专利名称：：一种复方紫杉醇—鸦胆子油注射乳剂及其制备方法
技术领域：
：本发明涉及一种复方紫杉醇一鸦胆子油注射乳剂及其制备方法，属于制药领域。
背景技术：
：紫杉醇是从红豆杉科红豆杉属植物的树皮中提取得到的二萜类化合物。它是一种新型的微管稳定剂，具有独特抗癌活性，被美国国立癌症研究所认为是近1520年来肿瘤化疗的最重要的进展。作为晚期卵巢癌的二线治疗药，至今已在40多个国家获准上市，并在乳腺癌、肺癌、白血病、胃肠道癌及介入治疗后的血管再狭窄等治疗上显示了令人鼓舞的疗效。虽然紫杉醇具有良好的抗肿瘤活性，但紫杉醇在甲醇、乙醇和DMSO等有机溶剂中可溶，而在水中的溶解度小于0.03mg/mL。口服给药生物利用度差，只能通过静脉注射给药。紫杉醇的水不溶性给其静脉给药带来很大困难，限制了它的临床应用。现行临床常用的紫杉醇制剂是用聚氧乙烯蓖麻油与无水乙醇l:l混合制成的油剂(CremophorEL)即紫杉醇Cremophor制剂，注射给药前用生理盐水或5%葡萄糖溶液稀释到给药浓度。为解决这一难题，人们在注射剂中加入表面活性剂聚氧乙烯蓖麻油(CremophorEL)，临床应用效果较好。但会引起多种不良反应，如过敏反应、中毒性肾损害、神经毒性、心脏血管毒性等。为避免严重的过敏反应，在临床上，紫杉醇注射给药前常预先注射皮质醇类(如地塞米松)，苯海拉明和H2受体拮抗剂(如西咪替丁、雷尼替丁)。但这些针剂的使用仍不能有效彻底防止所有患者的不良反应，仍会导致部分患者注射紫杉醇后发生过敏反应[KimSC.KimDW.ShimYH.etal.Invivoevaluationofpolymericmicellarpaclitaxelformulation:toxicityandefficacy.JControlledRelease.2001.72(123):191.]。近年来，为了解决临床应用中出现的水溶性低和不良反应等各种问题，研究人员对紫杉醇结构进行修饰或将其制备成特定的制剂，其中制剂是研究的热点和重点。目前，对紫杉醇的新型制剂研究包括微乳、胶束、前体药物、包合物、脂质体、微球、纳米粒、磁性泡囊、糊剂、凝胶、植入剂和药物释放支架等。这些紫杉醇制剂在水溶性、稳定性和生物利用度方面有了不同程度的改善，但仍没有一种制剂可以完全取代CremophorEL。因此，有必要进一步开发紫杉醇的新型制剂。中国专利申请CN1634021A公开了用一种注射用油来溶解紫杉醇并用适当乳化剂等药用辅料制备成符合静脉注射要求的乳剂。其中注射用油是选自于大豆油、鱼油、亚麻子油、葵花子油、月见草油、沙棘油、辛癸酸甘油醋或惹仁油中的一种或一种以上的混合物。该专利直接将紫杉醇溶于植物油中，由于紫衫醇在油中较低的溶解度，紫杉醇应该大多悬浮在油中，处于游离状态，制备成乳剂后，临床应用时稀释后很容易形成沉淀。中国专利申请CN101006997A公开了一种复方紫杉醇及衍生物多西他赛脂肪乳剂，该制剂是将主药紫杉醇或多西他赛包裹在水包油微球的复合油相中，这种复合油相采用对紫杉醇和多西他赛溶解度较大的增溶脂溶性成分植物挥发油或三丁酸甘油酷或三辛酸甘油脂同植物油混合。鸦胆子油是从苦木科植物鸦胆子的干燥成熟果实中提取得到的脂肪油，以体外腹水癌细胞伊红染色法为药理筛选指标，发现鸦胆子油中的油酸具有很强的抗癌活性。目前为止，未见紫杉醇、鸦胆子油和乙醇组成的复合油相与注射用辅料一起制备注射乳剂的报道。
发明内容本发明的目的在于寻找一种载药量大、副作用小、给药方便的新的静脉注射用紫杉醇乳剂及其制备方法，以满足市场上对该种新药的需求。本发明的技术方案本发明复方紫杉醇一鸦胆子油注射乳剂是由紫杉醇溶解于乙醇后加入鸦胆子油组成复合油相，再与卵磷脂、注射用水等注射用辅料制备成的复方乳剂。其中，紫杉醇乙醇鸦胆子油卵磷脂注射用水的重量配比=0.oiio:120:550:i30:600iooo。优选的是紫杉醇乙醇鸦胆子油卵磷脂注射用水的重量配比=0.055:210:io30:520:600soo。更进一步优选的是紫杉醇乙醇鸦胆子油卵磷脂注射用水的重量配比=0.12:412:io20:515:600700。其中所述卵磷脂为大豆卵磷脂或蛋黄卵磷脂。本发明复方紫杉醇一鸦胆子油注射乳剂的制备方法为将紫杉醇溶解于乙醇中，将鸦胆子油加入紫杉醇的乙醇溶液中，混合均匀形成油相，将卵磷脂分散于注射用水中得到水相，将水相和油相混合，用高速匀浆机搅拌5—IO分钟得初乳；将制得的乳剂置于高压乳匀机中，在80100MPa的压力下，乳化35次，得到均一的乳剂。所得乳剂用0.45ym的微孔滤膜过滤，分装后于115'C高压灭菌30分钟。本发明所得复方制剂的特征是含有抗癌药物紫杉醇和鸦胆子油的水包油型乳剂，该乳剂粒径小于1000nm，紫杉醇含量为O.510mg/g。本发明复方紫杉醇一鸦胆子油注射乳剂中紫杉醇的含量用高效液相色谱测定；粒径用激光动态光散射仪进行测定。本发明的优点经过大量筛选实验得到紫杉醇，乙醇和鸦胆子油组成的复合油相中紫杉醇的溶解度很大，制备成水包油型乳剂，外水相中不含紫杉醇成分，有效降低由于药物引起的静脉炎，过敏反应大大降低，增强患者的顺应性。且本发明制剂处方简单，稀释后不产生沉淀，静脉注射不会发生栓塞。为临床提供一种载药量大、副作用小、给药方便的新的静脉注射用紫杉醇乳剂。具体实施例方式实施例l油相筛选试验筛选的依据是将紫杉醇溶解于乙醇后加入植物油或表面活性剂，考察紫杉醇的溶解性，选择对紫杉醇溶解性较好的油相为成功制备注射用紫杉醇创造条件。具体筛选过程如下称取20mg紫杉醇5份，分别加入0.5g乙醇，超声处理溶解；向紫杉醇溶液中分别加入大豆油、鸦胆子油、玉米油、棉籽油和橄榄油各lg，混合，于超声波上超声处理30分钟后，10000rpm离心10分钟，弃去沉淀，上清液中紫杉醇含量用高效液相色谱测定，结果列于表l表1<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>试验表明，将各种油分别加入紫杉醇乙醇溶液中后，除了鸦胆子油以外，其它油都不同程度产生沉淀。因此，本发明选择将紫杉醇溶解于乙醇后加鸦胆子油经过处理得到油相，进一步制备乳剂。实施例2制备含紫杉醇O.7mg/g的复方紫杉醇一鸦胆子油注射乳剂称取480mg紫杉醇，加入8g乙醇，超声处理溶解后，加入13g鸦胆子油，充分搅拌均匀得油相；将10g精制大豆卵磷脂分散于300g注射用水中得水相。将以上两液混合，转移到高速匀浆机中，加入350g注射用水，以20000rpm混合均质10分钟，形成初乳。将初乳转移到高压乳匀机中，氮气保护下在80100MPa循环4次，将乳剂用O.45ym的微孔滤膜过滤，分装，115°C高压灭菌30分钟。该乳剂粒径在1001000nm之间的乳粒占94%，高效液相色谱测定紫杉醇含量为0.68mg/g。实施例3制备含紫杉醇lmg/g的复方紫杉醇一鸦胆子油注射乳剂称取800mg紫杉醇，加入10g乙醇，超声处理溶解后，加入10g鸦胆子油，充分搅拌均匀得油相；将10g精制大豆卵磷脂分散于300g注射用水中得水相。将以上两液混合，转移到高速匀浆机中，加入470g注射用水，以20000rpm混合均质10分钟，形成初乳。将初乳转移到高压乳匀机中，氮气保护下在80100MPa循环4次，将乳剂用O.45ym的微孔滤膜过滤，分装，115°C高压灭菌30分钟。该乳剂粒径在1001000nm之间的乳粒占97%，高效液相色谱测定紫杉醇含量为0.96mg/g。实施例4制备含紫杉醇2mg/g的复方紫杉醇一鸦胆子油注射乳剂称取800mg紫杉醇，加入12g乙醇，超声处理溶解后，加入15g鸦胆子油，充分搅拌均匀得油相；将13g精制大豆卵磷脂分散于250g注射用水中得水相。将以上两液混合，转移到高速匀浆机中，加入110g注射用水，以20000rpm混合均质10分钟，形成初乳。将初乳转移到高压乳匀机中，氮气保护下在80100MPa循环4次，将乳剂用O.45ym的微孔滤膜过滤，分装，115°C高压灭菌30分钟。该乳剂粒径在1001000nm之间的乳粒占92%，高效液相色谱测定紫杉醇含量为1.91mg/g实施例5制备含紫杉醇5mg/g的复方紫杉醇一鸦胆子油注射乳剂称取500mg紫杉醇，加入10g乙醇，超声处理溶解后，加入15g鸦胆子油，充分搅拌均匀得油相；将10g精制大豆卵磷脂分散于65g注射用水中得水相。将以上两液混合，转移到高速匀浆机中，以20000rpm混合均质10分钟，形成初乳。将初乳转移到高压乳匀机中，氮气保护下在80100MPa循环4次，将乳剂用O.45ym的微孔滤膜过滤，分装，115'C高压灭菌30分钟。该乳剂粒径在1001000nm之间的乳粒占92X，高效液相色谱测定紫杉醇含量为4.85mg/g)。实施例6制备含紫杉醇8mg/g的复方紫杉醇一鸦胆子油注射乳剂称取800mg紫杉醇，加入10g乙醇，超声处理溶解后，加入20g鸦胆子油，充分搅拌均匀得油相；将10g精制大豆卵磷脂分散于40g注射用水中得水相。将以上两液混合，转移到高速匀浆机中，以20000rpm混合均质10分钟，形成初乳。将初乳转移到高压乳匀机中，氮气保护下在80100MPa循环4次，将乳剂用O.45ym的微孔滤膜过滤，分装，115'C高压灭菌30分钟。该乳剂粒径在1001000nm之间的乳粒占90X，高效液相色谱测定紫杉醇含量为7.46mg/g)。以下试验例采用的对照品为市售紫杉醇注射液，重庆莱美药业股份有限公司提供，批号为080402。试验例一刺激性试验1、健康家兔30只，雌雄各半，体重2.5士0.2kg，随机分三组，第一组给生理盐水，第二组为市售紫杉醇注射液，第三组为实施例3制备的复方紫杉醇一鸦胆子油注射乳剂。经耳缘静脉给药，20ml/只，1ml/min恒速推入，药后两小时处死动物，取注射部位行病理切片H.E.染色，普通显微镜下观察注射部位血管，毛细血管对药物的反应。2、健康家兔30只，雌雄各半，体重2.5士0.2kg，随机分三组，第一组给生理盐水，第二组为市售紫杉醇注射液，第三组为实施例3制备的复方紫杉醇脂肪乳注射液。每日耳缘静脉给药一次，20ml/只，1ml/min恒速推入，连续给药一周，第七天药后2小时处死动物，取注射部位10%福尔多林液固定，石腊包埋，H.E.染色，普通显微镜下观察注射部位血管，毛细血管对药物的反应。结果显示，本发明复方紫杉醇脂肪乳注射液10例中有3例嗜中性白细胞向血管壁附着及浸润，而市售紫杉醇注射液10例中有4例嗜中性白细胞向血管壁附着及浸润，两者均有不同程度的间质浮肿。市售紫杉醇注射液10例中有7例都存在混合血栓。本发明复方紫杉醇乳注射液IO例中未出现血栓。二者均有不同程度的静脉内皮肿胀、毛细管周围炎性反应，但本发明复方紫杉醇乳注射液显著轻于市售紫杉醇注射液。试验例二急性过敏试验取豚鼠20只，随机分成2组，雌雄各半。受试药物为市售紫杉醇注射液和按实施例5制备的复方紫杉醇一鸦胆子油注射乳剂，分别按照4mg/kg剂量实施肌内注射，注射量为0.5ml，隔日注射，连续3次，观察豚鼠行为及出现的毒副作用。结果，市售紫杉醇注射液组出现3级过敏反应，如多次抓鼻，颤抖，喷嚏，竖毛，抽搐，呼吸困难，2例出现大小便失禁，3只死亡；本发明复方紫杉醇一鸦胆子油注射乳剂出现1级过敏反应症状，出现竖毛，喷嚏现象，没有死亡现象。因此，本发明复方紫杉醇一鸦胆子油注射乳剂较市售紫杉醇乳液过敏反应轻。试验例三体内抗肿瘤试验将处于生长旺盛期的小鼠Lewis肺癌组织制成稀薄悬液，接种于小鼠右侧腋部皮下，约22.5X106细胞/支，接种24小时随机分笼，尾静脉给药。给药方案为市售紫杉醇注射液组，按实施例6制备的复方紫杉醇一鸦胆子油注射乳剂，空白对照组，每两天给药一次，共4次；停药后48小时处死动物，称瘤重，计算各组平均瘤重，按下公式求出肿瘤生长抑制率并进行T检验。肿瘤生长抑制率二空白对照组平均瘤重-治疗组平均瘤重/空白平均瘤重X100%，结果见表2。表2<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>结果显示本发明复方紫杉醇一鸦胆子油注射乳剂抑瘤率显著优于紫杉醇注射液组，动物状态好。权利要求1.一种复方紫杉醇—鸦胆子油注射乳剂，其特征在于它是由紫杉醇溶解于乙醇后加入鸦胆子油组成复合油相，再与卵磷脂、注射用水等注射用辅料制备成的水包油型乳剂。2.根据权利要求l所述复方紫杉醇一鸦胆子油注射乳剂，其特征在于:该乳剂中紫杉醇含量为O.510mg/g。3.根据权利要求l所述复方紫杉醇一鸦胆子油注射乳剂，其特征在于:紫杉醇乙醇鸦胆子油卵磷脂注射用水的重量配比=o.oiio:120:550:130:6001000。4.根据权利要求3所述复方紫杉醇一鸦胆子油注射乳剂，其特征在于:紫杉醇乙醇鸦胆子油卵磷脂注射用水的重量配比=0.055:215:io30:520:600800。5.根据权利要求4所述复方紫杉醇一鸦胆子油注射乳剂，其特征在于:紫杉醇乙醇鸦胆子油卵磷脂注射用水的重量配比=0.12:412:io20:515:600700。6.制备权利要求35任一项所述复方紫杉醇一鸦胆子油注射乳剂的方法，它包括如下步骤a、按上述重量比准备原料；b、将紫杉醇溶解于乙醇中，加入鸦胆子油混合均匀，形成油相；c、将卵磷脂分散于注射用水中得到水相；d、将水相和油相混合，用高速匀浆机搅拌5—10分钟得初乳；将制得的乳剂置于高压乳匀机中，在80100MPa的压力下，乳化35次，用O.45ym的微孔滤膜过滤，分装后于115。C高压灭菌30分钟即得。全文摘要本发明涉及一种复方紫杉醇—鸦胆子油注射乳剂及其制备方法，属于制药领域。所解决的技术问题是寻找一种载药量大、副作用小、给药方便的新的静脉注射用紫杉醇乳剂及其制备方法，以满足市场上对该种新药的需求。具体地，它是由紫杉醇溶解于乙醇后加入鸦胆子油组成复合油相，再与卵磷脂、注射用水等注射用辅料制备成的水包油型乳剂。本发明经过大量筛选实验得到紫杉醇，乙醇和鸦胆子油组成的复合油相中紫杉醇的溶解度很大，制备成水包油型乳剂，外水相中不含紫杉醇成分，有效降低因其引起的静脉炎，过敏反应大大降低，增强患者的顺应性。且本发明制剂处方简单，稀释后不产生沉淀，静脉注射不会发生栓塞。为临床提供一种新的静脉注射用紫杉醇乳剂。文档编号A61K31/337GK101361771SQ20081030485公开日2009年2月11日申请日期2008年10月10日优先权日2008年10月10日发明者唐小海,鑫宋,谢永美,宇邱申请人:重庆莱美药业股份有限公司