专利名称：：雪胆甲素在制备治疗癌症的药物中的应用的制作方法
技术领域：
：本发明涉及一种药用成份雪胆甲素的制备方法，以及在制备治疗癌症的药物中的新应用。
背景技术：
：雪胆素为一种混合物，由雪胆甲素和雪胆乙素组成。最早由陈维新等人从园果雪胆植物(HemsleyaamalilsDiels)的根部分离得到(化学学报，1975，33(1)，5)，雪胆甲素鉴定为19一失碳—9P-甲基-10d-3d-氢-2P，36，166，20，25-五羟基A5羊毛甾烯-11，20-双酮-25-乙酸酯(IIa)即葫芦素F(Ic)的23.24-cc双氢-25-乙酸酯，乙素鉴定为葫芦素F(Ic)的23，24-双氢化合物，为二种新的化合物，并研制雪胆素片剂，于1974年已收载于云南省药品药品标准，用于治疗菌痢肠炎、气管炎、急性扁桃腺炎。为了寻找提取雪胆素的植物资源，一些学者先后对本属植物进行了资源化学的研究，先后从罗锅底(Hemsleyamaerospermac.y.wu),长果雪胆(H，dolichocarpW.J.cheng)峨眉雪胆(H,emiensilL.T.Sent)分离出雪胆甲素，乙素，其提取方法与陈氏的提取方法类同，均用乙醇提取生药，提取浸膏在水中用醋酸乙酯提取，提出物上硅胶柱，用氯仿丙酮醋酸乙酯三种不同比例的混合溶剂洗脱，洗脱液回收得粗品，再用乙醇重结晶，可分别得到甲素、乙素(参考文献:Rui-Lin-Nieetal.plantaMedica1984:322:施亚琴等云南动植物研究。1990。12(4)，460;中草药1995，26(12),619)。中国专利申请CN01102620.0公开了一种"纳米雪胆素制剂药物及其制备方法"，是以纳米雪胆素为原料，按比例配制，制成新的药物制剂，其颗粒细度达1200—1500目，粒径为0.1—200nm，其中绝大部分粒径小于100nm，并具有新的物性。采用微波萃取、减压浓缩、超音速射流技术喷雾干燥等歩骤制成。中国专利申请CN03159197.3公开了一种"雪胆素滴丸及其制备方法"，其特征在于将1重量份经超微粉碎的雪胆素细粉加入至110重量份熔融的基质中，充分混匀，滴制法在冷却剂中冷凝成丸，除冷却剂，干燥，即得。中国专利申请CN02134164.8公开了一种"雪胆素类衍生物及其制备方法和作为抗菌剂的应用"，提供一种与现有技术不同的雪胆素衍生物，其制备方法，以该化合物为有效成分的抗菌剂。目前，尚未发现雪胆甲素在抗癌的药物中应用的报道。本发明的目的在于提供一种雪胆甲素的制备方法。本发明的另一目的是提供雪胆甲素在制备治疗癌症的药物中的应用。本发明所述的雪胆甲素的制备方法由以下步骤组成一、取雪胆属植物块根，粉碎，用18—26重量倍的丙酮为溶剂，采用渗漉法提取，提取液在60—75。C水浴锅中回收，即得浸膏；二、将提出的浸膏拌入l一2重量倍的硅胶，烘干，上硅胶柱，用氯仿甲醇进行梯度洗脱，其中甲醇体积浓度为2-10%，回收洗脱液，得粗品；三、用甲醇或乙醇对粗品在水浴中加热溶解，滤过，置室温，重结晶，得凌柱状结晶，即纯度为98%以上的雪胆甲素。步骤一中所述的雪胆属植物为罗锅底、长果雪胆、峨眉雪胆等。步骤二中先用纯氯仿洗脱杂质，再用氯仿甲醇梯度洗脱；步骤三中所得雪胆甲素经高效液相(HPLC)分析纯度在98%以上，熔点226-228°C,经紫外光谱、红外光谱、核磁共振、质谱四谱分析，确认为雪胆甲素。其结构式为-
发明内容本发明涉及雪胆甲素在制备治疗肝癌的药物中的应用。本发明涉及雪胆甲素在制备治疗肺癌的药物中的应用。本发明涉及雪胆甲素在制备治疗胃癌的药物中的应用。本发明涉及雪胆甲素在制备治疗喉癌的药物中的应用。本发明涉及雪胆甲素在制备治疗白血病的药物中的应用。药效学试验资料雪胆甲素单体成份经药理体内外抗癌试验，确认本品体外对人体实体癌细胞具有抑制或杀灭作用，对人体肺癌细胞A549生长的Ic50(iig/ml)为1.50，与顺铂的Ic501.60基本相同，小鼠体内抗癌试验与制剂类型，及给药途径相关，相比之下，口服给药比注射给药稍差，其乳剂静脉注射对肺癌抑制率最高可达59%。抗癌试验1、体外筛选试验，采用抗癌物质活性的改良MTT法进行。癌细胞株HL60人白血病细胞株A549人肺癌细胞株SGC-7901人胃癌细胞株Bel-7402人肝癌细胞株SMMC-7721人肝癌细胞株HEP-2人喉癌细胞株GLC-15人肺癌细胞株实验结果对7株人肿瘤细胞生长的IC50(Ug/ml)HL.60A549SGC-7901Bel-7402SMMC-7721HEP-2GLC-15雪胆甲素43.221.508.71>10022.2615.8214.57DDP(顺铀)0.6951.600.892.310.210.301.72从上表可见，在本实验条件下，雪胆甲素对人体肿瘤细胞显示出较为明显的杀灭作用，但对不同组织来源的肿瘤细胞具有较明显的差异，提示雪胆甲素对不同肿瘤细胞具有相对选择性。2、体内试验采用昆明小鼠分别接种H22肝癌与小鼠Lewis肺癌，采用三种制剂，混悬剂、乳剂、冻干制剂三种给药途径，灌胃，腹腔注射，静脉注射，剂量分高、中、低三个治疗剂量，与阳性对照比较，计算抗肿瘤抑制率，实验结果见下面各表表1雪胆甲素混悬剂灌胃给药对小鼠H22肝癌的疗效试验<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>与阴性对照组比较***P<0.01。本实验具有显著性差异。表2雪胆甲素混悬剂腹腔给药对小鼠H22肝癌接肿疗效试验<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>与阴性对照组相比***P<0.01。表3雪胆甲素乳剂对小鼠H22肝癌静脉给药试验疗效表<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>**tp值〈0.01与阴性对照组相比。结论通过上述实验证明，雪胆甲素对各种癌症，包括肝癌，肺癌，胃癌，喉癌，白血病等具有显著的抑制或杀灭作用，其作用强度与剂型、给药途径和剂量有关。具体实施例方式实施例l:取云南巧家县地区罗锅底5kg，粉碎成中粉，盛入渗流容器中，在15-25°C，加24倍量丙酮浸泡48小时后，按中国药典渗漉法进行渗漉，回收渗漉液，提取物拌入等量的硅胶，50-70°C干燥，上硅胶柱，用氯仿甲醇为洗脱液进行梯度洗脱，收集在3-5%甲醇浓度的洗脱液，回收后即可得到粗品，用甲醇多次重结晶，得凌柱晶，熔点226—228°C,HPLC分析纯度98.98%。见图l，经紫外、红外光谱、核磁共振、质谱四谱分析，确认为雪胆甲素。以上述雪胆甲素为单体成分，按照常规工艺制成混悬剂、乳剂、冻干制剂、纳米冻干剂、片剂、丸剂、滴丸、胶囊剂、控释剂、微囊剂、片剂、脂质体等剂型。用于肝癌、肺癌、胃癌、喉癌以及白血病的治疗。权利要求1、一种雪胆甲素的制备方法，其特征在于由以下步骤组成一、取雪胆属植物块根，粉碎，用18—26重量倍的丙酮为溶剂，采用渗漉法提取，提取液在60—75°C水浴锅中回收，即得浸膏；二、将提出的浸膏拌入1—2重量倍的硅胶，烘干，上硅胶柱，用氯仿甲醇进行梯度洗脱，其中甲醇体积浓度为2-10％，回收洗脱液，得粗品；三、用甲醇或乙醇对粗品在水浴中加热溶解，滤过，置室温，重结晶，得凌柱状结晶，即纯度为98％以上的雪胆甲素。2、如权利要求1所述的雪胆甲素在制备治疗肝癌的药物中的应用。全文摘要本发明涉及雪胆甲素在制备治疗癌症的药物中的新应用。本发明涉及雪胆甲素在制备治疗肝癌的药物中的应用。经实验证明，雪胆甲素对各种癌症，包括肝癌，肺癌，胃癌，喉癌，白血病等具有显著的抑制或杀灭作用，其作用强度与剂型、给药途径和剂量有关。文档编号A61K31/575GK101422466SQ20081021274公开日2009年5月6日申请日期2006年5月19日优先权日2006年5月19日发明者张人伟,樊献俄,程惠佳申请人:樊献俄