专利名称：党参黄芪组合物在治疗神经系统疾病中的应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及党参黄芪组合物在制备用于治疗神经系统疾病的药物中的应用，更具体地，涉及党参黄芪组合物在制备用于治疗帕金森氏病的药物中的应用。
背景技术：
目前，以震颤、僵直、运动迟缓和步态失调伴姿势不稳为主要症状的神经系统慢性进行性疾病严重威胁着人类健康。这类患者除了有肢体的不自主震颤、僵直和运动迟缓外，还伴随有植物神经功能紊乱等一些复杂症状，其中，帕金森氏病(Parkinson’s disease，PD)是这类疾病的典型代表。
帕金森类神经性疾病是我国高发病率的致死致残性疾病，其神经细胞死亡导致的神经功能缺陷，至今尚无有效的治疗。帕金森氏病的临床表现包括以下几个方面。
1.静止性震颤。约75％的病人首先出现该症状。震颤是由于肢体的协同肌与拈抗肌发生连续的节律性收缩和松弛所致。帕金森氏病典型的震颤为静止性震颤，即病人在安静状态或全身肌肉放松时出现，甚至表现得更为明显。
2.肌僵直。肌僵直是指锥体外系病变而导致的协同肌和拮抗肌的肌张力同时增高。病人感觉关节僵硬以及肌肉发紧。检查时因震颤的存在与否可出现不同的结果。当关节作被动运动时，检查者感到有均匀的阻力，类似弯曲软铅管时的感觉，故称为“铅管样强直”；面肌僵直可出现与运动减少一样的“面具脸”。
3.行动迟缓。行动迟缓是由于肌肉的僵直和姿势反射障碍引起得一系列的运动障碍，主要包括动作缓慢和动作不能，前者指不正常的运动缓慢，后者指运动的缺乏、及随意运动的启动障碍。这是帕金森氏病最具致残性的症状之一。
4.植物神经功能障碍。出现肠梗阻。食道、胃及小肠的运动障碍可引起吞咽困难、食道痉挛以及胃一食道倒流等，吞钡检查可见异常的食道收缩波。
5.情绪与智力改变。帕金森氏病患者还可以出现精神方面的症状，表现为抑郁和/或痴呆的症状。部分病人表情淡漠，情绪低落，反应迟钝，自制力差，无自信心，悲观厌世；有的则表现情绪焦虑、多疑猜忌、固执、恐惧、恼怒等。
约14％～18％的帕金森氏病患者逐渐发生痴呆，表现为注意力不集中，记忆减退，运用学会的知识的能力降低，行动的愿望减少，思维迟钝，视觉空间觉障碍，智力下降等。
自二十世纪60年代后期，左旋多巴引入帕金森类神经性疾病的治疗，使此类病患者的生活质量得到显著改善，延长了患者寿命，降低了病死率。迄今为止，左旋多巴特别是复方左旋多巴，仍是治疗帕金森氏病的“金标准”。但在左旋多巴使用的过程中，用药2～5年后出现了疗效减退以及远期的不良反应，如运动波动，包括剂末现象、开关现象和冻结现象；异动症，包括双相异动症和肌张力障碍等。
Guilford制药公司近日宣布，一项II期临床试验已经开始，用以评估使用神经亲免素配体治疗帕金森氏病的疗效和安全性。
Guilford的合作者AMGEN公司，已开始着手于口服活性药物的试验。该药物已显示能够通过血脑屏障，被认为对于多种多样的神经变性疾病是一种可能的治疗方法。
如今干细胞移植治疗已成为神经系统难治性疾病的一个新的途径，而骨髓间质干细胞具有多分化潜能和可塑性等优点，在特定的条件下，可分化为骨、软骨、脂肪、肌肉和神经细胞等。本发明的申请人于2003年4月29日提交的中国专利申请CN03123045.8中公开了一种含有党参和黄芪的药物组合物及其制备方法。虽然之前的研究表明党参黄芪组合物可以用于制备治疗多种病症的药物，但没有任何专利文献或其它出版物提出或暗示该药物组合物可用于治疗神经系统疾病。本申请人通过研究发现，该药物组合物可以用于制备治疗神经系统疾病的药物，特别是用于制备治疗帕金森氏病的药物。
发明内容
本发明的目的是提供一种党参黄芪组合物，用于制备治疗神经系统疾病的药物，特别是用于制备治疗帕金森氏病的药物。
本发明的党参黄芪组合物中，主要含有党参和黄芪作为活性成分，其中党参和黄芪的重量比为1∶0.5到0.5∶1。该组合物还可以含有补气、补血类中药，包括当归、熟地、何首乌、白术、山药或其结合。
本发明所述的活性成分党参Codonopsis Pilosula(Franch.)Nannf为桔梗科植物的干燥根；黄芪是膜荚黄芪Astragalus membranaceus(Fisch.)Bge.或蒙古黄芪Astragalus membranaceus(Fisch.)Bge.Var.mongholicus(Bge.)Hsiao的干燥根。
在应用时，本发明的药物可以根据需要加入一种或多种药学上可以接受的载体，如稀释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、吸附载体、润滑剂等。
本发明的党参黄芪组合物优选以注射剂、片剂、丸剂、胶囊剂、颗粒剂、溶液、悬浮剂、或乳剂的形式使用，更优选为注射剂。上述剂型均可按照药学领域的常规方法制备。
本发明的党参黄芪组合物的给药途径包括口服、经皮、静脉或肌肉注射。
本发明的党参黄芪组合物的制备方法在本申请人于2003年4月29日提交的中国专利申请CN03123045.8号和2005年4月13日提交的专利申请第200510064551.5号中有详细的说明，其全部内容在此引入以供参考。
在本申请人以前的研究中，已经开发了党参黄芪组合物作为药物的多种用途2003年4月29日提交的专利申请CN03123045.8中公开了党参黄芪组合物用于调节免疫的用途；2003年6月18日提交的专利申请CN03137351.8公布了该组合物在制备治疗缺血性心脏病的药物中的用途；同日提交的专利申请CN200510080239.5公布了该组合物在降低血小板聚集方面的用途；2003年9月2日提交的专利申请CN03156284.1记载了该组合物在制备预防与治疗急性肺损伤的药物中的用途；此外，2004年10月27日提交的CN200410087116.X公开了参芪扶正注射液在制备治疗老年性常见疾病的药物中的用途。以上公开内容全部经本文引入以供参考。
中药党参黄芪组合物的活性成分为党参和黄芪，有研究认为，党参和黄芪具有补中益气、生津养血的功效，可以促进正常机体生长，有抗氧化、增强免疫和抑制细菌的作用。因此，党参黄芪组合物应用于神经科临床中时，对神经变性疾病应具有一定的疗效。既往研究认为其可在体外诱导分化hMSC为神经元样细胞。本申请人进一步的研究发现，党参黄芪组合物可以用于制备治疗神经系统疾病的药物，特别是用于制备治疗帕金森氏病的药物。
具体实施例方式
以下通过实施例，对本发明做进一步说明。这些实施方式仅用来说明本发明的实施方法和效果，并不以任何形式限制本发明。实施例中虽然以参芪液为剂型，通过动物试验说明本发明在治疗神经系统疾病，特别是帕金森氏病中的效果，但是本领域技术人员可以认识到，其它药学领域常见的剂型也可以达到相似的效果。以下实施方式仅仅是示例性的，并不是限定性的。
实施例1首先，我们在体外成功诱导hMSC向神经细胞分化的基础上，将体外标记并经参芪液诱导的hMSC注入神经细胞缺失的大鼠脑内，观察hMSC在大鼠脑内的分化及神经细胞缺失的大鼠在移植后的神经功能的改变。
1.材料及主要试剂DMEM(Dulbecco’s modified Eagle’s medium，低糖，Gibcobrl公司)、小鼠抗人神经元烯醇化酶(neuron-specific enolase，NSE，Chemicon公司)、胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic pro-tein，GFAP，Maxim公司)单克隆抗体(即用型)、小鼠抗人神经丝蛋白单抗(neurofilament-H，NF，DAKO公司)、DAB显色试剂盒(DAKO公司)、参芪液(250ml含党参和黄芪生药各10g)购自广东丽珠集团利民制药厂。
2.实验准备选用体重350-400g大鼠，杀死部分神经元细胞，制备左侧大脑中帕金森类神经性疾病模型。术前禁食，取右侧卧位。
在无菌条件下，骨髓单核细胞悬液经1.077×103g/L的Ficoll-Paque分离液以2500r/min离心30min，收集单核细胞层，以1×109/L密度接种，在37℃、5％CO2饱和湿度下培养。接近融合的MSC用含0.1mmol/LEDTA的0.025g/L胰酶于室温消化5-10min，以1500r/min离心20min，弃上清，沉淀按1∶3比例传代。
第5代hMSC在体外培养并融合成单层细胞后，胰酶消化，含10％FBS的DMEM(10ml)终止消化；加入10ul Hoeschst33342，终浓度为1ug/ml，在培养箱孵育30min；1000rpm，离心5min，用无血清DMEM清洗后，再离心，共3次。之后，加入4×10-4g/ml参芪液诱导30min；细胞用DMEM重悬，计数，调整细胞浓度为105/ul。
移植所有操作均在无菌条件下进行，随机选择皮层梗塞10天后的大鼠，术前12小时禁食，把大鼠头部固定于立体定位仪，以前囱为参考点，按照前囱尾侧3.0mm中线缓慢注入浓度为105/ul hMSCs 5μl，缝合头皮。对照治疗组则注入无细胞的DMEM，操作同前。
3.实验动物分组治疗组将成功制备的大鼠，40只随机分成移植组和生理盐水对照治疗组各20只，分别在移植术后第2、6周每组随机抽取一半处死，取大脑制作冰冻、石蜡切片，用于荧光观察和免疫组织化学染色。
对照组对照组也分20只大鼠，分别在与治疗组相同时间点处死，取大脑制作冰冻、石蜡切片，用于荧光观察和免疫组织化学染色。
表1.运动功能评分结果
该实验结果表明本发明的参芪液对于治疗帕金森类神经性疾病是有效的，对于运动神经的恢复起到了积极的作用。将参芪液诱导的hMSC注入神经细胞缺失的大鼠脑后，帮助神经细胞缺失的大鼠恢复神经功能。
实施例21.实验准备选用体重350-400g大鼠，杀死部分神经元细胞，制备左侧大脑中帕金森类神经性疾病模型。术前禁食，取右侧卧位，直接注射参芪液。以评估治疗神经细胞缺失的疾病的效果。
2.实验动物分组治疗组将成功制备的大鼠，40只随机分成移植组A和生理盐水对照治疗组B各20只，分别在移植术后第2、6周每组随机抽取一半处死，取大脑制作冰冻、石蜡切片，用于荧光观察和免疫组织化学染色。
对照组C对照组也分20只大鼠，分别在与治疗组相同时间点处死，取大脑制作冰冻、石蜡切片，用于荧光观察和免疫组织化学染色。
3.实验结果触觉刺激实验中，移植后2周和6周与移植前比较，触觉功能明显好转。模型鼠在移植前撕去左侧肢体胶布的能力很差，随着移植时间延长，触觉有所恢复，能撕去左侧肢体的胶布，且比值在增加。结果见表2。
表2.触觉功能评分结果
中药参芪液的成分为党参和黄芪，有研究表明，党参和黄芪具有补中益气、生津养血的功效，可以促进正常机体生长，有抗氧化、增强免疫和抑制细菌的作用。该实验结果表明本发明的参芪液对于神经元细胞缺失神经性疾病是有效的，对于触觉功能的恢复起到了积极的作用。将参芪液直接注入神经细胞缺失的大鼠脑后，帮助神经细胞缺失的大鼠恢复触觉功能。
实施例3本实验用于评估参芪液对促进切断海马—穹隆小鼠脑功能的恢复作用。
1.实验目的神经节苷脂对中枢神经系统的急性创伤性的脑功能恢复作用。
2.实验方法实验昆明鼠20只，麻醉后进行切除海马伞—穹窿手术。术后随机分为实验组和对照组。实验组小鼠按剂量1mg/只/天服用参芪液，对照组小鼠饮用自来水。服用14天后进行行为实验，以条件性主动回避反应行为模型。
3.实验结果实验组小鼠达到合格标准所需的训练次数为38.7±6.8，接近正常小鼠达到至今标准所需的训练次数；对照组小鼠30％经60次训练尚未达到学习标准，70％只达到学会标准的需训练次数平均为50.5±4.8。经统计处理两组间差异显著，P＜0.003，表明参芪液对中枢神经急性创伤性的脑功能和神经元细胞有明显的恢复作用。
因此，参芪液有恢复神经功能的作用，尤其在中枢神经系统的急性创伤性的脑功能恢复上有显著疗效。
以上实施方式仅仅为阐述本发明，而非限制本发明。本领域的技术人员能够理解，在本发明所附的权利要求的精神和范围内可以做多种修改和变动，而这些修改和变动也要包括在本发明范围内。
权利要求
1.一种党参黄芪组合物在制备治疗神经系统疾病的药物中的应用，其中所述的党参黄芪组合物含有党参和黄芪作为活性成分，党参和黄芪的重量比为1∶0.5到0.5∶1。
2.根据权利要求1所述的应用，其中所述的神经系统疾病为帕金森氏病。
3.根据权利要求1所述的应用，其中所述党参和黄芪的重量比为1∶1。
4.根据权利要求1所述的应用，其中所述的党参黄芪组合物还可以含有补气、补血类中药。
5.根据权利要求4所述的应用，其中所述的补气、补血类中药选自当归、熟地、何首乌、白术、山药或其结合。
6.根据权利要求1所述的应用，其中所述的党参黄芪组合物以注射剂、片剂、丸剂、胶囊剂、颗粒剂、溶液、悬浮剂、或乳剂的形式使用。
7.根据权利要求6所述的应用，其中所述的党参黄芪组合物以注射剂的形式使用。
8.根据权利要求1所述的应用，其中所述的党参黄芪组合物的给药途径为口服、经皮、静脉或肌肉注射。
全文摘要
本发明涉及党参黄芪组合物在制备用于治疗神经系统疾病的药物中的应用，更具体地，涉及党参黄芪组合物在制备用于治疗帕金森氏病的药物中的应用。其中所述的党参黄芪组合物含有党参和黄芪作为活性成分，党参和黄芪的重量比为1∶0.5到0.5∶1。
文档编号A61K9/20GK1876012SQ20061007668
公开日2006年12月13日 申请日期2006年4月29日 优先权日2006年4月29日
发明者刘东来 申请人:丽珠医药集团股份有限公司