专利名称：珍珠菜提取物缓释微丸制剂及其制备方法
技术领域：
本发明涉及天然药物领域及药物制剂领域，具体涉及一种珍珠菜提取物的缓释微丸制剂及其制备方法。
背景技术：
恶性肿瘤是造成人类死亡的仅次于心血管疾病的第二号杀手，随着工业化进展和老龄人口比例的增加，肿瘤发病率近20年来呈显著的上升趋势。药物治疗在临床上是最重要的治疗癌症的方法，但目前抗肿瘤药物均有严重的不良反应，因此，从中药中寻找作用显著、毒副作用小的抗肿瘤药物一直是国际医药界的重点、热点课题。
珍珠菜，英文名Lysimachia clethroide Duby，系报春花科植物虎尾珍珠菜的根或全草，味苦、辛，性平，具有清热利湿，活血散瘀，解毒消痈之功效。国外学者从70年代开始，相继从中分离得到槲皮素苷，山奈素，黄芪素等黄酮类化合物，国内学者近年来对其化学成分也有所研究，从中得到多种黄酮类和皂苷类化合物。发明人曾经对珍珠菜提取物进行系统、深入的药理学研究，发现从全草得到的黄酮和皂苷类化合物具有良好的抗肿瘤作用，文献也有所报道。
口服缓、控释给药系统是国内外医药工业发展的一个重要方向，国外在上世纪50年代就开始研制口服缓、控释制剂，国内也在80年代开始研制。中医药是我国的瑰宝，历史悠久，有独特的中医药理论体系，实践丰富，疗效确切，毒性较低，越来越受到人们的亲睐。但目前大多数中药制剂还停留在“粗”、“大”、“黑”的阶段，所以采用先进的制剂技术研究与开发高效、长效的中药缓、控释制剂是中药制药发展和社会需求发展的必然趋势，也是中药现代化的必然。目前中药缓、控释制剂研究逐年增加，但批准上市的品种极少，如果我们采用现代化手段将珍珠菜活性成分制成安全、高效、长效、低毒的抗肿瘤现代化制剂，这将是一件十分有价值、有意义，利国利民的大事。
发明内容
本发明公开了一种珍珠菜提取物的缓释微丸制剂，由珍珠菜提取物与药用辅料组成微丸丸芯，外裹缓释衣膜，其中，珍珠菜提取物占微丸丸芯重量的40～70％，缓释衣膜占整个微丸重量的2～10％。
微丸丸芯中的药用辅料包括成型辅料和粘合剂。
成型辅料优选自淀粉、乳糖、微晶纤维素、低取代羟丙基纤维素或糊精的一种或几种；粘合剂优选自羟丙甲基纤维素、甲基纤维素、羧丙基纤维素、羧甲基纤维素钠、聚乙二醇、聚维酮中的一种或几种。
上述包裹微丸丸芯的缓释衣膜优选含聚合物材料、致孔剂和抗粘着剂。以衣膜总重量计，其中各组分优选的范围是聚合物材料占72～80％，致孔剂占6～12％，抗粘着剂占14～16％。本发明涉及的百分比均为重量百分比。
其中聚合物材料优选乙基纤维素和/或丙烯酸树脂类；致孔剂优选羟丙甲基纤维素、聚乙二醇、聚维酮中的一种或几种，抗粘着剂优选滑石粉、硬脂酸镁、二氧化硅中的一种或几种。
本发明珍珠菜提取物由下列方法制备将珍珠菜粉碎，用乙醇回流提取，浓缩水沉后，过滤，滤液经回收溶媒浓缩至0.5～2.0ml/g生药，浓缩液调节pH值至4～6，然后通过树脂吸附，乙醇洗脱，蒸发除去溶剂并干燥，即得，其中所采用的树脂为AB-8、D4020、NKA-9、ZTC大孔吸附树脂或聚酰胺树脂。
用于回流的乙醇浓度优选20～80％，本发明中的百分比均为重量百分比。
用于洗脱的乙醇浓度优选20～95％，进一步优选40％。检测发现，在40％洗脱得到的提取物总黄酮含量最高，大于33％。
试验发现，采用不同提取方法制备的珍珠菜的药理活性大小不同，不同提取方法制备的有效部位提取物药效学比较比较样品1、醇提水沉物是指用乙醇提取、浓缩、水沉后的沉淀物，干燥所得提取物。
2、未吸附物指用乙醇提取、浓缩水沉后的滤液，经回收溶媒浓缩至0.5～2.0ml/g生药，浓缩液调节pH值至5.0，通过AB-8树脂吸附后的液体浓缩、干燥所得提取物。
3、水洗物指用乙醇提取、浓缩水沉后的滤液，经回收溶媒浓缩至0.5～2.0ml/g生药，浓缩液调节pH值至5.0，通过AB-8树脂吸附后，将树脂用水洗脱得到的洗脱液浓缩、干燥所得提取物。
4、粗提物指用乙醇提取、浓缩水沉后的滤液，经回收溶媒浓缩至0.5～2.0ml/g生药，通过聚酰胺树脂吸附并用水洗脱后，将树脂用80％乙醇洗脱得到的洗脱液浓缩、干燥所得提取物。
5、精提物1指用乙醇提取、浓缩水沉后的滤液，经回收溶媒浓缩至0.5～2.0ml/g生药，浓缩液调节pH值至4.0，通过AB-8树脂吸附并用水洗脱后，将树脂用30％乙醇洗脱得到的洗脱液浓缩、干燥所得提取物。
6、精提物2指用乙醇提取、浓缩水沉后的滤液，经回收溶媒浓缩至0.5～2.0ml/g生药，浓缩液调节pH值至5.0，通过AB-8树脂吸附并用水洗脱后，将树脂用95％乙醇洗脱得到的洗脱液浓缩、干燥所得提取物。
7、精提物3指用乙醇提取、浓缩水沉后的滤液，经回收溶媒浓缩至0.5～2.0ml/g生药，浓缩液调节pH值至5.0，通过AB-8树脂吸附并用水洗脱后，将树脂用40％乙醇洗脱得到的洗脱液浓缩、干燥所得提取物。
采用台盼蓝染色法、MTT法、集落形成试验法等对各提取有效部位进行药效学筛选，并与分离纯化前的原有部位进行对照，结果40μg/ml的不同提取方法的药物作用48h，对K562细胞增殖的抑制率分别为 0％(醇提水沉物)、2.2％(未吸附物)、5.6％(水洗物)、21.6％(粗提物)、37.8％(精提物1)、45.4％(精提物2)、70.81％(精提物3)；实验结果说明在几种组分中精提物3，即40％乙醇洗脱物的抗肿瘤活性为最好，且比纯化前有显著差异。
我们对精提物3进行了进一步的药理学研究，选取了人白血病细胞(K562)、人宫颈癌细胞(Hela)、人乳腺癌细胞(MCF-7)、人肝癌细胞(SMMC 7721)、人结肠癌细胞(Caco-2)等细胞株，通过普通光镜形态学观察法、台盼蓝染色法、MTT法、3H-TdR掺入法等方法，进行体外敏感细胞株的筛选，药物作用48h的IC50分别为173.75μg/ml(MCF-7)、144.75μg/ml(Caco-2)、47.32μg/ml(Hela)、40.37μg/ml(K562)、39.76μg/ml(SMMC 7721)，实验结果表明该药物对宫颈癌、白血病、肝癌有较好疗效，并且精提物3的IC50远远低于现有文献中报道的提取物的IC50值。
本发明的缓释微丸制剂制备简单，制备方法包括a)将珍珠菜提取物及药用辅料混合均匀后，制备软材，通过挤出滚圆造粒法制备含药微丸丸芯；b)取缓释衣膜材料，乙醇溶解后超声混匀；c)取含药丸芯，置沸腾包衣装置中流化，将包衣液雾化喷到微丸上，即得包衣缓释微丸。再按常规方法将上述包衣缓释微丸在60℃热处理24h即可用于临床。
本发明中，缓释衣膜的重量占整个微丸重量的2～10％时可以有效达到缓释效果，包衣后微丸的释放度约为
时间(h) 26 12累积释放百分数 15％～35％ 40％～60％＞70％这样的释放曲线完全符合临床用药，可以达到较好的疗效。如果包衣衣膜重量超过10％，则药物释放太缓慢，达不到所需的血药浓度，如未包衣微丸 用量药物珍珠菜提取物 1.0g成型辅料微晶纤维素0.96g乳糖 0.04g粘合剂 2％PEG60001.5ml包衣液 缓释材料乙基纤维素225mg致孔剂 PEG6000 27mg抗粘着剂滑石粉45mg溶剂90％乙醇 4.5ml该配方中缓释包衣约占微丸总重量的13％。
试验结果(以总黄酮计)未包衣微丸溶出度时间(min) 5 10 20 40 60累积溶出百分数49.12 60.00 73.09 89.07 91.59包衣微丸释放度时间(h) 0.51 2 4 6 8 12累积释放百分数5.03 8.29 11.97 13.80 24.83 34.02 51.79从累积释放度可以看出，微丸12小时后累积溶出才51.79％，达不到所需的药物浓度。
另一方面，在缓释包衣材料中，致孔剂的重量优选占衣膜重量的6～12％，致孔剂的含量如果偏离这个范围对药物的释放有一定程度的影响，如果含量偏低，则释放稍慢，含量偏高，又会导致释放过快，如试验一和试验二试验一未包衣微丸 用量药物珍珠菜提取物 1.0g成型辅料微晶纤维素0.98g
乳糖 0.02g粘合剂 0.5％PVPk301.5ml包衣液缓释材料乙基纤维素75mg致孔剂 PEG6000 3mg(致孔剂含量约占衣膜的3.2％)抗粘着剂滑石粉15mg溶剂90％乙醇 1.5ml试验结果(以总黄酮计)未包衣微丸溶出度时间(min) 5 10 20 4060累积溶出百分数37.15 50.39 67.15 82.87 85.77包衣微丸释放度时间(h) 0.51 2 4 6 8 12累积释放百分数7.73 15.14 33.66 45.38 52.17 57.11 66.99试验二未包衣微丸 用量药物珍珠菜提取物 1.0g成型辅料微晶纤维素0.96g羟丙基纤维素 0.04g粘合剂 0.2％PVPk301.5ml包衣液 缓释材料乙基纤维素75mg致孔剂 PEG6000 15mg(致孔剂含量约占衣膜的14.2％)抗粘着剂滑石粉15mg溶剂90％乙醇 1.5ml试验结果(以总黄酮计)未包衣微丸溶出度时间(min) 5 10 20 40 60累积溶出百分数 32.00 41.34 53.59 70.50 75.37包衣微丸释放度
时间(h) 0.51 2 4 6 8 12累积释放百分数13.80 16.87 34.64 52.40 63.43 69.56 78.14由上述试验一和试验二可以看出，致孔剂用量不同，则释放效果也不同。
本发明采用的缓释微丸技术，结合天然药物的有效性和安全性，制备出了缓慢释放，药效好的珍珠菜提取物微丸制剂，可广泛用于临床。
具体实施例方式
实施例1珍珠菜提取物的制备取珍珠菜600g，粉碎，分别用12、10、8倍量的80％乙醇回流提取三次，每次1.5小时，合并滤液，减压回收乙醇至1200ml左右，加等体积的水稀释，放置24小时后过滤，滤液浓缩至0.9ml/g生药。浓缩液用稀盐酸调节pH值至5.0，然后以1.5ml/min的流速通过D4020大孔吸附树脂吸附，水洗至洗脱液接近无色，再以95％乙醇洗脱，收集洗脱液，蒸发除去溶剂并真空干燥，得4.5g珍珠菜提取物，其中总黄酮含量约为20％。
实施例2珍珠菜提取物的制备取珍珠菜600g，粉碎，分别用12、10、8倍量的70％乙醇回流提取三次，每次1.5小时，合并滤液，减压回收乙醇至1200ml左右，加等体积的水稀释，放置24小时后过滤，滤液浓缩至1.4ml/g生药。浓缩液用稀盐酸调节pH值至5.5，然后以0.5ml/min的流速通过AB-8大孔吸附树脂吸附，水洗至洗脱液接近无色，再以70％乙醇洗脱，收集洗脱液，蒸发除去溶剂并真空干燥，得6.5g珍珠菜提取物，其中总黄酮含量约为28％。
实施例3珍珠菜提取物的制备取珍珠菜600g，粉碎，分别用12、10、8倍量的90％乙醇回流提取三次，每次1.5小时，合并滤液，减压回收乙醇至1200ml左右，加等体积的水稀释，放置24小时后过滤，滤液浓缩至1.8ml/g生药。浓缩液用稀盐酸调节pH值至4.5，然后以1.0ml/min的流速通过AB-8大孔吸附树脂吸附，水洗至洗脱液接近无色，再以50％乙醇洗脱，收集洗脱液，蒸发除去溶剂并真空干燥，得7.1g珍珠菜提取物，其中总黄酮含量约为31％。
实施例4珍珠菜提取物的制备取珍珠菜600g，粉碎，分别用12、10、8倍量的80％乙醇回流提取三次，每次1.5小时，合并滤液，减压回收乙醇至1200ml左右，加等体积的水稀释，放置24小时后过滤，滤液浓缩至0.9ml/g生药。浓缩液用稀盐酸调节pH值至4.0，然后以1.5ml/min的流速通过AB-8大孔吸附树脂吸附，水洗至洗脱液接近无色，再以30％乙醇洗脱，收集洗脱液，蒸发除去溶剂并真空干燥，得3.3g珍珠菜提取物，其中总黄酮含量约为17％。
实施例5珍珠菜提取物的制备取珍珠菜600g，粉碎，分别用12、10、8倍量的80％乙醇回流提取三次，每次1.5小时，合并滤液，减压回收乙醇至1200ml左右，加等体积的水稀释，放置24小时后过滤，滤液浓缩至0.9ml/g生药。浓缩液用稀盐酸调节pH值至5.0，然后以1.0ml/min的流速通过AB-8大孔吸附树脂吸附，水洗至洗脱液接近无色，再以40％ 醇洗脱，收集洗脱液，蒸发除去溶剂并真空干燥，得7.2g珍珠菜提取物，其中总黄酮含量约为33％。
实施例6珍珠菜缓释包衣微丸的制备未包衣微丸 用量药物珍珠菜提取物 1.0g(实施例5方法制备)成型辅料微晶纤维素1.0g粘合剂 0.2％PVPk301.5ml包衣液 缓释材料乙基纤维素75mg致孔剂 PEG6000 9mg抗粘着剂滑石粉15mg溶剂90％乙醇 1.5ml制备方法第一步，准确称取珍珠菜抗肿瘤精提物及成型辅料，混合均匀，取粘合剂材料的10％乙醇溶液制备软材，通过挤出滚圆造粒法制备含药微丸；第二步，称取缓释衣膜材料及致孔剂，以适量的90％ 醇溶解，加入抗粘着剂超声混匀，配制成100ml包衣液备用；第三步，取含药微丸，置沸腾包衣装置中预热、流化，将包衣液以一定速度通过雾化喷到微丸上，即得包衣缓释微丸。
试验结果(以总黄酮计)未包衣微丸溶出度时间(min) 5 10 20 40 60累积溶出百分数41.54 50.65 66.18 78.60 81.92包衣微丸释放度时间(h) 0.51 2 4 6 8 12累积释放百分数7.06 10.74 16.25 32.19 55.47 64.05 75.08实施例7珍珠菜缓释包衣微丸的制备未包衣微丸 用量药物珍珠菜提取物 1.0g(实施例5方法制备得到)成型辅料羟丙基纤维素 1.0g粘合剂 5％PEG60001.5ml包衣液 缓释材料乙基纤维素150mg致孔剂 PEG6000 18mg抗粘着剂滑石粉30mg溶剂90％乙醇 3.0ml制备方法同实施例6。
试验结果(以总黄酮计)未包衣微丸溶出度时间(min) 5 10 20 40 60累积溶出百分数36.78 45.05 61.60 74.16 78.75包衣微丸释放度时间(h) 0.51 2 4 6 8 12累积释放百分数11.35 13.19 16.87 39.54 53.63 62.98 70.95实施例8
珍珠菜缓释包衣微丸的制备未包衣微丸 用量药物珍珠菜提取物 1.0g(实施例4方法制备得到)成型辅料微晶纤维素1.0g粘合剂 0.2％PVPk301.5ml包衣液 缓释材料乙基纤维素75mg致孔剂 珀洛沙姆188 9mg抗粘着剂滑石粉15mg溶剂90％乙醇 1.5ml制备方法同实施例6。
试验结果(以总黄酮计)未包衣微丸溶出度时间(min) 5 10 20 40 60累积溶出百分数41.54 50.65 66.18 78.60 81.92包衣微丸释放度时间(h) 0.51 2 4 6 8 12累积释放百分数8.29 13.19 32.19 46.89 59.76 65.88 77.53实施例9珍珠菜缓释包衣微丸的制备未包衣微丸 用量药物珍珠菜提取物 1.0g(实施例4方法制备得到)成型辅料微晶纤维素 1.0g粘合剂 0.2％PVPk301.5ml包衣液 缓释材料乙基纤维素 77mg致孔剂 HPMC 7.5mg抗粘着剂滑石粉 14.5mg溶剂90％乙醇 1.5ml制备方法同实施例6。
试验结果(以总黄酮计)未包衣微丸溶出度时间(min) 5 10 20 40 60累积溶出百分数41.54 50.65 66.18 78.60 81.92包衣微丸释放度时间(h) 0.51 2 4 6 8 12累积释放百分数7.68 11.97 31.57 41.99 54.24 62.82 72.6权利要求
1.一种珍珠菜提取物的缓释微丸，其特征是由珍珠菜提取物与药用辅料组成微丸丸芯，外裹缓释衣膜，其中，珍珠菜提取物占微丸丸芯重量的40～70％，缓释衣膜占整个微丸重量的2～10％。
2.权利要求1的缓释微丸，其中药用辅料包括成型辅料和粘合剂。
3.权利要求2的缓释微丸，其中成型辅料选自淀粉、乳糖、微晶纤维素、低取代羟丙基纤维素或糊精的一种或几种；粘合剂选自羟丙甲基纤维素、甲基纤维素、羧丙基纤维素、羧甲基纤维素钠、聚乙二醇、聚维酮中的一种或几种。
4.权利要求1的缓释微丸，其中缓释衣膜含聚合物材料、致孔剂和抗粘着剂。
5.权利要求4的缓释微丸，其中聚合物材料为乙基纤维素和/或丙烯酸树脂类；致孔剂为羟丙甲基纤维素、聚乙二醇、聚维酮中的一种或几种，抗粘着剂为滑石粉、硬脂酸镁、二氧化硅中的一种或几种。
6.权利要求4的缓释微丸，以衣膜总重量计，其中聚合物材料占72～80％，致孔剂占6～12％，抗粘着剂占14～16％。
7.权利要求1的缓释微丸，其中珍珠菜提取物由下列方法制备将珍珠菜粉碎，用20～80％乙醇回流提取，浓缩水沉后，过滤，滤液经回收溶媒浓缩至0.5～2.0ml/g生药，浓缩液调节pH值至4～6，然后通过树脂吸附，乙醇洗脱，蒸发除去溶剂并干燥，即得，其中所采用的树脂为AB-8、D4020、NKA-9、ZTC大孔吸附树脂或聚酰胺树脂。
8.权利要求7的缓释微丸，其中洗脱用乙醇浓度为20～95％。
9.权利要求7的缓释微丸，其中洗脱用乙醇浓度为40％。
10.权利要求1至9中任一项的缓释微丸的制备方法，包括a)将珍珠菜提取物及药用辅料混合均匀后，制备软材，通过挤出滚圆造粒法制备含药微丸丸芯；b)取缓释衣膜材料，乙醇溶解后超声混匀；c)取含药丸芯，置沸腾包衣装置中流化，将包衣液雾化喷到微丸上，即得包衣缓释微丸。
全文摘要
本发明涉及天然药物领域及药物制剂领域，具体涉及一种珍珠菜提取物的缓释微丸制剂及其制备方法。本发明的微丸由珍珠菜提取物与药用辅料组成微丸丸芯，外裹缓释衣膜，其中，珍珠菜提取物占微丸丸芯重量的40～70％，缓释衣膜占整个微丸重量的2～10％。本发明采用的缓释微丸技术，结合天然药物的有效性和安全性，制备出了缓慢释放、药效好的珍珠菜提取物微丸制剂，可广泛用于临床。
文档编号A61P35/00GK101019902SQ20071002056
公开日2007年8月22日 申请日期2007年3月12日 优先权日2007年3月12日
发明者唐丽华, 游本刚, 王祎茜, 张威, 黄荣华, 潘海敏 申请人:苏州大学