藏茵陈提取物及其制备方法、药物组合物和用途的制作方法

专利名称：：藏茵陈提取物及其制备方法、药物组合物和用途的制作方法
技术领域：
：本发明属于医药
技术领域：
，涉及藏茵陈提取物，具体涉及藏茵陈提取物及其制备方法、药物组合物和医药用途。
背景技术：
：藏茵陈为藏医预防和治疗各种肝炎、肝损伤、肝纤维化、脂肪肝等疾病的名贵药材。植物化学研究表明，藏茵陈类主要药材(川西獐牙菜、印度獐牙菜、抱茎獐牙菜和花锚)植物中含有裂环烯醚辟苦类、黄酮及其香类、口山酮及其苷类、三萜类等多种成分。其中裂环烯醚辟芬类成分獐牙菜苦香、龙胆苦苷、獐牙菜苷具有保肝降酶、抗炎、促iW损伤恢复、抗肝纤维化等药理作用；芒果苷具有保肝利胆、抗肿瘤、利尿作用；异荭草苦具有明显的保肝作用。目前，藏茵陈类药材例如川西獐牙菜(5WeW/"mwMO衍.Franch)、印度獐牙菜(5WWac/w'ray/to(Roxb.exFlemi)Karst)、抱茎獐牙菜(5Ww,a々awc/ze"a"a/z.smith)、花4苗(/fa/ew'ae〃z>//caD.Don)等研制、开发的4元肝炎药物已有工业生产。中国专利(92108809.4)公开了一种藏茵陈有效成分的提取工艺、设备和藏茵陈片剂的生产方法。该工艺以藏茵陈草为原料，乙醇为提取剂，采用了连续提取、浓缩罐浓缩、敞口锅浓缩、干燥、粉碎等工序。连续提取工序中使用的连续提取设备的特征是它有两个提取罐，提取罐通过提取管道连接在一起，提取罐底部设有加热室。藏茵陈片剂的生产方法的特征是浸膏粉为45—90%，辅料为10—55%，经混合拌勻、混合湿润、干燥、压片成型等工序生成产品。该发明乙醇消耗少，能耗低，可连续提取。中国专利申请(200310121024.4)公开了一种獐牙菜苦甙注射剂及其制备方法和应用。该方法是以龙胆科、玄参科或木犀科植物为原料，采用常规ii物化学方法提取、分离、纯化，制得獐牙菜苦戒；称取獐牙菜苦戒和药用辅料，并加入注射用水，在30°C~60。C下保温10-20分钟，冷却，过滤；滤液在0。C5。C下放置148小时，过滤，灌封或灌封冷冻干燥，灭菌，包装，即为所需的獐牙菜苦戒注射剂。所述的过滤采用微孔滤膜、超滤膜或者纳滤膜。该发明作为制备治疗或预防病毒性肝炎或化学药物损伤性肝炎的药中的应用；作为制备治疗或预防胆嚢炎及胃肠道痉挛引起的疼痛的药中的应用，均具有良好的药用前景。中国专利(200410022719.1)公开了一种獐牙菜苦苷原料药制备方法，由以下步骤组成植物药材粉碎，乙醇冷浸提取，合并提取液，于40。C以下减压回收乙醇，得浸膏；浸膏溶于IO至15倍水中，调pH值至4.07.0后上大孔吸附树脂柱，首先以水为流动相洗脱，然后以低浓度乙醇洗脱，收集有效成分段馏分，于40。C以下减压回收乙醇，得淡黄色有效成分水溶液；有效成分水溶液用大孔树脂吸附，用高浓度乙醇洗脱，收集有效成分馏分4殳，于40。C以下减压回收乙醇至无乙醇止，得小体积有效成分流动状浸膏；流动状膏物进行反相柱层析，以乙醇或曱醇为流动相，收集40%~80%洗脱部份，于40。C以下减压回收醇至无醇味，用溶剂替代法得小体积有效成分溶液；冷冻干燥，得白色至淡黄色有效成分4分末。中国专利申请(200410055462〗)公开了一种从獐牙菜属主要药用植物中制备抗肝炎活性部位的方法，包括如下步骤(1)4分石争植物；称取植物粉末，放入水或亲水性有机溶剂中，植物粉末与溶剂的总量比为1:2-20，在50-100。C下回流提取2-4次，依次递减溶剂用量，过滤，得合并浓缩液，置室温或0-4。C冷藏12-48小时，离心或过滤，得澄清提取液；(2)使提取液以0.5-3BV/h的流速緩慢流过大孔吸附树脂的树脂柱。(3)用0.5-5倍树脂体积的水緩慢洗树脂柱，用10-70%的乙醇或曱醇水溶液以0.5-2BV/h的流速进行洗脱，收集洗脱液，浓缩至干，得到抗肝炎活性部位。中国专利申请(200510110396.6)公开了一种川东獐牙菜(5WwtocbW^Franch)中有效成分獐牙菜苦香(Swertiamarin)单体的分离纯化方法。该发明方法以大孔吸附树脂S-8为预分离填料，含水乙醇为洗脱剂；再以石圭胶G柱色i普纯化，乙酸乙酯-甲醇为洗脱剂解析，层析产品经析晶脱色处理，最终冷冻干燥得到98%獐牙菜苦苷纯品。该发明方法与原有传统工艺相比，采用常规廉价填料为分离介质，优化了产品分离纯化、脱色与干燥技术，方法简便，制备周期短，成本低，单体提取率及产品纯度高，可实现工业化生产。到目前为止，关于藏茵陈类药物(包括獐牙菜属药用植物)的中国专利才艮道中，CN1634099、CN1704086、CN1966511针对的是獐牙菜属植物中单一活性成分獐牙菜苦苦的原料和单体制备和制剂(如注射液)。CN1436474是关于一种复方藏茵陈茶々欠料配方的专利。CN1156602涉及的是一种以藏茵陈为主药的复方成药的配方及其制剂的专利。CN1070341是关于藏茵陈有效成分提取工艺设备和藏茵陈片剂生产方法的专利，该专利中有效成分指的是藏茵陈药材经乙醇连续提取，浓缩罐浓缩，干燥，粉碎后得到的固形物，即为藏茵陈药材成分复杂的粗4是物。专利CN1704086针对的是獐牙菜属主要药用植物川西獐牙菜、印度獐牙菜、抱茎獐牙菜等多种獐牙菜属药用植物抗肝炎活性部位的制备方法。其制备中采用水或亲水性溶剂对药材4分末提取，提取液浓缩后进行大孑L树脂柱分离，收集10-70%乙醇或曱醇洗脱液浓缩得到活性部位。该活性部位成分复杂，含有芒果苷、当药黄素、口山酮苷等及龙胆苦苷、獐牙菜苦苷、獐牙菜苷、苦龙胆酯苷等裂环烯醚碎苷成分。专利CN1634520公开了一种以藏茵陈药材为原料，经亲水溶剂提取，高速离心除杂，超滤处理，截留分子量小于10000Da的含药溶液，制成注射用水针或冻干粉针的工艺。该专利公开的工艺制得的针剂是含有多种成分的复杂混合物，其中已知成分主要有以芒果苷为主的口山酮、以当药黄素为主的黄酮苷、以龙胆苦苷、獐牙菜苦苦、獐牙菜香、苦龙胆酯苷等为主的裂环烯醚萜苷等。如上所述，目前关于藏茵陈类药物(包括獐牙菜属药用植物)的中国专利报道的发明、方法所获得的藏茵陈类植物的制品都是成分复杂、成分多数未知、各成分含量不确定、成分间比例不确定的^R取物。因此，提供一种具有治疗疗效的、符合制药要求、成份可表征的藏茵陈提取物，仍是本领域研究者所期望的。发明的内容本发明的目的是提供一种具有治疗疗效的、符合制药要求、成份可表征的藏茵陈提取物。本发明的另一目的是提供一种制备上述藏茵陈提取物的方法。本发明的再一目的是提供一种包含上述藏茵陈提取物的药物组合物。本发明的进一步的目的是提供一种上述藏茵陈提取物在制备用于抗肝纤维化的医药中的用途。本发明所述的藏茵陈可以是指多种藏茵陈类的药材，优选的可以是川西獐牙菜、印度獐牙菜、抱茎獐牙菜和花锚。更优选的，本发明所述的藏茵陈是川西獐牙菜。一方面，本发明提供的一种具有药理活性、符合制药要求、成份可表征的藏茵陈提取物，包含獐牙菜苦苷、龙胆苦苷、獐牙菜苷、芒果苷、异荭草苷，所述五种成分的质量比为(0.040.71):(2040):(1~15):(1.6~26):(0.010.16)。优选的，根据本发明的上述藏茵陈提取物，其中龙胆苦苷的含量为40-70wt%。更优选的，根据本发明的上述藏茵陈提取物，其中龙胆苦苦的含量为50-70wt%。进一步优选的，根据本发明的上述藏茵陈提取物，其中龙胆苦苷的含量为50-70wt%;獐牙菜苦苷龙胆苦苷獐牙菜苷芒果苷异荭草香的质量比为(0.040.71):(2040):(1~15):(1.626):(0.01-0.16)。本发明所述的獐牙菜苦苷(Swertiamarin)、龙胆苦苦(Gentiopicrin)、獐牙菜苷(Sweroside)、芒果苷(Mangiferin)、异荭草苷(Isoorientin),它们的化学结构分别如下另一方面，本发明提供的一种制备上述藏茵陈提取物的方法，其包括如下步骤(1)取藏茵陈药材，4分碎或切^:;(2)用7-15倍量的0-95%乙醇水溶液或丙酮水溶液提取3次，合并3次提取液；(3)将4是取液减压浓缩；(4)浓缩液依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯和正丁醇进行分配，各种有机溶剂的分配次lt为4次，每次体积为浓缩液初始体积；(5)减压浓缩各溶剂分配溶液，得各溶剂分配部位稠膏；(6)将正丁醇分配部位稠膏用适量蒸馏水溶解，加样于预处理好的树脂材料I的大孔树脂柱上端，吸附4-10小时；(7)用5-20BV蒸馏水以0.5-2BV/h的流速洗脱，再用10-95%的乙醇水溶液以0.5-2BV/h的流速线性梯度洗脱，分段收集洗脱液；(8)合并10-40%乙醇水溶液洗脱液，减压浓缩至无醇味；(9)将以上步骤的浓缩液加样于树脂材料I1的大孔树脂柱上端，吸附4-10小时；(10)用3-8BV的蒸馏水以0.5-3BV/h的流速洗脱，再用10-95%乙醇水溶液线性梯度洗脱；(11)收集10-30%乙醇水溶液洗脱液，浓缩该收集液，干燥，賴"淬即得藏茵陈提取物。其中，上述的BV表示树脂柱的柱床体积。具体地说，本发明提供的一种制备上述藏茵陈提取物的方法，其包括如下步骤(1)取藏茵陈药材，粉碎或切段，用10-15倍量的0-95°/。乙醇水溶液或丙酮水溶液提取三次，合并三次4是取液，减压浓缩，浓缩液依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯和正丁醇进行分配，各有机溶剂的分配次数为4次，每次体积为浓缩液初始体积。减压浓缩各溶剂分配溶液，回收溶剂，得各溶剂分配部位稠膏；(2)将正丁醇分配部位稠膏用适量蒸馏水溶解，加样于预处理好的树脂材料I的大孔树脂柱上端，吸附4-10小时后，用5-20BV蒸馏水以0.5-2BV/h的流速洗脱。随后以0.5-2BV/h的流速线性梯度洗脱，洗脱液为10-95%的乙醇水溶液，分段收集洗脱液，合并10-40%乙醇水溶液洗脱液，减压浓缩至无醇味；(3)将步骤(2)中浓缩液进行第二次大孑L树脂柱分离，具体步骤为将浓缩^口样于树脂材料II的大孔树脂柱上端，吸附4-10小时，用蒸馏水以0.5-3BV/h的流速洗脱，洗脱液为3-8BV,用10-95%乙醇水溶液线性梯度洗脱，收集10-30%乙醇水溶液洗脱液，浓缩该收集液，干燥，4分碎即得浅黄色至浅黄褐色的藏茵陈抗肝纤维化活性成分组藏茵陈苷粉末。本发明制备藏茵陈提取物的过程中使用的树脂材料I和/或树脂材料II可以任意地分别选自S-8、X-5、MG-2、FL-3、DlOl、SA-3、AB-8、HPDIOO、HPD300、HPD400、HPD500、HPD700或HPD800等。本发明提供的从藏茵陈药材中提取的具有抗肝纤维化的活性成分组藏茵陈苷，该提f^物的提取工艺显著特点在于通过该工艺能够提取藏茵陈5种活性成分总含量可达到60%以上，优选可达到75%以上，更优选可达到85%提取工艺中应用大孔树脂，、育l有效地出去糖、蛋白质、tt酸等杂志，提高活性成分含量。本发明提供的藏茵陈提取物，其中的抗肝纤维化活性成分组藏茵陈苷的HPLC含量测定方法，含量测定方法如下色谱条件与系统适应性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，检测波长为254nm,理论板数按龙胆苦苦计算不低于3000。流动相:见表l。_表l藏茵陈提取物HPLC测定流动相_<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>供试品溶液的制备取本品25mg，精密称定，用曱醇溶解后置于100ml容量瓶中，曱醇定容于刻度，摇匀，即得。对照品溶液的制备取獐牙菜苦苷、龙胆苦苷、獐牙菜苷、芒果苷和异荭草苷对照品各10mg，精密称定，加曱醇溶解并定容于50ml容量瓶中，稀释至刻度，摇匀，即得。测定方法分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10pl，注入高效液相色谱仪，记录色谱图，计算，即得。通过以上方法测定本发明制备的藏茵陈提取物。作为本发明优选的实施方案的藏茵陈提取物，其中包含獐牙菜苦苷、龙胆苦苷、獐牙菜苷、芒果苷、异荭草香，所述五种成分的质量比为(0.040.71):(20~40):(115):(1.626):(0.01~0.16)。作为本发明更优选的实施方案的藏茵陈提取物，其中的含龙胆苦香为40wt°/o-70wt%，优选为50wt%-70wt%。以上方法还可以适用于藏茵陈提取物的指紋图谱的测定。以上方法还可以适用于含有所述藏茵陈提取物的药物组合物的定量测定。即，所述的药物组合物中，通过以上的HPLC法测定，獐牙菜苦苷龙胆苦苷獐牙菜苷芒果苦异荭草苷的质量比为(0.040.71):(20-40):(1~15):(1.6~26):(0.01~0.16)。再一方面，本发明提供了一种药物组合物。具体的，本发明的药物组合物，包括治疗有效量的如本发明上述的藏茵陈提取物，和任选的药学可接受的载体。在该药物组合物中，獐牙菜苦苷龙胆苦苷獐牙菜苷芒果苷异荭草苷的质量比为(0.040.71):(2040):(1~15):(1.6-26):(0.01~0.16)。在本发明的药物组合物中，藏茵陈提取物和药学可接受的载体的二者比例是可以根据需要在较大范围内变化，这是本领域技术人员公知的，作为较好的实施方案，二者的重量比(藏茵陈提取物药学可4妻受的载体，w/w)可以为1:99~99:1。在发明的药物组合物中，五种苷占组合物的重量百分比可因具体组合物的形式、使用途径等因素而改变，是可以不必作出限定的，只要能够提供足量的治疗有效量的提取物施用于患者即可。根据本发明的上述药物组合物，其为适用于口服给药、胃肠外给药或局部给药、外用给药的药物剂型。根据本发明的上述药物组合物，所述的药物剂型选自片剂、胶嚢剂、颗粒剂、注射液、注射用粉剂、透皮贴剂、软膏剂、凝胶剂、栓剂、口服溶液、口服混悬液、注射用乳剂、口服乳剂等、緩释片剂、控释片剂等。在一种实施方案中，该藏茵陈提取物-使用药学可接受的配方施用于受试者，例如，以药学可接受的配方施用于该受试者后，药学可接受的配方给个体提供了持续有效达至少1小时、2小时、3小时、4小时、6小时、8小时、12小时的藏茵陈提:f又物。本发明上述的药物组合物可以适合于局部或经口施用于个体。在如以下详细描述的实施方案中，本发明的该药物组合物可以特别地配制用于以固体或液体形式施用，包括如下适用的(l)经口施用，例如，灌服剂(水性或非水性溶液或混悬液)、片剂、大丸剂、散剂、颗粒剂、糊剂；(2)胃肠外施用，例如，通过皮下的、月几内的或静脉内的注射剂，例如，灭菌溶液混悬液；(3)局部应用，例如，乳膏剂、软膏剂用于皮肤的喷雾剂；(4)阴道内或直肠内，例如，阴道栓剂、乳膏剂或泡沫剂；或者(5)气雾剂，例如，水性气雾剂、脂质体制剂或含有本发明藏茵陈提取物活性成分的固体微粒。所述的短语"药学可接受的"指的是本发明藏茵陈提取物、含有该藏茵陈提取物的组合物和/或剂型，它们在可靠的医学判断范围内，适用于与人类和动物的组织接触而没有过高的毒性、刺激、过敏性应答或其它问题或并发症，具有适当合理的利益/风险比。所述的短语"药学可接受的载体"包括药学可接受的材料、组分或载体，例如液体或固体填充剂、稀释剂、赋形剂、溶剂或包胶材料，参与将该藏茵陈提取物活性成分从一个器官或身体的部分运载或运输至另一器官或身体的部分。在与配方其它成分相容性和对患者无害的意义上说，各载体应当是"可接受的"。一些可用于药学可接受的载体的材料的实例包括(l)糖类，例如乳糖、葡萄糖和蔗糖；(2)淀粉类，例如玉米淀粉和马铃薯淀粉；(3)纤维素及其衍生物，例如羧曱基纤维素钠、乙基纤维素和醋酸纤维素；(4)西黄蓍胶粉；(5)麦芽；(6)明胶；(7)滑石粉；(8)赋形剂，例如可可脂和栓剂蜡类；(9)油类，例如花生油、棉子油、红花油、芝麻油、梯^览油、玉米油和大豆油；(10)乙二醇类，例如丙二醇；(ll)多元醇类，例如甘油、山梨醇、甘露醇和聚乙二醇；(12)酯类，例如油酸乙酯和月桂酸乙酯；(13)琼脂；(14)緩冲剂，例如氢氧化镁和氢氧化铝；(15)海藻酸；(16)无热原水；(17)等渗盐水；(18)林格氏溶液；(19)乙醇；(20)磷酸盐緩冲溶液；和(21)其它非毒性可配伍的用于药物配方的物质。润湿剂、乳化剂和润滑剂，例如十二烷^f克酸钠和硬脂酸镁，以及着色剂、释放剂、包衣剂、甜"未剂、调味剂和芳香剂，防腐剂和抗氧剂也可以出现于该组合物中。药学可接受的抗氧剂的实例包括(l)水溶性抗氧剂，例如抗坏血酸、盐酸半胱氨酸、硫酸氢钠、亚碌u酸钠、偏重亚好u酸钠、亚硫酸钠等；(2)油溶性抗氧剂，例如抗坏血酸棕榈酸酯、叔丁基对羟基茴香醚(BHA)、二丁基羟基曱苯(BHT)、卵磷脂、丁羟基茴香醚、a-生育酚等；和(3)金属螯合剂，例如枸橼酸、乙二胺四乙酸(EDTA)、山梨醇、酒石酸、磷酸等。含有藏茵陈提取物的组合物包括适合于经口、经鼻、局部(包括口颊和舌下)、直肠、阴道、气雾剂和/或胃肠外施用的那些。该组合物可方便地以单位剂型呈现，并且可以通过任何药学领域已知的方法制备。适合于经口施用的本发明组合物可以^J交嚢剂、扁胶嚢剂、丸剂、片剂、锭剂(使用香味基质，通常为蔗糖和阿拉伯胶或西黄蓍胶)、散剂、颗粒剂，或为在水或非水性液体中的溶液剂或混悬剂，或为水包油或油包水液体乳剂，或为酏剂或糖浆剂，或为软锭剂(使用惰性基质，例如明胶和甘油，或蔗糖和阿拉伯胶)和/或为口腔洗剂等的形式，各自含有预定量的藏茵陈提取物的活性成分。藏茵陈提取物还可以以大丸剂、药糖剂或糊剂施用。在本发明供经口施用的固体剂型(胶嚢剂、片剂、丸剂、糖锭剂、散剂、颗粒剂等)中，藏茵陈提取物的活性成分与一种或多种药学可接受的载体混合，该载体例如枸橼酸钠或磷酸二钙，和/或如下任意的l)充填剂或增充剂，例如淀粉类、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇和/或硅酸；(2)粘合剂，例如，羧曱基纤维素、藻酸盐类、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖和/或阿拉伯胶；(3)保湿剂，例如甘油；(4)崩解剂，例如琼脂、碳酸4丐、马铃薯或木薯淀粉、海藻酸、某些珪酸盐类和碳酸钠；(》溶解阻滞剂，例如石蜡；(6)吸收促进剂，例如季胺类化合物；(7)润湿剂，例如，乙酰醇(acetylalcohol)和单硬脂酸甘油酯；(8)吸收剂，例如高岭土和膨润土；(9)润滑剂，例如滑石粉、硬脂酸4丐、硬脂酸镁、固体聚乙二醇类、十二烷基硫酸钠及其混合物；和(10)着色剂。对于胶嚢剂、片剂和丸剂，该药物组合物还可以包括緩冲剂。使用赋形剂使用乳糖以及高分子量聚乙二醇类等，相似类型的固体组分还可以作为充填剂用于软和硬填充的明胶胶嚢剂。片剂可以任选地与一种或多种助剂通过压制或沖莫制而制备。压制片剂可以使用粘合剂(例如，明胶或羟丙基曱基纤维素)、滑润剂、惰性稀释剂、防腐剂、崩解剂(例如，淀粉幾乙酸钠或交联羧曱基纤维素钠)、表面活性或分散剂而制备。模制片剂可以通过在适当的机器上将粉末化的用惰性液体稀释剂润湿的活性成分的混合物制模而得。本发明药物组合物的片剂和其它固体剂型，例如糖锭剂、胶嚢剂、丸剂和颗粒剂可以任选地压痕，或者以衣层或壳而制备，例如药物配制领域/>知的肠溶衣或其它衣层。它们还可以配制成提供延緩或控制释放的活性成分，其中使用例如，以不同比例提供期望的释》丈才莫式的羟丙基曱基纤维素，其它聚合物基质、脂质体和/或微球。它们通过例如经细菌截流滤器过滤，或通过将灭菌剂掺入无菌固体组合物中而除菌，该无菌固体组合物可以在使用前溶于无菌水或一些其它无菌可注射的介质中。这些组合物还任选地含有遮光剂并且可以是仅仅、或优选在胃肠道的某些部位，任选地以延緩的方式释》文活性成分(类)的组合物。可以使用的包埋组合物的实例包括聚合物质和蜡类。如果合适，该活性成分还可以是与一种或多种上述赋形剂的^l交嚢形式。藏茵陈提取物经口施用的液体剂型包括药学可接受的乳剂、微乳剂、溶液剂、混悬剂、；瞎浆剂和酏剂。除该活性成分外，液体剂型可以^^有通常用于本领域的惰性稀释剂，例如，水或其它溶剂、增溶剂和乳化剂，例如乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、节醇、苯曱酸节酯、丙二醇、1,3-丁烯乙二醇、油类(特别地，棉籽、花生、玉米、胚芽、橄榄、蓖麻和芝眛油)、甘油、四氢呋喃曱醇、聚乙二醇类和脱水山梨醇脂肪酸酯类及其混合物。除了惰性稀释剂外，经口服的组合物可以包括辅助剂例如润湿剂、乳化剂和混悬剂、甜味剂、调味剂、着色剂、芳香剂和防腐剂。除了活性藏茵陈提取物外，混悬剂可以含有混悬剂，例如，乙氧基化异硬脂醇类、聚氧乙烯山梨醇和脱水山梨醇酯类、微晶纤维素、偏氢氧化铝、膨润土、琼脂和西黄蓍胶及其混合物。本发明供直肠或阴道施用的药物组合物可以是栓剂，其可以通过将藏茵陈提取物与一种或多种适合的非刺激性的包括例如可可脂、聚乙二醇类、栓剂蜡或水杨酸酯的赋形剂或载体混合而制备，并且该栓剂在室温下为固体，但在体温下为液体，并且因此在直肠或阴道腔中会熔化并释放活性剂。本发明适合阴道施用的组合物还包括阴道栓剂、棉塞剂、乳膏剂、凝胶剂、糊剂、泡沫剂或含有如本领域已知的适合的载体的喷雾配方。藏茵陈提取物的局部或经皮施用的剂型包^^t剂、喷雾剂、软膏剂、糊剂、乳膏剂、洗剂、凝力交剂、溶液剂、贴剂和吸入剂。该活性藏茵陈提取物可以在无菌条件下与药学可接受的载体和任何防腐剂、緩冲剂或可能需要的抛射剂混合。除了本发明的藏茵陈提取物外，软膏剂、糊剂、乳膏剂和^l交剂可以含有赋形剂，例如动物和植物脂肪类、油类、蜡类、石蜡类、淀粉、西黄蓍胶、纤维素衍生物、聚乙二醇类、硅酮类、膨润土、硅酸、滑石粉和氧化锌或其混合物。除了藏茵陈提取物外，散剂和喷雾剂可以含有赋形剂例如乳糖、滑石粉、珪酸、氢氧化铝、硅酸钩类和聚酰胺粉，或这些物质的混合物。喷雾剂还可以含有常用的抛射剂，例如氯氟碳氢化合物和挥发性未取代的碳氢化合物，例如丁夂克和丙火克。藏茵陈提取物可以另选地通过气雾剂施用。这是通过制M有该藏茵陈^是取物的水性气雾剂、脂质制品或固体颗粒而实现。可以^吏用非水性(例如石友氟化合物抛射剂)混悬剂。声波雾化器是优选的，因为它们使该藏茵陈提取物曝露于剪切力减至最小，该剪切力可引起藏茵陈提取物中的活性成分降解。通常，水性气雾剂是通过将该藏茵陈提取物的水性溶液或混悬液与常规的药学可接受的载体和稳定剂配制而制备。该载体和稳定剂因特定化合物的需要量而改变，但是典型地包括非离子型表面活性剂(吐温类、普流罗尼克类或聚乙二醇类)、无毒蛋白类如血清白蛋白、脱水山梨酯类、油酸、卵磷脂、氨基酸例如甘氨酸、緩冲剂、盐类、糖类或糖醇类。气雾剂通常由等渗溶液制备。透皮贴剂具有向身体提供控制释放藏茵陈提取物的额外优点。该剂型可以通过将该藏茵陈提取物活性成分溶解或M至适当的介质中而制备。还可使用吸收促进剂以增加该活性成分穿过皮肤的流量。该流量的速率可以通过提供速率控制膜或者将活性成分^:至聚合物1^质或凝胶中而得到控制。眼科配方、眼膏剂、散剂、溶液剂等也在本发明的范围内。本发明适合胃肠外施用的药物组合物包含藏茵陈提取物与一种或多种药学可接受的无菌等渗水性或非水性溶液剂、分歉剂、混悬剂或乳剂，或者临用前可以复溶于无菌可注射溶液剂或^:剂中的无菌粉末，该药物组合物可以含有抗氧剂、緩冲剂、抑菌剂、使该配方与意欲接受者的血液等渗的溶质或者混悬或增稠剂。可以用于本发明药物组合物的适合的水性或非水性载体的实例包括水、乙醇、多元醇类(例如甘油、丙二醇、聚乙二醇类等)及其适合的混合物、植物油类如橄榄油和可注射的有^/L酯类例如油酸乙酯。可以〗呆持适合的流动性，例如，通过使用包衣材料例如卵磷脂、在分散剂时通过维持需要的粒子径和通过^f吏用表面活性剂。这些组合物还可以含有辅助剂例如防腐剂、润湿剂、乳化剂和^t剂。通过包含各种抗细菌剂和抗真菌剂可以确保防止微生物的作用。该抗细菌剂和抗真菌剂例如对鞋基苯曱酸酯、三氯叔丁醇、苯酚、山梨酸等。还可以需要等渗剂例如糖类、氯化钠等包含于组合物中。另外，通过包含延緩吸收例如单硬脂酸铝和明胶的成分，可以使可注射药物剂型延长吸收。在某些情况下，为了延长药物的作用，需要减緩从皮下或肌内注射的药物的吸收。这可以通过使用具有弱水溶性的结晶或无定形材料的液体混悬剂而实现。药物的吸收速率依赖于其溶解速率，该溶解又依赖于晶体粒度、晶型等。或者，胃肠外施用的药物剂型的延緩吸收是通过将该药物溶解或混悬于油性载体中而实现的。可注射的贮库形式是通过在生物可降解聚合物例如聚交酯-聚乙醇酸交酯中将藏茵陈提取物形成微胶嚢基质而制备的。依据药物与聚合物的比，以及所用特定聚合物的性质，可以控制药物的释放速率。其它生物可降解聚合物的实例包括聚(原酸酯类)和聚(酐类)。贮库型可注射配方还可通过将药物包陷在与身体组织相容的脂质体或微乳剂中而制备。当藏茵陈提取物作为药物施用于人或动物时，它们可以以其本身给予，即不加任何的上述药学可接受的载体，将本发明上述的藏茵陈提取物以原形直接施用于患者；或者可以是以含有例如0.199.5%(更优选0.590%)的藏茵陈提取物与药学可接受的载体组合的药物组合物给予。不论所选择的施用途径，本发明的可以以适当水合的形式使用的藏茵陈提取物和/或药物组合物，它们是通过本领域技术人员已知的常规方法而配制成药学可接受的剂型。在本发明药物组合物中的活性成分，其实际的剂量7]c平和施用的时程可以改变以^f更获得一种活性成分的量，该量对于特定的患者、组合物和施用方法而言可有效地获得期望的治疗应答而对患者无毒性。示例性的剂量范围内是以龙胆苦苷计每日0.120mg/kg体重。本发明藏茵陈提取物的优选剂量是患者可耐受的最大的并且不发生严重不良反应的量。优选地，本发明的藏茵陈提取物以龙胆苦苷计，每日以约0.5mg~约16.0mg/kg体重，更优选约1.0mg约8.0mg//kg体重或更优选约1.5mg~约4.0mg/kg体重的浓度施用。上述值的中间范围也是本发明的部分。进一步的，本发明提供了一种上述藏茵陈提取物在制备预防或治疗肝纤维化的药物中的应用。本发明上述制备的药物，可以直接是本发明上述提供的藏茵陈提取物，也可以是本发明的藏茵陈提取物与任选的药学可接受的载体经制药工艺加工制成的如上述的药物组合物。特别地，上述的药物中包含治疗有效量的本发明上述的藏茵陈提取物。还特别地，上述的药物中包含的藏茵陈^是取物，其中的獐牙菜苦苷龙胆苦苷獐牙菜苷芒果苷异荭草苷的质量比为(0.04~0.71):(2040):(1~15):(1.6~26):(0.01~0.16)。本发明所述的肝纤维化是本领域技术人员公知的一种疾病。所述的肝纤维化是肝脏内纤维结締组织异常增生，细胞外基质过度沉积的病理过程，是向肝硬化甚至原发性肝癌发展的中间环节。同时，肝纤维化也是慢性肝病向肝硬化发展的必经阶段，各种原因引起的肝损伤在其发生发展的过程中都会经历肝纤维化这个病理过程，肝脏纤维化变时ALT、AST活性，血清HA、LN、PCin和CIV含量及肝匀浆HYP明显增加(与正常对照组比较差异有显著性P<0.05)，肉目M见察病变肝组织颜色灰白，质较硬，显微4竟下可见肝组织结构部分破坏，肝细胞变性坏死，有明显纤维组织增生。目前，药理实验中多采用四氯化碳对大鼠进行肝损伤，肝损伤经发展经历肝纤维化，进而形成肝硬化，从而造成抗肝纤维化(肝硬化^莫型。本发明中制得的藏茵陈提取物(含有多种藏茵陈苷)以藏茵陈提取物质量计，大鼠以0.05、0.1和0,2g/Kg/天的剂量灌胃给药，对四氯化碳肝纤维化模型有治疗作用，能促进四氯化碳大鼠肝纤维化逆转。本发明中制得的藏茵陈提取物能够降低病变肝组织羟脯氨酸含量，降低四氯化碳肝纤维化大鼠血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)活性和总胆红素(T-BILI)含量，明显降低大鼠血清透明质酸(HA)、层粘连蛋白(LN)、肝胆酸、III前胶原(PCIII)及IV型胶原(CIV)的含量(与模型组比较差异有显著性P<0.05)。本发明制得的藏茵陈提取物中，大剂量(0.2g/Kg)可使肝小叶结构明显改善，胶原纤维间隔减少，使肝细胞坏死、炎性细胞浸润少见，汇管区结締组织增生减轻。本发明制得的藏茵陈提取物中剂量(0.1g/Kg)灌胃给药使肝组织羟脯氨酸含量较模型对照组降低70%;低剂量(0.05g/Kg)灌胃给药使肝组织羟脯氨酸含量，交4莫型对照组降^f氐62%。尽管本发明提供了详细的动物试验结果，但是，根据本领域技术人员的知识，按照这些动物试验数据，在不付出创造性劳动的基础上，完全可以推知本发明的藏茵陈提取物及其组合物在用于人类患者时的剂量、给药方案等。通过本发明制得的抗肝纤维化活性成分组藏茵陈提取物(含有多种藏茵陈苷)中，其中包含的獐牙菜苦苷龙胆苦苷獐牙菜苷芒果苷异荭草苷的质量比为(0.040.71):(20~40):(1~15):(1.6~26):(0.01~0.16)。优选的实施方案中，龙胆苦苷含量40-70wt%。药理实验发现本发明制得的活性成分组能够改善肝损伤造成的各项指标，促进肝纤维化过程的逆转，较好的预防肝硬化。本发明提供的抗肝纤维化活性成分组藏茵陈苷的活性成分含量测定方法能够准确检测5种活性成分的含量，达到控制提取物品质的目的。图1为本发明藏茵陈提取物的HPLC分析的典型色谱图，其所使用的藏茵陈中药材为川西獐牙菜。图l中，川西獐牙菜提取的抗肝炎活性成分组的各种藏茵陈苷中的活性成分分别如下峰号化合物2獐牙菜苦苦(Swertiamarin)3龙胆苦苷(Gentiopicrin)4獐牙菜苦(Sweroside)5芒果苦(Mangiferin)6异荭草苦(Isoorientin)图2为治疗后的大鼠肝脏羟脯氨酸测定结果。具体实施方式以下参考通过具体实施方式进一步说明本发明。但是，这些实施方式只是为了便于理解本发明而作说明之用，并非用于限制本发明。实施例1.川西獐牙菜抗肝纤维化活性成分组藏茵陈苷的制备工艺取川西獐牙菜药材15公斤，切段(约1.5-2.5厘米)，置于200升的提取罐中，用95%乙醇150升70。C提取三次(三次共用450升)，提取时间分别为10小时，8小时，8小时。合并三次提取液(约400升)，用大型旋转蒸发仪浓缩至原来体积的四十分之一(约IO升)，浓缩液进行溶剂分配，依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯和正丁醇各40升，分别分四次，每次10升进行溶剂分配。分别回收溶剂，得正丁醇部位约l.l公斤。将正丁醇部位用5升蒸馏水溶解，上30公斤大孑L树脂柱(AB-8)进行分离，先用500升蒸馏水洗脱，随后依次分别用120升的10%,30%,40%，60%，80%和95%的乙醇水溶液洗脱，合并10%、30%、40%乙醇水溶液洗脱液，浓缩至3升。浓缩液上20公斤大孔树脂(HPD100)柱进行分离，先用200升蒸馏水洗脱，再依次分别用60升的20%,40%,60%，80%的乙醇水溶液洗脱，合并20%、40。/o乙醇水溶液洗脱液，浓缩并干燥得到约600克川西獐牙菜抗肝炎活性成分组的藏茵陈提取物(含有多种藏茵陈苷)。采用本发明前述的HPLC方法测定本实施例制备的藏茵陈提取物，结果如下龙胆苦苦=53wt%;獐牙菜苦苷龙胆苦苷獐牙菜苷芒果苷异荭草苷的质量比=0.51:28:9:7.5:0.09。实施例2.川西獐牙菜抗肝纤维化活性成分组藏茵陈苷的制备工艺取川西獐牙菜药材l公斤，切段(约1.5-2.5厘米)，置于10升的提取罐中，用75。/。乙醇9升70。C提取三次(三次共用27升)，提:f又时间分别为10小时，8小时，8小时。合并三次提取液(约20升)，用大型旋转蒸发仪浓缩至原来体积的四十分之一(约0.5升)，浓缩液进行溶剂分配，依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯和正丁醇各2升，分别分四次，每次0.5升进行溶剂分配。分别回收溶剂，得正丁醇部位约61克。将正丁醇部位用250毫升蒸馏水溶解，上2.4公斤大孔树脂柱(HPD100)进行分离，先用30升蒸馏水洗脱，随后依次分别用8升的15%，30%，40%,60%，80%和95%的乙醇水溶液洗脱，合并15%、30%、40%乙醇水溶液洗脱液，浓缩至3升。浓缩液上2/>斤大孑L树脂(AB-8)柱进行分离，先用12升蒸馏水洗脱，再依次分别用5升的20%,30%，60%,80%的乙醇水溶液洗脱，合并20%、30%乙醇水溶液洗脱液，浓缩并千燥得到约34克川西獐牙菜抗肝炎活性成分组的藏茵陈提取物(含有多种藏茵陈苷)。采用本发明前述的HPLC方法测定本实施例制备的藏茵陈提取物，结果如下龙胆苦香=46wt%;獐牙菜苦苷龙胆苦苷獐牙菜苷芒果苷异荭草苷的质量比=0.6:31:11:16:0.12。实施例3.川西獐牙菜抗肝纤维化活性成分组藏茵陈苷的制备工艺取川西獐牙菜药材2公斤，切段(约1.5-2.5厘米)，置于20升的提取罐中，用30%乙醇20升70。C提取三次(三次共用60升)，提取时间分别为8小时，8小时，8小时。合并三次提取液(约46升)，用大型旋转蒸发仪浓缩至原来体积的四十分之一(约1升)，浓缩液进4于溶剂分配，依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯和正丁醇各4升，分别分四次，每次l升进行溶剂分配。分别回收溶剂，得正丁醇部位约110克。将正丁醇部位用500毫升蒸馏水溶解，上4公斤大孑L树脂柱(S-8)进行分离，先用35升蒸馏水洗脱，随后依次分别用10升的10%,25%，40%，60%，80%和95%的乙醇水溶液洗脱，合并10%、25%、40%乙醇水溶液洗脱液，浓缩至1升。浓缩液上37>斤大孔树脂(HPD700)柱进行分离，先用15升蒸馏水洗脱，再依次分别用9升的20%,30%,60%,80%的乙醇水溶液洗脱，合并20%、30%乙醇水溶液洗脱液，浓缩并干燥得到约73克川西獐牙菜抗肝炎活性成分组的藏茵陈^R取物(含有多种藏茵陈苦)。采用本发明前述的HPLC方法测定本实施例制备的藏茵陈提取物，结果如下龙胆苦香-61wt。/o;獐牙菜苦苷龙胆苦苷獐牙菜苷芒果苷异荭草苷的质量比=0.05:22:3:5.1:0.04。实施例4.抱茎獐牙菜抗肝纤维化活性成分组藏茵陈苷的制备工艺取抱茎獐牙菜药材2公斤，粉碎(过20目筛)，置于20升的提取罐中，用70%乙醇10升75t^是取三次(三次共用30升)，^是取时间分别为8小时，6小时，6小时。合并三次提取液(约22升)，用大型旋转蒸发仪浓缩至原来体积的四十分之一(约0.5升)，浓缩液进行溶剂分配，依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯和正丁醇各3升，分别分四次，每次0.7升进行溶剂分配。分别回收溶剂，得正丁醇部位约98克。将正丁醇部位用400毫升蒸馏水溶解，上3.0公斤大孔树脂柱(HPD100)进行分离，先用38升蒸馏水洗脱，随后依次分别用9升的15%,30%,40%,70°/。，80%和95%的乙醇水溶液洗脱，合并15%、30%、40%乙醇水溶液洗脱液，浓缩至3.5升。浓缩液上2.5公斤大孔树脂(AB-8)柱进行分离，先用14升蒸馏水洗脱，再依次分别用6升的20%,30%,60%,80%的乙醇水溶液洗脱，合并20°/。、30%乙醇水溶液洗脱液，浓缩并干燥得到约51克川西獐牙茱抗肝炎活性成分組的藏茵陈提取物(含有多种藏茵陈香)。采用本发明前述的HPLC方法测定本实施例制备的藏茵陈提取物，结果如下龙胆苦苷=50wt°/。；獐牙菜苦苷龙胆苦苷獐牙菜苷芒果苷异荭草苦的质量比=0.59:29:13:21:0.14。实施例5.抱茎獐牙菜抗肝纤维化活性成分组藏茵陈苷的制备工艺取抱茎獐牙菜药材2公斤，粉碎(过20目篩)，置于20升的提取罐中，用50%乙醇10升80。C提取三次(三次共用30升)，^是取时间分别为8小时，6小时，6小时。合并三次提取液(约22升)，用大型旋转蒸发仪浓缩至原来体积的四十分之一(约0.5升)，浓缩液进行溶剂分配，依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯和正丁醇各3升，分别分四次，每次0.7升进行溶剂分配。分别回收溶剂，得正丁醇部位约115克。将正丁醇部位用400毫升蒸馏水溶解，上3.0公斤大孔树脂柱(S-8)进行分离，先用38升蒸馏水洗脱，随后依次分别用9升的15%，20%,30%,60°/。，80%和95%的乙醇水溶液洗脱，合并15%、20%、30%乙醇水溶液洗脱液，浓缩至3.5升。浓缩液上2.5公斤大孔树脂(D101)柱进行分离，先用14升蒸馏水洗脱,再依次分别用6升的10°/。，30%,60%,80%的乙醇水溶液洗脱，合并10%、30°/。乙醇水溶液洗脱液，浓缩并干燥得到约63克川西獐牙菜抗肝炎活性成分组的藏茵陈提取物(含有多种藏茵陈苷)。采用本发明前述的HPLC方法测定本实施例制备的藏茵陈提取物，结果^口下龙胆苦苷二42.2wt。/。；獐牙菜苦苷龙胆苦苷獐牙菜苷芒果苷异荭草苷的质量比=0.65:35:14:22:0.15。实施例6.印度獐牙菜抗肝纤维化活性成分组藏茵陈苷的制备工艺取印度獐牙菜药材10公斤，切段(约1.5-2.5厘米)，置于100升的提取罐中，用95。/。乙醇80升70。C提取三次(三次共用240升)，提取时间分别为IO小时，6小时，6小时。合并三次提取液(约200升)，用大型旋转蒸发仪浓缩至原来体积的四十分之一(约5升)，浓缩液进行溶剂分配，依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯和正丁醇各20升，分别分四次，每次5升进行溶剂分配。分别回收溶剂，得正丁醇部位约600克。将正丁醇部位用3000毫升蒸馏水溶解，上30公斤大孔树脂柱(X-5)进行分离，先用250升蒸馏水洗脱，随后依次分别用90升的15%，25%,40%,60%,80%和95%的乙醇水溶液洗脱，合并15%、25°/。、40%乙醇水溶液洗脱液，浓缩至5升。浓缩液上20公斤大孔树脂(HPD300)柱进行分离，先用200升蒸馏水洗脱，再依次分别用70升的10%，30%，60%,80。/。的乙醇水溶液洗脱，合并10%、30%乙醇水溶液洗脱液，浓缩并干燥得到约320克川西獐牙菜抗肝炎活性成分组的藏茵陈提取物(含有多种藏茵陈苦)。采用本发明前述的HPLC方法测定本实施例制备的藏茵陈提取物，结果如下龙胆苦苦=49.5wt%;獐牙菜苦苷龙胆苦苷獐牙菜苷芒果苷异荭草苷的质量比=0.57:30:12:14:0,1。实施例7.印度獐牙菜抗肝纤维化活性成分组藏茵陈苷的制备工艺取印度獐牙菜药材IO公斤，粉碎(过20目筛)，置于100升的提取罐中，用85%乙醇90升70。C提取三次(三次共用270升)，提取时间分别为8小时，6小时，6小时。合并三次提取液(约220升)，用大型旋转蒸发仪浓缩至原来体积的四十分之一(约6升)，浓缩液进行溶剂分配，依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯和正丁醇各24升，分别分四次，每次6升进行溶剂分配。分别回收溶剂，得正丁醇部位约640克。将正丁醇部位用3500毫升蒸馏水溶解，上30公斤大孔树脂柱(？1^3)进行分离，先用240升蒸馏水洗脱，随后依次分别用90升的15%,30%，40%,60%,80%和95。/。的乙醇水溶液洗脱，合并15%、30%、40%乙醇水溶液洗脱液，浓缩至5升。浓缩液上25公斤大孔树脂(HPD300)柱进行分离，先用200升蒸馏水洗脱，再依次分别用80升的30%，50%，60%,80%的乙醇水溶液洗脱，合并30%乙醇水溶液洗脱液，浓缩并干燥得到约300克川西獐牙菜抗肝炎活性成分组的藏茵陈提取物(含有多种藏茵陈苷)。采用本发明前述的HPLC方法测定本实施例制备的藏茵陈提取物，结果如下龙胆苦苷=47.0wt%;獐牙菜苦苷龙胆苦苷獐牙菜苷芒果苷异荭草苷的质量比=0.58:29:12:13:0.11。实施例8.花锚抗肝纤维化活性成分组藏茵陈普的制备工艺取花锚药材2公斤，切段(约1.5-2.5厘米)，置于20升的提取罐中，用75%乙醇15升70。C提取三次(三次共用45升)，提取时间分别为10小时，8小时，8小时。合并三次提取液(约35升)，用大型旋转蒸发仪浓缩至原来体积的四十分之一(约0.8升)，浓缩液进行溶剂分配，依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯和正丁醇各3.2升，分别分四次，每次0.8升进行溶剂分配。分别回收溶剂，得正丁醇部位约190克。将正丁醇部位用800毫升蒸馏水溶解，上4公斤大孔树脂柱(HPD100)进行分离，先用50升蒸馏水洗脱，随后依次分别用12升的10°/。，30%,50%,60%,80%和95%的乙醇水溶液洗脱，合并10%、30%乙醇水溶液洗脱液，浓缩至2升。浓缩液上3公斤大孔树脂(D101)柱进行分离，先用30升蒸馏水洗脱，再依次分别用8升的20%,30%，50%，80%的乙醇水溶液洗脱，合并20%、30°/。乙醇水溶液洗脱液，浓缩并干燥得到约110克川西獐牙菜抗肝炎活性成分组的藏茵陈提取物(含有多种藏茵陈苷)。采用本发明前述的HPLC方法测定本实施例制备的藏茵陈提取物，结果如下龙胆苦苷=54.0wt%;獐牙菜苦苷龙胆苦苷獐牙菜苷芒果苷异荭草苷的质量比=0.51:26:11:15:0.08。实施例9.花锚抗肝纤维化活性成分组藏茵陈苷的制备工艺取花锚药材2公斤，切段(约1.5-2.5厘米)，置于20升的提取罐中，用50%乙醇15升70。C提取三次(三次共用45升)，提取时间分别为10小时，8小时，8小时。合并三次提取液(约35升)，用大型旋转蒸发仪浓缩至原来体积的四十分之一(约0.8升)，浓缩液进行溶剂分配，依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯和正丁醇各3.2升，分别分四次，每次0.8升进行溶剂分配。分别回收溶剂，得正丁醇部位约190克。将正丁醇部位用800毫升蒸镏水溶解，上4公斤大孔树脂柱(HPD100)进行分离，先用50升蒸馏水洗脱，随后依次分别用12升的10%,30%,40%，60%,80%和95%的乙醇水溶液洗脱，合并10%、30%、40%乙醇水溶液洗脱液，浓缩至2升。浓缩液上37>斤大孔树脂(DIOI)柱进行分离，先用30升蒸馏水洗脱，再依次分别用8升的20°/。，30%,60%,80%的乙醇水溶液洗脱，合并20%、30%乙醇水溶液洗脱液，浓缩并干燥得到约80克川西獐牙菜抗肝炎活性成分组的藏茵陈^^取物(含有多种藏茵陈苦)。采用本发明前述的HPLC方法测定本实施例制备的藏茵陈提取物，结果如下龙胆苦苷=52.0wt°/0;獐牙菜苦苷龙胆苦苷獐牙菜苷芒果苷异荭草苷的质量比=0.55:30:13:17:0.09。实施例10.抱茎獐牙菜抗肝纤维化活性成分组藏茵陈苷的制备工艺取抱茎獐牙菜药材4公斤，粉碎(过20目筛)，置于40升的提取罐中，用95%乙醇30升75。C提取三次(三次共用90升)，提取时间分别为8小时，8小时，8小时。合并三次提取液(约78升)，用大型旋转蒸发仪浓缩至原来体积的四十分之一(约l.O升)，浓缩液进行溶剂分配，依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯和正丁醇各5升，分别分四次，每次1.25升进行溶剂分配。分别回收溶剂，得正丁醇部位约188克。将正丁醇部位用700毫升蒸馏水溶解，上5.0公斤大孑L树脂柱(HPD300)进行分离，先用55升蒸馏水洗脱，随后依次分别用16升的10%，30°/。，40°/。，70°/。，80°/。和95%的乙醇水溶液洗脱，合并10%、30%、40%乙醇水溶液洗脱液，浓缩至3.5升。浓缩液上3.5公斤大孔树脂(HPD-100)柱进行分离，先用24升蒸馏水洗脱，再依次分别用9升的15%,30%，60%，80%的乙醇水溶液洗脱，合并15%、30%乙醇水溶液洗脱液，浓缩并干燥得到约78克川西獐牙菜抗肝炎活性成分组的藏茵陈提取物(含有多种藏茵陈苷)。采用本发明前述的HPLC方法测定本实施例制备的藏茵陈提取物，结果如下龙胆苦香=70.3wt%;獐牙菜苦苷龙胆苦苦獐牙菜普芒果苷异荭草芬的质量比=0.04:40:1:1.6:0.01实施例11.印度獐牙菜抗肝纤维化活性成分组藏茵陈苷的制备工艺取印度獐牙菜药材IO公斤，粉碎(过20目筛)，置于IOO升的提取罐中，用50。/。乙醇90升70。C提取三次(三次共用270升)，提取时间分别为10小时，8小时，8小时。合并三次提取液(约210升)，用大型旋转蒸发仪浓缩至原来体积的四十分之一(约5.5升)，浓缩液进行溶剂分配，依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯和正丁醇各22升，分别分四次，每次5.5升进行溶剂分配。分别回收溶剂，得正丁醇部位约920克。将正丁醇部位用3600毫升蒸镏水溶解，上30公斤大孔树脂柱(X-5)进行分离，先用240升蒸馏水洗脱，随后依次分别用90升的20%，30%,40%，60%,80%和95%的乙醇水溶液洗脱，合并20%、30%、40%乙醇水溶液洗脱液，浓缩至5升。浓缩液上25公斤大孔树脂(HPD100)柱进行分离，先用200升蒸馏水洗脱，再依次分别用80升的20%,30%,60%,80%的乙醇水溶液洗脱，合并20%、30%乙醇水溶液洗脱液，浓缩并干燥得到约525克川西獐牙菜抗肝炎活性成分组的藏茵陈提取物(含有多种藏茵陈香)。采用本发明前述的HPLC方法测定本实施例制备的藏茵陈提取物，结果如下龙胆苦苦=40.0wt%;獐牙菜苦苷龙胆苦苷獐牙菜苷芒果苷异荭草苦的质量比=0.71:20:15:26:0.5。实施例12.花锚抗肝纤维化活性成分组藏茵陈苷的制备工艺取花锚药材2公斤，切段(约1.5-2.5厘米)，置于20升的提取罐中，用80%乙醇15升70。C提取三次(三次共用45升)，4是取时间分别为7小时，5小时，5小时。合并三次提取液(约37升)，用大型旋转蒸发仪浓缩至原来体积的四十分之一(约0.8升)，浓缩液进行溶剂分配，依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯和正丁醇各3.2升，分别分四次，每次0.8升进行溶剂分配。分别回收溶剂，得正丁醇部位约160克。将正丁醇部位用800毫升蒸馏水溶解，上4公斤大孔树脂柱(HPD300)进行分离，先用50升蒸馏水洗脱，随后依次分别用12升的20%，30%,40%，60%，80%和95%的乙醇水溶液洗脱，合并20%、30%、40%乙醇水溶液洗脱液，浓缩至2升。浓缩液上37>斤大孔树脂(DIOI)柱进行分离，先用30升蒸馏水洗脱，再依次分别用8升的30%,40%，60%，80%的乙醇水溶液洗脱，合并30°/。、乙醇水溶液洗脱液，浓缩并干燥得到约92克川西獐牙菜抗肝炎活性成分组的藏茵陈提取物(含有多种藏茵陈苷)。采用本发明前述的HPLC方法测定本实施例制备的藏茵陈提取物，结果如下龙胆苦苷-55.0wt。/o;獐牙菜苦苷龙胆苦苷獐牙菜苷芒果苷异荭草苷的质量比=0.3:35:8:12:0.25。实施例13.川西獐牙菜抗肝纤维化活性成分组藏茵陈苷的制备工艺(l)取川西獐牙菜药材l公斤，粉碎，置于提取罐中；(2)用7倍量的水在70。C下提取三次，每次提取10小时，合并三次提取液；(3)用大型旋转蒸发仪浓缩至约0.5升；(4)浓缩液进行溶剂分配，依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯和正丁醇各2升，分别分四次，每次0.5升进行溶剂分配；(5)减压浓缩各溶剂分配溶液，得各溶剂分配部位稠膏；(6)将正丁醇分配部位稠膏用约250毫升蒸馏水溶解，加样于预处理好的2.5公斤的AB-8的大孑L树脂柱上端，吸附4小时；(7)用5BV蒸馏水以0.5BV/h的流速洗脱，再用10-95%的乙醇7jc溶液以0.5BV/h的流速线性梯度洗脱，分段收集洗脱液；(8)合并10-40%乙醇水溶液洗脱液，减压浓缩至无醇p未(约3升)；(9)将以上步骤的浓缩液加样于2公斤的HPD100的大孔树脂柱上端，吸附4小时；(10)用3BV的蒸镏水以0.5BV/h的流速洗脱，再用10-95%乙醇水溶液线性梯度洗脱；(11)收集10-30%乙醇水溶液洗脱液，浓缩该收集液，干燥，并分碎即得藏茵陈提取物。采用本发明前述的HPLC方法测定本实施例制备的藏茵陈提取物，结果如下龙胆苦苦=40.7^%;獐牙菜苦苷龙胆苦苷獐牙菜苷芒果苷异荭草苷的质量比=0.71:20:15:26:0.08。实施例14.川西獐牙菜抗肝纤维化活性成分组藏茵陈苷的制备工艺(1)取川西獐牙菜药材l公斤，粉碎，置于提取罐中；(2)用IO倍量的30。/。丙酮/水在7(TC下提取三次，每次提取10小时，合并三次提取液；(3)用大型旋转蒸发仪浓缩至约0.5升；(4)浓缩液进行溶剂分配，依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯和正丁醇各2升，分别分四次，每次0.5升进行溶剂分配；(5)减压浓缩各溶剂分配溶液，得各溶剂分配部位稠膏；(6)将正丁醇分配部位稠膏用约250毫升蒸馏水溶解，加样于预处理好的2.5公斤的HPD100的大孔树脂柱上端，吸附4小时；(7)用5BV蒸馏水以0.5BV/h的流速洗脱，再用10-95%的乙醇水溶液以0.5BV/h的流速线性梯度洗脱，分段收集洗脱液；(8)合并10-40%乙醇水溶液洗脱液，减压浓缩至无醇味(约3升)；(9)将以上步骤的浓缩液加样于2公斤的AB-8的大孑L树脂柱上端，吸附4小时；(10)用3BV的蒸馏水以0.5BV/h的流速洗脱，再用10-95%乙醇水溶液线性梯度洗脱；(11)收集10-30%乙醇水溶液洗脱液，浓缩该收集液，干燥，4分碎即得藏茵陈提取物。采用本发明前述的HPLC方法测定本实施例制备的藏茵陈提取物，结果龙胆苦普-55.5wt。/o;獐牙菜苦苷龙胆苦苷獐牙菜苷芒果苷异荭草苷的质量比=0.04:30:1:1.6:0.01。纤维化活性成分组藏茵陈苷的制备工艺(1)取川西獐牙菜药材l公斤，粉碎，置于提取罐中；(2)用IO倍量的95%丙酮/水在70"下提取三次，每次提取10小时，合并三次提耳又液；(3)用大型旋转蒸发仪浓缩至约0.5升；(4)浓缩液进行溶剂分配，依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯和正丁醇各2升，分别分四次，每次0.5升进行溶剂分配；(5)减压浓缩各溶剂分配溶液，得各溶剂分配部位稠膏；(6)将正丁醇分配部位稠膏用约250毫升蒸馏水溶解，加样于预处理好的2.5公斤的HPD100的大孑L树脂柱上端，吸附4小时；(7)用5BV蒸馏水以0.5BV/h的流速洗脱，再用10-95%的乙醇水溶液以0.5BV/h的流速线性梯度洗脱，分4史收集洗脱液；(8)合并10-40%乙醇水溶液洗脱液，减压浓缩至无醇味(约3升)；(9)将以上步骤的浓缩液加样于2公斤的HPD100的大孑L树脂柱上端，吸附4小时；(10)用3BV的蒸馏水以0.5BV/h的流速洗脱，再用10-95%乙醇水溶液线性梯度洗脱；(11)收集10-30%乙醇水溶液洗脱液，浓缩该收集液，干燥，粉碎即得藏茵陈提取物。采用本发明前述的HPLC方法测定本实施例制备的藏茵陈提取物，结果如下龙胆苦苷=70.1^%;獐牙菜苦苷龙胆苦苷獐牙菜苷芒果苷异荭草苷的质量比=0.35:40:8:13:0.16。制剂例1、藏茵陈提取物的片剂制备制备方法将实施例1的藏茵陈提取物与淀粉混合均匀后，加入20%淀粉浆制成软料，过14目筛制粒，在50-60。C下干燥，过12目整粒，加硬脂酸镁混合后，处方:组分实施例1的藏茵陈提取物淀粉20%淀4分浆硬脂酸镁处方量100g薦g50g4g压制成2000片，即得。每片含有藏茵陈提取物50mg，每片相当于含有龙胆苦苦26.5mg。采用本发明前述的HPLC方法测定本实施例制备的藏茵陈提取物的药物组合物，结果如下獐牙菜苦苷龙胆苦苷獐牙菜苷芒果苷异荭草苷的质量比=0.51:28:9:7.5:0.09。制剂例2、藏茵陈提取物的口服溶液制备处方组分处方量实施例1的藏茵陈提取物100g蜂蜜1000g山梨酸0.2g蒸馏水加至10L制备方法将实施例1的藏茵陈提取物100g溶于8L热蒸馏水中，再緩緩加入蜂蜜，同时不断搅拌，使溶液均匀，加入山梨酸0,2g,补加水至10L,过滤冷确，灌装灭菌即得，每瓶灌装10ml。制备的口服液含藏茵陈提取物10mg/ml，相当于含龙胆苦香5.3mg/ml。制剂例3、藏茵陈4^取物的滴丸剂型制备处方组分处方量实施例1的藏茵陈提取物100g聚乙二醇6000250g制备方法将聚乙二醇6000熔融后加入藏茵陈提取物粉末并混合均匀，80。C以下保温，用内径为2.1mm,外径为3.3mm滴管，以100-120滴/分钟滴速滴入曱基珪油中，收集滴丸，用滤纸吸出冷却液，每丸重2.7~3.0mg。制备的滴丸每克相当于含藏茵陈"R取物0.286g。制剂例4、藏茵陈提取物的颗粒剂制备处方<table>tableseeoriginaldocumentpage26</column></row><table>蔗糖670g糊精280g30%乙醇40ml制备方法向藏茵陈提取物50g与670g蔗糖和280g糊精的混合物中喷入30%乙醇40ml，混合均匀，压过1620目的筛，制成颗粒，烘干，整粒，分装为200袋。每袋重5g，按藏茵陈苷提取物计，每袋为0.25g。制剂例5、藏茵陈提取物的胶嚢剂制备处方组分处方量实施例1的藏茵陈提取物lOOg淀粉400g硬脂酸镁8g制备方法将提取物与淀粉混合均匀后，在50-60。C下干燥，加硬脂酸镁混合后，分装成2000粒，即得。每粒含有藏茵陈提取物50mg。制剂例6、藏茵陈提取物的注射液制备处方组分处方量实施例1的藏茵陈提取物100g乙二胺四乙酸二钠0.6g注射用水，适量，加至10000ml制备方法ioog藏茵陈提:f又物和o.6g乙二胺四乙酸二钠溶解，加注射用水适量，搅拌溶解，再加注射用水至10000ml。调节pH值为6.0-7.0，用0.22pm微孔滤膜过滤至澄清，在充氮下以每支2ml灌装到2ml安瓿瓶中，封口，在115。C下热压灭菌25分钟，即得。每支含有藏茵陈提取物20mg。实验例l、藏茵陈提一取物治疗肝纤维化的药效试验试验方法采用四氯化碳对试验用大鼠(SD大鼠，青海地方病研究所提供)造肝损伤模型，每组12只大鼠，确认肝纤维化模型成立后，再以不同剂量的藏茵陈提取物(含有多种藏茵陈苷)对才莫型大鼠进行恢复性治疗，同时采用联苯双酯(有效治疗肝炎、肝纤维化的国家批准药物，北京协和药厂产)，作为阳性对照药对模型大鼠进行治疗。联苯双酯配置成0.45mg/ml的水溶液，以0.5ml/100g大鼠/天的剂量灌胃给药，给药的天数同藏茵陈提取物的给药天数。采用实施例1制备的藏茵陈提取物，给药剂量以提取物计，高剂量0.2g/kg大鼠/天(相当于龙胆苦苷106mg/kg/天)，低剂量0.05g/kg大鼠/天(相当于龙胆苦苷26.5mg/kg/天)，给药时间为8周。从肝纤维化造模前后和不同给药剂量大鼠的体重、肝组织羟脯氨酸含量、血液5项指标对藏茵陈提取物的药效学进行了评价，结果分别见表2至表4。表2、治疗期间试验动物的体重(g)<table>tableseeoriginaldocumentpage28</column></row><table>表3、直接造沖莫治疗给药后(30天)血液情况指标测试<table>tableseeoriginaldocumentpage28</column></row><table>表4、直接造才莫治疗给药后(30天)羟脯氨酸测试<table>tableseeoriginaldocumentpage28</column></row><table>以上数据显示本发明的方法制备的含有固定比例的多种藏茵陈苦的藏茵陈提取物对四氯化碳造成的肝纤维化有明显的逆转和治疗作用。大鼠体重明显恢复，接近正常值；肝组织羟脯氨酸含量明显较模型组下降、药效好于阳性对照药联苯双酯；血液5项不同程度地恢复，其测定值接近正常(空白)值，低剂量时治疗效果较高剂量好，药效好于阳性对照药联苯双酯。实验例2、藏茵陈提取物治疗肝纤维化的药效试验试验方法采用四氯化碳对试验用大鼠(SD大鼠，青海地方病研究所提供)造肝损伤模型，每组12只大鼠，确认肝纤维化模型成立后，再以不同剂量的藏茵陈提取物(含有多种藏茵陈苷)对模型大鼠进行恢复性治疗，同时采用联苯双酯(有效治疗肝炎、肝纤维化的国家批准药物，北京协和药厂生产)，作为阳性对照药对才莫型大鼠进行治疗。狭苯双酯配置成0.50mg/ml的水溶液，以0.5ml/100g大鼠/天的剂量灌胃给药，给药的天数同藏茵陈提取物的给药天数。采用实施例1制备的藏茵陈提取物，给药剂量以提取物计，高剂量0.2g/kg大鼠/天(相当于龙胆苦苷106mg/kg/天)，低剂量0.05g/kg大鼠/天(相当于龙胆苦苷26.5mg/kg/天)，给药时间为8周。从肝纤维化造模前后和不同给药剂量肝组织羟脯氨酸含量、肝组织5项、转氨酶16项为指标对藏茵陈提取物的药效学进行了评价，结果分别见表5至表7。表5、直接造才莫治疗给药后(30天)肝脏情况指标测试<table>tableseeoriginaldocumentpage29</column></row><table>#P〈0.05;##P〈0.01与空白比;%P<0.05;°/。0/0P<0.01与模型比；+P<0.05与阳性比專交表6、直接造模治疗给药后(30天)羟脯氨酸测试<table>tableseeoriginaldocumentpage29</column></row><table>表7、直接造模实验(30天)转氨酶数据<table>tableseeoriginaldocumentpage30</column></row><table>表7(续)、直接造模实验(30天)转氨酶数据<table>tableseeoriginaldocumentpage30</column></row><table>表7(续)、直接造模实验(30天)转氨酶数据<table>tableseeoriginaldocumentpage30</column></row><table>#P<0.05;##P<0.01与空白比;***P<0.001;**P<0.01;*P<0.05与J氐剂量比%P〈0.05与才莫型比；+P<0.05与阳性比较—P〈0.05;——P〈0.01与中剂量比较以上数据显示本发明的方法制备的含有固定比例的多种藏茵陈苷的藏茵陈提取物对四氯化碳造成的肝纤维化有明显的逆转和治疗作用。大鼠肝组织羟脯氨S吏含量明显较模型组下降、药效好于阳性对照药联苯双酯；肝组织5项不同程度地恢复，其测定值接近正常(空白)值，低剂量时治疗效果较高剂量好，药效好于阳性对照药联苯双酯；肝功16项中谷丙转氨酶，谷草转氨酶给药后明显转阴，效果接近或好于阳性对照药；其余肝功14项指标也都有不同程度的恢复并接近正常值。实验例3、藏茵陈提取物治疗肝纤维化的药效试验试验方法采用四氯化碳对试验用大鼠(SD大鼠，青海地方病研究所提供)造肝损伤模型，每组10只大鼠，确认肝纤维化模型成立后，再以不同剂量的藏茵陈提取物(含有多种藏茵陈苷)对才莫型大鼠进行恢复性治疗，同时采用联苯双酯(有效治疗肝炎、肝纤维化的国家批准药物，北京协和药厂生产)，作为阳性对照药对4莫型大鼠进行治疗。联苯双酯配置成0.4mg/ml的水溶液，以0.5ml/100g大鼠/天的剂量灌胃给药，给药的天数同藏茵陈提取物的给药天数。采用实施例1制备的藏茵陈提取物，给药剂量以提取物计，高剂量0.2g/kg大鼠/天(相当于龙胆苦苷106mg/kg/天)，低剂量0.05g/kg大鼠/天(相当于龙胆苦苷26.5mg/kg/天)，给药时间为8周。从肝纤维化造模前后和不同给药剂量大鼠肝组织羟脯氨酸含量、血液和肝组织5项等为指标对藏茵陈提取物的药效学进行了评价，结果分别见表8至表10。表8、直接造模治疗给药后(30天)血液情况指标测试<table>tableseeoriginaldocumentpage31</column></row><table>#P<0.05;##P〈0.01与空白比;%P<0.05;%%P<0.01与模型比；+P〈0.05与阳性比较表IO、直接造模治疗给药后(30天)羟脯氨酸测试组别ng/g高剂量组低剂量组阳性组模型组空白组羟脯氨酸736.2±159.7671.9±112.8"**990.7±274.7#1177.5±289.7**512.6±64.3与空白比氺P〈0.05;**P<0.01;与才莫型H:并P〈0.05;##P<0.01以上数据显示本发明的方法制备的含有固定比例的多种藏茵陈苷的藏茵陈提^f又物对四氯化碳造成的肝纤维化有明显的逆转和治疗作用。大鼠肝组织羟脯氨酸含量明显较模型组下降、药效好于阳性对照药联苯双酯；血液和肝组织肝纤维化5项不同程度地恢复，其测定值接近正常(空白)值，低剂量时治疗效果较高剂量好，药效好于阳性对照药联苯双酯。权利要求1、一种藏茵陈提取物，包含獐牙菜苦苷、龙胆苦苷、獐牙菜苷、芒果苷、异荭草苷，所述五种成分的质量比为(0.04～0.71)(20～40)(1～15)(1.6～26)(0.01～0.16)。2、根据权利要求1所述的藏茵陈提取物，其中龙胆苦苷的含量为40-70wt%。3、根据权利要求1所述的藏茵陈提取物，其中龙胆苦香的含量为50-70wt%。4、一种制备权利要求13任意一项所述的藏茵陈提取物的方法，其包括如下步骤(1)取藏茵陈药材，粉碎或切段；(2)用7-15倍量的0-95%的乙醇或丙酮的水溶液4是取3次，合并3次提取液；(3)将提取液减压浓缩；(4)浓缩液依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯和正丁醇进行分配，各种有机溶剂的分配次数为4次，每次体积为浓缩液初始体积；(5)减压浓缩各溶剂分配溶液，得各溶剂分配部位稠膏；(6)将正丁醇分配部位稠膏用适量蒸馏水溶解，加样于预处理好的树脂材料I的大孔树脂柱上端，吸附4-10小时；(7)用5-20BV蒸馏水以0.5-2BV/h的流速洗脱，再用10-95%的乙醇水溶液以0.5-2BV/h的流速线性梯度洗脱，分段收集洗脱液；(8)合并10-40%乙醇水溶液洗脱液，减压浓缩至无醇p未；(9)将以上步骤的浓缩液加样于树脂材料II的大孔树脂柱上端，吸附4-10小时；(10)用3-8BV的蒸馏水以0.5-3BV/h的流速洗脱，再用10-95%乙醇水溶液线性梯度洗脱；(11)收集10-30%乙醇水溶液洗脱液，浓缩该收集液，干燥，粉碎即得藏茵陈提取物。5、根据权利要求4所述的方法，其中所使用的树脂材料I和/或树脂材料II分别选自S-8、X画5、MG-2、FL-3、D101、SA-3、AB-8、HPD100、HPD300、HPD400、HPD500、HPD700或HPD,。6、一种药物组合物，包括治疗有效量的权利要求13任意一项所述的藏茵陈提取物，和任选的药学可接受的载体。7、根据权利要求6所述的药物组合物，其为选自下列的药物剂型片剂、胶嚢剂、颗粒剂、注射液、注射用粉剂、透皮贴剂、软膏剂、凝胶剂、栓剂、口服溶液、口服混悬液、注射用乳剂、口服乳剂等、緩释片剂、控释片剂。8、权利要求13任意一项所述的藏茵陈提取物在制备预防或治疗肝纤维化的药物中的应用。全文摘要本发明提供了一种藏茵陈提取物，包含獐牙菜苦苷、龙胆苦苷、獐牙菜苷、芒果苷、异荭草苷，所述五种成分的质量比为(0.04～0.71)∶(20～40)∶(1～15)∶(1.6～26)∶(0.01～0.16)。本发明还提供了该藏茵陈提取物的制备方法、包含该藏茵陈提取物的药物组合物及该藏茵陈提取物的医药用途。本发明的藏茵陈提取物能够改善肝损伤造成的各项指标，促进肝纤维化过程的逆转，较好的预防肝硬化。文档编号A61K9/00GK101396428SQ20071016309公开日2009年4月1日申请日期2007年9月30日优先权日2007年9月30日发明者杜玉枝,肖远灿,邹小艳,魏立新申请人:中国科学院西北高原生物研究所;东格尔药业有限公司