专利名称：：一类具有细胞毒活性哌嗪类衍生物的制备方法和用途的制作方法
技术领域：
：本发明属于有机化学、药物化学和药理学领域，具体而言，本发明涉及具有细胞毒活性的哌嗪类衍生物的制备方法和用途。经药理活性测试，该类化合物对三株肿瘤细胞如前列腺癌细胞(PC-3)，鼻咽癌细胞(CNE)，口腔上皮癌细胞株(KB)的生长具有较强的抑制活性，可以预期作为抗肿瘤药物用途。技术背景目前，由于工业发展带来的环境污染等问题，人类的生存环境质量不断下降，肿瘤疾病的发病率和致死率也不断上升。然而目前临床所用的细胞毒性抗肿瘤药物的选择性不高，导致对正常细胞的恶性杀伤，限制了该类药物的普遍使用性。因此，寻找和发现新的选择性高的细胞毒性抗肿瘤药物是世界范围内的研究热点。我们也致力于这类药物的研究。哌嗪衍生物通常具有优良的药效学性质，可作为抗肿瘤药、止痛和镇静剂、强心剂等。本发明的目的在于对这类化合物进行合成和结构改造，以期寻找对肿瘤细胞株生长产生更强抑制作用的哌嗪衍生物。根据全世界尤其是中国的常发肿瘤疾病谱及肿瘤细胞的敏感性，我们选择了人前列腺癌细胞(PC-3)，鼻咽癌细胞(CNE)，口腔上皮癌细胞(KB)作为体外细胞毒活性药理评价的指标。本发明制备得到的哌嗪类衍生物对上述肿瘤细胞的生长具有较强的抑制活性，可以预期作为抗肿瘤药物用途。由此完成了本发明。
发明内容本发明的目的在于提供一种具有细胞毒活性的杂环化合物。具体而言，本发明提供了一种具有式(I)所示的哌嗪类衍生物及其可药用盐:其中X选自氧或氢原子；Ri、R2、R3可以相同或不同，分别选自卤素，氢原子，羟基，或含15个碳的烷氧基，RpR2、R3还可以形成偕二甲氧基；R4基团选自氢原子，酯基，取代或未取代的苄基，取代或未取代的五元或六元脂环，或者取代或未取代的五元或六元芳香环；用来取代的取代基选自15个碳的烷氧基，卤素，或者57元的芳环或脂环。本发明的另一目的是提供了制备式(I)化合物和其中间体的制备方法；本发明的再一目的是提供了式(I)化合物及其中间体用于制备防治肿瘤疾病药物的用途；本发明的又一目的是提供了一种含有式(I)化合物及其中间体的用于防治肿瘤疾病的药物组合物。本发明优选的式(I)化合物选自W.[4-(3,4-亚甲二氧基苯氧基)苯基][4-(2-甲氧基苯基)哌嗪-l-基]甲酮；1-2.[4-(3，4-亚甲二氧基苯氧基)苯基][4-(3，4-二氯苄基)哌嗪-l-萄甲酮;W.[4-(3,4-亚甲二氧基苯氧基)苯基][4-(4-氟苯基)哌嗪-l-蜀甲酮；K[4-(3，4-亚甲二氧基苯氧基)苯基](4-环己基哌嗪-l-基)甲酮；[4-(3,4-二氯苄基)哌嗪-l-基][4-(3-甲氧基苯氧基)苯萄甲酮；[4-(3,4-二氯苄基)哌嗪-l-萄[4-(4-甲氧基苯氧基)苯蜀甲酮；1-7.[4-(4-氟苄萄哌嗪-l-基][4-(3-甲氧基苯氧基)苯基]甲酮；1-8.[4-(4-氟苄萄哌嗪-1-蜀[4-(4-甲氧基苯氧基)苯基]甲酮；1-9.[4-(3，4-二甲氧基苄基)哌嗪-l-基][4-(3-甲氧基苯氧基)苯基]甲酮；1-10.[4-(3,4-亚甲二氧基苯氧基)苯基][4-(4-氟苄基)哌嗪-l-基]甲酮；L11.[4-(3，4-亚甲二氧基苯氧基)苯甲酰基哌嗪基]-1-甲酸乙酯；1-12.[4-二苯甲基哌嗪-l-基][4-(3,4-亚甲二氧基苯氧基)苯基]甲酮；1-13.[4-(3，4-二甲氧基苄基)哌嗪-l-基][4-(3，4-亚甲二氧基苯氧基)苯基]甲酮；1_14.[4-(3,4-二氯苯基)哌嗪-l-基][4-(3，4-亚甲二氧基苯氧基)苯基]甲酮；1-15.1-二苯甲基-4-[4-(3-甲氧基苯氧基)苄基]-哌嗪；1-16.1-(3，4-二氯苄基)-4-[4-(3-甲氧基苯氧基)苄基]-哌嗪;1-17.4-[4-(3-甲氧基苯氧基)苄基]哌嗉基-1-甲酸乙酯；1-18.1-(2-甲氧基苯基)-4-[4-(3-甲氧基苯氧基)苄基]-哌嗪；1-19.1-(3，4-二氯苯基)-4-[4-(3-甲氧基苯氧基)苄基]-哌嗪;1-20.(2-呋喃基)[4-(3-甲氧基苯氧基)苄基哌嗪-l-基]甲酮；1-21.l-(4-氟苯基)-4-[4-(3-甲氧基苯氧基)苄基]-哌嗪。1—91—10<formula>formulaseeoriginaldocumentpage6</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage7</formula>式(I)所示的化合物，以及各中间体的具体制备过程如下所示:方法l:其中RhR2、R3可以相同或不同，分别选自卤素，氢原子，羟基，或含15个碳的垸氧基，Ri、R2、R3还可以形成偕二甲氧基；R4基团选自氢原子，酯基，取代或未取代的苄基，取代或未取代的五元或六元脂环，或者取代或未取代的五元或六元芳香环；用来取代的取代基选自15个碳的垸氧基，卤素，或57元的芳环或脂环。式(I)化合物及其制备中间体具有重要的生物活性，体外试验表明此类具有哌嗪类衍生物结构的化合物对人口腔上皮癌细胞(KB)、人前列腺癌细胞(PC-3)和人鼻咽癌细胞(CNE)显示出显著的细胞毒活性，表明该类杂环化合物有可能发展成为抗肿瘤药物。本发明的式(I)化合物及其制备中间体或其可药用盐可以与药学上常用的辅料或载体结合，制备得到具有抗肿瘤用途的药物组合物。上述药物组合物可以采用注射剂、片剂或胶囊等剂型药物。具体实施方式下面通过制备例和实施例进一步说明本发明。实施例给出了代表性新化合物的合成及相关结构鉴定数据以及部分活性数据。其中Me代表甲基(CH3)，OEt代表乙氧基(OCH2CH3)，DCM代表二氯甲烷，DMF代表N，N-二甲基甲酰胺，THF代表四氢呋喃，DCC代表二环己基碳二亚胺，DMAP代表4-二甲氨基吡啶。度量单位毫克以"mg"表示，毫摩尔以"mmol"表示，毫升以"ml"表示。核磁共振谱中MHz表示兆赫兹，J为耦合常数(用赫兹Hz表示其数值)。必须说明，下述实施例是用于说明本发明而不是对本发明的限制。根据本发明的实质对本发明进行的简单改进都属于本发明要求保护的范围。制备例l:化合物II-1(4-(4-甲氧基苯氧基)苯甲酸甲酯)的制备'COOMe化合物n—i在50毫升三口烧瓶中，氮气保护下依次加入对碘苯甲酸甲酯(262mg，l.Ommol)，对甲氧基苯酚(248mg，2.0mmol)，碳酸铯(Cs2C03)(980mg,3.0mmol)，碘化铜(Cul)(19mg，0.1mmol)，l-苯基-l，3-二丁酮(33mg,0.2mmo1)和1，4-二氧六环(10ml)。混合物升温到100'C下搅拌12小时，冷却至室温，过滤，向滤液中加入水(50ml)和乙酸乙酯(50ml)，乙酸乙酯萃取(2x50ml)，合并有机相，水洗(2x50ml)。无水硫酸钠干燥，抽滤，减压蒸除乙酸乙酯后，硅胶柱层析(石油醚乙酸乙酯=5:1)得到白色固体220mg，分离收率Y=86%。熔点94.5-95.5°C;核磁共振氢谱。HNMR)(400MHz，氖代氯仿)S7.97(双双峰,2H,/=2.0,6.8Hz)，7.01(双双峰，2H,J=2.0，6.8Hz)，6.92(双峰，4H，《/=8.4Hz),3.88(单峰，3H),3.82(单峰，3H)。制备例2:化合物II-2(4-(3-甲氧基苯氧基)苯甲酸甲酯)的制备'COOMe化合物n-2根据制备例1的方法制备化合物II-2，其中酚用3-甲氧基苯酚而不是对甲氧基苯酚。分离收率￥=78%;熔点53.5~55.5°C;核磁共振氢谱&NMR(400MHz，氖代氯仿)S8.00(双峰，2H，/=8,8Hz),7.28(多重峰，1H),7.01(双峰，2H，/=8.8Hz)，6.74(双双峰，1H，J=2.8，8,0Hz),6.63(多重峰，2H)，3.90(单峰，3H),3.79(单峰，3H)。制备例3:化合物II-3(4-(3，4-亚甲二氧基苯氧基)苯甲酸甲酯)的制备:根据制备例1的方法制备化合物II-3，其中酚用3，4-亚甲二氧基苯酚而不是对甲氧基苯酚。分离收率￥=83%;熔点70~71°C;核磁共振氢谱&NMR(400MHz,氘代氯仿)57.98(双峰，2H，/=8.8Hz)，6.94(双峰，2H，J=8.8Hz)，6.80(双峰，1H，《/=8.4Hz)，6.60(双峰，1H，《/=2.4Hz)，6.54(双双峰，1H，《/=2.4,8.4Hz)，6.00(单峰，2H),3.89(单峰，3H)。制备例4:化合物III-1(4-(4-甲氧基苯氧基)苯甲酸)的制备化合物II-l(220mg，0.85mmol)在10mlTHF和10mlIN氢氧化锂(LiOH)溶液中在室温下搅拌过夜，除去THF后，用3N盐酸(HC1)溶液中和至pH值为3，乙酸乙酯提取(3x50ml)，干燥，减压蒸除乙酸乙酯后得粗产品203mg。未进一步纯化直接用于下一步反应。制备例5:化合物III-2(4-(3-甲氧基苯氧萄苯甲酸)的制备<formula>formulaseeoriginaldocumentpage10</formula>vCOOH化合物m-2以化合物II-2为原料制备得到。根据制备例4的方法制备例6:化合物III-3(4-(3，4-亚甲二氧基苯氧基)苯甲酸)的制备:根据制备例4的方法，以化合物n-3为原料制备得到。制备例7:化合物IV-2(4-(3-甲氧基苯氧基)苯甲醇)的制备:化合物II-2(258mg,1.0mmol)在10mlTHF中在0。C下分批加入LiAlH4G8mg，l.Ommol)，加完后逐渐升温到室温过夜，TLC检测显示原料已经反应完，反应用10ml水和10mi乙酸乙酯淬灭，分层后，水层用乙酸乙酯提取(3x10ml)，合并有机层，干燥，减压蒸除乙酸乙酯后得粗产品218mg。未进一步纯化直接用于下一步反应。核磁共振氢谱&NMR(400MHz,気代氯仿)S7.33(双峰，2H,J=8.8Hz)，7.24(多重峰，1H)，7.01(双峰,2H，/=8.8Hz)，6,65(双双峰，1H,/=2.8，8.0Hz)，6.57(多重峰，2H)，4.66(单峰，2H),3.77(单峰，3H)。制备例8:化合物V-2(l-氯甲基-4-(3-甲氧基苯氧基)苯)的制备化合物IV-2(230mg，1.0mmol)在15mlDCM中在0。C下加入TEA(110mg，1.1mmol)，然后滴加甲基璜酰氯(125mg，1.1mmol)，滴加完后逐渐升温到室温过夜，薄层色谱检测显示原料已经反应完，反应液用水(3x10ml)洗，分层后，有机层干燥，旋转蒸发除去DCM后，硅胶柱层析(石油醚:乙酸乙酯=5:1)得到白色固体199mg，分离收率Y-80X;熔点6769。C;核磁共振氢谱^NMR(400MHz,氘代氯仿)S7.36(双峰,J=8.8Hz,2H),7.23(多重峰，1H),7.00(双峰,2H,J=8.8Hz),6.69(双双峰，1H，/=2.8，8.0Hz),6.61(多重峰，2H),4.59(单峰，2H):3.79(单峰，3H)。实施例l:化合物I-1([4-(3,4-亚甲二氧基苯氧基)苯基][4-(2-甲氧基苯基)哌嗪-l-基]甲酮)的制备130mg化合物m-3溶于二氯甲烷(5ml)中，分别加入DCC(113mg，0.5mmol),DMAP(5mg，0.04mmol)和l-(2-甲氧基苯基)哌嗪(100mg，0.5mmo1)，在室温下反应过夜。过滤，用二氯甲烷洗滤饼，减压蒸除溶剂后，硅胶色谱柱层析(DCM:甲醇二50:l)得白色固体114mg。分离收率丫=53%;熔点U0113。C;核磁共振氢谱&NMR(400MHz,気代氯仿)S3.04(宽单峰，4H)，3.71(宽单峰，4H)，3.84(单峰，3H),6.06(单峰，2H),6.57(双双峰，1H,J=8.0,2.0Hz)，6.68(双峰,1H，J=2.4Hz),6.867.00(多重峰，7H),7.46(双峰，2H，J=6.8,2.0Hz);电喷雾质谱MS(ESI),m/e(相对丰度)433(M+1)(100)。根据与以上制备例l-6及实施例1的方法，制备得到以下式(I)中X为氧原子时的化合物，即表一所示之实施例2-14所示的化合物Ri0表一:式(I)<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>下面列出的是表一中各化合物的理化数据1-2.[4-(3,4-亚甲二氧基苯氧基)苯基][4-(3，4-二氯苄基)哌嗪-l-蜀甲酮无色粉末，熔点89~90°C;核磁共振氢谱&NMR(400MHz,氘代氯仿)S2.47(宽单峰，4H)，3.56(单峰，2H),3.58(宽单峰，4H),6.05(单峰，2H),6.56(双双峰，1H,J=8.0，2.0Hz),6.67(双峰,1H,J=2.4Hz),6.86(双峰，1H,J=8.4Hz),6,96(双峰，2H，J=8.4Hz)，7.33(双峰，1H,J=8.4Hz),7.41(双峰，2H，J=8,4Hz),7.50~7.57(多重峰，2H)。1-3.[4-(3，4-亚甲二氧基苯氧基)苯基][4-(4-氟苯基)哌嗪-l-基]甲酮无色粉末，熔点111113°C;核磁共振氢谱iHNMR(400MHz，氘代氯仿)S3.15(宽单峰，4H),3.73(宽单峰，4H)，6.05(单峰，2H)，6.57(双双峰，1H,J=8.0，2.0Hz)，6.68(双峰，1H，J=2.4Hz)，6.88(双峰，1H,J=8.4Hz),6.98-7.03(多重峰，6H),7.47(双峰，2H,J=8.8Hz)。M.[4-(3，4-亚甲二氧基苯氧基)苯基](4-环己基哌嗪-l-基)甲酮无色粉末，熔点75~77。C;核磁共振氢谱&NMR(400MHz,氘代氯仿)S1.10-1.30(多重峰，6H),1.76~1.78(多重峰，4H),2.30(多重峰，1H)，2.55(brs，4H)，3.52(宽单峰，4H),6.05(单峰，2H)，6.56(双双峰，1H，J=8.0,2.0Hz),6.67(双峰，1H,J=2.4Hz)，6.87(双峰，1H，J=8.4Hz),6.96(双峰，2H，J=8.4Hz)，7.40(双峰，2H，J=8.4Hz)。1-5.[4-(3，4-二氯苄基)哌嗪-l-基][4-(3-甲氧基苯氧基)苯蜀甲酮浅黄色粉末，熔点87~89°C;核磁共振氢谱iHNMR(400MHz，氘代氯仿)S2.48(宽单峰，4H),3.58(宽单峰，4H)，3.70(单峰，2H)，3.78(单峰，3H),6.58~6.61(多重峰，2H)，6.69(双峰,1H,J=8.0Hz),6.84(单峰，1H),7.00(双峰,2H,J=8.4Hz),7.17(双峰，1H,J=8.0Hz),7.237.26(多重峰,1H，)，7.37-7.45(多重峰，3H)。M.[4-(3,4-二氯苄基)哌嗪-l-萄[4-(4-甲氧基苯氧基)苯基]甲酮无色粉末，熔点9395°C;S2.46(宽单峰，4H)，3.51(宽单峰，4H),3.74(单峰，2H),3.81(单峰，3H)，6.88~6.93(多重峰，4H),6.69(双峰,2H，J=8.0Hz)，7.17(双峰，2H,J=8.4Hz),7.347.40(多重峰，3H,),7.44(单峰，1H)。1-7.[4-(4-氟苄基)哌嗪-l-基][4-(3-甲氧基苯氧基)苯基]甲酮无色粉末,熔点101~103°C;核磁共振氢谱&NMR(400MHz，氘代氯仿)S2.45(宽单峰，4H),3.48(宽单峰，4H),3.70(单峰，2H),3.78(单峰，3H)，6.58~6.61(多重峰，2H)，6.69(3又峰，1H，J=8.0Hz),7.00~7.03(多重峰,4H)，7.23~7.26(多重峰，3H),7,38(双峰，2H,J=8.0Hz)。1-8.[4-(4-氟苄基)哌嗪-l-基][4-(4-甲氧基苯氧基)苯基]甲酮无色粉末,熔点92~94。C;核磁共振氢谱^NMR(400MHz,氘代氯仿)S3.15(宽单峰，4H),3.73(宽单峰，4H)，3.81(单峰，3H),6.95~7.07(多重峰，IOH)，7.46(双峰，lH，V=8.4Hz)。1-9.[4-(3，4-二甲氧基苄基)哌嗪-l-基][4-(3-甲氧基苯氧基)苯基]甲酮无色粉末，熔点101-103。C;核磁共振氢谱&NMR(400MHz,氘代氯仿)S2.45(宽单峰，4H),3.48(宽单峰，4H)，3.77(单峰，2H)，3.78(单峰,3H)，3.89(单峰，3H)，3.91(单峰，3H),6.58~6.61(多重峰，2H)，6.70(双峰,1H,J=8.0Hz),6.81~6.88(多重峰，3H)，7.00(双峰，1H，J=8.4Hz),7.237.26(多重峰，1H),7.38(双峰，2H,J=8,4Hz)。1-10.[4-(3，4-亚甲二氧基苯氧基)苯基][4-(4-氟苄基)哌嗪-l-基]甲酮浅黄色粉末，熔点97~99。C;4亥磁共振氢谱HNMR(400MHz,氘代氯仿)S2.43(宽单峰，4H)，3,53(s,2H)，3.58(宽单峰，4H)，6.54(单峰，2H),6.55(双双峰，1H，J=8.0,2.4Hz),6.70(单峰，1H)，6.87(双峰，1H,J=8.0Hz),6.96(双峰，2H，J=8.0Hz)，7.06~7.10(多重峰，2H),7.377.42(多重峰，4H)。[4-(3,4-亚甲二氧基苯氧基)苯甲酰基哌嗪基]-l-甲酸乙酯无色油状物；核磁共振氢谱iHNMR(400MHz，氘代氯仿CDC13):S1.25(三重峰,3H，J二7.2Hz)，1.66(宽单峰，2H),3.51(宽单峰，6H),4.46(四重峰，2H，J=7.2Hz),6.00(单峰，2H),6.53(双双峰，1H，/=2.4,8.0Hz)，6.60(单峰,1H)，6.78(双峰，1H，/=8.4Hz),6.96(双峰，2H，J=8.4Hz)，6.37(双峰，2H,o^8.4Hz)。1-12.[4-二苯甲基哌嗪-l-基][4-(3，4-亚甲二氧基苯氧基)苯基]甲酮无色粉末，熔点127~130°C;核磁共振氢谱&NMR(400MHz,氘代氯仿)S2.40(宽双峰，4H),3.48(宽单峰，2H),3.74(宽单峰，2H)，4.25(单峰，1H)，6.01(单峰，2H),6.49(双双峰，1H,J=8.0,2.4Hz),6.56(单峰，1H),6.76(双峰,1H,J=8.0Hz),6.81(双峰,2H,J=8.0Hz),7.17~7,42(多重峰，12H)。[4-(3，4-二甲氧基苄基)哌嗪-l-基][4-(3,4-亚甲二氧基苯氧基)苯基]甲酮白色固体，熔点85~86°C;核磁共振氢谱&NMR(400MHz，氘代氯仿)S2.45(宽双峰，4H)，3.48(宽单峰，4H),3.73(单峰，2H),3.87(单峰，3H),3.89(单峰，3H),6.01(单峰，2H)，6.50(双双峰，1H,J=8.0，2.4Hz),6.58(单峰，1H)，6.77~6.84(多重峰，3H),6.88(单峰，1H)，6.94(双峰，2H,J=8.8Hz)，7.36(双峰，2H,J=8.8Hz)。W4.[4-(3,4-二氯苯基)哌嗪-l-基][4-(3，4-亚甲二氧基苯氧基)苯基]甲酮白色固体，熔点73~74°C;核磁共振氢谱&NMR(400MHz，氘代氯仿)S2.74(宽单峰，4H,H-3'，7')，3.12(宽单峰，4H)，3.74(宽单峰，4H),6.01(单峰，2H)，6.51(双双峰，1H，J=8.4,2.4Hz),6.59(单峰，1H),6.74~6.80(多重峰，2H)，6.97(多重峰，3H)，7.30(双峰，1H，J=8,4Hz)，7.40(双峰，2H，J=8.4Hz)。实施例15:化合物1-15(l-二苯甲基-4-[4-(3-甲氧基苯氧基)苄基]-哌嗪)的制备1-二苯甲基哌嗪(126mg，0.5mmol)溶于乙腈(CH3CN，5ml)中，分别加入碳酸钾(K2C03)和化合物V-2(125mg，0.5mmo1)，在室温下反应过夜。过滤，用二氯甲垸洗滤饼，减压蒸除溶剂后，硅胶柱层析(二氯甲烷甲醇=100:1)得无色固体14811^。分离收率￥=64%;熔点67~69。C;核磁共振氢谱iHNMR(400MHz,氘代氯仿)S1.64(brs，1H)，2.50(宽单峰，7H)，3.49(单峰，2H),3.77(单峰，3H),4.22(单峰，1H)，6.55(多重峰，2H)，6.63(双峰，1H,J=4.0Hz),6.94(双峰，2H,J=8.4Hz)，7.14-7.30(多重峰，9H),7.40(多重峰，4H);电喷雾质谱MS(ESI),m/e(相对丰度)465(M+1)+(100)。实施例16:化合物1-16(1-(3，4-二氯苄基)-4-[4-(3-甲氧基苯氧基)苄基]-哌嗪)的制备OMe化合物I-16化合物1-5(117mg,0.25mmol)在10mlTHF中在0。C下分批加入氢化铝锂(LiAlH4)(10mg,0.25mmol)，加完后逐渐升温到室温过夜，薄层色谱检测显示原料已经反应完，反应用10ml水和10ml二氯甲烷淬灭，分层后，水层用二氯甲垸提取(3x10ml)，合并有机层，干燥，旋转蒸发除去二氯甲垸后，硅胶柱层析(二氯甲烷甲醇=100:l)得无色油状物97mg;分离收率Y-85X;核磁共振氢谱^NMR(400MHz,気代氯仿)S1.63(宽单峰，4H),2.47(宽单峰，4H),3.45(单峰，2H),3.49(单峰，2H),3.78(单峰，3H),6.57(宽单峰，2H)，6.64(双双峰，1H,/=2.4,8.0Hz)，6.95-7.03(多重峰，2H),7.14~7.26(多重峰，4H)，7.287.36(多重峰，1H),7.43(单峰，IH)，.电喷雾质谱MS(ESI),m/e(相对丰度》457(M+1)+(100)。根据与以上制备例7、8及实施例15、16的方法，制备得到式(I)中X为氢原子时的化合物，即表二所示之实施例17-21所示的化合物:表二<table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>下面列出的是表二中各化合物的理化数据W7.4-[4-(3-甲氧基苯氧基)苄基]哌嗪基-l-甲酸乙酯无色油状物；核磁共振氢谱^NMR(400MHz，氘代氯仿)S1.25(三重峰，3H，/=7.2Hz),2.40(宽单峰，4H),3.48(宽单峰，6H),3.78(单峰，2H)，4.15(四重峰，2H，《7=7.2Hz),6,57~6.59(多重峰，2H),6.65(双双峰，1H,/=2.4，8.0Hz),6.96~7.02(多重峰，2H)，7.20~7.36(多重峰，3H)。1-18.l-(2-甲氧基苯基)-4-[4-(3-甲氧基苯氧基)苄基]-哌嗪无色油状物；核磁共振氢谱^NMR(400MHz，氘代氯仿)S2.67(宽单峰，4H),3.17(宽单峰，4H),3.56(单峰，2H),3.86(单峰，3H)，3.88(单峰，3H)，6.57~6.59(多重峰，2H),6.65(双双峰，1H，J=2.4,8.0Hz),6.85~7.02(多重峰，6H)，7.20~7.35(多重峰，3H)。1-19.1-(3，4-二氯苯基)-4-[4-(3-甲氧基苯氧基)苄基]-哌嗪无色油状物；核磁共振氢谱&NMR(400MHz,氘代氯仿)S2.60(宽单峰，4H),3.17(宽单峰，4H)，3.53(单峰，2H),3.78(单峰，3H),6.57~6.59(多重峰，2H),6.65(双双峰，1H,/=2.4,8.0Hz)，6.75(双双峰，1H,/=2.4,8.0Hz),6.94~7.02(多重峰，3H)，7.20~7.35(多重峰，4H)。1-20.(2-呋喃基)[4-(3-甲氧基苯氧基)苄基哌嗉-l-基]甲酮无色油状物；核磁共振氢谱&NMR(400MHz，氘代氯仿)S2.51(宽单峰，4H),3.51(单峰，2H)，3.78(宽单峰，7H)，6,47~6.48(多重峰，1H)，6.51(单峰，2H)，6.67(双峰，1H,J=4.0Hz),6.97~7.03(多重峰，3H),7.207.36(多重峰,4H),7.47(单峰，1H)。1-21.1-(4-氟苯基)-4-[4-(3-甲氧基苯氧基)苄基]-哌嗪无色油状物；核磁共振氢谱^NMR(400MHz,氘代氯仿)S1.69(宽单峰，1H),2.50(宽单峰，7H),3.47(单峰，2H),3.48(单峰，2H),3,77(单峰，3H),6.57(宽单峰，2H),6.64(双双峰，1H，2.4，8.0Hz),6.95~7.03(多重峰，4H),7.19~7.35(多重峰，5H)。为了更好地理解本发明的实质，下面分别用本发明中的化合物对三种人肿瘤细胞株生长的抑制作用之药理实验结果，说明其在抗肿瘤药物研究领域中的新用途。药理实施例给出了代表性化合物的部分活性数据。必须说明，本发明的药理实施例是用于说明本发明而不是对本发明的限制。根据本发明的实质对本发明进行的简单改进都属于本发明要求保护的范围。药理实施例1:化合物1-13、1-17、I-18对KB细胞的细胞毒活性KB(口腔上皮癌)细胞用RPMI1640培养基培养，培养基中含IO%的胎牛血清，100U/毫升青霉素和100U/毫升的链霉素。细胞以每孔5X103的浓度加入到96孔板中，在37'C含5XC02潮湿空气的培养箱中培养24小时。细胞存活率的测定用改良MTT(3-(4,5-dimethylthiagol-2-yl)-2,5-diphenyltetrogoliumbromide)法。细胞经过24小时的孵育后，分别将新配的化合物1-13、1-17、I-18的二甲亚砜溶液以浓度梯度加入到各孔中，使孔中化合物最终浓度分别为100微克/毫升,33.3微克/毫升，11.1微克/毫升和3.7微克/毫升。72小时后，加入10微升MTT(5微克/亳升)的磷酸盐缓冲液，再继续在37'C培养4小时后，离心5分钟除去未转化的MTT,每孔中加入200微升二甲亚砜，以溶解还原的MTT晶体甲臜(formazan)，所形成的formazan用酶标仪在570nm波长下比色，细胞存活率由样品相对于对照品的比值计算。其中化合物1-13、1-17、1-18对KB细胞半抑制浓度IC5Q由剂量效应曲线得到。化合物1-13的IQo为9.0微克/毫升；化合物I-17的IC5。为21.1微克/毫升；化合物I-18的IQ()为19.8微克/毫升；而阳性对照顺铂对KB细胞的IQo为0.7微克/毫升。实验结论KB细胞是测试化合物对肿瘤细胞的细胞毒性的有效工具和评价指标。本实验表明此类哌嗪类衍生物对KB细胞具有较强的细胞毒性，有可能发展成为新的具有抗口腔上皮癌及相关肿瘤作用的药物。药理实施例2:化合物1-16、1-20对PC-3细胞的细胞毒活性PC-3(前列腺癌)细胞用F-12培养基培养，培养基中含10%的胎牛血清，100U/毫升青霉素和100U/毫升的链霉素。细胞以每孔5X103的浓度加入到96孔板中，在37'C含5XC02潮湿空气的培养箱中培养24小时。细胞存活率的测定用改良MTT法，具体方法如药理实施例1。其中化合物1-16、I-20对PC-3细胞半抑制浓度(IC5o)由剂量效应曲线得到。化合物I-16的IC5。为23.2微克/毫升；化合物I-20的IC5Q为27.8微克/毫升；而阳性对照顺铂对PC-3细胞的IC5。为1.6微克/毫升。实验结论:本实验表明此类哌嗪类衍生物对PC-3细胞具有较强的细胞毒性，有可能发展成为新的具有抗前列腺癌及相关肿瘤作用的药物。药理实施例3:化合物1-17、I-20对CNE细胞的细胞毒活性CNE(鼻咽癌)细胞用RPMI1640培养基培养，培养基中含10%的胎牛血清，100U/毫升青霉素和100U/毫升的链霉素。以每孔5X1()S细胞的浓度加入到96孔板中，在37°。含5XC02潮湿空气的培养箱中培养24小时。细胞存活率的测定用改良MTT法，具体方法如药理实施例l。其中化合物1-17、1-20对CNE细胞半抑制浓度(IC5())由剂量效应曲线得到。化合物1-17的ICso为3.1微克/毫升；化合物1-20的K^为17.5微克/毫升；而阳性对照顺铂对CNE细胞的IC5Q为2.4微克/毫升。实验结论本实验表明此类哌嗪类衍生物对CNE细胞具有较强的细胞毒性，有可能发展成为新的具有抗鼻咽癌及相关肿瘤作用的药物。本发明的这些化合物或其可药用盐及其溶剂化物可以与现已上市的抗肿瘤药物如铂类药物顺铂(DDP)、喜树碱类药物伊立替康(Irinatecan，CPT-ll)、长春花碱类药物失碳长春花碱(Vinorebine，NVB诺维本)、脱氧胞昔类药物吉西他滨(Gemcitabine，Gemzar，健择)、足叶乙甙(Etoposide)、紫杉醇(Paditaxd)等联合使用，制备得到具有肿瘤生长抑制活性的细胞毒性组合物，可用于治疗肿瘤疾病。权利要求1.本发明提供了一种具有式(I)所示结构的哌嗪类衍生物及其可药用盐id="icf0001"file="S2008100609391C00011.gif"wi="68"he="23"top="56"left="68"img-content="drawing"img-format="tif"orientation="portrait"inline="no"/>式(I)其中X选自氧或氢原子；R1、R2、R3可以相同或不同，分别选自卤素，氢原子，羟基，或含1～5个碳的烷氧基，R1、R2、R3还可以形成偕二甲氧基；R4基团选自氢原子，酯基，取代或未取代的苄基，取代或未取代的五元或六元脂环，或者取代或未取代的五元或六元芳香环；用来取代的取代基选自1～5个碳的烷氧基，卤素，或者5～7元的芳环或脂环。2.根据权利要求1的式(I)化合物及其可药用盐，其特征是所述化合物选自下列化合物H.[4-(3,4-亚甲二氧基苯氧基)苯基][4-(2-甲氧基苯基)哌嗪-l-基]甲酮；U.[4-(3,4-亚甲二氧基苯氧基)苯基][4-(3，4-二氯苄基)哌嗪-l-基]甲酮；W.[4-(3,4-亚甲二氧基苯氧基)苯基][4-(4-氟苯基)哌嗪-l-基]甲酮；M.[4-(3，4-亚甲二氧基苯氧基)苯基](4-环己基哌嗪-l-基)甲酮；1-5.[4-(3,4-二氯苄基)哌嗪-l-基][4-(3-甲氧基苯氧基)苯基]甲酮；[4-(3,4-二氯苄基)哌嗪-l-基][4-(4-甲氧基苯氧基)苯基]甲酮；1-7.[4-(4-氟苄基)哌嗪-l-蜀[4-(3-甲氧基苯氧基)苯蜀甲酮；1-8.[4-(4-氟苄基)哌嗪-l-萄[4-(4-甲氧基苯氧基)苯基]甲酮；I-9.[4-(3,4-二甲氧基苄基)哌嗪-1-基][4-(3-甲氧基苯氧基)苯基]甲酮；[4-(3,4-亚甲二氧基苯氧基)苯基][4-(4-氟苄基)哌嗪-l-基]甲酮；I-ll.[4-(3，4-亚甲二氧基苯氧基)苯甲酰基哌嗪基]-l-甲酸乙酯；1-12.[4-二苯甲基哌嗪-l-基][4-(3,4-亚甲二氧基苯氧基)苯基]甲酮；W3.[4-(3，4-二甲氧基苄基)哌嗪-l-基][4-(3,4-亚甲二氧基苯氧基)苯基]甲酮；1-14.[4-(3，4-二氯苯基)哌嗪-l-基][4-(3，4-亚甲二氧基苯氧基)苯基]甲酮;1-15.1-二苯甲基-4-[4-(3-甲氧基苯氧基)苄基]-哌嗪；W6.i_(3，4-二氯苄基)-4-[4-(3-甲氧基苯氧基)苄基]-哌嗪；工一17.4-[4-(3-甲氧基苯氧基)苄基]哌嗪基-l-甲酸乙酯；1-18.l-(2-甲氧基苯基)-4-[4-(3-甲氧基苯氧基)苄基]-哌嗪；H9.1-(3，4-二氯苯基)-4-[4-(3-甲氧基苯氧基)苄基]-哌嗪；1-20.(2-呋喃基)[4-(3-甲氧基苯氧基)苄基哌嗪-l-基]甲酮；1-21.l-(4-氟苯基)-4-[4-(3-甲氧基苯氧基)苄基]-哌嗪。3.根据权利要求1-2之一的化合物或者它们的混合物用于制备防治肿瘤疾病药物的用途。全文摘要本发明涉及医药
技术领域：
，具体而言，本发明涉及一类具有人体肿瘤细胞毒活性的哌嗪类衍生物的制备方法和用途。经药理活性测试，该类化合物对三株肿瘤细胞如人前列腺癌细胞(PC-3)，人鼻咽癌细胞(CNE)，人口腔上皮癌细胞株(KB)的生长具有显著的抑制活性，可以预期作为抗肿瘤药物用途。文档编号C07D319/00GK101255152SQ200810060939公开日2008年9月3日申请日期2008年4月8日优先权日2008年4月8日发明者叶发青,巫秀美,李校堃,伟熊,佳瞿,董建勇,董盛谊,昱赵,阳应华,黄可新申请人:温州医学院