专利名称：重组人粒细胞集落刺激因子微乳的制作方法
技术领域：
本发明属医药技术，特别是一种重组人粒细胞集落刺激因子微乳。
背景技术：
重组人粒细胞集落刺激因子是由DNA重组技术产生的人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)，与天然的粒细胞集落刺激因子的氨基酸序列和糖链完全相同，不同的是重组人粒细胞集落刺激因子链的N端含有蛋氨酸。本品可与靶细胞膜受体结合而起作用。粒细胞集落刺激因子是调节骨髓中粒系造血的主要细胞因子之一，主要刺激粒细胞系造血，也可使多能造血干细胞进入细胞周期；促进髓系造血祖细胞的增殖、分化和成熟，调节中性粒细胞系细胞的增殖与分化成熟；并驱使中性粒细胞释至血流，使外周中性粒细胞数量增多，并提高其功能，吞噬活性，针对肿瘤细胞的抗体依赖细胞细胞毒活性等。
重组人粒细胞集落刺激因子适用于癌症化疗等原因导致的中性粒细胞减少症。癌症患者使用骨髓抑制性化疗药物，特别是在强烈的、骨髓剥夺性化学药物治疗后、注射重组人粒细胞集落刺激因子有助于预防中性粒细胞减少症的发生，减轻中性粒细胞减少的程度，缩短粒细胞缺乏症的持续时间，加速粒细胞数的恢复，提升白细胞数量，从而降低合并感染发热的危险。重组人粒细胞集落刺激因子对慢性粒细胞缺乏症病人如骨髓异常增生综合征、周期性中性粒细胞缺乏症和再生障碍性贫血等疗效非常明显。
此外，重组人粒细胞集落刺激因子还可以(1)促进骨髓移植后中性粒细胞的恢复。(2)治疗伴随骨髓异常增生综合征之中性粒细胞减少症。(3)治疗伴随再生不良性贫血之中性粒细胞减少。(4)治疗先天性、特发性中性粒细胞减少症。
在现有技术中，重组人粒细胞集落刺激因子主要通过皮下注射或静脉注射的方式给药，这对于需要用药的患者极为不方便，同时注射给药给需要长期用药的患者带来很多的痛苦，使得临床用药的依从性降低。口服给药虽然可以有效解决上述问题，但重组人粒细胞集落刺激因子在胃液中遭到十分严重的破坏，也就是说，重组人粒细胞集落刺激因子口服无效。由于受药物稳定性和理化性质特点的限制，对于重组人粒细胞集落刺激因子还没有合适的制剂形式便于临床使用，现在还无法有效解决重组人粒细胞集落刺激因子给药方式的问题。
微乳制剂可以在很大程度上改善很多药物的生物利用度，但这种制剂形式对药物的理化性质和稳定性有着很高的要求，制备工艺也相当复杂，在制药工业的产业化上有很多的困难。
发明内容
本发明提供一种重组人粒细胞集落刺激因子微乳，它可以通过鼻腔途径喷雾给药。通过鼻腔给药的方式既可避免口服给药后，重组人粒细胞集落刺激因子在胃液中的破坏，大大提高了生物利用度，又避免了皮下或静脉注射给患者带来的不便和痛苦，同时由于本发明将重组人粒细胞集落刺激因子制备成为微乳制剂，使得鼻腔喷雾给药途径对鼻粘膜的刺激性损伤可以忽略不计，通过猕猴的生物利用度实验，惊奇地发现本发明做到了与注射给药途径相比，在生物利用度上无显著差异。
本发明的重量组成包括重组人粒细胞集落刺激因子----------1份表面活性剂------------------------1-5份助表面活性剂----------------------0.5-3份油相------------------------------1-3份水相------------------------------500-2000份所述的表面活性剂是指聚氧乙烯氢化蓖麻油、聚氧乙烯蓖麻油、十二烷基硫酸钠、十八烷基硫酸钠、十六烷基硫酸钠、卵磷脂、单硬脂酸甘油酯、蔗糖脂肪酸酯、脱水山梨醇脂肪酸酯、聚氧乙烯脱水山梨醇脂肪酸酯或泊洛沙姆中的一种或一种以上。
所述的助表面活性剂是指无水乙醇、聚乙二醇200、丙二醇或甘油中的一种或一种以上。
所述的油相是指亚油酸甘油酯、二乙二醇单乙醚、玉米油、大豆油、花生油、葵花籽油、棉籽油、芝麻油或橄榄油中的一种或一种以上。
所述的水相是指水、果汁、生理盐水或葡萄糖溶液中的一种或一种以上。
本发明的制备工艺为称取处方量重组人粒细胞集落刺激因子，加入处方量的油相中，搅拌使溶解，再加入处方量的表面活性剂、助表面活性剂，搅拌均匀，在水相中分散后即得微乳。
本发明重组人粒细胞集落刺激因子微乳与重组人粒细胞集落刺激因子注射剂相比较，由于本剂型制备成气雾剂经鼻腔给药，使得药物可以迅速吸收进入人体循环，既保持较高的生物利用度，避免口服给药发生的“首过效应”，又避免了皮下或静脉注射带来的不便和痛苦。因此，开发研制本品必将取得广泛的社会效益和经济效益。
具体实施例方式现通过以下实例进一步来说明本发明，但本发明申请的范围并不仅仅限于以下实施例。
实施例
七种具体处方如下(确定微乳制剂的辅料种类和数量)处方A重组人粒细胞集落刺激因子1.0g无水乙醇1.0g丙二醇 0.5g聚氧乙烯氢化蓖麻油 4.0g亚油酸甘油酯2.5g水 1000ml制成1000ml微乳制备工艺称取1.0g rhG-CSF，加入到2.5g的亚油酸甘油酯中，搅拌使溶解，再加入聚氧乙烯氢化蓖麻油4.0g、无水乙醇1.0g，丙二醇0.5g，搅拌均匀，在1000ml水中分散后即得微乳。
处方B重组人粒细胞集落刺激因子1.0g无水乙醇1.0g聚乙二醇200 0.5g脱水山梨醇脂肪酸酯 2.0g橄榄油 2.5g水 1000ml制成1000ml微乳制备工艺同处方A。
处方C重组人粒细胞集落刺激因子1.0g无水乙醇1.0g丙二醇 1.0g卵磷脂 3.0g玉米油 2.5g
果汁1000ml制成1000ml微乳制备工艺同处方A。
处方D重组人粒细胞集落刺激因子1.0g聚乙二醇200 1.0g丙二醇 1.0g泊洛沙姆3.0g二乙二醇单乙醚 3.0g水 1000ml制成1000ml微乳制备工艺同处方A。
处方E重组人粒细胞集落刺激因子1.0g无水乙醇2.0g聚氧乙烯氢化蓖麻油 4.0g亚油酸甘油酯2.5g水 1000ml制成1000ml微乳制备工艺同处方A。
处方F重组人粒细胞集落刺激因子1.0g聚乙二醇200 1.0g丙二醇 1.0g聚氧乙烯氢化蓖麻油 4.0g
亚油酸甘油酯2.5g水 500ml制成500ml微乳制备工艺同处方A。
处方G重组人粒细胞集落刺激因子1.0g无水乙醇1.0g丙二醇 0.5g聚氧乙烯氢化蓖麻油 3.0g二乙二醇单乙醚 3.0g水 1000ml制成1000ml微乳制备工艺同处方A。
应用实例本发明的动物体内药物代谢动力学实验方法如下取6只健康成年猕猴，随机分成2组，每组3只。第一次试验，第一组于大腿内侧皮下注射重组人粒细胞集落刺激因子，剂量为150μg/kg，给药体积0.15ml/kg；第二组动物鼻腔喷雾给药重组人粒细胞集落刺激因子微乳(按照实施例处方A制备)，剂量为150μg/kg。四周清洗后进行第二次试验，交叉给药，即第一组鼻腔喷雾给药，第二组皮下注射给药，剂量和给药体积同前。受试动物于给药后1、2、4、6、8、10、12、15、24、36、48以及72h从前肢肘静脉采血，血液在室温放置30min后，于4000rpm离心10min，分离出血清，-20℃保存。
用ELISA法测定6只健康猕猴交叉皮下注射和鼻腔喷雾给药后不同时间的血清药物浓度，实验数据用3P97药代计算程序进行数据处理，经拟和优度比较，所测定的数据符合一室消除模型，得到的药动参数为皮下注射重组人粒细胞集落刺激因子和鼻腔喷雾重组人粒细胞集落刺激因子微乳的平均达峰时间Tmax分别为11.1±1.9h和10.3±1.7h；平均峰浓度Cmax分别为2510±673ng/ml和2430±512ng/ml；平均清除半衰期t1/2ke分别为24.5±3.2h和24.1±2.9h；平均清除率CL分别为3.6±0.8ml/kg/h和2.9±0.8ml/kg/h；平均药时曲线下面积AUC(0-72h)分别为74926±19852h.ng/ml和69084±25630h.ng/ml；平均残留时间MRT分别为31.0±2.7h和30.9±2.5h。按照0-72h计算，鼻腔喷雾重组人粒细胞集落刺激因子微乳对皮下注射重组人粒细胞集落刺激因子的相对生物利用度为92.20±25.61％。经过双侧t检验，结果显示，鼻腔喷雾重组人粒细胞集落刺激因子微乳对皮下注射重组人粒细胞集落刺激因子的主要药动学参数(尤其生物利用度)间无显著性差异，表明两种给药的药代动力学行为基本一致。平均血药浓度-时间曲线见说明书附图
。
权利要求
1.一种重组人粒细胞集落刺激因子微乳，其特征在于其重量组成包括重组人粒细胞集落刺激因子-----------1份表面活性剂-------------------------1-5份助表面活性剂-----------------------0.5-3份油相-------------------------------1-3份水相-------------------------------500-2000份所述的表面活性剂是聚氧乙烯氢化蓖麻油、聚氧乙烯蓖麻油、十二烷基硫酸钠、十八烷基硫酸钠、十六烷基硫酸钠、卵磷脂、单硬脂酸甘油酯、蔗糖脂肪酸酯、脱水山梨醇脂肪酸酯、聚氧乙烯脱水山梨醇脂肪酸酯或泊洛沙姆中的一种或一种以上。所述的助表面活性剂是指无水乙醇、聚乙二醇200、丙二醇或甘油中的一种或一种以上。所述的油相是指亚油酸甘油酯、二乙二醇单乙醚、玉米油、大豆油、花生油、葵花籽油、棉籽油、芝麻油或橄榄油中的一种或一种以上。所述的水相是指水、果汁、生理盐水或葡萄糖溶液中的一种或一种以上。
2.根据权利要求1所述的重组人粒细胞集落刺激因子微乳，其特征在于其重量组成包括重组人粒细胞集落刺激因子-----------1份聚氧乙烯氢化蓖麻油-----------------1-5份无水乙醇---------------------------0.5-2份丙二醇-----------------------------0-1份亚油酸甘油酯-----------------------1-3份水---------------------------------500-2000份。
3.根据权利要求1所述的重组人粒细胞集落刺激因子微乳，其特征在于其重量组成包括重组人粒细胞集落刺激因子-----------1份脱水山梨醇脂肪酸酯-----------------1-3份无水乙醇---------------------------0.5-2份聚乙二醇200------------------------0-1份橄榄油-----------------------------1-3份水---------------------------------500-2000份。
4.根据权利要求1所述的重组人粒细胞集落刺激因子微乳，其特征在于其重量组成包括重组人粒细胞集落刺激因子-----------1份卵磷脂-----------------------------1-5份无水乙醇---------------------------0.5-2份丙二醇-----------------------------0-1份玉米油-----------------------------1-3份果汁-------------------------------500-2000份。
5.根据权利要求1所述的重组人粒细胞集落刺激因子微乳，其特征在于其重量组成包括重组人粒细胞集落刺激因子-----------1份泊洛沙姆---------------------------5份聚乙二醇200------------------------0.5-2份丙二醇-----------------------------0-1份二乙二醇单乙醚---------------------1-3份水---------------------------------500-2000份。
全文摘要
本发明属医药技术，特别是一种重组人粒细胞集落刺激因子微乳。它由重组人粒细胞集落刺激因子、表面活性剂、助表面活性剂、油相、水相组成，它们的重量比为1∶(1－5)∶(0.5－3)∶(1－3)∶(500－2000)。制备工艺为将处方量重组人粒细胞集落刺激因子，加入处方量的油相中，搅拌使溶解，再加入处方量的表面活性剂、助表面活性剂，搅拌均匀，在水相中分散后即得微乳。重组人粒细胞集落刺激因子适用于癌症放疗、化疗等导致的中性粒细胞减少症。本发明提供一种重组人粒细胞集落刺激因子微乳，制备成气雾剂经鼻腔给药，既可保持与注射给药等效的生物利用度，又避免了皮下或静脉注射带来的不便和痛苦。
文档编号A61P35/00GK101062406SQ20071001464
公开日2007年10月31日 申请日期2007年5月17日 优先权日2007年5月17日
发明者孙勇, 徐丽洒, 徐平, 沈若武, 刘占涛 申请人:青岛大学