉芽肿的影响(X±SD)
注与模型组比较*P＜0.05，**P＜0.01。
实验例13本药物组合物颗粒剂镇痛作用——对醋酸诱发疼痛的影响试验小鼠分为5组，每组10只，各组动物每日灌胃给药1次，连续7天，度冷丁组灌胃给药1次，模型组给同体积生理盐水，各组均于末次给药后30分钟腹腔注射0.6％醋酸(0.2ml/只)，观察20分钟内各组动物由醋酸诱发的扭体次数，进行组间比较(t检验)。
腹腔注射醋酸后可引起小鼠较持久的疼痛刺激，小鼠出现扭体反应。本药物组合物颗粒剂中、大剂量均有不同程度减少疼痛的作用，动物扭体次数明显少于模型组(P＜0.05～0.01)。
表13对小鼠疼痛(扭体)作用的影响(X±SD)
注与对照组比较*P＜0.05；**P＜0.01；***P＜0.001。
实验例14本药物组合物颗粒剂对免疫功能低下小鼠血清凝集素的影响试验取小鼠66只，随机分为6组，每组11只，每日给药1次，连续给药7天，给药48小时后即给药第3天，每只小鼠腹腔注射5％羊红细胞(SRBC)0.25ml进行免疫，同时再皮下注射环磷酰胺100mg/kg 1次(空白对照组除外)。免疫后的第6天由眼球后静脉丛取血，离心，分离血清，以微量凝集法测定血清中抗SRBC抗体滴度。
环磷酰胺组小鼠血清中抗体积数明显降低，与空白对照组比较差异显著(P＜0.01)；本药物组合物颗粒剂中、大剂量组均显著地提高了环磷酰胺致免疫功能低下小鼠血清中抗羊红细胞抗体的水平，与环磷酰胺组比较差异非常显著(P＜0.01～0.001)；阳性对照药左旋咪唑亦显著提高了小鼠对羊红细胞的抗体反应(P＜0.01)。说明本药物组合物颗粒剂能提高环磷酰胺致免疫功能低下小鼠的体液免疫功能。
表14本药物组合物颗粒剂对免疫功能低下小鼠血清凝集素的作用(n＝11 X±SD)
注与环磷酰胺组比较。
实验例15本药物组合物颗粒剂对免疫功能低下小鼠吞噬功能的影响实验取小鼠60只，随机分为6组，每日灌胃给药1次，连续给药7天，给药48小时后即给药第3天给小鼠皮下注射环磷酰胺100mg/kg(空白对照组除外)，给药的第8天以10％印度墨汁0.2ml/只给小鼠尾静脉注射。在注射后2分和10分钟分别眼球后静脉丛取血0.02ml，加入到装有4ml蒸馏水的试管中溶解红细胞，然后在波长为600nm的UV-120-02型分光光度计测定光密度(OD)值，计算在单位时间内血清中碳粒廓清的速度K。OD2和OD10分别注射印度墨汁后2分钟和10分钟所取血样的OD值，t2和t10为取血时间。试验结果t检验。
表15本药物组合物颗粒剂对免疫功能低下小鼠吞噬功能的影响(n＝10 X±SD)
注与环磷酰胺组比较。
如表所示，环磷酰胺组明显地降低了正常小鼠单核细胞的吞噬功能，与空白对照组比较差异显著(P＜0.05)；阳性对照药左旋咪唑的碳粒廓清指数显著高于环磷酰胺组(P＜0.001)，本药物组合物颗粒剂中、大剂量组可明显提高环磷酰胺致免疫功能低下小鼠碳粒廓清指数，与环磷酰胺组比较差异显著分别(P＜0.05～0.01)。该药对环磷酰胺致免疫功能低下小鼠非特异性免疫功能有增强作用。
实验例16本药物组合物颗粒剂对免疫功能低下小鼠迟发性变态反应的影响实验取小鼠70只，随机分为7组，每组10只，每日给药1次，连续给药8天，于给药第3天除空白对照组动物外，各组小鼠用1％DNFB丙酮橄榄油溶液50μl均匀涂抹于腹部脱毛处1次致敏。同时除空白对照组和模型组动物外，所有动物皮下注射环磷酰胺100mg/kg 1次。于致敏后的第5天全部小鼠用同上抗原20μl均匀涂抹于每只小鼠右耳两面进行攻击。攻击后24h，将小鼠颈椎脱臼处死，剪下左右耳壳，用打孔器取下直径8mm的耳片，称重。肿胀度结果进行t检验。
表16本药物组合物颗粒剂对免疫功能低下小鼠FPR的作用(n＝10 X±SD)
注△与空白对照组比较；#与模型组比较；*与环磷酰胺组比较。
如表所示，模型对照组小鼠耳肿胀度明显增大，与空白对照组比较P＜0.001，说明迟发性变态反应已形成；环磷酰胺组小鼠耳肿胀度明显比模型组轻，与模型组比较差异显著P＜0.001，免疫功能低下小鼠模型形成；阳性对照药左旋咪唑组与环磷酰胺组比较有明显提高免疫功能P＜0.001，受试药本药物组合物颗粒剂小、中、大剂量组均对环磷酰胺致免疫功能低下小鼠耳肿胀度有显著的增强作用，与环磷酰胺组比较差异十分显著均P＜0.001，该药对环磷酰胺致免疫功能低下小鼠的细胞免疫功能有增强作用。
实施例1药物组合物颗粒剂制备赤芍313g柴胡208g蒲 黄208g黄 芪417g当归250g川芎208g补骨脂208g延胡索313g桂枝125g细辛62g 没药(制)125g以上十一味，当归、川芎、补骨脂、延胡索用6倍量60％的乙醇加热回流，提取3次，每次2小时，合并乙醇提取液，药液备用；桂枝、细辛、没药加6倍量水，浸泡2小时，水蒸汽蒸馏提取8小时，收集挥发油，水溶液和药渣备用；取挥发油用6倍量的倍他环糊精及60倍量的水进行包结，40℃搅拌1小时，冷藏12小时，滤过，包结物40℃低温干燥，粉碎成细粉，备用；柴胡、赤芍、蒲黄及黄芪加8倍量水，提取3次，每次1小时，第三次和上述桂枝等药渣合煎，合并煎液，滤过，滤液与上述水溶液合并，合并液浓缩至50℃时测相对密度1.10-1.15，加乙醇使含醇量达70％，冷藏过夜，滤过，滤液与上述当归等药液分别回收乙醇至50℃时测相对密度1.15-1.20，干燥，与上述挥发油倍他环糊精包结物细粉及糊精适量(约500g)混匀，制成颗粒，干燥，制成颗粒1000g，即得。
实施例2药物组合物胶囊剂的制备赤芍7kg当归7kg生蒲黄4kg川芎6kg桂枝2kg延胡索8kg柴胡4kg生黄芪11kg 补骨脂4kg细辛2kg没药(制)2kg当归、川芎、补骨脂、延胡索用5倍量70％的乙醇加热回流，提取2次，每次3小时，合并乙醇提取液，药液备用；桂枝、细辛、没药加5倍量水，浸泡3小时，水蒸汽蒸馏提取7小时，收集挥发油，水溶液和药渣备用；取挥发油用8倍量的倍他环糊精及60倍量的水进行包结，60℃搅拌0.5小时，冷藏12小时，滤过，包结物35℃低温干燥，粉碎成细粉，备用；柴胡、赤芍、蒲黄及黄芪加9倍量水，提取2次，每次1.5小时，再将第二次提取液与上述桂枝等药渣合煎，合并煎液，滤过，滤液与上述水溶液合并，合并液浓缩至50℃时测相对密度1.10，加乙醇使含醇量达80％，冷藏过夜，滤过，滤液与上述当归等药液分别回收乙醇至50℃时测相对密度1.15，干燥，与上述挥发油β环糊精包结物细粉及糊精按重量比1∶0.5混匀，制成颗粒，干燥，制成胶囊剂。
实施例3药物组合物片剂的制备赤芍8kg当归5kg生蒲黄6kg川芎4kg桂枝4kg延胡索7kg柴胡6kg生黄芪9kg 补骨脂6kg细辛1kg制没药4kg当归、川芎、补骨脂、延胡索用7倍量50％的乙醇加热回流，提取2次，每次1.5小时，合并乙醇提取液，药液备用；桂枝、细辛、没药加7倍量水，浸泡1.5小时，水蒸汽蒸馏提取9小时，收集挥发油，水溶液和药渣备用；取挥发油用4倍量的倍他环糊精及80倍量的水进行包结，40℃搅拌1.5小时，冷藏12-18小时，滤过，包结物35℃低温干燥，粉碎成细粉，备用；柴胡、赤芍、蒲黄及黄芪加7倍量水，提取2次，每次0.5小时，再将第二次提取液与上述桂枝等药渣合煎，合并煎液，滤过，滤液与上述水溶液合并，合并液浓缩至50℃时测相对密度1.15，加乙醇使含醇量达80％，冷藏过夜，滤过，滤液与上述当归等药液分别回收乙醇至50℃时测相对密度1.20，干燥，与上述挥发油β环糊精包结物细粉及糊精按重量比1∶0.5混匀，制成颗粒，干燥，制成片剂。
实施例4颗粒剂的制备赤芍313g柴胡208g蒲黄208g黄芪417g当归250g川芎208g补骨脂208g 延胡索313g 桂枝125g细辛62g没药(制)125g共制成颗粒剂1000g，子宫内膜异位患者服用，每次8g，每日3次。
实施例5胶囊剂的制备赤芍7kg当归7kg生蒲黄4kg川芎6kg桂枝2kg延胡索8kg 柴胡4kg生黄芪11kg 补骨脂4kg 细辛2kg制没药2kg共制成胶囊剂5750g，子宫内膜异位患者服用，每次2g，每日3次。
实施例6片剂的制备赤芍8kg当归5kg生蒲黄6kg川芎4kg桂枝4kg延胡索7kg 柴胡6kg生黄芪9kg补骨脂6kg 细辛1kg制没药4kg共制成片剂6200g，子宫内膜异位患者服用，每次2g，每日3次。
实施例7口服剂的制备赤芍8kg当归5kg生蒲黄6kg川芎4kg桂枝4kg延胡索7kg 柴胡6kg生黄芪9kg补骨脂6kg 细辛1kg制没药4kg按上述制备工艺提取，加入辅料，制得口服液，每瓶100ml，共3100瓶，子宫内膜异位患者服用，每次10ml，每日3次。
实施例8滴丸的制备赤芍7kg当归7kg生蒲黄4kg川芎6kg桂枝2kg延胡索8kg 柴胡4kg生黄芪11kg 补骨脂4kg 细辛2kg制没药2kg按上述制备工艺提取，加入辅料，制成滴丸，每粒0.05g。子宫内膜异位患者服用，一次20粒，一日3次。
实施例9药物组合物的质量控制方法中的鉴别方法A.取本药物组合物颗粒剂剂4g，研细，加甲醇20ml，超声处理20分钟，滤过，滤液作为供试品溶液；另取芍药苷对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液12μl、对照品溶液10μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G预制薄层板上，以40∶5∶10∶0.2氯仿—醋酸乙酯—甲醇—甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛的50％磷酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；B.取补骨脂素和异补骨脂素对照品，分别加甲醇制成每1ml含0.3mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述鉴别A项下的供试品溶液12μl、对照品溶液8μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G预制薄层板上，以8∶2正己烷—醋酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％氢氧化钠甲醇溶液，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；C.取本药物组合物颗粒剂剂5g，研细，加入乙醇15ml，超声处理1小时，滤过，滤液作为供试品溶液；另取当归对照药材、川芎对照药材各2g，各加入乙醇10ml，分别超声处理1小时，滤过，滤液作为对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液及对照药材溶液各10μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以9∶1环己烷—醋酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；D.取本药物组合物颗粒剂剂12g，研细，加入氨试液2ml和氯仿30ml，超声处理40分钟，滤过，滤液回收氯仿至干，残渣加入乙醇5ml使溶解，作为供试品溶液；另取延胡索乙素对照品，加甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各12μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G预制薄层板上，以5∶4∶0.4正己烷—醋酸乙酯—氨水为展开剂，展开，取出，晾干，以碘蒸气熏至斑点显色清晰，日光下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；E.取本药物组合物颗粒剂剂24g，研细，置250ml的圆底烧瓶中，加入水50ml，连接挥发油提取器，自测定器上端加水使充满刻度，60～90℃加入石油醚1.5ml，然后连接回流冷凝管；将烧瓶内容物加热至沸，并保持微沸2小时，停止加热，取石油醚层作为供试品溶液；另取细辛对照药材10g提取挥发油，加氯仿30ml使溶解，作为对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液15μl、对照品溶液3μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以95∶5苯—醋酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1％香草醛硫酸溶液，在105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；F.取本药物组合物颗粒剂剂6g，研细，加入硅藻土2g，混匀，加入2％氢氧化钠的甲醇溶液20ml，加热回流提取1小时，滤过，滤液蒸干，加水30ml使溶解，每次用40ml水饱和的正丁醇提取，提取3次，合并正丁醇液，以水洗涤2次，弃去水液，再以1％磷酸二氢钾溶液洗涤1次，弃去水液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液；另取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1ml含0.3mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液12μl、对照品溶液6μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以20∶7∶2氯仿—甲醇—水的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％的硫酸乙醇溶液，在105℃烘烤至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；实施例10药物组合物质量控制方法中的含量测定方法色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；70∶430乙腈—水为流动相；检测波长为230nm；理论塔板数按芍药苷计算应不低于3000；对照品溶液的制备 称取芍药苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，即得；供试品溶液的制备 取本药物组合物颗粒剂剂装量差异项下内容物，研细，取1.2g，置具塞锥形瓶中，称定，加入甲醇20ml，称定重量，超声处理25分钟，取出，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，用0.45um微孔滤膜滤过，取续滤液，即得；测定法 分别吸取上述对照品溶液10μl、供试品溶液15μl，注入液相色谱仪，测定，即得；本品每袋(8g装)含赤芍以芍药苷C23H28O11计，不得少于23.0mg；实施例11药物组合物的质量控制方法A.取本药物组合物颗粒剂剂4g，研细，加甲醇20ml，超声处理20分钟，滤过，滤液作为供试品溶液；另取芍药苷对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液12μl、对照品溶液10μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G预制薄层板上，以40∶5∶10∶0.2氯仿—醋酸乙酯—甲醇—甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛的50％磷酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；B.取补骨脂素和异补骨脂素对照品，分别加甲醇制成每1ml含0.3mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述鉴别A项下的供试品溶液12μl、对照品溶液8μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G预制薄层板上，以8∶2正己烷—醋酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％氢氧化钠甲醇溶液，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；C.取本药物组合物颗粒剂剂5g，研细，加入乙醇15ml，超声处理1小时，滤过，滤液作为供试品溶液；另取当归对照药材、川芎对照药材各2g，各加入乙醇10ml，分别超声处理1小时，滤过，滤液作为对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液及对照药材溶液各10μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以9∶1环己烷—醋酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；
D.取本药物组合物颗粒剂剂12g，研细，加入氨试液2ml和氯仿30ml，超声处理40分钟，滤过，滤液回收氯仿至干，残渣加入乙醇5ml使溶解，作为供试品溶液；另取延胡索乙素对照品，加甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各12μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G预制薄层板上，以5∶4∶0.4正己烷—醋酸乙酯—氨水为展开剂，展开，取出，晾干，以碘蒸气熏至斑点显色清晰，日光下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；E.取本药物组合物颗粒剂剂24g，研细，置250ml的圆底烧瓶中，加入水50ml，连接挥发油提取器，自测定器上端加水使充满刻度，60～90℃加入石油醚1.5ml，然后连接回流冷凝管；将烧瓶内容物加热至沸，并保持微沸2小时，停止加热，取石油醚层作为供试品溶液；另取细辛对照药材10g提取挥发油，加氯仿30ml使溶解，作为对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液15μl、对照品溶液3μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以95∶5苯—醋酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1％香草醛硫酸溶液，在105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；F.取本药物组合物颗粒剂剂6g，研细，加入硅藻土2g，混匀，加入2％氢氧化钠的甲醇溶液20ml，加热回流提取1小时，滤过，滤液蒸干，加水30ml使溶解，每次用40ml水饱和的正丁醇提取，提取3次，合并正丁醇液，以水洗涤2次，弃去水液，再以1％磷酸二氢钾溶液洗涤1次，弃去水液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液；另取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1ml含0.3mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液12μl、对照品溶液6μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以20∶7∶2氯仿—甲醇—水的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％的硫酸乙醇溶液，在105℃烘烤至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；70∶430乙腈—水为流动相；检测波长为230nm；理论塔板数按芍药苷计算应不低于3000；对照品溶液的制备 称取芍药苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，即得；供试品溶液的制备 取本药物组合物颗粒剂剂装量差异项下内容物，研细，取1.2g，置具塞锥形瓶中，称定，加入甲醇20ml，称定重量，超声处理25分钟，取出，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，用0.45um微孔滤膜滤过，取续滤液，即得；测定法 分别吸取上述对照品溶液10μl、供试品溶液15μl，注入液相色谱仪，测定，即得；本品每袋(8g装)含赤芍以芍药苷C23H28O11计，不得少于23.0mg。
权利要求
1.一种治疗子宫内膜异位的药物组合物，其特征在于该药物组合物是由如下原料药按重量份制成赤芍7-8重量份当 归5-7重量份 生蒲黄4-6重量份川芎4-6重量份桂 枝2-4重量份 延胡索7-8重量份柴胡4-6重量份生黄芪9-11重量份补骨脂4-6重量份细辛1-2重量份制没药2-4重量份。
2.如权利要求1所述的药物组合物，其特征在于该药物组合物是由如下原料药按重量份制成赤芍7.5重量份当 归6重量份 生蒲黄5重量份川芎5重量份 桂 枝3重量份 延胡索7.5重量份柴胡5重量份 生黄芪10重量份 补骨脂5重量份细辛1.5重量份制没药3重量份。
3.如权利要求1所述的药物组合物，其特征在于该药物组合物是由如下原料药按重量份制成赤芍7重量份 当 归7重量份 生蒲黄4重量份川芎6重量份 桂 枝2重量份 延胡索8重量份柴胡4重量份 生黄芪11重量份 补骨脂4重量份细辛2重量份 制没药2重量份。
4.如权利要求1所述的药物组合物，其特征在于该药物组合物是由如下原料药按重量份制成赤芍8重量份 当 归5重量份 生蒲黄6重量份川芎4重量份 桂 枝4重量份 延胡索7重量份柴胡6重量份 生黄芪9重量份 补骨脂6重量份细辛1重量份 制没药4重量份。
5.如权利要求1、2、3或4所述的药物组合物，其特征在于该组合物可以制成一种临床上或药学上接受的剂型片剂、丸剂、胶囊剂、颗粒剂、滴丸剂、软胶囊剂、栓剂、混悬剂、口服液或灌肠剂。
6.如权利要求1、2、3或4所述的药物组合物的制备方法，其特征在于该方法包括以下步骤按配比剂量取药物组合物原料药十一味，当归、川芎、补骨脂、延胡索用5-8倍量50-70％的乙醇加热回流，提取2-4次，每次1.5-3小时，合并乙醇提取液，药液备用；桂枝、细辛、没药加3-7倍量水，浸泡0.5-3小时，水蒸汽蒸馏提取2-8小时，收集挥发油，水溶液和药渣备用；取挥发油用4-8倍量的β-环糊精及40-80倍量的水进行包结，30-60℃搅拌0.5-1.5小时，冷藏10-18小时，滤过，包结物30-55℃低温干燥，粉碎成细粉，备用；柴胡、赤芍、蒲黄及黄芪加7-10倍量水，提取2-4次，每次0.5-1.5小时，将末次提取液与上述桂枝等药渣合煎，合并煎液，滤过，滤液与上述水溶液合并，合并液浓缩至50℃时测相对密度1.10-1.15，加乙醇使含醇量达60-80％，冷藏过夜，滤过，滤液与上述当归等药液分别回收乙醇至50℃时测相对密度1.15-1.20，干燥，与上述挥发油β-环糊精包结物细粉及糊精按重量比1∶0.5-1.5混匀，制成颗粒，干燥，制成胶囊剂、片剂或颗粒剂。
7.如权利要求6所述的药物组合物的制备方法，其特征在于该方法包括以下步骤按配比剂量取药物组合物原料药十一味，当归、川芎、补骨脂、延胡索用6倍量60％的乙醇加热回流，提取3次，每次2小时，合并乙醇提取液，药液备用；桂枝、细辛、没药加6倍量水，浸泡2小时，水蒸汽蒸馏提取8小时，收集挥发油，水溶液和药渣备用；取挥发油用6倍量的β-环糊精及60倍量的水进行包结，40℃搅拌1小时，冷藏12小时，滤过，包结物40℃低温干燥，粉碎成细粉，备用；柴胡、赤芍、蒲黄及黄芪加8倍量水，提取3次，每次1小时，再将提取液与上述桂枝等药渣合煎，合并煎液，滤过，滤液与上述水溶液合并，合并液浓缩至50℃时测相对密度1.10-1.15，加乙醇使含醇量达70％，冷藏过夜，滤过，滤液与上述当归等药液分别回收乙醇至50℃时测相对密度1.15-1.20，干燥，与上述挥发油β-环糊精包结物细粉及糊精按重量比1∶1混匀，制成颗粒，干燥，制成胶囊剂、片剂或颗粒剂。
8.如权利要求1、2、3或4所述的药物组合物的质量控制方法，其特征在于该方法中的鉴别方法包括如下鉴别中的一种和/或几种A.取相当日服用剂量1/6倍的药物组合物制剂，研细，加甲醇15-25ml，超声处理10-30分钟，滤过，滤液作为供试品溶液；另取芍药苷对照品，加甲醇制成每1ml含0.3-0.6mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液5-15μl、对照品溶液5-15μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G预制薄层板上，以35-45∶4-6∶8-12∶0.15-0.25的氯仿—醋酸乙酯—甲醇—甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，喷以3-6％香草醛的45-55％磷酸乙醇溶液，在100-110℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；B.取补骨脂素和异补骨脂素对照品，分别加甲醇制成每1ml含0.2-0.4mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述鉴别A项下的供试品溶液5-15μl、对照品溶液4-10μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G预制薄层板上，以7-9∶1.5-2.5正己烷—醋酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5-15％氢氧化钠甲醇溶液，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；C.取相当日服用剂量5/24倍的药物组合物制剂，研细，加入乙醇10-20ml，超声处理0.5-1.5小时，滤过，滤液作为供试品溶液；另取当归对照药材、川芎对照药材各1.5-2.5g，各加入乙醇8-12ml，分别超声处理0.5-1.5小时，滤过，滤液作为对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液及对照药材溶液各5-15μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以8-10∶0.8-1.2环己烷—醋酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；D.取相当日服用剂量1/2倍的药物组合物制剂，研细，加入氨试液1.5-2.5ml和氯仿25-35ml，超声处理30-50分钟，滤过，滤液回收氯仿至干，残渣加入乙醇4-6ml使溶解，作为供试品溶液；另取延胡索乙素对照品，加甲醇制成每1ml含0.15-0.25mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10-15μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G预制薄层板上，以4-6∶3-5∶0.3-0.5正己烷—醋酸乙酯—氨水为展开剂，展开，取出，晾干，以碘蒸气熏至斑点显色清晰，日光下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；E.取相当日服用剂量1倍的药物组合物制剂，研细，置200-300ml的圆底烧瓶中，加入水40-60ml，连接挥发油提取器，自测定器上端加水使充满刻度，60～90℃加入石油醚1.0-2.0ml，然后连接回流冷凝管；将烧瓶内容物加热至沸，并保持1.5-2.5小时，停止加热，取石油醚层作为供试品溶液；另取细辛对照药材8-12g提取挥发油，加氯仿25-35ml使溶解，作为对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液10-20μl、对照品溶液2-5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以92-98∶4-6苯—醋酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，喷以0.8-0.12％香草醛硫酸溶液，在100-110℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；F.取相当日服用剂量1/4倍的药物组合物制剂，研细，加入硅藻土1.5-2.5g，混匀，加入2％氢氧化钠的甲醇溶液15-25ml，加热回流提取0.5-1.5小时，滤过，滤液蒸干，加水25-35ml使溶解，每次用35-45ml水饱和的正丁醇提取，提取2-4次，合并正丁醇液，以水洗涤1-3次，弃去水液，再以0.8-1.2％磷酸二氢钾溶液洗涤1-2次，弃去水液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇1.5-2.5ml使溶解，作为供试品溶液；另取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1ml含0.2-0.4mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液10-15μl、对照品溶液5-7μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以18-22∶6-8∶1.5-2.5氯仿—甲醇—水的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％的硫酸乙醇溶液，在100-110℃烘烤至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
9.如权利要求8所述的药物组合物的质量控制方法，其特征在于该方法中的鉴别方法包括如下鉴别中的一种和/或几种A.取药物组合物制剂日服用剂量1/6倍，研细，加甲醇20ml，超声处理20分钟，滤过，滤液作为供试品溶液；另取芍药苷对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液12μl、对照品溶液10μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G预制薄层板上，以40∶5∶10∶0.2氯仿—醋酸乙酯—甲醇—甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛的50％磷酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；B.取补骨脂素和异补骨脂素对照品，分别加甲醇制成每1ml含0.3mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述鉴别A项下的供试品溶液12μl、对照品溶液8μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G预制薄层板上，以8∶2正己烷—醋酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％氢氧化钠甲醇溶液，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；C.取药物组合物制剂日服用剂量5/24倍，研细，加入乙醇15ml，超声处理1小时，滤过，滤液作为供试品溶液；另取当归对照药材、川芎对照药材各2g，各加入乙醇10ml，分别超声处理1小时，滤过，滤液作为对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液及对照药材溶液各10μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以9∶1环己烷—醋酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；D.取药物组合物制剂日服用剂量1/2倍，研细，加入氨试液2ml和氯仿30ml，超声处理40分钟，滤过，滤液回收氯仿至干，残渣加入乙醇5ml使溶解，作为供试品溶液；另取延胡索乙素对照品，加甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各12μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G预制薄层板上，以5∶4∶0.4正己烷—醋酸乙酯—氨水为展开剂，展开，取出，晾干，以碘蒸气熏至斑点显色清晰，日光下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；E.取药物组合物制剂相当于日服用剂量，研细，置250ml的圆底烧瓶中，加入水50ml，连接挥发油提取器，自测定器上端加水使充满刻度，60～90℃加入石油醚1.5ml，然后连接回流冷凝管；将烧瓶内容物加热至沸，并保持微沸2小时，停止加热，取石油醚层作为供试品溶液；另取细辛对照药材10g提取挥发油，加氯仿30ml使溶解，作为对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液15μl、对照品溶液3μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以95∶5苯—醋酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1％香草醛硫酸溶液，在105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；F.取药物组合物制剂日服用剂量1/4倍，研细，加入硅藻土2g，混匀，加入2％氢氧化钠的甲醇溶液20ml，加热回流提取1小时，滤过，滤液蒸干，加水30ml使溶解，每次用40ml水饱和的正丁醇提取，提取3次，合并正丁醇液，以水洗涤2次，弃去水液，再以1％磷酸二氢钾溶液洗涤1次，弃去水液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液；另取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1ml含0.3mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液12μl、对照品溶液6μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以20∶7∶2氯仿—甲醇—水的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％的硫酸乙醇溶液，在105℃烘烤至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
10.如权利要求1、2、3或4所述的药物组合物的质量控制方法，其特征在于该方法中的含量测定包括如下测定方法色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；65-75∶425-435乙腈—水为流动相；检测波长为220-240nm；理论塔板数按芍药苷计算应不低于3000；对照品溶液的制备 称取芍药苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.2-1.0mg的溶液，即得；供试品溶液的制备 取本药物组合物制剂装量差异项下内容物，研细，取1.0-1.5g，置具塞锥形瓶中，称定，加入甲醇15-25ml，称定重量，超声处理20-30分钟，取出，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，用0.40-0.50um微孔滤膜滤过，取续滤液，即得；测定法 分别吸取上述对照品溶液5-15μl、供试品溶液14-20μl，注入液相色谱仪，测定，即得；本药物组合物按日服用剂量含赤芍以芍药苷C23H28O11计，不得少于69.0mg。
11.如利要求10所述的药物组合物的质量控制方法，其特征在于该方法中的含量测定为包括如下测定方法色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；70∶430乙腈—水为流动相；检测波长为230nm；理论塔板数按芍药苷计算应不低于3000；对照品溶液的制备 称取芍药苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，即得；供试品溶液的制备 取药物组合物制剂装量差异项下内容物，研细，取1.2g，置具塞锥形瓶中，称定，加入甲醇20ml，称定重量，超声处理25分钟，取出，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，用0.45um微孔滤膜滤过，取续滤液，即得；测定法 分别吸取上述对照品溶液10μl、供试品溶液15μl，注入液相色谱仪，测定，即得；药物组合物按日服用剂量含赤芍以芍药苷C23H28O11计，不得少于69.0mg。
12.如权利要求1、2、3或4所述的药物组合物在制备治疗子宫内膜异位的药物中的应用。
13.如权利要求12所述的药物组合物的应用，其特征在于所述的治疗子宫内膜异位是指降低卵泡刺激素FSH、黄体生成素LH、催乳素PRL或雌二醇E2的含量、缩小异位内膜体积、减轻异位内膜重量、减轻子宫内膜异位病变程度、改善动物血液流变学的趋势、降低子宫活动幅度及抑制子宫活动力、改善肠系膜微循环的作用、对局部血液循环障碍的保护作用、抗炎作用、镇痛作用或增强免疫功能作用。
全文摘要
本发明公开了一种治疗子宫内膜异位的药物组合物、其制备方法和质量控制方法。该药物组合物由赤芍、当归、生蒲黄、川芎、桂枝、延胡索、柴胡、生黄芪、补骨脂、细辛和制没药制成；本药物组合物用于治疗子宫内膜异位疗效确切，作用快且无毒副作用。
文档编号A61P15/00GK1943680SQ20051010801
公开日2007年4月11日 申请日期2005年10月9日 优先权日2005年10月9日
发明者任明非, 杨世林, 万方, 王卫华 申请人:成都华神集团股份有限公司