专利名称：用于治疗呼吸系统病毒感染药物的用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种用于治疗呼吸系统病毒感染药物的用途，尤其涉及一种用于治疗柯萨奇病毒B3、柯萨奇病毒B5、腺病毒、呼吸道合胞病毒、鼻病毒感染引起的呼吸系统疾病药物的用途。
背景技术：
急性呼吸道感染是人类最常见的疾病，约80％以上是由病毒引起的，是导致世界范围内老人和小孩发病与死亡的主要原因。引起呼吸道感染的病毒种类很多，其中较为常见的是流感病毒、呼吸道合胞病毒、腺病毒、鼻病毒和某些肠道病毒(如柯萨奇病毒)。
目前很多抗病毒药物由于毒副作用和长期应用的耐药性而限制了其临床应用如临床上常用于治疗流感的金刚烷胺及其结构衍生物甲基金刚乙胺就存在神经毒性、易产生耐药毒株和对B型流感病毒无效等缺陷；目前经FDA批准用于防治呼吸道合胞病毒感染的药物仅有病毒唑，但其通过静脉给药时存在骨髓细胞毒性，通过气雾剂经呼吸道少量给予时存在白细胞减少，剂量过大时可致头痛、不可逆贫血等副作用；从而导致呼吸系统病毒感染的发病率持续不衰。
化学药物在治疗病毒感染中占有极为重要的地位，因此开发研制有效防治呼吸系统病毒感染的新化合物具有极强的社会意义。盐酸阿比朵尔是非核苷类抗病毒药物，是前苏联药物化学研究中心首先研制出的新的抗病毒药物和免疫刺激剂，它对A、B型流感病毒的抗病毒活性最为显著，该药能抑制A、B型流感病毒复制的早期阶段，能抑制病毒细胞浆膜的融合以及病毒与内吞囊泡之间的膜融合。同时，盐酸阿比朵尔在体内还可诱导产生干扰素，对巨噬细胞的吞噬功能有显著的活化作用，具有免疫调节作用。我国在其基础上，采用新的合成方法及原料，合成了具有我国自主知识产权的新化合物。
发明内容
本发明的目的是提供一种用于治疗呼吸系统病毒感染药物的用途，该药物为盐酸阿比朵尔(Arbidol Hydrochloride)，化学名为6-溴-4-(二甲氨甲基)-5-羟基-1-甲基-2-(苯硫甲基)-1H-吲哚-3-羟酸乙酯盐酸盐-水合物，其化学结构式如下 本发明提供的一种新药的用途，是用于治疗柯萨奇病毒B3、柯萨奇病毒B5、腺病毒、呼吸道合胞病毒、鼻病毒所致的呼吸系统感染。
本发明通过小鼠实验表明，盐酸阿比朵尔具有抗柯萨奇病毒B3作用，表现在其能提高心肌炎小鼠存活率、降低小鼠心肌病变检出率以及心脏组织匀浆中病毒滴度。
本发明通过小鼠实验表明，盐酸阿比朵尔具有抗柯萨奇病毒B5作用，随着药物剂量的增加，小鼠死亡率降低，平均生存时间延长。同时，能降低感染柯萨奇病毒B5小鼠肺组织的病变程度、肺组织匀浆中的病毒滴度以及血清中和抗体的水平，且与药物浓度呈正相关。
本发明通过小鼠实验表明，盐酸阿比朵尔有明显抑制腺病毒的作用，表现在随着药物浓度的增加，小鼠死亡率降低，平均生存时间延长。同时能降低感染腺病毒小鼠肺组织的病变程度、肺组织匀浆中的病毒滴度以及血清中和抗体的水平，且与药物浓度呈正相关。
本发明通过小鼠实验表明，盐酸阿比朵尔有抗呼吸道合胞病毒作用，表现为盐酸阿比朵尔实验组与病毒对照组比较，死亡保护率、延长生命率、平均肺指数等指标评价，均有统计意义上的有效治疗效果，且治疗效果与药物浓度呈正相关。
本发明通过小鼠实验表明，盐酸阿比朵尔对鼻病毒所致小鼠的呼吸道感染有抑制作用，随着药物浓度的增加，小鼠肺组织病变程度降低，肺组织中鼻病毒检出率降低等改变，与病毒对照组相比较有显著性差异，且与药物浓度呈正相关。
本发明具有下列优点和积极效果1、降低柯萨奇病毒B3、柯萨奇病毒B5、腺病毒、呼吸道合胞病毒、鼻病毒感染后小鼠的死亡率，以及小鼠体内病毒滴度和血清中抗体水平；2、改善临床上呼吸道感染、肺炎、支气管炎症状及体征的作用。
具体实施例方式
实施例1盐酸阿比朵尔对感染柯萨奇病毒B3动物的保护作用BalB/C小鼠，雌雄兼用，随机分为6组正常对照组、病毒对照组、阳性药物对照组、受试药物组(采用3个浓度即盐酸阿比朵尔高剂量组、中剂量组和低剂量组)每组27只小鼠。于感染前用药2天，盐酸阿比朵尔各组小鼠灌胃给药，每日2次；阳性药物对照组以病毒唑腹腔注射；病毒对照组以等体积的消毒饮用水替代，每日2次。正常对照组不做任何处理，自然喂养。实验当日，小鼠感染部位常规消毒后，腹腔注射CVB3，接种2h后继续用药。观察存活率；连续治疗至急性期时，每组随机杀检1/3，取心脏的右半部分匀浆，滴定病毒滴度；取心脏左半部分进行HE染色，观察各组小鼠心肌组织病变程度及病变检出率；应用组织病理分级法对心肌损伤进行分析。剩余2/3小鼠继续接受治疗至10和20天时分别杀检，重复上述检测。
实验结果为盐酸阿比朵尔能提高心肌炎小鼠存活率。急性期5天内病毒对照组死亡18只，盐酸阿比朵尔高剂量组和中剂量组，死亡小鼠分别为8只和12只，差异有显著性(P＜0.05)。盐酸阿比朵尔各剂量组各期病变程度及范围均明显轻于病毒对照组。进一步将各期主要病变检出率量化比较，盐酸阿比朵尔高剂量组和中剂量组0度(正常)检出率与病毒对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05)，重度病变检出率低于病毒对照组，盐酸阿比朵尔高、中剂量组与病毒对照组比较差异有统计学意义(P＜0.01)。盐酸阿比朵尔实验组小鼠的心脏组织匀浆中病毒滴度降低，与病毒对照比较有显著性差异(P＜0.05)。
实施例2盐酸阿比朵尔对感染柯萨奇病毒B5动物的保护作用Balb/C鼠，雌性，5～7周龄，体重为17～20g，随机分成5组分别为正常对照组、病毒对照组、阳性药物对照组、治疗剂量25mg/kg/d实验组和治疗剂量50mg/kg/d实验组，每组10只。
实验当日，小鼠感染部位常规消毒后，腹腔注射CVB5。接种病毒24h后，盐酸阿比朵尔各组小鼠灌胃给药，每日1次，连续给药6天；正常对照组不做任何处理；病毒对照组用等体积的PBS灌胃替代药物。每组6只小鼠在接种病毒后第8天处死。将解剖所得到的肺、心脏和肝脏一部分HE染色进行病理学检测。一部分组织被冰冻做免疫荧光检测和病毒分离。剩下的动物每天观察体重的改变和死亡情况。评价抗病毒效果的参数包括21天内体重的减轻，死亡率的下降和/或平均存活时间的延长。
实验结果为每组中6只动物在接种病毒第8天被处死，将所得的肺、肾、肝、心和脾作病理学检查。显微镜下，病毒对照组动物肺组织的肺泡壁增厚，心肌细胞均质变性。除治疗剂量为25mg/kg/d实验组动物肺组织有局部出血，其他组织标本没有显著病理改变。在免疫荧光检测中发现，病毒对照组在接种病毒第8天所得到的肺和心，分别在肺泡壁和心肌细胞膜表面有强特异性荧光(++++)；治疗剂量25mg/kg/d实验组的肺和心表现为++～+++；治疗剂量为50mg/kg/d实验组的肺和心表现为+；正常对照组为阴性。
表1盐酸阿比朵尔作用后感染CVB5小鼠存活率和存活时间
表2盐酸阿比朵尔对感染CVB5小鼠的治疗作用
为盐酸阿比朵尔治疗组与病毒对照组比较有显著性差异(P＜0.01)实施例3盐酸阿比朵尔对感染腺病毒动物的保护作用小鼠雌雄各半，随机分成6组，每组10只。分别为正常对照组，病毒对照组，病毒唑组，盐酸阿比朵尔高、中、低剂量组。将小鼠用乙醚进行麻醉，然后滴鼻感染腺病毒原液，4h后盐酸阿比朵尔各组小鼠灌胃给药，每日2次，连续给药8天；病毒对照组，每日灌胃消毒饮用水2次；正常对照组，不做任何处理；阳性药物病毒唑对照组，腹腔注射药物。给药8天后杀剖小鼠，精密天平称其体重；取血分离血清，用ELISA法测定抗腺病毒抗体；解剖小鼠，取鼠肺称肺重，观察肺病变；计算肺指数及肺病变抑制率，公式如下肺指数＝肺重(g)÷体重(g)平均指数＝每组肺指数之和÷每组动物数肺病变抑制率＝(对照组平均肺指数-实验组平均肺指数)÷对照组平均肺指数×100％测定盐酸阿比朵尔组肺悬液在HEp-2细胞中病毒滴度(TCID50)，与病毒对照组比较。
实验结果为表3盐酸阿比朵尔对腺病毒感染小鼠血清效价影响(IgM)
表4盐酸阿比朵尔对腺病毒感染小鼠肺指数的影响
△p＜0.01与正常对照组比较；*p＜0.01，**p＞0.01与病毒对照组比较表5盐酸阿比朵尔对小鼠体内腺病毒增殖的抑制作用
*肺病变程度以“+”评价75％＜++++＜100％、50％＜+++＜75％、25％＜++＜50％、0％＜+＜25％、-未病变实施例4盐酸阿比朵尔对感染呼吸道合胞病毒动物的保护作用小鼠雌雄各半，随机分成6组正常对照组，病毒对照组，病毒唑组，盐酸阿比朵尔高、中、低剂量组，每组10只。将小鼠用乙醚进行麻醉，然后滴鼻感染RSV病毒原液，4h后盐酸阿比朵尔各组小鼠灌胃给药，每日给药2次，连续给药8天；病毒对照组，每日灌胃给饮用水2次；正常对照组，不做任何处理；阳性药物病毒唑组，腹腔注射给药。给药8天后杀剖小鼠，精密天平称其体重；取血分离血清，用ELISA法测定抗RSV病毒抗体；解剖小鼠，取鼠肺称肺重，观察肺病变；计算肺指数及肺病变抑制率，公式如下肺指数＝肺重(g)÷体重(g)平均指数＝每组肺指数之和÷每组动物数肺病变抑制率＝(对照组平均肺指数-实验组平均肺指数)/对照组平均肺指数×100％测定盐酸阿比朵尔组小鼠肺悬液在Hela细胞中病毒滴度(TCID50)，与病毒对照组比较。
实验结果为表6盐酸阿比朵尔对RSV感染小鼠血清效价影响(IgM)
表7盐酸阿比朵尔对RSV病毒感染小鼠肺指数的影响
△p＜0.01与正常对照组比较；*p＜0.01，**p＞0.01与病毒对照组比较表8盐酸阿比朵尔对小鼠体内RSV病毒增殖的抑制作用
*肺病变程度以“+”评价75％＜++++＜100％、50％＜+++＜75％、25％＜++＜50％、0％＜+＜25％、-未病变实施例5盐酸阿比朵尔对感染鼻病毒动物的保护作用Balb/C小鼠4周龄，雌性，体重17克左右，随机分为6组A组病毒对照组、B组阳性药物病毒唑对照组、C组盐酸阿比朵尔高剂量治疗组、D组盐酸阿比朵尔中剂量治疗组、E组盐酸阿比朵尔低剂量治疗组、F组正常对照组，每组20只。
将A组、B组和C、D、E组小鼠分别用戊巴比妥腹腔麻醉，麻醉后经鼻腔滴入RV悬液。当日盐酸阿比朵尔治疗组灌胃给药；阳性药物组腹腔注射，每日1次，连续给药8天。治疗第8天将小鼠颈脱臼致死，无菌取肺，将左侧肺做电镜病理学检测，将右侧肺用于RV分离。
实验结果为A组20只，B组12只，病毒分离阳性；C组病毒分离阳性6只，阴性6只，阳性率为50％。电镜结果显示C、D组小鼠肺组织病变程度明显轻于A组。
实施例6盐酸阿比朵尔治疗呼吸道病毒感染的临床验证总结一、临床资料病例来源及选择按呼吸道病毒感染诊断标准确诊的门诊病人共60例，其中女性26例，男性34例，年龄15～56岁，平均38岁，病程7～10天，平均8天。全身中毒症状均以发热、畏寒、头痛、肌肉酸痛、疲倦以及食欲不振为主，呼吸道症状以喷嚏、鼻塞、干咳、咽痛以及流涕为主，且鼻腔流涕症状比咽部症状明显。所有患者无严重的心、肝、肾疾患，无精神病、癫痫病史，病毒感染后未经其他药物治疗。将患者随机分为两组各30例阳性药物对照组与盐酸阿比朵尔治疗组，两组患者性别、年龄、临床表现及病因分布经统计学处理均无显著性差异(P＞0.05)。
二、治疗方法及疗效判断
1、治疗方法应用盐酸阿比朵尔高剂量于呼吸道病毒感染患者，每次口服5ml，每日3次。以上治疗7天为一疗程。
阳性药物对照组应用病毒唑针0.6～1.0g加入5％葡萄糖液100～250mL中静脉滴注，40滴/min，1次/d。以上治疗7天为一疗程。
2、疗效观察和评定详细记录主要症状(咳嗽、气促、喘息)和体征(发热、肺部罗音和哮鸣音)的严重程度、缓解时间和消失时间。显效治疗3天后，发热、咳嗽、气促等症状明显减轻或消失，精神状态明显好转无烦躁，肺部罗音明显减少或消失。有效治疗3天后，症状和体征有改善，但没有消失。无效治疗3天后，症状和体征均无改善。
三、结果与结论试验组显效26例(68.6％)，有效3例，总有效率96.7％，人均治疗时间(6.61±2.0)天，对照组显效19例(30％)，有效7例，总有效率86.7％，人均治疗时间(8.41±2)天。经统计学处理，试验组的疗效明显优于对照组(P＜0.01)，治疗过程中两组均未见明显毒副反应。从以上结果可得出盐酸阿比朵尔有治疗呼吸道病毒感染作用，效果优于病毒唑，有深入研究价值。
权利要求
1.一种盐酸阿比朵尔在制备治疗呼吸系统病毒感染药物中的应用，包括盐酸阿比朵尔(Arbidol Hydrochloride)，其化学名为6-溴-4-(二甲氨甲基)-5-羟基-1-甲基-2-(苯硫甲基)-1H-吲哚-3-羟酸乙酯盐酸盐-水合物 其中HO-表示羟基Br-表示溴CH3- 表示甲基CH2N(CH3)2- 表示二甲氨甲基-COOC2H5表示羟酸乙酯-CH2S- 表示硫甲基HCL表示盐酸H2O表示水其特征在于在制备治疗柯萨奇病毒B3(Coxsackievirus B3 Group，CVB3)、柯萨奇病毒B5(Coxsackievirus B5 Group，CVB5)、腺病毒(Adenovirus，AdV)、呼吸道合胞病毒(Respiratory syncyntial virus，RSV)、鼻病毒(Rhinovirus，RV)感染的药物中的应用。
全文摘要
本发明公开了一种用于治疗呼吸系统病毒感染药物的用途。本发明提供的盐酸阿比朵尔(Arbidol Hydrochloride)，其化学名为6－溴－4－(二甲氨甲基)－5－羟基－1－甲基－2－(苯硫甲基)－1H－吲哚－3－羟酸乙酯盐酸盐－水合物。本发明能降低柯萨奇病毒B3、柯萨奇病毒B5、腺病毒、呼吸道合胞病毒、鼻病毒感染后小鼠的死亡率，以及小鼠体内病毒滴度和血清中抗体水平；改善临床上呼吸道感染、肺炎、支气管炎症状及体征的作用。
文档编号A61P11/00GK1994299SQ20061012549
公开日2007年7月11日 申请日期2006年12月18日 优先权日2006年12月18日
发明者杨占秋, 罗凡, 钟琼, 王又又, 石丽桥, 肖红, 季红 申请人:武汉大学