专利名称：具有耐药逆转与多靶点效应的抗疟疾药品制备方法
技术领域：
本发明涉及一种新型抗疟疾药品及其制备方法，特别是应用卩-环糊精包合纳米磁性生物材料和药物的载药纳米磁性微球新制剂技术制备的抗疟疾口服剂；干扰疟原虫裂殖体DNA的复制与RNA转录过程，对各种疟原虫的红细胞内期、红细胞外期及配子体进行多靶点攻击，且达到耐药逆转。
背景技术：
疟疾是由蚊子传播的传染病，蚊子的疟原虫可分为间日疟原虫、恶性疟原虫，三日疟原虫和卵形疟原虫。人体发病时有定期发冷、发热、出汗等临床症状，脾肿大等体征。恶性疟原虫可引起脑型疟，可引发脑水肿、肺水肿、心力衰竭、呼吸衰竭、肾功能衰竭等重症。每
年世界上有3亿至5亿受感染，超过100万的人死于该病，其中绝大多数是小孩。
疟疾治疗的金标准是应用氯喹(CQ)。已知氯喹并不能直接杀死疟原虫，但能干扰疟原虫的繁殖。氯喹与核蛋白有较强的结合力，插入到疟原虫DNA的双螺旋两股之间，与DNA形成复合物，从而阻止DNA的复制与RNA的转录。氯喹还能抑制磷酸掺入疟原虫的DNA与RNA，由于核酸的合成减少，而干扰疟原虫的繁殖。氯喹曾因价格低廉、疗效快而在20世纪40年代成为治疗疟疾的特效药。但从50年代开始，蚊子的疟原虫逐渐对氯喹产生了抗体，在短短6年的时间内治愈率由最初的95%降低到目前的50%以下。青蒿素类药品作为目前全球公认的最佳抗疟疾药物，其生产和临床研究中心都位于中国，也是目前 惟一被国际社会普遍认可的中药药物，产品主要供应非洲和东南亚国
家，并被纳入世界卫生组织(WHO)采购目录。青蒿素通过影响疟 原虫红内期的超微结构，使其膜系结构发生变化，由于对食物泡膜的 作用，阻断了疟原虫的营养摄取，使疟原虫损失大量胞浆而很快死亡。 其作用方式是通过其内过氧化物(双氧)桥，经血红蛋白分解后产生 的游离铁所介导，产生不稳定的有机自由基及/或其他亲电子的中介 物，然后与疟原虫的蛋白质形成共价键，使疟原虫蛋白失去功能，而 使疟原虫死亡。但是，青蒿素单方药已经使疟原虫产生明显的抗药性， WHO决定对青蒿素单方药限产限销，并从2001年开始倡导复方抗 疟药。
发明内容
针对现有技术存在的缺点，本发明的目的在于提供一种具有耐药 逆转与多靶点效应的抗疟疾药品制备方法，利用这种方法制备的抗疟 疾口服剂不仅干扰疟原虫裂殖体DNA的复制与RNA转录过程，对 各种疟原虫的红细胞内期裂殖体进行杀灭，同时对疟原虫红细胞外期 及各型疟原虫配子体进行有效杀灭；不仅迅速控制临床发作及症状， 同时达到病因预防、控制疟疾流行与传播的目的。
本发明解决其技术问题所采取的技术方案是 一种具有耐药逆转 与多靶点效应的抗疟疾药品制备方法，其包括如下步骤
备料准备载体材料、骨架材料、药物和溶剂，其中，载体材料
为纳米磁性生物材料，即粒子直径在2 20 nm之间的「6304粉体， 骨架材料为P-环糊精，溶剂为水和乙醇，药物为中药提取物与化学药
物，其中中药提取物由下列重量份额的药物组成青蒿素10 30份、知母10 30份、丹皮10 30份、水牛角10 30份、鳖甲10 30份， 化学药物由下列重量份额的药物组成阿莫地喹40 80份、氯喹20 40份、伯氨喹1 20份；
制备水溶性中药包合微球将(3-环糊精和知母、丹皮、水牛角和
鳖甲的提取物加入可变速搅拌机中，以50 200转/分钟的频率均速 搅拌5至15分钟，然后加入Fe304粉体后再均速搅拌30 90分钟， 改以50 500转/分钟频率搅拌，并连续缓慢注入水，至成浆后取出 并倒入超分子包络化合机，开动包络化合头以1000 3000转/分钟 的频率包络化合30 120分钟后取出并倒入容器；载体材料、骨架
材料与药物的重量比为0.001 0.01 :1:1;药物与溶剂的重量
比为1: 1 2，待浆料稳定24小时后进行40 65。C恒温干燥到湿度 为5 12%;将干燥后的药品粉碎过筛备用；
制备醇溶性中药包合微球按照上述制备水溶性中药包合微球的 方法，将知母、丹皮、水牛角和鳖甲提取物换成青蒿素提取物，将溶 剂换成乙醇，制取醇溶性中药包合微球粉末备用；
制备水溶性化药包合微球按照上述制备水溶性中药包合微球的 方法，将知母、丹皮、水牛角和鳖甲四种提取物换成阿莫地喹、氯喹 和伯氨喹，制备水溶性化药包合微球粉末备用；
将上述三种包合微球粉末均匀混合，然后灌装胶囊或压片包衣。 所述具有耐药逆转与多靶点效应的抗疟疾药品制备方法，所述药
物中中药提取物由下列重量份额的药物组成青蒿素10份、知母IO
份、丹皮10份、水牛角10份、鳖甲10份，化学药物有下列重量份 额的药物组成阿莫地喹40份、氯喹20份、伯氨喹1份。
所述具有耐药逆转与多靶点效应的抗疟疾药品制备方法，所述药物中中药提取物由下列重量份额的药物组成青蒿素30份、知母30 份、丹皮30份、水牛角30份、鳖甲30份，化学药物有下列重量份 额的药物组成阿莫地喹80份、氯喹40份、伯氨喹20份。
所述具有耐药逆转与多耙点效应的抗疟疾药品制备方法，所述药 物中中药提取物由下列重量份额的药物组成青蒿素20份、知母20 份、丹皮20份、水牛角20份、鳖甲20份，化学药物有下列重量份 额的药物组成阿莫地喹60份、氯喹30份、伯氨喹10份。
所述具有耐药逆转与多靶点效应的抗疟疾药品制备方法，所述溶 剂为ph值为6-7的水，和50-95%的乙醇。
本发明具有耐药逆转与多靶点效应的抗疟疾药品制备方法，通过 纳米磁性微球携带纳米生物材料、生物活性材料、抗疟疾药物，迅速 结合靶细胞，进入靶细胞，实现药物的靶向释放及缓释效应，抑制靶 细胞的基因表达与扩增，改变其某些生化特征及凋亡抑制，使其变性 坏死或凋亡，同时提高靶细胞内的药物浓度，延长药物的半衰期，达 到耐药(抗药性)逆转作用。
本发明所应用的载药纳米磁性微球具有良好的生物降解性与生 物相容性，可有效促进药物吸收、提高药物生物利用度，其良好的 耙向性及缓控释效应是提高药物疗效、减少毒副作用的重要保证。载 药纳米磁性微球可以通过细胞外膜的特异性通道(OprD)—"膜离子通 道"或非特异性通道(OprF)，将药物成分与生物活性因子顺利带入靶 细胞内，抑制靶细胞的基因表达与扩增，改变其某些生化特征及凋亡 抑制，使其变性坏死或凋亡。由于耐药株细胞存在多种耐药机制，药 物分子越大，所带负电荷越多，疏水性越强，越不易通过细胞外膜的 非特异性通道(OprF)，不能形成细胞内有效药物浓度，以致产生耐药
7(抗药)性。药物的大分子如果被粒化成纳米粒径级的小分子后、就 能穿透组织间隙，并可通过人体最小的毛细血管。载药纳米磁性微球 由于自身独特的尺寸效应和表面效应能够顺利进入靶细胞，提高靶细 胞内的药物浓度，达到耐药逆转作用，从根本上解决疟原虫的"抗药 性"问题。
多数大分子药物的口服递送策略基本相同，就是让系统中的大分 子药物免受酶的降解，同时提高药物在消化道上皮细胞膜的透过效 率。载药纳米磁性微球递送系统正好满足这两点要求，它们能够保护 容易失活的大分子药物在消化道剧烈的环境中免受酶系统的代谢和 降解。在不加入促渗剂的情况下，这些微粒载体能够被消化道上皮细 胞所吸收，实现目标大分子的跨膜转运，克服这个大分子口服给药途 径中最大的生物屏障。
任何生长、增殖细胞的膜上都有铁转运蛋白的受体TfR。携带 Fe"的铁转运蛋白(transferrin;Tf )与受体结合后经内吞作用进入细胞 内，供细胞内合成利用。疟原虫表膜TfR的表达密度同样要比多数正 常细胞高许多倍，且与Tf亲和力明显增加；TfR在疟原虫表膜表达 稳定，很少被修饰、覆盖、或丢失；受体是内吞性的，容易进入细胞 质，如同癌细胞、登革病毒细胞表膜等，均高表达转铁蛋白受体(TfR)， 因此疟原虫中的铁离子浓度比正常细胞的浓度高。疟原虫细胞表面存 在比正常细胞更多的铁传蛋白受体，使得载药纳米磁性微球具有很高 的靶向性。
本发明新型抗疟疾口服剂及其制备方法，采用该方法制备的抗疟 疾中西药复方口服剂，具有多靶点效应，不仅干扰疟原虫裂殖体DNA 的复制与RNA转录过程，对各种疟原虫的红细胞内期裂殖体进行杀灭，同时对疟原虫红细胞外期及各型疟原虫配子体进行有效杀灭；不 仅迅速控制临床发作及症状，同时达到病因预防、控制疟疾流行与传 播之目的。
本发明中采用的抗疟疾药物，分别发挥以下不同的靶点治疗功
效
青蒿素青蒿素的过氧基团可产生自由基，对疟原虫红细胞内期
滋养体有杀灭作用，但最大缺点是复发率高。
知母[功用]烦热消渴，内热消渴，阴虚火旺，骨蒸劳热。 丹皮[功用]清热凉血，活血行瘀，温毒发斑、吐、衄、便血，
骨蒸劳热。
水牛角[功用]温热病(急性热性传染病)、清热、凉血、解毒。 治热病头痛、壮热神昏、斑疹、吐衄等。
鳖甲[功用]阴虚发热、劳热骨蒸、热病伤阴、软坚散结、虚 风内动、小作惊痫、久疟、疟母、癥瘕。
阿莫地喹为一种有效的裂殖体杀灭剂，作用于红细胞内期，对 恶性疟疾有根治效果。主要用于治疗疟疾急性发作，控制疟疾症状快。 但不能阻止复发，也不能作疟疾的预防和阻断传播。
氯喹干扰疟原虫的繁殖，阻止DNA的复制与RNA的转录。对各
种疟原虫的红细胞内期裂殖体有杀灭作用，但对红外期无效，对配子 体也无直接作用，故不能作病因预防及中断传播之用。氯喹进入细胞 浆内缓慢，生效慢。
伯氨喹主要对间日疟继发性红细胞外期和各种疟原虫的配子体 有较强的杀灭作用，是根治间日疟、阻止复发和控制疟疾传播的最有 效的药物。因此，本发明制备的抗疟疾中西药复方口服剂，可进一步增强药 效、抗拮耐药(抗药性)、降低毒副作用，实现更好的治疗效果。
具体实施方式
实施例1
一种具有耐药逆转与多靶点效应的抗疟疾药品制备方法，其包括 如下步骤
备料准备载体材料、骨架材料、药物和溶剂，其中，载体材料
为纳米磁性生物材料，即粒子直径在2 20 nm之间的「6304粉体， 骨架材料为P-环糊精，溶剂为ph值为6-7的水和50-95%的乙醇，
药物为中药提取物与化学药物，其中中药提取物由下列重量份额的药 物组成青蒿素10份、知母10份、丹皮10份、水牛角10份、鳖甲 10份，化学药物有下列重量份额的药物组成阿莫地喹40份、氯喹 20份、伯氨喹1份；
制备水溶性中药包合微球将(3-环糊精和知母、丹皮、水牛角和
鳖甲的提取物加入可变速搅拌机中，以50 200转/分钟的频率均速 搅拌5至15分钟，然后加入Fe304粉体后再均速搅拌30 90分钟， 改以50 500转/分钟频率搅拌，并连续缓慢注入ph值为6-7的水， 至成浆后取出并倒入超分子包络化合机，开动包络化合头以1000 3000转/分钟的频率包络化合30 120分钟后取出并倒入容器；待浆 料稳定24小时后进行40 65X:恒温干燥到湿度为5 12%;将干燥 后的药品粉碎过筛备用；
制备醇溶性中药包合微球按照上述制备水溶中药的方法，将知 母、丹皮、水牛角和鳖甲提取物换成青蒿素提取物，将溶剂换成乙醇， 制取醇溶中药粉末备用；制备水溶性化药包合微球按照上述制备水溶中药的方法，将知 母、丹皮、水牛角和鳖甲提取物换成阿莫地喹、氯喹和伯氨喹，制取 水溶化学药粉末备用；
将上述三种粉末均匀混合，然后灌装胶囊或压片包衣。
实施例2
一种具有耐药逆转与多靶点效应的抗疟疾药品制备方法，其包括 如下步骤
备料准备载体材料、骨架材料、药物和溶剂，其中，载体材料
为纳米磁性生物材料，即粒子直径在2 20 nm之间的「6304粉体， 骨架材料为(3-环糊精，溶剂为水和乙醇，药物为中药提取物与化学药
物，其中中药提取物由下列重量份额的药物组成青蒿素30份、知
母30份、丹皮30份、水牛角30份、鳖甲30份，化学药物有下列重 量份额的药物组成阿莫地喹80份、氯喹40份、伯氨喹20份；
制备水溶性中药包合微球将(3-环糊精和知母、丹皮、水牛角和
鳖甲的提取物加入可变速搅拌机中，以50 200转/分钟的频率均速 搅拌5至15分钟，然后加入Fe304粉体后再均速搅拌30 90分钟， 改以50 500转/分钟频率搅拌，并连续缓慢注入ph值为6-7的水， 至成桨后取出并倒入超分子包络化合机，开动包络化合头以1000 3000转/分钟的频率包络化合30 120分钟后取出并倒入容器；待浆 料稳定24小时后进行40 65'C恒温干燥到湿度为5 12%;将干燥 后的药品粉碎过筛备用；
制备醇溶性中药包合微球按照上述制备水溶中药的方法，将知 母、丹皮、水牛角和鳖甲提取物换成青蒿素提取物，将溶剂换成乙醇， 制取醇溶中药粉末备用；制备水溶性化药包合微球按照上述制备水溶中药的方法，将知 母、丹皮、水牛角和鳖甲提取物换成阿莫地喹、氯喹和伯氨喹，制取 水溶化学药粉末备用；
将上述三种粉末均匀混合，然后灌装胶囊或压片包衣。
实施例3
一种具有耐药逆转与多靶点效应的抗疟疾药品制备方法，其包括 如下步骤
备料准备载体材料、骨架材料、药物和溶剂，其中，载体材料
为纳米磁性生物材料，即粒子直径在2 20 nm之间的「6304粉体，
骨架材料为p-环糊精，溶剂为水和乙醇，药物为中药提取物与化学药
物，其中中药提取物由下列重量份额的药物组成青蒿素20份、知
母20份、丹皮20份、水牛角20份、鳖甲20份，化学药物有下列重
量份额的药物组成阿莫地喹60份、氯喹30份、伯氨喹10份；
制备水溶性中药包合微球将p-环糊精和知母、丹皮、水牛角和
鳖甲的提取物加入可变速搅拌机中，以50 200转/分钟的频率均速 搅拌5至15分钟，然后加入Fe304粉体后再均速搅拌30 90分钟， 改以50 500转/分钟频率搅拌，并连续缓慢注入ph值为6-7的水， 至成浆后取出并倒入超分子包络化合机，开动包络化合头以1000 3000转/分钟的频率包络化合30 120分钟后取出并倒入容器；待浆 料稳定24小时后进行40 65'C恒温干燥到湿度为5 12%;将干燥 后的药品粉碎过筛备用；
制备醇溶性中药包合微球按照上述制备水溶中药的方法，将知 母、丹皮、水牛角和鳖甲提取物换成青蒿素提取物，将溶剂换成乙醇， 制取醇溶中药粉末备用；制备水溶性化药包合微球按照上述制备水溶中药的方法，将知 母、丹皮、水牛角和鳖甲提取物换成阿莫地喹、氯喹和伯氨喹，制取 水溶化学药粉末备用；
将上述三种粉末均匀混合，然后灌装胶囊或压片包衣。 本发明所应用的各种物质材料以及机械设备等均为国内批准上 市销售产品，其中具体药品为-
青蒿素99%醇提提取物粉末，从中药青蒿中提取的有过氧基团的
倍半萜内酯药物—抗疟有效单体。世界卫生组织(WHO)关于抗疟药
使用的一线药物，我国卫生部规定的二线药物。
知母10:1水提，中药提取物粉末。传统中医药用于防治"骨蒸劳热"。 丹皮10:1水提，中药提取物粉末。传统中医药用于防治"骨蒸劳热"。 水牛角10:1水提，中药提取物粉末/浓縮粉。传统中医药用于防治
"温热病"。
鳖甲10:1水提，中药提取物粉末。传统中医药用于防治"骨蒸劳热"、
久症、症母o
阿莫地喹99%,化学药物-粉末，抗疟药喹啉类，药物别名氨酚 喹，USP28 (86-42-0)。世界卫生组织(WHO)与我国卫生部规定的 关于抗疟药使用的一线药物。
氯喹99%，化学药物--粉末，抗症药喹啉类，质量标准:BP2003 US28。 世界卫生组织(WHO)与我国卫生部规定的关于抗疟药使用的一线 药物。
伯氨喹》97.5%，化学药物-粉末，抗疟药喹啉类，药物别名伯氨 喹啉。世界卫生组织(WHO)与我国卫生部规定的关于抗疟药使用 的一线药物。
13鉴于目前无法查询到国内哪家权威检测机构建立标准的抗疟疾 动物试验模型，尚未进行本发明药物的动物试验与检测。
权利要求
1、一种具有耐药逆转与多靶点效应的抗疟疾药品制备方法，其特征在于其包括如下步骤备料准备载体材料、骨架材料、药物和溶剂，其中，载体材料为纳米磁性生物材料，即粒子直径在2～20nm之间的Fe3O4粉体，骨架材料为β-环糊精，溶剂为水和乙醇，药物为中药提取物与化学药物，其中中药提取物由下列重量份额的药物组成青蒿素10～30份、知母10～30份、丹皮10～30份、水牛角10～30份、鳖甲10～30份，化学药物由下列重量份额的药物组成阿莫地喹40～80份、氯喹20～40份、伯氨喹1～20份；制备水溶性中药包合微球将β-环糊精和知母、丹皮、水牛角和鳖甲的提取物加入可变速搅拌机中，以50～200转/分钟的频率均速搅拌5至15分钟，然后加入Fe3O4粉体后再均速搅拌30～90分钟，改以50～500转/分钟频率搅拌，并连续缓慢注入水，至成浆后取出并倒入超分子包络化合机，开动包络化合头以1000～3000转/分钟的频率包络化合30～120分钟后取出并倒入容器；载体材料、骨架材料与药物的重量比为0.001～0.01∶1∶1；药物与溶剂的重量比为1∶1～2，待浆料稳定24小时后进行40～65℃恒温干燥到湿度为5～12％；将干燥后的药品粉碎过筛备用；制备醇溶性中药包合微球按照上述制备水溶性中药包合微球的方法，将知母、丹皮、水牛角和鳖甲提取物换成青蒿素提取物，将溶剂换成乙醇，制取醇溶性中药包合微球粉末备用；制备水溶性化药包合微球按照上述制备水溶性中药包合微球的方法，将知母、丹皮、水牛角和鳖甲四种提取物换成阿莫地喹、氯喹和伯氨喹，制备水溶性化药包合微球粉末备用；将上述三种包合微球粉末均匀混合，然后灌装胶囊或压片包衣。
2、 根据权利要求1所述具有耐药逆转与多靶点效应的抗疟疾药品制备方法，其特征在于所述药物中中药提取物由下列重量份额的药物组成青蒿素10份、知母10份、丹皮10份、水牛角10份、鳖甲10份，化学药物有下列重量份额的药物组成阿莫地喹40份、氯喹20份、伯氨喹1份。
3、 根据权利要求1所述具有耐药逆转与多靶点效应的抗疟疾药品制备方法，其特征在于所述药物中中药提取物由下列重量份额的药物组成青蒿素30份、知母30份、丹皮30份、水牛角30份、鳖甲30份，化学药物有下列重量份额的药物组成阿莫地喹80份、氯喹40份、伯氨喹20份。
4、 根据权利要求1所述具有耐药逆转与多靶点效应的抗疟疾药品制备方法，其特征在于所述药物中中药提取物由下列重量份额的药物组成青蒿素20份、知母20份、丹皮20份、水牛角20份、鳖甲20份，化学药物有下列重量份额的药物组成阿莫地喹60份、氯喹30份、伯氨喹10份。
5、 根据权利要求1所述具有耐药逆转与多靶点效应的抗疟疾药品制备方法，其特征在于所述溶剂为ph值为6-7的水，和50-95%的乙醇。
全文摘要
本发明公开了一种具有耐药逆转与多靶点效应的抗疟疾药品制备方法，其步骤包括，备料、制备水溶性中药包合微球、制备醇溶性中药包合微球和制备水溶性化药包合微球工艺流程，本发明以β-环糊精为骨架材料，包合纳米磁性生物材料载体材料和药物组合；该载药纳米磁性微球可迅速与靶细胞结合，穿透靶细胞膜进入细胞内，实现药物分子的跨膜转运，抑制靶细胞的基因表达与扩增使其变性坏死或凋亡，同时达到耐药逆转作用，这种抗疟疾口服剂不仅干扰疟原虫裂殖体DNA的复制与RNA转录过程，对各种疟原虫的红细胞内期裂殖体进行杀灭，同时对疟原虫红细胞外期及各型疟原虫配子体进行有效杀灭；同时达到病因预防、控制疟疾流行与传播之目的。
文档编号A61K36/88GK101632778SQ20081013420
公开日2010年1月27日 申请日期2008年7月21日 优先权日2008年7月21日
发明者黄云清 申请人:黄云清