专利名称：口服复方骨肽药物组合物及其制备方法
技术领域：
本发明涉及一种药物组合物，具体涉及一种口服的复方骨肽药物组合物以及这种药物组合物的制备方法。
背景技术：
复方骨肽提取物是指以3份质量的健康猪或胎牛四肢骨与1份质量比例的全蝎为原料，提取得到的粘稠膏状产物，是用于制备复方骨肽注射液的半成品，复方骨肽注射液为其提取物制成的灭菌水溶液，每1ml中含多肽类物质不低于15mg，含总氮量不低于4mg(国家药品西药标准WS1-XG-007-2002)。复方骨肽富含多种骨生长因子，主要成分多肽、氨基酸、有机钙、磷、无机钙、无机盐、微量元素等，各成分有较强的相互协调作用，能够促进骨愈合，调节骨代谢，平衡骨生长，具有较强的抗炎镇痛作用，且无胃肠反应及成瘾性，可安全有效地缓解骨质疏松患者的痛苦。临床上用于治疗风湿、类风湿性关节炎、骨质增生、骨折等疾病。多肽类药物相对分子质量较大，分子易聚集，脂溶性差，不易透过生物膜，通常只能注射给药。目前复方骨肽的产品为复方骨肽注射液，但注射给药，尤其是需要长期或频繁给药的药物，对患者造成不便。因此，多肽类药物非注射剂型的研制具有重要意义和实用价值，也是目前研究的难点。
多肽类药物的化学及生物稳定性差，难以透膜吸收，血浆清除快，免疫源性等，一般认为这些因素是导致多肽类药物口服吸收困难的主要原因。目前含有骨肽成分的产品主要有复方骨肽注射液、骨肽(单方)注射液和骨肽片(单方)，复方骨肽目前没有口服制剂，也没有关于复方骨肽提取物非注射用途的报道。目前技术条件下，要达到与非口服给药相同的效果，口服多肽类药物常需要提供比注射用更大的剂量，如单方骨肽注射剂型(5mg/ml)的日剂量为10mg(国家药品西药标准，标准编号WS1-XG-035-2000)，但是其口服剂型(40mg/片)的日剂量为120～240mg(国家药品西药标准，标准编号WS1-XG-008-2002)，两种剂型日剂量相差12～24倍。两种骨肽剂型给药剂量的差别反映了骨肽产品口服与非口服效率的区别。提高口服用药效率具有重要意义。
目前发展应用较快的环糊精包合技术在多肽类药物中已经有了研究报道，多肽药物分子的多种氨基酸侧链(或基团)可以与环糊精产生(包合)作用而形成复杂的包合物，这种多肽/环糊精的相互作用(包合)形成的包合物能够防止多肽分子的自身聚集及阻止酶-底物(多肽)复合物的形成，环糊精的作用可增强多肽的生物和化学稳定性、增加膜表面多肽药物浓度、或提高多肽类药物的膜通透性，从而达到改善多肽药物吸收提高生物利用度的目的。但是，目前采用环糊精包合技术进行骨肽产品的研究还未见报道。
发明内容
本发明的目的是提供一种较高口服效率的复方骨肽产品。
本发明的技术方案是采用环糊精包合复方骨肽提取物，制备稳定性强、药剂学性能良好的固体包合物，采用常用药剂学方法以包合物制备口服有效的复方骨肽制剂产品。
具体技术方案口服复方骨肽药物组合物，其组成为，
复方骨肽提取物质量比1份环糊精质量比3～11份。
以上方案中所述的复方骨肽提取物是指所述的复方骨肽提取物是指以3份质量的健康猪或胎牛四肢骨与1份质量比例的全蝎为原料，提取得到的粘稠膏状产物。
所述的环糊精可以是β-环糊精或羟丙基-β-环糊精或磺丁基-β-环糊精。
以上所述的口服复方骨肽药物组合物的优化方案是复方骨肽提取物与环糊精的质量比为1∶4～7。
上述组合物的进一步限定，所述的口服复方骨肽药物组合物是按以下方法制备得到的组合物将β-环糊精，或羟丙基-β-环糊精或磺丁基-β-环糊精与1/3～1/11质量比的复方骨肽提取物加1～6倍质量的水充分搅拌数小时，在低于60℃温度下减压干燥得浅黄色固体包合物。
固体包合物配伍常用药用辅料制备成可口服的剂型如片剂、胶囊、颗粒剂、缓释片或分散片等制剂。上述固体包合物制成固体制剂，需要添加的辅料可以从以下物质中选用β-环糊精、微晶纤维素、淀粉、柠檬酸、滑石粉、羧甲淀粉钠、硬脂酸、预胶化淀粉、乳糖、甘露醇、交联聚维酮、滑石粉、PEG4000(聚乙二醇4000)、低取代羟丙纤维素、微粉硅胶、羧甲淀粉钠、PEG6000(聚乙二醇6000)。
辅料的用量按现有的技术规范。
本发明中固体包合物的制备是技术关键。
本发明的口服复方骨肽药物组合物的制备方法如下
将环糊精与1～6倍质量的纯水混合，制成混悬液或溶液，加入1/3～1/11质量比的复方骨肽提取物，充分混合，搅拌1～10小时，体系均匀呈糊状物后于45℃-60℃下减压干燥即得固体包合物。
本发明包合物制备优选以下方案将β-环糊精或羟丙基-β-环糊精或磺丁基-β-环糊精与1～5倍质量的纯水混合，使成混悬液或溶液；加入1/4～1/7质量比的复方骨肽提取物，充分混合、搅拌5～6小时，于50℃下减压干燥得固体包合物。
由本发明的包合组合物制备的口服制剂，以2～3倍于复方骨肽注射液质量比给药即可达到注射给药相同或相近的活性。而复方骨肽提取物制备的普通口服制剂(不采用包合技术)则需要多于3倍以上的剂量才具有注射给药相同或相近的活性。
以下说明本发明技术特点。
包合可行性复方骨肽提取物为猪骨或牛骨的乙醇提取物与蝎子全虫的乙醇提取物以一定比例混合的产物，为深黄色粘稠油膏状物，溶于乙醇，在水中有一定溶解度。水溶滤中，复方骨肽提取物在232nm～272nm区间有较弱的紫外吸收，加入自身无紫外吸收的环糊精后，复方骨肽提取物紫外吸收随环糊精浓度的增大呈现规律性增强(见图1)。复方骨肽提取物含有多种成分，根据文献(中国中药杂志，2004，29(8)12-15)的方法，通过环糊精浓度与复方骨肽提取物紫外吸收强度变化的定量关系可以测定提取物多组分混合的表观包合常数，实验测定β-环糊精、羟丙基-β-环糊精、磺丁基-β-环糊精与复方骨肽的表观包合常数(257nm)结果见表1。
表1不同环糊精与复方骨肽的包合常数(Ka)
较大的表观包合常数表明，β-环糊精、羟丙基-β-环糊精、磺丁基-β-环糊精与复方骨肽存在强的包合作用，能够形成稳定的包合物，这对提高多肽稳定性、改善提取物药剂学性质十分有利。
差示热分析试验验证包合物采用β-环糊精与复方骨肽包合物(复方骨肽提取物环糊精质量比1∶5)固体样品对照，差示热分析试验结果见附图2，β-环糊精图中75℃～80℃为β-环糊精典型的脱水吸热峰(脱包合水)，220℃～230℃有一特征相变(吸热)，固体β-环糊精280℃开始相变吸热，315℃后快速放热分解。包合物图中45℃～100℃吸热峰变宽而强度明显减弱，表明样品含微量包合水及脱除少量低分子组分，220℃～230℃的β-环糊精特征相变吸热峰消失，280℃开始相变放热至305℃～315℃变化为相变吸热，其差示热分析曲线显著区别于β-环糊精，样品为不同于β-环糊精的新物相(包合物)。
样品稳定性试验将复方骨肽包合物与人工胃液(1000ml)配制成含提取物1mg/ml的溶液，37℃恒温搅拌，分别于1、2、4、6及8小时取溶液20μL高效液相色谱仪进样，以紫外240nm波长检测；1ml/min流速；含苄基三甲基氯化铵(5mmol/L)的pH4.5醋酸-醋酸钠缓冲溶液(0.015mol/L)为流动相，得样品高效液相指纹色谱图。自身对照试验结果，样品各特征峰无变化(组分无明显降解、分解)，各特征峰高及峰面积基本不变(含量稳定)，显示包合物在人工胃液中具足够稳定性。固体包合物加速试验及长期留样观察，也未见变化。
口服药效试验将复方骨肽包合物与非包合的提取物分别制备成复方骨肽包合片(简称包合片)及复方骨肽普通片(简称普通片)两种口服剂型，与市售单方骨肽片剂(口服给药)及复方骨肽注射剂(注射给药)对照，进行小鼠扭体法镇痛试验、大鼠足跖角叉菜胶(Carraeenin)致肿法和小鼠耳二甲苯致炎法抗炎试验。试验结果表明口服复方骨肽具有明显的镇痛、抗炎作用，总体效果优于骨肽片。包合片比同剂量复方骨肽注射液(注射给药)作用弱，但包合片药效明显优于无环糊精的普通片剂。显示环糊精包合的复方骨肽口服制剂具有更高的口服效率。药效试验方法结果如下1、小鼠扭体试验受试药物包合片、普通片、骨肽片(口服阳性对照药)、复方骨肽注射液(注射阳性对照药)受试动物昆明种小鼠，雌雄各半，体重20±2g，第二军医大学实验动物中心提供，许可证号SCXK(沪)2002-0006，体重18～22g。雌雄兼用。
饲养条件实验动物使用许可证号为SY-XK-苏2003-0012。受试动物为养(笼具容积为32×21.5×17cm)，每笼饲养同性别动物5□只。基础饲料为实验鼠全价颗粒饲料，由江苏省江浦实验动物饲料厂提供。自由饮水。笼底垫料为刨花木屑，经烘干消毒，每周更换2次。实验室温度18～25℃，湿度50～70％。具有排气通风设备。
实验组别与剂量设置动物随机分组，每组10只。试验分空白对照组、试验组、阳性药对照组。试验组剂量分别为25、50及100mg/kg，阳性对照组骨肽片为50mg/kg，空白对照组以蒸馏水等容积灌胃。造模前每天给药一次，共7天。
给药方法各组给药方式均为单次灌胃给药(复方骨肽注射液为注射给药)。给药时间为醋酸腹腔注射前10分钟。各剂量组等体积(0.1ml/10g)给药。
观察指标观察不同时相小鼠扭体次数。
操作步骤每只小鼠腹腔注射0.6％醋酸0.2ml，于给药后不同时段(20及40分钟)分别计数小鼠的扭体次数。
数据处理
Ec对照组不同时相的扭体次数；Et各实验组不同时相的扭体次数统计方法数据以X±SD表示，扭体次数以Mann-Whitney检验。
结果醋酸致小鼠扭体试验结果表明(表2)，表2样品对醋酸致小鼠扭体反应的影响
n＝10，X±SD，*p＜0.05**p＜0.01与对照组，扭体次数Mann-Whitney包合片能明显抑制醋酸致小鼠扭体反应，减少扭体次数。包合片的作用明显优于骨肽片对照组。但比注射给药方式对照组复方骨肽注射液作用弱。环糊精包合片药效优于普通片剂。
2.角叉菜胶致大鼠足跖肿胀试验试验材料动物SD大鼠，雄性，体重163±18g，第二军医大学实验动物中心提供，许可证号SCXK(沪)2002-0006，体重18～22g。雌雄兼用。饲养条件实验动物使用许可证号为SY-XK-苏2003-0012。受试动物为养(笼具容积为32×21.5×17cm)，每笼饲养同性别动物5□只。基础饲料为实验鼠全价颗粒饲料。自由饮水。笼底垫料为刨花木屑，经烘干消毒，每周更换2次。实验室温度18～25□，湿度50～70％。具有排气通风设备。
试剂及配制方法角叉菜胶(Carrageenin，Sigma)1％角叉菜胶生理盐水混悬液定量称取角叉菜胶，于碾钵内与注射用生理盐水碾混均匀，实验当天现行配制。
仪器容积测量仪(按徐叔云、卞如濂、陈修主编《药理学实验方法学》p716定做)。
实验组别与剂量设置动物随机分组，每组8只，试验分空白对照组、试验组、阳性药对照组。试验组剂量分别为12.5、25及50mg/kg，阳性对照组骨肽片分别为25mg/kg，空白对照组为等体积蒸馏水灌胃。造模前每天给药一次，共7天。
给药方法各组给药方式均为单次灌胃给药(复方骨肽注射液为注射给药)。给药时间为角叉菜胶致炎前10分钟。各剂量组间等体积(1ml/100g体重)。
观察指标与观察时相动物于不同时相测右足容积。分别于致炎前及致炎后1、2、4及6小时测容积。
操作步骤按文献毛细管放大法测定。在大鼠右后肢踝关节周围用记号笔划线，测定右后足跖容积，给药后10分钟用7号针头在足跖皮下注入1％角叉菜胶生理盐水混悬液0.05ml，测定致炎后不同时相足跖体积变化。
数据处理 式中Ltn致炎后不同时相的足跖容积；Lt0致炎前的足跖容积； 式中Ec对照组足跖不同时相肿胀率；Et各实验组足跖不同时相肿胀率；资料以X±SD表示，行组间Student-t检验。
结果包合片对大鼠足跖肿胀具有明显的抑制作用，药效具剂量依从性，起效时间最快1小时，持续时间至少6小时。包合片与骨肽片等剂量及同时相肿胀度相比，有统计学差异，提示包合片药效明显优于骨肽片。但比复方骨肽注射液(注射给药)作用弱。环糊精包合片药效优于普通片。
表3.样品对致大鼠的影响
n＝8，X±SD，*p＜0.05，**p＜0.01与对照组Student-t3.小鼠二甲苯致耳廓肿胀试验动物昆明种小鼠，雌雄各半，体重20±2g，第二军医大学实验动物中心提供，许可证号SCXK(沪)2002-0006，体重18～22g。雌雄兼用。饲养条件实验动物使用许可证号为SY-XK-苏2003-0012。受试动物为养(笼具容积为32×21.5×17cm)，每笼饲养同性别动物5□只。基础饲料为实验鼠全价颗粒饲料。自由饮水。笼底垫料为刨花木屑，经烘干消毒，每周更换2次。实验室温度18～25□，湿度50～70％。具有排气通风设备。
试剂及配制方法二甲苯(AR，南京化学试剂厂)。
仪器打孔器(8mm)；电子天平。
实验组别与剂量设置动物随机分组，每组10只，实验分空白对照组、试验组及阳性药对照组。空白对照组给等体积蒸馏水，试验组剂量分别为25、50及100mg/kg，阳性对照组骨肽片为50mg/kg。
给药方法各组给药方式均为单次灌胃给药(复方骨肽注射液为注射给药)。给药时间为二甲苯致炎前10分钟。各剂量组间等体积(0.1ml/10g体重)给药。造模前每天给药一次，共7天。
观察指标左右耳廓片的重量。其差值为增值。
观察时相于二甲苯致炎后2小时测上述指标。
操作步骤各剂量组灌胃给药后10分钟于小鼠右耳前面滴100％二甲苯0.02ml/只，以左耳为对照。致炎2小时后脱颈椎处死小鼠后剪下左右两耳，用8mm打孔器于两耳相同部位取园形耳片，用电子天平称重，以左右两耳重量之差为肿胀度，计算抑制率。
数据处理 式中Ec对照组不同时相测定值；Et各实验组不同时相测定值；统计方法计量资料以X±SD表示，行组间Student-t检验。
结果小鼠二甲苯致耳廓肿胀试验结果表明，包合片25、50及100mg/kg剂量时，以左右耳片增重值计算抑制率，分别为35.7％、54.3％及60％，骨肽片100mg/kg剂量的抑制率58.6％；以耳廓增重率计算抑制率，包合片的抑制率分别为26.7％、44.7％及52.3％，骨肽片等剂量抑制率为50.5％。包合片与骨肽片等剂量相比无显著性差异，比复方骨肽注射液作用弱，但环糊精包合片药效优于普通片。
表4.样品对致小鼠的影响
n＝10，X±SD，*p＜0.05，**p＜0.01与对组比，Student-t检验。
3、本发明的优点(1)复方骨肽提取物口服有效，提取物与环糊精形成包合物口服效果更好，本发明为患者提供了复方骨肽更加安全、方便的给药途径和方法。
(2)环糊精包合复方骨肽提取物后，包合状态的固态液态样品性质稳定，适宜用于各种口服剂型。
(3)本发明的包合物在纯水条件下制备，不使用任何有机溶剂，无有机溶剂残留，有利于提高用药安全性。
(4)本发明的环糊精包合物性质稳定、固体包合物与其他药用辅料相容性好，易于配伍制剂加工，便于制剂的制备，实用性强。
(5)制备方法简单、操作简便、成本低且无环境污染。包合物易储存易运输、无毒害。
图1为水溶液中增大环糊精浓度复方骨肽提取物紫外吸收的变化；图2为β-环糊精与复方骨肽包合物差示热分析(DTA)图对比。
具体实施例方式实施例1，口服复方骨肽药物组合物将1100克β-环糊精与6600毫升纯水混合使成混悬液，搅拌下加入100克膏状复方骨肽提取物，混合充分后再搅拌小时，体系均匀呈糊状物，于60℃下减压干燥即得1117克浅黄色固体包合物。
所得固体包合物过100目筛备用，混合微晶纤维素100克、淀粉150克、羧甲淀粉钠200克、滑石粉20克、硬脂酸26克充分混匀后取2/3量药用辅料与固体包合物混合，充分混匀后用70％乙醇润湿制软材，过14目筛制粒，50℃干燥、整粒后加入另外1/3量药用辅料，充分混匀后测定复方骨肽提取物含量，按照剂量要求压片制得复方骨肽包合片产品。
实施例2将900克β-环糊精与2500毫升纯水混合使成混悬液，搅拌下加入300克膏状复方骨肽提取物，混合充分后再搅拌小时，体系均匀呈糊状物，于60℃下减压干燥得1136克浅黄色固体包合物。
所得固体包合物过100目筛备用，混合微晶纤维素100克、淀粉100克、羧甲淀粉钠250克、滑石粉20克、硬脂酸26克充分混匀后取2/3量药用辅料与固体包合物混合，充分混匀后用70％乙醇润湿制软材，过14目筛制粒，50℃干燥、整粒后加入另外1/3量药用辅料，充分混匀后测定含量，压片制得复方骨肽包合片。
实施例3将960克β-环糊精与2000毫升纯水混合使成混悬液，搅拌下加入240克膏状复方骨肽提取物，混合充分后再搅拌小时，体系均匀呈糊状物，于60℃下减压干燥得1126克浅黄色固体包合物。
所得固体包合物过100目筛备用，混合微晶纤维素100克、淀粉100克、羧甲淀粉钠250克、滑石粉20克、硬脂酸26克充分混匀后取2/3量药用辅料与固体包合物混合，充分混匀后用70％乙醇润湿制软材，过14目筛制粒，50℃干燥、整粒后加入另外1/3量药用辅料，充分混匀后测定含量，压片制得复方骨肽包合片。
实施例4将1000克β-环糊精与2000毫升纯水混合使成混悬液，搅拌下加入200克膏状复方骨肽提取物，混合充分后再搅拌小时，体系均匀呈糊状物，于60℃下减压干燥得1121克浅黄色固体包合物。
所得固体包合物过100目筛备用，混合微晶纤维素100克、淀粉100克、羧甲淀粉钠250克、滑石粉20克、硬脂酸26克充分混匀后取2/3量药用辅料与固体包合物混合，充分混匀后用70％乙醇润湿制软材，过14目筛制粒，50℃干燥、整粒后加入另外1/3量药用辅料，充分混匀后测定含量，压片制得复方骨肽包合片。
实施例5与实施例1基本相同，但是用羟丙基-β-环糊精与1100毫升纯水混合；加入157克膏状复方骨肽提取物。
制粒、压片后包衣制得复方骨肽环糊精包合包衣片。
实施例6与实施例3基本相同，但是用羟丙基-β-环糊精与1000毫升纯水混合。制粒、压片后包衣制得环糊精包合复方骨肽包衣片。
实施例7与实施例4基本相同，但是用羟丙基-β-环糊精与1000毫升纯水混合。制粒、压片后包衣制得环糊精包合复方骨肽包衣片。
实施例8与实施例1基本相同，但是用磺丁基-β-环糊精与1100毫升纯水混合。制粒、压片后包衣制得复方骨肽环糊精包合包衣片。
实施例9与实施例3基本相同，但是用磺丁基-β-环糊精与1000毫升纯水混合。制粒、压片后包衣制得复方骨肽环糊精包合包衣片。
实施例10与实施例4基本相同，但是用磺丁基-β-环糊精与1000毫升纯水混合。制粒、压片后包衣制得复方骨肽环糊精包合包衣片。
权利要求
1.一种口服复方骨肽药物组合物，其组成为，复方骨肽提取物质量比1份环糊精质量比3～11份。
2.按照权利要求1所述的口服复方骨肽药物组合物，其特征在于，所述的复方骨肽提取物是指以3份质量的健康猪或胎牛四肢骨与1份质量比例的全蝎为原料，提取得到的粘稠膏状产物。所述的环糊精选自β-环糊精或羟丙基-β-环糊精或磺丁基-β-环糊精；所述的复方骨肽提取物与环糊精的质量比为1∶4～7。
3.按照权利要求1或2所述的口服复方骨肽药物组合物，其特征在于，所述的口服复方骨肽药物组合物是按以下方法制备得到的组合物将β-环糊精，或羟丙基-β-环糊精或磺丁基-β-环糊精与1/3～1/11质量比的复方骨肽提取物加1～6倍质量的水充分搅拌数小时，在低于60℃温度下减压干燥得浅黄色固体包合物。
4.一种权利要求1所述的口服复方骨肽药物组合物的制备方法，步骤如下将环糊精与1～6倍质量的纯水混合，制成混悬液或溶液，加入1/3～1/11质量比的复方骨肽提取物，充分混合，搅拌1～10小时，体系均匀呈糊状物后于45℃～60℃下减压干燥即得固体包合物。
5.按照权利要求4所述的口服复方骨肽药物组合物的制备方法，其特征在于，具体步骤是将β-环糊精或羟丙基-β-环糊精或磺丁基-β-环糊精与1～5倍质量的纯水混合，使成混悬液或溶液；加入1/4～1/7质量比的复方骨肽提取物，充分混合、搅拌5～6小时，于50℃下减压干燥得固体包合物。
全文摘要
口服复方骨肽药物组合物，质量比组成为复方骨肽提取物1份；环糊精3～11份。复方骨肽提取物是以3份质量的健康猪或胎牛四肢骨与1份质量比例的全蝎为原料提取得到的粘稠膏状产物。环糊精选自β－环糊精或羟丙基－β－环糊精或磺丁基－β－环糊精；复方骨肽提取物与环糊精的优化的质量比为1∶4～7。其制备方法将环糊精与纯水混合制成混悬液或溶液，加入1/3～1/11质量比的复方骨肽提取物，搅拌1～10小时，体系均匀呈糊状物后于45℃～60℃下减压干燥即得固体包合物。本发明提供了复方骨肽更加安全、方便的给药途径和方法，实用性强。制备方法简单、操作简便、成本低且无环境污染。包合物易储存易运输、无毒害。
文档编号A61K35/36GK1903358SQ200610041199
公开日2007年1月31日 申请日期2006年8月11日 优先权日2006年8月11日
发明者任勇, 余书勤, 王晓洁, 朱冠臣 申请人:南京师范大学, 南京健利达科技开发有限公司