新的紫杉烷衍生物及其制法和用途的制作方法

专利名称：新的紫杉烷衍生物及其制法和用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及新的紫杉烷衍生物及其制备方法，以及含有该化合物的药物组合物和用于在制备抗恶性肿瘤药物中应用；还涉及在制备治疗多药耐药肿瘤的药物和逆转多药耐药肿瘤的药物中的应用。
癌症是严重危害人类的重大疾病之一。约有半数的经早期诊断的癌症患者能够得到手术或放射治疗。而有相当数量的癌症及转移癌必需进行化学治疗。肿瘤化疗近年来有了很大进展，能有效地治疗多种癌症，例如白血病，恶性淋巴瘤，恶性肉瘤等，能有效地延长某些癌症患者的生存期。临床常用的化疗药物有长春生物硷如长春新碱(Vincristine，VCR)，阿霉素类如doxorubicin，顺铂，鬼臼毒素(etoposide)，紫杉醇(taxol)等(Ojima，Bounaud PY，Bernacki RJ.治疗多药耐药肿瘤紫杉烷类化合物的设计，现代药物发现杂志，1999，5/645(Designing taxanes to treat multidrug-resistant tumors.Modern Drug Discovery.1999，May/June45))。
目前虽有近50种抗癌药在供临床应用，但对每一种肿瘤而言，仅有少数药对它有效，原因在于肿瘤细胞各自的特性及耐药性。肿瘤化疗最大的问题是，易使癌细胞产生耐药性，导致化疗的失败。近年的研究发现产生耐药性的机制有多种；肿瘤细胞对某一化疗药物产生耐药后，对其它化学结构及机理不同的化疗药物也产生交叉耐药，称“多药耐药”(multi-drug-resistance，MDR)。当癌细胞产生强耐药性后，如增加药量继续化疗，不仅疗效未能改善，且因药量加大而产生更大的毒副作用。这是许多癌症患者不能得治的重要原因(Cao LP，Duchrow M，Windhovel U，Kujath P，Bruch HP，Broll R.编码P-糖蛋白基因MDR1mRNA在福尔马林固定的、石蜡包埋的膀胱癌组织中的表达，欧洲癌症杂志，1998，34(10)1612(Expession of MDR1 mRNA and encoding P-glycoprotein inarchival formalin-fixed paraffin-embedded gall bladder cancer tissues.Eur J Cancer，1998，34(10)1612))。
现有研究资料表明，肿瘤细胞产生MDR的原因有多种，其中肿瘤细胞某些膜蛋白的过多表达是产生MDR的主要原因。与MDR有关的膜蛋白，即多药耐药蛋白目前已发现有3种P-糖蛋白(P-glycoprotein，p-gp，PG-170)、多药耐药蛋白(multidrug resistance protein，MRP-190)和肺耐药蛋白(lung resistanceprotein，LRP)(Ling，Vancouver.P-糖蛋白在耐药中的作用，美国医学杂志，1995，99(增刊6A)31s(P-GlycoproteinIts role in drug resistance.TheAmerican Journal of Medicine，1995，99(suppl 6A)31s))。DNA拓扑异构酶II在质和量上的改变也是肿瘤细胞对某些药物产生MDR的主要原因，DNA拓扑异构酶II是一种核酶，是蒽环类抗生素和表鬼臼毒素等抗癌抗生素的共同作用靶部位(Nooter K，Stoter G.多药耐药肿瘤化疗的分子机理，应用病理学研究，1996，192(7)798(Molecular mechanisms of muktidrug resistance in cancer chemotherapy.Pathol Res Pract，1996，192(7)768))。谷胱甘肽是体内的一个重要活性物质，谷胱甘肽-S-转移酶的过多表达及还原型谷胱甘肽(GSH)量的改变也与MDR的产生有关(O’Brien ML，Tew KD.多药耐药过程？中的谷光苷肽及其相关酶，欧洲癌症杂志，1996，32A(6)967(Glutahtione and related enzymes in multidrug resistance.Eur J Cancer，1996，32A(6)967))。蛋白激酶(PKC)及其异构酶的改变也可引起MDR现象，有研究发现PKC能够调节MDR，许多PKC抑制剂能够逆转MDR现象。另外有报道MDR与一些与凋亡抑制相关的癌基因(如bcl-2，bcr/abl，NF-kB等)的表达产物可阻断或阻碍多种因素(如化疗药物、辐射、激素等)诱导的肿瘤细胞凋亡，从而抑制肿瘤细胞的凋亡(apoptosis)(Gleave ME，Miayake H，GoldieJ，Nelson C，Tolcher A.针对bcl-2基因利用反义bcl-2寡脱氧核酸延缓前列腺癌雄性激素依赖性发展及增加其化学敏感性，泌尿学杂志，1999，54(增刊，6A)36(Targeting bcl-2 gene to delay androgen-independenct progression and enhancechemosensitivity in prostate cancer using antisense bcl-2 oligodeoxynucleotides.Urology，1999，54(suppl.6A)36)；Koty PP，Zhang H，Levitt ML.反义bcl-2促进非小细胞肺癌细胞株的程序性死亡，肺癌杂志，1999，23115(Antisense bcl-2treatment increases programmed cell death in non-small cell lung cancer cell lines.Lung Cancer，1999，23115))。
其中，pgp及上述耐药相关蛋白的过度表达是引起MDR的主要原因，因而、以它们为靶点，设计合成耐药相关蛋白抑制剂，是研究逆转MDR的药物的一个重要策略。
目前正在研究中的作用于pgp的MDR逆转剂有(1)钙通道阻断剂(calciumchannel blocker)，主要有Verapamil及其衍生物等，在mdrl翻译水平抑制pgp合成及其活性；(2)钙调蛋白拮抗剂(calmodulin antagonists)，包括Chlorpromazine等吩噻嗪类衍生物，已进入临床试验(3)环孢菌素类，环孢菌素A(Cyclosporine A)及其结构类似物PSC833，SDZ280-466等，阻断P-glycoprotein，能改变抗癌药物的药代动力学(4)喹啉类Quinidine等，已进入临床试验；(5)抗雌激素类化合物。其它MDR逆转剂有(1)反义核酸与核酶针对mdrl的反义核酸或核酶，破坏肿瘤细胞pgp mRNA的表达；(2)细胞因子TNF-α；(3)GSH耗竭剂Vitamin K3，BSO(丁硫氨酸亚砜胺)；(4)蛋白药物交联剂等。
此外，据报道紫杉烷类化合物Taxinine及其衍生物具有很好的逆转多药耐药癌细胞的活性(Hosoyama H，Shigemori H，Tomida A，Tsuruo T，Kobayashi J.taxinine衍生物对多药耐药肿瘤细胞株的调节，生物有机与药物化学通讯，1999，9389(Modulationof multidrug resistance in tumor cells bv taxinine derivatives.Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters，1999，9389))，紫杉醇衍生物ICD5109具有很好的抗多药耐药癌的活性(Polizzi D，Praresi G，Tortoreto M，Supino R，RivaR，Bombardelli E，Zunino F.一种对人移植肿瘤有更强耐受性及治疗活性的紫杉烷类化合物，癌症研究，1999，591036(A novel taxane with improved tolerabilityand therapeutic activity in a panel of human tumor xenografts.Cancer Research，1999，591036))，目前还未见到它们临床试用的报道。
比较理想的MDR逆转剂一般要求剂量有一定的耐受性，能够重复给药以保持所需的药物浓度，能完全逆转MDR且副作用较小。上述Verapamil，Cyclosporine A和Quinidine等，由于用为逆转MDR药物时出现的毒副作用，实际上未能在临床化疗中应用；其它报道过的药物尚处于研究阶段。因此开发新型的治疗恶性肿瘤的药物，尤其是开发疗效好，副作用小的治疗多药耐药肿瘤的药物和逆转多药耐药肿瘤的药物是非常必要的。
本发明的目的在于提供一种新的化合物及其衍生物，它可以成为治疗恶性肿瘤的药物，尤其是疗效优良，副作用小的治疗多药耐药肿瘤的药物和逆转多药耐药肿瘤的药物；本发明的另一目的在于提供一种制备本发明所述化合物的方法；
本发明的另一目的在于提供一种含有本发明所述化合物的药用组合物。
为了完成本发明的目的，本发明人经过研究现已发现下面通式(I)的新的紫杉烷化合物，其具有杀伤恶性肿瘤细胞的活性，杀伤多药耐药肿瘤细胞的活性和逆转多药耐药肿瘤细胞的耐药性的活性，因而可以开发作为治疗恶性肿瘤的药物，尤其是开发治疗多药耐药肿瘤的药物和逆转多药耐药肿瘤的耐药性的逆转药物。
本发明第一方面涉及通式(I)的化合物或其立体异构体或其药用盐。 其中，R1为氢、羟基，R2为氢，R1R2为＝O，R3为氢、羟基、C1-8烷酰氧基，R4为氢，R3R4为＝O，R5为C1-8烷酰氧基，苯甲酰氧基，取代的苯甲酰氧基，取代基可以是羟基，甲氧基或卤素，可以有1个或2个相同或不同的取代基，R6为氢，R7为羟基、脂环基C1-8烷基酰氧基、杂环基C1-8烷基酰氧基、芳环基C1-8烷基酰氧基，包括苯基C1-8烷基酰氧基，在苯基上可以有1个或2个相同或不同的取代基，取代基可以是叠氮基，甲氧基或卤素，在C1-8烷基上可以有1个或2个相同或不同的取代基，取代基可以是氧＝O、羟基、甲氧基或卤素，条件是取代基不在同一位置上，R8为氢，
R9为氢、羟基、C1-8烷基酰氧基，R10为氢，R9R10为＝O，R11为羟基、C1-8烷基酰氧基、苯甲酰氧基、芳烃基甲酰氧基，R12为氢，R11R12为＝O，但是不包括 本发明中的术语“苯基C1-8烷基酰氧基”中的C1-8烷酰氧基”是指含1-8个碳原子的烷酰氧基，如甲酰氧基，乙酰氧基，丙酰氧基，异丙酰氧基，丁酰氧基，异丁酰氧基等，戊酰氧基，含支链的戊酰氧基，己酰氧基，含支链的己酰氧基等。
根据本发明，优选式Ia化合物或其立体异构体包括
其中，R1R2为＝O，R3为氢、R4为氢，R5为C1-8烷酰氧基，R6为氢，R7为肉桂酰氧基、脂环基C1-8烷基酰氧基、杂环基C1-8烷基酰氧基、芳环基C1-8烷基酰氧基，包括苯基C1-8烷基酰氧基，在苯基上可以有1个或2个相同或不同的取代基，取代基可以是叠氮基、甲氧基或卤素，在C1-8烷基上可以有1个或2个相同或不同的取代基，取代基可以是氧＝O、羟基、甲氧基或卤素，条件是取代基不在同一位置上，R8为氢，R9为氢，R10为氢，R11为羟基、C1-8烷基酰氧基、苯甲酰氧基、芳烃基甲酰氧基，R12为氢，n＝0-7，根据本发明，优选式Ib化合物或其立体异构体包括 其中，R1为氢，R2为氢，R3为C1-8烷酰氧基，R4为氢，R5为C1-8烷酰氧基、苯甲酰氧基、取代的苯甲酰氧基、取代基可以是羟基、甲氧基或卤素，可以有1个或2个相同或不同的取代基，R6为氢，R7为肉桂酰氧基、脂环基C1-8烷基酰氧基、杂环基C1-8烷基酰氧基、芳环基C1-8烷基酰氧基，包括苯基C1-8烷基酰氧基，在苯基上可以有1个或2个相同或不同的取代基，取代基可以是叠氮基、甲氧基或卤素，在C1-8烷基上可以有1个或2个相同或不同的取代基，取代基可以是氧＝O、羟基、甲氧基或卤素，条件是取代基不在同一位置上，R8为氢，R9为氢，R10为氢，R11为C1-8烷基酰氧基、苯甲酰氧基、芳烃基甲酰氧基，R12为氢，n＝0-7，但是不包括 根据本发明，优选式Ic化合物或其立体异构体包括 其中，R1为氢，R2为氢，R3为C1-8烷酰氧基，R4为氢，R5为C1-8烷酰氧基，R6为氢，R7为肉桂酰氧基、脂环基C1-8烷基酰氧基、杂环基C1-8烷基酰氧基、芳环基C1-8烷基酰氧基，包括苯基C1-8烷基酰氧基，在苯基上可以有1个或2个相同或不同的取代基，取代基可以是叠氮基、甲氧基或卤素，在C1-8烷基上可以有1个或2个相同或不同的取代基，取代基可以是氧＝O、羟基、甲氧基或卤素，条件是取代基不在同一位置上，R8为氢，
R9为羟基，C1-8烷基酰氧基，R10为氢，R11为羟基、C1-8烷基酰氧基、苯甲酰氧基、芳烃基甲酰氧基，R12为氢，n＝0-7，根据本发明，优选式Id化合物或其立体异构体包括 其中，R1为氢，R2为氢，R3R4为＝O，R5为C1-8烷酰氧基，R6为氢，R7为肉桂酰氧基、脂环基C1-8烷基酰氧基、杂环基C1-8烷基酰氧基、芳环基C1-8烷基酰氧基，包括苯基C1-8烷基酰氧基，在苯基上可以有1个或2个相同或不同的取代基，取代基可以是叠氮基、甲氧基或卤素，在C1-8烷基上可以有1个或2个相同或不同的取代基，取代基可以是氧＝O、羟基、甲氧基或卤素，条件是取代基不在同一位置上，R8为氢，R9为氢，
R10为氢，R11为羟基、C1-8烷基酰氧基、苯甲酰氧基、芳烃基甲酰氧基，R12为氢，n＝0-7，根据本发明，优选式Ie化合物或其立体异构体包括 其中，A环上双键位于C12与C13，R1为氢，R2不存在，R3R4为＝O，R5为C1-8烷酰氧基，R6为氢，R7为肉桂酰氧基、脂环基C1-8烷基酰氧基、杂环基C1-8烷基酰氧基、芳环基C1-8烷基酰氧基，包括苯基C1-8烷基酰氧基，在苯基上可以有1个或2个相同或不同的取代基，取代基可以是叠氮基、甲氧基或卤素，在C1-8烷基上可以有1个或2个相同或不同的取代基，取代基可以是氧＝O、羟基、甲氧基或卤素，条件是取代基不在同一位置上，R8为氢，R9为氢，R10为氢，R11为C1-8烷基酰氧基、苯甲酰氧基、芳烃基甲酰氧基，
R12为氢，n＝0-7，应当明白的是，上述式Ia～Ie化合物或其立体异构体是本发明通式(I)化合物的特例或其亚类，式Ia～Ie化合物均在本发明通式(I)化合物范围内。
根据本发明，本发明通式(I)化合物包括更优选下面具体的化合物或其立体异构体5α-去乙酰-14-脱乙酰氧基-13-氧-5α-苯丙酰氧基-新杉素A 5α-去乙酰-14-脱乙酰氧基-13-氧-5α-苯丙烯酰氧基-新杉素A 5α-去乙酰-14-脱乙酰氧基-13-氧-5α-苯乙酰氧基-新杉素A 5α-去乙酰-14-脱乙酰氧基-13-氧-5α-苯甲酰氧基-新杉素A 5α-去乙酰-14-脱乙酰氧基-13-氧-5α-(2，5-二甲氧基苯乙酰氧基)-新杉素A 5α-去乙酰-14-脱乙酰氧基-13-氧-5α-苯甲酰丙酰氧基-新杉素A 5α-去乙酰-14-脱乙酰氧基-13-氧-5α-苯丁酰氧基-新杉素A 5α-去乙酰-5α-苯丙酰氧基-新杉素A 5α-去乙酰-5α-苯丙烯酰氧基-新杉素A 5α-去乙酰-9α-乙酰氧基-5α-苯丙酰基-新杉素A 5α-去乙酰-14-脱乙酰氧-13-氧-5-3’-吲哚丙酰氧基-新杉素A 5α，14β-二去乙酰-14-氧-5α-苯丙酰氧基-新杉素A
在本发明中涉及多种制备本发明通式(I)化合物的方法，以下为了方便起见，以下将详细说明之。制备方法(一)的反应路线为制备方法(二)的反应路线为 SINENXAN A a-1 a-2a-3 a-4a-5 Rb＝Ac or R′COIa SINENXANA Ra＝Ac or Hb-1 Rb＝R′CO or Acb-2制备方法(三)的反应路线为 SINENXANA c-1 Ra＝Ac or HRb＝R′CO or Acc-2 Ic
制备方法(四)的反应路线为 SINENXANA R＝Ac or Hd-1 Pg为保护基团 R′为各类烃包括芳香烃和脂肪烃d-2d-3 d-4Id方法V R′为各类烃包括芳香烃和脂肪烃d-4Ie
通过以上的的反应路线可以明了，本发明事实上包括五种制备方法，其中，以下涉及一种通式(I)化合物的制备方法，包括以下步骤(1)在水溶性有机溶剂中，用碱性水溶液处理新杉素A进行选择性水解，得式a-1化合物，即14β-去乙酰-新杉素A；(2)在碱性介质存在下，在有机溶剂中，化合物式a-1与二硫化碳，碘甲烷反应进行原磺酰酯化生成式-2化合物，即14β-去乙酰-14β-原磺酸酯-新杉素A；(3)经步骤2得到的式-2化合物14β-去乙酰-14β-原磺酸酯-新杉素A经过脱氧处理，生成式a-3化合物，即14-脱氧-新杉素A；(4)经步骤3得到的式a-3化合物14-脱氧-新杉素A，经过烯丙位氧化，得式a-4化合物，即14-脱氧-13-氧-新杉素A；(5)经步骤4得到的式a-4化合物14-脱氧-13-氧-新杉素A用碱水解，干燥后，于有机溶剂中，经有机碱处理，与乙酸酐反应进行选择性酰化得到式a-5化合物，即5α-去乙酰-14-脱氧-13-氧-新杉素A；(6)经步骤5得到的式a-5化合物于干燥的有机溶剂中，在DCC和有机碱存在下与R’COOH反应成酯得到通式Ia化合物，即5α-去乙酰-14-脱氧-13-氧-5α-R’酰基-新杉素A。
换言之，本发明通式I化合物的制备方法包括以下步骤步骤1新杉素A(Sinenxan A)在有机溶剂中，用KOH或K2CO3水溶液处理，生成式a-1化合物(14β-去乙酰-新杉素A)。该步骤选用水溶性有机溶剂中进行，如甲醇，乙醇，THF，以及一些混合溶剂，如甲醇/二氯甲烷溶液，甲醇/丙酮溶液等，其中优选混合溶剂，以甲醇/二氯甲烷溶液为最佳；反应是在0℃-40℃下进行，优选10℃-15℃；KOH或K2CO3水溶液不宜太浓，优选2mol/L-4mol/L。
步骤2式a-1化合物在碱性介质存在下，于有机溶剂中，与二硫化碳，碘甲烷反应生成式a-2化合物(14β-去乙酰-14β-原磺酸酯-新杉素A)。该反应一般在四氢呋喃，乙醚，二氧六环等不干扰反应的无水有机溶剂中进行，以四氢呋喃最佳；使用碱可以是氢氧化钠，氢钠，叔丁醇钾等无水碱，其中以氢钠最佳。该反应分两个阶段，第一个阶段，加入碱，二硫化碳一般在室温-回流温度下进行，优选回流温度；第二个阶段，与碘甲烷形成原磺酸酯，需在较低的温度20-50℃进行，优选40-50℃。
步骤3生成的式a-2化合物在氮气保护下，于有机溶剂中，与Bu3SnH/AIBN反应生成式a-3化合物。该反应采用甲苯、苯、二氧六环等较高温度的不干扰反应有机溶剂，通常这些溶剂需经无水，脱气处理，优选的是甲苯；反应一般在50-100C进行，优选70-80℃。
步骤4得到的式a-3化合物(14-脱氧-新杉素A)经PCC、NaOAc，或铬酐吡啶处理得到式a-4化合物。此步反应需在氮气保护下进行，所用有机溶剂为苯，二氯甲烷等不干扰反应的惰性有机溶剂，优选为苯；反应在室温-回流温度下进行，优选回流温度；反应时间一般不宜过长，以2-5h最佳。
步骤5得到的式a-4化合物(14-脱氧-13-氧-新杉素A)用碱水解，得到产物，不需纯化，干燥后，于有机溶剂中，经有机碱处理，与乙酸酐反应进行选择性酰化得到式a-5(5α-去乙酰-14-脱氧-13-氧-新杉素A)。该反应分两个阶段，第一个阶段，通常在甲醇或甲醇/四氢呋喃混合溶剂中进行，20-40℃下经2-4mol/L KOH或K2CO3水溶液处理，得到全水解产物；第二个阶段，一般有机溶剂和碱选用吡啶或二氯甲烷/DMAP等，反应在温度为20-50℃下进行，其中优选20-30℃。
步骤6得到式a-5化合物于干燥的有机溶剂中，在DCC和有机碱存在下与R’COOH反应成酯得到式Ia(5α-去乙酰-14-脱氧-13-氧-5α-R’酰基-新杉素A)。此步反应所用有机溶剂优选为甲苯、二氯甲烷等不干扰反应的惰性有机溶剂，以甲苯最佳；有机碱采用DMAP，4-PP，三乙胺等，优选DMAP；反应一般在20-50℃条件下进行，优选30-35℃。
在本发明中，步骤5，可以通过控制反应条件，进行选择性水解和选择性酰化，得到2，5，10不同位置羟基化合物，(如I-5化合物在-10-0℃下用2倍当量的1mol/L K2CO3水溶液处理1h得到10β-去乙酰-14-脱氧-13-氧-新杉素A)；随后与不同酸缩合，得到不同位置的酯化产物。
本发明还包括一种通式(I)化合物的制备方法，包括(1)新杉素A在有机溶剂中，经碱作用，得到全水解产物2α，5α，10β，14β-四去乙酰-新杉素A；干燥后，经有机碱处理，与乙酸酐反应进行选择性酰化生成式b-1化合物，即5α-去乙酰-新杉素A；(2)经步骤2得到的化合物b-1于干燥的有机溶剂中，在DCC和有机碱存在下与R’COOH反应成酯得到通式Ib化合物5α-去乙酰-5α-R’酰基-新杉素A。
换言之，本发明的通式(I)化合物的第二种制备方法包括以下步骤步骤1新杉素A在有机溶剂中，经碱作用反应水解，得到全水解产物(2α，5α，10β，14β-四去乙酰-新杉素A)，干燥后，经有机碱处理，与乙酸酐反应进行选择性酰化生成式b-1化合物(5α-去乙酰-新杉素A)。该反应水解所用溶剂为甲醇，乙醇，也可以是混合溶剂如甲醇/二氯甲烷，甲醇/丙酮，甲醇/四氢呋喃等，其中优选甲醇，甲醇/四氢呋喃；所用碱一般为K2CO3或KOH，反应在10-60℃下进行，优选20-40℃；随后酰化一般在吡啶中进行，20-40℃下反应。
步骤2得到的羟基化合物b-1于干燥的有机溶剂中，在DCC和有机碱存在下与R’COOH反应成酯得到式Ib(5α-去乙酰-5α-R’酰基-新杉素A)。此步反应所用有机溶剂可以是甲苯、二氯甲烷等不干扰反应的惰性有机溶剂，有机碱采用DMAP，4-DP，三乙胺等，反应一般在20-40℃条件下进行。
另外，在本方法中，经过步骤1通过控制反应条件，可以对新杉素A进行选择性水解和选择性酰化，得到2，5，10不同位置单羟基或多羟基化合物。
本发明还涉及一种通式(I)化合物的制备方法，包括以下步骤(1)将新杉素A溶于无水乙醇中，加入培养的银杏悬浮细胞中，浓度可为10-40mg/L，反应2-18天得到式c-1化合物，即9α-羟基-新杉素A；(2)经步骤1得到的式c-1化合物9α-羟基-新杉素A在有机溶剂中，经碱作用，得到全水解产物(2α，5α，10β，14β-四去乙酰-9α-羟基-新杉素A)，干燥后，经有机碱处理，与乙酸酐反应进行选择性酰化得到式c-2即5α-去乙酰-9α-乙酰基-新杉素A；(3)经得到羟基化合物于干燥的有机溶剂中，在DCC和有机碱存在下与R’COOH反应成酯得到式Ic化合物，即5α-去乙酰-5α-R’酰基-9α-乙酰基-新杉素A。
换言之，本发明还涉及第三种通式(I)化合物的制备方法，它包括以下步骤步骤1新杉素A溶于无水乙醇中，取适量在适当时期加入培养的银杏悬浮细胞中，反应数天得到式c-1化合物。按照公知的方法进行银杏悬浮细胞的培养，培养温度18-33℃，优选20-30℃，以25±2℃最佳；新杉素A加入浓度可为10-40mg/L，优选20-30mg/L，以20mg/L最佳；新杉素A的加入时期为细胞周期的6-18天，优选12-18天；反应时间可为2-18天，优选6-10天。
步骤2式c-1化合物(9α-羟基-新杉素A)在有机溶剂中，经碱作用，得到全水解产物(2α，5α，10β，14β-四去乙酰-9α-羟基-新杉素A)，干燥后，经有机碱处理，与乙酸酐反应进行选择性酰化得到式c-2化合物(5α-去乙酰-9α-乙酰基-新杉素A)。该反应水解所用溶剂为甲醇，乙醇，也可以是混合溶剂如甲醇/二氯甲烷，甲醇/丙酮，甲醇/四氢呋喃等，所用碱一般为K2CO3或KOH，反应温度控制在20-60℃，优选20-40℃。随后酰化一般在吡啶中进行，室温-40℃下反应。
步骤3得到羟基化合物于干燥的有机溶剂中，在DCC和有机碱存在下与R’COOH反应成酯得到式Ic(5α-去乙酰-5α-R’酰基-9α-乙酰基-新杉素A)。此步反应所用有机溶剂可以是甲苯、二氯甲烷等不干扰反应的惰性有机溶剂，有机碱采用DMAP，4-PP，三乙胺等，反应一般在20-40℃条件下进行。
另外，在步骤1中可通过控制反应条件，对新杉素A进行选择性水解和选择性酰化，得到2，5，10不同位置的单羟基或多羟基化合物本发明还涉及一种通式(I)化合物第三种制备方法，它包括以下步骤(1)新杉素A在有机溶剂中，经碱作用，得到全水解产物，即2α，5α，10β，14β-四去乙酰-新杉素A，干燥后，经有机碱处理，与乙酸酐反应进行选择性酰化生成式d-1化合物，即5α，14β-二去乙酰-新杉素A)；(2)经步骤1得到式d-1化合物5α，14β-二去乙酰-新杉素A在有机碱存在下，与保护基的作用得到式d-2化合物；(3)经步骤2得到式d-2化合物于干燥的有机溶剂中，在DCC和有机碱存在下与R’COOH反应成酯得到式d-3化合物，即5α，14β-二去乙酰-14β-Pg-5α-R’酰基-新杉素A，所述的式d-3化合物可干燥后直接溶于有机溶剂，在酸性介质中脱去保护，得到式d-4化合物；(4)经对步骤3得到的式d-4化合物脱保护后，得到的产物浓缩干燥后，溶于有机溶剂，用PCC氧化可得到通式(I)d化合物。
由此可见，在本发明中，还涉及第四种通式(I)化合物的制备方法，它包括以下步骤步骤1新杉素A在有机溶剂中，经碱作用，得到全水解产物(2α，5α，10β，14β-四去乙酰-新杉素A)，干燥后，经有机碱处理，与乙酸酐反应进行选择性酰化生成式d-1化合物(5α，14β-二去乙酰-新杉素A)。该反应水解所用条件同上述的第二种制备方法。随后酰化一般在吡啶中进行，20-60℃下反应2-4h，其中优选温度40-60℃。
步骤2得到的d-1化合物，在有机碱存在下，与保护基如TMSCl、TESCl，TBDMSCl等作用得到式d-2化合物。此步反应所用溶剂通常是干燥的不干扰反应的有机溶剂，如四氢呋喃，二氯甲烷，DMF等，优选混合溶剂二氯甲烷/DMF。碱一般用有机弱碱如咪唑、DMAP等。为提高选择性，反应一般在-78--20℃条件下进行，优选-50--30℃。
步骤3得到羟基化合物d-2化合物于干燥的有机溶剂中，在DCC和有机碱存在下与R’COOH反应成酯得到式d-3化合物(5α，14β-二去乙酰-14β-Pg-5α-R’酰基-新杉素A)。该反应所用有机溶剂可以是甲苯、二氯甲烷等不干扰反应的惰性有机溶剂，有机碱采用DMAP，4-PP，三乙胺等，反应一般在20-40℃条件下进行。所得产物可干燥后直接溶于有机溶剂，在酸性介质中脱去保护，得到式d-4化合物。通常所用溶剂是甲醇，四氢呋喃等极性较大溶剂。酸性介质一般用极稀的盐酸或其他有机酸稀溶液，以免发生副反应。
步骤4对脱保护的产物浓缩干燥后，将其溶于有机溶剂，用PCC氧化可得到式Id化合物。该步骤中使用的有机溶剂可以是苯，二氯甲烷，氯仿等，以干燥的二氯甲烷为最佳。
最后，本发明还涉及另一种通式(I)化合物的制备方法，该方法包括将上述式d-4化合物经氧化剂氧化，再与酸性介质反应硅胶发生双键转移，可得生成通式Ie化合物。
实际上上述的制备方法为本发明所涉及的第五种制备方法，它包括由方法IV制备化合物d-4经氧化剂氧化，再与酸性介质反应硅胶发生双键转移，可得生成式Ie化合物。该步骤中使用的有机溶剂可用干燥的氯仿，二氯甲烷，苯，THF等，其中优选二氯甲烷或苯，以二氯甲烷最佳；氧化剂可以是TPAP，PCC，PCC/乙酸钠等，优选为PCC或TPAP；酸性介质可以是硅胶，三氟乙酸，对甲苯磺酸，较浓的盐酸，HF等，其中优选为硅胶或HF，以硅胶最佳。
本发明另一方面还涉及一种药物组合物，它包括至少一种治疗有效剂量的通式(I)化合物和/或立体异构体或其药用盐例如药用酸盐和药学上可接受的载体。
本发明还涉及上述通式(I)化合物或其立体异构体在制备抗恶性肿瘤药物，尤其是治疗多药耐药肿瘤的药物和逆转多药耐药肿瘤的耐药性药物中的用途。
本发明的通式(I)化合物或含有它的药物组合物可以单位剂量形式给药，给药途径可为肠道或非肠道，如口服、肌肉、皮下、鼻腔、口腔粘膜、皮肤、腹膜或直肠等。给药剂型例如片剂、胶囊、滴丸、气雾剂、丸剂、粉剂、溶液剂、混悬剂、乳剂、颗粒剂、栓剂、冻干粉针剂等，可以是普通制剂、缓释制剂、控释制剂及各种微粒给药系统。将单位给药剂型制成片剂，可以广泛使用本领域公知的各种载体。关于药用载体的例子是，例如稀释剂与吸收剂，如淀粉、糊精、硫酸钙、乳糖、甘露醇、蔗糖、氯化钠、葡萄糖、尿素、碳酸钙、白陶土、微晶纤维素、硅酸铝等；湿润剂与粘合剂，如水、甘油、聚乙二醇、乙醇、丙醇、淀粉浆、糊精、糖浆、蜂蜜、葡萄糖溶液、阿拉伯胶浆、明胶浆、羧甲基纤维素钠、紫胶、甲基纤维素、磷酸钾、聚乙烯吡咯烷酮等；崩解剂，例如干燥淀粉、海藻酸盐、琼脂粉、褐藻淀粉、碳酸氢钠与枸橼酸、碳酸钙、聚氧乙烯山梨糖醇脂肪酸酯、十二烷基磺酸钠、甲基纤维素、乙基纤维素等；崩解抑制剂，例如蔗糖、三硬脂酸甘油酯、可可脂、氢化油等；吸收促进剂，例如季铵盐、十二烷基硫酸钠等；润滑剂，例如滑石粉、二氧化硅、玉米淀粉、硬脂酸盐、硼酸、液体石蜡、聚乙二醇等。还可以将片剂进一步制成包衣片，例如糖包衣片、薄膜包衣片、肠溶包衣片，或双层片和多层片。为了将给药单元制成丸剂，可以广泛使用本领域公知的各种载体。关于载体的例子是，例如稀释剂与吸收剂，如葡萄糖、乳糖、淀粉、可可脂、氢化植物油、聚乙烯吡咯烷酮、Gelucire、高岭土、滑石粉等；粘合剂，如阿拉伯胶、黄蓍胶、明胶、乙醇、蜂蜜、液糖、米糊或面糊等；崩解剂，如琼脂粉、干燥淀粉、海藻酸盐、十二烷基磺酸钠、甲基纤维素、乙基纤维素等。为了将给药单元制成栓剂，可以广泛使用本领域技术人员公知的各种载体。关于这类载体的例子是，例如聚乙二醇、卵磷脂、可可脂、高级醇、高级醇的酯、明胶、半合成甘油酯等。为了将给药单元制成胶囊，将有效成分通式(I)化合物或其立体异构体与上述的各种载体混合，并将由此得到的混合物置于硬的明胶囊或软胶囊中。也可将有效成分通式(I)化合物或其立体异构体制成微囊剂，混悬于水性介质中形成混悬剂，亦可装入硬胶囊中或制成注射剂应用。为了将给药单元制成注射用制剂，如溶液剂、乳剂、冻干粉针剂和混悬剂，可以使用本领域常用的所有稀释剂，例如，水、乙醇、聚乙二醇、1，3-丙二醇、乙氧基化的异硬脂醇、多氧化的异硬脂醇、聚氧乙烯山梨醇脂肪酸酯等。另外，为了制备等渗注射液，可以向注射用制剂中添加适量的氯化钠、葡萄糖或甘油，此外，还可以添加常规的助溶剂、缓冲剂、pH调节剂等。
此外，如需要，也可以向药物制剂中添加着色剂、防腐剂、香料、矫味剂、甜味剂或其它材料。
本发明通式(I)化合物或其立体异构体的给药剂量取决于许多因素，例如所要预防或治疗疾病的性质和严重程度，患者或动物的性别、年龄、体重及个体反应，所用的具体化合物，给药途径及给药次数等。上述剂量可以单一剂量形式或分成几个，例如二、三或四个剂量形式给药。
为了进一步理解本发明，下面的实施例以及药理实验仅仅用来进一步说明本发明，但并不是意味对本发明的任何限制。
实施例实施例15α-去乙酰-14-脱乙酰氧基-13-氧-5α-苯丙酰氧基-新杉素A 步骤114β-去乙酰-新杉素A503mg(0.9976mmol)新杉素A于30ml甲醇与4ml二氯甲烷的混合溶液中，0C下加入2mol/L KOH 5.0ml(10.0mmol)，搅拌3.5h，室温(8℃)继续5h。以5％HCl水溶液调PH至6-7，减压浓缩，以乙酸乙酯(3×50ml)提取，合并有机相，依次以饱和NaHCO3溶液，brine洗，无水Na2SO4干燥。减压蒸除溶剂，得到的粗产品，用硅胶柱层析纯化，石油醚/二氯甲烷/丙酮(10/10/1，5/20/1)的混合溶剂洗脱，得所需产物200mg，收率43.4％。步骤214β-去乙酰-14β-原磺酸酯-新杉素A1.6g(3.4632mmol)14β-去乙酰-新杉素A于45mL四氢呋喃(经无水处理)中，加入831mg(20.78mmol)NaH(60％于矿油中)，4.1ml(0.06926mmol)CS2，回流12h，降至室温，加入1ml(17.32mmol)碘甲烷，升至40-50℃继续搅拌2.5h，降至室温过滤，浓缩，以200ml乙酸乙酯提取，依次以饱和氯化铵水溶液、brine洗，无水Na2SO4干燥，减压蒸除溶剂，硅胶柱层析纯化，石油醚/乙酸乙酯(6/1，5/1，4/1)得所需产品1.82g，收率95.2％。步骤314-脱乙酰氧基-新杉素A氮气保护下，1.53g(2.7717mmol)14β-去乙酰-14β-原磺酸酯-新杉素A于100ml甲苯(经无水及脱气处理)升温至75-85℃，稳定后加入7.47ml(27.717mmol)Bu3SnH，46mg(0.27717mmol)AIBN，搅拌7h。浓缩，20ml丙酮稀释6g粗硅胶拌样，硅胶柱层析纯化，石油醚/乙酸乙酯(8/1，7/1，6/1)得所需产物0.986g，收率79.8％。FABMS447.1(M+1)1HNMR(CDCl3，δ)6.06(dd，1H，J＝5.3Hz，12.3Hz，10-H)，5.38(dd，1H，J＝2Hz，6.3Hz，2-H)，5.266(t，1H，J＝3Hz，5-H)，5.250(s，1H，20-H)，4.891(s，1H，20-H)，3.084(d，1H，J＝6Hz，3-H)，2.45(m，1H，，13-H)，2.375(dd，1H，J＝12Hz，14.5Hz，9-H)，2.12(s，3H，10-OAc-CH3)，2.062(s，3H，2-OAc-CH3)，2.045(s，3H，5-OAc-CH3)，2.033(s，3H，18-CH3)，2.094-1.87(m，3H，1-H，13-H，14-H)，1.80(m，2H，6-H，7-H)，1.68(m，1H，6-H)，1.588(s，3H，16-CH3)，1.588(m，1H，9-H)，1.22(m，7-H)，1.055(s，3H，17-CH3)，0.849(s，3H，19-CH3)步骤414-脱乙酰氧基-13-氧-新杉素A在氮气保护下，1.26g(20825mmol)14-脱乙酰氧基-新杉素A于160ml苯(无水)中，依次加入6.95g(84.75mmol)无水NaOAc，18.2g Celite，18.2g(84.75mmol)PCC，加热至95℃回流11h，过滤，残渣用500ml乙醚洗，合并滤液，减压浓缩，硅胶柱层析纯化，石油醚/丙酮(8/1)得所需产物650mg，回收原料300mg，基于原料75.6％的转化，收率65.7％。FABMS461.3(M+1)1HNMR(CDCl3，δ)6.06(dd，1H，J＝12Hz，5.5Hz，10-H)，5.46(dd，1H，J＝2Hz，6.5Hz，2-H)，5.266(s，1H，20-H)，5.226(t，J＝3Hz，1H，5-H)，4.816(s，1H，20-H)，3.187(d，1H，J＝6Hz，3-H)，2.87(dd，1H，J＝6.7Hz，19.7Hz，14-H)，2.48(dd，1H，J＝12Hz，15Hz，9-H)，2.328(d，1H，J＝19.5Hz，14-H)，2.196(s，3H，10-OAc-CH3)，2.142(dd，1H，J＝2Hz，6.7Hz，1-H)，2.097(s，3H，2-OAc-CH3)，2.063(s，3H，5-OAc-CH3)，1.990(s，3H，18-CH3)，2.14-1.85(m，1H，7-H)，1.79(m，3H，6-H，9-H)，1.691(s，3H，16-CH3)，1.21(m，7-H)，1.132(s，3H，17-CH3)，0.903(s，3H，19-CH3)步骤55α-去乙酰-14-脱乙酰氧基-13-氧-新杉素A32.5mg(0.07065mmol)14-脱乙酰氧基-13-氧-新杉素A于2.5ml甲醇中，加入0.26ml 4mol/L KOH室温搅拌38.5h，以4mol/L HCl水溶液调PH值至6-7，浓缩，用乙酸乙酯(3×15ml)提取，合并有机相，依次用饱和碳酸氢钠水溶液，brine洗，无水硫酸钠干燥，减压蒸去溶剂，真空干燥。得到25.5mg粗产品，溶于2ml吡啶，加入0.05ml乙酸酐(0.5294mmol)搅拌，0-4℃1.5h，室温7h，加入0.1ml甲醇，继续搅拌10min，减压浓缩，50ml乙酸乙酯稀释，1mol/L盐酸，饱和CuSO4水溶液，饱和碳酸氢钠水溶液，brine洗，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，TLC纯化，石油醚/丙酮(2.5/l)，得所需产物10mg，两步收率33.9％步骤65α-去乙酰-14-脱乙酰氧基-13-氧-5α-苯丙酰氧基-新杉素A27mg(0.0587mmol)5α-去乙酰-14-脱乙酰氧基-13-氧-新杉素A于2ml甲苯中，加入26mg(0.1262mmol)DCC，40mg(0.1393mmol)苯丙酸室温搅拌15min，加入17mg(0.1393mmol)DMAP继续反应6h，加入甲醇终止反应，浓缩，用乙酸乙酯提取，依次用1mol/L盐酸，饱和碳酸氢钠水溶液，brine洗，无水硫酸钠干燥，减压蒸去溶剂，TLC纯化，石油醚/乙酸乙酯(1.5/1)，得所需产物30mg，收率84.5％。mp.117.2℃FABMS551.3(M+1)1HNMR(CDCl3，δ)7.33-7.21(5H，Ph)，6.06(dd，1H，J＝12.3Hz，6Hz，10-H)，5.48(dd，1H，J＝1.5Hz，6.7Hz，2-H)，5.28(s，1H，20-H)，5.24(br.s，1H，5-H)，4.842(s，1H，20-H)，3.167(d，1H，J＝6Hz，3-H)，2.955(t，2H，J＝8Hz，2’-CH2)，2.81(dd，1H，J＝6.5Hz，20Hz，14-H)，2.63(m，1H，3’-CH2)，2.53(m，1H，3’-CH2)，2.50(dd，1H，J＝12Hz，15Hz，9-H)，2.32(d，1H，J＝20Hz，14-H)，2.179(s，3H，10-OAc-CH3)，2.16(dd，1H，J＝1.5Hz，6.5Hz，1-H)，2.117(s，3H，2-OAc-CH3)，2.088(s，3H，18-CH3)，1.91(m，1H，7-H)，1.78(m，3H，6-H，9-H)，1.711(s，3H，16-CH3)，1.28(m，7-H)，1.154(s，3H，17-CH3)，0.919(s，3H，19-CH3)实施例25α-去乙酰-14-脱乙酰氧基-13-氧-5α-苯丙烯酰氧基-新杉素A
按照实施例1描述的方法，步骤6中，用肉桂酸代替苯丙酸制备期待产物。白色固体，mp146.8-148℃FABMS1HNMR(CDCl3，δ)7.795(d，2H，J＝6.5Hz，Ph-2，6-H)，7.68(d，1H，J＝16Hz，3’H)，7.44(m，3H，Ph-3，4，5-H)，6.48(d，1H，J＝16.5Hz，2’H)，6.10(dd，1H，J＝6Hz，12.3Hz，10-H)，5.517(dd，1H，J＝2Hz，6.5Hz，2-H)，5.317(s，1H，20-H)，5.361(br.s，1H，5-H)，4.836(s，1H，20-H)，3.38(d，1H，J＝7Hz，3-H)，2.86(dd，1H，J＝7Hz，20Hz，14-H)，2.525(dd，1H，J＝12Hz，15Hz，9-H)，2.477(d，1H，J＝20Hz，14-H)，2.26(s，3H，10-OAc-CH3)，2.10(dd，1H，J＝1.5Hz，6.7Hz，1-H)，2.123(s，3H，2-OAc-CH3)，2.096(s，3H，18-CH3)，1.97(m，2H，6-H，7-H)，1.83(m，2H，6-H，9-H)，1.735(s，3H，16-CH3)，1.344(m，7-H)，1.185(s，3H，17-CH3)，0.959(s，3H，19-CH3)实施例35α-去乙酰-14-脱乙酰氧基-13-氧-5α-苯乙酰氧基-新杉素A按照实施例1描述的方法，步骤6中，用苯乙酸代替苯丙酸制备期待产物。 白色固体，mp51.1-51.9℃FABMS571.5(M+K+1)，537.5(M+1)1HNMR(CDCl3，δ)7.35-7.24(5H，Ph)，6.08(dd，1H，J＝12Hz，5.5Hz，10-H)，5.48(dd，1H，J＝2Hz，6.5Hz，2-H)，5.267(s，1H，20-H)，5.238(t，1H，J＝2Hz，5-H)，4.834(s，1H，20-H)，3.55(q，2H，J＝17Hz，2’CH2)3.105(d，1H，J＝6.5Hz，3-H)，2.835(dd，1H，J＝7Hz，19.7Hz，14-H)，2.50(dd，1H，J＝11.7Hz，15Hz，9-H)，2.37(d，1H，J＝19.5Hz，14-H)，2.24(s，3H，10-OAc-CH3)，2.62(dd，1H，J＝2Hz，7Hz，1-H)，2.101(s，3H，2-OAc-CH3)，2.064(s，3H，18-CH3)，1.95(m，1H，7-H)，1.80(m，3H，6-H， 9-H)，1.703(s，3H，16-CH3)，1.29(m，1H7-H)，1.154(s，3H，17-CH3)，0.894(s，3H，19-CH3)实施例45α-去乙酰-14-脱乙酰氧基-13-氧-5α-苯甲酰氧基-新杉素A按照实施例1描述的方法，步骤6中，不用DCC，用苯甲酰氯代替苯丙酸，制备期待产物。白色固体，mp137-138.5℃FABMS523.4(M+1)1HNMR(CDCl3，δ)7.82(d，2H，J＝7.5Hz，Ph-2，6-H)，7.607(t，1H，J＝7.3Hz，3-H)，7.538(t，2H，J＝7.5Hz，Ph-4，5-H)6.02(dd，1H，J＝12Hz，5.5Hz，10-H)，5.524(d，1H，J＝7Hz，2-H)，5.404(s，1H，5-H)，5.375(s，1H，20-H)，4.815(s，1H，20-H)，3.243(d，1H，J＝7Hz，3-H)，2.836(dd，1H，J＝7Hz，19.5Hz，14-H)，2.41(dd，1H，J＝12.5Hz，14.5Hz，9-H)，2.472(d，1H，J＝20Hz，14-H)，2.21(d，1H，J＝7.5Hz，1-H)，2.077(s，3H，10-OAc-CH3)，2.002(s，3H，2-OAc-CH3)，1.951(s，3H，18-CH3)，2.07-1.915(m，3H，2×6-H，7-H)，1.78(dd，1H，J＝14.7Hz，6.7Hz，9-H)，1.713(s，3H，16-CH3)，1.35(m，1H，7-H)，1.120(s，3H，17-CH3)，0.966(s，3H，19-CH3)实施例55α-去乙酰-14-脱乙酰氧基-13-氧-5α-(2，5-二甲氧基苯乙酰氧基)-新杉素A 按照实施例1描述的方法，步骤6中，用2，5-二甲氧基苯乙酸代替苯丙酸，制备期待产物。白色固体，mp69.5-70.5℃FABMS596.3(M+)1HNMR(CDCl3，δ)6.825-6.75(m，3H，Ph)，6.09(dd，1H，J＝5.5Hz，12Hz，10-H)，5.484(dd，1H，J＝1.5Hz，6.5Hz，2-H)，5.272(s，1H，20-H)，5.252(br.s，1H，5-H)，4.825(s，1H，20-H)，3.769(s，3H，5-OCH3)，3.759(s，3H，2-0CH3)，3.596(d，1H，J＝17Hz，2’-H)，3.407(d，1H，J＝17Hz，2’-H)，3.232(d，1H，J＝6.5Hz，3-H)，2.812(dd，1H，J＝7Hz，20Hz，14-H)，2.498(dd，1H，J＝12.3Hz，14.7Hz，9-H)，2.387(d，1H，J＝20Hz，14-H)，2.243(s，3H，10-OAc-CH3)，2.155(d，1H，J＝5.5Hz，1-H)，2.096(s，3H，2-OAc-CH3)，2.066(s，3H，18-CH3)，2.17-1.96(m，1H，7-H)，1.834(m，2H，6-H)，1.768(dd，1H，J＝14.7Hz，5.7Hz，9-H)，1.701(s，3H，16-CH3)，1.28(m，1H，7-H)，1.140(s，3H，17-CH3)，0.914(s，3H，19-CH3)实施例65α-去乙酰-14-脱乙酰氧基-13-氧-5α-苯甲酰丙酰氧基-新杉素A 按照实施例1描述的方法，步骤6中，用4-羰基-苯丁酸代替苯丙酸，制备期待产物。白色固体。FABMS579.3(M+1)1HNMR(CDCl3，δ)7.993(d，2H，J＝7.5Hz，Ph-2，6-H)，7.556-7.444(m，3H，Ph-3，4，5-H)，6.092(dd，1H，J＝12Hz，5.5Hz，10-H)，5.475(dd，1H，J＝1.5Hz，6.3Hz，2-H)，5.265(s，1H，20-H)，5.246(br.s，1H，5-H)，4.827(s，1H，20-H)，3.396(m，1H，3’-CH2)，3.193(m，2H，3-H，3’-CH2)，2.79(dd，1H，J＝7Hz，20Hz，14-H)，2.755(m，1H，J＝8Hz，2’-CH2)，2.56(m，1H，2’-CH2)2.49(dd，1H，J＝12.3Hz，14.7Hz，9-H)，2.369(d，1H，J＝20Hz，14-H)，2.254(s，3H，10-OAc-CH3)，2.145(dd，1H，J＝1.7Hz，6.7Hz，1-H)，2.09(s，3H，2-OAc-CH3)，2.064(s，3H，18-CH3)，2.01(m，1H，7-H)，1.86(m，2H，6-H)，1.772(dd，1H，J＝5.7Hz，14.7Hz，9-H)，1.696(s，3H，16-CH3)，1.563(s，3H，17-CH3)，1.308(m，1H，7-H)，1.133(s，3H，19-CH3)实施例75α-去乙酰-14-脱乙酰氧基-13-氧-5α-苯丁酰氧基-新杉素A 按照实施例1描述的方法，步骤6中，用苯丁酸代替苯丙酸，制备期待产物。白色固体。FABMS565.2(M+1)1HNMR(CDCl3，δ)7.306-7.172(m，5H，Ph)，6.049(dd，1H，J＝11.7Hz，5.7Hz，10-H)，5.461(dd，1H，J＝1.5Hz，6.5Hz，2-H)，5.265(s，1H，20-H)，5.232(t，J＝2.7Hz，1H，5-H)，4.817(s，1H，20-H)，3.396(m，1H，3’-CH2)，3.162(d，1H，J＝6Hz，3-H)，2.780(dd，1H，J＝6.7Hz，19.7Hz，14-H)，2.696(m，2H，2’-CH2)，2.481(dd，1H，J＝12Hz，15Hz，9-H)，2.309(d，1H，J＝20Hz，14-H)，2.241(m，2H，3’-CH2)2.155(s，3H，10-OAc-CH3)，2.137(dd，1H，J＝1.7Hz，7.3Hz，1-H)，2.094(s，3H，2-OAc-CH3)，2.060(s，3H，18-CH3)，1.906(m，3H，7-H，4’-CH2)，1.76(m，3H，6-H，9-H)，1.726(s，3H，16-CH3)，1.283(t，1H，J＝3.3Hz，7-H)，1.131(s，3H，17-CH3)，0.900(s，3H，19-CH3)实施例85α-去乙酰-5α-苯丙酰氧基-新杉素A 步骤A2α，5α，10β，14β-四去乙酰-新杉素A50mg(0.099mmol)新杉素A于2ml甲醇中，加入0.4ml 2mol/L KOH(0.8mmol)升温至40℃搅拌8h，减压浓缩至干，用乙酸乙酯溶解，滤去不溶物，减压蒸去溶剂，真空干燥，得到32mg所需产品，收率96％。步骤B5α-去乙酰-新杉素A60mg(0.1786mmol)2α，5α，10β，14β--四去乙酰-新杉素A溶于3ml吡啶，加入0.1ml乙酸酐(0.5294mmol)室温搅拌49h，加入0.2ml甲醇，继续搅拌10min，减压浓缩，20ml乙酸乙酯稀释，1mol/L盐酸，饱和CuSO4水溶液，饱和碳酸氢钠水溶液，brine洗，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，硅胶柱纯化，石油醚/乙酸乙酯(4/1-2/1)，得所需产物31mg，收率37.8％。步骤C5α-去乙酰-5α-苯丙酰氧基-新杉素A78mg(0.52mmol)苯丙酸于2ml甲苯中，加入40mg(0.1948mmol)DCC，室温搅拌15min，加入30mg(0.06494mmol)2α，10β，14β-三乙酰氧基-5α-羟基-新杉素A，79mg(0.6475mmol)DMAP继续反应4h，加入甲醇终止反应，浓缩，用乙酸乙酯提取，依次用1mol/L盐酸，饱和碳酸氢钠水溶液，brine洗，无水硫酸钠干燥，减压蒸去溶剂，硅胶柱纯化，石油醚/乙酸乙酯(6/1)，得所需产物25mg，收率65％。淡黄色油状物。FABMS587.2(M+Na)，565.2(M+1)1HNMR(CDCl3，δ)7.308-7.192(m，5H，Ph-H)，6.03(dd，1H，J＝12Hz，5.5Hz，10-H)，5.34(dd，1H，J＝2.5Hz，6.5Hz，2-H)，5.273(s，1H，20-H)，5.299(t，J＝3Hz，1H，5-H)4.985(dd，J＝4.5，9.5Hz，14-H)，4.879(s，1H，20-H)，2.99(m，2H，2’-CH2)，2.81(d，1H，J＝6.5Hz，3-H)，2.71(m，3H，3’-CH2，13-H)，2.41(dd，1H，J＝4.3，18.7Hz，13-H)，2.367(dd，1H，J＝12.3Hz，14.7Hz，9-H)，2.056(s，3H，10-OAc-CH3)，2.05(s，3H，2-OAc-CH3)2.023(s，3H，14-OAc-CH3，)2.009(s，3H，18-CH3)，1.91(m，1H，7-H)，1.877(d，1H，J＝2.29Hz，1-H)，1.75(m，2H，6-H)，1.65(s，3H，16-CH3)，1.61(dd，J＝6，15Hz，9-H)，1.106(s，3H，17-CH3)，0.832(s，3H，19-CH3)实施例95α-去乙酰-5α-苯丙烯酰氧基-新杉素A 按照实施例8描述的方法，步骤C中，用肉桂酸代替苯丙酸，制备期待产物。白色固体，mp75-78℃FABMS593(M+1)1HNMR(CDCl3，δ)7.76(d，1H，J＝6.02Hz，3’-H)7.39-7.57(m，5H，Ph)，6.53(d，1H，J＝6.02Hz，2’-H)6.07(dd，1H，J＝12.2Hz，5.7Hz，10-H)，5.36(dd，1H，J＝2.29Hz，6.49Hz，2-H)，5.34(s，1H，20-H)，5.33(br.s，1H，5-H)，5.04(dd，1H，J＝4.58，9.54Hz，14-H)4.93(s，1H，20-H)，2.99(d，J＝6.48Hz，3-H)2.82(dd，1H，J＝9.53Hz，19.45Hz，13-H)，2.47(dd，1H，J＝3.05，19.07Hz，13-H)，2.40(dd，1H，J＝12.21Hz，14.88Hz，9-H)，2.12，(s，3H，10-OAc-CH3)，2.08(s，3H，2-OAc-CH3)2.06(s，3H，14-OAc-CH3，)1.99(s，3H，18-CH3)，1.90(d，1H，J＝2.29Hz，1-H)，1.67(s，3H，16-CH3)，1.62(dd，J＝5.34，14.88Hz，9-H)，1.11(s，3H，17-CH3)，0.87(s，3H，19-CH3)实施例105α-去乙酰-9α-乙酰氧基-5α-苯丙酰基-新杉素A 步骤A9α-羟基-新杉素A的制备1)银杏悬浮细胞的培养银杏愈伤组织的诱导、培养及细胞悬浮培养体系的建立参见文献[1]。培养基为MS[]+0.5mg/L NAA(α-萘乙酸)+0.5mg/L 6-BA(6-苄基腺嘌呤)+0.2mg/L 2，4-D(2，4-二氯苯氧乙酸)，蔗糖用量为30g/L，消毒前pH调为5.8。所用摇瓶为500mL和1000mL的三角瓶，500mL三角瓶中盛装150mL培养基，1000mL中盛装330mL培养基，细胞接种量为5g/L培养物(干重)摇床振荡培养，摇床转速为110转/分钟，黑暗培养，培养温度为(25±2)℃。2)银杏细胞悬浮培养物对新杉素A的生物转化i)底物底物为新杉素A由中国医学科学院药物研究所生物合成室提供，是从云南红豆杉(Taxus yunnensis)愈伤组织培养物中分离得到，纯度经HPLC检查达到95％以上。准确称取Sinenxan A一定量，用无水乙醇溶解，配成浓度为20mg/mL的溶液，待用。ii)生物转化预试验 取上述新杉素A溶液0.5mL加入装有生长15天的银杏悬浮细胞的500mL三角瓶中，同时向另一三角瓶中加入0.5mL无水乙醇作为空白对照。再培养6天后将培养物减压滤去，并用蒸馏水将培养物清洗3次，每次蒸馏水用量为20mL，滤液合并，用等量乙酸乙酯萃取3次，萃取液减压浓缩至干，用少量丙酮溶出。培养物在50℃烘箱中烘干至恒重，用乙酸乙酯浸泡并超声提取0.5小时，滤去培养物后的溶液减压浓缩至干，用少量丙酮溶出。通过上述方法制得的样品与底物一起进行TLC检查。展开剂为丙酮-石油醚(1∶2.5)，喷10％硫酸乙醇溶液，加热至紫杉烷类化合物特有的棕褐色斑点出现为止。重复2次。iii)生物转化放大试验 经2次预试验确定银杏培养细胞对新杉素A有转化作用后，即进行放大试验。所用三角瓶容积为1000mL，共15瓶。待培养至15天后，于每瓶加上述底物新杉素A溶液1mL，在21天收获。滤去培养物并用适量蒸馏水清洗3次，合并滤液后用等量乙酸乙酯萃取5次，减压浓缩后用丙酮溶出。iv)生物转化产物的分离及鉴定 3)中丙酮溶出物减压滤去不溶物，浓缩后称重，得450mg残渣。硅胶柱层析进行分离，所用硅胶为薄层层析硅胶H(青岛海洋化工厂)，洗脱剂为丙酮-石油醚(1∶5-1∶1)，得一个产物，经1H-NMR，13C-NMR，1H-1H COSY，13C-1H COSY，FABMS，红外等光谱技术鉴定为2α，5α，10β，14β-四乙酰氧基-9α-羟基-新杉素A。v)9α-羟基-新杉素A制备的反应式、结构式、得率、分子量及比旋光度为 Sinenxan A 9-hydroxyl-sinenxan A1(60％)C28H40O9Exact Mass520.27Mol.Wt.520.61C，64.60；H，7.74；O，27.66[α]D20+44.6°(C＝0.0083，CH3OH)步骤B2α，5α，10β，14β-四去乙酰-9α-羟基-新杉素A135mg(0.260mmol)2α，5α，10β，14β-四乙酰氧基-9α-羟基-新杉素A于10ml甲醇和1ml丙酮中，加入1.2ml 4mol/L KOH(4.8mmol)室温搅拌34h，以6N HCl水溶液调PH值至6-7，浓缩，用乙酸乙酯(15ml)提取，有机相，依次用饱和碳酸氢钠水溶液，brine洗，无水硫酸钠干燥，减压蒸去溶剂，真空干燥，得到85mg粗产品。将粗产品溶于3ml吡啶，加入0.23ml乙酸酐(2.4mmol)室温搅拌48h，加入0.2ml甲醇，继续搅拌10min，减压浓缩，20ml乙酸乙酯稀释，1mol/L盐酸，饱和CuSO4水溶液，饱和碳酸氢钠水溶液，brine洗，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，硅胶柱纯化，石油醚/乙酸乙酯(3/1-1/1)，得所需产物35mg，收率28％。步骤C5α-去乙酰-9α-乙酰氧基-5α-苯丙酰基-新杉素A20mg(0.03846mmol)2α，9α，10β，14β-四乙酰氧基-5α-羟基-新杉素A于3ml二氯甲烷中，加入12mg(0.05769mmol)DCC，17mg(0.1154mmol)苯丙酸室温搅拌15min，加入14mg(0.1154mmol)DMAP继续反应10h，30-40℃继续4h，加入甲醇终止反应，浓缩，用二氯甲烷(12ml)提取，依次用1mol/L盐酸，饱和碳酸氢钠水溶液，brine洗，无水硫酸钠干燥，减压蒸去溶剂，硅胶柱层析纯化，石油醚/乙酸乙酯(6/1，5/1)，得所需产物18mg，收率97.8％。FABMS675.2(M+Na)1HNMR(CDCl3，δ)7.31-7.199(m，5H，Ph)，5.987(d，1H，J＝10Hz，10-H)，5.793(d，1H，J＝10.5Hz，9-H)，5.404(dd，1H，J＝2.5Hz，7Hz，2-H)，5.34(s，1H，20-H)，5.318(br.s，1H，5-H)，4.962(dd，1H，J＝5，9Hz，14-H)4.898(s，1H，20-H)，3.021(t，1H，J＝7.7Hz，2’-CH2)，2.92(d，1H，J＝6Hz，3-H)，2.79(m，2H，3’-CH2，13-H)，2.66(m，1H，3’-CH2)，2.42(dd，1H，J＝5，18.5Hz，13-H)，2.15(d，1H，J＝21.5Hz，2’-CH2)，2.073-2.009(3×s+br.s，12H，9-OAc-CH3，10-OAc-CH3，2-OAc-CH3，14-OAc-CH3，18-CH3)，1.93(d，1H，J＝2Hz，1-H)，1.79-1.64(m，4H，6-H，7-H)，1.672(s，3H，16-CH3)，1.110(s，3H，17-CH3)，0.844(s，3H，19-CH3)实施例115α，14β-二去乙酰-14-氧-5α-苯丙酰氧基-新杉素A 步骤A2α，5α，10β，14β--四去乙酰-新杉素A50mg(0.099mmol)2α，5α，10β，14β-四乙酰氧基-新杉素A于2ml甲醇中，加入0.4ml 2mol/L KOH(0.8mmol)升温至40℃搅拌8h，减压浓缩至干，用乙酸乙酯溶解，滤去不溶物，减压蒸去溶剂，真空干燥，得到32mg所需产品，收率96％。步骤B5α，14β-二去乙酰-新杉素A1.6g(4.8mmol)2α，5α，10β，14β--四去乙酰-新杉素A于11ml吡啶加入醋酐1.8ml(19.2mmol)中，40-60℃搅拌3h45min，加入甲醇终止反应.乙酸乙酯稀释，1mol/L盐酸，饱和CuSO4水溶液，饱和碳酸氢钠水溶液，brine洗，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，硅胶柱纯化，石油醚/乙酸乙酯(1.5/1-1/1)，得所需产物0.46g。收率23％。步骤C5α，14β-二去乙酰-14β-TES-新杉素A85mg(0.2021mmol)5α，14β-二去乙酰-新杉素A和138mg(2.021mmol)咪唑于8ml二氯甲烷和DMF混合溶液中，-12--14℃反应20min。以6ml冰水终止反应。用3×6ml二氯甲烷提取，合并有机相，brine洗，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，硅胶柱纯化，石油醚/乙酸乙酯(10/1-8/1)，得所需产物36mg。收率33.3％。步骤D5α，14β-二去乙酰-14-氧-5α-苯丙酰氧基-新杉素A50mg(0.09349mmol)5α，14β-二去乙酰-14β-TES-新杉素A于2ml二氯甲烷中，加入56mg(0.374mmol)苯甲酸，38mg(0.187mmol)DCC，室温搅拌15min，加入46mg(0.374mmol)DMAP继续2小时，升至30-40℃继续6小时，用3ml甲醇终止反应，以1mol/L HCl调PH值至6-7，再用0.5％HCl溶液调PH至3左右室温搅拌1小时，以饱和碳酸氢钠水溶液调PH到7，浓缩，20ml乙酸乙酯提取，有机相用brine洗，无水硫酸钠干燥，减压除去溶剂，得14β-羟基-2α，10β-二乙酰氧基-5α-苯丙酰氧基-新杉素A粗产品43mg。将该粗产品溶于3ml二氯甲烷，加入40mg(0.1873mmol)PCC，室温搅拌2小时，过短硅胶柱，以50ml乙醚冲洗，浓缩，薄层硅胶板分离纯化，得目标物28mg。收率71.8％。1HNMR(CDCl3，δ)7.31-7.18(5H，Ar)，5.875(dd，1H，J＝12.5Hz，6Hz，10-H)，5.552(dd，1H，J＝2.5Hz，6.5Hz，2-H)，5.202(s，1H，20-H)，5.183(br.s，1H，5-H)4.854(s，1H，20-H)，2.95(m，4H，13-H，9-H，2’-CH2)，2.71(d，1H，J＝6Hz，3-H)，2.50(m，3H，13-H，3’-CH2)，2.099(s，3H，10-OAc-CH3)，2.053(s，3H，2-OAc-CH3)，2.027(s，3H，18-CH3)，1.97(m，2H，1-H，9-H)，1.89-1.73(m，3H，7-H，2×6-H)，1.644(s，3H，16-CH3)，1.275(s，3H，17-CH3)，1.126(m，1H，7-H)，0.993(s，3H，19-CH3)实施例125α-去乙酰-14-脱乙酰氧-13-氧-5-3’-吲哚丙酰氧基-新杉素A 按照实施例1描述的方法，步骤6中，用3”-吲哚丙酸代替苯丙酸制备期待产物。1HNMR(CDCl3，δ)8.011(br.s 1H，NH)7.678-7.10(5H，Ar)，6.033(dd，1H，J＝12Hz，5.5Hz，10-H)，5.46(d，1H，J＝6.5Hz，2-H)，5.264(s，1H，20-H)，5.238(br.s，1H，5-H)，4.813(s，1H，20-H)，3.173(d，1H，J＝6.5Hz，3-H)，3.072(m，2H，2’-CH2)，2.781(dd，1H，J＝7.3Hz，20Hz，14-H)，2.636(m，2H，3’-CH2)，2.472(dd，1H，J＝11.7Hz，14.7Hz，9-H)，2.325(d，1H，J＝20Hz，14-H)，2.149(s，3H，10-OAc-CH3)，2.13(1H，1-H)，2.087(s，3H，2-OAc-CH3)，2.061(s，3H，18-CH3)，1.89-1.7(m，4H，7-H，2×6-H，9-H)，1.686(s，3H，16-CH3)，1.24(m，7-H)，1.125(s，3H，17-CH3)，0.895(s，3H，19-CH3)实验例1材料和方法药品及试剂经上述实施例2，5或10得到的本发明新的紫杉烷类化合物，用DMSO溶解。DMSO为北京化工厂产品。长春新碱(VCR)为北京医科大学实验药厂产品。RPMI1640为GIBCO产品。小牛血清为北京军区兽医防治中心产品。
细胞株KB/V200(人口腔上皮癌耐药细胞株)，由中国医学科学院药物研究所建立，培养传代。
仪器B10-RAD 550型酶标仪。
MTT法测定收集生长良好的肿瘤耐药细胞，用含10％小牛血清的RPMI1640培养基配制成1×104/ml细胞悬液，于96孔培养板内，每孔接种100μl(含1000个肿瘤细胞)，置37℃，5％CO2温箱内培养24小时后加药。实验设空白对照及溶剂对照，单独VCR组及VCR+受试样品组，每组4个剂量，每剂量3个平行孔。置37℃，5％CO2温箱内培养4天。弃去培养液，每孔加入MTT溶液(0.4mg/ml，RPMI1640配制)100μl，37℃孵育4小时。弃去上清液，每孔加入DMSO150μl，溶解Fomazan颗粒，轻度振荡后，用B10-RAD 550型酶标仪，在波长540nm条件下测定OD值。
结果计算以药物的不同浓度及对细胞的抑制率作图可得到剂量反应曲线，从中求出半数抑制浓度(IC50)。
MTT法人癌细胞杀伤结果(KB/V200*)样品 IC50(μmol/L)实施例2化合物 8.624实施例5化合物 3.952实施例10化合物55.243Verapamil 61.700
样品 IC50(μmol/L)VCR+实施例2化合物 0.023VCR+实施例5化合物 ＜0.01VCR+实施例10化合物 0.038VCR+Verapamil 0.066注*以mdr-1基因表达增加，P-gp表达升高为主要耐药机制，对长春新碱(VCR)耐药100倍以上，对阿霉素，紫杉醇，秋水仙碱等交叉耐药。
**对照药实验结果紫杉烷类化合物的衍生物对多药耐药的人口腔上皮癌细胞，能够显著逆转耐药性，增强抗癌药的活性。实施例2化合物，实施例5化合物及实施例10化合物的活性，强于已知对照药Verapamil。
权利要求
1.一种通式(1)化合物及其立体异构体， 其中，R1为氢、羟基，R2为氢，R1R2为＝O，R3为氢、羟基、C1-8烷酰氧基，R4为氢，R3R4为＝O，R5为C1-8烷酰氧基，苯甲酰氧基，取代的苯甲酰氧基，取代基可以是羟基，甲氧基或卤素，可以有1个或2个相同或不同的取代基，R6为氢，R7为羟基、脂环基C1-8烷基酰氧基、杂环基C1-8烷基酰氧基、芳环基C1-8烷基酰氧基，包括苯基C1-8烷基酰氧基，在苯基上可以有1个或2个相同或不同的取代基，取代基可以是叠氮基，甲氧基或卤素，在C1-8烷基上可以有1个或2个相同或不同的取代基，取代基可以是氧＝O、羟基、甲氧基或卤素，条件是取代基不在同一位置上，R8为氢，R9为氢、羟基、C1-8烷基酰氧基，R10为氢，R9R10为＝O，R11为羟基、C1-8烷基酰氧基、苯甲酰氧基、芳烃基甲酰氧基，R12为氢，R11R12为＝O但是不包括以下通式
2.如权利要求1所述的化合物及其立体异构体，其特征在于所述的化合物选自以下通式Ia、Ib、Ic、Id和Ie；其中，式Ia化合物或其立体异构体是 其中，R1R2为＝O，R3为氢、R4为氢，R5为C1-8烷酰氧基，R6为氢，R7为脂环基C1-8烷基酰氧基、杂环基C1-8烷基酰氧基、芳环基C1-8烷基酰氧基，包括苯基C1-8烷基酰氧基，在苯基上可以有1个或2个相同或不同的取代基，取代基可以是叠氮基、甲氧基或卤素，在C1-8烷基上可以有1个或2个相同或不同的取代基，取代基可以是氧＝O、羟基、甲氧基或卤素，条件是取代基不在同一位置上，R8为氢，R9为氢，R10为氢，R11为羟基、C1-8烷基酰氧基、苯甲酰氧基、芳烃基甲酰氧基，R12为氢，n＝0-7，Ib化合物或其立体异构体是 其中，R1为氢，R2为氢，R3为C1-8烷酰氧基，R4为氢，R5为C1-8烷酰氧基、苯甲酰氧基、取代的苯甲酰氧基、取代基可以是羟基、甲氧基或卤素，可以有1个或2个相同或不同的取代基，R6为氢，R7为脂环基C1-8烷基酰氧基、杂环基C1-8烷基酰氧基、芳环基C1-8烷基酰氧基，包括苯基C1-8烷基酰氧基，在苯基上可以有1个或2个相同或不同的取代基，取代基可以是叠氮基、甲氧基或卤素，在C1-8烷基上可以有1个或2个相同或不同的取代基，取代基可以是氧＝O、羟基、甲氧基或卤素，条件是取代基不在同一位置上，R8为氢，R9为氢，R10为氢，R11为C1-8烷基酰氧基、苯甲酰氧基、芳烃基甲酰氧基，R12为氢，n＝0-7，Ic化合物或其立体异构体是 其中，R1为氢，R2为氢，R3为C1-8烷酰氧基，R4为氢，R5为C1-8烷酰氧基，R6为氢，R7为脂环基C1-8烷基酰氧基、杂环基C1-8烷基酰氧基、芳环基C1-8烷基酰氧基，包括苯基C1-8烷基酰氧基，在苯基上可以有1个或2个相同或不同的取代基，取代基可以是叠氮基、甲氧基或卤素，在C1-8烷基上可以有1个或2个相同或不同的取代基，取代基可以是氧＝O、羟基、甲氧基或卤素，条件是取代基不在同一位置上，R8为氢，R9为羟基，C1-8烷基酰氧基，R10为氢，R11为羟基、C1-8烷基酰氧基、苯甲酰氧基、芳烃基甲酰氧基，R12为氢，n＝0-7， 式Id化合物或其立体异构体是 其中，R1为氢，R2为氢，R3R4为＝O，R5为C1-8烷酰氧基，R6为氢，R7脂环基C1-8烷基酰氧基、杂环基C1-8烷基酰氧基、芳环基C1-8烷基酰氧基，包括苯基C1-8烷基酰氧基，在苯基上可以有1个或2个相同或不同的取代基，取代基可以是叠氮基、甲氧基或卤素，在C1-8烷基上可以有1个或2个相同或不同的取代基，取代基可以是氧＝O、羟基、甲氧基或卤素，条件是取代基不在同一位置上，R8为氢，R9为氢，R10为氢，R11为羟基、C1-8烷基酰氧基、苯甲酰氧基、芳烃基甲酰氧基，R12为氢，n＝0-7，式Ie化合物或其立体异构体是 其中，A环上双键位于C12与C13.R1为氢，R2不存在，R3R4为＝O，R5为C1-8烷酰氧基，R6为氢，R7为脂环基C1-8烷基酰氧基、杂环基C1-8烷基酰氧基、芳环基C1-8烷基酰氧基，包括苯基C1-8烷基酰氧基，在苯基上可以有1个或2个相同或不同的取代基，取代基可以是叠氮基、甲氧基或卤素，在C1-8烷基上可以有1个或2个相同或不同的取代基，取代基可以是氧＝O、羟基、甲氧基或卤素，条件是取代基不在同一位置上，R8为氢，R9为氢，R10为氢，R11为C1-8烷基酰氧基、苯甲酰氧基、芳烃基甲酰氧基，R12为氢，n＝0-7，
3.如权利要求1或2所述的化合物及其立体异构体，其特征在于所述的化合物包括14-脱氧-13-羰基-5-苯丙酰基-紫杉烷A，14-脱氧-13-羰基-5-苯丙烯酰基-紫杉烷A，14-脱氧-13-羰基-5-苯乙酰基-紫杉烷A，14-脱氧-13-羰基-5-苯甲酰基-紫杉烷A，14-脱氧-13-羰基-5-2”，5”-二甲氧基苯乙酰基-紫杉烷A，14-脱氧-13-羰基-5-苯甲酰丙酰基-紫杉烷A，14-脱氧-13-羰基-5-苯丁酰基-紫杉烷A，5-苯丙酰基-紫杉烷A，5-苯丙烯酰基-紫杉烷A或者9-乙酰基-5-苯丙酰基-紫杉烷A。
4.一种通式(I)化合物的制备方法，包括(1)在水溶性有机溶剂中，用碱性水溶液处理新杉素A进行选择性水解，得式a-l化合物，即14β-去乙酰-新杉素A；(2)在碱性介质存在下，在有机溶剂中，化合物式a-1与二硫化碳，碘甲烷反应进行原磺酰酯化生成式-2化合物，即14β-去乙酰-14β-原磺酸酯-新杉素A；(3)经步骤2得到的式-2化合物14β-去乙酰-14β-原磺酸酯-新杉素A经过脱氧处理，生成式a-3化合物，即14-脱氧-新杉素A；(4)经步骤3得到的式a-3化合物14-脱氧-新杉素A，经过烯丙位氧化，得式a-4化合物，即14-脱氧-13-氧-新杉素A；(5)经步骤4得到的式a-4化合物14-脱氧-13-氧-新杉素A用碱水解，干燥后，于有机溶剂中，经有机碱处理，与乙酸酐反应进行选择性酰化得到式a-5化合物，即5α-去乙酰-14-脱氧-13-氧-新杉素A；(6)经步骤5得到的式a-5化合物于干燥的有机溶剂中，在DCC和有机碱存在下与R’COOH反应成酯得到通式Ia化合物，即5α-去乙酰-14-脱氧-13-氧-5α-R’酰基-新杉素A。
5.如权利要求4所述的方法，其特征在于步骤(1)中使用的有机溶剂为甲醇，乙醇，THF以及甲醇/二氯甲烷溶液，甲醇/丙酮溶液的混合溶剂；碱性水溶液为KOH或K2CO3水溶液；反应在0℃-40℃下进行，优选10℃-15℃。
6.如权利要求4所述的方法，其特征在于步骤(2)中使用的碱性介质是包括氢氧化钠，氢钠，叔丁醇钾的无水碱；所述的有机溶剂包括四氢呋喃，乙醚，二氧六环不干扰反应的无水有机溶剂。
7.如权利要求4所述的方法，其特征在于步骤(3)中反应一般在50-100℃进行，优选为70-80℃。
8.如权利要求4所述的方法，其特征在于步骤(5)中，所述的反应首先在甲醇或甲醇/四氢呋喃混合溶剂中进行，20-40℃下经2-4mol/L KOH或K2CO3水溶液处理，得到全水解产物；所述的反应有机溶剂和碱选用吡啶或二氯甲烷/DMAP，反应在温度为20-50℃下进行，优选为20-30℃。
9.如权利要求4所述的方法，其特征在于步骤(6)中，有机溶剂为不干扰反应的惰性有机溶剂，优选为甲苯；有机碱包括DMAP，4-PP，三乙胺，优选DMAP；反应一般在20-50℃条件下进行，优选为30-35℃。
10.一种通式(I)化合物的制备方法，包括以下步骤(1)新杉素A在有机溶剂中，经碱作用反应水解，得到全水解产物2α，5α，10β，14β-四去乙酰-新杉素A；干燥后，经有机碱处理，与乙酸酐反应进行选择性酰化生成式b-1化合物，即5α-去乙酰-新杉素A；(2)经步骤2得到的化合物b-1于干燥的有机溶剂中，在DCC和有机碱存在下与R’COOH反应成酯得到通式Ib化合物5α-去乙酰-5α-R’酰基-新杉素A。
11.如权利要求10所述的方法，其特征在于步骤(1)中所述的溶剂包括甲醇，乙醇，甲醇/二氯甲烷，甲醇/丙酮，甲醇/四氢呋喃混合溶剂，其中优选为甲醇，甲醇/四氢呋喃；所用碱包括K2CO3或KOH，反应在10-60℃下进行，优选20-40℃。
12.如权利要求10所述的方法，其特征在于步骤(2)中所述的有机溶剂可以是不干扰反应的惰性有机溶剂；所述的有机碱包括DMAP，4-PP，三乙胺；反应在20-40℃条件下进行。
13.一种通式(I)化合物的制备方法，包括以下步骤(1)将新杉素A溶于无水乙醇中，加入培养的银杏悬浮细胞中，浓度可为10-40mg/L，反应2-18天得到式c-1化合物，即9α-羟基-新杉素A；(2)经步骤1得到的式c-1化合物9α-羟基-新杉素A在有机溶剂中，经碱作用，得到全水解产物(2α，5α，10β，14β-四去乙酰-9α-羟基-新杉素A)，干燥后，经有机碱处理，与乙酸酐反应进行选择性酰化得到式c-2即5α-去乙酰-9α-乙酰基-新杉素A；(3)经得到羟基化合物于干燥的有机溶剂中，在DCC和有机碱存在下与R’COOH反应成酯得到式Ic化合物，即5α-去乙酰-5α-R’酰基-9α-乙酰基-新杉素A。
14.如权利要求13所述的方法，其特征在于步骤(1)中，新杉素A加入浓度可为10-40mg/L，优选20-30mg/L；新杉素A的加入时期为细胞周期的6-18天，优选12-18天；反应时间可为2-18天，优选6-10天。
15.如权利要求13所述的方法，其特征在于步骤(2)中，所述的有机溶剂为甲醇，乙醇，也可以是混合溶剂如甲醇/二氯甲烷，甲醇/丙酮，甲醇/四氢呋喃，所用碱一般为K2CO3或KOH，反应温度控制在20-60℃，优选20-40℃。随后酰化一般在吡啶中进行，室温-40℃下反应。
16.如权利要求13所述的方法，其特征在于步骤(3)中，所述的有机溶剂可以是不干扰反应的惰性有机溶剂，有机碱包括DMAP，4-PP，三乙胺，反应在20-40℃条件下进行。
17.一种通式(I)化合物的制备方法，它包括以下步骤(1)新杉素A在有机溶剂中，经碱作用，得到全水解产物，即2α，5α，10β，14β-四去乙酰-新杉素A，干燥后，经有机碱处理，与乙酸酐反应进行选择性酰化生成式d-1化合物，即5α，14β-二去乙酰-新杉素A)；(2)经步骤1得到式d-1化合物5α，14β-二去乙酰-新杉素A在有机碱存在下，与保护基的作用得到式d-2化合物；(3)经步骤2得到式d-2化合物于干燥的有机溶剂中，在DCC和有机碱存在下与R’COOH反应成酯得到式d-3化合物，即5α，14β-二去乙酰-14β-Pg-5α-R’酰基-新杉素A，所述的式d-3化合物可干燥后直接溶于有机溶剂，在酸性介质中脱去保护，得到式d-4化合物；(4)经对步骤3得到的式d-4化合物脱保护后，得到的产物浓缩干燥后，溶于有机溶剂，用PCC氧化可得到通式(I)化合物。
18.如权利要求17所述的方法，其特征在于步骤(1)中，所述的有机溶剂是干燥的不干扰反应的有机溶剂，有机碱一为有机弱碱；反应一般在-78--20℃条件下进行，优选-50--30℃。
19.如权利要求17所述的方法，其特征在于步骤(3)中，所述的有机溶剂是不干扰反应的惰性有机溶剂，有机碱包括DMAP，4-PP，三乙胺；反应一般在20-40℃条件下进行。
20.一种通式(I)化合物的制备方法，该方法包括将式d-4化合物经氧化剂氧化，再与酸性介质反应硅胶发生双键转移，生成通式(I)化合物。
21.如权利要求20所述的方法，其特征在于所述的氧化剂包括TPAP，PCC，PCC/乙酸钠，优选为PCC或TPAP；酸性介质可以是硅胶，三氟乙酸，对甲苯磺酸，盐酸，HF，其中优选为硅胶或HF。
22.一种药用组合物，其特征在于含有治疗有效剂量的通式(I)化合物和/或立体异构体或其药用盐和药学上可接受的载体。
23.如权利要求1所述的化合物及其立体异构体或其药用盐在制备抗恶性肿瘤药物中的用途。
24.如权利要求1所述的化合物及其立体异构体或其药用盐在制备治疗多药耐药肿瘤的药物和逆转多药耐药肿瘤的耐药性药物中的用途。
全文摘要
本发明涉及新的通式(I)所述的紫杉烷衍生物及其制备方法，以及含有该化合物的药物组合物和用于在制备抗恶性肿瘤药物中应用；本发明还涉及在制备治疗多药耐药肿瘤的药物和逆转多药耐药肿瘤的药物中的应用。
文档编号A61K31/337GK1393438SQ0112960
公开日2003年1月29日 申请日期2001年6月21日 优先权日2001年6月21日
发明者梁晓天, 郭积玉, 尹大力, 张猛, 朱蔚华, 戴均贵, 韩锐, 刘红岩 申请人:中国医学科学院药物研究所