与胰高血糖素受体抗体相关的组合物和方法

专利名称：：与胰高血糖素受体抗体相关的组合物和方法
技术领域：
：本发明涉及与胰高血糖素受体抗体相关的组合物和方法
背景技术：
：胰高血糖素是胰a细胞中由激素原转化酶2的细胞特异表达从其原型加工而成的29氨基酸激素(Furuta等，J.Biol.Chem.276:27197-27202(2001))。在禁食情况下，胰高血糖素分泌增加以响应葡萄糖水平的降低。增加的胰高血糖素分泌通过促进肝糖原分解和葡萄糖异生刺激葡萄糖生产。因此胰高血糖素平衡了胰岛素在维持动物正常葡萄糖水平中的作用。胰高血糖素受体(GCGR)是G蛋白偶联受体(GCGR)促胰液素亚族(B族)的成员。胰高血糖素受体主要在肝(其可调节肝葡萄糖输出)和肾(反应其在葡萄糖异生中的作用)表达。胰高血糖素受体在肝脏中的活化刺激腺普酸环化酶的活性和磷酸肌醇转活，其可接着引起葡萄糖异生酶表达增加，包括磷酸烯醇丙酮酸羧激酶(PEPCK)、果糖-l,6-二磷酸酶(FBPase-l)和葡萄糖-6-磷酸酶(G-6-Pase)。此外，胰高血糖素信号可活化糖原磷酸化酶并抑制糖原合成酶。研究显示更高的基础胰高血糖素水平和食后胰高血糖素分泌抑制缺乏可促成人糖尿病病症(Muller等，NEngJMed283:109-115(1970))。耙向胰高血糖素产生或功能可为控制和降低血糖的方法。持续需要提供n型糖尿病的有效疗法。本发明通过提供治疗n型糖尿病和相关疾病的新颖组合物和方法解决了这一需要。发明概述一方面，本发明提供了分离的抗原结合蛋白，其包含以下之一a.包含选自以下序列的轻链CDR3:i.与选自L1-L23的轻链CDR3序列(SEQIDNOs:72;74、76、78、80、83、85、87、89、91、93、95、97、100)相差总共不超过三个氨基酸添加、替换和/或缺失的轻链CDR3序列；ii.LQX21NSX22PLT(SEQIDNO:208)，iii.QAWDSX23TVX24(SEQIDNO:209);和b.包含选自以下序列的重链CDR3序列:i.与选自H1画H23的重链CDR3序列(SEQIDNO:165、167、169、171、173、175、177、179、181、183、185、187、189、191、193、195、197、199)相差总共不超过四个氨基酸添加、替换和/或缺失的重链CDR3序列；ii.EX25X26X27YDILTGYX28X29YYGX30DV(SEQIDNO:210)iii.X31GGGFDY(SEQIDNO:211);或c.(a)的轻链CDR3序列和(b)的重链CDR3序列；其中X21为组氨酸残基或谷氨酰胺残基，X22为天冬酰胺残基、天冬氨酸残基或酪氨酸残基，X23为天冬酰胺残基或丝氨酸残基，X24为异亮氨酸残基或缬氨酸残基，X25为赖氨酸残基、谷氨酸残基或脯氨酸残基，X26为天冬氨酸残基、苏氨酸残基、谷氨酰胺残基或脯氨酸残基，X27为组氨酸残基或酪氨酸残基,X28为天冬酰胺残基、组氨酸残基、天冬氨酸残基或苯丙氨酸残基，X29为酪氨酸残基、组氨酸残基或天冬酰胺残基，X3o为亮氨酸残基或甲硫氨酸残基，x^为亮氨酸残基或曱硫氨酸残基，其中所述抗原结合蛋白与人胰高血糖素受体特异性结合。另一方面，该分离的结合蛋白进一步包括选自以下的氨基酸序列a.选自以下的轻链CDR1序列:i.与L1-L23CDR序列(SEQIDNOs:10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38和41)相差不超过三个氨基酸添加、替换和/或缺失的轻链CDRl;ii.RSXiQSLLDX2X3DGTYTLD(SEQIDNO:200);iii.RASQX4IRNDX5G(SEQIDNO:201);以及iv.SGDKLGDKYX6C(SEQIDNO:202);其中Xi为丝氨酸残基或苏氨酸残基，X2为精氨酸残基或丝氨酸残基，X3为天冬氨酸残基或丙氨酸残基，X4为甘氨酸残基或天冬氨酸残基，X5为亮氨酸残基或苯丙氨酸残基，X6为缬氨酸残基或丙氨酸残基,b.选自以下的轻链CDR2序列i.与L1-L23的CDR2序列(SEQIDNOs:43、45、48、50、52、54、56、58、60、62、64、66、68和70)ii相差不超过两个氨基酸添加、替换和/或缺失的轻链CDR2;ii.AASSLX9S(SEQIDNO:204);和iii.QX10XuKRPS(SEQIDNO:205);其中X9为谷氨酰胺残基或谷氨酸残基，X1()为丝氨酸残基或苏氨酸残基，Xn为苏氨酸残基或丝氨酸残基；c.选自以下的重链CDR1序列i.与H1-H23的CDRl序列(SEQIDNOs:102、104、106、108、111、113、115、117、118、120和122)相差不超过两个氨基酸添加、替换和/或缺失的重链CDRl,ii.X7YX8MH(SEQIDNO:203),其中X7为丝氨酸残基或苏氨酸残基，X8为甘氨酸残基或天冬氨酸残基；以及d.选自以下的重链CDR2:与H1-H23的CDR2序列(SEQIDNOs:124、126、128、130、132、134、136、138、140、143、145、147、149、151、153、155、157、159、161和63)相差不超过三个氨基酸添加、替换和/或缺失的重链CDR2;ii.X121WX13DGSX14KYYX15DSVKG(SEQIDNO:206);以及iii.X161SX17DGSX18KYX19X20DSVKG(SEQIDNO:207);其中X12为丝氨酸残基、苯丙氨酸残基、缬氨酸残基或谷氨酸残基，X13为酪氨酸残基或天冬酰胺残基，X14为天冬酰胺残基或谷氨酸残基，X15为缬氨酸残基或丙氨酸残基，X16为缬氨酸残基或苯丙氨酸残基，X17为组氨酸残基或天冬氨酸残基或酪氨酸残基，X^为天冬氨酸残基、天冬酰胺残基或组氨酸残基，Xw为酪氨酸残基或丝氨酸残基，X2o为丙氨酸残基或甘氨酸残基,其中所述抗原结合蛋白与人胰高血糖素受体特异性结合。在另一方面，该分离的结合蛋白包括选自以下的氨基酸序列a.与L1-L23的CDRl序列(SEQIDNOs:10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38和41)相差不超过两个氨基酸添加、替换和/或缺失的轻链CDRl;b,与L1-L23的CDR2序列(SEQIDNOs:43、45、48、50、52、54、56、58、60、62、64、66、68和70)相差不超过一个氨基酸添加、替换和/或缺失的轻链CDR2序列；c.与L1國L23的CDR3序歹'J(SEQIDNOs:72、74、76、78、80、83、85、87、89、91、93、95、97和100)相差不超过两个氨基酸添加、替换和/或缺失的轻链CDR3序列；d.与H1-H23的CDR1序列(SEQIDNOs:102、104、106、108、111、113、115、117、118、120和122)相差不超过一个氨基酸添加、替换和/或缺失的重链CDRl序列；e.与H1-H23的CDR2序列(SEQIDNOs:124、126、128、130、132、134、138、140、143、145、147、149、151、153、155、157、159、161和163)相差不超过两个氨基酸添加、替换和/或缺失的重链CDR2序列；以及f.与H1國H23的CDR3序列(SEQIDNOs:165、167、169、171、173、175、177、179、181、183、185、187、189、191、193、195、197、和199)相差不超过三个氨基酸添加、替换和/或缺失的重链CDR3序列，其中所述抗原结合蛋白与人胰高血糖素受体特异性结合。在另一方面，该分离结合蛋白包含选自以下的氨基酸序列a.与L1國L23的CDR序列(SEQIDNOs:10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38和41)相差不超过一个氨基酸添加、替换和/或缺失的轻链CDR1序列；b.L1-L23的轻链CDR2序列，SEQIDNOs:43、45、48、50、52、54、56、58、60、62、64、66、68和70;c.与L1-L23的CDR3序列(SEQIDNOs:72、74、76、78、80、83、85、87、89、91、93、95、97和100)相差不超过一个氨基酸添加、替换和/或缺失的轻链CDR3序列；d.H1-H23的重链CDR1序列，SEQIDNOs:102、104、106、108、111、113、115、117、118、120和122;e.与H1曙H23的CDR2序列(SEQIDNOs:124、126、128、130、132、134、136、138、140、143、145、147、149、151、153、155、157、159、161和163)相差不超过一个氨基酸添加、替换和/或缺失的重链CDR2序列；和f.与H1-H23的CDR3序列(SEQIDNOs:165、167、169、171、173、175、177、179、181、183、185、187、189、191、193、195、197和199)相差不超过两个氨基酸添加、替换和/或缺失的重链CDR3序列，其中所述抗原结合蛋白与胰高血糖素受体特异性结合。在另一方面，该分离的结合蛋白包含选自以下的氨基酸序列a.L1-L23的轻链CDR1序列，SEQIDNOs:10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38和41;b.L1國L23的轻链CDR3序列，SEQIDNOs:72、74、76、78、80、83、85、87、89、91、93、95、97和100;c.H1-H23的重链CDR2序列，SEQIDNOs:124、126、128、130、132、134、136、138、140、143、145、147、149、151、153、155、157、159、161和163;和d.与H1-H23的CDR3序列(SEQIDNOs:165、167、169、171、173、175、177、179、181、183、185、187、189、191、193、195、197和199)相差不超过一个氨基酸添加、替换和/或缺失的重链CDR3序列，其中所述抗原结合蛋白与胰高血糖素受体特异性结合。在又另一方面，该分离的结合蛋白包含选自以下的氨基酸序列a.H1曙H23的重链CDR3序列，SEQIDNOs:165、167、169、171、173、175、177、179、181、183、185、187、189、191、193、195、197和199,其中所述抗原结合蛋白与胰高血糖素受体特异性结合。在另一方面，该分离的结合蛋白包含选自以下的两个氨基酸序列a.与L1-L23的CDR1序列(SEQIDNOs:10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38和41)相差不超过三个氨基酸添加、替换和/或缺失的轻链CDRl序列；b.与L1-L23的CDR2序列(SEQIDNOs:43、45、48、50、52、54、56、58、60、62、64、66、68和70)相差不超过两个氨基酸添加、替换和/或缺失的轻链CDR2序列；c.与L1-L23的CDR3序列(SEQIDNOs:72、74、76、78、80、83、85、87、89、91、93、95、97和100)相差不超过三个氨基酸添加、替换和/或缺失的轻链CDR3序列；d.与H1-H23的CDR1序列(SEQIDNOs:102、104、106、108、111、113、115、117、118、120和122)相差不超过两个氨基酸添加、替换和/或缺失的重链CDR1序列；e.与H1-H23的CDR2序列(SEQIDNOs:124、126、128、130、132、134、136、138、140、143、145、147、149、151、153、155、157、159、161和163)相差不超过三个氨基酸添加、替换和/或缺失的重链CDR2序列；和f.与H1-H23的CDR3序列(SEQIDNOs:165、167、169、171、173、175、177、179、181、183、185、187、189、191、193、195、197和199)相差不超过四个氨基酸添加、替换和/或缺失的重链CDR3序列，其中所述抗原结合蛋白与胰高血糖素受体特异性结合。在另一方面，该分离的结合蛋白包含选自以下的三个氨基酸序列a.与L1-L23的CDR1序列(SEQIDNOs:10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38和41)相差不超过三个氨基酸添加、替换和/或缺失的轻链CDR1序列；b.与L1-L23的CDR2序列(SEQIDNOs:43、45、48、50、52、54、56、58、60、62、64、66、68和70)相差不超过两个氨基酸添加、替换和/或缺失的轻链CDR2序列；c.与L1-L23的CDR3序列(SEQIDNOs:72、74、76、78、80、83、85、87、89、91、93、95、97和100)相差不超过三个氨基酸添14加、替换和/或缺失的轻链CDR3序列；d.与H1-H23的CDR1序列(SEQIDNOs:102、104、106、108、111、113、115、117、118、120和122)相差不超过两个氨基酸添加、替换和/或缺失的重链CDR1序列；e.与H1画H23的CDR2序列(SEQIDNOs:124、126、128、130、132、134、136、138、140、143、145、147、149、151、153、155、157、159、161和163)相差不超过三个氨基酸添加、替换和/或缺失的重链CDR2序列；和f.与H1-H23的CDR3序列(SEQIDNOs:165、167、169、171、173、175、177、179、181、183、185、187、189、191、193、195、197和199)相差不超过四个氨基酸添加、替换和/或缺失的重链CDR3序列，其中所述抗原结合蛋白与胰高血糖素受体特异性结合。在另一方面，该分离的结合蛋白包含选自以下的四个氨基酸序列a.与L1-L23的CDR1序列(SEQIDNOs:10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38和41)相差不超过三个氨基酸添加、替换和/或缺失的轻链CDR1序列；b.与L1-L23的CDR2序歹寸(SEQIDNOs:43、45、48、50、52、54、56、58、60、62、64、66、68和70)相差最多不超过两个氨基酸添加、替换和/或缺失的轻链CDR2序列；c.与L1-L23的CDR3序列(SEQIDNOs:72、74、76、78、80、83、85、87、89、91、93、95、97和100)相差不超过三个氨基酸添加、替换和/或缺失的轻链CDR3序列；d.与H1-H23的CDR1序列(SEQIDNOs:102、104、106、108、111、113、115、117、118、120和122)相差不超过两个氨基酸添加、替换和/或缺失的重链CDR1序列；e.与H1-H23的CDR2序列(SEQIDNOs:124、126、128、130、132、134、136、138、140、143、145、147、149、151、153、155、157、159、161和163)相差不超过三个氨基酸添加、替换和/或缺失的重链CDR2序列；和f.与H1-H23的CDR3序列(SEQIDNOs:165、167、169、171、173、175、177、179、181、183、185、187、189、191、193、195、197和199)相差最多不超过四个氨基酸添加、替换和/或缺失的重链CDR3序列，其中所述抗原结合蛋白与胰高血糖素受体特异性结合。在另一方面，该分离的结合蛋白包含选自以下的五个氨基酸序列a.与L1-L23的CDR1序列(SEQIDNOs:10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38和41)相差不超过三个氨基酸添加、替换和/或缺失的轻链CDR1序列；b.与L1-L23的CDR2序列(SEGIDNOs:43、45、48、50、52、54、56、58、60、62、64、66、68和70)相差不超过两个氨基酸添加、替换和/或缺失的轻链CDR2序列；c.与L1-L23的CDR3序歹'J(SEQIDNOs:72、74、76、78、80、83、85、87、89、91、93、95、97和100)相差不超过三个氨基酸添加、替换和/或缺失的轻链CDR3序列；d.与H1-H23的CDR1序列(SEQIDNOs:102、104、106、108、111、113、115、117、118、120和122)相差不超过两个氨基酸添加、替换和/或缺失的重链CDR1序列；e.与H1画H23的CDR2序列(SEQIDNOs:124、126、128、130、132、134、136、138、140、143、145、147、149、151、153、155、157、159、161和163)相差不超过三个氨基酸添加、替换和/或缺失的重链CDR2序列；和f.与H1-H23的CDR3序列(SEQIDNOs:165、167、169、171、173、175、177、179、181、183、185、187、189、191、193、195、197和199)相差不超过四个氨基酸添加、替换和/或缺失的重链CDR3序列，其中所述抗原结合蛋白与胰高血糖素受体特异性结合。在另一方面，该分离的结合蛋白包含a.与L1-L23的CDR1序列(SEQIDNOs:10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38和41)相差不超过三个氨基酸添加、替换和/或缺失的轻链CDR1序列；b.与L1-L23的CDR2序列(SEQIDNOs:43、45、48、50、52、54、56、58、60、62、64、66、68和70)相差不超过两个氨基酸添加、替换和/或缺失的轻链CDR2序列；c.与L1-L23的CDR3序歹寸(SEQIDNOs:72、74、76、78、80、83、85、87、89、91、93、95、97和100)相差不超过三个氨基酸添加、替换和/或缺失的轻链CDR3序列；d,与H1隱H23的CDR1序列(SEQIDNOs:102、104、106、108、111、113、115、117、118、120和122)相差不超过两个氨基酸添加、替换和/或缺失的重链CDR1序列；e.与H1-H23的CDR2序歹'J(SEQIDNOs:124、126、128、130、132、134、136、138、140、143、145、147、149、151、153、155、157、159、161和163)相差不超过三个氨基酸添加、替换和/或缺失的重链CDR2序列；和f.与H1-H23的CDR3序列(SEQIDNOs:165、167、169、171、173、175、177、179、181、183、185、187、189、191、193、195、197和199)相差不超过四个氨基酸添加、替换和/或缺失的重链CDR3序列，其中所述抗原结合蛋白与胰高血糖素受体特异性结合。16在另一方面，该分离抗原结合蛋白包含以下之一a.包含以下的轻链可变结构域i.选自SEQIDNOs:10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38和41的轻链CDR1序列；选自SEQIDNOs:43、45、48、50、52、54、56、58、60、62、64、66、68和70的轻链CDR2序列；和iii.选自SEQIDNOs:72、74、76、78、80、83、85、87、89、91、93、95、97和100的轻链CDR3序列；b.包含以下的重链可变结构域i.选自SEQIDNOs:102、104、106、108、111、113、U5、117、118、120和122的重链CDR1序列；ii.选自SEQIDNOs:124、126、128、130、132、134、136、138、140、143、145、147、149、151、153、155、157、159、161和163的重链CDR2序列;和iii.选自SEQIDNOs:165、167、169、171、173、175、177、179、181、183、185、187、189、191、193、195、197和199的重链CDR3序列；或c.(a)的轻链可变结构域和(b)的重链可变结构域，其中所述抗原结合蛋白与人胰高血糖素受体特异性结合。在另一方面，该分离的抗原结合蛋白包含选自以下的轻链可变结构域i.包含与选自Ll-L23(SEQIDNOs:213、215、217、219、221、223、225、227、229、231、233、235、237、239、241、243、245、247、249、251、253、255和257)的轻链可变结构域序列具有至少80%同一性的序列的氨基酸；ii.由与编码Ll-L23(SEQIDNOs:212、214、216、218、220、222、224、226、228、230、232、234、236、238、240、242、244、246、248、250、252、254和256)的轻链可变结构域序列的多聚核苦酸至少80%同一性的多聚核普酸序列编码的氨基酸序列；iii.由在中等严格条件下与由L1-L23(SEQIDNOs:212、214、216、218、220、222、224、226、228、230、232、234、236、238、240、242、244、246、248、250、252、254和256)的轻链可变结构域序列组成的多聚核苷酸的互补序列杂交的多聚核苷酸序列编码的氨基酸序列；b.选自以下的重链可变结构域序列i.与H1-H23(SEQIDNOs:259、261、263、265、267、269、271、273、275、277、279、281、283、285、287、289、291、293、295、297、299、301和303)的重链可变结构域序列至少80%相同的氨基酸序列；ii.由与编码H1-H23(SEQIDNOs:258、260、262、264、266、268、270、272、274、276、278、280、282、284、286、288、290、292、294、296、298、300、17和302)的重链可变结构域序列的多聚核苷酸序列至少80%相同的多聚核苷酸序列编码的氨基酸序列；iii.由可在中等严格条件下与由H1-H23(SEQIDNOs:258、260、262、264、266、268、270、272、274、276、278、280、282、284、286、288、290、292、294、296、298、300和302)的重链可变结构域序列组成的多聚核苷酸的互补序列杂交的多聚核苷酸序列编码的氨基酸序列；或c.(a)的轻链结构域和(b)的重链结构域，其中所述抗原结合蛋白与人胰高血糖素受体特异性结合。在一个实施方案中，该分离的抗原结合蛋白包含a.选自L1-L23(SEQIDNOs:213、215、217、219、221、223、225、227、229、231、233、235、237、239、241、243、245、247、249、251、253、255和257)的轻链可变结构域序列b.选自Hl-H23(SEQIDNOs:259、261、263、265、267、269、271、273、275、277、279、281、283、285、287、289、291、293、295、297、299、301和303)的重链可变结构域序列；或c，(a)的轻链结构域和(b)的重链结构域，其中所述抗原结合蛋白与人胰高血糖素受体特异性结合。在另一个实施方案中，该分离的抗原结合蛋白包含选自以下的轻链可变结构域和重链可变结构域的组合L1H1、L2H2、L3H3、L4H4、L5H5、L6H6、L7H7、L8H8、L9H9、LIOHIO、LllHll、U2H12、L13H13、L14H14、L15H15、L固16、L17H17、L18H18、L19H19、L20腦、L21H21、L22H22和L23H23,其中所述抗原结合蛋白与人胰高血糖素受体特异性结合。在一个实施方案中，该分离的抗原结合蛋白进一步包括SEQIDNO:305的轻链恒定序列；SEQIDNO:307的轻链恒定序列；SEQIDNO:309的重链恒定序列；SEQIDNO:305的轻链恒定序列；SEQIDNO:309的重链恒定序列；或SEQIDNO:307的轻链4艮顶序歹'J以及SEQIDNO:309的重链恒定序列。一方面，该分离的抗原结合蛋白选自人类抗体、人源化抗体、嵌合抗体、单克隆抗体、多克隆抗体、重组抗体、抗原-结合抗体片段、单链抗体、双链抗体、三链抗体、四链抗体、Fab片段、F(fa，)x片段、结构域抗体、IgD抗体、IgE抗体、IgM抗体、IgGl抗体、IgG2抗体、IgG3抗体、IgG4抗体和IgG4抗体，其在绞链区至少具有一处可减少形成内H链二硫键趋势的突变。在一个实施方案中，该抗原结合蛋白为人类4元体。另一方面，该分离的抗原结合蛋白当与人胰高血糖素受体结合时a.以与参比抗体基本相同的Kd与人胰高血糖素受体结合；b.以与所述参比抗体基本相同的IC5o抑制人胰高血糖素受体的胰高血糖素激活或c.与所述参比抗体竟争结合，其中所述参比抗体包含选自L1H1、L2H2、L3H3、L4H4、L5H5、L6H6、L7H7、L8H8、L9H9、LllHll、L12H12、L13H13、L15H15、L21H21和L22H22的轻链和重链可变结构域序列的组合。另一方面，提供了分离的人类抗体，当其与人胰高血糖素受体结合时a.以与参比抗体基本相同的Kd与人胰高血糖素受体结合；b.以与所述参比抗体基本相同的IC5o抑制人胰高血糖素受体的胰高血糖素激活或c.与所述参比抗体竟争结合，其中所述参比抗体包含选自A-l、A國2、A國3、A國4、A-5、A-6、A画7、A國8、A-9、A國ll、A-12、A-13、A-15、A-21和A-22的轻链和重链可变结构域序列的组合。另一方面，提供了分离的人类抗体，当其与人胰高血糖素受体结合时a.特异性结合至人胰高血糖素的Ser80至Serll9;b.以90nM或更低的ICs。值降低胰高血糖素信号传导；c.降低动物模型的血糖；d.a和b，或e.a、b和c。在一个实施方案中，该动物才莫型为ob/ob动物才莫型。在另一方面，提供了包含该抗原结合蛋白与药学可接受的载体混合的药用组合物。在另一个实施方案中，该药用组合物包含与药学可接受载体混合的分离的人类抗体。在另一方面，提供了包含编码本发明抗原结合蛋白的轻链可变结构域、重链可变结构域或二者的多聚核香酸的分离的核酸分子。在一个实施方案中，该多聚核苦酸包含轻链可变结构域多聚核苦酸序列L1-L23,SEqiDNOs:212、214、216、218、220、222、224、226、228、230、232、234、236、238、240、242、244、246、248、250、252、254和256,重链可变结构域多聚核苷酸序列Hl-H23，SEQIDNO:258、260、262、264、266、270、272、274、276、278、280、282、284、286、288、290、292、294、296、298、300、302,或二者。也提供了包含本发明多聚核苷酸的载体。在一个实施方案中该载体为表达载体。也提供了包含该载体的宿主细胞。也提供了可生产本发明抗原结合蛋白质的杂交瘤。进一步提供了制备本发明抗原结合蛋19白的方法，其包括在允许细胞表达本发明抗原结合蛋白的条件下培养该宿主细月包。也提供了降低受试者血糖的方法，包括给予受试者治疗有效量的药用组合物。也提供了提高受试者葡萄糖耐受的方法，包括给予受试者治疗有效量的药用组合物。也提供了通过给予受试者治疗有效量的药用组合物治疗受试者中II型糖尿病和相关病症的方法。在另一个实施方案中，该相关病症选自高血糖症、空腹血糖受损、葡萄糖耐量降低、脂肪代谢障碍和代谢综合症。也提供了本发明药用组合物在制备用于降低血糖、预防或治疗II性糖尿病包括高血糖症、空腹血糖受损、葡萄糖耐量降低、脂肪代谢障碍和代谢综合症的药物中的应用。附图简述图1显示了以1或3mg/kg(n=10动物/组)的剂量单次注射抗体A-3或抗体A-4后与注射緩冲液相比14周雄性ob/ob小鼠中的血糖水平。在注射后0以及24、48、96、120、144、192和240小时测量血糖。图2显示了以1或3mg/kg(n=10动物/组)的剂量单次注射抗体A-3或抗体A-9后与注射緩沖液相比14周雄性ob/ob小鼠中的血糖水平。在注射后0以及24、72、120、192和240小时测量血糖。图3显示了口服葡萄糖耐量试验(GTT)的结果，显示了单次皮下注射溶媒(vehicle)和抗体9(A9)之前(GTT1和GTT2)和之后(GTT3、4和5)的曲线下(AUC)葡萄糖水平。图4显示了可与标记抗体A-3(可克服(surmountable)抗体)竟争结合的未标记抗体。图5显示了可与标记抗体A-3(部分可克服抗体)部分竟争结合的未才示"i己抗体。图6显示了不可与标记抗体A-3(可克服抗体)竟争结合的未标记抗体。图7显示了四种抗GCGR抗体与构建自人GCGR和人GLP-1受体的嵌合受体的结合研究结果。发明详述本发明涉及抗原结合蛋白例如可与人胰高血糖素受体(GCGR)特异性结合的抗体。这些包括可抑制或阻断胰高血糖素与人GCGR结合并降低胰高血糖素经受体信号传导的抗原结合蛋白。在一个实施方案中提供了包括拮抗性抗体的可降低动物模型血糖的人类抗体。该抗原结合蛋白可用于治疗糖尿病和相关疾病。本发明进一步提供与可特异性结合至人胰高血糖素受体的抗原结合蛋白相关的组合物、试剂盒和方法。也提供了核酸分子及其衍生物和片段，其包含编码与胰高血糖素受体结合的多肽的全部或部分的多聚核苷酸，例如编码全部或部分抗胰高血糖素受体抗体、抗体片段或抗体衍生物的核酸。本发明进一步提供包含该类核酸的载体和质粒以及包含该类核酸和/或载体和质粒的细胞和细胞系。所提供方法包括，例如，制备、鉴定或分离与人GCGR结合的抗原结合蛋白例如抗GCGR抗体的方法，测定该抗原结合蛋白是否与GCGR结合的方法、制备包含与人GCGR结合的抗原结合蛋白的组合物例如药用组合物的方法，以及将与GCGR结合的抗原结合蛋白给予受试者的方法，治疗由GCGR介导的病症以及体内或体外调节与胰高血糖素信号传导相关的生物活性的方法。定义使用标准的单字母或三字母缩写表明多聚核苷酸和多肽序列。除非另外指明，多肽序列的氨基端在左而它们的羧基端在右，单链核酸序列和双链核酸序列的上游链的5'端在左而它们的3'端在右。多肽的具体部分可由氨基酸残基编号表示，例如氨基酸80至119,或由该位点的实际残基表示例如Ser80至Serl19。也可通过解释其与参比序列的差异描述具体的多肽或多聚核苷酸序列。具体轻链和重链可变结构域的多聚核苷酸和多肽可表示为Ll("轻链可变结构域1"),Hl("重链可变结构域1")。包含轻链和重链的抗原结合蛋白或抗体可通过结合轻链的名称和重链可变结构域的名称表示。例如，"L4H7"表示包含L4轻链可变结构域和H7重链可变结构域的抗体。除非本文另外定义，与本文相关的科学和技术术语应具有本领域普通技术人员所理解的含义。进一步，除非上下文另有要求，单数术语应包括复数并且复数含义术语应包括单数含义。通常，与本文所述细胞和组织培养、分子生物学、免疫学、微生物学、遗传学和蛋白质核酸化学以及杂交相关的命名法和技术为本领域熟知和经常使用的。本发明的方法和技术通常根据本领域已知的常规方法以及本说明书引用和讨论的各种普通和更具体的参考文献所描述的进行，除非另外说明。参见，例如,Sambrook等,MolecularCloning:ALaboratoryManual,第2版.，ColdSpringHarborLaboratoryPress,ColdSpringHarbor,N.Y.(1989)和Ausubel等，CurrentProtocolsinMolecularBiology,GreenePublishingAssociates(1992),以及HarlowandLaneAntibodies:ALaboratoryManualColdSpringHarborLaboratoryPress,ColdSpringHarbor,N.Y.(19卯)，均以参考形式并于本文。酶反应和纯化技术根据操作说明进行，如本领域通常完成或本文所述。与本文描述的分析化学、合成有机化学和医学和药学化学相关的术语学以及实验操作和技术均为本领域熟知和普遍使用者。标准技术可用于化学合成、化学分析、药物制备、制剂和给药以及患者的治疗。以下术语，除非另外指明，应理解为具有以下含义术语"分离的分子"(其中所述分子为例如多肽、多聚核苷酸或抗体)为就其来源或衍生源而言(1)与在天然状态下与其相伴的天然相关组分分离，(2)基本与同种的其它分子游离(3)由不同种细胞表达或(4)不天然存在。因此，化学合成或由与其天然来源的细胞不同的细胞体系表达的分子将与天然相关组分"分离"。也可使用本领域已知的纯化技术通过分离使分子基本与其天然相关组分游离。例如，可使用聚丙烯酰胺凝胶电泳测定多肽样品的纯度并使用本领域熟知的技术将凝胶染色以观察该多肽。对于某些目的，可使用HPLC或其它本领域熟知的纯化方法提供更高的分辨率。术语"胰高血糖素抑制剂"和"胰高血糖素拮抗剂"可交替使用。均为可检测地抑制胰高血糖素信号传导的分子。由抑制剂引起的抑制不需为完全抑制只要可使用测定法检测。例如，下文实施例4中描述的基于细胞的测定法显示了可用于测定胰高血糖素信号传导抑制的测定法。术语"肽"、"多肽，，和"蛋白"均指包含两个或多个通过肽键相互连接的氨基酸的分子。这些术语涵盖例如天然和人工蛋白、蛋白片段和蛋白序列的多肽类似物(例如突变蛋白、变异体和融合蛋白)22以及转录后或否则为共价或非共价修饰的蛋白。肽、多肽或蛋白可为单体或多聚体。如本文使用的术语"多肽片段"指与对应的全长蛋白相比具有氨基端和/或羧基端缺失的多肽。片段长度可为例如至少5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、20、50、70、80、90、100、150或200个氨基酸。片段长度可为例如最多1000、750、500、250、200、175、150、125、100、90、80、70、60、50、40、30、20、15、14、13、12、11或IO个氨基酸。片段可在其一端或两端进一步包含一个或多个附加氨基酸，例如，来自不同天然蛋白质的氨基酸序列(例如，Fc或亮氨酸拉链结构域)或人工氨基酸序列(例如，人工接头序列)。本发明多肽包括以任何原因和经任何方法修饰的多肽，例如，以(1)降低蛋白水解敏感性，(2)降低氧化敏感性，(3)改变形成蛋白复合物的亲和性，(4)改变结合亲和性以及(4)赋予或修饰其它物理化学或功能性质。类似物包含多肽的突变蛋白。例如，可在天然序列(例如在形成分子内接触的结构域之外的多肽部分)中进行单个或多个氨基酸替换(例如，保守氨基酸替换)。"保守氨基酸替换"为不显著改变母体序列结构特性者(例如，替换氨基酸不应破坏母体序列中出现的螺旋或干扰其它赋予母体序列特性或对其功能是必须的二级结构类型)。领域公认的多肽二级和三级结构的实例描述于Proteins,StructuresandMolecularPrinciples(Creighton编辑，W.H.FreemanandCompany,NewYork(1984》；IntroductiontoProteinStructure(C.BrandenandJ.Tooze,eds.,GarlandPublishing,NewYork,N.Y.(1991));和Thornton等,Nature354:105(1991),均以参考形式并于本文。本发明也提供了GCGR抗原结合蛋白的非肽类似物。非肽类似物普遍用于提供与模板肽具有相似性质的药物。这些非肽化学物类型被称作"模拟肽(peptidemimetics)"或"拟肽(peptidomimetics)"。Fauchere,J.Adv.DrugRes.15:29(1986);Veber和FreidingerTINS笫392页(1985);以及Evans等，J.Med.Chem.30:1229(1987),均以参考形式并于本文。与治疗用肽结构相似的模拟肽可用于产生相等的治疗或预防效果。通常，拟肽与范例多肽的结构相似(即具有期望生物化学性质或药理学活性的多肽)，例如人类抗体，但是具有一个或多个任选23被选自—CH2NH.....CH2S.....CH2—CH2—、画画CHK:H-(顺式和反式)、—COCH2.....CH(OH)CH2—、和—CH2SO—的连接通过本领域熟知的方法取代的肽连接。用相同类型的D-氨基酸系统取代一致序列的一个或多个氨基酸(例如，D-赖氨酸取代L-赖氨酸)也可用于生成更稳定的肽。此夕卜，可通过本领域已知的方法(RizoandGieraschAnn.Rev.Biochem.61:387(1992)，以参考形式并于本文)例如通过添加可形成将肽环化的分子间二硫键的内部半胱氨酸残基生成包含一致序列或基本相同的一致序列变异体的拘束肽(constrainedpeptides)。多肽(例如抗体)的"变异体"包含相对于另一多肽序列在氨基酸序列中插入、缺失和/或替换了一个或多个氨基酸残基的氨基酸序列。本发明的变异体包括融合蛋白。多肽的"衍生物"为经化学修饰的多肽(例如，抗体)，例如通过与其它化学部分例如聚乙二醇、白蛋白(例如人血清白蛋白)结合、磷酸化和糖基化。除非另外说明，术语"抗体"包括除包含两个全长重链和两个全长轻链的抗体外的其衍生物、变异体、片段和突变蛋白，其实例见下文。"抗原结合蛋白"为包含与抗原结合部分并任选为允许抗原结合部分采取促进该抗原结合蛋白与该抗原结合的构象的支架或框架部分的蛋白。抗原结合蛋白的实例包括抗体、抗体片段(例如抗体的抗原结合部分)、抗体书f生物和抗体类似物。该抗原结合蛋白可包含例如可选择的蛋白支架或具有移植CDRs或CDRs衍生物的人工支架。该支架包括但不限于包含被引入的例如以稳定化该抗原结合蛋白的三维结构的抗体衍生支架以及包含例如生物相容性多聚体的全合成支架。参见，侈寸戈口,Korndorfer等，2003,Proteins:Structure,Function,andBioinformatics,Volume53,Issue1:121-129;Roque等，2004,Biotechnol.Prog.20:639-654。此外，可使用模拟肽抗体("PAMs")以及基于模拟抗体的支架，其如支架一样利用纤维蛋白连接素。抗原结合蛋白可具有例如天然免疫球蛋白的结构。"免疫球蛋白"为四聚体分子。在天然的免疫球蛋白中，各四聚体由两个相同的多肽链对组成，各对具有一个"轻"(约25kDa)和一个"重"链(约50-70kDa)。各链的氨基端包括约100至110或更多氨基酸的可变结构域，主要与抗原识别相关。各链的羧基端部分确定了主要与效应器作用相关的恒定区。人的轻链分为K和X轻链。重链分为p、3、a或s,并确定了抗原的同种型，例如分别为IgM、IgD、IgG、IgA和IgE。在轻链和重链中，可变和恒定区由约12或更多个氨基酸的"J"区连接，重链也包括约10多个氨基酸的"D"区。参见，FundamentalImmunologyCh.7(Paul,W.,编辑，第2版.RavenPress,N.Y.(1989))(其完整内容以参考形式并于本文用于任何目的)。各轻/重链对的可变区形成抗体结合位点，这样一个完整的免疫球蛋白具有两个结合位点。天然免疫球蛋白链显示出由三个高度可变区连接的相对保守骨架区(FR)的相同基本结构，也被称作互补决定区或CDRs。从N端到C端，轻和重链均包含结构域FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3和FR4。各结构域氨基酸的分配与Kabat等在SequencesofProteinsofImmunologicalInterest,第5版.，USDept.ofHealthandHumanServices,PHS，NIH,NIHPublicationno.91-3242,1991中的定义一致。除非另外指明，"抗体"指完整的免疫球蛋白或其可与完整抗体竟争特异性结合的抗原结合部分。可由重组DNA技术或通过酶或化学裂解完整抗体生产抗原结合部分。抗原结合部分包括，尤其是，Fab、Fab'、F(ab，)2、Fv、结构域抗体(dAbs),包括互补决定区(CDRs)的片段、单链抗体(scFv)、嵌合抗体、双链抗体(diabodies)、三链抗体(triabodies)、四链抗体(tetrabodies)和至少包含足以赋予多肽特异抗原结合的免疫球蛋白的一部分的多肽。Fab片段为具有VL、VH、Cl和CH1结构域的单价片段；F(ab，)2片段为具有两个在铰链区由二硫键连接的Fab片段的二价片段；Fd片段具有Vh或Vl結枸域；dAb片段具有Vh结构域、VL结构域，或Vh或Vl结构域的抗原结合片段(美国专利号6846634、6696245,美国专利申请公开号05/0202512、04/0202995、04/0038291、04/0009507、03/0039958,Ward等，Nature341:544-546,1989)。单链抗体(scFv)为其中的Vl和Vh区由接头(例如，合成的氨基酸残基序列)连接以形成连续蛋白质的抗体，其中该接头足够长以允许该蛋白链折叠回自身并形成单价抗原结合位点(参见，例如，Bird等,1988,Science242:423-26andHustonetal.,1988,Proc.Natl.Acad.Sci.USA85:5879-83)。双链抗体为包含两个多肽链的二价抗体，其中各多肽链包含由接头连接的VH和VL结构域，该接头^f艮短以致于不允许两25个结构域在相同链上的配对，因此允许各结构域与另一多肽链上的互补结构域配对(参见，例如，Holliger等，1993,Proc.Natl.Acad.Sci.USA90:6444-48,和Poljaketal.,1994,Structure2:1121-23)。如果双链抗体的两个多肽链是相同的，那么由它们配对得到的双链抗体将具有相同的抗原结合位点。具有不同序列的多肽链可用于制备具有不同抗原结合位点的双链抗体。相似地，三链抗体和四链抗体分别为包含三个和四个多肽链的抗体并分别形成三个和四个抗原结合位点，其可相同或不同。可使用Kabat等在SequencesofProteinsofImmunologicalInterest,第5版.，USDept.ofHealthandHumanServices,PHS，NIH,NIHPublicationno.91-3242,1991中描述的方法鉴定给定抗体的互补决定区(CDRs)和骨架区(FR)。可向分子中共价或非共价并入一个或多个CDRs使其成为抗原结合蛋白。抗原结合蛋白可以较大多肽链并入CDR(s)。可将CDR(s)共价连接至另一多肽链，或非共价并入CDR(s)。CDRs允许抗原结合蛋白与具体的相关抗原特异性结合。抗原结合蛋白可有一个或多个结合位点。如果多于一个结合位点，该结合位点可与另一个相同或不同。例如，天然人免疫球蛋白通常具有两个相同的结合位点，而"双特异性"或"双功能"抗体具有两个不同的结合位点。术语"人类抗体"包括具有一个或多个来源于人免疫球蛋白序列的可变和恒定区的所有抗体。在一个实施方案中，所有的可变和恒定结构域均来源于人免疫球蛋白序列(全人类抗体)。可经多种方法制备这些抗体，其实例描述于下文，包括通过用相关抗原免疫小鼠，该小鼠被基因修饰以表达来源于人重和/或轻链编码基因的抗体。人源化抗体含有与来源于非人种抗原序列具有一个或多个氨基酸替换、缺失和/或添加差异的序列，这样与非人种抗体相比当给予人受试者时人源化抗体较不会诱导免疫应答，和/或诱导较不严重的免疫应答。在一个实施方案中，突变非人种抗原的重和/或轻链的骨架和恒定结构域的某些氨基酸以产生人源化抗体。在另一个实施方案中，来自人类抗体的恒定结构域与非人种的可变结构域融合。在另一个实施方案中，改变非人类抗体的一个或多个CDR序列中的一个或多个氨基酸残基以降低给予人受试者时非人类抗体可能的免疫原性，其中改变的氨基酸残者对氨基显著差于非人类抗体与该抗原的结合。如何制备人源化抗体的实例见美国专利号6054297、5886152和5877293。术语"嵌合抗体"指包含来自一种抗体的一个或多个区域和来自一个或多个其它抗体的一个或多个区域的抗体。在一个实施方案中，一个或多个CDRs来源于人抗GCGR抗体。在另一实施方案中，所有的CDRs来源于人抗GCGR抗体。在另一个实施方案中，将来自多于一个人抗GCGR抗体的CDRs混合并在嵌合抗体中配对。举例而言，嵌合抗体可包含来自第一个人抗GCGR抗体轻链的CDR1，第二个人抗GCGR抗体轻链的CDR2和CDR3,以及第三个人抗GCGR抗体的CDRs。进一步，该骨架区可来源于相同的抗GCGR抗体之一，来自一个或多个不同的抗体，例如人类抗体或来自人源化抗体。在嵌合抗体的一个实例中，重和/或轻链的一部分与来自具体物种的抗体相同、同源或由其衍生，或属于具体的抗体类别或亚类，而该链的剩余部分与来自另一物种的抗体或多个抗体相同、同源或由其衍生，或属于另一抗体类别或亚类。也包括显示期望生物学活性(即与人胰高血糖素受体特异性结合的能力)的该类抗体的片段。"中和抗体"或"抑制抗体"指经例如实施例4描述的基于细胞的测定法检测抑制胰高血糖素与人胰高血糖素受体结合，和/或抑制或降低胰高血糖素信号传导的抗体。该抑制不需为完全抑制，在一个实施方案中，其可将结合或信号传导降低至少20%。在进一步的实施方案中，结合或信号传导至少降低了30%、40%、50%、60%、70%、80%、85%、90%、95%、97%、99%和99.9%。术可轻易制备抗体片段或类似物。优选的片段或类似物的氨基和羧基端出现在功能结构域交界的附近。可通过与将核苷酸和/或氨基酸序列数据与公共或专有序列数据库对比鉴定结构和功能结构域。计算机对比方法可用于鉴定序列基序或预测在其它结构和/或功能已知的蛋白质中出现的蛋白构象结构域。鉴定折叠成已知三维结构的蛋白序列的方法为已知。参见，例如，Bowie等，1991,Science253:164。"CDR移植抗体"为包含一个或多个来源于具体物种或同种型的顷域熟知的技27抗体的CDRs以及相同物种或同种型的另一抗体的骨架的抗体。"多特异性抗体"为可识别一个或多个抗原上的多于一种表位的抗体。该类型抗体的亚类为可识别相同或不同抗原上的两个不同表位的"双特异抗体"。包括与抗原"特异性结合"抗体的抗原结合蛋白质，如果以1(T7M或更低(IOOnM或更低)的解离常数(Kd或对应Kb,如下文所述)测定的高结合亲和力与抗原结合。与人胰高血糖素受体特异性结合的抗原结合蛋白可与其它物种的胰高血糖素受体以相同或不同的亲和力结合。"抗原结合结构域"、"抗原结合区"或"抗原结合位点"为包含与抗原相互作用的氨基酸残基(或其它部分)并有助于抗原结合蛋白对抗原的特异性和亲和力的抗原结合蛋白质的部分。对与其抗原特异性结合的抗体而言，这将包括至少部分的至少一个其CDR结构域。"表位"为与抗原结合蛋白(例如，通过抗体)结合的分子部分。表位可包含分子的非连续部分(例如，在多肽中，在多肽的一级序列中不连续的氨基酸残基在该多肽的三级和四级结构中相互足够接近以致于被一个抗原结合蛋白结合)。两个多聚核苷酸或两个多肽序列的"相同百分比"由使用GAP计算机程序(GCGWisconsinPackage,version10.3(Accelrys,SanDiego,CA)的一部分)使用其默认参数比较序列测定。术语"多聚核苷酸"、"寡聚核苷酸"和"核酸"可在全文中交替使用并包括DNA分子(例如，cDNA或基因组DNA)、RNA分子(例如mRNA)、使用核苷酸类似物(例如，肽核酸和非天然核苦酸类似物)生成的DNA或RNA类似物及其杂交体。核酸分子可为单链或双链。在一个实施方案中，本发明的核酸分子包含编码本发明抗体或其片段、衍生物、突变蛋白或变异体连续的开放阅读框。如果它们的序列可反向平行排列则两个单链多聚核苷酸是相互"互补的"，这样一个多聚核苷酸中的各核苷酸与另一多聚核苷酸中的互补核苷酸相反，不会引入空隙并且各序列的5'或3'端没有未配对的核香酸。如果两个多聚核苷酸可在中等严格条件下相互杂交那么一个多聚核苷酸与另一多聚核苷酸"互补"。因此，一个多聚核苷酸可与另一多聚核普酸互补，但并不是它的互补序列。28"载体"为可用于将与其相连的另一核酸引入细胞的核酸。载体的一种类型为"质粒"，其指可连接附加核酸区段的线性或环状双链DNA分子。载体的另一类型为病毒载体(例如，复制缺陷逆转录病毒、腺病毒和腺病毒伴随病毒)，其中可将附加DNA区段引入病毒基因组。某些载体可在它们被引入的宿主细胞中自主复制(例如，包含细菌复制起点的细菌载体以及游离型哺乳动物载体)。其它载体(例如，非游离型哺乳动物载体)在引入宿主细胞时整合入宿主细胞的基因组中并因此与宿主基因组一起复制。"表达载体"为可引导所选多聚核苷酸表达的载体类型。如果调控序列影响核苷酸序列的表达(例如，表达水平、时间或位点)那么核苷酸序列与调控序列"可操作地相连"。"调控序列"为可影响与其可操作相连的核酸的表达(例如，表达水平、时间或位点)的核酸。调控基因，例如，直接对受调控核酸发挥作用或通过一个或多个其它分子(例如，与调控序列和/或核酸结合的多聚核苷酸)的作用。调控序列的实例包括启动子、增强子和其它表达控制元件(例如，多腺苷酸化信号)。调控序列的进一步实例描述于例如Goeddel,1990,GeneExpressionTechnology:MethodsinEnzymology185,AcademicPress,SanDiego,CAandBaronetal.,1995,NucleicAcidsRes.23:3605-06。"宿主细胞"为用于表达核酸例如本发明核酸的细胞。宿主细胞可为原核生物，例如大肠杆菌，或者其可为真核生物，例如单细胞真核生物(例如，酵母或其它真菌)、植物细胞(例如烟草或番茄植物细胞)、动物细胞(例如，人细胞、猴细胞、仓鼠细胞、大鼠细胞、小鼠细胞或昆虫细胞)或杂交瘤。通常，宿主细胞为可用多肽编码核酸转化或转染的培养细胞，其可接着在宿主细胞中表达。短语"重组宿主细胞"可用于表述用预期表达的核酸转化或转染的宿主细胞。宿主细胞也可为包含该核酸但是不以期望水平表达的细胞，除非向该宿主细胞引入了调控序列这样其与核酸可操作地相连。应理解的是术语宿主细胞不仅指具体的受试者细胞也指该细胞的子代或可能的子代。由于例如突变或环境影响后续世代会出现某些修饰，该子代事实上可能与母体细胞不同但是仍然属于本文使用的术语范围。胰高血糖素受体胰高血糖素受体(GCGR)属于7-跨膜受体家族，其通过异源三聚体鸟。票呤核苷酸结合蛋白(G蛋白)与一个或多个胞内信号传导途径偶联(Jelinek等，Science259:1614-1616(1993),Segreetal.,TrendsEndocrinol.Metab4:309-314(1993))。如本文所使用"胰高血糖素受体"和"GCGR，，可交替使用。这一家族的其它成员包括胰泌素、胰高血糖素样肽(GLP-1)、血管活性肠肽(VIP)和生长激素释放因子的受体。这些受体具有高度同源的结构特点包括相对较大的胞外N端结构域以及一系列的跨膜、胞内和胞外结构域。在一个实施方案中，可选择本发明的抗原结合剂结合表达于细胞上的膜结合胰高血糖素受体并通过胰高血糖素受体抑制或阻断胰高血糖素信号传导。在一个实施方案中，本发明的抗原结合剂与人胰高血糖素受体特异性结合。在进一步的实施方案中，与人胰高血糖素受体结合的抗原结合蛋白也可与其它物种的胰高血糖素受体结合。下文中的实施例提供生成与人膜结合胰高血糖素受体结合的全人类抗体，在进一步的实施方案中与其它物种的胰高血糖素受体结合。已知数个物种的胰高血糖素受体的多聚核苷酸和多肽序列。表1显示了人、小鼠和大鼠的序列。本文鉴定了食蟹猴(cynomolgus)的胰高血糖素受体序列并列于下文。表l:胰高血糖素受体人(Homosapiens)多聚核苷酸(SEQIDNO:1)登录号BC1048541gtgcagcccctgccagatgtggg鄉cagctagctgcccagaggcatgcccccctgccag61ccacagcgacccctgctgctgttgctgctgctgctggcctgccagccacaggtcccctcc121gctcaggtgatggacttcctgtttgagaagtggaagctctacggtgaccagtgtcaccac181aacctgagcctgctgccccctcccacggagctggtgtgcaacagaaccttcgacaagtat241tcctgctggccggacacccccgccaataccacggccaacatctcctgcccctggtacctg301ccttggcaccacaaagtgcaacaccgcttcgtgttcaagagatgcgggcccgacggtcag361tgggtgcgtggaccccgggggcagccttggcgtgatgcctcccagtgccagatggatggc421gaggagattgaggtccagaaggaggtggccaagatgtacagcagcttccaggtgatgtac481acagtgggctacagcctgtccctgggggccctgctcctcgccttggccatcctggggggc541ctcagcaagctgcactgcacccgcaatgccatccacgcgaatctgtttgcgtccttcgtg601ctgaaagccagctccgtgctggtcattgatgggctgctcaggacccgctacagccagaaa661attggcgacgacctcagtgtcagcacctggctcagtgatggagcggtggctggctgccgt721gtggccgcggtgttcatgcaatatggcatcgtggccaactactgctggctgctggtggag781ggcctgtacctgcacaacctgctgggcctggccaccctccccgagaggagcttcttcagc841ctctacctgggcatcggctggggtgcceccatgctgttcgtcgtcccctgggcagtggtc901aagtgtctgttcgagaacgtccagtgctggaccagcaatgacaacatgggcttctggtgg961atcctgcggttccccgtcttcctggccatcctgatcaacttcttcatcttcgtccgcatc1021gttcagctgctcgtggccaagctgcgggcacggcagatgcaccacacagactacaagttc1081cggctggccaagtccacgctgaccctcatccctctgctgggcgtccacgaagtggtcttc1141gccttcgtgacggacgagcacgeccagggcaecctgcgctccgccaagctcttcttcgac1201ctcttcctcagctccttccagggcctgctggtggctgtcctctactgcttcctcaacaag1261gaggtgcagtcggagctgcggcggcgttggcaccgctggcgcctgggcaaagtgctatgg1321gaggagcggaacaccagc肌ccacagggcctcatcttcgcccggccacggccctcccagc1381aaggagctgcagtttgggaggg魄gtggcagccaggattcatctgcggagacccccttg1441gctggtggcctccctagattggctgagagccccttctgaaccctgctgggaccccagcta1501gggctggactctggcaccc人(Homosapiens)氨基酸(SEQIDNO:2)477aa;登录号.EAW89684MetProProCysGinProGinArgProLeuLeuLeuLeuLeuLeuLeuLeuAlaCysGinProGinValProSerAlaGinValMetAspPheLeuPheGluLysTrpLysLeuTyrGlyThrPheAspLysTyrSerCysTrpProAspThrProAlaAsnThrThrAlaAsnlieSerCysProTrpTyrLeuProTrpHisHisLysValGinHisArgPheValPheLysArgCysGlyProAspGlyGinTrpValArgGlyProArgGlyGinProTrpArgAspAlaSerGinCysGinMetAspGlyGluGlulieGluValGinLysGluValAlaLysMetTyrSerSerPheGinValMetTyrThrValGlyTyrSerLeuSerLeuGlyAlaLeuLeuLeuAlaLeuAlalieLeuGlyGlyLeuSerLysLeuHisCysThrArgAsnAlalieHisAlaAsnLeuPheAlaSerPheValLeuLysAlaSerSerValLeuValHeAspGlyLeuLeuArgThrArgTyrSerGinLyslieGlyAspAspLeuSerValSerThrTrpLeuSerAspGlyAlaValAlaGlyCysArgValAlaAlaValPheMetGinTyrGlyHeValAlaAsnTyrCysTipLeuLeuValGluGlyLeuTyrLeuHisAsnLeuLeuGlyLeuAlaThrLeuProGluArgSerPhePheSerLeuTyrLeuGlylieGlyTipGlyAlaProMetLeuPheValValProTipAlaValValLysCysLeuPheGluAsnValGinCysTipThrSerAsnAspAsnMetGlyPheTrpTrplieLeuArgPheProValPheLeuAlalieLeulieAsnPhePheliePheValArglieValGinLeuLeuValAlaLysLeuArgAlaArgGinMetHisHisThrAspTyrLysPheArgLeuAlaLysSerThrLeuThrLeulieProLeuLeuGlyValHisGluValValPheAlaPheValThrAspGluHisAlaGinGlyThrLeuArgSerAlaLysLeuPhePheAspLeuPheLeuSerSerPheGinGlyLeuLeuValAlaValLeuTyrCysPheLeuAsnLysGluValGinSerGluLeuArgArgArgTrpHisArgTrpArgLeuGlyLysValLeuTrpGluGluArgAsnThrSerAsnHisArgAlaSerSerSerProGlyHisGlyProProSerLysGluLeuGinPheGlyArgGlyGlyGlySerGinAspSerSerAlaGluThrProLeuAlaGlyGlyLeuProArgLeuAlaGluSerProPhe小鼠(Musmusculus)多聚核香酸(SEQIDNO:3)登录号BC50579881cgcgaggagcgcagccctagccccggcgactgagcacacctgaggagaggtgcacacact61ctgaggacctaggtgtgcaacctctgccagatgtggggcgtggctacccagaggcatgcc121cctcacccagctccactgtccccacctgctgctgctgctgttggtgctgtcatgtctgcc181agaggcaccctctgcccaggtaatggactttttgtttgagaagtggaagctctatagtga241ccaatgccaccacaacctaagcctgctgcccccacctactgagctggtctgtaacagaac301cttcgacaagtactcctgctggcctgacacccctcccaacaccactgccaacatttcctg361cccctggtacctaccttggtaccacaaagtgcagcaccgcctagtgttcaagaggtgtgg421gcccgatgggcagtgggttcgagggccacgggggcagccgtggcgcaacgcctcccaatg481tcagttggatgatgaagagatcgaggtccagaagggggtggccaagatgtatagcagcca541gcaggtgatgtacaccgtgggctacagtctgtccctgggggccttgctccttgcgctggt601catcctgctgggcctcaggaagctgcactgcacccgaaactacatccatgggaacctgtt661tgcgtcctttgtgctcaaggctggctctgtgttggtcatcgattggctgctgaagacacg721gtacagccagaagattggcgatgacctcagtgtgagcgtetggctcagtgacggggcgat781ggccggctgcagagtggccacagtgatcatgcagtacggcatcatagccaactattgctg841gttgctggtagagggcgtgtacctgtacagcctgctgagccttgccaccttctctgagag901gagcttcttttccctctacctgggcattggctggggtgcgcccctgctgtttgtcatccc32961etgggtggtggtcaagtgtctgtttgagaatgttcagtgctggaccagcaatgacaacat1021gggattctggtggatcctgcgtattcctgtcttcctggccttactgatcaattttttcat1081ctttgtccacatcattcaccttcttgtggccaagctgcgtgcccatcagatgcactatgc1141tgactataagttccggctggccaggtccacgctgaccctcatccctctgctgggggtcca1201cgaggtggtctttgcctttgtgactgacgagcatgcccaaggcaccctgcgctccaccaa1261gctcttttttgacctgttcctcagctccttccagggtctgctggtggctgttctctactg1321tttcctcaacaaggaggtgcaggcagagctgatgcggcgttggaggcaatggcaagaagg1381caaagctcttcaggaggaaaggttggccagcagccatggcagccacatggccccagcagg1441gccttgtcatggtgatccctgtgagaaacttcagcttatgagtgcaggcagcagcagtgg1501gactggctgtgtgccctctatggagacctcgctggccagtagtctcccaaggttggctga1561cagccccacctgaatctccactggagcctagccaggctgcgttcagaaagggcctcagag1621gacaacccagagccagatgcccggccaaggctgaagagacaaagcagcaagacagcagct1681tgtactgtgcacactcccctaacctgtcctagcctggcacaggccacagtgacagagtag1741gggttggatatgatggagaagccatgttatctatgaactctgagtgttcccatgtgtgtt1801gacatggtccctgtacccagatatgtccttcagtaaaaagctcgagtgggagctgctgca1861caaaaa肌肌aaaaaa肌aa小鼠(Musmusculus)氨基酸(SEQIDNO:4)485aa登录号AAH57988MetProLeuThrGinLeuHisCysProHisLeuLeuLeuLeuLeuLeuValLeuSerCysLeuProGluAlaProSerAlaGinValMetAspPheLeuPheGluLysTrpLysLeuTyrSerAspGinCysHisHisAsnLeuSerLeuLeuProProProThrGluLeuValCysAsnArgThrPheAspLysTyrSerCysTipProAspThrProProAsnThrThrAlaAsnlieSerCysProTrpTyrLeuProTrpTyrHisLysValGinHisArgLeuValPheLysArgCysGlyProAspGlyGinTrpValArgGlyProArgGlyGinProTrpArgAsnAlaSerGinCysGinLeuAspAspGluGlulieGluValGinLysGlyValAlaLysMetTyrSerSerGinGinValGlyLeuArgLysLeuHisCysThrArgAsnTyrlieHisGlyAsnLeuPheAlaSerPheValLeuLysAlaGlySerValLeuVallieAspTrpLeuLeuLysThrArgTyrSerGinLyslieGlyAspAspLeuSerValSerValTrpLeuSerAspGlyAlaMetAlaGlyCysArgValAlaThrVallieMetGinTyrGlylielieAlaAsnTyrCysTrpLeuLeuValGluGlyVal33SerLeuAlaThrPheSerGluArgSerPhePheSerLeuTyrLeuGluAsnValGinCysTrpThrSerAsnAspAsnMetGlyPheTrpTrplieLeuArglieProValPheLeuAlaLeuLeulieAsnPhePheliePheValHislielieHisLeuLeuValAlaLysLeuArgAlaHisGinMetHisTyrAlaAspTyrLysPheArgLeuAlaArgSerThrLeuThrLeulieProLeuLeuGlyValHisGluValValPheAlaPheValThrAspGluHisAlaGinGlyThrLeuArgSerThrLysLeuPhePheAspLeuPheLeuSerSerPheGinGlyLeuLeuValAlaValLeuTyrCysPheLeuAsnLysGluValGinAlaGluLeuMetArgArgTrpArgGinTrpGinGluGlyLysAlaLeuGinGluGluArgLeuAlaSerSerHisGlySerHisMetAlaProAlaGlyProCysHisGlyAspProCysGluLysLeuGinLeuMetSerAlaGlySerSerSerGlyThrGlyCysValProSerMetGluThrSerLeuAlaSerSerLeuProArgLeuAlaAspSerProThr大鼠(Rattusnorvegicus)多聚核香酸(SEQIDNO:5)登录号.NM1720921gaattcgcggccgccgccgggccccagatcccagtgcgcgaggagcccagtc加gaccc61agcaacctgaggagaggtgcacacacccccaaggacccaggcacccaacctctgccagat121gtgggggggtggctacccagaggcatgctcctcacccagctccactgtccctacctgctg181ctgctgctggtggtgctgtcatgtctgccaaaggcaccctctgcccaggtaatggacttt241ttgtttgagaagtggaagctctatagtgaccagtgccaccacaacctaagcctgctgccc301ccacctactgagctggtctgcaacagaactttcgacaagtactcctgctggcctgacacc361cctcccaacaccactgccaacatttcctgcccctggtacctaccttggtaccacaaagtg421cagcaccgcctagtgttcaagaggtgtgggcctgatgggcagtgggttcgagggccacgg481gggcagtcatggcgcgacgcctcccaatgtcagatggatgatgacgagatcgaggtccag541aagggggtagccaagatgtatagcagctaccaggtgatgtacactgtgggctacagtctg601tccctgggggccttgctcctggcgctggtcatcctgctgggcctcaggaagctgcactgc661acccggaactacatccacgggaacctgttcgcgtccttcgtgctcaaggctggctctgtg721ctggtcattgattggctgctcaagacacgctatagccagaagattggagatgacctcagt781gtgagcgtctggctcagtgatggggcggtggctggctgcagagtggccacagtgatcatg841cagtacggcatcatagccaactactgctggttgctggtggagggtgtgtacctgtacagc<table>tableseeoriginaldocumentpage35</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage36</column></row><table>nsi勾o々￡>Byynsicxyqini。ByyJ3SJ3SdsvWOJ3S々￡)々0Siy々oui￡)n"s人isXq々9(xy々。u[9々{)oldb[vj"o:yiqis下husvJ3S々￡)SiynI。nI。WOn3lPA々9ti3i3iydi丄Siy<^丄s]H3jySiyn3i1q9p3八ni。sXiusysqjsXqi/^lt\3i[B八BjvPAn"ti3i々{)u[。3qjJ3SJ"sqdnsqdsv叫dti3isX，Biv3qd3jvn3im々owoBivs!hniodsvjqipa叫dbtv3iw3iipaniosih0Jdqiti3qiqxnsijqiJ3SsX^b]yns^§jy3lW"1"丄dsyJq丄STHSTH13PMnI9SiyWn3l"1b[Vl^An3ln3rIS!Hl^A3II3II9lH3II3qd3qdusv3IIn3l3IIBIVn3T[3q<II^AOJJsiySiyn3l3II&丄&丄3IW々0usvdsVusyJ3SJqi&丄sXqu[￡)qiusy巧￡>3xyti3^3jyp八p八[b八di丄o_y3II3TI3lUn3lWW0JdBIV人IO&丄勾93II勾9n3l"丄n3lJ3S叫d3qdJ3Saiy0Jdn3lBTVn3l々。ti3insqusvs^hiX丄々￡>[b八di丄sXoj/C丄usyBIVPAPA々9"丄WO,l^AWWl^A~々9BIVPABp/々￡)dsvJ3Sn3l&丄3iiPAj3Sn3rtdsydsy々￡)qisX^iqoJ9S"丄3iyiqi3iyn3ln3l人IOdsv3IIpa[BAksrasByynaq[B八j巧[B八sqjusyb|VS!H3IIusy~Jqis^3SFHsAqJ3S叩々￡)nsqqiBjyti3qB[vnsiti3iBiv々9nsiJ3Sn，sJ^丄"八JMl"丄顺PA可O叫dj3sJ3S"丄ppmsXiPAni9"1n3rInionid々{)dsyP河ujoWOJ3SBp/dsv3lV化0Jdui。々ogjv叫々oSiyPAdi丄WO々0dsV叫々。sX3gjysXi3qjp八叫d3iysynWOPAMis，hs，hdJ丄cxynsqiA丄di丄cxys^3J9SqiusyBIVJqiJqiusvBIV0JdJHldsvcxydj丄sAqjssiX丄sXidsysiyjqx§iyusys^OI^ansinjQjqxcxyojjojjnsinsqusys;hs!hs^OWDdsy々0"工n9l"1di丄sXq3iynsi叫ddsyp何pe八可objvjsschjb^v可o0JdU[￡)SX3B[vtl31tl31tl31tl31tl3"Itl3qtlSq(UJ§jy§jyQI(JTI[{)CUJOJJ}3]/\[(8:ONLaiD3S)凍赁货(s!JBinqosBjB3B0BiM)錄蕞辜站3甜b3蹄3话B03p3BB3BB0蹄3邻33甜BB33蹄303询乖3333B3BBC5B:)0BB33B33B3甜330SBS3B甜B03p3话BBB3g33:p3S033pSMB3節WB333:)33cm3BBS3。jSB3glg3BSSBB0BBCn3邻33:pBp:po讽3甜飾p3p33飾o邻:)o:p3BC5p邻3p:)B3邻邻3:p3BB333邻3g询o。:)B3舒虽S0V8S憲法能抗原结合蛋白一方面，本发明提供与人胰高血糖素受体特异性结合的抗原结合蛋白(例如，抗体、抗体片段、抗体衍生物、抗体突变蛋白和抗体变异体)。在一个实施方案中该抗原结合蛋白为人类抗体。根据本发明的抗原结合蛋白包括与人胰高血糖素受体结合并通过胰高血糖素受体抑制胰高血糖素信号传导的抗原结合蛋白。在一个实施方案中，该抗原结合蛋白的IC5o值为90nM或更低。另一方面，该抗原结合蛋白与胰高血糖素受体特异性结合，抑制信号传导并显示出治疗性生物作用，例如降低动物模型的血糖或提高动物模型的葡萄糖清除率(耐受)。在一个实施方案中，该抗原结合蛋白为与胰高血糖素受体特异性结合并通过胰高血糖素受体抑制信号传导的人类抗体。在另一实施方案中，该抗原结合蛋白为与胰高血糖素受体特异性结合、通过胰高血糖素受体抑制信号传导并可以降低血糖或提高动物模型的葡萄糖清除率(耐受)的人类抗体。在一个实施方案中，该抗原结合蛋白(例如，抗体)包含与下文表2中A1-A23的CDR序列各相差5、4、3、2、1或0个单氨基酸添加、替换和/或缺失的序列。如本文所使用，与下文表2所示的CDR序列最多不超过例如四个氨基酸添加、替换和或缺失的CDR序列指与下文表2中的序列相比具有4、3、2、1或0个单氨基酸添加、替换和/或缺失的序列。在另一个实施方案中，该抗原结合蛋白包含一个或多个下文所示的CDR—致序列(consensuss叫uences)。提供了轻链CDR1、CDR2、CDR3和重链CDR1、CDR2和CDR3的一致序列。抗原结合蛋白(抗体)A1-A23的轻链CDRs以及示例性抗原结合蛋白(抗体)A1-A23的重链CDRs见表2。A-l至A-23对应于下文的Ll至L23以及下文的Hl至H23。也显示了编码CDRs氨基酸序列的多聚核苷酸序列。表2轻链Ll至L23AbCDR1CDR2CDR3A-lNAaggtctagtcagagcctcttggatagagatgatggagacAcgctttcctatcgggcctct(SEQIDNO:42)atgcaacgtatagagtttccattcact38acctatttggac(SEQIDNO:71)(SEQIDNO:9)AARSSQSIXDRDDGDTLSYRASMQRIEFPFTTYLD(SEQIDNO:(SEQIDNO:43)(SEQIDNO:72)10)A陽2aggtctagtcagagcctcttacgctttcctatcgggcctctatgcaacgtatagagtttcNAggatagtgctgatggagac(SEQIDNO:42)cattcactacctetttggac(SEQIDNO:71)(SEQIDNO:11)AARSSQSLLDSADGDTXSYRASMqRIEFPFTTYLD(SEQIDNO:(SEQIDNO:43)(SEQIDNO:72)12)A-3cgggcaagtcagggcattagctgcatccagtttgcaaagtctacagcataatagtaaccNAgaaatgatttaggc(SEQIDNO:44)ctctcact(SEQIDNO:13)(SEQIDNO:73)AARASQGIRNDLGAASSLQSLQHNSNPLT(SEQIDNO:14)(SEQIDNO:45)(SEQIDNO:74)A-4cgggcaagtcagggcattagctgcatccagtttgcaaagtctacagcataatBgtaaccNAgaaatgatttaggc(SEQIDNO:44)ctctcact(SEQIDNO:13)(SEQIDNO:73)AARASQGIRNDLGAASSLQSLQHNSNPUT(SEQIDNO:14)(SEQIDNO:45)(SEQIDNO:74)A-5cgggcaagtcagggcattagctgcctccagtttgcaaagtetacagcataatagtgaccNAgaaatgatttaggc(SEQIDNO:46)cgctcacc(SEQIDNO:13)(SEQIDNO:75)AARASQG翻DLGAASSLQSLQHNSDPLT(SEQIDNO:14)(SEQIDNO:45)(SEQIDNO:76)A-6agggccagtcagagtgttaggtgcatccagcagggccactcaacaatatggtaactcacNAgcagcaactacttagcc(SEQIDNO:47)cattcact(SEQIDNO:15)(SEQIDNO:77)AARASQSVSSNYLAGASSRATQQYGNSPFT39<table>tableseeoriginaldocumentpage40</column></row><table>AASGDKLGDKYVC(SEQIDNO:24)QTSKRPS(SEQIDNO:54)QAWDSSTVV(SEQIDNO:80)A-13NAtctggagataaattgggggataaatatgcttgc(SEQIDNO:25)c肌tctaccaagcggccctca(SEQIDNO:55)caggcgtgggacagcagcactgtggta(SEQIDNO:81)AASGDKLGDKYAC(SEQIDNO:26)QSTKRPS(SEQIDNO:56)QAWDSSTVV(SEQIDNO:80)A-14NAacccgcagcagtggcagcattgtcagcaactttgtgca(SEQIDNO:27)gaggataaccaaagaccctct(SEQIDNO:57)cagtcttatgataccagcaatcaggtg(SEQIDNO:82)AATRSSGSIVSNFVQ(SEQIDNO:28)EDNQRPS(SEQIDNO:58)QSYDTSNQV(SEQIDNO:83)A-15NA.actggaatcacctccaacatcggaagcaatactgtacac(SEQIDNO:29)agtaataatcagcggccctca(SEQIDNO:59)gcagcatgggatgacagcctgaatggtccggtg(SEQIDNO:84)AATGITSNIGSNTVH(SEQIDNO:30)S丽QRPS(SEQIDNO:60)AAWDDSLNGPV(SEQIDNO:85)A-16NAtctggaagcaggtccaacatcggaagtaattatgtatac(SEQIDNO:31)aggaataatcagcggccctca(SEQIDNO:61)gcagcatgggatgacagcctgagtaggccggta(SEQIDNO:86)AASGSRSNIGSNYVY(SEQIDNO:32)RNNQRPS(SEQIDNO:62)AAWDDSLSRPV(SEQIDNO:87)A-17NAactgggagcagctccaacatcggggcaggttatgctgtacac(SEQIDNO:33)gataacaacaatcggccctca(SEQIDNO:63)cagtcctatgacagcagcctgagtgctata(SEQIDNO:88)AATGSSSNIGAGYAVH(SEQIDNO:34)DNNNRP(SEQIDNO:64)QSYDSSLSAI(SEQIDNO:89)A-18aagtctagtcagagcctcctgaagtttcctaccggttctctatgcaaaatatacagcctc41NAgcatagtgatggaaagaactatttgttt(SEQIDNO:35)(SEQIDNO:65)ctctcacc(SEQIDNO:90)AAKSSQSLLHSDGKNYLF(SEQIDNO:36)EVSYRFS(SEQIDNO:66)MQNIQPPLT(SEQIDNO:91)A-19NAaggtctagtcagagcctcctgcatagtaatggatacaactatttggat(SEQIDNO:37)ttgggttctaatcgggcctcc(SEQIDNO:67)atggaagctcttcaaactatgtgcagt(SEQIDNO:92)AARSSQSLLHSNGYNYLD(SEQIDNO:38)LGSNRAS(SEQIDNO:68)MEALQTMCS(SEQIDNO:93)A-20NAcgggcaagtcagggcattagaaatgatttaggc(SEQIDNO:39)gctgcatccagtttgcaaagt(SEQIDNO:44)ctacagcataatagttaccctcgcagt(SEQIDNO:94)AARASQG腿DLG(SEQIDNO:14)AASSLQS(SEQIDNO:45)LQHNSYPRS(SEQIDNO:95)A-21NAcgggcgagtcagggtattagcagctggttagcc(SEQIDNO:40)gctgcatccagtttgcaaagt(SEQIDNO:44)caacaggctaacagtttcccgctcact(SEQIDNO:96)AARASQGISSWLA(SEQIDNO:41)AASSLQS(SEQIDNO:45)QQANSFPLT(SEQIDNO:97)A-22NAaggtctagtcagagcctcttggatagagatgatggagacacctatttggac(SEQIDNO:9)acgctttcctatcgggcctct(SEQIDNO:42)atgcaacgtatagagtttccattcactt(SEQIDNO:98)AARSSQSLLDRDDGDTYLD(SEQIDNO:10)TLSYRAS(SEQIDNO:43)MQRIEFPFT(SEQIDNO:72)A-23NAcgggcgagtcagggtattagcagctggttagccactgcatccactttgcaaagt(SEQIDNO:69)caacagtctaacagtttcccgctcact42<table>tableseeoriginaldocumentpage43</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage44</column></row><table>A-9NAagctatggcatgcac(SEQIDNO:101)gttatgtggtatgatggaagtaataaagactatgtagactccgtgaagggc(SEQIDNO:127)gaaaaagatcattacgacattttgactggttataactactactacggtctggacgtc(SEQIDNO:168)AASYGMH(SEQIDNO:102)VMWYDGSNKDYVDSVKG(SEQIDNO:128)EKDHYDILTGYNYYYGLDV(SEQIDNO:169)A-10NAagcaactatgctgcttggaac(SEQIDNO:107)aggacatactacaggtccaagtggtataatgattatgcagtatctgtgagaagt(SEQIDNO:137)gaagatggcagtggctggtacggtgcttttgacatc(SEQIDNO:178)AASNYAA額(SEQIDNO:108)RTYYRSKWYNDYAVSVRS(SEQIDNO:138)EDGSGWYGAFDI(SEQIDNO:179)A-llNAagctatgacatgcac(SEQIDNO:109)tttatatcagatgatggaagtaataaatactatggagactccgtgaagggc(SEQIDNO:139)gatcaatacgatattttgactggttattcttctgatgcttttgatatc(SEQIDNO:180)AASYDMH(SEQIDNO:阔FISDDGSNKYYGDSVKG(SEQIDNO:140)DQYDILTGYSSDAFDI(SEQIDNO:181)A-12NAagctatgacatgcac(SEQIDNO:109)tttatatcagatgatggaagtaataaatattatggagactccgtgaagggc(SEQIDNO:141)gatcaatacgatattttgactggttattcttctgatgcttttgatatc(SEQIDNO:180)AASYDMH(SEQIDNO:106)FISDDGSNKYYGDSVKG(SEQIDNO:140)DQYDILTGYSSDAFDI(SEQIDNO:181)A-13NAagctatgacatgcac(SEQIDNO:109)gttatatcatatgatggaagtaataaatactatggagactccgtgaagggcgatcaatacgatattttgactggttattcttctgatgcttttgatatc(SEQIDNO:180)45<table>tableseeoriginaldocumentpage46</column></row><table>115)(SEQIDNO:151)A-18NAaagtctagtcagagcctcctgcatagtgatggaaagaact3tttgttt(SEQIDNO:116)gaagtttcctaccggttctct(SEQIDNO:152)atgcaaaatatacagcctcctctc(SEQIDNO:190)AAKSSQSLLHSDGKNYLF(SEQIDNO:117)VIWYDGSHKYYEDSVKG(SEQIDNO:153)VGYGSGWYEYYYHYGMDV(SEQIDNO:191)A-19NAagctatggcatgcac(SEQIDNO:101)attatatggtctgatggaattaacaaatactatgcagactccgtgaagggc(SEQIDNO:154)gagagaggcctctacgatattttgactggttattataactactacggtattgacgtc(SEQIDNO:192)AASYGMH(SEQIDNO:102)而SDGINKYYADSVKG(SEQIDNO:155)ERGLYDILTGYYNYYGIDV(SEQIDNO:193)A-20NAggctataccttgaac(SEQIDNO:117)aacattaatagtaggagtagtctcatatactacacagaetctgtgaagggc(SEQIDNO:156)gatcagtataactggaactactactacggtatggacgtc(SEQIDNO:194)AAGYTLN(SEQIDNO:118)N歸RSSLIYYTDSVKG(SEQIDNO:157)DQYN颗YYYGMDV(SEQIDNO:195)A-21NAagctatgceatgaac(SEQIDNO:119)tacattggtagtagtagtagtgccatatactacggagactctgtg肌gggc(SEQIDNO:158)tatagaagtggctggtcccccctctttgacttc(SEQIDNO:196)AASYAMN(SEQIDNO:阔YIGSSSSAIYYGDSVKG(SEQIDNO:159)YRSGWSPLFDF(SEQIDNO:197)A-22agctatggcatgcactctatatggtatgatggaagtaacttggtggtggttttgactac47<table>tableseeoriginaldocumentpage48</column></row><table>CDR—致序列轻链CDR11组RSSQSLLDRDDGDTYLD(SEQIDNO:10)RSSQSLLDSADGDTYLD(SEQIDNO:12)RSTQSLLDSDDGDTYLD(SEQIDNO:20)XiX2X3RSSQSLLDRDDGTYTLDTSAi.RSXiQSLLDX^DGTYTLD(SEQIDNO:200)为丝氨酸残基或苏氨酸残基，X2为精氨酸残基或丝氨酸残基，x3为天冬氨酸残基或丙氨酸残基，2组RASQDIRNDFG(SEQIDNO:18)RASQGIRNDLG(SEQIDNO:14)X4X5RASQGIRNDLGDFii.RASQX41RNDX5G(SEQIDNO:201)X4为甘氨酸残基或天冬氨酸残基，X5为亮氨酸残基或苯丙氨酸残基.3组SGDKLGDKYVC(SEQIDNO:24)SGDKLGDKYAC(SEQIDNO26)X6SGDKLGDKYVCAiii.SGDKLGDKYX6C(SEQIDNO:202)X6为缬氨酸残基或丙氨酸残基重链CDR11组TYGMH-(SEQIDNO:104)SYGMH画(SEQIDNO:102)SYDMH-(SEQIDNO:106)x7x849sYGMHTDi.X7YX8MH(SEQIDNO:203)X7为丝氨酸残基或苏氨酸残基，x8为甘氨酸残基或天冬氨酸残基，轻链CDR21组AASSLQS(SEQIDNO:45)AASSLES(SEQIDNO:50)X9AASSLQSEi.AASSLX9S(SEQIDNO:204)X9为谷氨酰胺残基或谷氨酸残基，2组QTSKRPS(SEQIDNO:54)QSTKRPS(SEQIDNO:56)XioXiiQTSKRPSSTii.QXk)XhKRPS(SEQIDNO:205)X10为丝氨酸残基或苏氨酸残基，xu为苏氨酸残基或丝氨酸残基，50重链CDR21组SIWYDGSNKYYVDSVKG(SEQIDNO:124)FIWYDGSEKYYVDSVKG(SEQIDNO:126)VIWYDGSNKYYADSVKG(SEQIDNO:145)EIWNDGSNKYYADSVKG(SEQIDNO:132)X12X13X14X"SIWYDGSNKYYVDSVKGFNEAVEi.X12IWX13DGSX14KYYX15DSVKG(SEQIDNO:206)X12为丝氨酸残基、苯丙氨酸残基、缬氨酸残基或谷氨酸残基，x13为酪氨酸残基或天冬酰胺残基，x14为天冬酰胺残基或谷氨酸残基，x15为缬氨酸残基或丙氨酸残基，2组VISHDGSDKYYADSVKG(SEQIDNO:134)FISDDGSNKYYGDSVKG(SEQIDNO:140)VISYDGSNKYYGDSVKG(SEQIDNO:143)VISDDGSHKYSADSVKG(SEQIDNO:130)Xi6XnXi8X19X20VISHDGSDKYYADSVKGFDNSGYHii.X16ISX17DGSX18KYX19X20DSVKG(SEQIDNO:207)X16为丙氨酸残基或苯并氨酸残基，X17为组氨酸残基、天冬氨酸残基或酪氨酸残基，x18为天冬氨酸残基、天冬酰胺残基或组氨酸残基,x19为酪氨酸残基或丝氨酸残基，x20为丙氨酸残基或甘氨酸残基，轻链CDR31组LQHNSDPLT(SEQIDNO:76)LQQNSYPLT(SEQIDNO:80)LQHNSNPLT(SEQIDNO:74)X21X22LQHNSNPLTQDYi.LQX21NSX22PLT(SEQIDNO:208)X21为组氨酸残基或谷氨酰胺残基，x22为天冬酰胺残基、天冬氨酸残基或酪氨酸残基,2组QAWDSNTVI(SEQIDNO:78)QAWDSSTVV(SEQIDNO:80)X23X:24QAWDSNTVISVii.QAWDSX23TVX24(SEQIDNO:209)X23为天冬酰胺残基或丝氨酸残基，x24为异亮氨酸残基或缬氨酸残基，重链CDR31组EKDHYDILTGYNYYYGLDV(SEQIDNO:169)EETYYDILTGYHHYYGMDV(SEQIDNO:171)EPQYYDILTGYDNYYGMDV(SEQIDNO:173)EKPYYDILTGYFYYYGMDV(SEQIDNO:175)X25X26X27EKDHYETYPQPX28X29X30DILTGYNYYYGLDVHHMDNFi.EX25X26X27YDILTGYX28X29YYGX30DV(SEQIDNO:210)X25为赖氨酸残基、谷氨酸残基或脯氨酸残基，X26为天冬氨酸残基、苏氨酸残基、谷氨酰胺残基或脯氨酸残基,x27为组氨酸残基或酪氨酸残基，x28为天冬酰胺残基、组氨酸残基、天冬氨酸残基或苯丙氨酸残基x29为酪氨酸残基、组氨酸残基或天冬酰胺残基，x30为亮氨酸残基或曱硫氨酸残基，2组LGGGFDY(SEQIDNO:165)MGGGFDY(SEQIDNO:167)X31LGGGFDYMii.X31GGGFDY(SEQIDNO:211)X31为亮氨酸残基或甲硫氨酸残基。另一方面，本发明提供包含选自L1-L23的轻链可变区或选自H1-H23的重链可变区及其片段、衍生物、突变蛋白或变异体的抗原结合蛋白。可用名称"LxHy"表示该类抗原结合蛋白，其中"x"对应于轻链可变区并且"y"对应于重链可变区。例如，L2H1指具有包含如下文表3所示L2氨基酸序列的轻链可变区和包含H1氨基酸序列的重链可变区的抗原结合蛋白。本发明抗原结合蛋白包括例如包含选自组合L1H1、L2H2、L3H3、L4H4、L5H5、L6H6、L7H7、L8H8、L9H9、L丽IO、LllHll、L12H12、L13H13、L14H14、L15H15、L16H16、H17H17、L18H18、L19H19、L20H20、L21H21、L22H22和L23H2的轻链和重链可变结构域的组合。在一个实施方案中，该抗体为人类抗体。表3也提供了编码示例性GCGR抗体的可变轻链和可变重链结构域的氨基酸序列的多聚核苷酸(DNA)序列。表3抗GCGR可变区多聚核苷酸序列和氨基酸序列轻链可变区多聚核苷酸和氨基酸序列Ll(A-l)gatatt.gtgct.gacccagactccactctccctgcccgtcacccctggagagccggcctccatctcctgca^gtofcagtcagage^ettggataga幼tg战醉gag恥aixt汰tttggactggtacctgcagaagccagggcagtctccacagctcctgatctatacgefflcc鉍tcgggcct"ggagtcccagacaggttcagtggcagtgggtcaggcactgatttctcactgaaaatcagcagggtggaggctgaggatgttggagtttattactgc射gf^解gt射船船附W汰撫,賊fttcggccctgggaccaaagtggatatcaaa(SEQIDNO:212)IYTLSYRASGVPDRFSGSGSGTDFSLKISRVEAEDVGVYYCMOHCTPFTFGPGTKVDIK(SEQIDNO:213)L2(A-2)agactccactctccctgcccgtcacccctggagagccggcctccatctcctgcaggtctagtcagagcctcttggatag|gg|ggJggagi￡a￡￡lStttEgMtggtacctgcagaagccagggcagtctccacagctcctgatctata￡￡e|||^latcggg<xtctggagtcccagacaggttcagtggcagtg.ggtcagacactgatttctcactgaaaatcagcagggtggaggctgaggatgttggagtttattactgcstgpa汰t^树agag裕p,cat1^併tcggccctgggaccaaagtggatatcaaa(SEQIDNO:214)IYTLSYRASGVPDRFSGSGSDTDFSLKISRVEAEDVGVYYCMOIUB符FTFGPGTKVDIK(SEQIDNO:215)L3(A-3)gacatccagatgacccagtctccatcctccctgtctgcatctgtaggagacagagtcaccatcacttgcsggggaigjg;agggcattagaaatgattt解g"ggtatcagcagaaaccagggaaagcccctaagcgcctgatctatgctgcatecaglHg2gaagtggggtcccatcaaggttcagcggcagtggatctgggacagaattcactctcacaatcagcagtgtgcagcctga犯attttgtaacttattactgtet織gcat膽t敏謝cctctc狄tttcggcggagggaccaaggtggagatcaaa(SEQIDNO:216)DIOMTOSPSSLSASVGDRVTITCRASOG画DmWYOOKPGKAPKRLIYAASK(SEQIDNO:217)L4(A-4)gacatccagatgacccagtctccatcctccctgtctgcatctgtaggagacagagtcaccatcacttgc|]||i^iJ||^，g爐汰gaa鄉诚tt欲,tggtatcagcagaaacca卿aaagcccctaagcgcctgatcta，.争站oda55g|gggg§§gtggggtcccatcaaggttcagcggcagtggatctgggacagaattcactctcacaatcagcagtctgcagcctgaagattttgcaacttattactgtctacagcafaatagtaaecctfitcacl;ttcggcggagggaccaaggtggagatcaaa(SEQIDNO:218)D懸TOSPSSLSASVGDRVTITC脇OG腿DLGWYOOKPGKAPKRLIYAASSL0SGVPSRFSGSGSGTEFTLT1SSL0PEDFATYYCL0HNS，LTFGGGTKVE1K(SEQIDNO:219)L5(A-5)gacatccagatgacccagtctccatcctccctgtctgcatttgtaggagacagagtcaccatcacttgct^ggeaagte汰朋解爐解aa汰tga付t賴^tggtatcagcagaaaccagggaaagcccctaagcgcctgctctatg^路^^賴ggigSiaigJggggtcccatcaaggttcagcggcagtgggtctgggtcagaattcactctcacaatcagcagcctgcagcctgaagattttgcaacttattactgtcta^g9ataata一gacecgctoaccttcggccaagggacacgactggagattaaa(SEQIDNO:220)DIgMTOSPSSLSAFVGDRVTITCRASOGmNDLGAVYOOKPGKAPKRLLYAASSLOSGVPSRFSGSGSGSEFTLTISSLOPEDFATYYCLQHNSDPLTFGOGTRLEIK(SEQIDNO:221)L6(A-6)gaaatt辨tt导ac夢ca虽tctcca競caccctgtctttgtttccaggggaaagagccaccctctcctgcilimi^agigtgtti^gfiaggMEtifill5gSStggtaccagcagaaatctggccaggctcccaggctcctcatctat^lllilleeagfeagggfifiastggcatcccagacaggttca!t競ca!t驟tct,acagacttcactctcaccatcagcagactggagcctgaagattttgcagtgtattactgte汰aeaatat解taact&汰ccattcactttcggccctgggaccaatgtggatotca肌(SEQIDNO:222)EIVLTOSPGTLSLFPGERATLSCM糾S腦NY^LAWYOOKSGOAPRLLIY,恵SRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQOY,鄉TFGPGTNVDIK(SEQIDNO:223)56L7(A-7);|acatcca|.at|acccagtctccatcctccctgtctgcatctgtaggagacagagtcaccgtcacttgcj^^p|^aggg￡il||lgaMtgiltttgB6tggtatcagcaaaaaccagggaaagcccctaagcgcctgatctatgfiJg￡g$^§gHlag^gl^Iggggtcccatcaaggttcagc縣ca爽.gatctg路acagaattcactctcacaatcagcagcctgcagcctgaagattttgcaacttattactgtetacageaa汰ataf[ttaeccgctcadttcgggggagggaccaaggtggaaatcaaa(SEQIDNO:224)(SEQIDNO:225)L8(A-8)gatatt魏at蔡acccagactccactctccct虽cccgtcacccctggagagccggcctccatctcctgcaggjglaslsaga总ectcttggatagt^t故atggaaaca(Xita傲ggactggtacctgcagaagccggggcagtctccacagctcctgatctatacg鄉cct站cgggcctctggagtcccagacaggttcagtg.gcagt戀tca^cactgatttcacactgaaaatcagcagggtggaggctgaggatgttggagtttattactgcatgcaacgtat船agtttecattcaetttcggccctgggaccaaagtggatatcaaa(SEQIDNO:226)DIVMTOTPLSLPVTPGEPASISCRS丽L固DDGDTTL誇YLOKPGOSPOLLIYTLSYKASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMOiaEFPFTFGPGTKVDIK(SEQIDNO:227)L9(A-9)...............................gacatcca.gatgacccagtctccatcctccctgtctgcatctgtaggagacagagtcaccatcacttgc6i酵輕,，agggfiMa8M§tgMfegg￡tggtatcagcagaaaccagggaaagcccctaagcgcctgatctat^gM^g辨ggaaagtggggtcccatcaaggttcag;cg;gcagt.ggatctg.g;gacagaattcactctcacaatcagcagtgtgcagcctgaagattttgtaacttattactgtc重acagc站aat丰aacc鄉c鄉tcggcggagggaccaaggtggagatcaaa(SEQIDNO:228)囊I:…ETGGGl纖IRKpAGi，p缀懇Q爨.QoYoos纖TTcYYADEpssTT爪EQTGGVsyGAsLssFTsI,pMsQo_I-flsQKL10(A誦IO)gacatccagatgacccagtctccatcctccctgtctgcatctgtgggagacagagtcaccatcacttgc￡ggg￡g§;gj￡aggg￡§Ulgtiagt§ISlaa|tggtatcagcagaaaccagggaaagcccctaagctcctcatctacg§igg§|￡￡a§|MSSiMeiggggtcccatcaaggttcagtggaagtggatctgggacagattttactttcaccatcagcagcctgcagcctgaagatattgcaacatattactgt&aac解tatggt效atctcecg汪tea(^ttcggccaagggacacgactggagagt(SEQIDNO:230)NLETGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLOPEDIATYYCQQYGNLPITFGOGTRLESK(SEQIDNO:231)Lll(A誦ll)tcctatgagctgactcagccaccctcagtgtccgtgtccccaggacagacagccagcatcacctgc|gjggagaliaattggp:gatoa醉atgtttgctggtatcagcagaagccaggccagtcccctgtgctggtcatctatcaaacttccaagc战g^t^igggatccctgagcggttctctggctccaactctgggaacacagccactctgaccatcagcgggacccaggctatggatgaggctgactattactgtea战&gteggaeaacaacactgt萨tfflcggcggagggaccaagctgaccgtceta(SEQIDNO:232)碗GIPERFSGSNSGNTATLTISGTOAMDEADYYCi隱kJ毅國FGGGTKLTVL(SEQIDNO:233)L12(A-12)tcctatgagctgactca.gccaccctcagtgtccgtgtccccaggacagacagccagcatcacctgc|g|gggg||guitgggggMaMMgSlg￡tggtatcagcagaagceaggccagtcccctgtgctggtcatctat￡MMS￡￡Mge￡SgggJES^gggatccctgagcggttctctggctccaactctgggaacacagccactctgaccatcagcgggacccaggct58(SEQIDNO:229)Q3S化Katggatgaggctgactattactgteag糾斜ggg糾躯g汰^恥tgt蹄琳tcggcggagggaccaagctgaccgtccta(SEQIDNO:234),GIPERFSGSNSGNTATLTISGTOAMDEADYYCOAW腦TWFGGGTKLTVL(SEQIDNO:235)L13(A-13)tcctatgagct^ctcagccaccctcagtgtccgtgtccccaggacagacagccagcatcacctgcfglggagalg^gjIgggggg^M^ggJJggtggtatcagcag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aggctccaggcaaggggctggagtgggtggcatet被汰tgg衞g辨gg縣gto存tM射鹏糾gta斜ct^g1;g种gggficgattcaccatcttcagagacaattccaagaaaacgctgtatctgcaaatgaacaggctgagagccgaggacacggctgtgtattactgtgcgagacttggtggtggttttgaetaetggggccagggaaccctggtcaccgtctcctca(seqidno:300)ovolvesgggvvopgrslrlscaasgitfssygmhwvroapgkglewvasiwydgsnkyyvdsvk:orftifrdnskktlylo画rlraedtavyycarlgggFpYWGOGTLVTVSS(SEQIDNO:301)h23(a-23)gaggtgcggctggtggagtctgggggaggcttggtacagcctggggggtccctgagactctcctgtacagcctctggattccccttcaat统gat汰tgce汰取a汰etgggtccgccaggctccagggaaggggctggagtgggtttcatacatt叫t汰g卖汰gtagt&gt:gc,(atatac.faegg.agae.tetgt:ga汰ggjgi&cgattcaccatctccagagacaatgccaagaactcactgtatctgcaaatgaacagcctgagagatgaagacacggctgtgtattactgtgcgagaj^lag^igl^j^ll^gSSMg^Sj^gtggggccagggaaccctggtcaccgtctcctca(seqidno:302)EVRLVESGGGLVOPGGSLRLSCTASGFPFNJJl^liwVROAPGKGLEWVS隱醫國圖,圖I圖圖RFTISRDNAKNSLYLQMNSLRDEDTAVYYCAR圖國磁M戰WGOGTLVTVSS(seqidno:303)71本发明抗原结合蛋白的具体实施方案包含与一个或多个上文所列CDRs和/或FRs(骨架区)的氨基酸序列相同的一个或多个氨基酸序列。在一个实施方案中，该抗原结合蛋白包含上文所列轻链CDR1序列。在另一个实施方案中，该抗原结合蛋白包含上文所列的轻链CDR2序列。在另一个实施方案中，该抗原结合蛋白包含上文所列的轻链CDR3序列。在另一个实施方案中，该抗原结合蛋白包含上文所列的重链CDR1序列。在另一个实施方案中，该抗原结合蛋白包含上文所列的重链CDR2序列。在另一个实施方案中，该抗原结合蛋白包含上文所列的重链CDR3序列。在另一个实施方案中，该抗原结合蛋白包含上文所列的轻链FR1序列。在另一个实施方案中，该抗原结合蛋白包含上文所列的轻链FR2序列。在另一个实施方案中，该抗原结合蛋白包含上文所列轻链FR3序列。在另一个实施方案中，该抗原结合蛋白包含上文所列轻链FR4序列。在另一个实施方案中，该抗原结合蛋白包含上文所列重链FR1序列。在另一个实施方案中，该抗原结合蛋白包含上文所列重链FR2序列。在另一个实施方案中，该抗原结合蛋白包含上文所列重链FR3序列。在另一个实施方案中，该抗原结合蛋白包含上文所列重链FR4序列。在另一个实施方案中，至少一个抗原结合蛋白的CDR3序列与来自A1-A23的CDR3序列的差异最多不超过6、5、4、3、2、1或0个单氨基酸添加、替换和/或缺失，如上文表2和3所示。在另一个实施方案中，抗原结合蛋白的轻链CDR3序列与上述A1-A23的轻链CDR3序列的差异不得超过6、5、4、3、2、l或O个单氨基酸添加、替换和/或缺失并且抗原结合蛋白的重链CDR3序列与上文所述A1-A23的重链CDR3序列的差异最多不超过6、5、4、3、2、1或0个单氨基酸添加、替换和/或缺失。在另一个实施方案中，抗原结合蛋白进一步包含1、2、3、4或5个CDR序列，各序列独自与A1-A23的CDR序列的差异最多不超过6、5、4、3、2、l或O个单氨基酸差异。在另一个实施方案中，抗原结合蛋白包含上文所列轻链可变区的CDRs和重链可变区的CDRs。在另一实施方案中，抗原结合蛋白包含上文所述的1、2、3、4、5和/或6个一致CDR序列。在进一步的实施方案中，该抗原结合蛋白包含L1H1、L2H2、L3H3、L4H4、L5H5、L6H6、L7H7、L8H8、L9H9、LIOHIO、LllHll、L12H12、L13H13、L14H14、L15H15、L16H16、L17H17、L18H18、Ll懇9、L20H20、L21H21、L22H22和L23H23中任何之一的CDRs。在一个实施方案中，该抗原结合蛋白为人类抗体。在一个实施方案中，该抗原结合蛋白(例如抗体或抗体片段)包含轻链可变结构域，其包含与选自L1-L23的轻链可变结构域序列存在15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2、1或0个氨基酸差异的氨基酸序列，其中各该序列的差异独立为一个氨基酸残基的缺失、插入或替换。在另一个实施方案中，该轻链可变结构域包含与选自L1-L23的轻链可变结构域至少70%、75%、80%、85%、90%、95%、97%或99°/。相同的氨基酸序列。在另一个实施方案中，该轻链可变结构域包含与下文所列L1-L23多聚核苷酸序列至少70%、75%、80%、85%、90%、95%、97%或99%相同的核苷酸序列编码的氨基酸序列。在另一个实施方案中，该轻链可变结构域包含在中等条件下与编码选自L1-L23的轻链可变结构域的多聚核苷酸互补序列杂交的多聚核苷酸编码的氨基酸序列。在另一个实施方案中，该轻链可变结构域包含在严才各条件下与编码选自L1-L23的轻链可变结构域的多聚核苷酸的互补序列杂交的多聚核苷酸编码的氨基酸序列。在另一个实施方案中，本发明提供包含重链可变结构域的抗原结合蛋白，该可变结构域包含选自H1-H23的重链可变结构域序列存在15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2、1或0个残基存在差异的氨基酸序列，其中各该序列差异独立为一个氨基酸的缺失、插入或替换。在另一个实施方案中，该重链可变结构域包含与选自H1-H23的重链可变结构域序列至少70%、75%、80%、85%、90%、95%、97%或99%相同的氨基酸序列。在另一个实施方案中，该重链可变结构域包含在中等严格条件下与编码选自H1-H23的重链可变结构域的多聚核苷酸互补序列杂交的多聚核苷酸编码的氨基酸序列。在一个实施方案中，该重链可变结构域包含在严格条件下与编码选自H1-H23的重链可变结构域的多聚核苷酸互补序列杂交的的多聚核苦酸编码的氨基酸序列。附加实施方案包括包含组合L1H1、L2H2、L3H3、L4H4、L5H5、L6H6、L7H7、L8H8、L9H9、L10H10、LllHll、L12H12、L13H13、L14H14、L15H15、L16H16、L17H17、L18H18、L19H19、L20H20、73L21H21、L22H22和L23H23的抗原结合蛋白。本发明的抗原结合蛋白(例如，抗体、抗体片段和抗体衍生物)可包含本领域已知的任何恒定区。轻链恒定区可为例如k或X型轻链恒定区，例如人k或X型轻链恒定区。重链恒定区可为例如a、S、s、y或H型重链恒定区，例如人a、8、s、y或iLi型重链恒定区。在一个实施方案中，该轻链或重链恒定区为天然恒定区的片段、衍生物、变异体或突变蛋白。已知从相关抗体衍生不同亚类或同种型抗体的技术，即亚类转换(subclassswitching)。因此，可从IgM抗体4汙生IgG抗体，反之亦然。这类技术允许制备具有给定抗体(母体抗体)的抗原结合性质的新抗体，但是也显示与母体抗体不同的抗体同种型或亚类相关的生物学性质。也可应用重组DNA4支术。可在该操作中应用编码具体抗体多肽的已克隆DNA,例如编码期望同种型的抗体恒定结构域的DNA。也可参见Lanitto等，MethodsMol.Biol.178:303-16(2002)。在一个实施方案中，本发明的抗原结合蛋白进一步包含恒定轻链k或X结构域或这些的片段。轻链恒定区序列和它们的编码多聚核苦酸提供于表4。在另一个实施方案中，本发明抗原结合蛋白进一步包含重链恒定结构域或其片段，例如提供于表4的IgG重链恒定区。在一个实施方案中，人轻链IgG2形式和抗体A-9和A-3的重链氨基酸序列列于下文的SEQIDNO:310、SEQIDNO:311、SEQIDNO:312和SEQIDNO:311。表4轻链恒定区多聚核苷酸(k)cgaactgtggctgcaccatctgtcttcatcttcccgccatctgatgagcagttgaaatctggaactgcctctgttgtgtgcctgctgaataacttctatcccagagaggccaaagtacagtggaaggtggataacgccctccaatcgggtaactcccaggagagtgtcacagagcaggacagcaaggacagcacctacagcctcagcagcaccctg3cgctgagca肌gcagactacg3g肌acacaaagtctacgcctgcgaagtcacccatcagggcctgagctcgcccgtcacaaagagcttcaacaggggagagtgt(SEQIDNO:304)氨基酸(k)GLSSPVTKSFNRGEC(SEQIDNO:305)多聚核苷酸(AOggtcagcccaaggctgccccctcggtcactctgttcccgccctcctctgaggagcttcaagccaacaaggccacactggtgtgtctcataagtgacttctacccgggagccgtgacagtggcctggaaggcagatagcagccccgtcaaggcgggagtggagaccaccacaccctccaaacaaagcaacaacaagtacgcggccagcagctatctgagcctgacgcctgagcagtggaagtcccacagaagctacagctgccaggtcacgcatgaagggagcaccgtggagaagacagtggcccctacagaatgttca(SEQIDNO:306)氨基酸(X)STVEKTVAPTECS(SEQIDNO:307)重链恒定区多聚核苷酸gcctccaccaagggcccatcggtcttccccctggcgccctgctccaggagcacctccgagagcacagcggccctgggctgcctggtcaaggactacttccccgaaccggtgacggtgtcgtggaactcaggcgctctgaccagcggcgtgcacaccttcccagctgtcctacagtcctcaggactctactccctcagcagcgtggtgaccgtgccctccagcaacttcggcacccagacctacacctgcaacgtagatcacaagcccagcaacaccaaggtggacaagacagttgagcgcaaatgttgtgtcgagtgcccaccgtgcccagcaccacctgtggcaggaccgtcagtcttcctcttccccccaaaacccaaggacaccctcatgatctcccggacccctgaggtcacgtgcgtggtggtggacgtgagccacgaagaccccgaggtccagttcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccacgggaggagcagttcaacagcacgttccgtgtggtcagcgtcctcaccgttgtgcaccaggactggctgaacggcaaggagtacaagtgcaaggtctccaacaaaggcctcccagcccccatcgagaaaaccatctccaaaaccaaagggcagccccgagaaccacaggtgtacaccctgcccccatcccgggaggagatgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctaccccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccacacctcccatgctggactccgacggctccttcttcctctacagcaagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcaggggaac75gtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtctccgggtaaa(SEQIDNO:308)氨基酸ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVGK(SEQIDNO:309)轻链A-9IgG2形式GEC(SEQIDNO:310)重链A-9IgG2形式FTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAVMWYDGSNKDYVDSVKGRFTITCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDHNHYTQKSLSLSPGK(SEQIDNO:311)轻链A-3IgG2形式GEC(SEQIDNO:312)重链A-3IgG2形式TCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDHNHYTQKSLSLSPGK(SEQIDNO:311)本发明抗原结合蛋白(例如抗体)包括例如包含组合LlHl、L2H2、L3H3、L4H4、L5H5、L6H6、L7H7、L8H8、L9H9、L10H10、LllHll、L12H12、L13H13、L14H14、L15H15、L16H15、L17H17、L18H18、L19脂、L20腦、L21H21、L22H22和L23H23并具有期望表型(例如，IgA、IgGl、IgG2、IgG3、IgG4、IgM、IgE和IgD)以及其Fab或F(ab，)2片段的那些。而且，如果期望IgG4，也需要如Bloom等，1997,ProteinScience6:407(以参考形式并于本文)77所述在铰链区引入一个点突变以减轻形成IgG4抗体中不均一性的内H链二硫键的趋势。抗体和抗体片殺:在一个实施方案中该抗原结合蛋白为抗体。术语"抗体，，指完整抗体或其抗原结合片段，如定义部分所广泛描述。抗体可包含完整的抗体分子(包括具有全长重和/或轻链的多克隆、单克隆、嵌合、人源化或人类抗体)或包含其抗原结合片段。抗体片段包括F(ab，)2、Fab、Fab，、Fv、Fc和Fd片段，并可整合入单结构域抗体、单链抗体、最大抗体(maxibodies)、孩史抗体(minibodies)、内4元体(intrabodies)、二链4元体、三链抗体、四链抗体、v-NAR和bis-scFv(参见，例如HollingerandHudson,2005,NatureBiotechnology,23,9,1126-1136)。也包括抗体多肽例如美国专利号6703199中所公开的那些，包括纤维结合素多肽单抗体。其它抗体多肽公开于美国专利出版物2005/0238646，其为单链多肽。在一个实施方案中，本发明该抗体包含上文表2所列的至少一个CDR或一致CDR。在一个实4方案中，人源化单克隆;元体包含鼠;元体的可变结构域(全部或部分其抗原结合位点)和人类抗体的恒定结构域。或者，人源化抗体可包含鼠单克隆抗体的抗原结合位点和来源于人类抗体的可变结构域片段(缺失抗原结合位点)。基因工程单克隆抗体的生产方法包括Riechmann等，1988,Nature332:323,Liu等，1987,Proc.NatAcad.Sci.USA84:3439,Larrick等，1989,Bio/Technology7:934和Winter等,1993,TIPS14:139中所述。在一个实施方案中，该嵌合抗体为CDR移植抗体。人源化抗体的技术描述于例如美国专利号5869619、5225539、5821337、5859205、6881557,Padlan等，1995,FASEBJ.9:133-39,Tamura等，2000,J.Immunol.164:1432-41，Zhang,W等，MolecularImmunology.42(12):1445画1451,2005;HwangW.等，Methods.36(1):35画42,2005;Dall，AcquaWF等，Methods36(l):43-60，2005;和Clark,M.,ImmunologyToday.21(8):397-402,2000。本发明抗体也可为全长人单克隆抗体。可通过本领域普通技术人员熟悉的技术生成全长人单克隆抗体。该类方法包括但是不限于EpsteinBarrVirus(EBV)转染人外周血细胞(例如包含B淋巴细胞)、体外免疫人B细胞、携带被插入的人免疫球蛋白基因的经免疫转基因小鼠的脾细胞融合、从人免疫球蛋白V区噬菌体文库中分离或其它本领域已知并基于本文公开内容的操作。已研发出在非人动物中生成人单克隆抗体的方法。举例而言，已制备了通过各种途径将一个或多个内源免疫球蛋白基因灭活的小鼠。已将人免疫球蛋白基因引入小鼠取代被灭活的小鼠基因。在这一技术中，将人重和轻链基因座的元件引入来源于包含内源重链和轻链基因座的靶向断裂的胚胎干细胞的小鼠抹(也可参见Bruggemann等，Curr.Opin.Biotechnol.8:455-58(1997)。例如，人免疫球蛋白转基因可为小基因构建体或酵母人工染色体上的转位子，其经过在小鼠淋巴样组织中的B细胞特异DNA重排和超突变。动物中生产的抗体整合了由引入动物中的人遗传物质编码的人免疫球蛋白多肽链。在一个实施方案中，用适当的GCGR免疫原免疫非人类动物例如转基因小鼠。适当GCGR免疫原的实例为如下文实施例中描述的富含受体的细胞膜部分。另一实例为SEQIDNO:2的胞外结构域。生产技术实例和使用转基因动物生产人或部分人类抗体描述于美国专利5814318、5569825和5545806,Davis等，Productionofhumanantibodiesfromtransgenicmice,Lo,ed.AntibodyEngineering:MethodsandProtocols,HumanaPress,NJ:191-200(2003),Kelle醒nn等，2002,CurrOpinBiotechnol.13:593-97,Russeletal.,2000,InfectImmun.68:1820-26,Galloetal.,2000,EurJImmun.30:534-40,Davis等，1999,CancerMetastasisRev.18:421-25,Green,1999,JImmunolMethods.231:11-23,Jakobovits,1998,AdvancedDrugDeliveryReviews31:33-42,Greenetal.,1998,JExpMed.188:483-95,JakobovitsA,1998,Exp.Opin.InvestDrugs.7:607-14,Tsuda等，1997,Genomics.42:413-21,Mendez等，1997，NatGenet.15:146-56,Jakobovits,1994,CurrBiol.4:761-63,Arbones等，1994,Immunity.1:247-60,Green等，1994,NatGenet.7:13-21,Jakobovits等，1993,Nature.362:255-58,Jakobovits等，1993,ProcNatlAcadSciUSA.90:2551-55.Chen,J.，M.Trounstine,F.W.Alt,F.Young,C.Kurahara,J.Loring,D.Huszar."ImmunoglobulingenerearrangementinB-celldeficientmicegeneratedbytargeteddeletionof79theJHlocus"InternationalImmunology5(1993):647-656,Choi等，1993,NatureGenetics4:117-23,Fishwild等，1996,NatureBiotechnology14:845-51,Harding等，1995,AnnalsoftheNewYorkAcademyofSciences,Lonberg等，1994,Nature368:856-59,Lonberg,1994,TransgenicApproachestoHumanMonoclonalAntibodiesinHandbookofExperimentalPharmacology113:49-101,Lonberg等，1995,InternalReviewofImmunology13:65-93,Neuberger,1996,NatureBiotechnology14:826,Taylor等，1992,NucleicAcidsResearch20:6287-95,Taylor等，1994,InternationalImmunology6:579-91,Tomizuka等，1997,NatureGenetics16:133-43,Tomizuka等，2000,ProceedingsoftheNationalAcademyofSciencesUSA97:722-27,Tuaillon等，1993,ProceedingsoftheNationalAcademyofSciencesUSA90:3720-24,andTuaillon等，1994,JournalofImmunology152:2912-20.;Lonberg等，Nature368:856,1994;Taylor等，Int.Immun.6:579,1994;美国专利号5877,97;Bruggemann等，1997Curr.Opin.Biotechnol.8:455-58;Jakobovits等，1995Ann.N.Y.Acad.Sci.764:525-35。此外，涉及XenoMouse(Abgenix,nowAmgen,Inc.)的方案4笛述于例如U.S.05/0118643以及WO05/694879、WO98/24838、WO00〃6310和美国专利7064244。例如将被免疫转基因小鼠的淋巴样细胞与骨髓瘤细胞融合以生产杂交瘤。用于生成杂交瘤的融合方法的骨髓瘤细胞优选为非抗体生产，其具有高融合效率以及使它们可可在仅支持期望融合细胞(杂交瘤)生长的选择培养基中生长的酶缺陷。用于该类融合的适当细胞系的实例包括Sp國20、P3-X63/Ag8、P3-X63-Ag8.653、NSl/l.Ag41、Sp210-Ag14、FO、NSO/U、MPC-11、MPC11-X45-GTG1.7和S194/5XX0Bul;用于大鼠融合的细胞系实例包括R210.RCY3、Y3-Ag1.2.3、IR983F和4B210。用于细胞融合的其它细胞系为U-266、GM1500國GRG2、LICR画LON画HMy2和UC729-6。淋巴样(例如脾)细胞和杂交瘤细胞可在膜融合促进剂(例如聚乙二醇或非离子去污剂)存在下结合数分钟，然后低密度接种至支持杂交瘤而不支持未融合骨髓瘤细胞生长的选择性培养基上。一种筛选培养基为HAT(次黄噤呤、氨基蝶呤、胸腺嘧啶)。经过足够时间之后，通常约一至两周，可观察到细胞集落。分离单集落，可使用各种本领域已知即本文描述的免疫测定法检测细胞产生抗体与人GCGR的结合活性。克隆该杂交瘤(例如，通过有限稀释克隆或通过软琼脂挑斑分离)，筛选并培养可生产对人GCGR具有特异性的抗体的阳性克隆。可从杂交瘤培养物的上清中分离来自杂交瘤培养物的单克隆抗体。另一种生成本发明人类抗体的方法包括通过EBV转化永生化人外周血细胞。参见，例如美国专利号4464456。可通过本文提供的免疫检测方法例如ELISA鉴定生可特异性结合人GCGR的单克隆抗体的永生化B细胞系(或类成淋巴细胞)，然后通过标准的克隆技术分离。可将已转化细胞系与鼠杂交瘤融合提高可生产抗GCGR抗体的类成淋巴细胞的稳定性(参见，例如，Glasky等，Hybridoma8:377-89(1989))。又另一种生成人单克隆抗体的方法为体外免疫，其包括用人GCGR初次免疫人脾B细胞，然后将已初次免疫的B细胞和杂交融合配体融合。参见。例如1991J.Immunol,147:86-95。在一些实施方案中，筛选生产抗人GCGR抗体的B细胞并根据本领域已知(WO92/02551;美国专利5627052;Babcook等,Proc.Natl.Acad.Sci.USA93:7843-48(1996))及本文所述的分子生物学技术从B细胞克隆轻链和重链可变区。可从脾、淋巴结或外周血样品中通过筛选生产与GCGR特异性结合的抗体从被免疫小鼠分离B细胞。也可从人例如外周血样品中分离B细胞。检测生产具有期望特异性的抗体的单个B细J包的方法为本领域已知，例如，通过空斑形成、荧光激活细胞分选术、体内激活然后检测特异抗体及类似方法。筛选特异抗体生产B细胞的方法包括例如在包含人GCGR的软琼脂中制备B细胞的单细胞混悬液。由B细胞生产的特异抗体的结合导致复合物的形成，其可以免疫沉淀物可见。筛选了生产期望抗体的B细胞后，可根据本领域已知或本文描述的方法通过分离或扩增DNA或mRNA克隆特异抗体基因。获得本发明抗体的附加方法为噬菌体展示。参见，例如，Winter等，1994A醒.Rev.Immunol.12:433-55;Burton等，1994Adv.Immunol.57:191-280。可在噬菌体载体中建立人或鼠免疫球蛋白可变区基因组合文库，该噬菌体载体可用于筛选与TGF-卩结合蛋白或其变异体或片段特异性结合的Ig片段(Fab、Fv、sFv或其多聚体)。参见，例如，美国专利号5223409;Huse等，1989Science246:1275-81;Sastry等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA86:5728-32(1989);Alting画Mees等，StrategiesinMolecularBiology3:1-9(19%);Kang等，1991Proc.Natl.Acad.Sci.USA88:4363-66;Hoogenboom等，1992J.Molec.Biol.227:381-388;Schlebusch等，1997Hybridoma16:47-52以及本文引用的参考文献。例如，可将包含编码Ig可变区的多个多聚核普酸序列的文库插入丝状噬菌体例如M13或其变异体的基因组中，与编码噬菌体衣壳蛋白的序列在同一框架中。融合蛋白可为衣壳蛋白与轻链可变区结构域和/或重链可变区结构域的融合。根据具体的实施方案，免疫球蛋白Fab片段也可展示于噬菌体颗粒(参见，例如美国专利号5698426)。也可在X噬菌体中制备重链和轻链免疫球蛋白cDNA表达文库，例如使用人lmmunoZapTM(H)和？JmmunoZapTM(L)载体(Stmtagene,LaJolla,California)。简而言之，从B细胞群中分离mRNA并用于在JmmunoZap(H)和XImmunoZap(L)载体中生成重链和轻链免疫球蛋白cDNA表达文库。可单独筛选这些载体或共表达以形成Fab片段或抗体(参见上文的Huse等；也参见上文的Sastry等)。接着可将阳性空斑转化成允许从大肠杆菌高水平表达单克隆抗体片段的非裂解质粒。在一个实施方案中，使用核苷酸引物扩增在杂交瘤中表达相关单克隆抗体的基因的可变区。这些引物可由本领域普通技术人员合成或从商业来源购买(参见,例如Stratagene(LaJolla,California),其销售鼠和人可变区引物包括VHa、Vnb、VHc、VHd、Cm、Vl和Cl区的引物)。这些引物可用于扩增重链或轻链可变区，然后将其分别插入载体例如ImmunoZAPTMH或ImmunoZAPTML(Stratagene)中。然后将这些载体引入大肠杆菌、酵母或哺乳动物为基础的表达系统。可使用这些方法生产大量包含Vh和VL结构域融合的单链蛋白(参见，Bird等,Science242:423-426,1988).细胞，可根据本文所述标准方法通过分离并从其扩增DNA或mRNA将特异抗体基因克隆。测序从其生产的抗体并鉴定CDRs，可如之前所述对编码CDRs的DNA进行操作以生成根据本发明的其它抗体。本发明的抗原结合蛋白优选在本文描述的基于细胞的测定法中和/或本文描述的体内测定法中调节胰高血糖素信号传导和/或交叉阻断本82申请所述抗体之一的结合和/或经本申请所述抗体之一被结合GCGR交叉阻断。因此可使用本文所述测定法鉴定该类结合剂。在一些实施方案中，通过首先鉴定在本文描述的基于细胞的和/或体内测定法中与过表达GCGRs的细胞结合和/或中和和/或交叉阻断本申请描述的抗体和/或经本申请描述的抗体之一净皮结合GCGR交叉阻断的抗体以生成抗体。本领域技术人员应理解的是一些蛋白质，例如抗体，可能进行可多种转录后修饰。这些修饰的类型和程度取决于用于表达该蛋白的宿主细胞系以及培养条件。该类修饰包括糖基化作用、甲硫氨酸氧化、二酮哌。秦形成、天冬氨酸异构化和天冬酰胺脱酰胺作用的变化。由于羧肽酶的作用频繁修饰导致羧端碱性残基(例如赖氨酸或精氨酸)的丟失(如Harris,R丄JournalofChromatography705:129-134,1995中所述)。生产鼠单克隆抗体的可选择方法为将杂交瘤细胞注入同系基因小鼠的腹膜腔，例如经处理(例如姥鲛烷初次免疫)促进形成包含单克隆抗体的腹水的小鼠。可通过多种已确立的技术分离和纯化单克隆抗体。该类分离技术包括使用蛋白A-琼脂糖的亲和色谱法、分子排阻色谱法和离子交换色谱法(参见，例如，Coligan第2.7.1-2.7.12页和第2.9.1-2.9.3页；Baines等，"PurificationofImmunoglobulinG(IgG),"MethodsinMolecularBiology,第10巻,第79-104页(TheHumanaPress,Inc.1992))。可使用基于抗体的特殊性质(例如，重链或轻链同种型、结合特异性等)筛选的适当配基通过亲和色谱法纯化单克隆抗体。固定化于固体载体的适当配基的实例包括蛋白A、蛋白G、抗恒定区(轻链或重链)抗体、抗独特型抗体以及TGF-卩结合蛋白或其片段或变异体。可使用抗体结合位点中央的互补决定区(CDRs)的分子进化分离亲和性增加的抗体，例如对c-erbB-2亲和性增加的抗体，如Schier等,1996,J.Mol.Biol.263:551所述。因此，该类技术可用于制备人胰高血糖素受体的抗体。例如可在检测是否存在胰高血糖素受体的体外或体内测定法中使用针对人胰高血糖素受体的抗原结合蛋白。尽管人类、部分人类或人源化抗体可适用于许多应用，尤其是涉及将抗体给予人类受试者，但是其它类型的抗原结合蛋白也适用于某些应用。本发明的非人类抗体可来源于例如任何生产抗体的动物，例如小鼠、大鼠、兔、山羊、驴或非人灵长类(例如猴子，如食蟹猴或猕猴)或猿(例如猩猩))。本发明的非人类抗体可用于例如体外或基于细胞培养的应用中，或其它任何应用，其中不发生对本发明抗体的免疫应答、不显著、可以预防、不关心或期望。下文的实施例2描述了鼠抗体的生成。在一个实施方案中，将本发明的非人类抗体给予非人受试者。在另一个实施方案中，该非人类抗体不会在非人受试者中引起免疫应答。在另一个实施方案中，非人类抗体来自与非人受试者相同的种属，例如将本发明的小鼠抗体给予小鼠。可通过用期望免疫原免疫该种属的动物生产具体种属的抗体或使用人工体系生成该种属的抗体(例如，细菌或基于噬菌体展示体系用于生成具体物种的抗体)或通过例如用另一物种的恒定区取代抗体的恒定区将一个物种的抗体转化成另一物种的抗体，或通过取代抗体的一个或多个氨基酸残基这样其与来自其它物种的抗体序列更相似。在一个实施方案中，该抗体为嵌合抗体，其包含来源于两个或多个不同物种的抗体的氨基酸序列。也可通过^f壬何传统技术制备抗体。例如，可从天然表达这些抗体的细胞将其纯化(例如，可从生产抗体的杂交瘤将其纯化)或使用本领域任何已知的技术在重组表达系统中生产。参见，例如，MonoclonalAntibodies,Hybridomas:ANewDimensioninBiologicalAnalyses,Kennet等(编辑)，PlenumPress,NewYork(1980);和Antibodies:ALaboratoryManual,HarlowandLand(编辑)，ColdSpringHarborLaboratoryPress,ColdSpringHarbor,NY,(1988)。这在下文的核酸部分讨论。可通过任何已知技术制备抗原结合蛋白并筛选期望性质。一些技术涉及分离编码相关抗原结合蛋白(例如，抗胰高血糖素受体抗体)的多肽链(或其部分)的核酸，并通过重组DNA技术操作核酸。该核酸可与另一相关核酸融合或经修饰(例如通过诱变或其它传统技术)以添加、缺失或替换一个或多个氨基酸残基。当需要提高根据本发明包含一个或多个上述CDRs的抗体的亲和性时，可通过多种亲和成熟方案包括维持CDRs(Yang等，J.Mol.Biol.,254,392-403,1995)、链替换(Marks等，Bio/Technology,10,779-783,1992)、使用大肠杆菌的突变抹(Low等，J.Mol.Biol.,250,350-368,1996)DNA重排(Patten等，Curr.Opin.Biotechnol.,8,724-733,1997)、噬菌体展示(Thompson等，J.Mol.Biol.,256,7-88,1996)以及其它PCR技术(Crameri等，Nature,391,288-291,1998)。所有这些亲和力成熟方法讨论于Vaughan等，NatureBiotechnology,16,535-539,1998中。抗体片段在另一方面本发明提供本发明抗胰高血糖素受体片段。该片段可完全由抗体衍生序列组成或可包含附加序列。抗原结合片段的实例包括Fab、F(ab，)2、单链抗体、双链抗体、三链抗体、四链抗体和结构域抗体。其它实例提供于Lunde等，2002,Biochem.Soc.Trans.30:500-06。可经氨基酸桥(短肽接头)连接重链和轻链可变结构域(Fv区)形成单链抗体，从而得到单多肽链。已通过将编码肽接头的DNA融合在编码两个可变结构域多肽(Vt和Vh)的DNAs之间制备该单链FVs(scFvs)。所得多肽可折叠回自身形成抗原结合单体，或它们可形成多聚体(例如，二聚体、三聚体或四聚体)，取决于两个可变结构域之间的柔性接头的长度(Kortt等，1997,Prot.Eng.10:423;Kortt等，2001,Biomol.Eng.18:95-108)。通过组合包含多肽的不同VL和VH,可形成与不同表型结合的多体scFvs(Kriangkum等，2001，Biomol.Eng.18:31-40)。已研发的用于生产单链抗体的技术包括美国专利号4946778;Bird,1988,Science242:423;Huston等，1988,Proc.Natl.Acad.Sci.USA85:5879;Ward等，1989,Nature334:544,deGraaf等，2002,MethodsMolBiol.178:379-87中描述的那些。来源于本文提供的抗体的单链抗体包括但不限于包含可变结构域组合L1H1、L2H2、L3H3、L4H4、L5H5、L6H6、L7H7、L8H8、L9H9、U0H10、U皿l、L12H12、U3H13、L14H14、L15H15、L16H16、L17H17、L18H18、L19H19、L20H20、L21H21、L22H22和L23H23的scFvs,均涵盖于本发明。也可通过抗体的蛋白水解作用例如根据传统方法用胃蛋白酶或木瓜蛋白酶消化完整的抗体获得来源于抗体的抗原结合片段。举例而言，可用胃蛋白酶酶裂解抗体提供称作F(ab，)2的5S片段生产抗体片段。可85使用巯基还原剂进一步裂解这一片段产生3.5SFab，单价片段。可选择性的，可使用巯基保护基团进行该裂解反应得到二硫键的裂解。作为可选择的，使用木瓜蛋白酶的酶裂解直接产生两个单价Fab片段和一个Fc片段。这些方法描述于例如Goldenberg,美国专利号4,331,647,Nisonoff等，Arch.Biochem.Biophys.89:230,1960;Porter，Biochem.J.73:119,1959;Edelman等,MethodsinEnzymology1:422(AcademicPress1967);以及Andrews,S.M.和Titus，J.A.CurrentProtocolsinImmunology(ColiganJ.E.等，编辑)，JohnWiley&Sons,NewYork(2003),第2.8.1-2.8.10页和第2.10A.1-2.10A.5页。其它裂解抗体的方法，例如制备重链以形成单价重-轻链片段(Fd),进一步裂解片段或也可使用其它酶、化学或基因技术，只要片段与可被该完整抗体识别的抗原结合。另一种形式的抗体片段为包含一个或多个抗体互补决定区(CDRs)的肽。可通过构建编码相关CDR的多肽获得CDRs。例如可通过使用聚合酶链式反应用抗体生成细胞的mRNA作为才莫板合成可变区制备该类多肽(参见,例如，Larrick等，Methods:ACompaniontoMethodsinEnzymology2:106,1991;Courtenay画Luck,"GeneticManipulationofMonoclonalAntibodies,"MonoclonalAntibodies:Production,EngineeringandClinicalApplication,Ritter等.(编辑)，166页(CambridgeUniversityPress1995);和Ward等，"GeneticManipulationandExpressionofAntibodies,"MonoclonalAntibodies:PrinciplesandApplications,Birch等，(编辑)，137页(Wiley-Liss,Inc.1995))。该抗体片段可进一步包含本文所述抗体的至少一个可变结构域。因此，例如，V区结构域可为单体并且是Vh或Vl結枸域，其可以如下文所迷的至少等于1x10々M或更低的亲和度独立与胰高血糖素受体结合。该可变区结构域可为任何天然可变结构域或其基因工程形式。基因工程形式指使用重组DNA工程技术生产的可变区结构域。该基因工程形式包括例如通过向特异抗体的氨基酸序列插入、缺失或改变从特异抗体可变区产生的。具体实例包括包含只含一个CDR以及任选来自一个抗体的一个或多个框架氨基酸和来自另一抗体的可变区结构域剩余部分的基因工程可变区结构域。可变区结构域可与至少一个其它抗体结构域或其片段在C端氨基酸共价连接。因此，举例而言，存在于可变区结构域的VH结构域可与免疫球蛋白CH1结构域或其片段相连。相似地，结构域可与CK结构域或其片段相连。以这种方式，例如，该抗体可为Fab片段，其中抗原结合结构域包含它们的C端分别与CH1和Ck结构域共价连接的联合VH和Vl结构域。可用其它氨基酸延长CH1结构域，例如以提供铰链区或如Fab，片段中的部分铰链结构域或提供其它结构域，例如抗体CH2和CH3结构域。抗原结合蛋白的衍生物和变异体例如可通过随机诱变或通过定点诱变(例如寡聚核苷酸诱导的定点诱变)改变编码对应于氨基酸序列A1-A23的核苷酸序列L1-L23和Hl-H23以产生与未突变多聚核苷酸相比包含一个或多个具体核苷酸替换、缺失或插入的经改变的多聚核苷酸。用于产生该类改变的技术实例描述于Walder等，1986，Gene42:133;Bauer等,1985,Gene37:73;Craik,BioTechniques，January1985,12-19;Smith等，1981,GeneticEngineering:PrinciplesandMethods,PlenumPress;以及美国专利号4518584和4737462。这些和其它方法可用于产生例如与未书f生化抗体相比具有期望性质例如亲和性、亲和力或对胰高血糖素受体的特异性增强、体内或体外活性或稳定性增强或体内副作用降低的抗胰高血糖素受体抗体的衍生物。本发明领域的其它抗胰高血糖素受体抗体衍生物包括抗胰高血糖素受体抗体或其片段与它蛋白或多肽的共价或聚集结合物，例如通过表达包含与抗胰高血糖素受体抗体多肽的N端或C端融合的异源多肽的重组融合蛋白。例如，该结合肽可为异源信号(或引导)多肽，例如酵母a因子前导肽或例如表位标签的肽。包含融合蛋白的抗原结合蛋白可包含被添加以辅助抗原结合蛋白的纯化或鉴定的肽(例如多聚组氨酸)。抗原结合蛋白也可与FLAG肽连接，如H叩p等，Bio/Technology6:1204,1988和美国专利5011912所述。FLAG肽具有高抗原性并提供被特异单克隆抗体(mAb)可逆结合的表位，允许已表达重组蛋白的快速检测和方便纯化。可商业购买(Sigma,St.Louis,MO)用于制备其中FLAG肽与给定多肽融合的融合蛋白的试剂。在另一个实施方案中，包含一个或多个抗原结合蛋白的寡聚体可用作胰高血糖素受体拮抗剂或用更高级的寡聚体。寡聚体可以是共价连接的或非共价连接的二聚体、三聚体或更高的寡聚体形式。可使用包含两个或更多个抗原结合蛋白的寡具体，其中一个实例为同型二聚体。其它寡聚体包括异二聚体、同型三聚体、异三聚体、同型四聚体、杂四聚体等。一个实施方案是针对包含多个抗原结合蛋白的寡聚体，它们通过与抗原结合蛋白融合的肽部分之间的共价或非共价相互作用连接。该类肽可为肽接头(spacers)或具有促进寡聚化作用性质的肽。亮氨酸拉链和某些来源于抗体的多肽为可促进抗原结合蛋白寡聚化的肽，如下文详细描述。在具体的实施方案中，寡聚体包含两个至四个抗原结合蛋白。寡聚体的抗原结合蛋白可为任何形式，如上文所述任何形式，例如变异体或片段。优选地，该寡聚体包含具有胰高血糖素受体结合活性的抗原结合蛋白。在一个实施方案中，使用来源于免疫球蛋白的多肽制备寡聚体。制备包含一些与抗体衍生多肽(包括Fc结构域)的不同部位融合的异源多肽已描述于例如Ashkenazi等，1991,PNASUSA88:10535;Byrn等，1990,Nature344:677;和Hollenbaugh等，1992"ConstructionofImmunoglobulinFusionProteins",CurrentProtocolsinImmunology,Suppl.4,第10.19.1-10.19.11页。本发明的一个实施方案是针对包含两个由融合抗胰高血糖素受体抗体的胰高血糖素结合片段与抗体的Fc区产生的融合蛋白的二聚体。可通过以下方式制备二聚体例如在适当的表达载体中插入编码融合蛋白的基因融合，在用重组表达载体转化的宿主细胞中表达该融合基因并允许已表达融合蛋白像抗体分子一样组装，其中Fc部分之间的链间二硫键形成二聚体。如本文所使用术语"Fc多肽"包括来源于抗体Fc区的天然和突变蛋白形式的多肽。也包括包含促进二聚体化的铰链区的该类多肽的截短形式。包含Fc部分(以及由其形成的寡聚体)的融合蛋白提供了在蛋白A或蛋白G柱子上进行亲和层析法方便纯化的优势。PCT申请WO93/10151(以参考形式并于本文)中一种适当的Fc多肽为从N端铰链区延伸至人IgGl抗体的Fc区的天然C端的单链多肽。另一种可用的Fc多肽为美国专利5457035和Baum等，1994,EMBO88J.13:3992-4001中描述的Fc突变蛋白。该突变蛋白的氨基酸序列与WO93/10151中所示天然Fc序列的氨基酸序列相同，除了氨基酸19从亮氨酸变为丙氨酸，氨基酸20从亮氨酸变为谷氨酰胺以及氨基酸22从甘氨酸变为丙氨酸。该突变蛋白表现出对Fc受体的亲和力降低。在其它实施方案中，抗胰高血糖素受体抗体的重链和/或轻链可被取代为抗体重链和/或轻链的可变部分。或者，该寡聚体为包含多个抗原结合蛋白的融合蛋白，包含或不包含接头肽(spacerpeptides)。这些适当的接头肽描述于美国专利4751180和4935233。制备寡聚抗原结合蛋白的另一种方法涉及使用亮氨酸拉链。亮氨酸拉链结构域为促进它们所存在的蛋白寡聚化作用的肽。最初发现亮氨酸拉链存在于数种DNA结合蛋白中(Landschulz等，1988，Science240:1759),此后发现存在于各种不同蛋白中。在已知的亮氨酸拉链中为可二聚体化或三聚体化的天然肽或其衍生物。适用于生产可溶寡聚蛋白的亮氨酸拉链结构域的实例描述于PCT申请WO94/10308，来源于肺表面活性蛋白D(SPD)的亮氨酸拉链描述于Hoppe等，1994,FEBSLetters344:191,以参考形式并于本文。允许与其融合的异源蛋白稳定三聚体化的经修饰的亮氨酸拉链的使用描述于Fanslow等，1994,Semin.Immunol.6:267-78。在一种方法中，在适当的宿主细胞中表达包含与亮氨酸拉链肽融合的抗胰高血糖素受体抗体片段或衍生物的重组融合蛋白，从培养物上清中收集可溶寡聚抗胰高血糖素受体抗体片段或其衍生物。在另一个实施方案中，该抗体衍生物可包含至少本文公开的CDRs之一。举例而言，可将一个或多个CDR整合入已知的抗体骨架区(IgGl,IgG2等)或与适当的载体结合以增强其半衰期。适当载体包括但不限于Fc、白蛋白、转铁蛋及类似物质。这些和其它适当的载体为本领域已知。该结合CDR肽可为单体、二聚体、四聚体或其它形式。在一个实施方案中，一个或多个水溶性多聚体在结合剂的一个或多个特异位点结合，例如在氨基端。在一个实例中，抗体衍生物包含一个或多个水溶性多聚体附着物包括但不限于聚乙二醇、聚氧乙烯二醇或聚丙二醇。参见，例如，美国专利号4640835、4496689、4301144、4670417、4791192和4179337。在一些实施方案中，衍生物包含一个或多个一曱氧基-聚乙二醇、葡聚糖、纤维素或其它基于碳水化合物的聚合物，聚(N-乙烯基吡咯酮)-聚乙二醇、聚氧乙烯多元醇(例如甘油)和聚乙烯醇，以及该类聚合物的混合物。在一些实施方案中，一个或多个水溶性聚合物与一个或多个侧链随机结合。在一些实施方案中。PEG可提高结合剂例如抗体的治疗作用。一些该类方法描述于例如美国专利号6133426,其以参考形式以任何目的并于本文。应当理解的是本发明抗体可具有至少一个氨基酸替换，只要该抗体保留了结合特异性。因此，抗体结构的修饰包含于本发明范畴。这些可包括不破坏抗体胰高血糖素受体结合能力的氨基酸替换，其可为保守或非保守的。保守氨基酸替换可包括非天然氨基酸残基，其通常经化学肽合成整合而不是生物系统合成。这些包括拟肽和其它反向或倒转形式的氨基酸部分。保守氨基酸替换也可涉及用非天然残基替换天然氨基酸残基这样对该位点氨基酸残基的极性或电荷作用很小或没有作用。非保守替换可涉及一类氨基酸或氨基酸类似物的一个成员与具有不同物理性质(例如，体积、极性、疏水性、电荷)的另一类氨基酸的成员交换。该被替换的残基可引入与非人类抗体同源的人类抗体区，或引入该分子的非同源区。而且，本领域技术人员可生成在各期望氨基酸残基上包含氨基酸替换的待测变异体。可使用本领域技术人员已知的活性测定法筛选该类变异体。该类变异体可用于收集关于适当变异体的信息。举例而言，如果发现某一氨基酸残基可引起活性破坏、非期望的降低或不当的活性，可避免具有该类变化的变异体。换言之，基于从这些常规试验收集的信息，本领域技术人员可轻松确定应避免进一步替换(单独或与其它突变组合)的氨基酸。技术人员可使用已知技术确定如本文所列的多肽的适当变异体。在一些实施方案中，本领域技术人员可通过靶向对于活性不重要的区域鉴定经改变后不会破坏活性的分子适当区域。在一些实施方案中，可鉴定在相似多肽中保守的残基或分子部分。在一些实施方案中，甚至可保守替换对于生物活性或结构重要的区域而不破坏生物活性或不会不利作用于多肽结构。此外，本领域技术人员可考察结构-功能研究鉴定对活性或结构重要的相似多肽中的残基。鉴于这一对比，可预测对应于在相似蛋白中对活性或结构重要的氨基酸残基的蛋白质中氨基酸残基的重要性。本领域技术人员可为这些经预测重要的氨基酸残基选择化学相似氨基酸替换。本领域技术人员也可分析与相似多肽的结构相关的三维结构和氨基酸序列。鉴于该类信息，本领域技术人员可预测就三维结构而言抗体的氨基酸残基比对。在一些实施方案中，本领域技术人员可选择不对经预测在蛋白质表面的氨基酸残基进行显著改变，因为该类残基可能参与与其它分子的重要相互作用。许多科学出版物致力于二级结构的预测。参见，MoultJ.,Curr.Op.Biotech.,7(4):422画427(1996),Chou等，Biochemistry,13(2):222-245(1974);Chou等，Biochemistry,113(2):211-222(1974);Chou等，Adv.Enzymol.Relat.AreasMol.Biol.,47:45-148(1978);Chou等，Ann.Rev.Biochem.,47:251-276和Chou等，Biophys.J.,26:367-384(1979)。此外，目前可使用计算机程序辅助预测二级结构。举例而言，序列同一性大于30%或相似性大于40%的两个多肽或蛋白质通常具有相似的结构拓朴学。近期蛋白结构数据库(PDB)的增长增强了二级结构的可预测性，包括多肽或蛋白结构中潜在的折叠数量。参见，Holm等，Nucl.Acid.Res.,27(l):244-247(1999)。已表明(Brenner等，Curr.Op.Struct.Biol"7(3):369-376(1997))在给定多肽或蛋白质中存在有限数量的折叠并且一旦确定了临界数量的结构，结构预测将变得显著更加精确。预测二级结构的其它方法包括"穿接(threading)"(Jones,D.,Curr.Opin.Struct.Biol.,7(3):377國87(1997);Sippl等，Structure,4(1):15-19(1996》，"图谱分析(profileanalysis)"(Bowie等，Science,253:164-170(1991);Gribskov等,Meth.Enzym.,183:146-159(1990);Gribskov等,Proc.NatAcad.Sci.,84(13):4355画4358(1987))和"进化联系(evolutionarylinkage)"(参见Holm,supra(1999),andBrenner,supra(1997))。在一些实施方案中，抗体变异体包括糖基化变异体，其中与母体多肽的氨基酸序列相比改变了糖基化位点的数量和/或类型。在一些实施方案中，变异体与天然蛋白质相比具有更多或更少数量的N连接糖基化位点。或者，去除该序列的替换可移除现有的N连接糖链。也提供了N连接糖链的重排，其中去除了一个或多个N连接糖链位点(通常为天然存在的那些)并创造了一个或多个新的N连接位点。其它优选抗体变异体包括半胱氨酸变异体，与母体氨基酸序列相比其中91缺失或由另一氨基酸(例如丝氨酸)替换一个或多个半胱氨酸残基。当抗体必须折叠成生物活性构象时(例如在分离可溶包涵体之后)可用半胱氨酸变异体。半胱氨酸变异体通常比天然蛋白质具有较少的半胱氨酸残基，并通常具有偶数个半胱氨酸以最小化未配对半胱氨酸引起的相互作用。本领域技术人员可在需要该类替换时确定期望的氨基酸替换(保守或非保守)。在一些实施方案中，氨基酸替换可用于鉴定人胰高血糖素受体抗体的重要残基或者增加或降低本文所述人胰高血糖素受体抗体的亲和力。根据一些实施方案，优选的氨基酸替换为以下(l)降低蛋白质水解敏感性，(2)降低氧化敏感性，(3)改变形成蛋白质复合物的结合亲和力，(4)改变结合亲和力和/或(4)赋予或修饰该类多肽上的其它物理化学或功能性质。根据一些实施方案，可在天然存在序列中(在一些实施方案中，在形成分子间接触的结构域之外的多肽部分)进行单个或多个氨基酸替换(在一些实施方案中为保守氨基酸替换)。在一些实施方案中，保守氨基酸替换通常不会本质上改变母体序列的结构特性(例如，替换氨基酸不应破解存在于母体序列中的螺旋或干扰特征化母体序列的其它类型二级结构)。本领域认可的多肽二级和三级结构的实例描述于Proteins,StructuresandMolecularPrinciples(Creighton,编辑，W.H.FreemanandCompany,NewYork(1984));IntroductiontoProteinStructure(C.BrandenandJ.Tooze,eds.,GarlandPublishing,NewYork,N.Y.(1991》；以及Thornton等，Nature354:105(1991),其以参考形式并于本文。在一些实施方案中，本发明抗体可与多聚体、脂类或其它部分(moieties)化学键合。抗原结合试剂可包含至少一个本文描述的CDRs,其掺入生物相容性骨架结构中。在一个实例中，该生物相容性骨架结构包含足以形成构象稳定结构支持或骨架或支架的多肽或其部分，其可在局限的表面区域展示可与抗原结合的一个或多个氨基酸序列(例如，CDRs、可变区等)。该类结构可为天然存在多肽或多肽"折叠"(结构基序)，或相对与天然多肽或折叠可具有一个或多个修饰，例如氨基酸添加、缺失或替换。这些支架可来源于任何物种(或多于一个物种)的多肽，例如，人类、其它哺乳动物、其它脊推动物、无脊推动物、细菌或病毒。生物可溶性骨架结构通常是基于蛋白质支架或骨架而不是免疫球蛋白结构域。举例而言，可使用基于纤维结合素、锚蛋白、脂质运载蛋白(lipocalin)、新抑癌蛋白、细胞色素b、CP1锌指蛋白、PST1、巻曲螺旋、LACI-D1、Z结构域和淀粉酶抑肽结构域(参见，例如，Nygren和Uhlen,1997,CurrentOpinioninStructuralBiology,7,463-469》此外，本领域技术人员可认识到适当的结合剂包括这些抗体的部分，例如一个或多个重链CDR1、CDR2、CDR3,轻链CDR1、CDR2和CDR3,如本文所具体7^开。至少一个重链CDR1、CDR2、CDR3、CDR1,CDR2和CDR3区具有至少一个氨基酸替换，只要该抗体保留了非替换CDR的结合特异性。该抗体的非CDR部分可为非蛋白分子，其中体的胰高血糖素信号传导。该抗体^非CDR部分可为非i白质分子，其中该抗体在竟争结合测定法中显示出与至少抗体A1-A23之一所显示相似的与人GCGR肽的结合类型，和/或中和胰高血糖素的活性。抗体的非CDR部分可由氨基酸组成，其中该抗体为重组结合蛋白或合成肽，并且该重组结合蛋白交叉阻断本文公开的抗体与人GCGR的结合和/或中和体内或体外胰高血糖素活性。抗体的非CDR部分可由氨基酸组成，其中该抗体为重组抗体，并且该重组抗体在竟争结合测定法中显示出与至少抗体A1-A23之一所显示相似的与人GCGR肽的结合类型，和/或中和胰高血糖素信号传导。核酸一方面，本发明提供分离的核酸分子。该核酸分子包含例如编码全部或部分抗原结合蛋白的多聚核苷酸，例如本发明抗体的一条链或两条链，或其片段、衍生物、突变蛋白或变异体；足以用作杂交探针的多聚核苷酸；PCR引物或用于鉴定、分析、突变或扩增编码多肽的多聚核苷酸的测序引物；用于抑制多聚核苷酸表达的反义核酸以及其互补序列。该核酸可为任何长度。例如它们的长度可为5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、75、100、125、150、175、200、250、300、350、400、450、500、750、1000、1500、3000、5000或更多个核普酸，和/或包含一个或多个附加序列，例如调控序列，和/或是较大核酸例如载体的一部分。该核酸可为单链或双链并包含RNA和/或DNA核苷酸以及其人工变异体(例如，肽核酸)。可从经GCGR抗原免疫的小鼠B细胞中分离编码抗体多肽(例如，重链或轻链、仅可变结构域或全长)的核酸。可通过常规方法例如聚合酶链式反应(PCR)分离该核酸。编码重链和轻链可变区的核酸序列如上文所示。熟练的技术人员可理解由于遗传密码的简并性，本文公开的各多肽序列可由更多数量的其他核酸序列编码。本发明提供编码本发明抗原结合蛋白的各简并核苷酸序列。本发明进一步提供在具体杂交条件下与其他核酸(例如，包含任何A1-A14的核普酸序列的核酸)杂交的核酸。杂交核酸的方法为本领^或熟^口。参见,例长口,CurrentProtocolsinMolecularBiology,JohnWiley&Sons,N.Y.(1989),6.3.1-6.3.6。如本文定义，例如，中等严格条件使用包含5X氯化钠/柠檬酸钠(SSC)的预洗溶液、0.5%SDS、1.0mMEDTA(pH8.0)、约50°/。曱酰胺的杂交緩冲液、6XSSC和55°C的杂交温度(或其他相似的杂交溶液，例如包含约50%甲酰胺的，以42°C杂交)，并且洗脱条件为60°C,使用0.5XSSC、0.1%SDS。严格杂交条件在6XSSC中于45°C杂交，然后于68°C在0.1XSSC、0.2%SDS中洗涤一次或多次。此外，本领域技术人员可操作杂交和/或洗涤条件以增加或降低杂交严才各度这样包含相互之间至少65、70、75、80、85、90、95、98或99%同源的核苷酸序列的核酸通常仍可以相互杂交。影响杂交条件选择的基本参数和设计适当条件的指导列于例如Sambrook:Fritsch和Maniatis(1989，MolecularCloning:ALaboratoryManual,ColdSpringHarborLaboratoryPress,ColdSpringHarbor,N.Y,,第9和11章；CurrentProtocolsinMolecularBiology,1995，Ausubel等编辑，JohnWiley&Sons,Inc.,第2.10和6.3-6.4节)并可由具有本领域普通技术的人员基于例如DNA的长度和/或碱基组成轻松确定。可通过突变在核酸中引入变化，藉此导致其编码的多肽(例如，抗原结合蛋白)氨基酸序列的变化。可使用本领域已知的任何技术引入突变。在一个事实方案中，使用例如定点诱变方案改变一个或多个具体氨基酸残基。在另一个实施方案中，使用例如随机诱变方案改变一个或多个随机选择的残基。无论其如何生成，可表达突变多肽并筛选期望性质。94可将突变引入核酸而不显著改变其编码多肽的生物学活性。例如，可进行引起非必需氨基酸残基处氨基酸替换的核香酸替换。在一个实施方案中，突变本文为L-1-L-23和H-l至H-23提供的核苷酸序列或其片段、变异体或衍生物这样其编码包含本文所示L-l至L-23和H-l至H-23的氨基酸残基的一个或多个缺失或替换，成为两个或多个序列相异的残基。在另一个实施方案中，诱变作用在本文所示L-l至L-23和H-l至H-23的一个或多个氨基酸残基附近插入一个氨基酸成为两个或多个序列相异的残基。或者，可将一个或多个突变引入核酸以选择性改变其编码多肽的生物学活性(例如，与GCGR结合)。例如，该突变可在数量上或性质上改变生物学活性。量变的实例包括增加、降低或消除该活性。质变的实例包括改变抗原结合蛋白的抗原特异性。在另一方面，本发明提供适于用做引物或检测本发明核酸序列的杂交探针的核酸分子。本发明的核酸分子可仅包含编码本发明全长多肽的核酸序列的一部分，例如，可用作探针或引物或编码本发明多肽活性部分的片段(例如，GCGE结合部分)的片段。编码本发明多肽的转录物。该探针可包含标记基团，例如放射性同位素、荧光化合物、酶或酶辅因子。该类探针可用于鉴定表达该多肽的细胞。在另一方面本发明提供包含编码本发明多肽或其部分的核算的载体。载体的实例包括但是不限于质粒、病毒载体、非游离基因哺乳动物载体和表达载体，例如重组表达载体。本发明的重组表达载体可包含适于该核酸在宿主细胞中表达的形式的本发明核酸。该重组表达载体包括一个或多个调控序列，基于用于表达的宿主细胞进行筛选，其与该预表达的核酸序列可操作性相连。调控序列包括引导核苦酸序列在多个种类宿主细胞中组成型表达的(例如，SV40早期基因增强剂、劳斯氏肉瘤病毒启动子和细胞巨化病毒启动子)，引导仅在某些宿主细胞中核苦酸序列的表达的(例如，组织特异调控序列，参见Voss等，1986,TrendsBiochem.Sci.11:287,Maniatis等，1987,Science236:1237，其完整内容以参考形式并于本文)以及引导核苷酸序列响应具体处理或条件的诱导型表达的(例如，哺乳动物细胞中的金属硫堇启动子和原核和真核系统二者中的四环霉素反应(tet-sesponsive)启动子和/或链霉素反应启动子(同前))。本领域技术人员应理解表达载体的设计取决于例如用于转化的宿主细胞的选择、所需蛋白表达水平等因素。本发明的表达载体可引入宿主细胞，藉此生产由本文所述核酸编码的蛋白或肽，包括融合蛋白或肽。另一方面，本发明提供可引入本发明表达载体的宿主细胞。宿主细胞可为任何原核或真核细胞。原核宿主细胞包括革兰氏阴性或革兰氏阳性生物体，例如大肠杆菌或杆菌。更高级的真核细胞包括昆虫细胞、酵母细胞以及哺乳动物源的确立细胞系。适当哺乳动物宿主细胞系的实例包括中国仓鼠卯巢(CHO)细胞或它们的衍生物例如VeggieCHO和在无血清培养基中生长的相关细胞系(参见Rasmussen等，1998Cytotechnology28:31)或CHO林DXB-ll，其缺失DHFR(参见Urlaub等，1980,Proc.Natl.Acad.Sci.USA77:4216-20)。其它CHO细胞系包括CHO國Kl(ATCC#CCL-61)、EM9(ATCC#CRL國1861),和UV20(ATCC#CRL-1862)。其它宿主细胞包括猴肾细胞的COS-7系(ATCCCRL1651)(参见Gluzman等，1981,Cell23:175)、L细胞、C127细胞、3T3细胞(ATCCCCL163),AM-1/D细胞(描述于美国专利序列号6210924)、HeLa细胞、BHK(ATCCCRLIO)细胞系、来源于非洲绿猴肾细胞系CV1的CV1/EBNA细胞系(ATCCCCL70)(参见McMahan等,1991,EMBOJ.10:2821)、人胚肾细胞例如293,293EBNA或MSR293、人上皮A431细胞、人Colo205细胞、其它经转化灵长动物细胞系、正常二倍体细胞、来源于初生组织体外培养物的细胞抹、初移植体、HL-60、U937、HaK或Jurkat细胞。用于细菌、真菌、酵母和哺乳细胞宿主的适当克隆和表达载体描述于Pouwels等(CloningVectors:ALaboratoryManual,Elsevier,NewYork,1985)。可通过传统转化或转染技术将载体DNA引入原核或真核细胞中。对于稳定的哺乳动物转染而言，取决于使用的表达载体和转染技术，已知只有一小部分细胞可将外源DNA整合入它们的基因组中。为了鉴定和筛选这些整合子，通常将编码筛选标记(例如抗生素抗性)的基因与所关注基因一起引入宿主细胞。优选的筛选标记包括可赋予药物(如G418、潮霉素和曱氨喋呤)抗性的那些。在其它方法中可通过药物筛选鉴别包含被引入核酸的稳定转染细胞(例如，整合了筛选基因的细胞可存活，而其它细胞则死亡)。可在提高多肽表达的条件下培养已转化细胞，可通过常规蛋白纯化方法回收多肽。一种该纯化方法描述于下文实施例。预用于本文的多肽包括基本同源的重组哺乳动物抗胰高血糖素受体抗体多肽，其基本不含污染性内源材料。抗原结合蛋白的活性一方面，本发明提供抗原结合蛋白，尤其是能与人胰高血糖素受体特异性结合的人类、人源化或嵌合抗体。该类抗体包括可减少或中和胰高血糖素信号传导(由例如实施例4描述的基于细胞的功能测定法检测)的拮抗或中和抗体。在一个实施方案中，抗原结合蛋白，例如本发明的人类抗体的IC50值为90nM或更低；在另一个实施方案中，IC50值为80nM或更低；在另一个实施方案中，70nM或更低；在另一个实施方案中，60nM或更j氐；在另一个实施方案中，50nM或更^f氐；在另一个实施方案中，40nM或更j氐；在另一个实施方案中，30nM或更低；在另一个实施方案中，25nM或更低。在另一个实施方案中，抗原结合蛋白例如本发明的人类抗体可与人胰高血糖素受体特异性结合，而且其IC50值与参比抗体基本相似。在另一个实施方案中，抗原结合蛋白具有由下述实施例所描述的测定法(或相似测定法)检测的与参比抗体基本相似的Kb(或Kd)。在本文中，术语"基本相似，，意为与参比抗体的IC50或Kb(或Kd)可比或约100%、99%、98%、97%、95%、90%、85%、80%、75°/。、70%、65%或50Q/q。参比抗体包括，例如，具有重链和轻链组合L1H1、L2H2、L3H3、L4H4、L5H5、L6H6、L7H7、L8H8、L9H9、U皿l、U2H12、L13H13、L15H15、L21H21及L22H22的抗体。在一个实施方案中，参比抗体包括A-1、A-2、A-3、A-4、A-5、A-6、A画7、A醫8、A國9、A國ll、A國12、A-13、A-15、A-21及A-22。在另一个实施方案中，抗原结合蛋白例如本发明的人类抗体可与人胰高血糖素受体特异性结合，并能降低动物模型的血糖。在一个实施方案中，与未处理动物相比血糖降低2%;在另一个实施方案中，与未处理动物相比血糖降低5%;在另一个实施方案中，与未处理动物相比血糖降低10%;在另一个实施方案中，与未处理动物相比血糖降低15°/。，在另一个实施方案中为20%,在另一个实施方案中为25%或更多。血糖降低量由剂量控制。对于动物或人类患者而言，治疗有效剂量是为将血糖降低至正常范围的剂量。示例动物模型为ob/ob小97鼠，如下文实施例6所描述。在另一个实施方案中，本发明的人类抗体可与人胰高血糖素受体特异性结合并提高动物模型的葡萄糖清除率。示例动物模型为食蟹猴，如下文实施例7所描述。提高葡萄糖清除率指在动物或人类患者口服葡萄糖后血糖降低所需的时间量，为葡萄糖耐受的量度。它可由标准试验例如口服葡萄糖耐量试验(OGTT)检测，如下文实施例所描述。本发明的抗原结合蛋白可提高动物模型的葡萄糖清除率。此外，抗原结合蛋白可改善其它与2型糖尿病和高血糖症相关的体内指标，包括但不限于空腹糖耐量、血脂异常和代谢综合症。与人胰高血糖素受体结合在一个实施方案中，本发明提供与参比抗体交叉竟争结合的抗原结合蛋白，其中参比抗体包含选自L1H1、L2H2、L3H3、L4H4、L5H5、L6H6、L7H7、L8H8、L9H9、LllHll、L12H12、L13H13、L15H15、L17H17、L21H21和L22H22的轻链和重链结构域的组合。在另一个实施方案中，本发明提供与参比抗体交叉竟争结合的人类抗体，其中该参比抗体为A-1、A-2、A-3、A-4、A-5、A-6、A-7、A-8、A-9、A-ll、A-12、A-13、A-15、A-21和A-22。在另一方面，本发明提供与人胰高血糖素受体的Ser80-Ser119区域结合的人类抗体。在另一个实施方案中，本发明提供与参比抗体交叉竟争结合的人类抗体，其中参比抗体与人胰高血糖素受体的Ser80-Ser119区域结合。在另一个实施方案中，本发明提供与人胰高血糖素受体的Ser80-Ser119区域结合的人类抗体，其IC50值为90nM或更低，在另一个实施方案中为80nM或更低，在另一个实施方案中为70nM或更低，在另一个实施方案中为60nM或更低，在另一个实施方案中为50nM或更低，在另一个实施方案中为40nM或更低，在另一个实施方案中为30nM或更低，在另一个实施方案中为25nM或更低，由例如实施例4所述测定法枱:测。在另一个实施方案中，本发明提供与参比抗体交叉竟争结合至人胰高血糖素受体的抗体，其中参比抗体为A-3。在又一实施方案中，抗原结合蛋白在结合至人胰高血糖素受体时以与参比抗体基本相同的Kd与人胰高血糖素受体结合；以与所述参比抗体基本相同的IC5o抑制人胰高血糖素受体的胰高血糖素激活；和/或与所述参比抗体交叉竟争结合至人胰高血糖素受体，其中所述参比抗体包含选自L1H1、L2H2、L3H3、L4H4、L5H5、L6H6、L7H7、L8H8、L9H9、LllHll、L12H12、L13H13、L15H15、L21H21合L22H22的轻链和重链可变结构域序列。在又一实施方案中，所提供分离的人源抗体在结合至人胰高血糖素受体时以与参比抗体基本相同的Kd与人胰高血糖素受体结合；以与所述参比抗体基本相同的IC5o抑制人胰高血糖素受体的胰高血糖素激活；和/或与所述参比抗体交叉竟争结合至人胰高血糖素受体，其中所述参比抗体选自A-l、A-2、A-3、A-4、A-5、A-6、A-7、A-8、A-9、A國ll、A國12、A國13、A誦15、A國21和A國22。在又一实施方案中，所提供分离的人源抗体在结合至人胰高血糖素受体时a.与人胰高血糖素受体的氨基酸Ser80-Ser119部分特异性结合；b.以90nM或更低的IC50降低胰高血糖素信号传导；c.降低动物模型的血糖；或(a)和(b)，或(a)、(b)和(c)。如下检测与抗体交叉竟争的能力。下面的实施例8描述了采用A-3作为参比抗体的示例性竟争结合测定法。所测抗体为可克服(可与A-3竟争结合)、部分可克服(仅部分竟争结合)及非可克服抗体(不能与A-3竟争结合)。结果如图4-6所示。此外，人类抗体A-3和其它人类抗体的结合位点经构建人GCGR和GLP-1受体的嵌合受体检测，如下文实施例9所述。如下所述及如图7所示，采用嵌合受体的检测表明对于抗体A-3,人胰高血糖素受体氨基酸Ser80-Ser117区域是结合必需且足够的。此外，人GCGR包含3对半胱氨酸。对于抗体A-3，结合需要第二和第三对半胱氨酸而不是第一对。这与抗体A-18、A-21和A-10是相反的，它们仅在3对半胱氨酸均完整时结合。适应症糖尿病尤其是2型糖尿病及其并发症已经成为全世界日益严重的问题。通常，该疾病由胰脏(3细胞胰岛素生成受损引起。在2型糖尿病(此疾病最常见的形式)中，人们认为遗传和环境因素联合引起卩细胞衰竭，使得在跟多个体中引起胰岛素分泌和活性受损以及胰岛素抵抗。一般认为肥胖症是促使成人甚至儿童中2型糖尿病增加的病症。人们还认为血脂异常，或者异常HDL(高密度脂蛋白)和LDL(低密度脂蛋白)均与2型糖尿病相关。2型糖尿病的特征为肌肉和其它器官不能响应正常循环浓度的胰岛素。随后胰脏P细胞分泌胰岛素增多，即高胰岛素血症的病症。最终卩细胞无法再补偿，导致葡萄糖耐量降低、空腹葡萄糖浓度受损、慢性高血糖和组织损伤。此外，人们认为早发2型糖尿病与血脂异常，或者异常HDL(高密度脂蛋白)和LDL(低密度脂蛋白)有关。代谢综合症患者都表现血脂异常和高血糖症。本发明提供抗原结合蛋白，尤其是可与胰高血糖素受体体内结合、降低动物模型血糖浓度的人类抗体。抗原结合蛋白还可改善葡萄糖耐量。在一个实施方案中，本发明提供具有体内效价的完全人类抗体。对ob/ob小鼠单次注射抗体的作用可在注射后数天内降低血糖，为高血糖、2型糖尿病以及相关病症提供了有效、持久的治疗。单次注射抗体也可改善在下文所述食蟹猴上进行的葡萄糖耐量试验(GTT)中血样的葡萄糖清除率(改善葡萄糖耐量)。本发明的抗原结合蛋白，尤其是人类抗体可用于降低血液或血浆葡萄糖，改善葡萄糖耐量降低，改善空腹葡萄糖水平以及改善血脂异常。这样，本发明的抗原结合蛋白，尤其是人类抗体可用于治疗高血糖症、2型糖尿病、代谢综合症和包括血脂异常的其它相关症状。此外，已显示降低血糖可在某些情况下用于预防和治疗具体的癌症例如结肠癌，如Richardson等，NatureClinPractOncol2:48-53(2005),Giovannucci等,Gastroenterology132:2208-2225(2007),Krone等，IntegrativeCancerTher4(1):25-31(2005),Chang等，Diabetologia46(5):595-607(2003),Jee等，YonseiMedJ46(4):449-55(2005)所述。治疗方法另一方面，治疗受试者的方法，包括给予治疗剂量的本发明提供的抗原结合蛋白。在一个实施方案中，抗原结合蛋白为人类抗体。本文中，术语"受试者，，指哺乳动物，包括人类，可与术语"患者"交替使用。人类抗体可用于治疗、控制或预防以患者体内过量胰高血糖素和/或血糖为特点的病症或症状。这些病症包括高血糖症、代谢综合症和2型糖尿病。术语"治疗"包括减轻或预防至少一种症状或病症的其它方面，或者减轻疾病严重性，等等。本发明的抗原结合蛋白尤其是人类抗体不需要产生完全治愈的效果，或根除疾病的所有症状或表现，即可构成有效治疗剂。如相关领域所公认，作为治疗剂的药物100可减少给定疾病状态的严重程度，但不需消除疾病的所有表现即可被认为是有效的治疗剂。相似地，预防给药治疗不需在预防症状出现上完全有效即可构成有效预防剂。只减少疾病的影响(例如，通过减少其症状的数量或严重度，或通过提高另一治疗效果，或通过产生另一有效作用)，或者减少受试者中疾病发生或加重的可能性就已经足够。本发明的一个实施方案涉及包含以足以诱导反应具体病症严重性的指示剂高于基线水平的持续改善的量和时间给予患者抗原结合蛋白例如人类纟元体的方法。如相关领域所理解，将包含本发明抗原结合蛋白的药用组合物以对适应症恰当的方式给予病人。在一个实施方案中，药物组合物包含本发明的人类抗体。药物组合物可采用任意适当技术包括但不限于肠道外、局部或吸入给药。如果是注射，可通过例如关节内、静脉内、肌肉内、损伤区内、腹膜内或皮下途径，以快速注射或连续输注给予药用组合物。可考虑例如在疾病或损伤部位局部给药，如透皮给药和埋植剂持续释放给药。吸入给药包括例如鼻腔或口腔吸入、采用喷雾剂、以气雾剂形式吸入抗原结合蛋白等等。其它选择包括口腔制剂包括片剂、糖浆剂或锭剂。以包含一个或更多其它组分例如生理学可接受载体、辅料或稀释剂的组合物形式给予本发明抗原结合蛋白是有利的。组合物可任选额外包含一个或更多如下所述的生理学活性剂。在多个具体实施方案中，组合物包含除一个或更多本发明抗原结合蛋白(例如人类抗体)之外的一个、两个、三个、四个、五个或六个生理学活性剂。在一个实施方案中，药物组合物包含本发明人类抗体以及一个或更多选自以下的物质pH适合于抗体的緩冲液、抗氧化剂例如抗坏血酸、低分子量多肽(例如含少于IO个氨基酸的多肽)、蛋白质、氨基酸、糖例如糊精、络合物例如EDTA、谷胱甘肽、稳定剂和辅料。根据适当工业标准，也可加入防腐剂。可使用适当辅料溶液作为稀释剂将组合物配制成冻干粉末。适当组分在所用剂量和浓度下对受者无毒。可用于药物处方组分的进一步实例见Remington'sPharmaceuticalSciences,第16版.(1980)和20版.(2000),MackPublishingCompany,Easton,PA.提供医学从业者使用的试剂盒，其包括一种或更多本发明抗原结合蛋白以及治疗本文讨论任何病症的标签或其它说明。在一个实施方案中，试剂盒包括以上述组合物形式装在一个或多个管型瓶中的一种或多种人类抗体的无菌制剂。给药剂量和频率可根据以下因素而改变给药途径、所用具体抗体、所治疾病的性质和严重度、症状为急性还是慢性以及患者的体积和总体症状。可通过本领域熟知的方法确定适当剂量，例如在临床试验中包括剂量放大研究。本发明抗原结合蛋白尤其是人类抗体可在例如一段时间内按规律间隔给药一次或多次。在具体实施方案中，在至少一个月或更长时间给药一次给予人类抗体，例如一个、两个或三个月或者甚至不确定。对于治疗慢性症状，长期治疗通常最有效。但是，对于治疗急性症状，短期给药例如从一周至六周就已足够。通常，给予人类抗体直至患者表现出所选体征或指示剂高于基线水平的医学相关改善度为止。本文提供的治疗方案的一个实例包括以适当剂量一周一次皮下注射抗原结合蛋白例如人类抗体治疗血糖水平引起的症状。本文提供的这些症状的实例包括例如高血糖症、2型糖尿病、空腹糖耐量受损、葡萄糖耐量降低和血脂异常。可持续每周或每月给予抗原结合蛋白直到达到所需结果例如病人症状消退。可按需要重新治疗，或者，可选择地，给予维持剂量。可在使用抗原结合蛋白例如人类抗体治疗之前、进行中和/或之后监测病人血糖浓度，以检测其浓度的任何变化。对于某些病症，血糖升高发病率可随例如疾病进程等因素而变化。可用已知技术测定葡萄糖水平。也可用已知技术例如ELISA在患者血液中测定葡萄糖水平。本发明方法和组合物的具体实施方案涉及使用例如抗原结合蛋白例如人类抗体和一个或多个胰高血糖素拮抗剂、两个或更多本发明抗原结合蛋白，或者本发明抗原结合蛋白和一个或更多其它胰高血糖素拮抗剂。在进一步的实施方案中，单独或与其它用于治疗使患者痛苦的症状的药剂組合给予抗原结合蛋白。这些药剂的实例包括蛋白质以及非蛋白质药物。当联合给予多种药物时，如本领域所熟知其剂量应相应调整。"联合给药"和组合疗法不限于同时给药，也包括在涉及给予患者至少一种其它治疗剂的疗程中至少给予一次抗原和蛋白的治疗方案。另一方面，本发明提供制备治疗2型糖尿病、高血糖症、代谢综合症、血脂异常和相关病症药剂的方法，其包含本发明抗原结合蛋白例如人类抗体与药学可接受辅料中的混合物，用于治疗2型糖尿病和相关病症。药剂制备方法如上所述。组合疗法另一方面，本发明提供使用本发明治疗性抗原结合蛋白，例如本文所述完全人类治疗性抗体与一种或多种其它治疗一起治疗糖尿病患者的方法。在一个实施方案中，该组合疗法可达到协同效应。抗原结合蛋白可与一个或更多下述当前可用的2型糖尿病治疗组合。其中包括双胍(美福明)以及磺脲类(例如格列本脲、格列吡溱)。用于维持血糖平衡的其它治疗包括PPARy拮抗剂(吡格列酮、罗格列酮)；a葡萄糖苷酶抑制剂(阿卡波糖、伏格列波糖)。其它治疗包括可注射治疗例如Exenatide(胰高血糖素样肽)和Symlin(普兰林肽)。已描述本发明，以下实施例用以说明目的，不具有限制性。实施例实施例1:抗原制备将编码全长477个氨基酸的胰高血糖素受体(SEQIDNO:2)的人类GCGRcDNA亚克隆到pDC312表达载体中，并转染AM1D细胞。在筛选和单细胞克隆后，选择单克隆(克隆1004)用于进一步基于受体的细胞表面表达的特性研究。饱和结合分析测定的受体表达水平(Bmax)为每mg膜蛋白质含11.4pmol胰高血糖素受体。此外，在框架中讲编码N端GCGR(SEQIDNO:2的1-142氨基酸)的cDNA序列与人IgGlFc的cDNA融合，并亚克隆至pDsRa21载体(如U.S.2005/0118643所述)。在转染至AM1D细胞后可筛选细胞稳定库。用重组蛋白质A快流速柱(GEHealthcare)接着用Source30Q阴离子交换柱(GEHealthcare)从浓缩条件培养基中纯化GCGRN端Fc。实施例2:鼠抗人杂交瘤生成将上述克隆1004的41细胞膜组分用作常*见和RIMMS(多位点注射快速免疫)免疫C57BL/6或DBF1小鼠的抗原(JacksonLaboratories,BarHarbor,Maine)。在多轮免疫之后，通过电融合将淋巴结(RIMMS免疫)或脾(常规免疫)释放的淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞、Sp2/0-Ag14(ATCC)融合。将融合细胞按2xl04个细胞/孔的密度接种于预铺100^1添加10%FBS、5。/o三曱氧唑辛克隆因子(BioVerisTM)、lx青霉素-链霉素-谷酰胺(Gibco)以及lxOPI(草酰乙酸盐、丙酮酸盐及胰岛素，Sigma)的BD培养基的96孔板。培养24小时后，每孔加入100pl2xHAT(0.1mM次黄嘌呤、0.16mM脱氧胸腺嘧咬普、4mM氨基蝶呤，Sigma)。分别在融合后的第7天和第10天更换培养基，然后在第2次更换培养基后的第2天收集条件培养基用于下述初步筛选。对杂交瘤上清进行基于细胞的ELISA(酶联免疫吸附测定法)或使用1004细胞的FMAT(微体积荧光数字图像测定技术)，与亲代AM1D细胞平行。基于可与1004而非AM1D特异性结合来筛选包含GCGR特异抗体的杂交瘤克隆。从下述扩增的杂交瘤培养基中部分纯化单克隆抗体，并用结合的(ELISA或FMAT)和功能的基于细胞的测定法测定其对胰高血糖素诱导cAMP生成的中和作用，如下文所述。扩增阳性克隆、克隆单细胞并用多个测定法进一步确认。实施例3:完全人类抗体生成根据所述方案，例如U.S.05/0118643和WO05/694879、WO98/24838、WO00/76310和美国专利7064244(均以参考形式并于本文)，将来源于人GCGR高表达细胞系1004的粗细胞膜制备品用作免疫IgG2和IgG4XenoMouse(Abgenix,nowAmgen,Inc.)的抗原。初次免疫后，给予后继轮次的加强免疫直至达到适当的抗体滴度。鉴别显示适当滴度的动物，然后从引流淋巴结获得淋巴细胞，必要时将各组混合。在一些实例中，通过用适当的介质(例如，DMEM,Invitrogen，Carlsbad,CA)研磨淋巴组织以解离淋巴细胞将细胞从组织中释放。筛选B细胞并与适当融合配体融合，例如非分泌骨髓瘤P3X63Ag8.653细胞(AmericanTypeCultureCollectionCRL1580,Kerney等，J.Immunol.123,1548-1550(1979))，如上述参考文献所述。其它适当的融合配体包括Sp2/0-Agl4(ATCC)细胞。将融合细胞沉淀并重悬于筛选介质中(通常为包含含偶氮丝氨酸、hypozanthine和其它补充物质的DMEM),温育20-30分钟，然后重悬于筛选介质中病接种平皿前培养。然后将细胞分布于孔中以最大化克隆形成能力，并用标准技术培养。培养后，用富含胰高血糖素受体细胞克隆1004和亲代细胞系AM1D用FMAT对杂交瘤上清对进行筛选。接着用使用FITC标记(异硫氰酸荧光素偶联)的人IgG抗体的FACS分析确认GCGR特异性结合子。按U.S2005/0118643及其它上述引用参考文献所述方案扩增包含受体特异单克隆抗体的杂交瘤克隆。如下文所述检测上清对胰高血糖素诱导的cAMP生成的抑制。将包含拮抗抗体的杂交瘤克隆单细胞克隆并扩增用于进一步检测。然后如下所述纯化抗体，然后测定来自单克隆的纯化抗体的中和活性。用MabSelect(GEHealthcare)树脂将抗体从杂交瘤条件培养基中纯化出来。向7至10ml的条件培养基(CM)中加入100iil在PBS中平衡的MabSelect树脂的l:2匀浆。将试管置振动器于4-8匸过夜。1000xg离心试管5分钟，倾去未结合部分。用5mlPBS洗涤树脂，然后离心并如上所述倾去未结合部分。将转移树脂至SPIN-X,0.45nm,2ml试管中。用0.5mlPBS再洗涤树脂两次，然后离心。通过室温下温育并偶尔搅拌10分钟用0.2ml0.1M醋酸洗脱单克隆抗体。离心试管，向洗脱液中加入30ial1MpH8.0Tris緩冲液。纯化抗保存于4-8。C。实施例4:抗体的体外表征抗体/受体结合测定法基于总细胞的ELISA将GCGR过表达CHO细胞(克隆1004)和亲代细胞(AM1D)接种于微量培养板至90%汇合。用BSA封闭细胞，与杂交瘤上清4。C温育90分钟。强洗涤后，将细胞与检测抗体羊抗鼠IgGFc-HRP(Pierce)温育，洗涤三次。加入50pl/孔TMB底物(KPL),室温温育5-10分钟。加入50|xl0.5NH2S04终止反应，用SpectraMax(MolecularDevices)于450nm处读取数值。以GCGR膜血清免疫小鼠为阳性对照，以空白培养基为背景对照。抗体/受体结合测定法FMAT将GCGR过表达CHO细胞(克隆1004)以亚汇合密度(50-60%)接种于底部洁净、黑壁的96孔微量培养板(AppliedBiosystems)中，然后在室温与杂交瘤上清温育60分钟。与FMAT蓝色标记第二抗体(羊抗人IgG,AppliedBiosystems)温育后，用8200细胞检测系统(AppliedBiosystems)记录细力包影4象和细胞结合荧光量。基于细胞的功能测定法在采用稳定功能细胞系基于细胞的功能测定法中测定抗胰高血糖素受体抗体的中和活性。用包含来自人、小鼠、大鼠、食蟹猴或大鼠的GCGRcDNAs(cDNAs分别编码SEQIDNO:2,4,6，8)的表达构建体(pcDNA3.1,Invitrogen)分别转染CHOKl细胞以建立稳定细胞系。从转染群中单细胞克隆表达来自上述种属GCGR的最终功能细胞系，并检测胰高血糖素刺激cAMP生成。基于各单品系的EC5o，选择最终测定法细胞系并保存以备将来使用。在竟争结合测定法中用以下方案测定Kb,或基于拮抗剂存在下剂量响应曲线漂移的Schild分析法计算抗体结合的解离常数。Schild分析法的使用如Lazaeno等，Br.J.Pharmacol.109(4):1110-9(1993)所描述，此处以参考形式并于本文。该测定法从用于小分子改编到用于本文抗体。杂交瘤上清和纯化抗体均使用以下方案检测。Cisbio的HTRF(均相时间分辨荧光分析l支术)-cAMP动态试剂盒用于功能测定。用功能测定法首先篩选在结合测定法中可与人GCGR特异性结合的克隆的杂交瘤上清。然后从杂交瘤条件培养基中纯化抗体，并重新检测Kb和IC5o值。使用该方法可鉴别可抑制胰高血糖素激活时cAMP生成、为胰高血糖素拮抗剂的抗体。将所选稳定功能细胞系接种于96-半孔板。将GCGR抗体加入孔中，37。C温育20分钟，然后加胰高血糖素(Calbiochem),并在37°C再温育15分钟。在裂解液中加入cAMP共轭物之后，将抗cAMP穴状化合物(抗共轭结合至穴状化合物的cAMP的抗体)加入孔中，将板于室温下温育1小时，然后用RubyStar(BMGLabtech的荧光微量培养板读板仪)读取数值。用功能性人GCGR细胞系初步检测2pM浓度的纯化抗体。用50pM胰高血糖素刺激细胞，筛选显示强抑制活性的抗体测定ICso(定义为抑制高于基线最大效应一半所需的抗体浓度)。在liiM浓度检测抗体，然后作连续2倍系列稀释。绘制剂量响应曲线图，并用GraphPadPrism软件测定IC5o。筛选具有较低IC5o的抗人GCGR抗体，然后用适当细胞系进一步检测交叉种属受体活性。功能测定法中人类抗体的IC50IC50(nM)抗体人食蟹猴鼠(murine)大鼠A-39.122.54.913.5A國418.152.110.117.2A-97.426.64.19.9对各所选人源抗体作Schild分析以检测跨不同种属的人抗GCGR抗体的相对效价。简而言之，在连续稀释的胰高血糖素(100nM至10fM)存在下才企测不同浓度的抗体。用GraphPadPrism软件绘制不同抗体浓度下的胰高血糖素剂量响应曲线。计算抗体的pA2，即产生胰高血糖素剂量响应曲线2倍右移所需抗体浓度的负对数。当Schild斜率等于1时，pA2等于pKb,即抗体结合的解离常数。然后，由pKb的反log值衍生出Kb,可直接用于比较跨种属单个抗体的相对效价。-险测其它抗体对人GCGR的活性。抗体IC50(nM)A國l15.0A國210.1A國513.3A-632.2A國78.8A画810.4A-10无活性A國il16.7A-1221.3A画1372.6A-14457.5A-1511.3A-16无活性A-17无活性A陽18203.7A画19无活性A-20无活性<table>tableseeoriginaldocumentpage108</column></row><table>Schild分析法测定的Kb值<table>tableseeoriginaldocumentpage108</column></row><table>实施例5:抗体的重组表达和纯4匕研发表达抗体的稳定细胞系基于Abgenix提供各抗体的DNA序列设计PCR引物以获得完整轻链开放阅读框、重链开放式阅读框的信号肽和可变域。将完整轻链、重链信号肽和可变域以及人IgG2恒定区分与表达载体pDC323和pDC324相连。作为PCR引物设定的实例，5，A-9轻链引物为4337-12(5，-AAGCTCGAGGTCGACTAGACCACCATGGACATGAGGGTCCCCGCTCAGCTCCTG-3，)(SEQIDNO:313)，其包含Sail限制性酶切位点、框内终止密码子、Kozak序列和氨基酸MDMRVPAQLL(SEQIDNO:314)的密码，3'引物3250國80(5，誦AACCGTTTAAACGCGGCCGCTCAACACTCTCCCCTGTTGAA國3，)(SEQIDNO:315),其包含NotI限制性酶切位点、终止密码子和氨基酸FNRGEC(SEQIDNO:316)的密码。5，A画9重链引物为3444-34(5，画AAGCTCGAGGTCGACTAGACCACCATGGAGTTTGGGCTGAGCTGGGTTTTC-3，)(SEQIDNO:317),其包含Sail限制性酶切位点、框内终止密码子、Kozak序列和氨基酸MEFGLSWVF(SEQIDNO:318)的密码，A-9重链可变区/IgG2(+)链接点引物4341-29(5'陽GACCACGGTCACCGTCTCCTCAGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTT-3，)(SEQIDNO:319),编码氨基酸GTTVTVSSASTKGPSVF(SEQIDNO:321)的互补(-)链引物4341-30(5，-AAGACCGATGGGCCCTTGGTGGAGGCTGAGGAGACGGTGACCGTGGTC國3，)(SEQIDNO:320),3，引物3250-79(5，画AACCGTTTAAACGCGGCCGCTCATTTACCCGGAGACAGGGA-3，)(SEQIDNO:322),其包含Notl限制性酶切位点、终止密码子和氨基酸SLSPGK(SEQIDNO:323)的密码。用于转染抗GCGR表达质粒的CHO宿主细胞位通过适应无血清培养基(Rasmussen等，Cytotechnology28:31-42,1998)来源于DXB画ll细胞(Urlaub等，PNASUS77:4126画4220,(1980))的CHO细胞系。使用标准电穿孔方法用表达质粒pDC323-抗GCGRk和pDC324-[抗GCGR-IgG2]转染宿主细胞产生抗GCGR细胞系。在用表达质粒转染宿主细胞系之后，在含有4%经透析的胎牛血清(ds或dfFBS)的选择性培养基(不含GHT)中培养细胞2-3周以篩选质粒和回收细胞。然后从培养基中移去血清，在-GHT选择性培养基中培养细胞直至其活力〉85%。随后在含有150nMMTX的培养基中培养转染细胞群。细胞系克隆根据以下方法建立所筛选克隆的细胞库。克隆步骤保证产生克隆种群和细胞库，使商业生产具有重现性。将抗体表达细胞扩增群(pool)有限稀释地接种于96孔板，并在小规模研究中评价候选克隆的生长和生产力特性。实施例6:ob/ob小鼠的体内活性向12周i^性ob/ob小鼠(JacksonLaboratories,BarHarbor,Maine)IP注射緩冲液或者1或3mg/kg(n-8-10/组)的抗体3或4。在单次注射抗体后的0、24、48、72、96、120、144、192、240小时测定血糖。以3mg/kg抗体剂量注射抗体3时血糖降低8天，如图1所示。相似地，向12周雄性ob/ob小鼠(JacksonLaboratories,BarHarbor,Maine)IP注射緩冲液或者1或3mg/kg(11=8-10/组)的抗体3或9。在单次注射抗体后的0、24、72、120、192、240小时测定血糖。以3mg/kg抗体剂量注射抗体3和9时血糖降低8天，如图2所示。实施例7:正常雄性食蟹猴的体内效力在云南灵长类动物中心(中国云南)在雄性食蟹猴中评价抗体A-9单次皮下(SC)剂量的效力。通过检测给予口服剂量葡萄糖后的血液葡萄糖清除率对猴子进行葡萄糖耐量试验(GTT)。GTT数据表示为AUC(曲线下面积)，如图3所示，代表通过测定口服后0、30、90分钟的血糖量得到的葡萄糖清除率。如图3所示，在给予抗体前24天以交错方式给予前剂量GTT1，在单次剂量前17天以交错方式给予前剂量GTT2。向30只食蟹猴单次皮下(SC)注射总共3或30mg/kg抗体A-9或对照给药抗体。注射后3天给予猴子GTT3,注射后8天给予GTT4,注射后17天给予GTT5。如图3所示，结果为单次SC注射3或30mg/kg抗体9可提高葡萄糖耐量试验期间的葡萄糖清除率。实施例8:竟争结合测定法将本发明的若干抗体混合，用竟争结合测定法检测哪些抗体与标记参比抗GCGR抗体交叉竟争结合。用Alexa荧光染料(分子探针/Invitrogen,Carlsbad,CA)标记A-3抗体作为示踪物，根据操作说明制备。检测一定剂量范围内的各个抗体与固定浓度lnM标记A-3抗体竟争结合表达于CHO细胞(如上所述)上的GCGR受体的能力。用实施例4描述的FMAT测定荧光密度，并计算AlexaA-3结合受体的抑制程度。基于以上分析可分出三组抗体。即与Alexa-A-3竟争时的可克服、部分可克服或非可克服抗体。可克服抗体能与A-3竟争结合，而非可克服抗体不能交叉竟争并且似乎在人GCGR上具有不同的结合位点。部分可克月良抗体与A-3结合位点有一些重叠。如图4-6所示。经冲企测并发现能与Alexa-A-3竟争结合(可克服)的抗体为A-ll、A-2、A-7、A國12、A國17、A國6、A國8、A國15和A國5。经检测并发现仅能与Alexa-A-3部分竟争结合(部分可克服)的抗体为A-16、A-14、A-20和A-23。经检测并发现不能与Alexa-A-3竟争结合的抗体为A-19和A-10。需要注意的是所有或大部分可克服抗体在基于细胞测定法(IC50)中显示性。^P口实施例9:嵌合受体的构建人GCGR与人GLP-1受体最为同源，且均属于受体N端部分有三对半胱氨酸的GPCRB家族。为了测定所测人类抗体结合至人GCGR上的区域或位点，并测定之间形成二硫键的三对半胱氨酸所维持构象的重要性，生成人GCGR和人GLP-1R(GLP-1R,登录号NP—002053)之间的多种嵌合受体构建物并在细胞中表达。如图7所示。来自人GCGR的嵌合体序列显示于图7。举例而言，显示图上部的嵌合体4中，氨基酸1-142来自人GCGR,其余部分来自GLP-1受体。嵌合体4包含完整的三对半胱氨酸。在嵌合体4中引入成对半胱氨酸的点突变(Cys1-3、Cys2-5或Cys4-6)使随后的三个嵌合体嵌合体-41CA,3CA;42CA,5CA以及44CA,6CA均含一个断裂的半胱氨酸对。嵌合体-7的氨基酸1-79来自人GCGR;嵌合体-8的氨基酸80-477来自人GCGR;嵌合体-10的氨基酸80-142来自人GCGR;嵌合体-15的氨基酸80-119来自人GCGR;嵌合体-19的氨基酸1-119和143-477来自人GCGR。通过荧光蛋白的框内C端融合监测细胞表面受体表达。使用Alexa标记的参比抗体A-3通过FMAT直接检测抗体与特定嵌合受体的结合。如图7所示，此处测定的所有抗体的结合均需要人GCGR的N端(氨基酸1-142)。抗体A-18、A-21和A-10的表现相似因为它们表现出仅与含三个完整半胱氨酸对的嵌合体-4结合。这表明这些抗体的构象表位。对于抗体A-3，来自人GCGR80-119的氨基酸序列是抗体结合所必需且足够的。此外，研究表明A-3结合不需要人GCGR的氨基酸120-142。而且，对于抗体A-3,构象由第二和第三对(Cys2-5、Cys4-6)维持，而不是第一对半胱氨酸。因此，抗体A-3和所有与A-3交叉反应的抗体与人GCGR结合的受体区域在人GCGR氨基酸Ser80-Ser119之内。本文引用的各参考文献就其所述和所有目的完整并于本文作为参考。本发明不限于本文描述的预期作为本发明单个方面的单独例证的特定实施方案、本发明的功能等同方法和组分的范围之内。确实，对于本领域技术人员而言可根据上文的描述和附图做出除本文显示和描述之外的许多本发明的修改。这些修改均涵盖于附加权利要求的范围内。权利要求1.包含选自以下的氨基酸序列的分离的抗原结合蛋白a.包含选自以下序列的轻链CDR3i.与选自L1-L23的轻链CDR3序列，SEQIDNOs72；74、76、78、80、83、85、87、89、91、93、95、97、100的CDR3序列相差总共不超过三个氨基酸添加、替换和/或缺失的轻链CDR3序列；ii.LQX21NSX22PLT(SEQIDNO208)；iii.QAWDSX23TVX24(SEQIDNO209)；b.包含选自以下序列的重链CDR3序列i.与选自H1-H23的重链CDR3序列，SEQIDNOs165、167、169、171、173、175、177、179、181、183、185、187、189、191、193、195、197、199的CDR3序列相差总共不超过四个氨基酸添加、替换和/或缺失的重链CDR3序列；ii.EX25X26X27YDILTGYX28X29YYGX30DV(SEQIDNO210)iii.X31GGGFDY(SEQIDNO211)；或c.(a)的轻链CDR3序列和(b)的重链CDR3序列；其中，X21为组氨酸残基或谷氨酰胺残基，X22为天冬酰胺残基、天冬氨酸残基或酪氨酸残基，X23为天冬酰胺残基或丝氨酸残基，X24为异亮氨酸残基或缬氨酸残基，X25为赖氨酸残基、谷氨酸残基或脯氨酸残基，X26为天冬氨酸残基、苏氨酸残基、谷氨酰胺残基或脯氨酸残基，X27为组氨酸残基或酪氨酸残基，X28为天冬酰胺残基、组氨酸残基、天冬氨酸残基或苯丙氨酸残基，X29为酪氨酸残基、组氨酸残基或天冬酰胺残基，X30为亮氨酸残基或甲硫氨酸残基，X31为亮氨酸残基或甲硫氨酸残基，其中所述抗原结合蛋白与人胰高血糖素受体特异性结合。2.权利要求1的分离的抗原结合蛋白，其包含选自以下的氨基酸序列a.选自以下的轻链CDR1序列i.与L1國L23的CDR1序列，SEQIDNOs:10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38和41相差不超过三个氨基酸添加、替换和/或缺失的轻链CDRl;ii.RSXiQSLLDX^DGTYTLD(SEQIDNO:200)iii.RASQX4IRNDX5G(SEQIDNO:201);及iv.SGDKLGDKYX6C(SEQIDNO:202);其中为丝氨酸残基或苏氨酸残基，X2为精氨酸残基或丝氨酸残基，x3为天冬氨酸残基或丙氨酸残基，x4为甘氨酸残基或天冬氨酸残基，x5为亮氨酸残基或苯丙氨酸残基，x6为缬氨酸残基或丙氨酸残基，b.选自以下的轻链CDR2序列i.与L1-L23的CDR2序列，SEQIDNOs:43、45、48、50、52、54、56、58、60、62、64、66、68和70相差不超过两个氨基酸添加、替换和/或缺失的轻链CDR2;ii.AASSLX9S(SEQIDNO:204);及iii.QX10XuKRPS(SEQIDNO:205);其中X9为谷氨酰胺残基或谷氨酸残基，X10为丝氨酸残基或苏氨酸残基，Xu为苏氨酸残基或丝氨酸残基，c.选自以下的重链CDRl序列i.与H1-H23的CDR1序列，SEQIDNOs:102、104、106、108、111、113、115、117、118、120和122相差不超过两个氨基酸添加、替换和/或缺失的重链CDRl;ii.X7YX8MH(SEQIDNO:203),其中X7为丝氨酸残基或苏氨酸残基，X8为甘氨酸残基或天冬氨酸残基；及d.选自以下的重链CDR2:i.与H1-H23的CDR2序列，SEQIDNOs:124、126、128、130、132、134、136、138、140、143、145、147、149、151、153、(155、157、159、161和163相差不超过三个氨基酸添加、替换和/或缺失的重链序列；ii.X12IWX13DGSX14KYYX15DSVKG(SEQIDNO:206);iii.X16ISX17DGSX18KYX19X20DSVKG(SEQIDNO:207);其中X12为丝氨酸残基、苯丙氨酸残基、缬氨酸残基或谷氨酸残基，X13为酪氨酸残基或天冬酰胺残基，X14为天冬酰胺残基或谷氨酸残基，X15为缬氨酸残基或丙氨酸残基，X16为缬氨酸残基或苯丙氨酸残基，X17为组氨酸残基、天冬氨酸残基或酪氨酸残基，X18为天冬氨酸残基、天冬酰胺残基或组氨酸残基，X19为酪氨酸残基或丝氨酸残基，X2()为丙氨酸残基或甘氨酸残基，其中所述抗原结合蛋白与人胰高血糖素受体特异性结合。3.权利要求1的分离的抗原结合蛋白，其包含以下之一a.包含以下的轻链可变结构域i.选自SEQIDNOs:lO、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38和41的轻链CDR1序列；ii.选自SEQIDNOs:43、45、48、50、52、54、56、58、60、62、64、66、68和70的轻链CDR2序列；iii.选自SEQIDNOs:72、74、76、78、80、83、85、87、89、91、93、95、97和100的轻链CDR3序列；以及b.包含以下的重链可变结构域i.选自SEQIDNOs:102、104、106、108、111、113、115、117、118、120和122的重链CDR1序列;ii.选自SEQIDNOs:124、126、128、130、132、134、136、138、140、143、145、147、149、151、153、155、157、159、161和163的重链CDR2序列；以及iii.选自SEQIDNOs:165、167、169、169、171、173、175、，177、179、181、183、185、187、189、191、193、195、197和199的重链CDR3序列；或c.(a)的轻链可变结构域和(b)的重链可变结构域，其中所述抗原结合蛋白与人胰高血糖素受体特异性结合。4.分离的抗原结合蛋白，其包含以下之一a.选自以下的轻链可变结构域序列i.具有与选自L1-L23的轻链可变结构域序列，SEQIDNOs:213、215、217、219、221、223、225、227、229、231、233、235、237、239、241、243、245、247、249、251、253、255和257至少80°/。相同的序列的氨基酸；ii.具有与编码L1-L23的轻链可变结构域序列，SEQIDNOs:212、214、216、218、220、222、224、226、228、230、232、234、236、238、240、242、244、246、248、250、252、254和256至少80%相同的多聚核苷酸序列编码的氨基酸序列；iii.由在中等严才各条件下与L1-L23轻链可变结构域序列，SEQIDNOs:212、214、216、218、220、222、224、226、228、230、232、234、236、238、240、242、244、246、248、250、252、254和256组成的多聚核苦酸的互补序列杂交的多聚核香酸序列编码的氨基酸序列；b.选自以下的重链可变结构域序列i.与H1-H23的重链可变结构域序列，SEQIDNOs:259、261、263、265、267、269、271、273、275、277、279、281、283、285、287、289、291、293、295、297、299、301和303至少80%相同的氨基酸序列；ii.与编码H1-H23的重链可变结构域序列，SEQIDNOs:258、260、262、264、266、268、270、272、274、276、278、280、282、284、286、288、292、294、296、298、300和302的多聚核苷酸序列至少80%相同的多聚核苷酸序列编码的氨基酸序列；iii.由在中等严格条件下与H1-H23重链可变结构域序列，SEQIDNOs:258、260、262、264、266、268、270、272、274、276、278、280、282、284、286、288、292、294、296、298、300和302组成的多聚核苷酸的互补序列杂交的多聚核苷酸序列编码的氨基酸序列；或c.(a)的轻链可变结构域和(b)的重链可变结构域，其中所述抗原结合蛋白与人胰高血糖素受体特异性结合。5.权利要求4的分离的抗原结合蛋白，其包含以下之一a.选自Ll-L23:SEQIDNOs:213、215、217、219、221、223、225、227、229、231、233、235、237、239、241、243、245、247、249、251、253、255和257的轻链可变结构域序列；b.选自H1國H23:SEQIDNOs:259、261、263、265、267、269、271、273、275、277、279、281、283、285、287、289、291、293、295、297、299、301和303的重链可变结构域序列；或c.(a)的轻链可变结构域和(b)的重链可变结构域，其中所述抗原结合蛋白与人胰高血糖素受体特异性结合。6.权利要求5的抗原结合蛋白，其中所述轻链可变结构域与重链可变结构域选自组合L1H1、L1H1、L2H2、L3H3、L4H4、L5H5、L6H6、L7H7、L8H8、L9H9、L10H10、LllHll、L12H12、L13H13、L14H14、L15H15、L16H16、L17H17、L18H18、L19H19、L20H20、L21H21、L22H22和L23H23。其中所述抗原结合蛋白与人胰高血糖素受体特异性结合。7.权利要求6的抗原结合蛋白，其进一步包含a.SEQIDNO:305的轻链恒定序列；b.SEQIDNO:307的轻链恒定序列；c.SEQIDNO:309的重链恒定序列；d.SEQIDNO:305的轻链恒定序列和SEQIDNO:309的重链恒定序列，或e.SEQIDNO:307的轻链恒定序列和SEQIDNO:309的重链恒定序列。8.权利要求1或4的分离的结合蛋白，其中所述抗原结合蛋白选自人类抗体、人源化抗体、嵌合抗体、单克隆抗体、多克隆抗体、重组抗体、抗原结合抗体片段、单链抗体、双链抗体、三链抗体、四链抗体、Fab片段、F(fa，)x片段、结构域抗体、IgD抗体、IgE抗体、IgM抗体、IgGl抗体、IgG2抗体、IgG3抗体、IgG4抗体和在铰链区至少具有一个突变的IgG4抗体。9.权利要求8的抗原结合蛋白，其中所述结合蛋白为人类抗体。10.权利要求1或4的抗原结合蛋白，当其与人胰高血糖素受体结合时a.以与参比抗体基本相同的Kd与人胰高血糖素受体结合；b.以与所述参比抗体基本相同的IC50抑制人胰高血糖素受体的胰高血糖素激活；或c.在人胰高血糖素受体上与所述参比抗体交叉竟争结合，其中所述参比抗体包含选自L1H1、L2H2、L3H3、L4H4、L5H5、L6H6、L7H7、L8H8、L9H9、LllHll、L12H12、L13H13、L15H15、L21H21和L22H22的轻链和重链可变结构域序列的组合。11.分离的人类抗体，当其与人胰高血糖素受体结合时a.以与参比抗体基本相同的Kd与人胰高血糖素受体结合；b.以与所述参比抗体基本相同的ICso抑制人胰高血糖素受体的胰高血糖素激活；或c.在人胰高血糖素受体上与所述参比抗体交叉竟争结合，其中所述参比抗体选自A-l、A-2、A-3、A-4、A-5、A-6、A-7、A-8、A-9、A-ll、A-12、A-13、A國15、A國21和A-22。12.权利要求11的分离的人类抗体，当其与人胰高血糖素受体结合时a.与人胰高血糖素受体的氨基酸Ser80至Serl19特异性结合；b.以90nM或更低的IC5o值降低胰高血糖素信号传导；c.在动物模型中降低血糖；d.(a)和(b)二者，或e.(a)、(b)和(c)。13.权利要求12的抗体，其中所述动物为ob/ob小鼠模型。14.一种药用组合物，其包含与药用可接受载体混合的权利要求1或4的抗原结合蛋白。15.—种药用组合物，其包含与药用可接受载体混合的权利要求11或12的人类抗体。16.—种分离的核酸，其包含编码权利要求1或5的抗原结合剂的轻链可变结构域、重链可变结构域或二者的多聚核苷酸序列。17.权利要求16的分离的核酸，其中序列选自L1-L23,SEQIDNOs:212、214、216、218、220、222、224、226、228、230、232、234、236、238、240、242、244、246、248、250、252、254和256;H1画H23，SEQIDN0s:258、260、262、264、266、268、270、272、274、276、278、280、282、284、286、288、290、292、294、296、298、300和302,或二者。18.—种重组表达载体，其包含权利要求16的核酸。19.一种宿主细胞，其包含权利要求18的载体。20.—种杂交瘤，其能够生产权利要求9的抗体。21.生产与人胰高血糖素受体特异性结合的抗原结合蛋白的方法，其包括在允许表达所述抗原结合蛋白的条件下培养权利要求19的宿主细胞。22.降低需要治疗的受试者的血糖的方法，其包括给予受试者治疗有效量的权利要求14的组合物。23.提高需要治疗的受试者的葡萄糖耐受的方法，其包括给予受试者治疗有效量的权利要求14的组合物。24.在需要治疗的受试者中预防或治疗2型糖尿病或相关病症的方法，其包括给予受试者治疗有效量的权利要求14的组合物。25.权利要求24的方法，其中所述受试者为人受试者。26.权利要求24的方法，其中所述相关病症为高血糖症、空腹血糖受损、葡萄糖耐量降低、血脂异常和代谢综合症。27.在需要治疗的受试者中降低血糖的方法，其包括给予受试者治疗有效量的权利要求15的组合物。28.在需要治疗的受试者中提高葡萄糖耐受的方法，其包括给予受试者治疗有效量的权利要求15的组合物。29.在需要治疗的受试者中预防或治疗2型糖尿病或相关病症的方法，其包括给予受试者治疗有效量的权利要求15的组合物。30.权利要求29的方法，其中所述受试者是人受试者。31.权利要求29的方法，其中所述相关病症为高血糖症、空腹血糖受损、葡萄糖耐量降低、血脂异常和代谢综合症。32.—种用于治疗2型糖尿病的试剂盒，其包含权利要求14的组合物。33.—种用于治疗2型糖尿病的试剂盒，其包含权利要求15的组合物。34.权利要求14或15的药用组合物在制备用于治疗可从降低血糖受益的病症的药物中的用途。35.权利要求32的用途，其中所述病症选自2型糖尿病、高血糖症、空腹血糖受损、葡萄糖耐量降低、血脂异常和代谢综合症。全文摘要本发明提供与抗原结合蛋白尤其是与胰高血糖素受体特异性结合的抗体相关的组合物和方法。本发明提供编码该抗原结合蛋白和抗体的核酸以及制备和使用该类抗体的方法，包括通过给予需要治疗的受试者该类抗体以治疗和预防2型糖尿病和相关病症的方法。文档编号A61K39/395GK101589062SQ200780042973公开日2009年11月25日申请日期2007年9月19日优先权日2006年9月20日发明者H·颜,R·A·林伯格,S·S·胡,T·C·布恩申请人:安姆根有限公司