包含cyc-682和细胞毒性药物的抗增殖性组合的制作方法

专利名称：：包含cyc-682和细胞毒性药物的抗增殖性组合的制作方法包含CYC-682和细胞毒性药物的抗增殖性组合本发明涉及适合用于治疗增殖性疾病的药物组合。
背景技术：
：嘧啶核苷在治疗增生性疾病中的治疗用途已经记载在本领域中。作为实例，市售的嘧啶系列的抗肿瘤剂包括5-氟脲嘧啶(Duschinsky,R.,等人，J.Am.Chem.Soc.,79,4559(1957))、替加氟(Hiller,SA.,等人，Dokl.Akad.NaukUSSR,176，332(1967》、优福定(Fujii，S.,等人，Gann，69，763(1978))、卡莫氟(Hoshi，A.,等人，Gann，67,725(1976))、去氧氟尿苦(Doxyfluridine)(Cook，A.F.,等人，J.Med.Chem.，22,1330(1979))、阿糖胞香(Evance,J.S.,等人,Proc.Soc.Exp.Bio.Med"106.350(1961))、安西他滨(Hoshi，A"等人，Gann,63,353，(1972))和依诺他滨(Aoshima，M.，等人，CancerRes"36,27260976)):、n、二'"，、、j人恶性肿瘤。核苷例如l-P-D-阿拉伯呋喃糖基胞嘧啶(阿糖胞苷，Ara-C)、氟达拉滨和克拉屈滨在白血病的治疗中发挥重要的作用，而吉西他滨在许多类型的实体瘤的治疗中广泛使用。这些化合物以相似的方式代谢为内源性核苷和核苷酸。活性代谢物干扰核芬和核芬酸的从头合成和/或在整合入DNA链后抑制DNA链的延长，其用作链终止剂。此外，整合入DNA链的核芬抗代谢药诱导链断裂，链断裂最终可导致诱导凋亡。核苷抗代谢药耙向一种或多种特异的酶(Galmarini等人，Nuceosideanloguesandnucleobasesincancertreatment.LancetOncol.2002Jul;3(7》415-24;Review)。核苷抗代谢药之间对于靶酶的抑制作用模式可能不同，所述核苦抗代谢药具有相同的核香碱基，例如阿糖胞苦和吉西他滨。尽管两种核苷均被脱氧胞芬激酶磷酸化，并且均为胞苷脱氨酶的良好底物，但只有吉西他滨表现出对抗实体瘤的抗肿瘤活性。这表明这些核香抗代谢药的药理活性不同，这可反映出对靶向分子的不同的作用模式。已经表明dCK缺乏与多种细胞和动物模型中的阿糖胞苷抵抗相关(Galmarini等人，Invivomechanismsofresistancetocytarabineinacutemyeloidleukaemia,BrJHaematol.2002Jun;117(4):860-8)。在阿糖胞香治疗的AML患者中的dCK基因的表达改变或此酶活性的显著降低也与临床结果相关。这些数据与下述概念是一致的，所述概念为通过dCK的阿糖胞苷细胞内磷酸化对于细胞模型和患者中的细胞毒性是重要的。已表明在母细胞质膜中hENTl的缺乏也为对阿糖胞苷的细胞抵抗的机制。其他作者表明对阿糖胞苷的药物抵抗机制与阿糖胞苷分解代谢酶如CDA水平的增高相关。EP536936(Sankyo有限公司)公开了多种l-(3-D-阿拉伯呋喃糖基胞嘧啶(l-(3-D-arabinofiiranosylcytosine)的2'-氰基-2'-脱氧-衍生物，其已经表现出有价值的抗肿瘤活性。在EP536936中公开的一个具体化合物为2'-氰基-2'-脱氧-N、棕榈酰基-l-(3-D-阿拉伯呋喃糖基胞嘧咬(下文称作"CYC682"),该化合物现在正在被进一步研究。CYC682,也称为l-(2-C-氰基-2-二氧基-(3-D-阿拉伯-呋喃戊糖基)-N、棕榈酰基月包嗜口定(l-(2-C-cyano-2-dioxy画p-D-arabino画pentoftiranosyl)-N4-palmitoylcytosine)，(Hanaoka,K.,等人，Owcer，1999:82:226-236;DonehowerR,等人，/Voc爿wSocC7/"(9"co/,2000:abstract764;Burch,PA，等人，Prac爿w5bcC7/"(9"co/,2001:abstract364)，其为口服给药的核芬CNDAC，l-(2-C陽氰基-2-脱氧-P-D-阿拉伯-呋喃戊糖基)-胞嘧啶的新的2，-脱氧胞香抗代谢前药。相对于其它核苷代谢产物(例如吉西他滨)，CYC682具有独特的作用方式，即它具有自发的DNA链断裂作用，从而导致在多种细胞系、异种移植和转移性癌症模型中的强效的抗肿瘤活性(Hanaoka等人，1999;Kaneko等人,<formula>formulaseeoriginaldocumentpage8</formula>1997;Wu等人，2003)。基于对实体肿瘤的临床前数据，考虑到CYC682的口服生物利用度和其对于吉西他滨(重要的上市核苷类似物)和5-FU(广泛使用的抗代谢药物)的改善的活性，CYC682已经成为众多研究的焦点。近年来，研究人员报导在结肠癌模型中，CYC682表现出很强的抗癌活性。在相同模型中，在提高存活率和防止结肠癌扩散转移至肝的方面中，发现CYC682优于吉西他滨或5-FU(WuM,等人，Ca"cwA^ye^r/z，2003:63:2477-2482)。至今，来自患有多种癌症的病人的I期数据表明CYC682在人中具有良好的耐受性，且骨髓抑制为剂量限制性毒性。为了优化治疗方案，本领域中活性药物试剂常组合给药。例如，WO2005/053699(CyclacelLimited)中公开了包含CKD抑制剂和l-(2-C-氰基-2-二氧-卩-D-阿拉伯-呋喃戊糖基)-N"-棕榈酰基胞嘧咬，或其代谢产物的组合，以及它们在治疗增殖性疾病中的用途。本发明寻求提供已知药物试剂的新组合，其特别适用于治疗增殖性疾病，特别是癌症。更具体地，本发明涉及组合，所述组合包括2'-氰基-2'-脱氧-N^棕榈酰基-l-P-D-阿拉伯呋喃糖基-胞嗜啶，或其代谢产物，和典型的细胞毒性药物。
发明内容本发明的第一方面涉及组合(combination)，其包含2'-氰基-2'-脱氧-N、棕榈酰基-l-(3-D-阿拉伯呋喃糖基-胞嘧啶，或其代谢产物，或其可药用盐，和细胞毒性药物，其中所述细胞毒性药物选自(a)长春花生物碱；(b)紫杉烷；(c)胞嘧啶类似物；(d)蒽环类抗生素；和(e)铂类抗肿瘤剂。虽然2'-氰基-2'-脱氧-N^棕榈酰基-l-P-D-阿拉伯呋喃糖基-胞嘧啶和上述细胞毒性药物是本领域公认的单个治疗剂，但是并没有建议本发明所述的特定组合对于治疗癌症特别有效。第二方面涉及药物组合物，其包含本发明的组合和可药用载体、稀释剂或赋形剂。第三方面涉及本发明的组合在制备用于治疗增殖性疾病的药物中的用途。第四方面涉及药物制品(pharmaceuticalproduct),其包含(i)2'-氰基-2'-脱氧-N、棕榈酰基-l-P-D-阿拉伯呋喃糖基-胞嘧啶，或其代谢产物，或其可药用盐，和(ii)细胞毒性药物，其选自(a)长春花生物碱；(b)紫杉烷；(c)胞嘧啶类似物；(d)蒽环类抗生素；和(e)铂类抗肿瘤剂，作为在治疗中同时(simultaneous)、依次(sequential)或分另'j(separate)4吏用的组合制齐寸(combinedpreparation)。第五方面涉及一种治疗增殖性疾病的方法，所述方法包含同时、依次或分别给药2'-氰基-2'-脱氧-N、棕榈酰基-l-P-D-阿拉伯呋喃糖基-胞嘧啶，或其代谢产物，或其可药用盐，和细胞毒性药物，其中所述细胞毒性药物选自(a)长春花生物4^;(b)紫杉烷；(c)胞嘧啶类似物；(d)蒽环类抗生素；和(e)铂类抗肿瘤剂。第六方面涉及2'-氰基-2'-脱氧-N、棕榈酰基-1-(3-D-阿拉伯呋喃糖基-胞嗜啶，或其代谢产物，或其可药用盐在制备用于治疗增殖性疾病的药物中的用途，其中所述治疗包含向患者同时、依次或分别给药选自下述的细胞毒性药物(a)长春花生物碱；(b)紫杉烷；(c)胞嘧啶类似物；(d)蒽环类抗生素；和(e)铂类抗肿瘤剂。第七方面涉及细胞毒性药物在制备用于治疗增殖性疾病的药物中的用途，所述细胞毒性药物选自(a)长春花生物碱；(b)紫杉烷；(c)胞嘧啶类似物；(d)蒽环类抗生素；和(e)铂类抗肿瘤剂，其中所述治疗包含向患者同时、依次或分别给药2'-氰基-2'-脱氧-N、棕榈酰基-l-(3-D-阿拉伯呋喃糖基-胞嘧啶，或其代谢产物，或其可药用盐。第八方面涉及2'-氰基-2'-脱氧-N^棕榈酰基-1-(3-D-阿拉伯呋喃糖基-胞嘧啶，或其代谢产物，或其可药用盐，和细胞毒性药物在制备用于治疗增殖性疾病的药物中的用途，所述细胞毒性药物选自(a)长春花生物碱；(b)紫杉烷；(c)胞嗜啶类似物；(d)蒽环类抗生素；和(e)铂类抗肿瘤剂。第九方面涉及细胞毒性药物在制备用于治疗增殖性疾病的药物中的用途，所述细胞毒性药物选自(a)长春花生物碱；(b)紫杉烷；(c)胞嘧咬类似物；(d)蒽环类抗生素；和(e)铂类抗肺瘤剂，其中所述药物用于与2'-氰基-2'-脱氧-N、棕榈酰基-l-(3-D-阿拉伯呋喃糖基-胞嘧啶，或其代谢产物，或其可药用盐的组合治疗。第十方面涉及2'-氰基-2'-脱氧-N气棕榈酰基-l-P-D-阿拉伯呋喃糖基-胞嘧啶，或其代谢产物，或其可药用盐在制备用于治疗增殖性疾病的药物中用途，其中所述药物用于与细胞毒性药物的组合治疗，所述细胞毒性药物选自(a)长春花生物碱；(b)紫杉烷；(c)胞嘧啶类似物；(d)蒽环类抗生素；和(e)铂类抗肿瘤剂。本发明的第十一方面涉及2'-氰基-2'-脱氧-N、棕榈酰基-1-P-D-阿拉伯呋喃糖基-胞嘧啶，或其代谢产物，或其可药用盐，在制备用于治疗增殖性疾病的药物中的用途，其中所述药物用于以细胞毒性药物的预处理治疗(pretreatmenttherapy),所述细胞毒性药物选自(a)长春花生物碱；(b)紫杉烷；(c)胞嘧啶类似物；(d)蒽环类抗生素；和(e)铂类抗肿瘤剂。发明详述下述的优选实施方案可用于上述本发明的所有方面。本发明的一个优选实施方案涉及组合，其包含2'-氰基-2'-脱氧-N、棕榈酰基-l-P-D-阿拉伯呋喃糖基-胞嘧啶(CYC682)或其代谢产物，和细胞毒性药物，其中所述细胞毒性药物选自吉西他滨、奥沙利铂、多西他赛和多柔比星。本发明的另一方面涉及药物组合物，其包含CYC682或其代谢产物，和细胞毒性药物，其中所述细胞毒性药物选自(a)长春花生物碱；(b)紫杉烷；(c)胞嘧啶类似物；(d)蒽环类抗生素；和(e)铂类抗胂瘤剂。本发明的另一优选实施方案涉及药物组合物，其包含CYC682或其代谢产物，和细胞毒性药物，其中所述细胞毒性药物选自吉西他滨、奥沙利柏、多西他赛和多柔比星。在一个优选实施方案中，所述代谢产物为l-(2-C-氰基-2-脱氧-p-D-阿拉伯-呋喃戊糖基)-胞嘧咬，也称为"CNDAC"。另一方面涉及药物制品，其包含用于治疗增殖性疾病的本发明的组合，其中所述疾病优选为癌症。本发明的另一方面涉及药物制品，其包含CYC682或其代谢产物，和细胞毒性药物，其中所述细胞毒性药物选自(a)长春花生物碱；(b)紫杉烷；(c)胞嘧啶类似物；(d)蒽环类抗生素；和(e)铂类抗肿瘤剂，作为在治疗中同时、依次或分别使用的组合制剂。本发明的一个实施方案涉及药物制品，其包含CYC682或其代谢产物，和细胞毒性药物，其中所述细胞毒性药物选自吉西他滨、奥沙利柏、多西他赛和多柔比星，作为在治疗中同时、依次或分别使用的组合制剂。另一方面涉及一种治疗增殖性疾病的方法，所述方法包含同时、依次或分别给药本发明的组合。本文所用的"同时"是指两种药物同时给药，而所用的术语"组合"指如果它们不是同时给药，则在时限内"依次"给药，从而使得它们均适合于在同一时限内起治疗作用。因此，"依次"给药可允许在给药一种药物后5分钟内、10分钟内或大约几小时后给药另一种药物，条件是它们均同时以治疗量存在。给药成分间的延时依成分的确切性质、它们之间的相互作用和它们各自的半衰期而改变。与"组合"或"依次"相比，本文所用的"分别"是指在给药一种药物和另一种药物之间的间隔是明显的，即当给药第二种药物时，第一次给药的药物可以不再以治疗有效量存在于血流中。在一个优选实施方案中，所述药物制品包含在给药CYC682或其代谢产物前依次或分别给药细胞毒性药物。在另一个优选实施方案中，所述药物制品包含在给药细胞毒性药物之前，依次或分别给药CYC682或其代谢产物。在一个优选实施方案中，在给药细胞毒性药物前至少1小时，或至少4小时，或至少8小时、12小时、24小时或48小时，给药CYC682(或其代谢产物)。在另一个优选实施方案中，在给药CYC682(或其代谢产物)前至少1小时，或至少4小时，或至少8小时、12小时、24小时或48小时给药细胞毒性药物。在另一个优选实施方案中，所述细胞毒性药物和CYC682(或其代谢产物)同时给药。在一个高度优选的实施方案中，所述CYC682(或其代谢产物)和细胞毒性药物根据图2中所述的方案给药，即CYC682给药48小时，然后细胞毒性药物给药24小时，或细胞毒性药物给药24小时，然后CYC682给药48小时，或细胞毒性药物和CYC682同时给药24、48或72小时。必要的时候可以重复给药方案，优选在每个治疗周期之间具有不治疗的时期。在一优选实施方案中，CYC682或其代谢产物，和细胞毒性药物，对于单个成分，每个以治疗有效量给药。在另一个优选实施方案中，CYC682或其代谢产物，和细胞毒性药物，对于单个成分，每个以亚治疗量给药。术语"亚治疗量(sub-therapeuticamount)"指低于单独用CYC682或单独用细胞毒性药物治疗产生治疗效果一般所需的量。另一方面涉及本发明的组合在制备用于治疗增殖性疾病的药物中的用途。本文所用的术语"药物制备"包括一种或多种上述成分直接作为药物或这类药物制备的任意阶段中的用途。本发明另一方面涉及CYC682或其代谢产物在制备用于治疗增殖性疾病的药物中的用途，其中所述治疗包含向患者同时、依次或分别给药细胞毒性药物，其中所述细胞毒性药物选自(a)长春花生物碱；(b)紫杉烷；(c)胞嘧啶类似物；(d)蒽环类抗生素；和(e)铂类抗肿瘤剂。一个特别优选的实施方案涉及CYC682或其代谢产物在制备用于治疗增殖性疾病的药物中的用途，其中所述治疗包含向患者同时、依次或分别给药细胞毒性药物，其中所述细胞毒性药物选自吉西他滨、奥沙利铂、多西他赛和多柔比星。另一方面涉及细胞毒性药物在制备用于治疗增殖性疾病的药物中的用途，所述细胞毒性药物选自(a)长春花生物;威；(b)紫杉烷；(c)胞嘧啶类似物；(d)蒽环类抗生素；和(e)铂类抗肿瘤剂，其中所述药物用于与CYC682或其代谢产物组合治疗。在一个优选实施方案中，所述治疗可以为预处理治疗。一个特别优选的实施方案涉及细胞毒性药物在制备用于治疗增殖性疾病的药物中的用途，所述细胞毒性药物选自吉西他滨、奥沙利柏、多西他赛和多柔比星，其中所述药物用于与CYC682或其代谢产物组合治疗。在一个优选实施方案中，所述治疗可为预处理治疗。另一方面涉及CYC682或其代谢产物在制备用于治疗增殖性疾病的药物中的用途，其中所述药物用于与细胞毒性药物组合治疗，所述细胞毒性药物选自(a)长春花生物碱；(b)紫杉烷；(c)胞嘧啶类似物；(d)蒽环类抗生素；和(e)铂类抗胂瘤剂。在一个优选实施方案中，所述治疗可为预处理治疗。一个特别优选的实施方案涉及CYC682或其代谢产物在制备用于治疗增殖性疾病的药物中的用途，其中所述药物与细胞毒性药物组合治疗，所述细胞毒性药物选自吉西他滨、奥沙利铂、多西他赛和多柔比星。再次，在一个高度优选的实施方案中，所述治疗可为预处理治疗。本文所用的术语"组合治疗(combinationtherapy)"是指如果不同时给药细胞毒性药物和CYC682(或其代谢产物)，则在时限内依次给药，以便在同一时限内它们均可起到治疗作用。本文所用的术语"预处理治疗(pretreatmenttherapy)"或"预治疗"指下述给药方案，其中给药一种药物后分别或依次给药第二种药物。优选地，给药第一种药物后至少2小时，给药第二种药物。更优选地，在给药第一种药物后至少4小时，或更优选地至少6或8小时，给药第二种药物。甚至更优选地，在给药第一种药物后至少12小时，或更优选地至少18或24小时，给药第二种药物。优选地，CYC682或其代谢产物，和细胞毒性药物以协同方式相互作用。本文所用的术语"协同，，是指CYC682和细胞毒性药物在组合使用时产生比由两种组分的单独效应相加预料到的效应更大的效应。有利地，协同相互作用可允许每种组分以较低剂量给药于患者，从而降低化疗的毒性，同时产生和/或保持相同的疗效。因此，在尤其优选的实施方案中，可以亚治疗量给药每种组分。在另一个优选实施方案中，CYC682或其代谢产物，和细胞毒性药物以一种减轻或消除在单独治疗中使用单个成分相关的或在已知组合中使用它们时相关的不良副作用的方式相互作用。在本发明的一个优选实施方案中，所述细胞毒性药物为蒽环类抗生素。这类化合物包括柔红霉素(Cerubidine)、多柔比星(Adriamycin，Rubex)、表柔t匕星(Ellence，Pharmorubicin)和4尹达t匕星(Idamycin)。在1939年，首次从^L生物分离出蒽环类抗生素，且在20世纪50年代研究了它们的抗菌特性。这些抗生素十分迅速的杀死细菌，但是它们的毒性太大而不能用于治疗人的感染。直到20世纪60年代检测到了蒽环类抗生素的抗肿瘤特性，并发现它们有抵抗癌细胞的活性。蒽环类抗生素均与DNA结合，且它们的细胞毒性很大程度是由于这种结合。更具体而言，它们结合到双链DNA上。在用蒽环类抗生素结合药物处理的人类染色体中观察到明显的橙红色荧光带。这种与DNA的相互作用是通过嵌入进行的，且已经通过几种方法确证如此。如果改变蒽环类抗生素的结构使得改变与DNA的结合，那么通常会降低或失去抗肿瘤活性。因此，DNA结合似乎对这些药物的抗癌活性是关键的。然而，这种导致细胞毒性的方式还没有被清楚的阐明。人们认为抑制DNA和RNA合成对于细胞毒性不是关键的，因为细胞毒性仅发生在高药物浓度时。蒽环类抗生素具有许多重要的作用，其中任何一个或所有作用在这些药物的细胞毒性作用中起作用。首先，它们可以嵌入DNA,因此影响DNA的许多功能，包括DNA和RNA合成。也可能发生DNA链的断裂。认为这是被酶DNA拓朴异构酶II或被自由基的形成调节的。例如抑制酶拓朴异构酶II可导致一系列导致DNA双链断裂的反应。在正常的通过形成裂解复合物的催化循环过程中，通过拓朴异构酶II诱导临时双链断裂。导致永久性双链断裂的该复合物的破坏通常发生在不存在药物时。拓朴异构酶II抑制剂导致可裂解的复合物不裂解，由此增加了可裂解的复合物转化为不可逆的双链断裂的可能性。蒽环类抗生素也可导致活性氧物质的生成，然后活性氧物质主要导致单链断裂。蒽环类抗生素生色团含有羟基醌，其为充分描述的铁螯合结构。药物-Fe-DNA复合物催化电子从谷胱甘肽转移至氧，从而导致活性氧物质的生成。在本发明的一个高度优选的实施方案中，所述细胞毒性药物为多柔比星。多柔比星为化合物(88-顺)-8-乙酰基-10-[(3-氨基-2，3,6-三脱氧-01丄-来苏-吡喃己糖基)氧基]7，8，9，10-四氢-6,8,ll-三羟基-l-曱氧基-5,12-并四苯二酮或(8S,10S)-10-(4-氨基-5-羟基-6-曱基-四氢-2H-吡喃-2-基氧基)-6，8,ll-三羟基-8-(2-羟基乙酰基)-1-曱氧基-7,8,9，10-四氢并四苯-5,12-二酮。优选地，其中所述细胞毒性药物为多柔比星，所述细胞毒性药物和CYC682(或其代谢产物)分别或依次，更优选地，依次给药。在一个特别优选的实施方案中，其中所述细胞毒性药物为多柔比星，在给药细胞毒性药物之前，给药CYC682(或其代谢产物)，即优选地，患者用CYC682预治疗。在另一个特别优选的实施方案中，其中所述细胞毒性药物为多柔比星，在给药CYC682(或其代谢产物)前，给药多柔比星，即优选地，患者用多柔比星预治疗。在一个优选实施方案中，本发明的组合包含CNDAC(作为CYC682的代谢产物)和作为细胞毒性药物的多柔比星。优选地，对于该实施方案，给药CNDAC前，给药多柔比星，或二者同时给药。在本发明另一个优选实施方案中，所述细胞毒性药物为铂类抗肿瘤剂，如顺铂、卡柏或奥沙利柏。在一个高度优选的实施方案中，所述铂类抗肿瘤剂为奥沙利铂。奥沙利铂为含铂原子的细胞毒性药物，所述铂原子与草酸根和二氨基环己烷(DACH)络合。人们认为大的DACH比顺铂和卡铂产生更大的细胞毒性(AVisemanLR，AdkinsJC，PloskerGL，等人，Oxaliplatin:areviewofitsuseinthemanagementofmetastaticcolorectalcance.DrugsAging1999;14(6):459-75)。奥沙利铂的精确作用机理尚不清楚，虽然已知其是细胞周期各相非特异性的。奥沙利铂形成活性铂络合物，认为其通过形成DNA分子的链间和链内的交联抑制DNA的合成。通常奥沙利柏对顺柏或卡柏没有交叉抗性，这可能是因为DACH基团和对DNA错位修复的抵抗(WisemanLR等人，同上；MissetJL，BleibergH，SutherlandW,等人,OxaliplatinClinicalActivity:AReview;CriticalReviewsinOncology-Hematology2000;35(2》75-93)。临床前研究已经表明奥沙利铂与氟脲嘧啶和SN-38(伊立替康的活性代谢产物)有十办同"f乍用(CvitkovicE，BekraddaM.Oxaliplatin:ANewTherapeuticOptioninColorectalCancer;SeminOncol1999;26(6):647-62)。奥沙利铀也是放射敏化剂(FreyerG，BossardN，RomestaingP,等人，Oxaliplatin(OXA),5-fluorouracil(5FU)，L-folinicacid(FA)andconcomitantirradiationinpatientswithrectalcancer:Aphase1study;ProcAmSocClinOncol2000;19:260a;CarraroS，RocaE,CartelliC，等人，Oxaliplatin(OXA),5-fluorouracil(5-Fu)andleucovorin(LV)plusradiotherapyinunresectablerectalCancer(URC):Preliminaryresults;ProcAmSocClinOncol2000;19:291a)。奥沙利铂被批注用于与5-氟脲嘧啶(5-FU)和亚叶酸组合辅助治疗在切除原发肿瘤后的III期(Duke'sC)结肠癌，且用于治疗转移性结肠直肠癌。优选地，其中所述细胞毒性药物为奥沙利钼，所述细胞毒性药物和CYC682(或其代谢产物)分别或依次给药，更优选地，依次给药。在一个特别优选的实施方案中，其中所述细胞毒性药物为奥沙利铂，在给药细胞毒性药物之前，给药CYC682(或其代谢产物)，即优选地，患者用CYC682预治疗。在另一个尤其优选的实施方案中，其中所述细胞毒性药物为奥沙利铂，在给药CYC682(或其代谢产物)之前，给药细胞毒性药物，即优选地，患者用奥沙利铂预治疗。在另一个尤其优选的实施方案中，所述细胞毒性药物为顺铂。化合物顺-二氯化二氨合铂(II)，通常称为顺铂或顺-DDP，为已知的抗癌药，其在临床中广泛使用，尤其在治疗睾丸癌中。其分子结构相对简单，含有在顺式位置的两个氯配体和两个NH3配体，以铂原子为中心形成四方形(正方形)平面结构。顺铂为电中性，4配位的柏络合物。然而，研究表明二水合(活性)形式促进与DNA的结合。顺铂通常以无菌盐水溶液静脉给药到血流中。由于血液中较高的氯浓度，该药物以其中性形式保持完整。然后该药物通过扩散进入细胞，其中该药物由于非常低的细胞内氯浓度经历了水解。水解将中性分子转化为活性水合的络合物，其中两个氯配体被水分子取代以产生带正电物质。活性形式为双功能的亲电试剂，其能够进行DNA碱基对的亲核取代。顺铂具有与双功能烷化剂相似的生化特性，产生在DNA中的链间、链内和单功能加成交联。最常见的形式为1，2-链内交联。在该加成中，铂共价结合到相邻嘌呤4^基的N7位。其结果是，DNA未缠绕并弯向大沟(majorgroove)。其它4白-DNA加成物包括单功能的和1，3-和较长范围的链内、链间和蛋白-DNA交联。研究表明大多数加成物包括鸟嘌呤残基，其提供与胞嘧啶形成氢键连接的三个位点，因此导致与腺噤呤和胸腺嗜咬之间可能形成的两个氬键相比具有更好的稳定性。顺柏-DNA加成物的形成扭曲了DNA的结构，从而导致复制和转录的破坏。而且，顺铂-DNA加成物的形成通过阻断或减慢修复蛋白质或负改变核苷酸切除修复(NER)蛋白，尤其是XPA的功能，从而破坏了细胞自我修复的能力。顺铂被批准用于治疗转移性非精原细胞瘤生殖细胞癌，晚期和耐药卵巢癌，肺癌，子宫颈，晚期和耐药膀胱癌，和头和颈的鳞状细胞癌。也表明顺铂与其它抗肺瘤剂组合用于治疗转移性睾丸癌。据报道顺铂、长春碱和博来霉素的组合具有很高效果。在一个优选实施方案中，所述组合包含CNDAC(作为CYC682的代谢产物)和顺铂。优选地，对于该实施方案，顺铂先于CNDAC给药，或二者同时给药。更优选地，顺铂先于CNDAC给药。在一个优选实施方案中，所述细胞毒性药物为紫杉烷。紫杉烷是一类来自紫杉属植物(紫杉属树木)的生物碱。紫杉烷类的主要机理是抑制微管功能，从而抑制细胞分裂。紫杉烷家族的成员包括多西他赛和紫杉醇。在一个优选实施方案中，本发明的组合包含CNDAC(作为CYC682的代谢产物)和作为细胞毒性药物的顺铂。优选地，对于该实施方案，顺铂先于CNDAC给药，或二者同时给药。在本发明一个高度优选的实施方案中，所述细胞毒性药物为多西他赛。多西他赛(docetaxel)是紫杉烷家族的抗癌药物，通过从欧洲紫杉树(roxw^cc"to)的可更新的针叶半合成制备得到。多西他赛在临床中广泛用于治疗许多癌症，包括局部进展或转移性乳腺癌，局部进展或转移性非小细胞肺癌和激素抵抗的前列腺癌。作用机理基于微管网络的断裂，所述微管网络在细胞分裂中起重要作用。最近的研究已经集中在多西他赛作为一线药物单独或组合治疗下述疾病的用途中，所述疾病为非小细胞肺癌、头颈癌、乳腺癌、胃癌、前列腺癌和卵巢癌。优选地，其中所述细胞毒性药物为多西他赛，细胞毒性药物和CYC682(或其代谢产物)分别或依次给药，更优选地，依次给药。在一个特别优选的实施方案中，其中所述细胞毒性药物为多西他赛，细胞毒性药物先于CYC682(或其代谢产物)给药，即优选地，患者用多西他赛预治疗。在另一个优选实施方案中，所述细胞毒性药物为长春花生物碱。长春花生物碱为一类来自长春花属植物长春花(0^/7ara"//2^myew"(也称rasea，丄oc/z"erarasea，和Xmwoc^torasea)的。引。呆-二氬卩引口呆二聚体。已知这类药物抑制微管蛋白聚合成微管，因此阻断纺锤体形成并使细胞停止在分裂中期。长春花生物碱包括长春碱、长春胺、长春瑞滨、长春新碱、长春地辛和长春西丁。在一个高度优选的实施方案中，所述细胞毒性药物为长春瑞滨。长春瑞滨被批准用于单独或组合作为一线药物，治疗3期或4期非小细胞肺癌，和治疗用含蒽环类抗生素治疗方案治疗后复发或对于含蒽环类抗生素治疗方案耐药的3期和4期晚期乳腺癌。在一个优选实施方案中，本发明的组合包含CNDAC(作为CYC682的代谢产物)和作为细胞毒性药物的长春瑞滨，对于该实施方案，所述长春瑞滨可以先于CNDAC给药，或同时给药，或在给药CNDAC后给药。在本发明一个高度优选的实施方案中，所述细胞毒性药物为胞嘧啶类似物。胞嗜咬为衍生自嘧啶的含氮碱，所述胞嘧咬出现在RNA和DNA中。更具体的，胞嘧啶为称为4-氨基嘧啶-2(1//)-酮的化合物，其具有下式结构。本文所用的术语"胞。密啶类似物"是指被化学修饰的胞嘧咬。示例性的化学修饰为氢被囟素、烷基、糖或其衍生物、酰基或氨基代替。优选地，所述胞嘧啶的化学修饰为在1位的氮被糖或其衍生物取代。因此在本发明中，优选的胞嗜咬类似物包括，但不限于，吉西他滨和阿糖胞苷(或阿糖胞苷，Ara-C，4-氨基-1-[(211，38,411，511)-3,4-二羟基-5-(羟基曱基)草脲胺_2-基]嘧啶_2_酮)。在本发明的一个高度优选的实施方案中，所述细胞毒性药物为吉西他滨。吉西他滨，2，-脱氧-2，，2，-二氟胞苷，为核苷类似物，其表现出抗肿瘤活性，尤其是抗卵巢癌、胰腺癌和肺癌。吉西他滨表现出细胞周期(cellphase)特异性，主要杀死正在经历DNA合成(S-期)的细胞，且也阻断了细胞通过Gl/S-期界限的进展。吉西他滨在细胞内被核苷激酶改变生成活性的二磷酸核苷(dFdCDP)和三磷酸核苦吉西他滨阿糖胞苦(dFdCTP)。由于二磷酸核香和三磷酸核芬的组合作用，吉西他滨的细胞毒作用可有助于抑制DNA合成。更具体地，二磷酸吉西他滨抑制核糖核苷酸还原酶，所述核糖核苷酸还原酶负责催化产生三磷酸脱氧核苦的反应，所述三磷酸脱氧核苷用于DNA的合成。通过二磷酸核苷抑制该酶导致脱氧核苷酸(例如dCTP)浓度的降低而且，三磷酸吉西他滨与dCTP竟争并入DNA。之后dCTP在细胞内浓度的减少促进三磷酸吉西他滨并入DNA(自身增强)。当吉西他滨核苷酸并入DNA后，仅有一种其它核苷酸^L加入到增长的DNA链中，之后不抑制进一步的DNA合成。DNA聚合酶不能移除吉西他滨核香酸和^f务复增长的DNA链(遮蔽链终止)。在CEMT成淋巴细胞样细胞中，吉西他滨包括核小体DNA的断裂，其特征在于程序性细胞死亡。在一个特别优选的实施方案中，所述细胞毒性药物为吉西他滨，且细胞毒性药物和CYC682同时给药。在另一个尤其优选的实施方案中，所述细胞毒性药物为吉西他滨，且细胞毒性药物和CYC682分别或依次给药，更优选地，依次给药。更优选地，所述CYC682先于吉西他滨给药，即优选地，患者用CYC682预治疗。在一个优选实施方案中，本发明的组合包含CNDAC(作为CYC682的代谢产物)和作为细胞毒性药物的吉西他滨。优选地，对于该实施方案，吉西他滨与CNDAC同时给药。增殖性疾病本文所用的术语"增殖性疾病"广义上包括任何需要控制细胞周期的疾病，例如心血管疾病如再狭窄和心脏病、自身免疫性疾病如肾小球肾炎和类风湿性关节炎、皮肤病如牛皮癣、抗炎性、抗真菌、抗寄生虫疾病如症疾、肺气肿和脱发病。在这些疾病中，本发明的化合物可按照需要在所需的细胞内诱导凋亡或保持停滞。对于上述所有方面和实施方案，优选所述增殖性疾病为癌症，更优选为结肠癌。在另一个优选实施方案中，所述癌症为肺癌，更优选为非小细胞肺癌。在一个优选实施方案中，当所述细胞毒性药物为吉西他滨时，所述增殖性疾病为肺癌、乳腺癌、膀胱癌或胰腺癌。在另一个优选实施方案中，当所述细胞毒性药物为奥沙利柏时，所述增殖性疾病为结肠直肠癌。在另一个优选实施方案中，当所述细胞毒性药物为多柔比星时，所述增殖性疾病为乳腺癌、前列腺癌或血癌。在另一个优选实施方案中，当所述细胞毒性药物为多西他赛时，所述增殖性疾病为乳腺癌、肺癌或前列腺癌。在另一个优选实施方案中，当所述细胞毒性药物为顺铂时，所述增殖性疾病为卵巢癌、肺癌、子宫颈癌、睾丸癌、膀胱癌或头和颈的磷状细胞癌。在另一个优选实施方案中，当所述细胞毒性药物为长春瑞滨时，所述增殖性疾病为乳腺癌或肺癌。更优选地，所述增殖性疾病为非小细胞肺癌。药物组合物在一个尤其优选的实施方案中，本发明的药物制品为药物组合物的形式，其包含可药用载体、稀释剂或赋形剂。尽管本发明的化合物(包括它们的可药用盐、酯和可药用溶剂合物)可以单独给药，但它们通常与药物载体、赋形剂或稀释剂混合给药，尤其是用于人类治疗时。药物组合物可用于人类或动物，在人用药和兽用药中使用。这些本文中描述的用于各种不同形式的药物组合物的适合赋形剂的实例可见于"HandbookofPharmaceuticalExcipients",第2版，(1994)，AWade和PJWeller编。治疗用的可接受的载体或稀释剂是药学领域公知的，且描述于例如Remington'sPharmaceuticalSciences,MackPublishingCo.(A.R.Gennaro编，1985)。适合的载体的实例包括乳糖、淀粉、葡萄糖、曱基纤维素、硬脂酸镁、甘露醇、山梨糖醇等。适合的稀释剂的实例包括乙醇、甘油和水。药学载体、赋形剂或稀释剂的选择可以根据计划的给药途径和标准的药学应用。所述药物组合物可包含(除载体、赋形剂或稀释剂外)任何合适的粘合剂、润滑剂、助悬剂、包衣剂、助溶剂。适合的粘合剂的实例包括淀粉、明胶、天然糖(如葡萄糖、无水乳糖、自由流动的乳糖、P-乳糖)、玉米增甜剂、天然和合成的胶(如阿拉伯胶、黄蓍胶或海藻酸钠)、羧曱基纤维素和聚乙二醇。合适的润滑剂的实例包括油酸钠、硬脂酸钠、硬脂酸镁、苯曱酸钠、乙酸钠、氯化钠等。药物组合物中可以提供防腐剂、稳定剂、染料和甚至芳香剂。防腐剂的实例包括苯曱酸钠、山梨酸和对羟基苯曱酸酯。也可以使用抗氧化剂和助悬剂。盐/酯本发明的试剂可以为盐或酯，尤其是可药用盐或酯。本发明的试剂的可药用盐包括其适合的酸加成盐或碱加成盐。适合的药学盐的综述可见于Berge等人，JPharmSci,66，1-19(1977)。盐为与例如以下酸形成的盐强无机酸，如矿物酸，如硫酸、磷酸或氢由酸；强有机羧酸，如未取代或取代(如被卣代)的1至4个碳原子的链烷羧酸，例如乙酸；饱和或不饱和的二羧酸，例如草酸、丙二酸、琥珀酸、马来酸、富马酸、邻苯二曱酸或四邻苯二甲酸(tetraphthalic);羟基羧酸，例如抗坏血酸、羟基乙酸、乳酸、苹果酸、酒石酸或柠檬酸；氨基酸，例如天冬氨酸或谷氨酸；苯曱酸；或有机磺酸，如未取代或取代(如被面代)的(C,-C4)烷基磺酸或芳基磺酸，如曱磺酸或对曱苯磺酸。取决于被酯化的官能团，使用有机酸或醇/氢氧化物形成酯。有机酸包括羧酸，如未取代或取代(如被卣代)的1至12个碳原子的链烷羧酸，例如乙酸；饱和或不饱和的二元羧酸，例如草酸、丙二酸、丁二酸、马来酸、富马酸、邻苯二曱酸或四邻苯二曱酸；羟基羧酸，例如抗坏血酸、羟基乙酸、乳酸、苹果酸、酒石酸或柠檬酸；氨基酸，例如天冬氨酸或谷氨酸；苯曱酸；或与有机磺酸，如未取代或取代(如被卣代)的(d-CO烷基磺酸或芳基磺酸，如曱磺酸或对曱苯磺酸。合适的氢氧化物包括无机氢氧化物，如氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化钙、氢氧化铝。醇包括未取代或取代(如被卣代)的1至12个碳原子的链烷醇。对映异构体/互变异构体本发明还适当地包括试剂的全部对映异构体和互变异构体。本领域的技术人员能认识到具有光学性质(一个或多个手性碳原子)或互变异构特征的化合物。可通过本领域中已知的方法分离/制备相应的对映异构体和/或互变异构体。立体异构体和几何异构体本发明的一些试剂可以立体异构体和/或几何异构体的形式存在，例如它们可具有一个或多个不对称和/或几何中心，并因此可以两种或多种立体异构和/或几何形式存在。本发明包括这些抑制剂试剂所有的单独立体异构体和几何异构体及它们的混合物的使用。权利要求中使用的术语包括这些形式，只要所述形式保留适当的功能活性(但不必到相同程度)。本发明还包括所述试剂或其可药用盐的所有合适的同位素变体。本发明的试剂或其可药用盐的同位素变体定义为其中至少一个原子被具有相同原子序数但原子质量与自然界中通常发现的原子质量不同的原子取代的物质。可被掺入到所述试剂和其可药用盐的同位素的例子包括氢、碳、氮、氧、磷、硫、氟和氯的同位素，分别如&、3H、13C、14C、15N、l70、180、"P、32p、35(S、18F和36C1。试剂和其可药用盐的一些同位素变体，例如结合放射性同位素如^或14C的那些化合物，在药物和/或底物组织分布研究中是有用的。含氚的即311和碳-14即14C同位素因其容易制备和可检测性而特别优选。此外，用同位素如氘即2H的取代可因较大的代谢稳定性而提供特定的治疗益处，例如体内半衰期增加或剂量要求降低，并因此可优选用于一些情况中。可药用盐的同位素变体。溶剂合物本发明也包括本发明试剂的溶剂合物形式。权利要求书中所用的术语包括这些形式。多晶型本发明还涉及各种晶型、多晶型和无水/水合形式的本发明的药剂。众所周知，在药方法和或分离形式来分离得到化合物的任意这类形式<前药本发明还包括前体药物形式的本发明的药剂。这种前体药物通常为一个或多个适当基团已被修饰以使在对人或哺乳动物对象给药后所述的修饰可被逆转的化合物。虽然为了实现体内逆转可与这种前体药物一起给药第二种药剂，但通常通过在这类对象中天然存在的酶实现这种逆转。这类修饰的例子包括酯(例如上述那些中的任一种)，其中可通过酯酶等进行逆转。其它这类系统为本领域中那些技术人员所熟知。给药本发明的药物组合物可适合于口服、直肠、阴道、胃肠外、肌内、腹膜内、动脉内、鞘内、支气管内、皮下、真皮内、静脉内、鼻、含服或舌下的途径给药。对于口服给药，尤其可用的是压缩片剂、丸剂、片剂、凝胶剂(gellules)、滴剂和胶嚢。优选地，这些组合物每剂量含有1至2000mg,且更优选50-1000mg的活'l"生成分。其它给药形式包括溶液或乳液，它们可经静脉内、动脉内、鞘内、皮下、皮内、腹膜内或肌内注射给药，并由无菌或可灭菌溶液制备。本发明的药物组合物还可为栓剂、阴道栓剂、混悬剂、乳液、洗液、软膏、乳膏剂、凝胶、喷雾剂、溶液或朴粉(dustingpoeder)的形式。经皮给药的替代方式是利用皮肤贴片。例如，可将有效成分掺入到由聚乙二醇含水乳液或液体石蜡组成的乳膏剂内。还可以l-io重量％的浓度将有效成分掺入到由白蜡或白色软石蜡基质与所需要的稳定剂和防腐剂共同组成的软膏内。可注射形式每剂可包含10-1000mg,优选10-500mg的活性成分。组合物可被配制成单元剂型，即包含单元剂量或单元剂量的多重单位或亚单位的形式的离散部分。在一尤其优选的实施方案中，静脉内给药所述本发明的组合或药物组合物。剂量本领域的普通技术人员不用额外试验就可容易地确定对患者给药的本发明的组合物的适宜剂量。通常，医师会确定对个体患者最适合的实际剂量，并且根据各种因素进行调整，包括使用的具体化合物的活性、化合物的代谢稳定性和作用长短、年龄、体重、一般健康状况、性别、饮食、给药方式和时间、排泄速度、药物组合、特定病症的严重程度和个体正接受的治疗。本文公开的剂量为一般情况的示例。当然也可有有益的较高或较低剂量范围个别情况，这都在本发明的范围内。根据需要，给药的试剂的剂量可为0.1-30mg/kg体重，如2-20mg/kg,更优选0.1-1mg/kg体重。指导性地，所述细胞毒性药物通常根据医师指导给药，剂量在所述细胞毒性药物的被批准的剂量内。所述剂量来自对每种试剂的产品性质的总结(SummaryofProductCharacteristics),其可以乂人供应商获4寻,或乂人文献，》口www.emea.eu.int/htms/human/epar/a-zepar.htm获得。指导性地，CYC682通常根据医师指导给药，对于成人患者剂量为0.05至5g。优选地，口服剂量为1至120mg/m2体表面积。剂量可以为在4周中每周5天，或在4周中每周3天。使用的剂量和频率通常要适应患者的身体状况和所引起的不良作用的严重程度，尤其是对造血、肝和肾系统造成的不良作用。CYC682的总日剂量可以作为单个剂量给药，或以分散剂量优选每天给药2、3或4次给药。优选地，在给药CYC682，或其代谢产物之前至少2小时，给药细胞毒性药物。更优选地，在给药CYC682，或其代谢产物之前至少4小时，或更优选至少6或8小时，给药细胞毒性药物。甚至更优选地，在给药CYC682,或其代谢产物之前至少12小时，或更优选至少18或24小时，给药细胞毒性药物。在另一个优选实施方案中，在给药CYC682,或其代谢产物之后至少2小时，给药细胞毒性药物。更优选地，在给药CYC682，或其代谢产物之后至少4小时，或更优选至少6或8小时，给药细胞毒性药物。甚至更优选地，在给药CYC682，或其代谢产物之后至少12小时，或更优选至少18或24小时，给药细胞毒性药物。i式剂盒(kitofparts)本发明的另一方面涉及试剂盒，其包含(i)2'-氰基-2'-脱氧-N、椋榈酰基-1-(3-D-阿拉伯呋喃糖基-胞嘧啶，或其代谢产物，任选与可药用稀释剂、赋形剂或载体混合；和(ii)细胞毒性药物，其选自(a)长春花生物碱；(b)紫杉烷；(c)胞嘧啶类似物；(d)蒽环类抗生素；和(e)铂类抗肿瘤剂，任选与可药用稀释剂、赋形剂或载体混合。本发明的一个特别优选的实施方案涉及试剂盒，其包含(i)2'-氰基-2'-脱氧-N"-棕榈酰基-1-(3-D-阿拉伯呋喃糖基-胞嘧啶，或其代谢产物，任选与可药用稀释剂、赋形剂或载体混合；和(ii)细胞毒性药物，其选自吉西他滨、奥沙利铂、多西他赛和多柔比星，任选与可药用稀释剂、赋形剂或载体混合。优选地，2'-氰基-2'-脱氧-N、棕榈酰基-l-!3-D-阿拉伯呋喃糖基-胞嘧啶，或其代谢产物，和细胞毒性药物，各自为单位剂型。优选地，试剂盒含有许多单位剂型的每种成分，即上述成分(i)和(ii)。任选地，试剂盒还可以包含适应特定给药方案的工具，例如说明书，指导何时、如何和以多少频率使用单位剂型的每种成分。通过实施例并结合以下附图进一步描述本发明，其中图1表示CYC682和CNDAC对系列(apanelof)细胞系的作用(％存活率对pM为单位的浓度作图)。图2表示次序1、2和3评估基于CYC682的组合的作用。暴露于药物之后暴露H72后立即进行读数。图3表示等效线图解，其表示在人COLO205和HCT116癌细胞系中CYC682和多西他赛的相互作用。图4表示等效线图解，其表示在人COLO205和HCT116癌细胞系中CYC682和吉西他滨的相互作用。图5表示等效线图解，其表示在人COLO205和HCT116癌细胞系中，CYC682和多柔比星的相互作用。图6表示等效线图解，其表示在人COLO205和HCT116癌细胞系中，CYC682和奥沙利鉑的相互作用。实施例材料和方法多柔比星和组织培养试剂由SigmaAldrich提供。CYC682由CyclacelLtd.(DundeeUK)提供。以临床制剂使用多西他赛(Taxotere⑧，Aventis)。吉西他滨由Lilly提供。奥沙利4白由Sanofi提供。顺柏和长春瑞滨购自SigmaAldrich。CYC682的制备(根据EP536936)根据EP536936(SankyoCompanyLimited)中的实施例1和2所述方法制备CYC682。细胞系所有细胞系购自ATCC(Rockville,MD)。细胞在补充有10%胎牛血清(Invitrogen，Cergy-Pontoise，France),2mM谷氨酰胺，100单位/ml青霉素和100lig/ml链霉素的RPMI培养基中单层生长。所有细胞每周使用胰蛋白酶/EDTA(分别为0,25%和0.02%;Invitrogen,Cergy-Pontoise，法国)分离两次，并以2.5x104个细胞/ml的浓度接种。使用Stratagene试剂盒(LaJolla，CA)通过PCR定期检测所有细胞系的支原体污染。体外生长抑制实验(MTT实验)MTT实验如以前所述进行(HansenMB,NielsenSE,BergK.Re-examinationandfartherdevelopmentofapreciseandrapiddyemethodformeasuringcellgrowth/cellkill.JImmunolMethods.1989May12;119(2):203-10)。简言之，将细胞接种在96-孔组织培养板中，密度为2x103个细胞/孔。培养120小时后检测细胞存活率，通过黄色的水溶性四唑错盐MTT溴化(3-[4，5-二曱基噻唑-2-yl]-2,5-二苯基四唑錄；Sigma,Saint-QuentinFallavier,France)转变为紫色水不溶性曱腈的色度转变^r测。该反应通过线粒体脱氢酶催化，并用于估算存活细胞的相对数量(Mosmann,T，Rapidcolorimetricassayforcellulargrowthandsurvival:applicationtoproliferationandcytotoxicityassays.JImmunolMethods.1983Dec16;65(l-2):55-63)。细月包在37°C用0.4mg/ml的MTT培养4小时。培养后，弃去上清液，细胞沉淀再悬于0.1ml的DMSO中，并在560nm处使用微量培养板读数器(Dynatech，Michigan)检测吸光度。使用含未处理的细胞的孔或含药培养基而不含细胞的孔分别作为阳性和阴性对照。以相对于未处理的对照组细胞的百分比绘制生长抑制曲线。单试剂研究将细胞以2x103个细胞/孔接种于96-孔板中，且24小时后用浓度递增的CYC682处理。培养1小时、24小时或48小时后，洗涤细胞，然后再用不含药物的培养基后培养72小时。然后通过MTT实验检测生长抑制。同时暴露于CYC682和其它药物对于同时药物暴露，将细胞以2x103个细胞/孔接种在96-孔板中，且24小时后单独用浓度递增的CYC682处理，或用CYC682与对应于IC2Q、IC40或IC6o值的多种浓度的另一种药物处理。大约四次加倍(fourdoublingtimes)(120小时)后，通过MTT实-验^r测生长抑制效果。依次暴露于CYC682和其它药物将细胞以2x103个细胞/孔接种在96-孔板中，使其生长24小时。然后将细胞暴露于多种浓度的第一种药物中1小时/24小时/48小时，移出药物，洗涤细胞，然后加入第二种药物。再次暴露于药物后，移出第二种药物，洗涤细胞，然后在没有药物的培养基中培养72小时。然后通过MTT实验检测生长抑制。CNDAC组合在96-孔板中，进行NSCLC细胞系H1299或RERF-LC-MA实验，细胞以密度3,000/孔接种于含有10%(v/v)FCS的DMEM中。所有药物于二曱亚砜中制成储备液，吉西他滨除外，吉西他滨溶于0.9。/。(w/v)无菌盐水溶液。对于可能的协同相互作用的实验评估，同时处理方案涉及同时用CNDAC和另一种研究药物处理细胞72小时，同时用单个化合物单独地处理细胞72小时作为适合的对照。在该依次处理方案中，接种后2小时向细胞中加入一种药物并放置24小时。然后抽吸培养基，用含有第二种药物的新鲜培养基替换，然后培养72小时。对于依次处理方案中的两个单个处理对照，用不含药物的培养基替换其中药物处理之一。药物处理后，通过在含有10%alamarblue(Roche,Lewes，EastSussex,U.K.)的培养基中培养1小时并在488-595nm处检测吸光度而评估每孔中的细胞数。使用下述Calcusyn软件包(BioSoft,Cambridge,U.K.)分析药物相互作用。组合指数(combinationindex,C丄)为1表示具有相加的药物相互作用，而C丄大于1表示拮抗作用，且分数小于l表示协同作用。协同作用活性的统计学分析和检测使用基于半数有效(median-effect)原理的Chou和Talalay方法(ChouTC，TalalayRQuantitativeanalysisofdose-effectrelationships:thecombinedeffectsofmultipledrugsorenzymeinhibitors.AdvEnzymeRegul.1984;22:27隱55)评估药物组合的作用。其涉及对于每种药物的量-效曲线，且对于多次稀释、固定比例的组合使用方程fa/fu=(C/Cm)m，其中fa为被药物浓度C影响的细胞分数(例如，如果细胞增长被抑制了90%,则为0.9),fu未被影响的分数，C为药物浓度，ICso为对于最大效果的一半(即，50%抑制细胞生长)所需的浓度，且m为浓度-效果曲线的sigmoidicity系数。根据对于组合中每种药物的曲线的斜率，可以确定药物是否具有相互非独立的作用(如，独立作用或相互作用)。然后通过下述方程确定组合指数CCI):CI=,]+[(C)2/(Cx)2]+[a(C)'(C)2/(Cx),(Cx)2]，其中(Cx),为单独使用药物1产生的x百分数效果所需的药物1的浓度，且(C)!为与(C)2组合时产生的X百分数效果所需的药物1的浓度。如果药物的作用方式是相互独立或非独立的，那么a分别为0或l。CI值将根据该方程使用不同的fa值(即对于不同程度的细胞生长抑制)计算。CI值〈1表示协同作用，该值为l表示加和作用，该值大于l表示拮抗作用。在IBM-PC计算机上使用对于微机软件的浓度-效果分析(Biosoft,Cambridge,UK)来分析数据。对于统计学分析和作图，我们将使用Instat和Prism软件(GraphPad,SanDiego，USA)。对于单独或成对组合的所检测的药物的量-效关系，使用半数有效作图分析以确定它们在各所选定的细胞系中的相对作用(IC50)、适应性(shape)(m)和相容性(conformity)(r)。如上所述，ICso和m值分别用于计算基于CI方程的协同作用和拮抗作用。结果以成对进行的至少3组实验的平均数土标准差表示。在每个实验中，细胞暴露于如上所述的成对组合48小时。使用Student'sW全验(双侧；？值)比较均数和标准差。结果单个试剂研究CYC682和CNDAC作为单个试剂在系列人癌细胞系中的抗增殖作用图1表示CYC682和CNDAC在系列细胞系中的作用。每个点为至少3个单独实验(每个实验一式二份)的平均数。暴露48小时的IC50s见表1。检测暴露于CYC682和CNDAC24小时，且发现对于CNDAC的细胞毒性是不足的。表明48-小时暴露对于在最敏感的人癌细胞系中观察CYC682的抗增殖活性是最佳的。每个点为至少3个单独实验(每个实验一式二份)的平均数。CYC682显示出对抗几种人癌细胞系的细胞毒性作用，HCT116为最敏感的癌细J包系。CYC682的细胞毒性与其它抗癌药物的细胞毒性比较比较在CYC682与其它一些抗癌药物之间的细胞毒性作用中进行(表1)，所述抗癌药物包括奥沙利铂、顺铂、多柔比星、吉西他滨、长春瑞滨、5FU和阿糖胞苷。数据表明CYC682在大多数癌细胞系中表现出微摩尔级浓度的抗增殖活性，且其作用性质(profile)不同于经典的抗癌药物，如奥沙利铂和顺铂，以及紧密相关的抗代谢药，如阿糖胞苷和吉西他滨的作用性质。这表明在人癌细胞中，CYC682的作用和耐药机理可能，至少部分地，不同于阿糖胞香和吉西他滨。药物组合研究在两种敏感性结肠癌细胞系-COLO205和HCT116中，使用组合指数，对依次和同时暴露于CYC682与奥沙利铂、多柔比星、多西他赛和吉西他滨的作用进行研究(图2),所述组合指数表示如上述Chou和Talalay所述的对于相应IC50的药物浓度的受影响的分数。多西他赛-CYC682组合如图3中所述，在两种细胞系中，当多西他赛先于CYC682给药时，观察到协同作用。吉西他滨-CYC682组合在两种细胞系中，给药吉西他滨后，给药CYC682具有协同作用(图4)。CYC682和吉西他滨之间的协同作用表明，虽然紧密相关，但两种化合物对癌细胞可具有不同的作用机理。多柔比星-CYC682组合使用依次暴露，在高浓度得到CYC682与多柔比星的组合的协同作用(图5)。奥沙利铂-CYC682组合在HCT116细胞中，当CYC682先于或后于奥沙利铂给药时，CYC682与奥沙利铂的组合导致协同活性(图6)。在COLO205细胞中，当CYC682先于奥沙利铂给药时得到协同作用。CNDAC组合检测CNDAC与多柔比星、顺鉑、吉西他滨或多西他赛的组合，且结果表明所有这些组合产生协同的药物相互作用(表3)。在H1299细胞中，也检测CNDAC与长春瑞滨的组合，且结果表明在所有3种所检测的处理方案中产生协同作用(表4)。在H1299细胞中，用多柔比星预处理和同时处理方案，CNDAC和多柔比星在ED50(当50。/o细胞^C杀死)产生协同作用。在ED50，用顺铂预处理时，CNDAC和顺铂产生协同作用；当共同处理时，CNDAC和顺柏产生弱的协同作用。在共同处理方案中，检测CNDAC和吉西他滨，该组合在ED50产生协同作用。讨论上述数据表明CYC682表现出对抗较宽范围的人癌细胞系的细胞毒性作用，HCT116为最敏感的。CYC682和CNDAC表现出不同于经典代谢产物的特定活性谱，所述经典代谢物如阿糖胞苷、吉西他滨、5FU和其它细胞毒性药物(奥沙利铂、顺铂、多柔比星、长春瑞滨、多西他赛)。在人结肠癌细胞和NSCLC细胞中，当CYC682(或CNDAC)与下述药物以较宽浓度范围组合时，组合研究表明了协同作用，所述药物如奥沙利鉑、吉西他滨、多西他赛、长春瑞滨、顺铂和多柔比星。CYC682和吉西他滨之间的协同作用强烈表明尽管紧密相关，但这两种化合物在癌症细胞中具有不同的作用^L理。在不脱离本发明的范围和精神的情况下，本发明的各种改变和变化对本领域的那些技术人员来说是显而易见的。尽管已结合具体的优选实施方案描述了本发明，但应该认识到要求的本发明不应该不适当地限制至这种具体实施方案。事实上，对相关领域那些技术人员明显的用于实施本发明上述方式的各种改变都被本发明覆盖。<table>tableseeoriginaldocumentpage33</column></row><table>表3和4:CNDAC与多种细胞毒性药物组合得到的结果的总结。细胞用CNDAC与所示的细胞毒性药物组合处理，使用3种不同的处理方案，如实施例部分所述。结果为至少3个独立实验的平均数。<table>tableseeoriginaldocumentpage34</column></row><table>权利要求1.组合，其包含2′-氰基-2′-脱氧-N4-棕榈酰基-1-β-D-阿拉伯呋喃糖基-胞嘧啶，或其代谢产物，或其可药用盐，和细胞毒性药物，其中所述细胞毒性药物选自(a)长春花生物碱；(b)紫杉烷；(c)胞嘧啶类似物；(d)蒽环类抗生素；和(e)铂类抗肿瘤剂。2.根据权利要求1的组合，其中所述长春花生物碱选自长春碱、长春新碱、长春地辛和长春瑞滨。3.根据权利要求1或权利要求2的组合，其中所述长春花生物碱为长春瑞滨。4.根据权利要求1的组合，其中所述紫杉烷选自多西他赛和紫杉醇。5.根据权利要求l的组合，其中所述紫杉烷为多西他赛。6.根据权利要求1的组合，其中所述胞嘧啶类似物选自吉西他滨和阿糖胞苷。7.根据权利要求l的组合，其中所述胞嘧啶类似物为吉西他滨。8.根据权利要求1的组合，其中所述蒽环类抗生素选自多柔比星、柔红霉素、伊达比星、表柔比星和米托蒽醌。9.根据权利要求1的组合，其中所述蒽环类抗生素为多柔比星。10.根据权利要求1的组合，其中所述铂类抗肺瘤剂选自顺铂、奥沙利铂和卡铂。11.根据权利要求1的组合，其中所述铂类抗肿瘤剂为顺铂。12.根据权利要求l的组合，其中所述铂类抗肺瘤剂为奥沙利铂。13.根据上述权利要求中任一项的组合，其中所述代谢产物为l-(2-C-氰基-2-脱氧-(3-D-阿拉伯-呋喃戊糖基)-胞嘧啶。14.药物组合物，其包含上述权利要求中任一项的组合和可药用载体、稀释剂或赋形剂。15.权利要求1-14中任一项的组合在制备用于治疗增殖性疾病的药物中的用途。16.药物制品，其包含(i)2'-氰基-2'-脱氧-N、棕榈酰基-l-l3-D-阿拉伯呋喃糖基-胞嘧啶，或其代谢产物，或其可药用盐，和(ii)细胞毒性药物，其中所述细胞毒性药物选自(a)长春花生物碱；(b)紫杉烷；(c)胞嘧啶类似物；(d)蒽环类抗生素；和(e)铂类抗肿瘤剂，作为在治疗中同时、依次或分别使用的组合制剂。17.根据权利要求16的药物制品，其中所述2'-氰基-2'-脱氧-N、棕榈酰基-l-P-D-阿拉伯呋喃糖基-胞嘧啶，或其代谢产物，和细胞毒性药物为同时给药。18.根据权利要求16的药物制品，其中所述2'-氰基-2'-脱氧-N"-棕榈酰基-l-(3-D-阿拉伯呋喃糖基-胞嘧啶，或其代谢产物，和细胞毒性药物为依次或分别给药。19.根据权利要求18的药物制品，其中在给药2'-氰基-2'-脱氧-N气棕榈酰基-l-P-D-阿拉伯呋喃糖基-胞嗜啶，或其代谢产物之前，依次或分别给药细胞毒性药物。20.根据权利要求18的药物制品，其中在给药细胞毒性药物之前，依次或分别给药2'-氰基-2'-脱氧-N、棕榈酰基-l-P-D-阿拉伯呋喃糖基-胞嘧啶，或其代谢产物。21.根据权利要求14-20中任一项的药物制品，其中所述长春花生物碱选自长春》威、长春新-威、长春地辛和长春瑞滨。22.根据权利要求14-21中任一项的药物制品，其中所述长春花生物碱为长春瑞滨。23.根据权利要求14-20中任一项的药物制品，其中所述紫杉烷选自多西他赛和紫杉醇。24.根据权利要求14-20中任一项的药物制品，其中所述紫杉烷为多西他赛。25.根据权利要求14-20中任一项的药物制品，其中所述胞嘧啶类似物选自吉西他滨和阿糖胞苷。26.根据权利要求14-20中任一项的药物制品，其中所述胞嘧啶类似物为吉西他滨。27.根据权利要求14-20中任一项的药物制品，其中所述蒽环类抗生素选自多柔比星、柔红霉素、伊达比星、表柔比星和米托蒽醌。28.根据权利要求14-20中任一项的药物制品，其中所述蒽环类抗生素为多柔比星。29.根据权利要求14-20中任一项的药物制品，其中所述铂类抗胂瘤剂选自顺铂、奥沙利铂和卡铂。30.根据权利要求14-20中任一项的药物制品，其中所述铂类抗肿瘤剂为顺柏。31.根据权利要求14-20中任一项的药物制品，其中所述铂类抗肿瘤剂为奥沙利铂。32.根据权利要求14-31中任一项的药物制品，其中所述代谢产物为1-(2-0氰基-2-脱氧-卩-0-阿拉伯-呋喃戊糖基)-胞嘧咬。33.权利要求14-32中任一项的药物制品，其为包含可药用载体、稀释剂或赋形剂的药物组合物形式。34.根据权利要求14-33中任一项的药物制品，其用于治疗增殖性疾病。35.根据权利要求34的药物制品，其中所述增殖性疾病为癌症。36.—种治疗增殖性疾病的方法，所述方法包含同时、依次或分别给药2'-氰基-2'-脱氧-N气棕榈酰基-1-P-D-阿拉伯呋喃糖基-胞嘧啶，或其代谢产物，或其可药用盐，和细胞毒性药物，其中所述细胞毒性药物选自(a)长春花生物碱；(b)紫杉烷；(c)胞嘧啶类似物；(d)蒽环类抗生素；和(e)铂类抗肿瘤剂。37.根据权利要求36的方法，其中所述代谢产物为l-(2-C-氰基-2-脱氧-(3-0-阿拉伯-呋喃戊糖基)-胞嘧啶。38.根据权利要求36或权利要求37的方法，其中所述2'-氰基-2'-脱氧^4-棕榈酰基-1+-0-阿拉伯呋喃糖基-胞嗜啶，或其代谢产物，和细胞毒性药物，对于单个成分各自以治疗有效量给药。39.根据权利要求36或权利要求37的方法，其中所述2'-氰基-2'-脱氧->^4-棕榈酰基-1+-0-阿拉伯呋喃糖基-胞嘧啶，或其代谢产物，和细胞毒性药物，对于单个成分各自以亚治疗有效量给药。40.根据权利要求36-39中任一项的方法，其中所述2'-氰基-2'-脱氧-N4-椋榈酰基-l-(3-D-阿拉伯呋喃糖基-胞嘧咬，或其代谢产物，和细胞毒性药物为同时给药。41.根据权利要求36-39中任一项的方法，其中所述2'-氰基-2'-脱氧-N、棕榈酰基-l-P-D-阿拉伯呋喃糖基-胞嘧啶，或其代谢产物，和细胞毒性药物为依次或分别给药。42.根据权利要求41的方法，其中在给药2'-氰基-2'-脱氧-N、棕榈酰基-l-卩-D-阿拉伯呋喃糖基-胞嘧啶，或其代谢产物之前，依次或分别给药细胞毒性药物。43.根据权利要求41的方法，其中在给药细胞毒性药物之前，依次或分别给药2'-氰基-2'-脱氧-N"-棕榈酰基-l-P-D-阿拉伯呋喃糖基-胞嘧啶，或其代谢产物。44.根据权利要求36-43中任一项的方法，其中所述增殖性疾病为癌症。45.根据权利要求44的方法，其中所述癌症为结肠癌。46.2'-氰基-2'-脱氧-N、棕榈酰基-l-P-D-阿拉伯呋喃糖基-胞嘧啶，或其代谢产物，或其可药用盐在制备用于治疗增殖性疾病的药物中的用途，其中所述治疗包含同时、依次或分别向患者给药细胞毒性药物，其中所述细胞毒性药物选自(a)长春花生物^成；(b)紫杉烷；(c)胞嗜啶类似物；(d)蒽环类抗生素；和(e)铂类抗肿瘤剂。47.细胞毒性药物在制备用于治疗增殖性疾病的药物中的用途，所述细胞毒性药物选自(a)长春花生物碱；(b)紫杉烷；(c)胞嘧啶类似物；(d)蒽环类抗生素；和(e)铂类抗肿瘤剂，其中所述治疗包含同时、依次或分别向患者给药2'-氰基-2'-脱氧-N、棕榈酰基-l-P-D-阿拉伯呋喃糖基-胞嘧啶，或其代谢产物，或其可药用盐。48.2'-氰基-2'-脱氧-N"-棕榈酰基-l-(3-D-阿拉伯呋喃糖基-胞嘧啶，或其代谢产物，或其可药用盐，和细胞毒性药物在制备用于治疗增殖性疾病的药物中的用途，所述细胞毒性药物选自(a)长春花生物碱；(b)紫杉烷；(c)胞嘧啶类似物；(d)蒽环类抗生素；和(e)铂类抗胂瘤剂。49.细胞毒性药物在制备用于治疗增殖性疾病的药物中的用途，所述细胞毒性药物选自(a)长春花生物碱；(b)紫杉烷；(c)胞嘧啶类似物；(d)蒽环类抗生素；和(e)铂类抗肿瘤剂，其中所述药物用于与2'-氰基-2'-脱氧-NM宗榈酰基-l-f3-D-阿拉伯呋喃糖基-胞嗜啶，或其代谢产物，或其可药用盐的组合治疗。50.2'-氰基-2'-脱氧-NM宗榈酰基-l-P-D-阿拉伯呋喃糖基-胞嘧啶，或其代谢产物，或其可药用盐在制备用于治疗增殖性疾病的药物中的用途，其中所述药物用于与细胞毒性药物的组合治疗，所述细胞毒性药物选自(a)长春花生物碱；(b)紫杉烷；(c)胞嘧啶类似物；(d)蒽环类抗生素；和(e)柏类抗肿瘤剂。51.2'-氰基-2'-脱氧-N、棕榈酰基-l-(3-D-阿拉伯呋喃糖基-胞嘧啶，或其代谢产物，或其可药用盐在制备用于治疗增殖性疾病的药物中的用途，其中所述药物用于以细胞毒性药物的预处理治疗中，所述细胞毒性药物选自(a)长春花生物碱；(b)紫杉烷；(c)胞嘧啶类似物；(d)蒽环类抗生素；和(e)铂类抗肿瘤剂。52.根据权利要求46-51中任一项的用途，其中所述代谢产物为l-(2-C-氰基-2-脱氧-P-D-阿拉伯-呋喃戊糖基)-胞嗜啶。53.根据权利要求46-52中任一项的用途，其中所述增殖性疾病为癌症。54.根据权利要求39的用途，其中所述癌症为结肠癌。55.试剂盒，其包含(i)2'-氰基-2'-脱氧-N^棕榈酰基-l-P-D-阿拉伯呋喃糖基-胞嘧啶，或其代谢产物，任选与可药用稀释剂、赋形剂或载体混合；和(ii)细胞毒性药物，其选自(a)长春花生物碱；(b)紫杉烷；(c)胞嗜啶类似物；(d)蒽环类抗生素；和(e)铂类抗肿瘤剂，任选与可药用稀释剂、赋形剂或载体混合。56.基本上如本文所述的组合、药物制品、方法或用途。全文摘要本发明的第一方面涉及组合，其包含2′-氰基-2′-脱氧-N⁴-棕榈酰基-1-β-D-阿拉伯呋喃糖基-胞嘧啶，或其代谢产物，或其可药用盐，和细胞毒性药物，其中所述细胞毒性药物选自(a)长春花生物碱；(b)紫杉烷；(c)胞嘧啶类似物；(d)蒽环类抗生素；和(e)铂类抗肿瘤剂。本发明的第二方面涉及包含上述组合的药物制品，作为在治疗中同时、依次或分别使用的组合制剂。本发明的第三方面涉及治疗增殖性疾病的方法，所述方法包括同时、依次或分别给药上述组合。文档编号A61P35/00GK101355969SQ200680050955公开日2009年1月28日申请日期2006年11月13日优先权日2005年11月11日发明者伊恩·弗莱明,埃里克·雷蒙德,西蒙·格林申请人:西克拉塞尔有限公司