Cfms抑制剂用于治疗或预防骨癌以及与骨癌相关的骨丢失和骨痛的用途的制作方法

专利名称：Cfms抑制剂用于治疗或预防骨癌以及与骨癌相关的骨丢失和骨痛的用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及治疗或预防骨癌和来自其他原发部位的骨转移，以及预防和治疗与癌 转移相关的骨丢失和骨疼的方法。
背景技术：
骨癌是相对罕见的疾病，在该疾病中癌细胞在骨组织中生长。癌可在骨中形成或 可从体内的其他部位扩散至骨中。当癌在骨组织中开始时，其称为原发性骨癌。当癌细胞 从别的地方转移至骨中时，其称为继发性骨癌或转移性骨癌。骨癌的类型包括骨肉瘤，其 为骨的癌性肿瘤，通常是手臂、腿或骨盆的癌性肿瘤(最常见的原发性癌)；软骨肉瘤，即软 骨的癌(第二最常见的原发性癌)；尤因氏肉瘤，其为通常在腿骨和上肢骨的骨腔中发展的 肿瘤；纤维肉瘤和恶性纤维组织细胞瘤，其在诸如腱、韧带、脂肪、肌肉之类的软组织中发展 并转移至腿骨、上肢骨和颂骨的癌；巨细胞瘤，其为一种仅在约10%的时间里恶性并且最 常见于上肢骨或腿骨中的原发性骨肿瘤；以及脊索瘤，其为一种通常出现在颅骨和脊柱中 的原发性骨肿瘤。骨转移在患有实体瘤恶性肿瘤(包括末期乳腺癌、前列腺癌和肺癌)的患者中发 生频率高(Mundy G. R.，Nat Rev Cancer 2002 ；2 :584_93)。骨骼中的转移性肿瘤可导致严 重的病态，包括骨折、高血钙症和疼痛。该疼痛通常会产生对阿片疗法的抗性，并且产生自 两个主要来源生长中的肿瘤对受神经支配的骨膜的侵害和骨骼不稳定(Sabino MA等人， JSupport Oncol 2005;3:15-24)。后者是破骨细胞介导的骨质侵蚀的副作用。在这种背景下，惯用的两者治疗方法包括放射疗法以使肿瘤体萎缩，以及高剂量 二膦酸盐(即帕米膦酸和唑来膦酸)以耗竭破骨细胞和减少骨质溶解(Saarto T等人，Eur J Pain 2002 ；6 323330 ；和 MystakidouK 等人，Cancer Treat Rev 2005 ；31 303 311)。放射疗法不能解决通常伴随着骨转移的软组织转移。另外，在大多数患者中双膦 酸盐可延缓( 35%)但不能防止骨骼事件，并且伴随着显著的骨毒性(骨坏死)。而且， 多数现有的化学疗法直接靶向肿瘤细胞，但在许多癌中的功效不同，并通常伴随出现使人 虚弱的副作用，不能长期施用。此外，晚期癌由于它们固有的遗传不稳定性而倾向于产生对 化学疗法的抗性。由于这些原因，人们对于了解和探索肿瘤对宿主微环境的依赖性的兴趣 日益浓厚(Joyce J.，Cancer Cell 2005 ；7 :513_520)。一个重要的新兴观点是，肿瘤相关的巨噬细胞可促进肿瘤生长和转移(参见例 如，Pollard Jff.，Nature Reviews Cancer 2004 ；4 -Jl-IS ；禾口 BingleL 等人，J Pathol 2002 ； 196 254-265)。在大多数肿瘤中巨噬细胞占细胞的5%至50%，并且长期以来被认为是肿瘤免疫
23的组分(Wood GW 等人，J Natl Cancer Inst 1977 ;59 1081-7 ；和 Kelly PMA 等人，BrJ Cancer 1988;57:174-177)。然而，许多最近的证明巨噬细胞数目、血管生成和肿瘤发展之 间有直接关系的研究(参见Bingle L等人，J Pathol 2002 ； 196 :254_265和Valkovic T 等人，VirchowsArch 2002 ；440 583 588)已迫使要重新考虑巨噬细胞在肿瘤微环境中的
潜在作用。现在越来越多的证据表明，肿瘤相关的巨噬细胞(TAM)可促进肿瘤血管生成和 生长。TAM会响应肿瘤的微环境而被“选择性激活”，以产生能支持肿瘤生长的生长因子和 细胞因子，包括VEGF、血小板衍生生长因子(PDGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)和 TGF-β 1、基质金属蛋白酶-9(ΜΜΡ-9)和尿激酶型纤溶酶原激活物(uPA) (Mantovani A.等 人，Trends in Immunology 2002;23:549-555)。值得注意的是，在某些肿瘤中TAM已被鉴 定为表皮生长因子(EGF)的主要来源。实际上，若干研究已表明，在临床前模型中化学法或遗传法耗减TAM可导致肿瘤 生长抑制(参见例如，van Rooijen N等人，Methods Enzymol 2003 ；373 3-16 ；De Palma M 等人，Cancer Cell 2005 ；8 211~226 ；Nowickki A等人，Int J Cancer 1996 ；65 :112_119 ； Aharinejad S 等 人’ Cancer Res 2002；62 :5317_5324 ；Aharinejad S 等 人’ Cancer Res2004 ；64 :5378_5384 ；禾口 Paulus P 等人，Cancer Res 2006 ；66 :4349_56)。巨噬细胞谱系部分地依赖于集落刺激因子-I(CSF-I)(参见例如，Pollard, J. W.等人，Adv in Devel Biochem 1995;4:153-193)。FMS 是 III 类受体酪氨酸激酶，其 负责巨噬细胞谱系生长因子、集落刺激因子-I(CSF-I)进行的所有细胞信号转导。由于 CSF-I在肿瘤诱导的破骨细胞形成中起关键作用，所以抑制FMS预期可提供防止转移性骨 疾病中骨质溶解的机制。另外，小鼠遗传学分析更具体地将CSF-I与肿瘤生长和发展牵涉 起来。Lewis肺癌在CSF-I缺陷型小鼠中生长不良(Nowicki A等人，Int J Cancer 1996 ； 65 =112119)。此外，已证实系统性地递送CSF-I反义核酸和中和性抗CSF-I抗体可降低几 种人肿瘤异种移植物的生长速率(Paulus P等人，Cancer Res 2006 ；66 =43494356) 生长 抑制与TAM减少和微血管密度较低相关。50%至85%的患有晚期乳腺癌和前列腺癌的患者将会被诊断有骨转移(Roodman GD.，NEJM 2004 ；350 1655-64)。在晚期肺癌患者中骨转移率稍低(大约30% )，这仅是因 为该疾病发展和致死较快。尽管进行双膦酸盐疗法，但大多数骨转移患者将经历骨骼事件 (如剧烈骨痛、骨折或高钙血症)。取决于是破骨活动占优势还是成骨活动占优势，转移性骨病变在本质上可以是 溶解性或硬化性的；如果这两种过程活跃性相当，则将它们称为混合病变。乳腺癌患者中 的骨转移通常涉及溶骨性疾病，在该疾病中正常的骨稳态被破坏而偏向过度的骨再吸收 (Coleman RE, CancerTreat Rev. 27(3)，165-76(2001))。肿瘤相关的骨质侵蚀因有利于破骨细胞形成和破骨细胞激活的微环境而加剧 (Roodman GD.，Biology of osteoclast activation in cancer. JClin Oncol 2001 ；19 3562-3571)。CSF-I由肿瘤表达并且是破骨细胞的关键分化因子，CSF-I缺陷型幼小鼠中 几乎完全没有破骨细胞即为例证(Pollard，J. W.等人，Adv in Devel Biochem 1995 ；4 153-193)。CSF-I不仅驱动破骨细胞前体(即巨噬细胞)的增殖和分化，而且其为破骨细胞前
24体分化成破骨细胞所需要的，该分化在部分上是RANK的增强表达所致(Kitaura H等人，J Clin Invest ；2005 ；115 :3418_27)。尽管激活性FMS突变在人类癌症中罕见，但FMS的异位表达可能在某些肿瘤中驱 动增殖。对原发性肿瘤的组织学检查表明，在许多乳腺癌、前列腺癌、卵巢癌、子宫癌、子宫 内膜癌、肝细胞癌和鳞状细胞癌中FMS表达较高(Kascinski B. , Cancer Treat Res 2002 ； 107 :285292)。表达FMS的肺癌和乳腺癌肿瘤系更具侵润性，并且已认为乳腺癌中的FMS表 达与预后差相关联(Kluger HM 等人，Clin Cancer Res 2004 ;10 :173177)。患有骨转移的患者会经历相当多的病态，包括骨痛、病理性骨折、高钙血症、运动 性降低和脊髓或神经根压迫。尽管这些临床问题很重要，但对于与癌转移相关的骨损失几 乎没有可用的治疗方法。因而，在本领域中仍有需要去鉴定新的药剂和方法以供预防或治 疗癌转移，包括骨转移以及相关的骨损失和骨痛(参见例如，WO 2007/081879)。

发明内容
本发明涉及治疗或预防骨癌和来自其他原发部位的骨转移，以及预防和治疗与癌 转移相关的骨损失和骨痛的方法，此类方法利用W02006/047277(于2005年10月20日作为 PCT/US2005/037868提交)中所述的某些化合物，特别是在WO 2006/047277中描述为实例 38a和本文中描述为JNJ-141的4-氰基-IH-咪唑-2-甲酸{2-环己-1-烯基_4-[1_(2-二 甲氨基_乙酰基)_哌啶-4-基]-苯基}_酰胺或其溶剂化合物、水合物、互变异构体或可 药用盐，藉此将WO 2006/047277的公开内容以引用的方式全文并入本文。


图1JNJ-141的结构和细胞活性A JNJ-141的结构。B 将具有重组CSF-IR表达的 稳定的HEK细胞系用梯度浓度的JNJ-141预处理30分钟，然后用25ng/ml CSF-I处理10分 钟。将细胞裂解，并如本文实验部分所描述通过免疫印迹分析对裂解物进行磷酸化CSF-IR 和总CSF-IR评估。图2JNJ-141抑制体内CSF-1R。将B6C3R1小鼠用JNJ-141 口服给药八小时，然后 尾静脉注射0.8毫克(yg)重组CSF-1。十五分钟后，处死小鼠并如本文实验部分所述测量 脾脏裂解物中的c-fos mRNA。在小鼠中JNJ-141剂量依赖性地抑制了 CSF-I诱导的c-fos mRNA诱导作用。图3JNJ-141减缓了 H460人肺肿瘤异种移植物在裸鼠中的生长。在对裸鼠用 IXlO6个H460细胞皮下接种三天后，开始每日两次(周末每日一次)用溶媒或JNJ-141以 25、50或100mg/kg进行口服给药。A 用卡钳测量法测定肿瘤体积。B:在第28天，处死小 鼠，切取肿瘤并称重。C:在指定的日期测定小鼠体重。所有数值均示出了平均值和标准误 差。*相对溶媒对照ρ < 0. 05。**相对溶媒对照ρ < 0. 01。图4JNJ-141减少了肿瘤相关的巨噬细胞和微血管形成。第28天，从用溶媒处理 的小鼠(A和C)和用100mg/kg JNJ-141处理的小鼠(B和D)采集肿瘤。将肿瘤在福尔马 林中固定并检测石蜡包埋的切片的F4/80+巨噬细胞(A和B)，或将肿瘤冷冻并检测冷冻切 片的CD31+微脉管系统(C和D)，如本文实验部分所述。图5JNJ-141防止了具有MRMT-I肿瘤的胫骨的骨质侵蚀。将盐水㈧或3X IO4个大鼠同系MRMT乳腺癌细胞(B-D)接种进大鼠的左胫骨中。在第3天开始，将大鼠用溶媒 (B)或用20mg/kg JNJ-141 (C)每日两次给药，或用30 μ g/kg唑来膦酸盐(D)每隔一日皮下 给药。在第17天，处死大鼠并通过显微计算机辅助断层摄影技术进行评估胫骨。图6JNJ-141防止了具有MRMT-I肿瘤的胫骨中的骨质侵蚀并清除了破骨细胞。将 盐水㈧或3X IO4个大鼠同系MRMT乳腺癌细胞(B-G)接种进大鼠的左胫骨中。在第3天 开始，将大鼠用溶媒(B和E)或20mg/kgJNJ-141 (C和F)每日两次给药，或用30 μ g/kg唑 来膦酸盐(D和G)每隔一日皮下给药。在第17天，处死大鼠并切取左后肢，固定并脱钙，将 石蜡包埋的切片在H&E中对TRAP+细胞进行染色和轻度复染色。在暗视野下拍摄代表性的 骺骨小梁显微照片(40x原物)(A-D)，以便使生长板下的骨小梁能最佳显影。提供了代表性 的骨膜肿瘤的显微照片(200x原物)(E-G)。注意到用溶媒处理的荷瘤大鼠中骨小梁几乎完 全丢失，而JNJ-141和唑来膦酸盐提供了保护作用(A-D)。虽然这两种药剂都耗减了骨小梁 中的破骨细胞，但注意到多核的、肿瘤相关的破骨细胞仍然存在于唑来膦酸盐处理过的大 鼠中(G)，而不存在于用JNJ-141处理过的大鼠中(F)。图7JNJ-141防止了转移性骨痛的发生。与用介质接种的动物相比，将MRMT-I细 胞接种进胫骨近端，在最终时间点时显著增加了用MRMT-I细胞接种的动物中的机械性异 常性疼痛；P < 0. 01。用吗啡处理患病动物自第二个时间点起逆转了异常性疼痛，而与用肿 瘤接种的动物相比较而言用20mpk或60mpk JNJ-141处理在最终时间点减少了异常性疼痛 (P分别小于0. 05和0. 01)。与用肿瘤接种的动物相比较，唑来膦酸盐处理也减少了异常性 疼痛，但这一作用未达到统计学显著性。图中的数值表示组平均值士SEM。通过本发明的如下具体实施方式
和权利要求书，本发明的其他特征和优点将显而 易见。
具体实施方式
术语“包含”、“包括”和“含有”在本文中是以它们开放的、非限制件的意义使用。
缩写
本文所用的下列缩写旨在具有如下含义(另外的缩写在本说明书中需要的地方提供)
ATP三磷酸腺苷
Boc 或 BOC叔丁氧羰基
DCM二氯甲烷
DMF二甲基甲酰胺
DMSO二甲亚砜
DIEA二异丙基乙胺
EDCI1- (3- 二甲基氨丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐
EDTA乙二胺四乙酸
EtOAc乙酸乙酯
FP荧光偏振
HOBT 或 HOBt1-羟基苯并三唑水合物
LC/MS(ESI)液相色谱/质谱(电喷射电离)
26
甲醇
核磁共振
三氟乙酸 四氢呋喃 薄层色谱法^Ji除非另外指明，否则术语“烷基”指具有最多12个碳原子，优选最多6个碳原子的 直链的和支链的基团，包括(但不限于)甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、仲丁基、叔 丁基、戊基、异戊基、己基、异己基、庚基、辛基、2，2，4_三甲基戊基、壬基、癸基、i^一烷基和
十·~ 焼基。术语“羟烷基”指具有最多6个碳原子的直链的和支链的基团，其中一个氢原子已 被OH基取代。术语“羟烷基氨基”指其中碳链上的一个氢原子已被氨基取代的羟烷基，其中氮是 与分子的其他部分的连接点。术语“环烷基”指由3至8个碳原子构成的饱和的或部分饱和的环。在该环上任 选可存在最多四个烷基取代基。例子包括环丙基、1，1-二甲基环丁基、1，2，3_三甲基环戊 基、环己基、环戊烯基、环己烯基和4，4- 二甲基环己烯基。术语“二氢砜代吡喃基(dihydrosulfonopyranyl) ”指如下基团术语“羟烷基”指至少一个羟基键合至烷基链上的任何碳原子。术语“氨基烷基”指至少一个伯氨基或仲氨基键合至烷基链上的任何碳原子，其中 烷基为与分子的其他部分的连接点。术语“烷基氨基”指具有一个烷基取代基的氨基，其中所述氨基为与分子的其他部 分的连接点。术语“二烷基氨基”指具有两个烷基取代基的氨基，其中所述氨基为与分子的其他 部分的连接点。术语“杂芳族”或“杂芳基”指5至7元单环或8至10元双环芳环体系，其任何环 可由一个至四个选自N、0或S的杂原子组成，其中氮原子和硫原子可以任何允许的氧化态 存在。例子包括苯并咪唑基、苯并噻唑基、苯并噻吩基、苯并噁唑基、呋喃基、咪唑基、异噻唑 基、异噁唑基、噁唑基、吡嗪基、批唑基、吡啶基、嘧啶基、吡咯基、喹啉基、噻唑基和噻吩基。术语“杂原子”指氮原子、氧原子或硫原子，其中所述氮原子和硫原子可以任何允 许的氧化态存在。除非另外指明，否则术语“烷氧基”指键合至氧原子的具有最多12个碳原子的直 链或支链基团。例子包括甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基和丁氧基。术语“芳基”指环中含有6至12个碳的单环或双环芳环体系。烷基取代基可任选 存在于该环上。例子包括苯、联苯和萘。
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术语“芳烷基”指含有芳基取代基的CV6烷基。例子包括苄基、苯乙基或2-萘基甲基。术语“磺酰基”指-S(O)2Ra基团，其中Ra为氢、烷基、环烷基、卤代烷基、芳基、芳烷 基、杂芳基和杂芳烷基。“磺酰化剂”可将-S(O)2Ra基团加至分子。 本发明包括使用式I化合物(在本文中称为“本发明化合物”) 或其溶剂化物、水合物、互变异构体或可药用盐的方法，其中A 为苯基或吡啶基，其任一者可由氯、氟、甲基、-N3> -NH2, -NH(烷基)、-N(烷 基)2、-S (烷基)、-0 (烷基)或4-氨基苯基中的一者取代；W 为吡咯基(包括IH-吡咯-2-基)、咪唑基(包括IH-咪唑-2-基)、异噁唑基、噁 唑基、1，2，4-三唑基或呋喃基(包括呋喃-2-基)，其任一者可通过任何碳原子连接，其中 吡咯基、咪唑基、异噁唑基、噁唑基、1，2，4_三唑基或呋喃基可含有一个连接至任何其他碳 的-Cl、-CN、-NO2, -OMe 或-CF3 取代基；R2 为环烷基(包括环己烯基、环戊烯基)、噻吩基、二氢砜代吡喃基、苯基、呋喃基、四 氢吡啶基或二氢吡喃基，其任一者可独立地由每个如下基团中的一者或两者取代氯、氟和 C(1_3)烷基(包括4，4-二甲基环己烯基、4-甲基环己烯基、2-甲基噻吩基、3-甲基噻吩基)， 前提条件是，四氢吡啶基通过碳_碳键连接至环A ；X 为
Ra D·
^2S-
I
或 RbZ 为CH 或 N ；
D1 禾口 D2各自为氢或合在一起形成连接氧的双键；D3 和 D4各自为氢或合在一起形成连接氧的双键；D5 为氢或-CH3，其中所述-CH3可相对地取向为顺式或反式；Ra和Rb独立地为氢、环烷基、卤代烷基、芳基、芳烷基、杂芳基或杂芳烷基；E 为N、S、0、SO或SO2,前提条件是，如果同时满足以下三个条件则E不可以为N =Qa不 存在；Qb不存在；且R3为其中与E的连接点为N的氨基或环氨基；Qa 为不存在、-CH2-、-CH2CH2-或C(O)；Qb 为不存在、-NH-、-CH2-、-CH2CH2-或C (0)，前提条件是，如果Qa为C (0)则Qb不可以 为C(O)，另外的前提条件是，如果E为N且Qa不存在则Qb不可以为-NH-，进一步的前提条 件是，如果R3为其中与Qb的连接点为N的氨基或环氨基则Qb不可以为-NH-；R3 是氢、苯基、羟烷基氨基(包括2-羟基乙氨基)、(羟烷基)2氨基、羟烷基(烷基)氨 基(包括1-羟乙-2-基(甲基)氨基)、烷基氨基(包括甲氨基)、氨基烷基(包括2-氨基异 丙基)、二羟基烷基(包括1，3- 二羟基异丙基、1，2- 二羟基乙基)、烷氧基(包括甲氧基)、 二烷基氨基(包括二甲氨基)、羟烷基(包括I-羟基乙-2-基)、-C00H、_C0NH2、-CN、-S02-g 基-R4 (包括-SO2CH3) ,-NH2,或含有至少一个杂原子N并且可任选含有选自S、S02、N和0的 额外杂部分(heteromoiety)的5或6元环，并且该5或6元环可以是饱和的、部分不饱和 的或芳族的(包括哌啶基、吗啉基、咪唑基和吡啶基)，其中该5或6元环中的芳族氮可以作 为N-氧化物(包括吡啶基N-氧化物)存在，并且该5或6元环可任选由甲基、卤素、烷基 氨基或烷氧基(包括1-甲基咪唑基)取代；R3也可以不存在，前提条件是E为氮时R3不能 不存在；R4 是氢、-0H、烷氧基、羧基、甲酰胺基或氨甲酰基。实施例本发明的实施例包括式I化合物，其中a)A 为苯基或吡啶基，其任一者可由氯、氟、甲基、-N3> -NH2, -NH(烷基)、-N(烷 基)2、-S (烷基)、-0 (烷基)或4-氨基苯基中的一者取代；b)A 为苯基；c) W 为吡咯基(包括IH-吡咯-2-基)、咪唑基(包括IH-咪唑-2-基)、异噁唑基、噁
29唑基、1，2，4-三唑基或呋喃基(包括呋喃-2-基)，其任一者可通过任何碳原子连接，其中 吡咯基、咪唑基、异噁唑基、噁唑基、1，2，4-三唑基或呋喃基可含有一个连接至任何其他碳 的-Cl、-CN、-NO2, -OMe 或-CF3 取代基；d)W 为呋喃-2-基、IH-吡咯-2-基或IH-咪唑_2_基，其任一者可在第4或5位碳原子 处被-CN取代；e)W 为3H-2-咪唑基-4-甲腈或5-氰基-IH-吡咯_2_基；f)W 为3H-2-咪唑基-4-甲腈；g)R2 为环烷基(包括环己烯基、环戊烯基)、噻吩基、二氢砜代吡喃基、苯基、呋喃基、四 氢吡啶基或二氢吡喃基，其任一者可独立地由每个如下基团中的一者或两者取代氯、氟和 C(1_3)烷基(包括4，4-二甲基环己烯基、4-甲基环己烯基、2-甲基噻吩基、3-甲基噻吩基)， 前提条件是，四氢吡啶基通过碳_碳键连接至环A ；h)R2 为环烷基(包括环己烯基、环戊烯基)，其可由一个或两个C(1_3)烷基(包括4，4_ 二 甲基环己烯基、4-甲基环己烯基)取代；i)R2 为环己烯基，其可由一个或两个C(1_3)烷基取代；j)R2 为环己烯基、4，4- 二甲基环己烯基或4-甲基环己烯基；k)R2 为环己烯基；1)X 为 m)X 为 ο) Z 为CH或 N;p)Z 为CH;q) D1 和 D2各自为氢或合在一起形成连接氧的双键；r) D1 和 D2各自为氢；s) D3 和 D4各自为氢或合在一起形成连接氧的双键；t) D3 和 D4各自为氢；U) D5 为氢或-CH3，其中所述-CH3可相对地取向为顺式或反式；ν) Ra和Rb独立地为氢、环烷基、卤代烷基、芳基、芳烷基、杂芳基或杂芳烷基；w) E 为N、S、0、SO或SO2,前提条件是，如果同时满足以下三个条件则E不可以为N =Qa不 存在；Qb不存在；且R3为其中与E的连接点为N的氨基或环氨基；x)E 为N，前提条件是，如果同时满足以下三个条件则E不可以为N :Qa不存在；Qb不存在； 且R3为其中与E的连接点为N的氨基或环氨基； cc) Qb 为不存在、-NH-、-CH2-、-CH2CH2-或C(O)，前提条件是，如果Qa为C(O)则Qb不可以 为C(O)，另外的前提条件是，如果E为N且Qa不存在则Qb不可以为-NH-，进一步的前提条 件是，如果R3为其中与Qb的连接点为N的氨基或环氨基则Qb不可以为-NH-；dd)Qb 为不存在、-CH2CH2-或C(O)，前提条件是，如果QaSC(O)则Qb不可以为C(O)；ee)Qb 为不存在或C(O)，前提条件是，如果QaSC(O)则Qb不可以为C(O)；ff)R3 为氢、苯基、羟烷基氨基(包括2-羟基乙氨基)、(羟烷基)2氨基、羟烷基(烷基)氨 基(包括1-羟乙-2-基(甲基)氨基)、烷基氨基(包括甲氨基)、氨基烷基(包括2-氨基异 丙基)、二羟基烷基(包括1，3- 二羟基异丙基、1，2- 二羟基乙基)、烷氧基(包括甲氧基)、 二烷基氨基(包括二甲氨基)、羟烷基(包括I-羟基乙-2-基)、-C00H、_C0NH2、-CN、-S02-g 基-R4 (包括-SO2CH3) ,-NH2,或含有至少一个杂原子N并且可任选含有选自S、S02、N和0的 额外杂部分的5或6元环，并且该5或6元环可以是饱和的、部分饱和的或芳族的(包括哌 啶基、吗啉基、咪唑基和吡啶基)，其中该5或6元环中的芳族氮可以作为N-氧化物(包括 吡啶基N-氧化物)存在，并且该5或6元环可任选由甲基、卤素、烷基氨基或烷氧基(包括 1-甲基咪唑基)取代；R3也可以不存在，前提条件是E为氮时R3不能不存在；gg)R3 为氢、苯基、2-羟基乙氨基、1-羟乙-2-基(甲基)氨基、甲氨基、2-氨基异丙基、1， 3_二羟基异丙基、1，2_二羟基乙基、甲氧基、二甲氨基、1-羟基乙-2-基、-C00H、-C0NH2、-CN、 -S02-、-SO2CH3)、-NH2、哌啶基、吗啉基、咪唑基、吡啶基、吡啶基N-氧化物或1-甲基咪唑基；hh)R3 为烷基氨基(包括甲氨基)、二烷基氨基(包括二甲氨基)或-SO2-烷基-R4(包 括-SO2CH3)；ii)R3 为甲氨基、二甲氨基或一SO2CH3 ；jj)R3 为二甲氨基；kk)R4 为氢、-0H、烷氧基、羧基、甲酰胺基或氨甲酰基；并且11)R4 为氢；以及上述的a)至11)(包括a)和11))的所有组合。式I的其他优选实施例是其中为如下情况的那些实施例A 为苯基或吡啶基，其任一者可由氯、氟、甲基、-N3> -NH2, -NH(烷基)、-N(烷 基)2、-S (烷基)、-0 (烷基)或4-氨基苯基中的一者取代；W 为
吡咯基、咪唑基、异噁唑基、噁唑基、1，2，4-三唑基或呋喃基，其任一者可通过任何 碳原子连接，其中吡咯基、咪唑基、异噁唑基、噁唑基、1，2，4-三唑基或呋喃基可含有一个连 接至任何其他碳的-Cl、-CN、-NO2、-OMe或-CF3取代基；R2 为:环烷基、噻吩基、二氢砜代吡喃基、苯基、呋喃基、四氢吡啶基或二氢吡喃基，其任 一者可独立地由每个如下基团中的一者或两者取代氯、氟和C(1_3)烷基，前提条件是，四氢 吡啶基通过碳_碳键连接至环A ；X 为 并且相对于-NHCO-W为对位取向；Z 为CH或 N;D1 禾口 D2各自为氢或合在一起形成连接氧的双键；D3 禾口 D4各自为氢或合在一起形成连接氧的双键；D5 为氢或-CH3，其中所述-CH3可相对地取向为顺式或反式；Ra和Rb独立地为氢、环烷基、卤代烷基、芳基、芳烷基、杂芳基或杂芳烷基；E 为N、S、0、SO或SO2，前提条件是，如果同时满足以下三个条件则E不可以为N =Qa不 存在；Qb不存在；且R3为其中与E的连接点为N的氨基或环氨基；Qa 为不存在、-CH2-、-CH2CH2-或C(O)；Qb 为不存在、-NH-、-CH2-、-CH2CH2-或C (0)，前提条件是，如果Qa为C (0)则Qb不可以 为C(O)，另外的前提条件是，如果E为N且Qa不存在则Qb不可以为-NH-，进一步的前提条 件是，如果R3为其中与Qb的连接点为N的氨基或环氨基则Qb不可以为-NH-；R3 为
氢、羟烷基氨基、(羟烷基)2氨基、烷基氨基、氨基烷基、二羟基烷基、烷氧基、二烷 基氨基、羟烷基、-C00H、-CONH2, -CN、-SO2-烷基-R4、-NH2,或含有至少一个杂原子N并且可 任选含有选自S、SO2、N和0的额外杂部分的5或6元环，并且该5或6元环可以是饱和的、 部分不饱和的或芳族的，其中该5或6元环中的芳族氮可以作为N-氧化物存在，并且该5 或6元环可任选由甲基、商素、烷基氨基或烷氧基取代；R3也可以不存在，前提条件是E为氮 时R3不能不存在；R4 为氢、-0H、烷氧基、羧基、甲酰胺基或氨甲酰基。式I的其他优选实施例是其中为如下情况的那些实施例A 为苯基或吡啶基；W 为吡咯基、咪唑基、异噁唑基、噁唑基、1，2，4-三唑基或呋喃基，其任一者可通过任何 碳原子连接，其中吡咯基、咪唑基、异噁唑基、噁唑基、1，2，4-三唑基或呋喃基可含有一个连 接至任何其他碳的-Cl、-CN、-NO2、-OMe或-CF3取代基；R2 为:环烷基、噻吩基、二氢砜代吡喃基、苯基、呋喃基、四氢吡啶基或二氢吡喃基，其任 一者可独立地由每个如下基团中的一者或两者取代氯、氟和C(1_3)烷基，前提条件是，四氢 吡啶基通过碳_碳键连接至环A ；X 为 并且相对于-NHCO-W为对位取向；Z 为CH或 N;D1 和 D2各自为氢或合在一起形成连接氧的双键；D3 和 D4各自为氢或合在一起形成连接氧的双键；D5 为氢或-CH3，其中所述-CH3可相对地取向为顺式或反式；
Ra和Rb独立地为氢、环烷基、卤代烷基、芳基、芳烷基、杂芳基或杂芳烷基；E 为N、S、0、SO或SO2,前提条件是，如果同时满足以下三个条件则E不可以为N =Qa不 存在；Qb不存在；且R3为其中与E的连接点为N的氨基或环氨基；Qa 为不存在、-CH2-、-CH2CH2-或C(O)；Qb 为不存在、-NH-、-CH2-、-CH2CH2-或C (0)，前提条件是，如果Qa为C (0)则Qb不可以 为C(O)，另外的前提条件是，如果E为N且Qa不存在则Qb不可以为-NH-，进一步的前提条 件是，如果R3为其中与Qb的连接点为N的氨基或环氨基则Qb不可以为-NH-；R3 为氢、羟烷基氨基、(羟烷基)2氨基、烷基氨基、氨基烷基、二羟基烷基、烷氧基、二烷 基氨基、羟烷基、-C00H、-CONH2, -CN、-SO2-烷基-R4、-NH2,或含有至少一个杂原子N并且可 任选含有选自S、SO2、N和0的额外杂部分的5或6元环，并且该5或6元环可以是饱和的、 部分不饱和的或芳族的，其中该5或6元环中的芳族氮可以作为N-氧化物存在，并且该5 或6元环可任选由甲基、商素、烷基氨基或烷氧基取代；R3也可以不存在，前提条件是E为氮 时R3不能不存在；R4 为氢、-0H、烷氧基、羧基、甲酰胺基或氨甲酰基。式I的其他优选实施例是其中为如下情况的那些实施例A 为苯基或吡啶基；W 为3H-2-咪唑基-4-甲腈；R2 为环烷基、噻吩基、二氢砜代吡喃基、苯基、呋喃基、四氢吡啶基或二氢吡喃基，其任 一者可独立地由每个如下基团中的一者或两者取代氯、氟和C(1_3)烷基，前提条件是，四氢 吡啶基通过碳_碳键连接至环A ；X 为
35 并且相对于-NHCO-W为对位取向；Z 为CH 或 N ；D1 和 D2各自为氢或合在一起形成连接氧的双键；D3 和 D4各自为氢或合在一起形成连接氧的双键；D5 为氢或-CH3，其中所述-CH3可相对地取向为顺式或反式；Ra和Rb独立地为氢、环烷基、卤代烷基、芳基、芳烷基、杂芳基或杂芳烷基；E 为N、S、0、SO或SO2,前提条件是，如果同时满足以下三个条件则E不可以为N =Qa不 存在；Qb不存在；且R3为其中与E的连接点为N的氨基或环氨基；Qa 为不存在、-CH2-、-CH2CH2-或C(O)；Qb 为不存在、-NH-、-CH2-、-CH2CH2-或C (0)，前提条件是，如果Qa为C (0)则Qb不可以 为C(O)，另外的前提条件是，如果E为N且Qa不存在则Qb不可以为-NH-，进一步的前提条 件是，如果R3为其中与Qb的连接点为N的氨基或环氨基则Qb不可以为-NH-；R3 为氢、羟烷基氨基、(羟烷基)2氨基、烷基氨基、氨基烷基、二羟基烷基、烷氧基、二烷 基氨基、羟烷基、-C00H、-CONH2, -CN、-SO2-烷基-R4、-NH2,或含有至少一个杂原子N并且可 任选含有选自S、SO2、N和0的额外杂部分的5或6元环，并且该5或6元环可以是饱和的、 部分不饱和的或芳族的，其中该5或6元环中的芳族氮可以作为N-氧化物存在，并且该5 或6元环可任选由甲基、商素、烷基氨基或烷氧基取代；R3也可以不存在，前提条件是E为氮 时R3不能不存在；R4 为氢、-0H、烷氧基、羧基、甲酰胺基或氨甲酰基。式I的其他优选实施例是其中为如下情况的那些实施例 A 为苯基或吡啶基；W 为3H-2-咪唑基-4-甲腈；R2 为可由一个或两个甲基取代的环己烯基；X 为并且相对于-NHCO-W为对位取向；Z 为CH 或 N ；D1 禾口 D2各自为氢或合在一起形成连接氧的双键；D3 和 D4各自为氢或合在一起形成连接氧的双键；D5 为氢或-CH3，其中所述-CH3可相对地取向为顺式或反式；Ra和Rb独立地为氢、环烷基、卤代烷基、芳基、芳烷基、杂芳基或杂芳烷基；E 为N、S、0、SO或SO2,前提条件是，如果同时满足以下三个条件则E不可以为N =Qa不 存在；Qb不存在；且R3为其中与E的连接点为N的氨基或环氨基；Qa 为不存在、-CH2-、-CH2CH2-或C(O)；Qb 为不存在、-NH-、-CH2-、-CH2CH2-或C (0)，前提条件是，如果Qa为C (0)则Qb不可以 为C(O)，另外的前提条件是，如果E为N且Qa不存在则Qb不可以为-NH-，进一步的前提条 件是，如果R3为其中与Qb的连接点为N的氨基或环氨基则Qb不可以为-NH-；R3 为氢、羟烷基氨基、(羟烷基)2氨基、烷基氨基、氨基烷基、二羟基烷基、烷氧基、二烷基氨基、羟烷基、-C00H、-CONH2, -CN、-SO2-烷基-R4、-NH2,或含有至少一个杂原子N并且可 任选含有选自S、SO2、N和0的额外杂部分的5或6元环，并且该5或6元环可以是饱和的、 部分不饱和的或芳族的，其中该5或6元环中的芳族氮可以作为N-氧化物存在，并且该5 或6元环可任选由甲基、商素、烷基氨基或烷氧基取代；R3也可以不存在，前提条件是E为氮 时R3不能不存在；R4 为氢、-0H、烷氧基、羧基、甲酰胺基或氨甲酰基。式I的其他优选实施例是其中为如下情况的那些实施例A 为苯基或吡啶基；W 为3H-2-咪唑基-4-甲腈；R2 为可由一个或两个甲基取代的环己烯基；X 为 并且相对于-NHCO-W为对位取向；Z 为CH;D1 和 D2各自为氢；D3 和 D4各自为氢；D5 为-CH3，其中所述-CH3可相对地取向为顺式或反式；E 为N ；Qa 为不存在、-CH2-、-CH2CH2-或C(O)；Qb 为不存在、-CH2_、-CH2CH2-或C(O)，前提条件是，如果QaSC(O)则Qb不可以为C(O)， 另外的前提条件是，如果R3为其中与Qb的连接点为N的氨基或环氨基则Qb不可以为-NH-；R3 为氢、羟烷基氨基、(羟烷基)2氨基、烷基氨基、氨基烷基、二羟基烷基、烷氧基、二烷 基氨基、羟烷基、-C00H、-CONH2, -CN、_S02_CH3、_NH2、吡啶基、吡啶基-N-氧化物或吗啉基。
或 H3C
38
式I的其他优选实施例是其中为如下情况的那些实施例A 为苯基或吡啶基；W 为3H-2-咪唑基-4-甲腈；R2 为可由一个或两个甲基取代的环己烯基；X 为 并且相对于-NHCO-W为对位取向。式I化合物的例子包括5-氰基-呋喃-2-甲酸[4- (4-甲基-哌嗪-1-基)_2_ (3_甲基-噻吩_2_基)-苯 基]-酰胺，和5-氰基-呋喃-2-甲酸[4- (4-甲基-哌嗪基)_2_ (2_甲基-噻吩_3_基)-苯 基]-酰胺，以及它们的溶剂化物、水合物、互变异构体和可药用盐。式I化合物的另外的例子包括4-氰基-IH-咪唑-2-甲酸[4-(1-乙酰基-哌啶-4-基)-2-(1，2，5，6-四氢-吡 啶-3-基)_苯基]_酰胺，4-氰基-IH-咪唑-2-甲酸[2-环己-1-烯基-4-(l，l-二氧代-六氢-1λ6-噻 喃-4-基)-苯基]-酰胺，5-氰基-呋喃-2-甲酸[2-环己-1-烯基_4_ (4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-酰 胺，5-氰基-呋喃-2-甲酸[2- (3，6- 二氢_2Η_吡喃_4_基)_4_ (4-甲基-哌 嗪-1-基)_苯基]_酰胺，4-氰基-IH-咪唑-2-甲酸[2_(1，1_ 二氧代 _1，2，3，6_ 四氢-1 λ 6-噻 喃-4-基)-4-哌啶-4-基-苯基]-酰胺，4-氰基-IH-咪唑-2-甲酸[4_(1_乙酰基-哌啶_4_基)_2_ (1，1_ 二氧代-1，2， 3,6-四氢-1 λ6-噻喃-4-基)-苯基]-酰胺，5-氰基-呋喃-2-甲酸[2‘-甲基-5-(4_甲基-哌嗪-1-基)_联苯-2-基]-酰胺，和5-氰基-呋喃-2-甲酸[2‘-氟-5-(4_甲基-哌嗪-1-基)_联苯-2-基]-酰 胺，以及它们的溶剂化物、水合物、互变异构体和可药用盐。式I化合物的另外的例子是(4-{4-[(4-氰基-IH-咪唑_2_羰基)_氨基]_3_环己烯基-苯基}-哌 啶-1-基)_乙酸，4-氰基-IH-咪唑-2-甲酸[4-(1_氨甲酰甲基-哌啶-4-基)-2_环己-1-烯 基-苯基]-酰胺，4-氰基-IH-咪唑-2-甲酸[2_(4_甲基-环己烯基)_4_哌啶_4_基-苯 基]-酰胺，4-氰基-IH-咪唑-2-甲酸{2-环己烯基_4-[1_(2-羟基-乙基)_哌 啶-4-基]-苯基}_酰胺，4-氰基-IH-咪唑-2-甲酸[2_(4_甲基-环己烯基)_4_(1_吡啶_2_基甲 基-哌啶-4-基)-苯基]-酰胺，4-氰基-IH-咪唑-2-甲酸{2_环己烯基_4-[1-(2_羟基羟甲基-乙 基)-哌啶-4-基]-苯基}-酰胺，4-氰基-IH-咪唑-2-甲酸{4_[1_ (2_氰基-乙基)-哌啶_4_基]_2_环己烯
基-苯基}-酰胺，4-氰基-IH-咪唑-2-甲酸{2_环己烯基_4-[1_ (2_吗啉_4_基-乙基)-哌 啶-4-基]-苯基}_酰胺，4-氰基-IH-咪唑-2-甲酸(2_环己烯基_4_哌啶_4_基-苯基)-酰胺，4-氰基-IH-咪唑-2-甲酸{2-环己烯基_4-[1_(2-甲磺酰基-乙基)_哌 啶-4-基]-苯基}_酰胺，4-氰基-IH-咪唑-2-甲酸[2-环己烯基_4_ (1_吡啶_2_基甲基-哌 啶-4-基)_苯基]-酰胺，4-氰基-IH-咪唑-2-甲酸{2-环戊-1-烯基-4-[l-(l-甲基-IH-咪唑_2_基甲 基)-哌啶-4-基]-苯基}-酰胺，4-氰基-IH-咪唑-2-甲酸(2_环戊烯基_4_哌啶_4_基-苯基)-酰胺，4-氰基-IH-吡咯-2-甲酸(2_环己烯基_4_哌啶_4_基-苯基)-酰胺，4-氰基-IH-咪唑-2-甲酸[2-环己-1-烯基-4_(3，4，5，6-四氢-2H-[1，2'] 联吡啶-4-基)-苯基]-酰胺，和4-氰基-IH-吡咯-2-甲酸[4_(1_乙酰基-哌啶_4_基)_2_环己烯基-苯 基]-酰胺，以及它们的溶剂化物、水合物、互变异构体和可药用盐。式I化合物的其他例子是4-氰基-IH-咪唑-2-甲酸{2_环己烯基_4_ [1_ (1_氧基-吡啶_3_羰基)-哌 啶-4-基]-苯基}_酰胺，4-氰基-IH-咪唑-2-甲酸{2_环己烯基_4_ [1_ (1_氧基-吡啶_4_羰基)-哌啶-4-基]-苯基}_酰胺， 4-氰基-IH-咪唑-2-甲酸{2-环己-1-烯基-4-[l-(3-吗啉-4-基-丙酰基)_哌 啶-4-基]-苯基}_酰胺， 4- {4- [ (4-氰基-IH-咪唑_2_羰基)_氨基]_3_环己烯基-苯基}-哌啶甲 酸酰胺，4-氰基-IH-咪唑-2-甲酸{2-环己烯基_4-[1_(吡啶_3_羰基)-哌 啶-4-基]-苯基}_酰胺，4- {4- [ (4-氰基-IH-咪唑_2_羰基)_氨基]_3_环己烯基-苯基}-哌啶甲 酸(2-羟基-乙基)-酰胺，4-氰基-IH-咪唑-2-甲酸{2_环己烯基_4-[1-(2_3Η-咪唑_4_基-乙酰 基)-哌啶-4-基]-苯基}-酰胺，4-氰基-IH-咪唑-2-甲酸{2_环己烯基_4_ [1_ (2-吡啶_4_基-乙酰基)-哌 啶-4-基]-苯基}_酰胺，4-氰基-IH-咪唑-2-甲酸(2_环己烯基-4-{1-[2-(1_甲基-IH-咪 唑-4-基)-乙酰基]-哌啶-4-基}-苯基)-酰胺，4-氰基-IH-咪唑-2-甲酸{2_环己烯基_4_ [1_ (2-吡啶_3_基-乙酰基)-哌 啶-4-基]-苯基}_酰胺，4-氰基-IH-咪唑-2-甲酸{2_环己烯基_4-[1_ (2-甲磺酰基-乙酰基)-哌 啶-4-基]-苯基}_酰胺，4-氰基-IH-咪唑-2-甲酸{2_环己烯基_4_ [1_ (2-吡啶_2_基-乙酰基)-哌 啶-4-基]-苯基}_酰胺，和4-氰基-IH-咪唑-2-甲酸[4-(1-乙酰基-哌啶_4_基)_2_环己烯基-苯 基]-酰胺，以及它们的溶剂化物、水合物、互变异构体和可药用盐。式I的另外的示例化合物是4-氰基-IH-咪唑-2-甲酸[2-环己烯基_4_ (1_ {2_[ (2-羟基-乙基)-甲 基-氨基]-乙酰基}_哌啶-4-基)-苯基]-酰胺，以及它们的溶剂化物、水合物、互变异构体和可药用盐。式I的另外的示例化合物是4-氰基-IH-咪唑-2-甲酸{2_环己烯基_4-[1_ (2_ 二甲氨基-乙酰基)-哌 啶-4-基]-苯基}_酰胺，以及它们的溶剂化物、水合物、互变异构体和可药用盐。式I的另外的示例化合物是4-氰基-IH-咪唑-2-甲酸{2_环己烯基_4-[1_ (2_吗啉_4_基-乙酰基)-哌 啶-4-基]-苯基}_酰胺，以及它们的溶剂化物、水合物、互变异构体和可药用盐。式I的其他示例化合物是4-氰基-IH-咪唑-2-甲酸{4- [ 1- (3-氨基_3_甲基-丁酰基)-哌啶_4_基]_2_环 己-1-烯基-苯基}-酰胺三氟乙酸盐，
4H-[1，2，4]_三唑-3-甲酸(2_环己烯基_4_哌啶_4_基-苯基)-酰胺双三 氟乙酸盐，5-氯_4!1-[1，2，4]-三唑-3-甲酸(2_环己烯基_4_哌啶_4_基-苯基)-酰
胺三氟乙酸盐，5-氰基-IH-咪唑-2-甲酸[2_环己烯基_4_(顺式_2，6_ 二甲基-哌 啶-4-基)-苯基]-酰胺双三氟乙酸盐，5-氰基-IH-咪唑-2-甲酸[2_环己烯基_4_ (反式_2，6- 二甲基-哌 啶-4-基)-苯基]-酰胺双三氟乙酸盐，5-氰基-IH-咪唑-2-甲酸{2_ 环己 烯基-4_[1_ (R) - (+) - (2，3_ 二羟基-丙 酰基)_哌啶-4-基]-苯基}-酰胺，5-氰基-IH-咪唑-2-甲酸[2_环己烯基_4_(1_甲氧基-哌啶_4_基)-苯 基]-酰胺三氟乙酸盐，4-氰基-IH-咪唑-2-甲酸[6-(4，4-二甲基-环己-1-烯基)_1' ,2' ,3' ,4'， 5'，6'-六氢-[2，4']联吡啶-5-基]-酰胺三氟乙酸盐，5-氰基-IH-咪唑-2-甲酸{4- [ 1- (2-氨基_2_甲基-丙酰基)-哌啶_4_基]_2_环 己-1-烯基-苯基}-酰胺三氟乙酸盐，和5-氰基-IH-咪唑-2-甲酸[6-环己-1-烯基-1' -(2-甲磺酰基-乙基)_1 ‘， 2'，3'，4'，5'，6'-六氢-[2，4']联吡啶 _5_ 基]-酰胺，以及它们的溶剂化物、水合物、互变异构体和可药用盐。式I的另外的示例化合物是4-氰基-IH-咪唑-2-甲酸{2-环己-1-烯基-4-[l-(2-甲氨基-乙酰基)_哌 啶-4-基]-苯基}_酰胺，4-氰基-IH-咪唑-2-甲酸[1' _(2_ 二甲氨基-乙酰基)_6_ (4，4_ 二甲基-环 己-1-烯基)_1'，2'，3'，4'，5'，6'-六氢-[2，4']联吡啶_5_基]-酰胺三氟乙酸 盐，和4-氰基-IH-咪唑-2-甲酸[6-(4，4_ 二甲基-环己-1-烯基)-Γ _(2_甲磺酰 基-乙基)-1'，2'，3'，4'，5'，6'-六氢-[2，4']联吡啶_5_基]-酰胺三氟乙酸盐，以及它们的溶剂化物、水合物、互变异构体和可药用盐。本文所用的术语“本发明化合物”应该也包括它们的溶剂化物、水合物、互变异构 体或可药用盐。可药用盐如所说明的，本发明化合物也可以可药用盐的形式存在。对于医学中的使用，本发明化合物的盐指无毒的“可药用盐”。FDA核准的可药用 盐形式(Ref. International J. Pharm. 1986，33，201-217 ;J. Pharm. Sci.，1977，Jan，66 (1)， pl)包括可药用酸式/阴离子盐或碱式/阳离子盐。可药用酸式/阴离子盐包括(但不限于)乙酸盐、苯磺酸盐、苯甲酸盐、碳酸氢盐、 酒石酸氢盐、溴化物、依地酸钙、樟脑磺酸盐、碳酸盐、氯化物、柠檬酸盐、二盐酸盐、依地酸 盐、乙二磺酸盐、依托酸盐、乙磺酸酯、延胡索酸盐、葡庚糖酸盐、葡糖酸盐、谷氨酸盐、对羟 乙酰氨基苯胂酸盐、己基间苯二酚盐、海巴明、氢溴酸盐、盐酸盐、羟萘酸盐、碘化物、羟乙基
42磺酸盐、乳酸盐、乳糖酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、扁桃酸盐、甲磺酸盐、甲基溴化物、甲基硝 酸盐、甲基硫酸盐、粘液酸盐、萘磺酸盐、硝酸盐、双羟萘酸盐、泛酸盐、磷酸盐/ 二磷酸盐、 聚半乳糖醛酸盐、水杨酸盐、硬脂酸盐、次乙酸盐、琥珀酸盐、硫酸盐、鞣酸盐、酒石酸盐、茶 氯酸盐、甲苯磺酸盐以及三乙碘化物。有机酸或无机酸还包括但不限于氢碘酸、过氯酸、硫 酸、磷酸、丙酸、乙醇酸、甲磺酸、羟基乙磺酸、草酸、2_萘磺酸、对甲苯磺酸、环己烷氨基磺 酸、糖精酸或三氟乙酸。可药用碱式/阳离子盐包括(不限于)铝盐、2-氨基-2-羟甲基-丙-1，3- 二醇 (也称为三(羟甲基)氨基甲烷、tromethane或“TRIS”)、氨盐、苄星、叔丁胺、钙盐、葡萄糖 酸钙、氢氧化钙、氯普鲁卡因、胆碱、胆碱碳酸氢盐、氯化胆碱、环己胺、二乙醇胺、乙二胺、锂 盐、LiOMe、L-赖氨酸、镁盐、葡甲胺、NH3> NH4OH, N-甲基-D-葡萄糖胺、哌啶、钾盐、叔丁醇 钾、氢氧化钾(水溶液)、普鲁卡因、奎宁、钠盐、碳酸钠、2-乙基己酸钠(SEH)、氢氧化钠或锌
Τττ . οMM本发明在其范围之内还包括本发明化合物的前药。一般而言，此类前药将是所述 化合物的官能衍生物，这些衍生物在体内容易转化为活性化合物。因此，在本发明的治疗方 法中，术语“MM”应涵盖采用本发明化合物或其前药治疗、缓解或预防本文所描述的综合 征、障碍或疾病的手段，所述前药虽然没有被具体公开任何给定化合物，但明显包括在本发 明的范围之内。选择和制备合适的前药衍生物的常规方法在(例如)以下文献中有所描述 “Design of Prodrugs” (前药设计)，H. Bundgaard(编辑)，Elsevier, 1985。立体异构体本领域技术人员将认识到，本发明的某些化合物在其结构中具有一个或多个不对 称碳原子。意图本发明将本发明化合物的单一对映体形式、外消旋混合物以及其中存在对 映体过量的对映体混合物包括在其范围内。本文所用的术语述”定义了本发明化合物和它们的N-氧化物、加成盐、 季胺以及生理功能性衍生物可具有的所有可能的纯手性形式。立体化学上纯的异构形式可通过应用本领域已知的原理来获得。非对映异构体可 通过物理分离方法例如分步结晶和色谱技术进行分离，而对映体可通过使与光学活性酸或 碱所成的非对映体盐进行选择性结晶或通过手性色谱来彼此分离。纯的立体异构体也可用 合适的立体化学上纯的原料合成法制备，或者可通过使用立体选择性反应合成法制备。术语“异构体”指具有相同的组成和分子量，但物理和/或化学性质不同的化合 物。此类物质具有相同数目和种类的原子，但结构不同。结构差异可在于构造(几何异构 体)或在于使偏振光的平面旋转的能力(对映体)。术语“立体异构体”指构造相同伯.在其原子空间排列上不同的异构体。对映体和 非对映体是立体异构体的例子。术语“手件的”指分子的结构特征，该特征使得不可能将其重》在其镜像上。术语“对映体”指互为镜像并且不可重叠的一对分子物质之一。术语“非对映体”指不互为镜像的立体异构体。符号“R”和“S”代表手性碳原子周围的取代基的构型。术语“外消旋物”或“外消旋混合物”指由等摩尔量的两种对映体物质组成的组合物，其中该组合物没有光学活性。术语“纯手件”指对映体纯的状态。术语“光学活件”指纯手性分子或手性分子的非外消旋混合物使偏振光的平面旋 转的度数。应当理解，用于制备本发明化合物的各种取代(substituent)立体异构体、几何 异构体及其混合物可商购获得，可用可商购的原料合成法制备，或者可制备为异构体混合 物然后用本领域技术人员熟知的技术作为拆分的异构体获得。本文所述的有关异构的描述词“R”和“S”是用于指示相对于核心分子的原子构 型，并旨在如文献(IUPAC Recommendations for Fundamental Stereochemistry (Section Ε)，Pure App 1. Chem.，1976，45 13-30)中所定义进行使用。可通过异构体特异性合成或从异构体混合物拆分，将本发明化合物制备成单独的 异构体。常规的拆分技术包括用异构体对的每一异构体的游离碱形成光学活性盐(然后进 行分步结晶和游离碱的再生)；形成异构体对的每一异构体的酯或酰胺(然后进行色谱分 离并去除手性助剂)；或用制备型TLC (薄层色谱法)或手性HPLC柱拆分原料或终产物的 异构体混合物。多晶型物和溶剂化物此外，本发明的化合物可具有一种或多种多晶型或无定形结晶形式，这些多晶型 或无定形结晶形式旨在包括在本发明的范围内。另外，化合物可例如与水形成溶剂化物 (即水合物)或与普通有机溶剂形成溶剂化物。本文所用的术语“MM ”意指本发明化 合物与一个或多个溶剂分子的物理缔合。该物理缔合涉及不同程度的离子键键合和共价键 键合，包括氢键键合。在某些情况下，溶剂化物将能够在(例如)一个或多个溶剂分子掺入 在结晶固体的晶格中时分离出来。术语“溶剂化物”旨在既涵盖溶液相溶剂化物又涵盖可 分离溶剂化物。合适的溶剂化物的非限制性例子包括乙醇化物、甲醇化物等。本发明旨在将本发明化合物的溶剂化物包括在其范围内。因此，在本发明的治疗 方法中，术语“■”应涵盖用本发明的化合物或其溶剂化物治疗、缓解或预防本文所述的 综合征、障碍或疾病的方法，所述溶剂化物虽然没有具体公开，但明显包括在本发明的范围 之内。N-氧化物可根据本领域已知的用于将三价氮转化成其N-氧化物形式的方法，将本发明的 化合物转化成相应的N-氧化物形式。所述N-氧化反应通常可通过使原料与合适的有机或 无机过氧化物反应来进行。合适的无机过氧化物包括(例如)过氧化氢、碱金属或碱土金属 过氧化物如过氧化钠、过氧化钾；合适的有机过氧化物可包括过氧酸例如过氧化苯甲酸或 卤素取代的过氧化苯甲酸如3-氯过氧化苯甲酸、过氧化链烷酸如过氧化乙酸、烷基过氧化 氢如叔丁基过氧化氢。合适的溶剂是(例如)水、低级醇如乙醇等、烃类如甲苯、酮如2-丁 酮、卤化烃如二氯甲烷，以及这些溶剂的混合物。互变异构形式本发明的化合物也可以它们的互变异构形式存在。此类形式虽然未在本专利申请 中明确指出，但也旨在包括在本发明的范围内。本发明化合物的制备
在制备本发明化合物的任何方法过程中，可能有必要和/或需要保护任何有 关分子上的敏感基团或反应性基团。这可通过常规保护基团来实现，如在Protecting Groups, P. Kocienski，Thieme Medical Publishers，2000 ；禾口 Τ· W. Greene & P. G. Μ. Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis,第 3 片反，Wiley Interscience，1999 中描述的 那些保护基团。保护基团可在方便的后续阶段用本领域已知的方法除去。制备方法方案1 方案1示出了用于制备式I化合物的一般方法。式1-2化合物可通过这样获得 使式1-1的氨基化合物进行邻位卤化(优选溴化)，然后用硼酸或硼酸酯进行金属催化的偶 联反应(Suzuki反应，其中R2M为R2B (OH)2或硼酸酯)或用锡试剂进行金属催化的偶联反应 (Stille 反应，其中 R2M为 R2Sn (烷基)3)(关于综述参见N. Miyaura，A. Suzuki，Chem. Rev.， 95 2457 (1995)，J. K. Stille, Angew. Chem, Int. Ed. Engl.，25 508024 (1986)和 A. Suzuki in Metal-Catalyzed Coupling Reactions, F. Deiderich, P. Stang(编辑)，ffiley-VCH, Weinheim(1988))。式1_1化合物可商购获得，或者可用上述的钯介导的交叉偶联反应从原 料1-0产生式1-1化合物。将式1-1化合物溴化的优选条件是在合适的溶剂例如N，N_ 二甲基甲酰胺(DMF)、 二氯甲烷(DCM)或乙腈中使用N-溴琥珀酰亚胺(NBS)。金属催化的偶联反应(优选Suzuki 反应)可根据标准方法进行，优选在存在钯催化剂例如四(三苯基膦)钯(0) (Pd(PPh3)4)、 碱的水溶液如Na2CO3水溶液和合适溶剂例如甲苯、乙醇、二甲氧基乙烷(DME)或DMF的情况 下进行。式I化合物可根据酰胺键形成的标准方法，使式1-2化合物与羧酸WC00H反应而 制备(关于综述参见M. Bodansky 禾P A. Bodansky，The Practice of Peptide Synthesis, Springer-Verlag, NY (1984))，或者可通过与酰氯WCOCl或活化酯WCO2Rq (其中Rq为离去 基团，例如五氟苯基或N-琥珀酰亚胺)反应而制备。与WC00H偶联的优选反应条件是当W 为呋喃时，用草酰氯的DCM溶液与催化剂DMF(DMF as a catalyst)形成酰氯WC0C1，然后在 存在三烷基胺例如DIEA的情况下进行偶联；当W为吡咯时，用1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙 基碳二亚胺盐酸盐(EDCI)和1-羟基苯并三唑-6-亚磺酰氨基甲基盐酸盐(HOBt)；当W为 咪唑时，优选的条件是用三吡咯烷基溴化鳞六氟磷酸盐(PyBrOP)和二异丙基乙胺(DIEA)。应当理解，式I的环A上存在的任选取代基可存在于原料1-1或1-3中，并且在这种情况下，该取代基将能渡过方案1中示出的合成。或者，式I化合物上的各种取代基可以 下述多种方式引入，以提供对式I所列出的任选取代基。存在于式1-0或1-3的环A上的 离去基团"L1 ”可在执行方案1之前进行取代，或者在执行方案1过程中的任一步进行取代。 当这类离去基团(优选氟或氯)由式1-3的硝基活化以进行亲核攻击时，它们可在存在合 适的碱例如K2C03、N，N-二异丙基乙胺(DIEA)或NEt3W情况下，经历由氨和叠氮阴离子或 由胺、醇、硫醇和其他亲核试剂进行的直接亲核芳族取代。当离去基团适合于金属催化的偶 联(优选溴或三氟甲磺酰氧基)时，可以进行多种交叉偶联反应(例如上文所讨论的用于 引入R2的Suzuki或Stille反应)。其他可采用的金属催化偶联反应包括芳族和杂芳族 胺化和酰胺化(有关综述参见S. L. Buchwald 等人，Top. Curr. Chem.，219 131-209 (2001) 禾口 J. F. Hartwig 的"Organopalladium Chemistry for Organic Synthesis, " Wiley Interscience, NY(2002))。如果L1为通过硝基活化的溴、碘或氯，则可采用另外的与2,4, 6-三甲基-环三硼氧烷的金属催化交叉偶联反应以产生任选的甲基取代(参见M. Gray等 人，Tetrahedron Lett. ,41 :6237_40 (2000))。在一些情况下，可如下文所述将初始取代基进一步衍生，以提供式I的最终取代。用于将含氮杂环取代基引入到环A上的另选方法是从环A上的氨基形成杂环。氨 基可以受保护的或未受保护的形式原先存在于原料中，或者可通过使硝基还原而产生，该 硝基也最初存在于原料中或通过硝化反应连接上。另外，氨基可通过使叠氮基还原而形成， 该叠氮基可存在于原料中或者可如上所述用叠氮阴离子对活化的卤素离子进行亲核芳族 取代而产生。氨基也可通过氨或通过受保护的氨等同物的阴离子(例如氨基甲酸叔丁酯) 对活化的卤素离子(在例如硝基卤化合物中)进行亲核芳族取代而产生。如果是以受保护 形式引入，则可根据标准的文献方法对胺进行去保护。(有关胺保护基团和去保护方法的例 子参见Theodora W. Greene 和 Peter G. Μ. Wuts, John Wiley and Sons，Inc.，NY (1991))。 成环反应涉及用合适的任选取代的双亲电子试剂(优选二卤化物或二羰基化合物)处理苯 胺氨基，这在该氨基上产生两个取代基，从而形成任选取代的杂环。就二商化物而言，可加 入多种合适的碱中的任何一种作为酸清除剂，例如碳酸钾、氢氧化钠或三烷基胺(例如三 乙胺)。因此，用双(2-卤乙基)胺如双(2-氯乙基)胺或双(2-溴乙基)胺处理将会得到 哌嗪环(参见例如，J.Med· Chem. ,29 :640_4(1986)和 J.Med· Chem. ,46 :2837 (2003))。该 试剂的胺氮上的任选取代基将会在哌嗪的末端胺上掺入任选的取代基。例如，用N，N-双 (2-氯乙基)苯胺处理将产生N-苯基哌嗪基团。用双(2-卤乙基)醚或双(2-卤乙基)硫 醚处理将分别得到吗啉环或硫吗啉环。直接取代以在环A上引入杂环取代基的另一种另选方法是从醛(即从环A上的甲 酰基)形成杂环。甲酰基可以受保护的或未受保护的形式原先存在于原料中，或可由文献 中已知的多种甲酰化反应(包括Vilsmeier-Haack反应)中的任一种得到(有关甲酰化反 应化学的综述参见G. A. Olah等人，Chem Rev. ,87 (1987))或通过硝基芳香化合物的对甲 酰化得到(参见:A. Katritsky 和 L. Xie, Tetrahedron Lett. ,37 :347_50 (1996))。最后，可以理解，可对式I化合物进一步进行衍生化。可根据标准的合成方法除去 式 I 化合物上的保护基(Theodora W. Greene 和 Peter G. Μ. Wuts, John Wiley and Sons, Inc.，NY(1991))，然后可对其进行进一步衍生化。式I化合物进一步衍生化的例子包括但 不限于当式I化合物含有伯胺或仲胺时，可将该胺在存在诸如三乙酰氧基硼氢化钠的还
46原剂的情况下与醛或酮反应(参见Abdel-Magid J. Org. Chem. 61，第3849-3862页，(1996)) 以进行还原性烷基化；与酰氯或羧酸和如上所述的形成酰胺键的试剂反应以形成酰胺；与 磺酰氯反应以形成磺酰胺；与异氰酸酯反应以形成脲；在存在如上所述的钯催化剂的情况 下与芳基卤化物或杂芳基氯化物反应(参见上述Buchwald和Hartwig的参考文献)以形 成芳胺和杂芳胺。此外，当式I化合物含有芳基卤化物或杂芳基卤化物时，可使这些化合物 与硼酸进行金属催化的反应(例如，如上所述的Suzuki或Stille偶联)或与胺或醇进行 金属催化的反应(Buchwald型或Hartwig型偶联，参见上述的Buchwald和Hartwig的参考 文献)。当式I化合物含有氰基时，可将该基团在酸性或碱性条件下水解为酰胺或酸。碱 性胺可氧化为N-氧化物，相反N-氧化物可还原为碱性胺。当式I化合物含有硫化物(非 环状硫化物或环状硫化物)时，可将该硫化物进一步氧化为相应的亚砜或砜。亚砜可通过 用合适的氧化剂(例如一当量的(间_氯过苯甲酸)MCPBA)进行氧化或通过用NaIO4进行 处理而获得(参见例如J. Regan，等人，J. Med. Chem.，46 =4676-86 (2003))，砜可通过用二当 量的MCPBA或通过用4-甲基吗啉N-氧化物和催化性四氧化锇进行处理而获得(参见例如 PCT 专利申请 WO 01/47919)。方案2a 方案2a示出了得到式I化合物的途径。F代表_NQaQbR3-、_0_、S、SO或S02，AA代 表-NH2或-N02。D1和D2仅为说明目的而示出；本领域技术人员将认识到，D5D6D7D8也可以 存在。可通过用非亲核性碱(例如LDA)处理，然后用三氟甲磺酰化试剂(例如三氟甲磺酸 酐或优选N-苯基三氟甲磺酰亚胺)捕获所得的烯醇式盐，将式2-1酮转化为式2-2的三氟 甲磺酸乙烯酯。式2-3的硼酸或硼酸酯与式2-2的三氟甲磺酸乙烯酯的Suzuki偶联可得 到其中Z为C的式2-4化合物(Synthesis, 993 (1991))。对于式2-4化合物，用Pd/C处理可使烯烃(和硝基，在AA为NO2时)二者还原， 得到Z为CH，AA为NH2。其中F代表-SO2的式2_4化合物通过用MCPBA使其中AA是-NO2 且F是硫化物(F为-S-)的式2-4化合物氧化而制备，或用方案1中所述的其他方法制备。然后可用Pd/C还原硝基，以将硝基和烯烃两者还原。然后如方案1所述，将式2-4化合物(AA为NH2)转化为式2_5化合物(如果不要 进一步修饰的话，则其也代表式I化合物)。可进一步修饰式2-5化合物，得到另外的式I化合物。例如，在其中F为_NQaQbR3-、 QaQb为直接键且R3代表BOC保护基团(C02tBu)的情况中，可根据标准的方法，例如在 DCM中使用三氟乙酸(TFA) (Greene和Wuts，同上)，将BOC基团去除以得到仲胺，然后可 将该仲胺进一步衍生化而得到式I化合物。进一步衍生化包括但不限于在存在还原剂 例如三乙酰氧基硼氢化钠的情况下与醛或酮反应，得到其中F为-NCH2R3的式II化合物 (A.F.Abdel-Magid，同上)；与酰氯或与羧酸和形成酰胺键的试剂(如方案1所述)反应，得 到其中F为-NCOR3的式II化合物；与磺酰氯反应(如方案1所述)，得到其中F为-NSO2Ra 式I化合物；与异氰酸酯反应(如方案1所述)，得到其中F为-NCONRaRb的式II化合物； 或如方案1所述进行金属催化的取代反应，得到其中F为-NR3的式I化合物(S. L. Buchwald 等人，同上J. H. Hartwig,同上)。对于上述例子，Ra和Rb独立地为氢、烷基、环烷基、卤代 烷基、芳基、芳烷基、杂芳基和杂芳烷基。方案2b 方案2b示出了方案2a的修改方案，用来合成部分不饱和的式I化合物。E代 表-NQaQbR3-^-O- (D1 和 D2 为 H)、-S- (D1 和 D2 为 H) ,-(D1 和 D2 为 H)或-SO2- (D1 和 D2 为 H)， 并且Rm代表-NH2或-NO2。式2-4化合物如方案2所示制备。如果Raa为-NO2,则必须通过 不会还原烯烃的方法来还原硝基，例如铁和氯化铵。如果式2-4的Raa为氨基，则不需要进 行什么步骤，式2-4化合物也是式2-7化合物。为了制备其中E为-SO2-或-SO-的式2_7 化合物，必须如上所述在其中Raa为-NO2的化合物2-4上进行硫化物的氧化，然后进行硝基 还原。方案3 方案3示出了用于合成式I化合物的中间体的制备，其中环A是吡啶基，R5为环A 上的任选取代基，或如式I中所定义的杂环取代基之一。K为NH2或可通过已知的文献方法 最终转化为氨基的其他官能团，例如N02、COOH或C00R，所述方法例如NO2的还原(如方案 1 所论述的)或 COOH 的 Curtius 重排(有关综述参见 Organic Reactions, 3 =337(1947)) L3和L4是卤素。(K为COOH也可由K为COOR通过简单的碱催化或酸催化水解形成)。一般 而言，引入R2和R5的选择性和顺序可通过化合物(3-1)中所选择的卤素L3和L4的相对反 应性、杂环的内在选择性和/或所采用的反应条件来实现。在选择性引入R2和R5时使用卤 素L3和L4的相对选择性的例子包括这样的情况在L3为氟代基且L4为溴代基的式3-1化 合物中，可实现亲核试剂对氟代基的选择性置换，然后通过金属催化的取代化学反应(例 如Suzuki或Stille交叉偶联反应，如下面进一步示出的)取代剩下的溴代基。类似地，在 其中L3和L4之一为碘代基且另一者为溴代基或氯代基的式3-1化合物中，可在碘代基上 实现选择性金属催化的取代化学反应(例如Suzuki或Stille交叉偶联反应或Buchwald/ Hartwig胺化反应，如下面进一步论述的)，然后通过另一金属催化的取代反应置换剩下的 溴代基或氯代基。如方案3所示，可先取代式3-1中的离去基团L3以获得式3_3化合物，或可先取 代离去基团L4以获得式3-2化合物。然后使化合物3-2或3-3反应以置换L3或L4，从而得 到式3-4化合物。因而，可将式3-1化合物与仲胺、氨或受保护的胺(例如氨基甲酸叔丁基酯)的直 接亲核置换或金属催化胺化(有关综述参见Modern Amination Methods =Ricci, Α.编辑； Wiley-VCH =Weinheim, 2000)用于在其中R5为伯胺或仲胺、氨基(NH2)和胺等价基团或受保 护的氨基的式3-2或3-3中引入R5。如方案1所述，化合物3-1与硼酸或硼酸酯进行金属 催化偶联反应(Suzuki反应，M为硼酸基团或硼酸酯基团)或与有机锡化合物进行金属催 化偶联反应(Stille反应，M为SnR3，其中R为烷基，其他取代基是如上面所定义的)，可得 到式3-2或3-3化合物。还可通过如上所述的金属催化的Suzuki或Stille偶联反应将化合物3-2进一步 转化为化合物3-4。随后，同样还可通过直接亲核取代或用亲核试剂进行的金属催化反应， 或通过与上文所述相同的金属催化交叉偶联反应，将化合物3-3中的L4用R5取代，以获得 式3-4化合物。当式(3-2、3-3或3-4)中的R5是受保护的胺且K不是氨基时，可将其去保护 以显露该氨基官能团。然后可如方案1所述将该氨基官能团进一步衍生化。当式3-4中的K 基团不是氨基(例如上述官能团)时，可根据已知的的文献方法(参见例如，ComprehensiveOrganic Transformations :Larock，R. S. ；Wiley and Sons Inc.，USA，1999)将其转化为 氨基，所得的胺3-5可用于如方案(1)所述的酰胺键形成反应，以获得式I化合物。当式 3-4中的K为氨基时，可将其直接用于如上所述的酰胺偶联反应。方案4a 方案4a和4b示出了待根据方案3进一步进行修饰的中间体的制备，该制备是从 式4-1和4-5的单卤素取代化合物开始，通过在完成对第一个离去基团的取代后引入第二 个离去基团来进行。这些中间体还可以用于合成式I化合物，其中环A是吡啶，R5为环A上 的任选取代基或杂环取代基之一。如方案3所示，可如式I中所描述的将吡啶环上其余的位 置进行取代。K为NH2或可通过已知的文献方法(例如，如方案3中所述的还原或Curtius 重排)最终转换为氨基的其他官能团，例如N02、COOH或C00R。L3或L4是卤素。在这些化 合物中，T是H或是可通过已知的文献方法(参见例如，Nicolai，E.等人，J. Heterocyclic Chemistry, 31, (73)，(1994))转化为离去基团L3或L4(例如卤素、三氟甲磺酸酯或甲磺酸 酯)的官能团例如0H。通过方案3所述的方法置换式4-1化合物中的L3或式4-5中的L4， 可得到式4-2和4-6化合物。此时，可通过标准方法将化合物4-2或4-6的取代基T转化 为离去基团L4或L3 (优选卤素)，以得到式4-3和4-5化合物。例如，当T为OH时，实现该 转化的优选试剂是亚硫酰氯、PCl5, POCl3或PBr3 (参见例如，Kolder，den Hertog.，Reel. Trav. Chim. Pays-Bas ；285, (1953)，以及 Iddon, B 等人，J. Chem. Soc. Perkin Trans. 1.， 1370，(1980))。当T为H时，可将其直接卤化(优选溴化)以得到式4_3或4_7化合物(参 见例如，Canibano，V.等人，Synthesis，14，2175，(2001))。溴化的优选条件是在合适的溶 剂例如DCM或乙腈中使用NBS。可通过上述方法分别弓I入其余的基团R2或R5，将式4-3或4_7化合物转化为式4_4 或4-8化合物，然后通过方案3所述的将式3-4和3-5转化为式I化合物的方法，将其转化 为式I化合物。本发明的代表性化合物以及它们的合成在下面的图表中以及其后的实例中给出。 以下内容仅用于示例性目的，绝不旨在限制本发明。本发明的优选化合物为实例14、17、34、 35、38a、38b、40、51a、51b、55 和 56 ；最优选的是化合物 38a。
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实例15~氰基-呋喃-2-甲酸 在氩气下向配有搅拌棒和维格勒(Vigreaux)柱的烧瓶加入2_甲酰基_5_呋喃甲 酸(2. 8g,20mmol)、盐酸羟胺(2. 7g,40mmol)和干吡啶(50mL)。将该混合物加热至85°C，加 入乙酸酐(40mL)并将混合物搅拌3小时。冷却至60°C后，加入水(250mL)并将所得混合物 在室温下搅拌70小时。将混合物用浓盐酸酸化至pH为2，并用3 1的二氯甲烷-异丙 醇(SXlOOmL)进行萃取。将合并的有机层用水(IOOmL)、盐水(IOOmL)洗涤，用无水硫酸 钠干燥，真空浓缩得到标题化合物，为棕褐色固体(1.26g，46%)。1H-NMR(CD3OD ；400MHz) δ 14. 05 (br s，1H)，7. 74 (d, 1H, J = 3. 8Hz)，7. 42 (d, 1H, J = 3. 8Hz)。实例24-氰基-IH-吡咯-2-甲酸 本标题化合物可通过文献方法制备(Loader和Anderson，CanadianJ. Chem. 59 2673(1981))。1H-Wr(CdcI3AOOMHz) δ 12. 70 (br s，1H)，7. 78 (s，1H)，7. 13 (s，1H)。实例34-氰基-1_(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-1Η-咪唑-2-甲酸钾盐 a) 1-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-IH-咪唑-4-甲腈 将装有咪唑-4-甲腈(0.5g，5. 2mmol) (Synthesis，677，2003)、2-(三甲基甲硅 烷基)乙氧甲基氯(SEMCl) (0. 95mL, 5. 3mmol), K2CO3(1. 40g, 10. 4mmol)和丙酮(5mL)的 烧瓶在室温下搅动10小时。将所得混合物用EtOAc (20mL)稀释，用水(20mL)和盐水 (20mL)洗涤，并将有机层用MgSO4干燥。将粗产物用30% EtOAc/己烷经20_g固相萃取 柱(SPEcartridge) ( 二氧化硅)洗脱得到0. 80g(70% )呈无色油状的标题化合物。质谱 (Cl (CH4)，m/z) C10H17N3OSi 的计算值224. 1 (M+H)，实测值224. 1。b) 2-溴-1-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-IH-咪唑-4-甲腈 向1-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-IH-咪唑-4-甲腈(0. 70g，3. lmmol)(在 前面步骤中制备)于CCl4 (IOmL)中的溶液中加入NBS(0.61g，3.4mmol)和AIBN (催化)，并 将所得混合物在60°C加热4小时。将反应混合物用EtOAc (30mL)稀释，用NaHCO3 (2 X 30mL) 和盐水(30mL)洗涤，并将有机层用Na2SO4干燥然后浓缩。用30% EtOAc/己烷将标题化 合物从20-g固相萃取柱(二氧化硅)洗脱下来，得到0. 73g(77% )黄色固体物质。质谱 (Cl (CH4)，m/z) C10H16BrN3OSi 的计算值302· 0/304. 0 (M+H)，实测值302· 1/304. 1。c)4_氰基-l-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-1Η-咪唑-2-甲酸乙酯 向-40°C下的2-溴-l-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-1Η-咪唑-4-甲腈 (0. 55g，1. 8mmol)(在前面的步骤中制备)于THF(6mL)中的溶液中滴加2M i-PrMgCl于 THF(ImL)中的溶液。让反应物在-40°C下搅拌10分钟，然后冷却至-78°C，加入氰基甲酸 乙酯(0. 3g，3. Ommol)。使让反应物达到室温并搅拌1小时。将反应混合物用饱和NH4Cl 水溶液猝灭，用EtOAc (20mL)稀释，用盐水(2X20mL)洗涤，将有机层用Na2SO4干燥，然后 浓缩。用30% EtOAc/己烷将标题化合物从20-g固相萃取柱(二氧化硅)洗脱下来，得 到0. 4g(74% )无色油状物。质谱(ESI，m/z) =C13H21N3O3Si的计算值296. 1 (M+H)，实测值 296.1。
向4-氰基-1-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-IH-咪唑-2-甲酸乙酯(0. 4g， 1.3mm0l)(在前面的步骤中制备)于乙醇(3mL)中的溶液中加入6MK0H溶液(0. 2mL)，将搅 拌反应10分钟，然后浓缩得到ο. 40g(i00% )呈黄色固体的标题化合物。1H-NmrgoomHz, CD3OD) δ 7. 98 (s, 1H), 5. 92 (s, 2H), 3. 62 (m, 2H), 0. 94 (m, 2H), 0. 00 (s, 9H) 质谱(ESI-neg， m/z) C11H17N3O3Si 的计算值266· 1 (M-H)，实测值266· 0。实例45-氰基-呋喃-2-甲酸「4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-2-(3-甲基-噻吩基)-苯 基1-酰胺 a) 1-(3-溴硝基-苯基)~4~甲基-哌嗪将2-溴-4-氟硝基苯(949mg，4. 31mmol)分两份加入至0°C的纯N-甲基哌 嗪(SmL)中，并让其升温至室温。将反应加热至60°C维持1小时，然后将反应混合物用 50mL EtOAc稀释并倾注入H2O(50mL)中。分离各层，将有机层用饱和NaHCO3水溶液洗涤， 干燥(Na2SO4),真空浓缩得到580mg(45% )呈黄色固体的标题化合物质谱(ESI，m/z) C11H14BrN3O2 的计算值300. 0 (M+H)，实测值300. 1。b) 4，4，5，5-四甲基-2-(3-甲基-噻吩-2-基)-「1，3，21 二氧杂硼烧 向-40°C下搅拌的2-溴-3-甲基噻吩(337mg，1. 9mmol)于8mL THF中的溶液中加 入正丁基锂(0.8mL，2.5M/己烷)，并让反应物搅拌30分钟。此时加入2-异丙氧基-4，4， 5，5-四甲基-[1，3，2] 二氧杂硼烷(775 μ L，3. 8mmol)，并让反应物升温至环境温度，继续搅 拌1小时。然后将反应混合物冷却至0°C，用饱和NaHCO3水溶液(IOmL)猝灭。将该混合物 倾注入EtOAc (IOOmL)中，用H2O (2 X 50mL)洗涤，干燥(Na2SO4)并真空浓缩。通过硅胶制备 型薄层色谱法(20% EtOAc-己烷)纯化残余物，得到224mg(53% )呈油状的标题化合物。
1H-NMR(CDCl3 ；400MHz) δ 1. 36 (s, 12H)，2. 5 (s，3H)，6. 99 (d, 1H, J = 4. 8Hz)，7. 50 (d, 1H, J =4. 8Hz)。c) 1-甲基-4-「3-(3-甲基-噻吩基)_4_硝基-苯基哌嗪 向装有1-(3-溴-4-硝基-苯基)-4-甲基-哌嗪(68mg，0. 2mmol，如在实例4的步 骤(a)中制备)、4，4，5，5_四甲基-2-(3-甲基-噻吩-2-基)-[1，3，2] 二氧杂硼烷(61mg， 0. 27mmol，如前面的步骤中制备)和Pd(PPh3)4(14mg，6mol%)的烧瓶中加入甲苯(3mL)、乙 醇(3mL)和2M Na2CO3 (4mL)。将所得混合物在80°C下加热2小时，然后倾注入EtOAc (25mL) 中。分离有机层、干燥(Na2SO4)并真空浓缩。通过硅胶制备型薄层色谱法(EtOAc)纯化， 得到40mg(63% )呈浅黄色固体的标题化合物。质谱(ESI, m/z) =C16H19N3O2S的计算值 318. 1(M+H)，实测值318. 2。d)5-氰基-呋喃-2-甲酸「4_(4_甲基-哌嗪基)-2_(3_甲基-噻 吩-2-基)-苯基1-酰胺 将1-甲基-4-[3-(3-甲基-噻吩-2-基)-4-硝基-苯基]-哌嗪(60mg，0. 1 Snmol， 如前面的步骤中制备)在H2 (1个大气压)下与40mg 5% Pd-C于MeOH(5mL)中的溶液一起 搅拌2小时。将反应混合物通过Celite过滤并进行真空浓缩，得到40mg (72% )呈褐色固体 的4- (4-甲基-哌嗪-1-基)-2- (3-甲基-噻吩-2-基)-苯胺，其无需进一步纯化就可直 接使用。使用类似于实例9步骤(c)的方法，让4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-2-(3-甲基-噻 吩-2-基)_苯胺(40mg，0. 13mmol)与5-氰基-呋喃-2-碳酰氯(30mg，0. 19mmol，如实例9 的步骤(c)中制备)在存在DIEA(61 μ L，0. 34mmol)的情况下反应，得到18. 9mg(36%)呈黄 色固体的标题化合物。1H-NMR(CDCl3 ；400MHz) δ 2. 13(s，3H)，2. 38(s，3H)，2. 59-2. 62 (m, 4H)，3. 24-3. 27 (m, 4H)，6. 92 (d, 1H, J = 2. 8Hz)，7. 06 (d, 1H, J = 5. 1Hz)，7. 15 (d, 1H, J = 3. 7Hz)，7. 19 (d, 1H, J = 3. 7Hz)，7. 02 (dd, 1H, J = 2. 8,9. OHz)，7. 42 (d, 1H, J = 5. IHz)， 8. 11 (s，1H)，8· 34 (d，1H，J = 9. OHz)；质谱(ESI，m/z) =C22H22N4O2S 的计算值407. 1 (M+H)， 实测值=407. 1。实例55-氰基-呋喃-2-甲酸「4-(4-甲基-哌嗪基)(4_甲基-噻吩-3-基)-苯 基1-酰胺
a)4,4,5,5-四甲基-2-(2_甲基-噻吩-3-基)-「1, 3, 21 二氧杂硼烧 使用类似于实例4的步骤(b)的方法，将3-溴-4-甲基噻吩(571mg，3. 2mmol) 用正丁基锂(1.41mL，2. 5M/己烷)处理，然后让其与2-异丙氧基-4，4，5，5-四甲基-[1， 3,2] 二氧杂硼烷(775μ ，3.8πιπι01)反应，得到189mg(26% )呈无色油状的标题化合物。 1H-NMR (CDCl3 ；400MHz) δ 1. 32 (s，12H)，2· 42(s，3H)，6· 90-6. 91 (m, 1H)，7· 84 (d, 1Η, J = 2. 9Hz)。b) 1-甲基-4-「3-(4-甲基-噻吩-3-基)_4_硝基-苯基]-哌嗪使用类似于实例4的步骤(c)的方法，让1-(3-溴-4-硝基-苯基)-4-甲基-哌 嗪(162mg，0. 54mmol)、4，4，5，5-四甲基-2_(2_ 甲基-噻吩-3-基)-[1，3，2] 二氧杂硼 烷(145mg,0. 64mmol)和 Pd(PPh3)4(37mg，6mol % )反应，得到 108mg(71 % )呈黄色固体 的标题化合物。1H-NMR(CDCl3 ；400MHz) δ 2. 02(s，3H)，2· 37(s，3H)，2· 55-2. 57(m，4H)， 3. 42-3. 45 (m, 4H)，6. 66 (d, 1H, J = 2. 8Hz)，6. 87 (s, 1H)，6. 99-7. 00 (m, 1H)，7. 09 (d, 1H, J = 3. 2Hz) ,8. 13 (d, 1H, J = 9. 2Hz)。c) 4- (4-甲基-哌嗪-1-基)-2- (4~甲基-噻吩基)-苯胺使用类似于实例4的步骤(d)的方法，将1-甲基-4-[3_(4-甲基-噻 吩-3-基)-4_硝基-苯基]-哌嗪(100mg，0. 32mmol)与80mg 5% Pd-C 一起在H2下搅拌， 得到82mg(89%)呈深色油状的标题化合物，其无需进一步纯化就可直接使用。质谱(ESI， m/z) =C16H21N3S 的计算值288. 15(M+H)，实测值288. 1。d)5-氰基-呋喃-2-甲酸「4_(4_甲基-哌嗪基)-2_(4_甲基-噻 吩-3-基)-苯基1-酰胺
67
使用类似于实例9的步骤(c)的方法，让5-氰基-呋喃-2-碳酰氯(64mg， 0.41mmol，如实例9的步骤(c)中制备)与4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-2_(4_甲基-噻 吩-3-基)_苯胺(80mg，0. 27mmol，如前面的步骤中制备)在存在DIEA(0. IOmL,0. 59mmol) 的情况下反应，得到25.8mg(24% )呈黄色固体的标题化合物。1H-Nmr(CdCI3JOOMHz) δ 2. 09 (s，3Η)，2. 37 (s, 3H)，2. 59-2. 60 (m, 4H)，3. 24-3. 26 (m, 4H)，6. 83 (d, 1H, J = 2. 9Hz)， 6. 98-7. 06 (m，2H)，7. 14—7. 21 (m，3H)，7. 96 (s，1H)，8. 32 (d，1H，J = 9.0Hz)。质谱(ESI, m/ ζ) =C22H22N4O2S 的计算值407. 1 (Μ+Η)，实测值407. 1。实例64-氰基-IH-咪唑-2-甲酸{2-环己-1-烯基-4-「1-(2-羟基-1-羟甲基-乙 ；S ) - _定-4-胃 1 -絲 1 -酉a) 4-氰基-IH-咪唑-2-甲酸{2_ 环己 烯基-4-「l_(2, 2_ 二甲基-「1, 31 二氧 杂环己烷-5-某)-哌啶-4-某1 -苯某丨-酰胺向4-氰基-IH-咪唑-2-甲酸(2_环己烯基_4_哌啶_4_基-苯基)-酰胺 三氟乙酸盐(81mg，0. 16mmol，如实例14的步骤(b)中制备)于CH2Cl2(3mL)中的浆液中加 ANEts(33yL,0. 24mmol)。然后将溶液用2，2-二甲基-[1，3] 二氧杂环己烷_5_酮(31mg， 0. 24mmol)处理，并让反应物搅拌3小时。此时将NaBH(OAc)3(5Img,0. 24mmol) 一次性加 入，并让反应物再搅拌4小时。将反应混合物用H2O(IOmL)稀释并用EtOAc (2 X 25mL)萃取。 将有机萃取物干燥(Na2SO4)并真空浓缩。通过硅胶制备型薄层色谱法(IO^MeOH-CHCl3) 纯化，得到22mg(28% )呈灰白色半固体的标题化合物。质谱(ESI，m/z) =C28H35N5O3的计算 值490. 2 (M+H)，实测值490. 6。b)4-氰基-IH-咪唑-2-甲酸{2_环己烯基_4-「1-(2_羟基羟甲基-乙 某)-哌啶酉H安三氟,乙_向 4-氰基-IH-咪唑-2-甲酸{2_ 环己 烯基 _4-[1_ (2，2-二甲基-[1，3] 二 氧杂环己烷-5-基)-哌啶-4-基]-苯基}-酰胺(22mg，0. 04mmol,如前面的步骤中制
备)于THF-H20(lmL，4 lv/v)中的溶液中加入TFA (0. 4mL)，并让反应物搅拌1小时。在 真空下去除溶剂得到14mg(60% )呈琥珀色泡沫的标题化合物。1H-NMR(OT3ODdOOMHz) δ 1. 78-1. 90 (m, 4H)，2. 03-2. 16 (m, 3H)，2. 29 (br s，4H)，2. 88-2. 96 (m, 1H)，3. 37-3. 40 (m, 1H)，3. 46-3. 53 (m, 2H)，3. 74-3. 78 (m, 3H)，5. 83 (s, 1H)，7. 13 (d, 1H, J = 2. OHz)，7. 22 (dd, 1H, J = 2. 0，8. 4Hz)，8. 03(s，lH)，8. 17(d，lH，J = 8. 4Hz)；质谱(ESI，m/z) =C25H31N5O3 的计 算值450. 2 (M+H)，实测值450. 2。实例74-氰基-IH-咪唑-2-甲酸{2_环己烯基「1_ (2~吗啉_4_基-乙酰基)-哌 啶-4-基1-苯基丨-酰胺 通过注射器向吗啉-4-基-乙酸乙酯(117mg，0.67mmOl)于乙醇(4mL)中的溶液 中加入6N K0H(110yL，0. 67mmol)，并继续搅拌3小时。真空浓缩得到122mg(100% )吗 啉-4-基-乙酸钾盐。向吗啉-4-基-乙酸钾盐(29mg，0. 15mmol)、4_氰基-IH-咪唑-2-甲 酸(2-环己-1-烯基-4-哌啶-4-基-苯基)-酰胺三氟乙酸盐(65. Img,0. 13mmol，如 实例14的步骤(b)中制备)和PyBroP(93mg，0. 19mmol)于CH2Cl2(4mL)中的混合物中加 入DIEA(51yL，0. 29mmol)，并让反应物搅拌过夜。将反应混合物用CH2Cl2 (50mL)稀释， 用吐0(2\25!^)洗涤，干燥(Na2SO4)并真空浓缩。通过硅胶制备型TLC纯化粗产物，得 到 8. lmg(12% )呈白色固体的标题化合物。iH-NMlUCDCls ；400MHz) δ 1. 68-2. 04 (m, 5H)， 2. 20-2. 29 (m, 4H)，2. 53-2. 78 (m, 5H)，3. 09-3. 23 (m, 6H)，3. 35-3. 40 (m, 1H)，3. 72 (br s, 4H)，4. 16-4. 22 (m, 1H)，4. 73-4. 77 (m, 1H)，5. 82 (s, 1H)，7. 00 (s, 1H)，7. 12 (dd, 1H，J = 0. 6， 8. OHz) ,7. 73 (s，1H) ,8. 27 (d, 1H, J = 8. IHz) ,9. 48 (s, 1H)；质谱(ESI，m/z) C28H34N6O3 的计 算值503. 27(M+H)，实测值503. 1。实例84-氰基-IH-咪唑-2-甲酸{2-环己烯基「1_ (3~吗啉_4_基-丙酰基)-哌 啶-4-基1-苯基丨-酰胺 向装有3-吗啉-4-基-丙酸钾盐(94mg，0. 47mmol,完全如实例7中所述由 3-吗啉-4-基-丙酸乙酯制备)、4_氰基-IH-咪唑-2-甲酸(2-环己-1-烯基-4-哌 啶-4-基-苯基)_酰胺三氟乙酸盐(179mg，0.36mmOl，如实例14的步骤(b)中制备)、 EDCI(83mg,0. 43mmol)和 HOBT(68mg，0. 5mmol)的烧瓶加入 DMF(4mL)。向该搅拌下的浆液 中加入DIEA(157y L，0. 9mmol)，并让反应物搅拌过夜。将反应混合物用H2O(IOmL)稀释并 用EtOAc (2 X 25mL)萃取。将合并的有机萃取物干燥(Na2SO4)，真空浓缩，并将粗产物通过硅 胶制备型TLC纯化，得到10.4mg(6% )呈白色固体的标题化合物。1H-NMR(⑶Cl3 ；400MHz) δ 1. 49-1. 93 (m, 5H)，2. 22-2. 31 (m, 3H)，2. 52 (br s，4H)，2. 58-2. 63 (m, 3H)，2. 74-2. 76 (m, 4H)，3. 10-3. 17 (m, 2H)，3. 72 (br s，4H)，3. 97-4. 02 (m, 2H)，4. 76-4. 81 (m, 2H)， 5. 81-5. 82 (m, 1H)，6. 81-6. 82 (m, 1H)，6. 99-7. 00 (m, 1H)，7. 09-7. 13 (m, 1H)，7. 70 (s, 1H)， 8. 26(d，lH，J = 8. 2Hz)，9. 51(s，lH)；质谱(ESI，m/z) =C29H36N6O3 的计算值517. 28M+H)，实 测值517. 3。实例95-氰基-呋喃-2-甲酸「2'-甲基-5-(4-甲基-哌嗪基)_联苯基1 -酰 胺 向 1. OOg(4. 55mmol)2-溴-4-氟硝基苯(Oakwood)于 12mL EtOH中的的冷却(0°C) 溶液中加入1. 52mL(13. 7mmol)哌啶。将所得溶液在0°C搅拌0. 5小时，然后在60°C搅拌4 小时。将混合物真空浓缩，溶解于EtOAc (60mL)中，用水(3 X IOOmL)和盐水(IOOmL)洗涤，
并进行干燥(Na2SO4)。将其真空浓缩并用1-3% MeOH- 二氯甲烷在50_g 二氧化硅固相萃 取柱上进行色谱纯化，得到1.06g(77% )呈棕黄色固体的标题化合物。质谱(ESI，m/z) C11H14BrN3O2 的计算值300. 0(M+H，79Br)，实测值300. 1。b) 1-甲基-4- (2 ‘ ~甲基-6-硝基-联苯-3-基)-哌嗪 向200mg(0. 666mmol) 1_(3_溴-4-硝基-苯基)_4_甲基-哌嗪(如前面的步骤 中制备)、136mg(0.999mmol)和77. Omg (0. 0666mmol)四(三苯基膦)钯(0)的混合物在氩 气下加入4. OmL脱气的二甲氧基乙烷(DME)和400 μ L(0. 799mmol) 2. OM Na2CO3水溶液。将 混合物在氩气下于80°C搅拌加热14小时。将冷却(RT)的混合物浓缩并用1-5% MeOH于 二氯甲烷-己烷(1 1)中的溶液在10-g 二氧化硅固相萃取柱上进行色谱纯化。将产物 级分用80mg脱色炭处理，过滤，浓缩，然后用1-3% EtOH-二氯甲烷在相似的柱上再次进行 色谱纯化，得到265mg呈黄色树脂状的标题化合物(通过1H-NMR测得纯度为75%，为与三 苯膦的混合物)，其无需进一步纯化就用于下面的反应。质谱(ESI，m/z) =C11H21N3O3的计算 值312. 2(M+H)，实测值312. 2。c) 5-氰基-呋喃-2-甲酸「2'-甲基_5-(4_甲基-哌嗪基)_联苯基酰 胺将140mg(基于75%纯度为0. 337mmol)l-甲基-4-(2'-甲基_6_硝基-联 苯-3-基)-哌嗪(如前面的步骤中制备)和70mg 10%披钯碳(DegussaElOl-NE/W型， Aldrich, 50重量％的水)于5mL THF中的混合物在在氢气氛下剧烈搅拌1小时。将混合物 过滤(Celite)，用二氯甲烷(2X2mL)洗涤，将所得苯胺溶液置于氩气下并立即用于下面的 反应。在进行上述还原的同时，将处于CaSO4干燥管下的55. 4mg(0. 404mmol) 5_氰基呋 喃-2-甲酸(如实例1中制备)于2. 5mL无水二氯甲烷中的溶液用52. 9 μ L(0. 606mmol) 草酰氯处理，接着用10 μ L无水DMF处理。将溶液搅拌25分钟并在快速在20-25°C下真 空浓缩。将所得5-氰基-呋喃-2-碳酰氯在高真空下放置2-3分钟，然后立即置于氩气 下，在冰浴中冷却至0°C，并用上面产生的苯胺溶液处理，接着用141 μ L(0. 808mmol)N, N-二异丙基乙胺(DIEA)处理。在室温下搅拌30分钟后，将混合物真空浓缩，将所得残余物用2-10% EtOH-二氯甲烷在20-g 二氧化硅固相萃取柱上进行色谱纯化，得到黄色树 脂，将其从EtOAc-己烷中结晶出来，得到17. 2mg(13% )呈黄色固体的纯标题化合物以及 70. 3mg不纯的标题化合物。将不纯的级分溶解于50mL EtOAc中，用饱和NaHCO3水溶液-IM K2CO3(1 l,2X20mL)和盐水(20mL)洗涤，干燥(Na2SO4)并浓缩，得到 43. 4mg(32% )呈 晶状黄色固体的额外的标题化合物(总产率为45% )。1H-NMR(⑶Cl3 ；400MHz) δ 8. 32 (d， 1H, J = 9. 0Hz)，7. 73 (br s，1H)，7. 34-7. 54 (m, 3H)，7. 25 (d, 1H, J = 7. 7Hz) ,7. 12, 7. 14 (AB q，2H，J = 3. 7Hz)，7. 01(dd，lH，J = 9. 0，2. 8Hz)，3. 25-3. 27 (m，4H)，2. 59-2. 62 (m，4H)， 2. 38(s，3H)，和 2. 15(s，3H)。质谱(ESI, m/z) =C21H24N4O3 的计算值401. 2 (M+H)，实测值 401. 1。实例10 5-氰基-呋喃-2-甲酸「2'-氟-5-(4-甲基-哌嗪基)_联苯基1 -酰 胺按照实例9的步骤(b)中的方法，使用75. Omg (0. 250mmol) 1_ (3_溴~4~硝基-苯 基)-4_甲基-哌嗪(如实例9的步骤(a)中制备)、136mg(0.999mmol)2-氟苯硼酸、 26. 8mg(0. 0232mmol)四(三苯基膦)钯(0)和 400 μ L (0. 799mmol) 2. OM Na2CO3 水溶液于 DME中的溶液，不同的是将混合物加热22小时。用1-5% MeOH于二氯甲烷-己烧(1 1) 中的溶液在5-g 二氧化硅固相萃取柱上进行色谱纯化，得到95. Omg呈黄色树脂状的标题化 合物(通过1H-NMR测得纯度为76%，为与三苯膦的混合物)，其无需进一步纯化即用于下 面的反应。质谱(ESI，m/z) =C17H18FN3O3 的计算值316. 1 (M+H)，实测值316. 2。b) 5-氰基-呋喃-2-甲酸「2'-氟-5-(4-甲基-哌嗪基)_联苯基1 -酰 胺 a) 1~(2'-氟硝基-联苯基)~4~甲基-哌嗪 按照实例9的步骤(c)中的方法，使用93. 2mg(基于76 %纯度为 0. 225mmol)l-(2 ‘-氟-6-硝基-联苯-3-基)-4-甲基-哌嗪(如前面的步骤中制 备)、46mg 10%披钯碳、37.0mg(0. 270mmol)5-氰基呋喃-2-甲酸(如实例1中制备)、 35. 3μ L(0. 405mmol)草酰氯、5. 0 μ L 无水 DMF 禾口 94. 1 μ L(0. 540mmol)DIEA。用 1-4 % MeOH- 二氯甲烷在5-g 二氧化硅固相萃取柱上进行色谱纯化，得到69. Smg (77 % )呈黄色树 脂状的标题化合物。1H-NMR (CDCl3 ；400MHz) δ 8. 04 (d, 1H, J = 9. OHz) , 7. 93 (br s，lH)， 7. 434-7. 48 (m, 1H)，7. 37 (td, 1H，J = 7. 5，1. 8Hz)，7. 22-7. 31 (m, 2H) ,7. 13, 7. 18 (AB q, 2H, J = 3. 7Hz)，7. 02(dd，lH，J = 9. 0,2. 9Hz) ,6. 88 (d, 1H, J = 2. 9Hz)，3. 24-3. 27 (m，4H)， 2. 57-2. 60 (m, 4H)和 2. 36 (s, 3H)。质谱(ESI，m/z) =C23H21FN4O2 的计算值:405· 2 (Μ+Η)，实测 值:405. 2。实例115-氰基-呋喃-2-甲酸「2-环己-1-烯基-4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-酰 胺 将102mg(0. 340mmol) 1_(3_溴~4~硝基-苯基)_4_甲基-哌嗪(如实例9的步 骤(a)中制备)、59.7mg(0.474mmol)环己烯-1-基硼酸、43. 8mg(0. 0379mmol)四(三苯基 膦)钯(0)的混合物在氩气下用206 μ L(0. 412mmol) 2. OM脱气Na2CO3水溶液、0. 6mL脱气 无水甲苯和0. 2mL脱气无水EtOH处理，并将混合物在100°C加热21小时。冷却至室温后， 将混合物倾注入EtOAc (IOmL)中，用盐水(IOmL)洗涤，干燥(Na2SO4)并真空浓缩。用 a) l-(3-环己烯基_4_硝基-苯基)_4_甲基-哌嗪
EtOH于二氯甲烷中的溶液在5-g 二氧化硅固相萃取柱上进行色谱纯化，得到126mg呈黄色 油状的标题化合物(通过RP-HPLC(C18柱)测得纯度为74%，为与三苯膦的混合物)，其无 需进一步纯化即用于下面的反应。质谱(ESI，m/z) =C17H23N3O3的计算值302. 2 (M+H)，实测 值302. 2。 b) 5-氰基-呋喃-2-甲酸「2-环己-1-烯基-4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯 基1-酰胺向122mg(基于74 %纯度为0. 299mmol) 1_(3_环己-1-烯基-4-硝基-苯 基)-4-甲基-哌嗪(如前面的步骤中制备)于5. OmL EtOH-水(2 1)中的溶液中加入 83. 8mg(l. 50mmol)铁粉和160mg(2. 99mmol)NH4Cl,将该混合物在氩气下回流12小时。另外 加入83. 8mg(l. 50mmol)铁粉，并将混合物回流1小时。将混合物倾注入EtOAc (12mL)中， 过滤(Celite)，用EtOAc (2 X 4mL)洗涤，真空浓缩并溶解于无水THF (4. OmL)中。将所得苯 胺溶液置于氩气下并直接用于下面的反应。将处于CaSO4干燥管下的61. 6mg(0. 449mmol) 5_氰基呋喃_2_甲酸(如实例1中 制备)于2. 5mL无水二氯甲烷中的溶液用60. 0 μ L (0. 688mmol)草酰氯处理，接着用IOyL 无水DMF处理。将溶液搅拌25分钟并快速在20-25°C下真空浓缩。将残余物在高真空下 放置2-3分钟，然后立即置于氩气下，在冰浴中冷却至0°C，并用上面产生的苯胺溶液处理， 接着用104yL(0.598mmol)DIEA处理。在室温下搅拌30分钟后，将混合物真空浓缩，溶 解于EtOAc (20mL)中，用IM K2CO3 (2X IOmL)和盐水(IOmL)洗涤，干燥(Na2SO4)并真空浓 缩。将所得残余物用1-4% MeOH-二氯甲烷在10-g 二氧化硅固相萃取柱上进行色谱纯化， 得到黄色树脂，然后可将该树脂从Et2O-己烷中结晶出来，得到84. 7mg(72% )呈晶状黄色 固体的标题化合物。iH-NMlUCDCls ；400MHz) δ 8. 57 (br s, 1H) ,8. 26 (d, 1H, J = 9. OHz)， 7. 20，7. 23 (AB q, 2H, J = 3. 7Hz)，6. 86 (dd, 1H, J = 9. 0，2. 9Hz)，6. 74 (d, 1H, J = 2. 9Hz)， 5. 84-5. 85 (m, 1H)，3. 20-3. 22 (m, 4H)，2. 57-2. 59 (m, 4H)，2. 36 (s, 3H)，2. 23-2. 30 (m, 4H) and 1. 79-1. 84(m，4H)。质谱(ESI, m/z) =C23H26N4O2 的计算值:391. 2 (M+H)，实测值391. 2。实例125-氰基-呋喃-2-甲酸「2-(3,6- 二氢_2H_吡喃_4_基)_4_(4_甲基-哌 嗪-1-基)-苯基-酰胺
将l-[3-(3，6- 二氢_2H_吡喃_4_基)_4_硝基-苯基]_4_甲基-哌嗪(如前面 的步骤中制备)(80mg，0. 26mmol)采用类似于实例4步骤(d)的方法转化成相应的胺，并将 其与如实例9的步骤(c)中制备的5-氰基-呋喃-2-碳酰氯(从137mg、l.OOmmol的实例 1所制备的5-氰基-呋喃-2-甲酸获得)在CH2Cl2(2mL)中于0°C下进行偶联。通过在二氧 化硅(50% EtOAc/己烷-10% MeOH/EtOAc)上进行快速色谱来分离产物，得到标题化合物 (62. 2mg,60% )。1H-NMR(CDCl3 ；400MHz) δ 8. 35 (br s, 1H)，8· 12 (d, IHeach, J = 8. 76Hz)， 7. 24 (d, 1H, J = 5. 08Hz)，7. 19 (d, 1H, J = 5. 08Hz)，6. 88 (dd, 1H, J = 8. 76,2. 7Hz)，6. 73 (d, 1H, J = 2. 7Hz)，5. 88 (br s，1H)，4. 34 (m, 2H)，3. 94 (t, 2H, J = 5. 3Hz)，3. 23 (m, 4H)，2. 59 (m, 4H)，2. 38 (br s，5H)。LC-MS (ESI, m/z) C22H24N4O3 的计算值393. 1 (M+H)，实测值393. 2。 a) 1-「3-(3,6~ 二氢_2H_吡喃土基)土硝基二苯基1 甲基-哌嗪 将1-(3_溴-4-硝基-苯基)-4_甲基-哌嗪(如实例9的步骤(a)中制备) (225. Img, 0. 79mmol), K2CO3 (310. 9mg, 2. 25mmol)和 4-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2] 二氧 杂硼烷-2-基)-3，6_ 二氢-2H-吡喃(Murata, M.等人，Synthesis, 778, (2000)) (157mg， 0. 75mmol)于二氧杂环己烷(5mL)中的溶液在80°C于氩气下加热过夜。让反应混合物冷却 至室温，浓缩，并将所得残余物在二氧化硅上进行色谱纯化(10% EtOAc/己烷-20% MeOH/ EtOAc)，得到标题化合物(82mg, 36% )。1H-NMR(CDCl3 ；400MHz) δ 8. 04 (d, 1H, J = 9. 4Hz)， 6. 78 (dd, 1H, J = 9. 4，2. 6Hz)，6. 58 (m, 1H, J = 2. 6Hz)，5. 58 (m, 1H)，4. 34 (m, 2H)，3. 95 (t, 2H, J = 5. 3Hz)，3. 46 (m, 4H)，2. 57 (m, 4H)，2. 38 (s, 3H)，2. 30 (m, 2H)。b) 5-氰基-呋喃-2-甲酸「2- (3,6- 二氢_2H_吡喃基)~4~ (4_甲基-哌 嗪-1-基)-苯基-酰胺 实例134-氰基-IH-吡咯-2-甲酸(2_环己烯基_4_哌啶基-苯基)-酰胺三氟 乙酸盐 a) 4-(4~氨基-苯基)-3,6_ 二氢_2H_吡啶土甲酸叔丁酯 本标题化合物可根据实例35的步骤(b)中的方法，通过使4-(4，4，5，5_四甲 基-[1，3，2] 二氧杂硼烷-2-基)-苯胺与4-三氟甲磺酰氧基_3，6- 二氢-2H-吡啶-1-甲 酸叔丁酯(Synthesis，993，(1991))进行 Suzuki 偶联来制备。质谱(ESI, m/z) =C16H22N2O2 的计算值275. 2(M+H)，实测值275. 1。b) 4- (4-氨基-苯基)_哌啶-1-甲酸叔丁酯 将4-(4-氨基-苯基)-3，6-二氢-2!1-吡啶-1-甲酸叔丁酯(0. 35g，1. 2mmol)(如 前面的步骤中制备)于甲醇中的溶液在20psi下于10%Pd/C上氢化1小时。将溶液过滤 并浓缩，得到0. 35g(100% )呈黄色固体的标题化合物质谱(ESI, m/z) =C16H24N2O2的计算 值277. 2(M+H)，实测值277. 1。c) 4- (4- t[某-3-、遼-苯某)-哌啶-1-甲酸叔丁酯 向4-(4-氨基-苯基)-哌啶-1-甲酸叔丁酯(0. 20g，0. 71mmol)(如前面的步骤 中制备)于DCM(3mL)中的溶液中加入N-溴琥珀酰亚胺(NBS) (0. 13g，0. 71mmol)，并将反 应物在室温下搅拌10小时。将反应混合物用EtOAc(IOmL)稀释，用NaHCO3 (2X IOmL)和盐 水(IOmL)洗涤。浓缩有机层得到0. 26g(100% )呈黄色泡沫的标题化合物。质谱(ESI，m/ ζ) =C16H23BrN2O2 的计算值355. 1 (Μ+Η)，实测值355. 1。d)4-(4~氨基-3-环己-1-烯基-苯基)-哌啶-1-甲酸叔丁酯 向烧瓶装入4-(4-氨基-3-溴-苯基)-哌啶-1-甲酸叔丁酯(0. 13g，0. 36mmol) (如前面的步骤中制备)、环己-1-烯基硼酸(0. 060g, 0. 48mmol)、Pd (PPh3) 4 (0. 04g, IOmol %)、2M Na2CO3水溶液(1.5mL)、乙醇(1. 5mL)和甲苯(3mL)，并在80°C下加热3小时。 将反应混合物用EtOAc(IOmL)稀释，用NaHCO3 (2 X IOmL)和盐水(IOmL)洗涤，并将有机层用 Na2SO4干燥然后浓缩。用30% EtOAc/己烷将标题化合物从20_g固相萃取柱(二氧化硅) 洗脱下来，得到0. 10g(85% )呈黄色油状的标题化合物。质谱(ESI，m/z) =C22H32N2O2的计算 值357. 2(M+H)，实测值357. 1。e) 4-氰基-IH-吡咯_2_甲酸(2_环己烯基_4_哌啶_4_基-苯基)-酰胺三 氟乙酸盐向烧瓶装入4-(4-氨基-3-环己-1-烯基-苯基)_哌啶-1-甲酸叔丁酯(0. 050g， 0. 14mmol)(如前面的步骤中制备)、4_氰基-IH-吡咯-2-甲酸(0. 019g，0. 14mmol)(如实例 2 中制备)、EDCI (0. 040g，0. 21mmol)、HOBt (0. 019g，0. 14mmol)、DIEA (0. 073mL，0. 42mmol) 和DCM(0. 5mL)，并在25°C下搅拌10小时。将反应混合物直接上样至10_g固相萃取(SPE) 柱(二氧化硅)，并将所得中间体用30% EtOAc/己烷洗脱。将该化合物在室温下于50% TFA/DCM(2mL)中搅拌1小时，然后浓缩并通过RP-HPLC(C18)纯化(用30-50% CH3CN于 0. 1% TFA/H20中的溶液洗脱12分钟)，得到标题化合物(0. 052g,77% )。1H-WrGOOMHz, CD3OD) δ 7. 59 (s, 1H)，7. 50 (d, 1H)，7. 22 (d, 1H)，7. 16 (m, 2H)，5. 74 (m, 1H)，3. 54. (m, 2H)， 3. 16 (m, 2H), 2. 94 (m, 1H)，2. 29 (m，2H)，2. 15(m，4H)，1. 92 (m, 2H)，1. 72(m，4H)。质谱(ESI，

m/z) =C23H26N4O 的计算值375. 2 (M+H)，实测值375. 1。实例144-氰基-IH-咪唑-2-甲酸(2-环己烯基_4_哌啶基-苯基)-酰胺三氟 乙酸盐
某1-3-环己-1-烯某-苯某)-哌啶-1-甲酸叔丁酯
向4-氰基-1-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-IH-咪唑-2-甲酸钾盐(3. 34g， 10. 9mmol)(如实例3的步骤(d)中制备)于20mL DCM中的溶液中加入DIEA (3. 8mL， 21. 8mmol)和 PyBroP(5. 6g，12. Ommol)，将反应物在 25°C下搅拌 15 分钟。加入 4_(4_ 氨 基-3-环己-1-烯基-苯基)-哌啶-1-甲酸叔丁酯(3. 9g，10. 9mmol)(如实例13的步骤 (d)中制备)于IOmL DCM中的溶液，并将反应物在25°C下搅拌8小时。将反应混合物用 EtOAc (60mL)稀释，用NaHCO3 (2 X 60mL)和盐水(IOOmL)洗涤，并将有机层用Na2SO4干燥然 后浓缩。通过快速色谱法(硅胶，2% EtOAc/DCM)纯化标题化合物，得到5. 5g(85% )呈黄 色油状的标题化合物。质谱(ESI，m/z) =C33H47N5O4Si的计算值606· 2 (M+H)，实测值606· 2。b) 4-氰基-IH-咪唑-2-甲酸(2-环己烯基_4_哌啶_4_基-苯基)-酰胺三 氟乙酸盐向4- (4- {[4-氰基-1- (2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-IH-咪唑_2_羰基]-氨 基}-3_环己-1-烯基-苯基)-哌啶-1-甲酸叔丁酯(1.5g，2. 5mmol)(如前面的步骤中 制备)于IOmL DCM和0. 3mL EtOH中的溶液中加入3mL TFA,并将溶液在25°C下搅拌3小 时。将反应混合物用5mL EtOH稀释，然后浓缩。使残余物从甲醇和乙醚中结晶出来，得到 0. 85g(70% )呈白色固体的标题化合物。1H-WrGOOMHz, CD3OD) δ 8. 18 (d, 1H) ,8. 04 (s, 1H)，7. 22 (dd, 1H)，7. 12 (d, 1H)，5. 76 (m, 1H)，3. 54. (m, 2H)，3. 16 (m, 2H)，2. 92 (m, 1H)，2. 30(m，4H)，2. 10(m，2H)，1. 75(m，6H)。质谱(ESI, m/z) =C22H25N5O 的计算值376· 2 (M+H)， 实测值376. 2。实例154-氰基-IH-吡咯-2-甲酸「4_(1_乙酰基-哌啶_4_基)_2_环己烯基-苯 基1-酰胺 本标题化合物是根据实例37的方法，从4-氰基-IH-吡咯-2-甲酸(2_环 己-1-烯基-4-哌啶-4-基-苯基)-酰胺三氟乙酸盐(如实例13的步骤(e)中制备) 制备而得。1H-WrGOOMHz, CDCl3) δ 10. 82 (s, 1H) ,8. 28 (d, 1H) ,8. 18 (s，1H)，7. 48 (d, 1H)， 7. 16 (dd, 1H)，7. 02 (s, 1H)，6. 72 (s, 1H)，5. 88 (m, 1H)，4. 82 (m, 1H)，3. 98. (m, 1H)，3. 20 (m, 1H)，2. 70 (m, 2H)，2. 29 (m, 4H)，2. 18 (s, 3H)，1. 80 (m, 8H)。质谱(ESI，m/z) C25H28N4O2 的计算 值417. 2(M+H)，实测值417. 1。实例164-氰基-IH-咪唑-2-甲酸「4_(1_乙酰基-哌啶_4_基)_2_环己烯基-苯 基1-酰胺 本标题化合物是根据实例37的方法，从4-氰基-IH-咪唑-2-甲酸(2_环己烯 基-4-哌啶-4-基-苯基)-酰胺三氟乙酸盐(如实例13的步骤(b)中制备)制备而得 1H-WrGOOMHz, CDCl3) δ 13. 12 (br s，lH)，9. 58(s，lH)，8. 34(d，lH)，7. 76(s，lH)，7. 21 (dd, 1H)，7. 05 (d, 1H)，5. 86 (s, 1H)，4. 84 (m, 2H)，4. 00 (m, 1H)，3. 22 (m, 1H)，2. 72 (m, 2H)，2. 30 (m, 4H)，2. 21 (s，3H)，1. 80 (m，8H)。质谱(ESI，m/z) =C24H27N5O2 的计算值418. 2 (M+H)，实测值 418.1。实例17
4-氰基-IH-咪唑-2-甲酸「2- (4-甲基-环己烯基)_4_哌啶基-苯 基1-酰胺三氟乙酸盐 本标题化合物是根据实例14的方法，从4-氰基-1-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲 基)-IH-咪唑-2-甲酸钾盐(如实例3的步骤(d)中制备)和4-[4-氨基-3-(4-甲基-环 己-1-烯基)_苯基]-哌啶-1-甲酸叔丁酯(根据实例13的步骤(d)中的方法，用4-甲 基-ι-环己-ι-烯基硼酸替换环己-ι-烯基硼酸来进行制备)制备而得=1H-NmrgoomHz, CD3OD) δ 8. 18 (d, 1H)，8. 04 (s, 1H)，7. 22 (dd, 1H)，7. 12 (d, 1H)，5. 80 (m, 1H)，3. 54. (m, 2H)， 3. 18 (m, 2H)，2. 94 (m, 1H)，2. 30 (m, 3H)，2. 12 (m, 2H)，1. 92 (m, 5H)，1. 54 (m, 1H)，1. 12 (d, 3H)。 质谱(ESI，m/z) =C23H27N5O 的计算值390. 2 (M+H)，实测值390. 2。实例184-氰基-IH-咪唑-2-甲酸(2_环戊烯基_4_哌啶基-苯基)-酰胺三氟 乙酸盐
本标题化合物是根据实例14的方法，从4-氰基-1-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲 基)-IH-咪唑-2-甲酸钾盐(如实例3的步骤(d)中制备)和4-(4-氨基-3-环戊-1-烯 基-苯基)-哌啶-1-甲酸叔丁酯(根据实例13的步骤(d)中的方法，用环戊烯-1-基硼酸 替换环己-1-烯基硼酸进行制备)制备而得。1H-WRGOOMHziDMSO-Cl6) δ 14. 25 (br s，1H)， 10. 00 (S，1H)，8. 36 (s, 1H)，7. 72 (d, 1H)，7. 18 (m, 2H)，6. 06 (s, 1H)，4. 12 (m, 1H)，3. 42 (m, 2H)，3. 18 (m, 2H)，3. 00 (m, 3H)，2. 80 (m, 2H)，1. 92 (m, 5H)。质谱(ESI，m/z) =C21H23N5O 的计算 值362. 2 (M+H)，实测值362. 2。实例19下面描述了用于合成实例1中所述中间体的替代方法。5~氰基-呋喃-2-甲酸
将配有机械搅拌器、加热套和冷凝器的250mL三颈圆底烧瓶中装入5-甲酰 基-2-呋喃甲酸(9. 18g,65. 6mmol)和吡啶(60mL)。加入盐酸羟胺(5. Olg，72. 2mmol)，将 混合物加热至85°C。加入乙酸酐(40mL)，将反应物在85°C下搅拌3小时，之后在40°C减 压蒸发溶剂。将残余物溶解于水中，用2. ON NaOH溶液碱化至pH为9，用4 1 二氯甲烷 /2-丙醇进行萃取，直到完全除去吡啶(5X200mL)。然后将水溶液用2. ON HCl溶液酸化至 PH 2，用固体NaCl使其饱和，并用4 1 二氯甲烷/2-丙醇(5X200mL)萃取。将合并的有 机萃取液用Na2SO4干燥，真空浓缩至干燥。将残余物从二氯甲烷中结晶出来，得到6. 80g呈 白色固体的标题化合物(76% )。质谱(ESI-neg，m/z) C6H3NO3的计算值136. 0 (M-H)，实测 值136. 1. 1H核磁共振谱与确定的结构一致。实例204-氰基-IH-咪唑-2-甲酸丨2_环己烯基_4-「1-(2_甲磺酰基-乙酰基)_哌 啶-4-基1-苯基丨-酰胺向烧瓶装入甲磺酰基-乙酸(14mg，0.IOmmol)、EDCI (30mg，0. 15mmol)、 H0Bt(14mg，0. IOmmol)、DIEA(36 μ L，0. 20mmol)和 0. 5mLDCM,并在 25 °C 下搅拌。10 分钟 后，加入4-氰基-IH-咪唑-2-甲酸(2-环己-1-烯基-4-哌啶-4-基-苯基)-酰胺TFA 盐(40mg，0. 08mmol)(如实例 20 的步骤(b)中制备)和 NEt3(14y L,0. 09mmol)于 0. 5mL DCM中的溶液，并让反应在25°C下进行10小时。将反应混合物上样至5-g固相萃取柱(二 氧化硅)上，用10% EtOH/EtOAc将标题化合物洗脱下来，得到10mg(25% )的白色固体 物质。1H-匪R(400MHz，CDCl3) δ 11. 60 (br s，1H)，9. 52 (s，1H)，8. 30 (d，1H)，7. 74 (s，1H)， 7. 60 (dd, 1H)，7. 03 (d, 1H)，5. 86 (m, 1H)，4. 84 (m, 1H)，4. 18 (s,2H)，4. 12 (m, 1H)，3. 32 (m, 1H)，3. 20 (s，3H)，2. 82 (m, 2H)，2. 30 (m, 4H)，1. 98 (m, 2H)，1. 84 (m, 5H)，1. 72 (m, 1H)。质谱 (ESI，m/z) =C25H29N5O4S 的计算值496. 2 (M+H)，实测值496. 2。实例214-氰基-IH-咪唑-2-甲酸「2_环己烯基(1_吡啶_2_基甲基-哌 啶-4-基)-苯基1 -酰胺三氟乙酸盐 向烧瓶装入4-氰基-IH-咪唑-2-甲酸(2_环己烯基_4_哌啶_4_基-苯 基)_酰胺TFA盐(88mg，0. 18mmol)(如实例14的步骤(b)中制备)、吡啶_2_甲醛(17 μ L， 0. 21mmol)、NEt3(30y L，0. 21mmol)、三乙酰氧基硼氢化钠(56mg，0. 25mmol)禾Π 0. 8mL 1， 2-二氯乙烷，并在25°C下搅拌10小时。蒸发溶剂，将标题化合物通过RP-HPLC(CIS)纯化 (用30-50 % CH3CN TO. 1% TFA/H20中的溶液洗脱20分钟)，得到8 Img (78 % )白色固体物 质。1H-WR(400MHz，DMS0-d6) δ 14. 25(brs, 1H)，9· 90 (br s, 1Η)，9· 79 (s, 1Η)，8· 72 (s, 1Η)， 8. 36 (s，1Η)，7. 98 (m, 1Η)，7. 88 (dd, 1Η)，7. 58 (d, 1H)，7. 52 (m, 1H)，7. 20 (m, 1H)，7. 12 (d, 1H)，5. 76 (m, 1H)，4. 56 (s, 2H)，3. 40 (m, 2H)，3. 18 (m, 2H)，2. 88 (m, 1H)，2. 20 (m, 4H)，2. 00 (m, 4H)，1. 72 (m，4H)。质谱(ESI，m/z) =C28H30N6O 的计算值467. 2 (M+H)，实测值467. 2。实例224-氰基-IH-咪哔-2-甲酸「2_(4_甲基-环己烯基)(1_吡啶_2_基甲 基_哌啶-4-基)-苯基1 -酰胺三氟乙酸盐 此化合物是根据实例21的方法，从4-氰基-IH-咪唑_2_甲酸[2_(4_甲基-环 己-1-烯基)-4_哌啶-4-基-苯基]-酰胺(如实例17中制备)和吡啶-2-甲醛制备而 得。1H-WR(400MHz，DMS0-d6) δ 14. 25 (br s, 1H)，9· 90(brs, 1H)，9· 79 (s, 1H)，8· 72 (s, 1Η)， 8. 36 (s，1Η)，7. 98 (m, 1H)，7. 86 (dd, 1H)，7. 54 (d, 1H)，7. 52 (m, 1H)，7. 20 (m, 1H)，7. 12 (d, 1H)，5. 74 (m, 1H)，4. 56 (s,2H)，3. 40 (m, 2H)，3. 18 (m, 2H)，2. 88 (m, 1H)，2. 48-2. 22 (m, 3H)， 2. 18-2. 06(m，4H)，1. 98-1. 82(m，3H)，1. 52(m，1H)，1. 02(s，3H)。质谱(ESI，m/z) =C28H32N6O 的计算值481. 2(M+H)，实测值481. 2。实例23
4-氰基-IH-咪唑-2-甲酸{2_环戊烯基_4-「1-(1_甲基-IH-咪唑_2_基甲 ；S )-霧-4-胃1 -絲1 -酉 此化合物是根据实例21中的方法，从4-氰基-IH-咪唑_2_甲酸(2-环戊烯 基-4-哌啶-4-基-苯基)-酰胺TFA盐(如实例18中制备)和1-甲基-IH-咪唑-2-甲 醛制备而得。1H-WR(400MHz,CD3OD) δ 8. 03 (m，2Η)，7. 50 (d, 1H)，7. 42 (s, 1H)，7. 20 (m, 2H)， 6. 02 (m, 1H) ,4. 22(s，2H)，3. 96(s，3H)，3. 30(m，2H)，2· 82-2. 40 (m，7H)，2· 13-1. 84(m，6H)。 质谱(ESI，m/z) =C26H29N7O 的计算值456. 2 (M+H)，实测值456. 2。实例244- {4-「(4-氰基-IH-咪唑_2_羰基)-氨基1 环己烯基-苯基丨-哌啶甲 酸酰胺 向烧瓶装入4-氰基-IH-咪唑-2-甲酸(2-环己-1-烯基-4-哌啶-4-基-苯 基)_酰胺TFA盐(51mg，0. IOmmol)(如实例 14 的步骤(b)中制备)、NEt3 (22 μ L，0. 15mmol)、 三甲基甲硅烷基异氰酸酯(16μ ，0. llmmol)和l.OmL DCM，并在25°C下搅拌10小时。蒸 发溶剂，将标题化合物通过RP-HPLC (C18)纯化(用35-60 % CH3CN于0. 1 % TFA/H20中的溶 液洗脱 11 分钟)，得至IJ 30mg(70% )白色固体物质。1H-WRGOOMHziDMSO-Cl6) δ 14. 28 (br s, 1H)，9· 76 (s，1Η)，8· 34 (s，1H)，7· 84 (d, 1H)，7· 18 (dd, 1H)，7· 08 (d, 1Η)，6· 00 (br s，2H)， 5. 72 (m, 1Η)，4. 18 (m, 2H)，2. 80-2. 60 (m, 3H)，2. 24-2. 10 (m, 4H)，1. 80-1. 60 (m, 6H)，1. 50 (m, 2H)。质谱(ESI，m/z) =C23H26N6O 的计算值419. 2 (M+H)，实测值419. 0。实例254-氰基-IH-咪唑-2-甲酸「2_ 环己 烯基 (3,4, 5,6_ 四氢-2H_「1,2' 1
83联吡啶-4-基)_苯基1 _酰胺三氟乙酸盐
向烧瓶装入4-氰基-IH-咪唑-2-甲酸(2_环己烯基_4_哌啶_4_基-苯 基)_酰胺 TFA 盐(75mg，0. 15mmol)(如实例 14 的步骤(b)中制备)、K2C03 (84mg，0. 60mmol)、 2_氟吡啶(27yL，0. 30mmol)和0. 3mL N, N-二甲基乙酰胺，并在120°C下搅拌8小时。将 反应混合物用3mL H2O稀释，将标题化合物通过RP-HPLC (C18)纯化(用30-50% CH3CN于 0. 1 % TFA/H20 中的溶液洗脱 9 分钟)，得至Ij 50mg(75% )白色固体。1H-WRGOOMHziCD3OD) δ 8. 18 (d, 1H)，8. 06 (m, 1H)，8. 02 (s, 1H)，7. 94 (dd, 1H)，7. 48 (d, 2H)，7. 22 (dd, 1H)，7. 12 (d, 1H), 6. 98 (t, 1H), 5. 82 (m, 1H) ,4. 32 (m, 2H), 3. 46 (m，2H)，3. 00 (m, 1H) ,2. 30 (m, 4H), 2. 18 (m, 2H)，1. 96-1. 74(m，6H)。质谱(ESI，m/z) =C27H28N6O 的计算值:453. 2 (M+H)，实测值453. 2。实例264-氰基-IH-咪唑-2-甲酸{2_环己烯基_4-「1-(2_羟基-乙基)_哌 啶-4-基1 -苯基丨-酰胺三氟乙酸盐
本标题化合物是根据实例21中的方法，从4-氰基-IH-咪唑-2-甲酸(2_环 己-1-烯基-4-哌啶-4-基-苯基)_酰胺TFA盐(如实例14的步骤(b)中制备)和羟 基-乙酸制备而得。1H-WrGOOMHz, CD3OD) δ 8. 18 (d, 1H)，8· 02 (s, 1H)，7· 22 (dd, 1H)， 7. 14 (d, 2H)，5. 82 (m, 1H)，3. 94 (m, 2H)，3. 74 (m, 2H)，3. 30 (m, 2H)，3. 18 (t, 2H)，2. 92 (m, 1H)， 2.30(m，4H)，2.20-1.98(m，4H)，1.96-1.74(m，4H)。质谱(ESI，m/z) C24H29N5O2 的计算值 420. 2 (M+H)，实测值420. 2。实例274-氰基-IH-咪唑-2-甲酸{4-「1- (2~氰基-乙基)-哌啶_4_基1 环己烯基-苯基丨-酰胺三氟乙酸盐
向烧瓶装入4-氰基-IH-咪唑-2-甲酸(2_环己烯基_4_哌啶_4_基-苯 基)_酰胺TFA盐(77mg，0. 16mmol)(如实例 14 的步骤(b)中制备)、NEt3 (24 μ L，0. 16mmol)、 丙烯腈(12μ L,0. 18mmol)、0. ImL MeOH 禾 Π 1. OmLl，2-二氯乙烷，并在 80°C 下搅拌 1 小时。 将反应混合物浓缩，并将标题化合物通过RP-HPLC (C18)纯化(用30-50% CH3CN于0. 1 % TFA/H20中的溶液洗脱12分钟)，得到83mg(95 % )白色固体。1H-^RGOOMHz, CD3OD) δ 8. 18 (d, 1H)，8. 06 (m, 1H)，7. 22 (dd, 1H)，7. 12 (d, 1H)，5. 82 (m, 1H)，3. 76 (m, 2H)，3. 60 (m, 2H), 3. 28 (t，2H)，3. 12(t，2H)，2· 92 (m, 1H) ,2. 30 (m，4H)，2· 18-1. 98 (m, 4H)，1. 92-1. 74 (m, 4H)。质谱(ESI，m/z) =C25H28N6O 的计算值429. 2 (M+H)，实测值429. 2。实例284-氰基-IH-咪唑-2-甲酸「4_(1_氨甲酰甲基-哌啶_4_基)环己烯 基-苯基]-酰胺三氟乙酸盐 向烧瓶装入4-氰基-IH-咪唑-2-甲酸(2_环己烯基_4_哌啶_4_基-苯 基)_酰胺 TFA盐(50mg，0. IOmmol)(如实例 14 的步骤(b)中制备)、NEt3 (32 μ L，0. 23mmol)、 2_溴乙酰胺(16mg，0. 12mmol)和0. 5mL DCM，并在25°C下搅拌4小时。将反应混合物浓缩， 并将标题化合物通过RP-HPLC (C18)纯化(用30-50% CH3CN于0. 1 % TFA/H20中的溶液洗 脱 12 分钟)，得至Ij 42mg(75% )白色固体。1H-NMR(400MHz, DMS0_d6) δ 14. 28 (br s, 1H)， 9. 78 (s，1H)，9. 50 (br s，1H)，8. 34 (s, 1H)，8. 00 (s, 1H)，7. 88 (d, 1H)，7. 72 (s, 1H)，7. 18 (dd, 1H)，7. 10 (d, 1H)，5. 76 (m, 1H)，3. 94 (s, 2H)，3. 58 (m, 2H)，3. 12 (m, 2H)，2. 80 (m, 1H)，2. 20 (m, 4H)，1. 98 (m，4H)，1. 80 (m，4H)。质谱(ESI，m/z) =C24H28N6O2 的计算值=433. 2 (M+H)，实测值433. 2。实例294-氰基-IH-咪唑-2-甲酸{2_环己烯基「1_ (2~吡啶_2_基-乙酰基)-哌 啶-4-基1 -苯基丨-酰胺三氟乙酸盐 向烧瓶装入4-氰基-IH-咪唑-2-甲酸(2-环己-1-烯基-4-哌啶-4-基-苯 基)_酰胺TFA盐(25mg，0.05mmol)(如实例14的步骤(b)中制备)、吡啶_2_基-乙酸 盐酸盐(IOmg, 0. 06mmol)、EDCI (12mg, 0. 06mmol)、HOBt (8. Omg, 0. 06mmol)、DIEA (36 μ L, 0. 20mmol)和0. 2mL DMF,并在25°C下搅拌10小时。将反应混合物用2mL H2O稀释，将标 题化合物通过RP-HPLC (C18)纯化(用30-50% CH3CN于0. 1 % TFA/H20中的溶液洗脱9分 钟)，得到 22mg(70 % )白色固体。1H-NMR(400MHz, CD3OD) δ 8. 82 (d, 1H)，8· 52 (t, 1H)， 8. 14 (d, 1H)，8. 04 (s, 1H)，7. 96 (m, 3H)，7. 20 (dd, 1H)，7. 10 (d, 1H)，5. 82 (m, 1H)，4. 68 (m, 1H)，4. 32 (m, 2H)，4. 18 (m, 1H)，3. 40 (m, 1H)，2. 88 (m, 2H)，2. 30 (m, 4H)，2. 06-1. 60 (m, 8H)。质 谱(ESI，m/z) =C29H30N6O2 的计算值495. 2. 2 (M+H)，实测值495. 2。实例304-氰基-IH-咪唑-2-甲酸{2_环己烯基「1_ (2~吡啶_3_基-乙酰基)-哌 啶-4-基1 -苯基丨-酰胺三氟乙酸盐 本标题化合物是按照实例29的方法，采用吡啶-3-基-乙酸，从4-氰基-IH-咪 唑-2-甲酸(2-环己-1-烯基-4-哌啶-4-基-苯基)_酰胺TFA盐(如实例14的步骤 (b)中制备)制备而得。1H-NMR (400MHz, CD3OD) δ 8. 80(m，2H)，8· 54 (d, 1H)，8· 10 (d, 1Η)， 8. 06 (t, 1Η)，7. 98 (s, 1H)，7. 18 (dd, 1H)，7. 08 (d, 1H)，5. 78 (m, 1H)，4. 68 (m, 1H)，4. 20 (m, 1H)，4. 18 (s，2H)，3. 36 (m, 1H)，2. 84 (m, 2H)，2. 28 (m, 4H)，2. 06-1. 70 (m, 7H)，1. 62 (m, 1H)。质
谱(ESI，m/z) =C29H30N6O2 的计算值495. 2 (M+H)，实测值495. 2。实例314-氰基-IH-咪唑-2-甲酸{2_环己烯基「1_ (2~吡啶_4_基-乙酰基)-哌 啶-4-基1 -苯基丨-酰胺三氟乙酸盐 本标题化合物是按照实例29的方法，采用吡啶-4-基-乙酸，从4-氰基-IH-咪 唑-2-甲酸(2-环己-1-烯基-4-哌啶-4-基-苯基)_酰胺TFA盐(如实例14的步骤 (b)中制备)制备而得。1H-NMR(400MHz, CD3OD) δ 8. 78 (d，2H)，8. 12 (d，1H)，8. 00 (m，3H)， 7. 18 (dd, 1H)，7. 0(d, 1H)，5. 80 (m, 1H)，4. 66 (m, 1H)，4. 22 (s, 2H)，4. 18 (m, 1H)，3. 34 (m, 1H)，2. 84 (m, 2H)，2. 24 (m, 4H)，2. 00-1. 70 (m, 7H)，1. 64 (m, 1H)。质谱(ESI，m/z) C29H30N6O2 的计算值495. 2 (M+H)，实测值495. 2。实例324-氰基-IH-咪唑-2-甲酸(2-环己烯基-4-丨1-「2-(1_甲基-IH-咪 P半-4-某)-乙酰某1 -哌啶-4-某丨-苯某)-酰胺三氟乙酸盐 本标题化合物是按照实例29的方法，采用(1-甲基-IH-咪唑_4_基)-乙酸，从 4-氰基-IH-咪唑-2-甲酸(2-环己-1-烯基-4-哌啶-4-基-苯基)-酰胺TFA盐(如实 例 14 的步骤(b)中制备)制备而得。1H-匪R(400MHz,CD3OD) δ 8. 82 (s, 1H)，8· 10 (d, 1H)， 8. 00 (s，1H)，7. 42 (s, 1H)，7. 16 (dd, 1H)，7. 06 (d, 1H)，5. 80 (m, 1H)，4. 66 (m, 1H)，4. 12 (m, 1H)，4. 04 (m, 2H)，3. 92 (s,3H)，3. 28 (m, 1H)，2. 82 (m, 2H)，2. 26 (m, 4H)，2. 00-1. 70 (m, 7H)， 1. 64 (m, 1H)。质谱(ESI，m/z) =C28H31N7O2 的计算值498. 2 (M+H)，实测值498. 2。实例334-氰基-IH-咪唑-2-甲酸丨2_环己烯基-4-「1-(2_1Η-咪唑_4_基-乙酰 本标题化合物是按照实例29的方法，采用(1-甲基-IH-咪唑_4_基)-乙酸，从 4-氰基-IH-咪唑-2-甲酸(2-环己-1-烯基-4-哌啶-4-基-苯基)-酰胺TFA盐(如实 例 14 的步骤(b)中制备)制备而得。1H-匪R(400MHz,CD3OD) δ 8. 88 (s，1H)，8· 12 (d，1H)， 8. 02 (s，1H)，7. 44 (s, 1H)，7. 20 (dd, 1H)，7. 10 (d, 1H)，5. 82 (m, 1H)，4. 70 (m, 1H)，4. 18 (m, 1H)，4. 06 (m, 2H)，3. 36 (m, 1H)，2. 84 (m, 2H)，2. 30 (m, 4H)，2. 00-1. 70 (m, 7H)，1. 64 (m, 1H)。质 谱(ESI，m/z) =C27H29N7O2 的计算值484· 2 (M+H)，实测值484· 2。实例344-氰基-IH-咪唑-2-甲酸{2_环己烯基_4-「1_ (2_吗啉基-乙基)-哌 瞭-4-基1-苯基丨-酰胺二 -三氟乙酸盐 向烧瓶装入4-氰基-1- (2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-IH-咪唑_2_甲酸(2_环 己-1-烯基-4-哌啶-4-基-苯基)_酰胺TFA盐(830mg，1. 34mmol)(如实例39的步骤
88a) 4-氰基-1- (2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-IH-咪唑_2_甲酸{2_环己M 基-4-「1- (2-吗啉-4-基-乙基)-哌啶-4-基1 -苯基丨-酰胺
(a)中制备)、K2C03 (600mg, 4. 34mmol)、碘化钠(40mg, 0. 27mmol)、4_ (2-氯-乙基)-吗啉盐 酸盐(260mg，1. 40mmol)和5. OmL N，N- 二甲基乙酰胺，并在80°C下搅拌8小时。将反应混 合物用EtOAc (50mL)稀释，用NaHCO3 (2 X 50mL)和盐水(50mL)洗涤并浓缩。将标题化合物 通过快速色谱法(硅胶，5%Me0H/DCM)纯化得到650mg(78% )白色固体物质。质谱(ESI， m/z) =C34H50N6O3Si 的计算值619. 4(M+H)，实测值619. 3。b) 4-氰基-IH-咪唑-2-甲酸{2-环己烯基「1_ (2~吗啉_4_基-乙基)-哌 啶-4-基1 -苯基丨-酰胺三氟乙酸盐向4-氰基-1- (2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-IH-咪唑_2_甲酸{2_环己烯 基-4- [1- (2-吗啉-4-基-乙基)-哌啶-4-基]-苯基}-酰胺(650mg, 1. 05mmol)(如前面 的步骤中制备)于IOmL DCM中的溶液中加入0. 3mLEt0H和3. OmL TFA，让反应在25°C下进 行2小时。将反应混合物用IOmLEtOH稀释并浓缩。将标题化合物通过RP-HPLC (C18)纯化 (用30-50% CH3CN于0. 1 % TFA/H20中的溶液洗脱9分钟)，得到600mg (80% )白色固体物 质。1H-WR (400MHz ,CD3OD) δ 8. 18 (d, 1H)，8· 04 (s，1H)，7· 24 (dd, 1H)，7· 14 (d, 1H)，5· 84 (m, 1H)，3. 84 (m, 4H)，3. 76 (m, 2H)，3. 50 (m, 2H)，3. 30-3. 10 (m, 4H)，2. 92 (m, 5H)，2. 30 (m, 4H)， 2. 20-2. 00(m，4H)，1. 90-1. 74(m，4H)。质谱(ESI，m/z) =C28H36N6O2 的计算值489. 2，实测值 489.2。实例354-氰基-IH-咪唑-2-甲酸「2-(1,1_ 二 氧代-1,2,3,6-四氢 λ 噻 喃-4-基)-4-哌啶-4-基-苯基1 -酰胺 a)三氟甲磺酸3,6- 二氢_2H_ PJl_ ~4~某酯 在-78°C于氩气下，将四氢-噻喃-4-酮(1.00g，8.61mmOl)于IOml THF中的溶液 加入到LDA(2. 0M，4. 52mL，9. 04mmol)于20ml THF中的溶液中。将所得混合物升温至室温 并搅拌0.5小时，然后再冷却至-78°C。加入N-苯基三氟甲磺酰亚胺(3. 42g，9. 47mmol)于 IOml THF中的溶液。将所得混合物升温至室温并在氩气下搅拌0.5小时。用200ml EtOAc 处理，将混合物用H2O(3X 50mL)、盐水(50mL)洗涤并干燥(Na2SO4)15减压去除溶剂，然后在 娃胶(己烷EtOAc/己烷)上对残余物进行快速色谱纯化，得到810mg(38% )呈无色 油状的标题化合物。1H-NMR(CDCl3 ；400MHz) δ 6. 01 (m, 1H)，3. 30 (m, 2H)，2. 86 (dd, 2H, J = 5. 7,5. 7Ηζ)，2· 58-2. 64(m，2H)。质谱(ESI，m/z) =C6H7F3O3S2 的计算值249· 0 (M+H)，实测值
89249.3。b) 4- (4-硝基 ~ 苯基)-3,6- 二氢 _2H_ 噻喃 向4-硝基苯硼酸(418mg，2. 50mmol)、三氟甲磺酸3，6_ 二氢-2H-噻喃-4-基 酯(如前面的步骤中制备，931mg，3. 75mmol)、Pd(PPh3)4 (433mg，0. 375mmol)和氯化锂 (LiCl) (212mg,5. Ommol)于2OmL 1，4_ 二氧杂环己烷中的混合物中加入2. OM Na2CO3水溶 液(3. 13mL，6. 25mmol)。将所得混合物在80°C下搅拌2小时，然后冷却至室温。用200mL EtOAc处理，将混合物用H2O(2X30mL)、盐水(30mL)洗涤并干燥(Na2SO4)15减压去除溶剂， 然后在硅胶(1-3% EtOAc/己烷)上对残余物进行快速色谱纯化，得到470mg(85% )呈浅 褐色油状的标题化合物。1H-NMR (CDCl3 ；400MHz) δ 8. 19(d，2H，J = 9. 1Hz)，7. 48(d，2H，J =9. 1Ηζ)，6. 36 (m，lH)，3.39 (m，2H)，2.91 (t，2H，J = 5. 7Hz)，2. 72 (m，2H)。质谱(ESI, m/ z) =C11H11NO2S 的计算值222. 1 (M+H)，实测值222. 3。c) 4-(4-硝基-苯基)-3,6- 二氢_2H_噻喃1,二氧化物在_78°C于氩气下，将3-氯过氧苯甲酸(1.04g，4. 62mmol，77% )于15mL 二氯甲 烷(DCM)中的溶液缓慢加入到4- (4-硝基-苯基)-3，6- 二氢-2H-噻喃(如前面的步骤中 制备，465mg，2. 1 Ommol)于15mL DCM中的溶液中。将混合物在_78°C下搅拌0. 5小时，然后 升温至室温。用IOOmL EtOAc处理，将混合物用10% Na2SO3 (2 X 15mL)、饱和NaHCO3水溶液 (20mL)、H20(20mL)、盐水(20mL)洗涤并干燥(Na2SO4)。减压去除溶剂，然后在硅胶(2_5% EtOAc/DCM)上对残余物进行快速色谱纯化，得到518mg(97% )呈白色固体的标题化合物。 1H-WR (CDCl3 ；400MHz) δ 8. 23 (d, 2H, J = 9. OHz)，7. 52 (d, 2H, J = 9. OHz)，6. 04 (m, 1H)， 3. 86 (m, 2H)，3. 26-3. 31 (m, 2H)，3. 18-3. 23 (m, 2H)。d) 4- (1,1- 二氧代-六氢-1 λ 噻喃-4-基)-苯胺 将4-(4_硝基-苯基)-3，6_二氢-2H-噻喃1，1_二氧化物(如前面的步骤中制备， 502mg, 1. 98mmol)和 10% Pd/C(250mg，50wt% )于 15mL MeOH 中的混合物在室温于 H2 (气囊 压)下搅拌2小时。通过在Celite上过滤来去除Pd催化剂，将滤液浓缩，得到314mg (70% ) 呈浅黄色固体的标题化合物。1H-NMR(CDCl3 ；400MHz) δ 7. 03(d，2H，J = 8. 3Ηζ)，6· 67 (d，
2H, J = 8. 3Hz) ,3. 51-3. 79 (br s，2H)，3· 11-3. 17(m，4H)，2· 70(dddd, 1H, J = 12. 3，12. 3，
2. 9,2. 9Hz)，2. 31-2. 43 (m, 2H)，2. 15-2. 23 (m, 2H)。 e) 2-溴-4-(l, 1- 二氧代-六氢-1 λ 噻喃某)-苯胺在氩气下，向0°C的4-(1，1_ 二氧代-六氢-1λ6-噻喃-4-基)_苯胺(如前 面的步骤中制备，174mg，0. 77mmol)于20mL 3 lDCM/MeOH中的悬浮液中加入N-溴琥 珀酰亚胺(NBS) (137mg，0. 77mmol)于5mL DCM中的溶液。将混合物升温至室温并在氩气 下搅拌1小时。用IOOmL EtOAc处理，将混合物用H2O(2X20mL)、盐水(20mL)洗涤并干 燥(Na2SO4)。减压去除溶剂，然后在硅胶(2-3% EtOAc/DCM)上对残余物进行快速色谱 纯化，得至IJ 155mg(66% )呈白色固体的标题化合物。1H-NMR(O)Cl3 ； 400MHz) δ 7. 28 (d, 1H, J = 2. OHz) ,6. 97 (dd, 1H, J = 8. 3,2. OHz) ,6. 73 (d, 1H, J = 8. 3Hz) ,4. 07 (br s, 2H)，3· 09-3. 14(m，4H)，2. 66(dddd, 1H, J = 12. 1，12. 1,3. 3,3. 3Hz)，2. 26-2. 39(m，2H)， 2. 12-2. 21 (m，2H)。质谱(ESI, m/z) =C11H14BrNO2S 的计算值:304· 0 (M+H)，实测值:304· 1。f) 2-环己-1-烯基-4- (1，1- 二氧代-六氢_1 λ 6-噻喃-4-基)-苯胺向2-溴-4- (1，1-二氧代-六氢-1 λ 6-噻喃_4_基)-苯胺(如前面的步骤中制备， 150mg，0. 493mmol)、环己烯 基硼酸(70mg，0. 542mmol)和 Pd (PPh3) 4 (57mg，0. 0493mmol) 于5mL 1，4-二氧杂环己烷中的混合物中加入2. OM Na2CO3水溶液(2. OmL，4. Ommol)。将 所得混合物在80°C于氩气下搅拌8小时，然后冷却至室温。用50mL EtOAc处理，将混合 物用H2O(3X15mL)、盐水(20mL)洗涤并干燥(Na2SO4)。减压去除溶剂，然后在硅胶(2_5% EtOAc/DCM)上对残余物进行快速色谱纯化，得到130mg(86% )呈褐色固体的标题化合物。 1H-NMR (CDCl3 ；400MHz) δ 6. 89 (dd, 1H，J = 8. 4，2. 3Hz)，6. 84 (d, 1H, J = 2. 3Hz)，6. 65 (d, 1H, J = 8. 4Ηζ)，5· 74 (m, 1H)，3· 74 (br s，2H)，3· 08-3. 17(m，4H)，2· 66(dddd, 1H, J = 12. 1， 12. 1,3. 1,3. 1Hz)，2· 29-2. 42 (m，2H)，2· 13-2. 25(m，6H)，1. 73-1. 81 (m，2H)，1. 65-1. 73 (m, 2H)。质谱(ESI, m/z) =C17H23NO2S 的计算值:306· 1 (M+H)，实测值:306· 1。r) 4-氰基-1- (2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-IH-咪唑_2_甲酸「2_环己烯 某-4- (1，1- 二氧代-六氢-1 λ __ -4-某)-苯某1 -酰胺 向2-环己-1-烯基-4-(l，l-二氧代-六氢-1λ6-噻喃-4-基)-苯胺(如前 面的步骤中制备，122mg，0. 50mmol)、4_氰基-1-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-IH-咪 唑-2-甲酸钾(如实例3的步骤(d)中制备，134mg,0. 44mmol)和三吡咯烷基溴化鳞六氟磷 酸盐(PyBroP) (205mg,0. 44mmol)于 5mLDMF 中的混合物中加入 DIEA(209y L，1. 20mmol)。 将所得混合物在室温下于氩气下搅拌18小时，冷却至室温。用50mL EtOAc处理，将混合 物用H2O(3X IOmL)、盐水(IOmL)洗涤并干燥(Na2SO4)。减压去除溶剂，然后在硅胶(1_3% EtOAc/DCM)上对残余物进行快速色谱纯化，得到161mg(73% )呈无色油状的标题化合 物。1H-NMR(CDCl3 ；400MHz) δ 9. 69 (s, 1H) ,8. 29 (d, 1H, J = 8. 4Hz)，7. 78 (s, 1H)，7. 14 (dd, 1H, J = 8. 4，2. 2Hz)，7. 04 (d, 1H, J = 2. 2Hz)，5. 95 (s, 2H)，5. 83 (m, 1H)，3. 66 (t, 2H, J = 8. 2Hz) ,3. 11-3. 20(m，4H)，2· 77(dddd, 1H, J = 12. 1，12. 1,3. 2,3. 2Hz)，2. 35-2. 47 (m, 2H)， 2. 17-2. 33 (m, 6H)，1. 74-1. 89(m，4H)，0· 97(t，2H，J = 8. 2Ηζ)，0· 00(s，9H)。质谱(ESI, m/ ζ) =C28H38N4O4SSi 的计算值555. 2(Μ+Η)，实测值555. 3。h) 4-氰基-IH-咪哔-2-甲酸「2-环己-1-烯基(1，1~ 二氧代-六氢λ 噻 喃-4-基)-苯基1-酰胺 向4-氰基-1- (2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-IH-咪唑_2_甲酸[2_环己烯 基-4-(l，l-二氧代-六氢-1λ6-噻喃-4-基)-苯基]-酰胺(如前面的步骤中制备， 145mg，0. 261mmol)于6mL DCM中的溶液中加入0. 20mL EtOH，然后加入2mL TFA。将所得 溶液在室温下搅拌3小时。减压去除溶剂，然后在硅胶(20-25% EtOAc/DCM)上对残余物 进行快速色谱纯化，得到83mg(90% )呈白色固体的标题化合物。1H-NMR(OTCI3JOOMHz) δ 12. 34 (s，1Η)，9. 60 (s, 1H)，8. 35 (d, 1H, J = 8. 4Hz)，7. 75 (s, 1H)，7. 30 (dd, 1H, J = 8. 4， 2. 2Hz) ,7. 08 (d, 1H, J = 2. 2Hz)，5. 86 (m, 1H)，3. 11-3. 23 (m, 4H), 2. 80(dddd, 1H, J = 12. 2， 12. 2，2. 8，2. 8Hz)，2. 40-2. 57(m，2H)，2. 17-2. 35 (m，6H)，1. 74-1. 91 (m，4H)。质谱(ESI, m/ z) =C22H24N4O3S 的计算值425. 2 (M+H)，实测值425. 6。实例36
4-氰基-IH-咪唑-2-甲酸「2-(1,1_ 二 氧代-1,2,3,6-四氢 λ 噻 _ -4-某)-4-哌啶-4-某-苯某1-酰胺三氟乙酸盐 a) 2-(3,6- 二氢 _2H_ 噻喃 _4_ 基)_5, 5_ 二甲基-「1, 3, 21 二氧硼杂环己烧 将三氟甲磺酸3，6_ 二氢-2H-噻喃-4-基酯(如实例35的步骤(a)中制备， 500mg，2. Olmmol)、联硼酸新戊二醇酯(478mg，2. llmmol)、Pd(dppf) Cl2 (147mg, 0. 20mmol) 和K0Ac(592mg，6. 03mmol)于8mL 1，4-二氧杂环己烷中的混合物在80°C于氩气下搅拌8小 时，然后冷却至室温。用50mL EtOAc处理，将混合物用H2O(2X IOmL)、盐水(IOmL)洗涤并 干燥(Na2SO4)。减压去除溶剂，然后在硅胶(0-5% EtOAc/DCM)上对残余物进行快速色谱纯 化，得至IJ 351mg(82% )呈无色油状的标题化合物。1H-NMR(O)Cl3 ；400MHz) δ 6. 62 (m, 1H)， 3. 63(s，4H)，3. 21(m，2H)，2. 68(t，2H，J = 5. 8Hz)，2. 37(m，2H)，0· 96(s，6H)。质谱(ESI,m/ ζ) =C10H17BO2S 的计算值213. 1 (Μ+Η)，实测值213. 1。b) 4-「4-氨基-3-(3,6~ 二氢_2H_噻喃基)-苯基1 -哌啶甲酸叔丁酯 向4-(4-氨基-3-溴-苯基)-哌啶-1-甲酸叔丁酯(如实例13的步骤(c)中 制备，200mg，0. 563mmol)、2_(3,6- 二氢-2H-噻喃-4-基)-5，5- 二甲基-[1，3，2] 二氧硼 杂环己烷(dioxaborinane)(如前面的步骤中制备，131mg，0. 619mmol)和 Pd(PPh3)4(65mg， 0. 056mmol)于5mL 1，4-二氧杂环己烷中的混合物中加入2. OM Na2CO3水溶液(2. 25mL， 4.5mmol)。将所得混合物在80°C于氩气下搅拌7小时，然后冷却至室温。用5OmL EtOAc 处理，将混合物用H2O (3 X 15mL)、盐水(20mL)洗涤并干燥(Na2SO4)。减压去除溶剂，然后 在硅胶(15-30% EtOAc/己烷)上对残余物进行快速色谱纯化，得到141mg(67% )呈无色油状的标题化合物。1H-NMR(CDCl3 ；400MHz) δ6. 91(dd，lH，J = 8. 2，2. 2Hz)，6. 81 (d， 1H, J = 2. 2Hz) ,6. 65 (d, 1H, J = 8. 2Hz), 5. 91 (m, 1H), 4. 22 (br s,2H) ,3. 66 (br s，2H)， 3. 29-3. 31 (m, 2H)，2. 87 (dd, 2H, J = 5. 7，5. 7Hz)，2. 77 (m, 2H)，2. 47-2. 56 (m, 3H)，1. 78 (d, 2H, J = 12. 6Hz)，1. 50-1. 63 (m, 2H)，1. 48(s，9H)。质谱(ESI, m/z) =C21H30N2O2S 的计算值 375. 2 (M+H)，实测值375. 2。c) 4- Γ4- {Γ4-氰基(2~三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-IH-咪唑_2_羰基1 -氨 某1 -3-(3,6- 二氢-2H- PJl_ -4-某)-苯某1 -哌啶-1-甲酸叔丁酯 向4-[4_氨基-3-(3，6_ 二氢-2H-噻喃-4-基)_苯基]-哌啶-1-甲酸叔丁 酯(如前面的步骤中制备，45mg，0. 12mmol)、4-氰基-l-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲 基)-IH-咪唑-2-甲酸钾(如实例3的步骤(d)中制备，44mg，0. 144mmol)和PyBroP (67mg， 0. 144謹ol)于2mL DMF中的混合物中加入DIEA (42 μ L，0. 24mmol)。将所得混合物在室温 下于氩气下搅拌4小时。用30mL EtOAc处理，将混合物用H2O (3 X IOmL)、盐水(IOmL)洗涤 并干燥(Na2SO4)。减压去除溶剂，然后在硅胶(1-2% EtOAc/DCM)上对残余物进行快速色谱 纯化，得到64mg(85% )呈浅黄色油状的标题化合物。1H-NMR(O)Cl3 ；400MHz) δ 9. 51 (s, 1H)，8· 21 (d，1H，J = 8. 5Hz), 7. 78 (s, 1H), 7. 16 (dd, 1Η, J = 8. 5，2. 1Hz)，7. 02 (d，1Η，J =2. 1Hz)，6. 00 (m, 1H)，5. 92 (s, 2H)，4. 25 (br s，2H)，3. 66 (t, 2H, J = 8. 2), 3. 42 (m, 2H)， 2. 93 (dd, 2H, J = 5. 7，5. 7Hz)，2. 79 (m, 2H)，2. 63 (dddd, 1H, J = 12. 3,12. 3,3. 3,3. 3Hz)， 2. 49-2. 56 (m, 2H)，1. 82 (d, 2H, J = 12. 8Hz)，1. 56-1. 66 (m, 2H)，1. 49 (s,9H)，0. 97 (t, 2H, J =8. 2Hz) ,0. 00(s，9H)。d) 4-「4- {「4-氰基-1- (2~三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-IH-咪唑_2_羰基1 -氨 某 1 -3- (1，1- 二氧,代-1，2，3，6-四氢-1 λ L Pj|_ -4-某)-苯某 1 - RMPg -1-甲酸叔丁酯在-78°C于氩气下，将3-氯过氧苯甲酸(91mg，0. 404謹ol，77% )于ImL DCM中 的溶液缓慢加入到4- [4- {[4-氰基-1- (2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-IH-咪唑-2-羰 基]-氨基} -3- (3,6- 二氢-2H-噻喃-4-基)-苯基]-哌啶-1-甲酸叔丁酯(如前面的 步骤中制备，120mg,0. 192mmol)于3mL DCM中的溶液中。将混合物在_78°C下搅拌15小 时，然后升温至室温。用40mLEt0Ac处理，将混合物用15 % Na2SO3(5mL)、饱和NaHCO3 /K 溶液(2X IOmL)、H2O(IOmL)、盐水(IOmL)洗涤并干燥(Na2SO4)。减压去除溶剂，然后在 硅胶(2-10% EtOAc/DCM)上对残余物进行快速色谱纯化，得到85mg(67 % )呈无色油状 的标题化合物。1H-NMR(CDCl3 ；400MHz) δ 9. 23 (s, 1H)，8· 03 (d, 1H, J = 8. 3Hz)，7· 80 (s, 1H)，7. 21 (dd, 1H，J = 8. 3，2. OHz)，7. 06 (d, 1H, J = 2. OHz)，5. 93 (s, 2H)，5. 75 (t, 1H, J = 4. 1Hz)，4. 25 (brs, 2H)，3. 86 (br s，2H)，3. 66 (t, 2H, J = 8. 2Hz)，3. 29 (t, 2H, J = 6. 3Hz)， 3. 03 (t, 2H, J = 5. 4Hz)，2. 74-2. 86 (m, 2H)，2. 64 (dddd, 1H, J= 12. 3,12. 3,3. 3,3. 3Hz)， 1. 82 (d, 2H, J = 12. 3Hz)，1. 55-1. 65 (m, 2H)，1. 49 (s,9H)，0. 98 (t, 2H, J = 8. 2Hz)，0. 01 (s， 9H)。质谱(ESI，m/z) =C32H45N5O6SSi 的计算值656. 3 (M+H)，实测值656. 7。e)4~ 氰基 _1Η_ 咪唑 _2_ 甲酸「2-(1,1_ 二 氧代-1,2,3,6-四氢噻 _ -4-某)-4-哌啶-4-某-苯某1 -酰胺，三氟乙酸盐 向4- [4- {[4-氰基-1- (2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-IH-咪唑_2_羰基]-氨 基} _3-(1，1-二氧代-1,2, 3,6-四氢-1 λ 6-噻喃-4-基)-苯基]-哌啶-1-甲酸叔丁酯 (如前面的步骤中制备，81mg，0. 123mmol)于6mL DCM中的溶液中加入0. 20mL EtOH，然后加 入2mL TFA。将所得溶液在室温下搅拌3小时。减压去除溶剂，得到64mg(96% )呈白色固 体的标题化合物。1H-NMR(CD3OD ；400MHz) δ 8. 02 (s, 1H), 7. 78 (d, 1H, J = 8. 3Hz), 7. 29 (dd, 1H, J =8. 3，2. 0Hz)，7. 21 (d, 1H, J = 2. OHz)，5. 71 (t，1H，J = 4. 2Hz)，3. 83 (br s，2H)，3. 51 (d, 2H, J = 12. 4Hz)，3. 33 (t, 2H, J = 6. OHz)，3. 15 (td, 2H, J = 13. 1,2. 6Hz)，3. 01 (m, 2H)， 2. 94 (dddd, 1H，J = 12. 2，12. 2，3. 5，3. 5Hz)，2. 08 (d，2H，J = 12. 9Hz)，1. 91 (m，2H，J = 13. 3，13. 3，13. 3，3. 8Hz)。质谱(ESI，m/z) =C21H23N5O3S 的计算值426. 2 (M+H)，实测值: 426.2。实例374-氰基-IH-咪唑-2-甲酸「4_(1_乙酰基-哌啶_4_基)(1,二氧代, 2, 3,6-四氢-1 λ 噻喃-4-基)-苯基1 -酰胺
95 在室温下向4-氰基-IH-咪唑-2-甲酸[2_ (1，1_ 二氧代-1，2，3，6_四氢_1 λ 6-噻 喃-4-基)-4-哌啶-4-基-苯基]-酰胺三氟乙酸盐(如实例36的步骤(e)中制备，62mg， 0. 115mmol)于 4mL 1 1DCM/DMF 中的悬浮液中加入 DIEA (60 μ L，0. 345mmol)。将混合物 搅拌5分钟，然后将乙酸酐(llyL，0. 121mmol)缓慢加入至该混合物中，并将所得混合物 在室温下搅拌0.5小时。用40mL EtOAc处理，将混合物用H2O(2X20mL)洗涤。将水层用 EtOAc (4X IOmL)萃取。真空浓缩合并的有机层。将残余物在硅胶(1_4% MeOH/DCM)上进 行快速色谱纯化，得到50. 9mg(95% )呈白色固体的标题化合物。1H-NMR(⑶Cl3 ；400MHz) δ 13. 0 (s，1Η)，9. 10 (s, 1H)，8. 13 (d, 1H, J = 8. 4Hz)，7. 77 (d, 1H, J = 2. 3Hz)，7. 26 (dd, 1H, J = 8. 4，2. OHz)，7. 08 (d, 1H, J = 2. OHz)，5. 77 (t, 1H, J = 4. 3Hz)，4. 84 (dt, 1H, J = 13. 3， 2. IHz)，4. 00 (dt, 1H, J= 13. 3,2. IHz)，3. 89 (br s，2H)，3. 31 (t，2H，J = 6. 2Hz)，3. 23 (td, 1H, J = 13. 2,2. 5Ηζ)，3· 02 (m，2Η)，2. 77(dddd, 1H, J = 11. 9，11. 9,3. 4,3. 4Hz)，2. 68(ddd, 1H, J = 12. 6，12. 6,2. 9Hz)，2. 18(s，3H)，1. 70-1. 97(m，4H)。质谱(ESI，m/z) C23H25N5O4S 的 计算值468. 2 (M+H)，实测值468. 1。实例38a4-氰基-IH-咪哔-2-甲酸|2_环己烯基_4-「1-(2_ 二甲氨基-乙酰基)_哌 啶-4-基1-苯基丨-酰胺 将4-氰基-IH-咪唑-2-甲酸(2_环己烯基_4_哌啶_4_基-苯基)-酰胺 三氟乙酸盐(如实例14的步骤(b)中制备，655mg，l. 30mmol)于DCM(15mL)中的混合物冷 却至0°C，加入DIEA (0. 92mL，5. 2mmol)。然后在10分钟里分批加入二甲氨基乙酰氯盐酸 盐(211mg，1. 3mol)。将反应混合物在0°C下搅拌30分钟，然后让其升温至室温并搅拌2小 时。真空去除溶剂，将所得残余物在盐水和DCM之间分配。分离有机层，干燥(Na2SO4)并 浓缩。将残余物在硅胶(5%Me0H:DCM)上纯化，得到432mg(70% )呈白色固体的标题化合 物。1H-NMR(CDCl3 ；400MHz) δ 9. 49 (s, 1H) ,8. 24 (d, 1H, J = 2. 3Hz)，7. 70 (s, 1H)，7. 12 (dd, 1H, J = 8. 4，2. lHz)，7. 01(s，lH)，5. 82(m，lH)，4. 75(d，lH，J = 13. 4Hz)，4. 13 (d，1H，J
啶-4-基1-苯基丨-酰胺
某-4-哌啶-4-某-苯某)-酰胺，三氟乙酸盐
将实例38a进行HPLC纯化还得到少量的4_氰基-IH-咪唑_2_甲酸{2_环 己-1-烯基-4- [ 1- (2-甲氨基-乙酰基)-哌啶-4-基]-苯基}-酰胺。1H-NMR (CD3OD ； 400MHz) δ 8. 02 (d, 1H, J = 8. 4Hz)，7. 92 (s, 1H)，7. 07 (dd, 1H, J = 8. 4Hz, J = 2. 4Hz)， 6. 98(d, 1H, J = 2. 4Hz) , 5. 73-5. 68 (m, 1Η) ,4. 60-4. 51 (m, 1Η) , 3. 76-3. 68 (m, 1Η)， 3. 20-3. 11 (m, 1Η)，2. 81-2. 70 (m，2Η)，2. 67(s，3H)，2· 22-2. 13(m，4H)，1. 88-1. 66(m，6H)， 1. 66-1. 46 (m，2H)。质谱(ESI, m/z) =C25H30N6O2 的计算值:447· 2 (Μ+Η)，实测值:447· 3。实例394- {4-「(4-氰基-IH-咪唑_2_羰基)-氨基1 环己烯基-苯基丨-哌啶甲 酸(2-羟基-乙基)-酰胺
=13. 4Hz)，3. 57 (d, 1H, J = 14. 2Hz)，3. 18 (d, 1H, J = 14. 2Hz)，3. 12 (td, 1H, J = 13. 3， 2. 4Ηζ), 2. 73(dddd, 1H, J = 11. 9，11. 9,3. 8,3. 8Hz)，2. 65(ddd, 1H, J = 13. 3，13. 3,2. 4Hz)， 2. 40(s，6H)，2. 18-2. 32(m，4H)，1. 60-1. 98(m，8H)。质谱(ESI，m/z) :C26H32N6O2 的计算值: 461. 3 (Μ+Η)，实测值461. 2。实例38b 4-氰基-IH-咪唑-2-甲酸{2-环己-1-烯基-4-「l-(2-甲氨基_乙酰基)_哌
SEM
在0°C向4-(4-{[4-氰基-1-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-IH-咪唑-2-羰 基]-氨基}-3_环己-1-烯基-苯基)_哌啶-1-甲酸叔丁酯(如实例14的步骤(a)中 制备，81mg，0. 123mmol)于18mL DCM中的溶液中加入ImL EtOH，然后加入5mL TFA0将所 得溶液在室温下搅拌0. 5小时，用20mL EtOH处理，接着用20mL正丙醇和5mL H2O处理，然 后将混合物减压浓缩，得到浅黄色固体物质。将化合物在硅胶(2-4%Me0H/DCM)上进行快 速色谱，得到0. 87g(85% )呈白色固体的标题化合物。1H-NMR(O)Cl3 ；400MHz) δ 9. 70 (s, 1H)，9. 66 (br s，1H)，9. 15 (br s，1H)，8. 29 (d, 1H, J = 8. 3Hz)，7. 78 (s, 1H)，7. 13 (dd, 1H, J =8. 3，2. 2Hz)，7. 03 (d, 1H, J = 2. 2Hz)，5. 95 (s, 2H)，5. 83 (m, 1H)，3. 66 (t, 2H, J = 8. 4Hz)， 3. 55 (d, 2H, J = 12. 3Hz)，2. 95-3. 11 (m, 2H)，2. 76 (m, 1H)，2. 18-2. 33 (m, 4H)，1. 99-2. 15 (m, 4H)，1. 82(m，4H)，0· 97(t，2H，J = 8· 3Ηζ)，0· 00(s，9H)。质谱(ESI, m/z) =C28H39N5O2Si 的计 算值506. 3(M+H)，实测值506. 1。b) 4- (4- {Γ4-氰基-1- (2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-IH-咪唑_2_羰基1 -氨 基丨-3-环己-1-烯基-苯基)-哌啶-1-甲酸(2-羟基-乙基)-酰胺
在_78°C于氩气下，将4-氰基-l-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-1Η-咪 唑-2-甲酸(2-环己-1-烯基-4-哌啶-4-基-苯基)_酰胺三氟乙酸盐(如前面的步骤中 制备，116mg，0. 192mmol)和DIEA (134 μ L, 0. 770mmol)于4mLDCM中的溶液缓慢加入到三光 气(23mg，0. 0768mmol)于4mL DCM中的溶液中。将混合物在_78°C搅拌15分钟，升温至室 温并搅拌15分钟，然后再次冷却至_78°C。加入2-氨基-乙醇(350 μ L，5. 77mmol)于4mL THF中的悬浮液，将所得混合物升温至室温并在氩气下搅拌20小时。用IOOmL EtOAc处理， 将混合物用H20(3X20mL)、盐水(20mL)洗涤并干燥(Na2SO4)。在真空中去除溶剂，然后在硅 胶(10% EtOAc/DCM，然后5% MeOH/DCM)上对残余物进行快速色谱纯化，得到95mg(83% ) 呈无色油状的标题化合物。1H-NMR(CDCl3 ；400MHz) δ 9. 68 (s, 1H)，8. 25 (d，1H，J = 8. 4Hz)， 7. 77 (s，1H)，7. 12 (dd, 1H, J = 8. 4，2. 2Hz)，7. 01 (d, 1H, J = 2. 2Hz)，5. 94 (s, 2H)，5. 83 (m, 1H), 4. 96 (t, 1H, J = 5. 6Hz) ,4. ll(d，2H，J = 13. 3Hz)，3. 75(ddd，2H，J = 4. 4Hz)，3. 66 (t, 2H, J = 8. 3Hz)，3. 44 (ddd, 2H, J = 5. OHz)，3. 36 (t, 1H, J = 4. 6Hz)，2. 91 (ddd, 2H, J= 13. 0, 2. 2Hz)，2. 66 (dddd, 1H, J= 12. 2,12. 2,3. 3,3. 3Hz)，2. 18-2. 33 (m, 4H)，1. 75-1. 91 (m, 6H)， 1. 67 (dddd, 2H, J= 12. 9，12. 9，12. 9,4. OHz)，0. 97 (t, 2H, J = 8. 3Hz)，0. 00 (s,9H)。质谱 (ESI，m/z) =C31H44N6O4Si 的计算值593. 3 (M+H)，实测值593. 1。c) 4-{4-Γ (4-氰基_1Η_咪唑羰基)-氨基1 ~3~环己烯基-苯基丨-哌 啶-1-甲酸(2-羟某-乙某)-酰胺 向4- (4- {[4-氰基-1- (2_三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-IH-咪唑_2_羰基]-氨 基}-3_环己-1-烯基-苯基)_哌啶-1-甲酸(2-羟基-乙基)_酰胺(如前面的步骤 中制备，95mg，0. 16謹ol)于3mL DCM中的溶液中加入0. IOmL EtOH，然后加入1. OmL TFA0 将所得溶液在室温下搅拌6小时。减压去除溶剂，然后在硅胶(2-8%Me0H/DCM)上对 残余物进行快速色谱纯化，得到68mg(92% )呈白色固体的标题化合物。1H-NMRKD3OD; 400MHz) δ 8. 09 (d, 1H, J = 8. 4Hz)，8. 00 (s, 1H)，7. 15 (dd, 1H, J = 8. 4，2. 2Hz)，5. 79 (m, 1H)，4. 15 (dd, 2H, J= 13. 3，1. IHz)，3. 61 (t，2H，J = 5. 9Hz)，3. 27-3. 32 (m, 2H)，2. 90 (ddd, 2H, J = 13. 0,13. 0,2. 5Ηζ), 2. 73 (dddd, 1H, J = 12. 1，12. 1，2. 6，2. 6Hz)，2. 26 (m，4H)， 1. 73-1. 88 (m, 6H)，1. 62 (dddd, 2H, J = 12. 6，12. 6，12. 6,4. OHz)。质谱(ESI，m/z) C25H30N6O3 的计算值463. 2 (M+H)，实测值463. 2。实例404-氰基-IH-咪唑-2-甲酸{2_环己烯基_4-「1-(2_甲磺酰基-乙基)-哌 啶-4-基1-苯基丨-酰胺 a)甲磺酸2-甲磺酰基_乙酯 在氩气下，向0°C的甲磺酰氯(484mg，4. 23mmol)于15mL DCM中的溶液中加入 2_甲磺酰基-乙醇(500mg，4. 03mmol)于IOmL DCM中的溶液，然后加入DIEA(1. 05mL， 6. 05mmol)。将混合物升温至室温并在氩气下搅拌20小时。将混合物用IOOmL EtOAc处理， 用H20(3X20mL)、盐水(20mL)洗涤并干燥(Na2SO4)。在真空中去除溶剂，得到534mg(66% ) 呈褐色油状的标题化合物。1H-NMR (CDCl3 ；400MHz) δ 4. 67(d，2H，J = 5. 5Hz)，3. 46(d，2H， J = 5. 5Ηζ)，3· ll(s，3H)，3. 04(s，3H)。b) 4-氰基-IH-咪唑-2-甲酸丨2_环己烯基-4_「l-(2_甲磺酰基-乙基)-哌 啶-4-基1-苯基丨-酰胺 在室温下向4-氰基-IH-咪唑-2-甲酸(2_环己烯基_4_哌啶_4_基-苯 基)_酰胺三氟乙酸盐(如实例14的步骤(b)中制备，85mg，0. 174mmol)和DIEA(91 μ L， 0. 521mmol)于3mL DCM中的溶液中加入2-甲磺酸2-甲磺酰基-乙酯(如前面的步骤中 制备，42mg，0. 208mmol)。将所得混合物在室温下搅拌3小时。用5OmL EtOAc处理，将混合 物用H20(2X20mL)、盐水(IOmL)洗涤并干燥(Na2SO4)。真空去除溶剂，然后在硅胶(1_3% MeOH/DCM)上对残余物进行快速色谱纯化，得到54mg(65% )呈白色固体的标题化合物。 1H-NMR(CDCl3；400MHz) δ 9. 54(s，1H)，8. 25(d,1H,J = 8. 4Hz)，7. 72(s,1H)，7. 15 (dd,1H, J =8. 4，2. 0Hz)，7. 04 (d, 1H, J = 2. OHz)，5. 85 (m, 1H)，3. 21 (t，1H，J = 6. 5Hz)，3. 09 (s, 3H)， 3.02-3. ll(m，2H)，2. 92(t，2H，J = 6. 5Hz)，2. 52 (dddd，1H，J = 12. 1,12. 1，3. 3，3. 3Hz)， 2. 18-2. 34 (m, 4H), 2. 18(t，2H，J = 10. 8Hz)，1. 64-1. 94 (m, 8H)。质谱(ESI，m/z) C25H31N5O3S 的计算值482. 2 (M+H)，实测值482. 2。已经根据所指出的实例制备了如下化合物 4-氰基-IH-咪哔-2-甲酸|2_环己烯基_4-「1_(吡啶_3_羰基)-哌 啶-4-基1-苯基丨-酰胺
100 将4-氰基-IH-咪唑-2-甲酸(2-环己-1-烯基-4-哌啶-4-基-苯基)_酰 胺三氟乙酸盐(如实例14的步骤(b)中制备，75.0mg，0. 15mmol)于CH2Cl2 (IOmL)中的溶 液用Et3N (64. IyL,0. 46mmol)处理，并冷却至0°C。将混合物用烟酰氯盐酸盐(0. 030g, 0. 17mmol)处理，在0°C下搅拌15分钟，然后在室温下搅拌17小时。将反应混合物直 接吸附至硅胶上。进行硅胶色谱纯化(10%Me0H的EtOAc溶液)，得到呈白色固体的 标题化合物(61. Omg, 83 % )。1H-NMR(CDCl3 ；400MHz) δ 9. 51 (br s, 1H)，8· 77 (s, 1H)， 8. 70-8. 66 (m, 1H)，8. 32 (d, 1H, J = 8. 4Hz)，7. 86-7. 81 (m, 1H)，7. 70 (s, 1H)，7. 42-7. 37 (m, 1H)，7. 17 (d, 1H, J = 8. 4Hz)，7. 06-7. 04 (m, 1H)，5. 87-5. 82 (m, 1H)，4. 98-4. 87 (m, 1H)， 3. 94-3. 84 (m, 1H)，3. 29-3. 18 (m, 1H)，2. 98-2. 86 (m, 1H)，2. 86-2. 76 (m, 1H)，2. 34-2. 20 (m, 4H)，1. 94-1. 72 (m, 9H)。LC-MS (ESI，m/z) C28H28N6O2 的计算值:481. 2 (M+H)，实测值481. 3。实例444-氰基-IH-咪唑-2-甲酸(2_环己烯基-4-丨1-「2-(2_羟基-乙氨基)-乙 酰基1 -哌啶-4-基丨-苯基)-酰胺三氟乙酸盐 a)「2- (4~{4~「(4_氰基-IH-咪唑_2_羰基)-氨基1 环己烯基-苯基丨-哌 啶-1-某)-2_氧代-乙某1-氡某甲酸,叔丁酯 将 N-BOC-甘氨酸(0. 29g, 1. 63mmol)于 CH2Cl2(IOmL)中的溶液用 DIEA (0. 85mL, 4. 90mmol) ,HOBt (0. 26g, 1. 96mmol)和 EDCI (0. 38g, 1. 96mmol)处理。将所得混合物在室温己-1-烯基-苯基1 _酰胺三氟乙酸盐
将4-氰基-IH-咪唑-2-甲酸{4-[1-(2_氨基-乙酰基)_哌啶-4-基]-2-环 己-1-烯基-苯基]-酰胺三氟乙酸盐(如前面的步骤中制备，0.42g，0.77mmol)于 CH2Cl2 (20mL)中的悬浮液用 Na (OAc) 3BH(0. 33g, 1. 54mmol)和固体乙二酸(44. 6mg, 0. 77mmol)处理。将混合物在室温下搅拌1小时，真空蒸发溶剂。将残余物溶解于MeOH中， 滤出固体，使滤液真空浓缩。进行反相HPLC(C-18柱)(20%至60%乙腈的水(具有0.1% TFA)溶液，进行30分钟)，得到呈白色固体的标题化合物(83mg，两个步骤为19% )。
将[2-(4-{4-[(4-氰基-IH-咪唑-2-羰基)_氨基]-3-环己-1-烯基-苯基}_哌 唳-1-基)-2_氧代-乙基]-氨基甲酸叔丁酯(如前面的步骤中制备，0. 41g，0. 77mmol) 于CH2Cl2 (20mL)中的溶液用EtOH(0. 2mL)和TFA(6mL)处理。将混合物在室温下搅拌45分 钟，并真空蒸发溶剂。将粗产物直接用于下一步骤。LC-MS(ESI，m/z) =C24H28N6O2的计算值: 433. 2 (M+H)，实测值433. 2。c) 4-氰基-IH-咪唑-2-甲酸(2-环己烯基丨1_「2_ (2~羟基-乙氨基)-乙
下搅拌10分钟，加入到4-氰基-IH-咪唑-2-甲酸(2-环己-1-烯基-4-哌啶-4-基-苯 基)_酰胺三氟乙酸盐(如实例14的步骤(b)中制备，0.80g，1.63mmOl)于CH2Cl2(20mL) 中的悬浮液中。将溶液在室温下搅拌17小时。真空蒸发溶剂。进行硅胶色谱(50% EtOAc 的己烷溶液)，得到呈白色固体的标题化合物(o.4ig，47%)。1H-Nmr(OtCI3JoomHz) δ 9. 53 (S，1Η)，8. 26 (d, 1H, J = 8. 4Hz)，7. 80-7. 78 (m, 1H)，7. 71 (s，1H)，7. 45-7. 43 (m, 1H)， 7. 06 (d, 1H, J = 8. 4Hz)，7. 00 (s, 1H)，5. 83 (br s，1H)，5. 76 (br s，1H)，4. 78-4. 68 (m, 1H)， 3. 96-3. 85 (m, 2H)，3. 17-3. 03 (m, 1H)，2. 78-2. 63 (m, 2H)，2. 29 (br s，2H)，2. 22 (br s，2H)， 1. 95-1. 87(m，2H)，1. 86-1. 72 (m, 4H)，1. 70-1. 55(m，2H)，1. 44(s，9H)。LC-MS (ESI, m/z) C29H36N6O4 的计算值533. 3 (M+H)，实测值532. 9。 b)4-氰基-IH-咪唑-2-甲酸{4_「1-(2_氨基-乙酰基)-哌啶基1_2_环啶-3-基)_苯基1 _酰胺三氟乙酸盐
TFA HN' a) 5-三氟甲磺酰氧基-3,6- 二氢_2H_吡啶甲酸叔丁酷 1H-NMR (CD3OD ；400MHz) δ 8. 16-8. 09 (m, 1H)，8. 05-8. 01 (m, 1H)，7. 22-7. 15 (m, 1H)，7. 11-7. 06 (m, 1H)，5. 84-5. 79 (m, 1H)，4. 72-4. 62 (m, 1H)，4. 24-3. 91 (m, 2H)， 3. 89-3. 80 (m, 2H)，3. 28-3. 18 (m, 2H)，2. 92-2. 79 (m, 2H)，2. 28 (br s，4H)，1. 98-1. 89 (m, 2H)，1. 89-1. 76(m，4H)，1. 76-1. 57(m，2H)。LC-MS(ESI，m/z) :Q6H32N603 的计算值: 477. 2 (M+H)，实测值477. 2。实例 454-氰基-IH-咪唑-2-甲酸(2-环己-1-烯基-4-丨1-「2-(2_羟基-乙基)_甲 基-氨基-乙酰基1 -哌啶-4-基丨-苯基)-酰胺三氟乙酸盐
I O将4-氰基-IH-咪唑-2-甲酸(2-环己烯基_4_ {1_ [2- (2-羟基-乙氨基)-乙 酰基]-哌啶-4-基}_苯基)_酰胺三氟乙酸盐(如实例44的步骤(c)中制备，50.0mg，
0.085mmol)于 Me0H(3mL)中的溶液用 Na (OAc)3BH(39. 5mg，0. 19mmol)和 37% 甲酸水溶液 (8.2yL,0. IOmmol)处理。将所得混合物在室温下搅拌5. 5小时，真空除去溶剂。进行反 相HPLC (C-18柱)(10%至50%乙腈的水(具有0. TFA)溶液，进行30分钟)，得到呈白 色固体的标题化合物(19. 5mg,47% )。1H-NMR(CD3C)D ；400MHz) δ 8. 12 (d, 1H, J = 8. 4Hz)， 8. 02 (s, 1H) ,7. 19 (dd, 1H, J = 8. 4，2. OHz)，7. 09 (d，1H，J = 2. OHz)，5. 84-5. 79 (m，1H)， 4. 72-4. 64 (m, 1H)，4. 39-4. 23 (m, 2H)，3. 84-3. 79 (m, 1H)，3. 31-3. 21 (m, 1H)，3. 03-2. 94 (m, 6H) , 2. 92-2. 80 (m，2H) , 2. 32-2. 24 (m，4H) , 2. 00-1. 90 (m, 2H) , 1. 90-1. 76 (m, 5Η)，
1.78-1. 59(m，2H)。LC_MS(ESI，m/z) C27H34N6O3 的计算值491· 3 (M+H)，实测值491· 2。实例464-氰基-IH-咪唑-2-甲酸「4_(1_乙酰基-哌啶基)(1, 2, 5,6_四氢-口比 将LDA (23. 4mL, 35. Immol, 1. 5M环己烷溶液)于THF(50mL)中的溶液在氩气下冷 却至-78 °C。将所得溶液通过滴加3-氧代-哌啶-1-甲酸叔丁酯(5. OOg, 25. Immol)于 THF(15mL)中的溶液进行处理，搅拌15分钟。将所得混合物用1，1，1-三氟-N-苯基-N-[(三 氟甲基)磺酰基]甲磺酰亚胺(12. 5g，35. lmmol)于THF(40mL)中的溶液进行处理。让混合 物升温至室温并搅拌2. 5小时。将反应混合物用饱和NaHCOyK溶液猝灭，用Et2O稀释，并用 水洗涤。将有机层用MgSO4干燥并进行真空浓缩。进行硅胶色谱(5% EtOAc的己烷溶液)处 理，得到呈无色油状的标题化合物(2. 45g,30% L1H-NMR(O)Cl3 ；400MHz) δ 5. 97-5. 89 (m， 1H)，4. 09-4. 01 (m, 2H)，3. 54-3. 45 (m, 2H)，2. 36-2. 26 (m, 2H)，1. 48 (s,9H)。LC-MS (ESI，m/ ζ) =C11H16F3NO5S 的计算值332. 1 (Μ+Η)，实测值332. 1。b) 5- (4,4, 5, 5-四甲基-「1, 3, 21 二氧杂硼烷 _2_ 基)_3,6_ 二氢 _2H_ 吡啶 土 甲 酸叔丁酯将PdCl2dppf(0· 16g，0.22mmol)、K0Ac(2. 18g，22.2mmol)、4，4，5，5，4'，4'，5'， 5'-八甲基 _[2，2']双[[1，3，2] 二氧杂硼烷基](2. 07g，8. 13mmol)和 dppf(0. 12g， 0. 22mmol)置于圆底烧瓶中，将烧瓶用Ar吹扫。将5-三氟甲磺酰氧基-3，6-二氢-2H-吡 啶-1-甲酸叔丁酯(如前面的步骤中制备，2.45g，7.40mmol)于二氧杂环己烷(70mL)中 的脱气溶液加入烧瓶中，加热至80°C保持16小时。将混合物通过烧结玻璃漏斗过滤，以 去除固体KOAc，真空浓缩滤液。进行硅胶色谱(5% EtOAc的己烷溶液)，得到呈无色油状 的标题化合物(1.62g，71%)。1H-Wr(CdcI3JOOMHz) δ 6. 69-6. 60 (m, 1H), 3. 98 (br s, 2H)，3· 49-3. 42(m，2H)，2· 24-2. 16(m，2H)，1. 47(s，9H)，1. 27 (s, 12H)。LC-MS (ESI, m/z) C18H28BNO4 的计算值310. 2 (Μ+Η)，实测值311. O。c) 4- (4-硝基-苯基)-3,6- 二氢_2H_吡啶土甲酸叔丁酯 本标题化合物是通过实例35步骤(b)中的Suzuki偶联方法，用4_硝基苯硼酸 (167mg, 1. OOmmol)和4-三氟甲磺酰氧基-3，6-二氢-2H-吡啶-1-甲酸叔丁酯(如实 例13的步骤(a)中制备，295mg，1.00mmOl)制备而得。进行硅胶色谱(10% EtOAc的己烷 溶液)，得到呈油状的标题化合物(273mg,90% )0 1H-NMR(O)Cl3 ；400MHz) δ 8. 19(d，2H， J = 8. 8Hz)，7. 50 (d, 2H, J = 8. 8Hz)，6. 23 (m, 1H)，4. 12 (m, 2H)，3. 66 (m, 2H)，2. 54 (m, 2H)， 1. 49(s，9H)。d) 1-Γ4- (4-氨基-苯基)-哌啶-1-基1 -乙酮将4-(4-硝基-苯基)-3，6-二氢_2!1-吡啶-1-甲酸叔丁酯(如前面的步骤中 制备，304mg，1. OOmmol)于DCM/TFA的1 1混合物(IOmL)中的溶液在室温下搅拌3小时 并浓缩。将残余物真空干燥过夜，溶解于CH2Cl2 (IOmL)中并冷却至0°C。向该溶液中滴加 Ε 3Ν(280μ ，2πιπιΟ1)，然后加入乙酸酐(102 μ L，lmmol)。将所得混合物在0°C下搅拌1小 时，让其升温至室温。将反应混合物用盐水洗涤，分离有机层、干燥并浓缩。用类似于实例4 步骤(d)的方法将所得产物还原，获得标题化合物(143mg，65% )。1H-NMR(⑶Cl3 ；400MHz) δ 6. 97 (d, 2H, J = 8. 4Hz)，6. 64 (d, 2H, J = 8. 4Hz)，4. 75 (m, 1H)，3. 93 (m, 1H)，3. 13 (m, 3H)， 2. 66 (m, 2H)，2. 12 (s, 3H)，1. 84 (m, 2H)，1. 57 (m, 2H)。e) 1-Γ4- (4~氨基_3_溴-苯基)-哌啶基1 -乙酮将1-[4-(4_氨基-苯基)_哌啶-1-基]-乙酮(如前面的步骤中制备，0.36g， 1. 66mmol)于 CH2Cl2 (IOmL)中的溶液冷却至 _78°C，用 NBS (0. 28g, 1. 58mmol)于 CH2Cl2 (4mL) 中的悬浮液进行处理。让反应物升温至室温并搅拌30分钟。将反应物用CH2Cl2稀释，用饱 和NaHCO3水溶液洗涤。将有机层用MgSO4干燥，真空浓缩。将粗产物直接用于下一反应。 LC-MS (ESI，m/z) =C13H17BrN2O 的计算值297. 1 (M+H)，实测值297. 1。f) 5-「5- (1-乙酰基-哌啶-4-基)_2_氨基-苯基1-3,6- 二氢_2H_吡啶甲 酸叔丁酯 将5- (4，4，5，5-四甲基-[1，3，2] 二氧杂硼烷 _2_ 基)-3，6_ 二氢 _2Η_ 吡啶 甲 酸叔丁酯(如实例46的步骤(b)中制备，0.62g，2.02mmol)和1_[4-(4-氨基-3-溴-苯 基)_哌啶-1-基]-乙酮(如前面的步骤中制备，0.20g，0.67mmol)于甲苯Et0H(2 1， 9mL)中的溶液用2. OM Na2CO3水溶液(2. 7mL，5. 38mmol)处理，并在氩气下进行超声脱气。 将混合物加热至80°C，用Pd(PPh3)4(54mg，0. 05mmol)处理，并在80°C下搅拌4. 5小时。将 反应混合物冷却至室温，用EtOAc稀释，并用饱和NaHCO3水溶液洗涤。将有机层用MgSO4干 燥，真空浓缩，得到呈灰白色固体的标题化合物(0. 25g，93%)。LC-MS(ESI，m/z) =C23H33N3O3 的计算值422. 2 (M+Na)，实测值422. 0。r) 5- (5- (1-乙酰基-哌啶-4-基)丨「4_氰基(2~三甲基硅烷基-乙氧基甲 某)-IH-眯卩半-2-羰某1 -氡某丨-苯某)-3,6- 二氢-2H-吡啶-1-甲酸叔丁酯 将5- [5- (1-乙酰基-哌啶-4-基)-2-氨基-苯基]-3，6_ 二氢_2H_吡啶甲 酸叔丁酯(如前面的步骤中制备，0. 25g，0. 63mmol)于CH2Cl2中的溶液用PyBroP(0. 44g，
0.94mmol)和4-氰基-1-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-IH-咪唑-2-甲酸钾盐(如实 例3的步骤(d)中制备，0. 21g，0. 69mmol)处理。将所得浆液冷却至0°C并用DIEA (0. 33mL,
1.88mmol)进行处理。移除冰浴，将混合物在室温下搅拌18小时。将反应混合物用CH2Cl2 稀释，用饱和NaHCO3水溶液洗涤。将有机层用MgSO4干燥并进行真空浓缩。进行硅胶色谱 (25-45% EtOAc的己烷溶液，然后为100% EtOAc)，得到呈白色固体的标题化合物(399mg， 98% )。LC-MS (ESI, m/z) =C34H48N6O5Si 的计算值649. 4(M+H)，实测值649. 9。 h) 4-氰基-IH-咪唑-2-甲酸「4_ (1_乙酰基-哌啶_4_基)(1, 2, 5,6_四氢-吡 啶-3-基)-苯基1 -酰胺三氟乙酸盐 将5- (5- (1-乙酰基-哌啶-4-基)_2_ {[4_氰基(2_三甲基硅烷基-乙氧基 甲基)-IH-咪唑-2-羰基]-氨基}-苯基)-3，6- 二氢-2H-吡啶-1-甲酸叔丁酯(如前面 的步骤中制备,0. 40g，0. 61mmol)于 CH2Cl2 (20mL)和 Et0H(0.4mL)中的溶液用 TFA(3mL)处 理。将溶液在室温下搅拌0.5小时。真空蒸发溶剂，将残余物立即溶解于Et0H(25mL)中并 在5°C下保存11小时。真空浓缩该溶液，将残余物溶解于CH2Cl2 (20mL)和Et0H(0. 4mL)中， 然后用TFA (6mL)处理。在室温下搅拌反应2小时，然后真空蒸发溶剂。进行反相HPLC (C-18 柱)(10至80%乙腈的水(具有0. TFA)溶液，进行30分钟)，得到呈白色固体的标题 化合物(56.9mg，22% )。1H-NMR (CDCl3 ；400MHz) δ 8. 06 (s，1H)，7. 81 (d，1H，J = 8. 4Hz)， 7. 32 (d, 1H, J = 8. 4Hz)，7. 22 (s, 1H)，6. 10-6. 03 (m, 1H)，4. 74-4. 64(m，2H)，4. 11-4. 02 (m, 1H)，3. 95 (s，2H)，3. 50-3. 37 (m, 2H)，3. 29-3. 20 (m, 1H)，2. 93-2. 82 (m, 1H)，2. 80-2. 69 (m, 1H)，2· 62-2. 53(m，2H)，2· 16(s，3H)，1. 98-1. 84(m，2H)，1. 78-1. 54 (m, 2H)。LC-MS (ESI, m/ ζ) =C23H26N6O2 的计算值:419. 2 (Μ+Η)，实测值:419· 2。实例47(4-{4-Γ (4-氰基-IH-咪哔_2_羰基)_氨基1_3_环己烯基-苯基丨-哌 啶-1-基)-乙酸三氟乙酸盐 向烧瓶装入4-氰基-IH-咪唑-2-甲酸(2_环己烯基_4_哌啶_4_基-苯 基)_酰胺TFA盐(33mg，0. 067mmol)(如实例14的步骤(b)中制备)、溴乙酸叔丁酯(10 μ L, 0. 067mmol)、NEt3(20y L,0. 135mmol)和 0. 25mLDCM,并在 25 °C 下搅拌 10 小时。将反应 混合物上样至5g固相萃取柱(二氧化硅)上，用25% EtOAc/DCM洗脱出23mg(70% )的 (4- {4- [ (4-氰基-IH-咪唑-2-羰基)_氨基]-3-环己-1-烯基-苯基}-哌啶基)-乙 酸叔丁酯。将此化合物溶解于ImL DCM和20 μ L EtOH中，加入ImL TFA，在25°C搅拌反应3 小时。将标题化合物通过RP-HPLC(C18)纯化(用30-50% CH3CN于0. TFA/H20中的溶 a)「3- (4~{4~「(4_氰基_1Η_咪唑_2_羰基)-氨基1 环己烯基-苯基丨-哌 啶-1-某)-1，1- 二甲某-3-氧,代-丙某1 -氡某甲酸叔丁酯 向4-氰基-IH-咪唑-2-甲酸(2_环己烯基_4_哌啶_4_基-苯基)-酰胺三 氟乙酸盐(如实例14的步骤(b)中制备，40. Omg, 0. 0818mmol)、3-叔-丁氧羰基氨基-3-甲 基-丁酸(J. Med. Chem.，34 (2)，633-642，(1991)，21. 4mg, 0. 0981mmol)和 PyBroP (55. Omg, 0. 0981mmol)于二氯乙烷(2mL)中的混合物中加入DIEA(43 μ L，0. 25mmol)，并将所得混 合物在室温下于氩气下搅拌1天。将混合物用EtOAc (30mL)稀释，用H2O (2 X IOmL)、盐水 (IOmL)洗涤，用Na2SO4干燥，然后进行真空浓缩。将残余物通过快速色谱(硅胶，10-40% EtOAc/己烷)纯化，得到33. Omg(70% )呈无色油状的标题化合物。质谱(ESI，m/z) C32H42N6O4 的计算值575. 3 (M+H)，实测值574. 8。b)4~氰基-IH-咪唑-2-甲酸{4_「1-(3_氨基_3_甲基-丁酰基)-哌 啶-4-某1 -2-环己-1-烯某-苯某丨-酰胺三氟乙酸盐
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液洗脱 12 分钟)，得到 IOmg(40% )白色固体物质。1H-WRGOOMHziCD3OD) δ 8. 16(d，lH)， 8. 02 (s，1H)，7. 22 (dd, 1H)，7. 10 (d, 1H)，5. 72 (m, 1H)，4. 04. (s,2H)，3. 76 (m, 2H)，3. 22 (m, 2H)，2. 90 (m, 1H)，2. 29 (m, 4H)，2. 10 (m, 4H)，1. 82 (m, 4H)。质谱(ESI，m/z) C24H27N5O3 的计算 值434. 2(M+H)，实测值434. 2。实例484-氰基-IH-咪唑-2-甲酸{4-「1- (3-氨基甲基-丁酰基)-哌啶基1 环 己-1-烯基-苯基丨-酰胺三氟乙酸盐
108 向0°C下的[3-(4-{4-[(4-氰基-IH-咪唑-2-羰基)_氨基]-3-环己-1-烯基-苯 基}-哌啶-1-基)-1，1- 二甲基-3-氧代-丙基]-氨基甲酸叔丁酯(33. Omg, 0. 0574mmol) (如前面的步骤中制备)于3mL DCM和0. IOmL EtOH中的溶液中加入1. OmL TFA,将混合 物升温至室温并搅拌3小时。将反应混合物用3mL正丙醇稀释，然后进行真空浓缩。将残 余物通过快速色谱(硅胶，3-8% MeOH/DCM)纯化，得到33. 5mg(99% )呈白色固体的标题 化合物。1H-匪R(400MHz，CDCl3) δ 13. 3 (s, 1H), 9. 52 (s, 1H), 8. 57 (br s,3H) ,8. 26 (d, 1H, J = 8. 6Hz)，7. 69 (s，1H)，7. 02 (dd, 1H，J = 8. 6，1. 7Hz)，6. 98 (d, 1H, J=L 7Hz)，5. 78 (m, 1H)，4. 67 (br d, 1H, J = 13. 4Hz)，3. 88 (br d, 1H, J = 13. 4Hz)，3. 10 (m, 1H)，2. 55-2. 85 (m, 4H)，2. 23 (m，4H)，1. 72-2. 01 (m，8H)，1. 50 (s,6H)。质谱(ESI，m/z) =C27H34N6O2 的计算值: 475. 3 (M+H)，实测值475. 1。实例494Η-「1, 2,41 -三唑_3_甲酸(2_环己烯基哌啶基-苯基)-酰胺双三氟乙酸盐 a) 1-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-1H-[1，2,4]-三唑-3-甲酸甲酷 在0 °C向NaH(60 %分散体)(200mg，5. OOmmo 1)于DMF(5mL)中的悬浮液中滴加 1H-1，2，4-三唑甲酸甲酯(635mg，5. OOmmol)于DMF(5mL)中的溶液。将所得悬浮液在相同 温度下搅拌30分钟，并用SEMCl (0. 90mL, 5. Ommol)处理。将所得溶液在室温下搅拌30分 钟，并倾注于冰上。将产物用乙醚(3X20mL)萃取。将乙醚层合并，干燥(Na2SO4)并真空 向4-(3_环己-1-烯基-4-{[l-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-1Η-[1，2， 4]-三唑-3-羰基]-氨基}-苯基)-哌啶-1-甲酸叔丁酯(如前面的步骤中制备， 81. 9mg,0. 140mmol)于 DCM(0.4mL)和 Et0H(13yL)中的溶液中加入 TFA(0. 13mL)。将所 得溶液在室温下搅拌3小时并真空浓缩。将获得的残余物真空干燥1小时，将其悬浮于
浓缩。将获得的残余物在二氧化硅上进行色谱纯化(10% EtOAc/己烷)，得到标题化合物 (530mg,41% )。质谱(ESI, m/z) =C10H19N3O3Si 的计算值258. 1 (M+H)，实测值258. 2。b) 4- (3-环己-1-烯基-4- {Tl- (2~三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-IH-「1, 2,4-1三 ρ半-3-羰某ι -氡某ι -苯某)-哌啶-ι- ^murm
▽ O
AV、τ
Ν O向1-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-IH-[1，2，4]-三唑-3-甲酸甲酯(如前面 的步骤中制备，257mg，l. OOmmol)于Et0H(2mL)中的溶液中加入2N KOH(0. 5mL，lmmol)。将 所得溶液在室温下搅拌20分钟并进行真空浓缩。将残余物悬浮于乙醚(IOmL)中并超声处 理5分钟。然后真空去除乙醚，将所得残余物干燥4小时，得到1-(2-三甲基硅烷基-乙氧 基甲基)-IH-[1，2,4]-三唑-3-甲酸钾盐(273mg，97%),其无需任何进一步的纯化就直接 用于下一步骤。将1-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-IH-[1，2,4]-三唑_3_甲酸钾盐(如前面 制备，28mg, 0. IOmmol) ,DIEA (34 μ L, 0. 20mmol)、4_ (4-氨基-3-环己-1-烯基-苯基)-哌 啶-1-甲酸叔丁酯(如实例14的步骤(b)中制备，35. 6mg，0. 1 OOmmo 1)和PyBroP (69. 9mg， 0. 150mmol)于DCM(2mL)中的混合物在室温下搅拌12小时。将反应混合物用DCM(5mL)稀 释，用饱和NaHCO3水溶液(IOmL)和水(IOmL)洗涤。分离有机层、干燥(Na2SO4)并真空浓 缩。将产物在二氧化硅上进行色谱纯化(20-40% EtOAc/己烷)，得到标题化合物(31. 9mg, 55% )。质谱(ESI, m/z) =C31H47N5O4Si 的计算值481· 2 (M-B0C+2H)，实测值481. 2。c) 4Η-「1, 2,4-1 -三唑_3_甲酸(2_环己烯基哌啶基-苯基)-酰胺 双三氟乙酸盐
a) 5-氯-1- (2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)_1Η_「1, 2,41 -三唑_3_甲酸甲酯 在0°C下向NaH(60%分散体，53. 9mg, 1. 34mmol)于DMF(5mL)中的悬浮液中滴加 5-氯-1H-[1，2，4]_ 三唑-3-甲酸甲酯(Bull. Pharm. Sci.，20(1) :47_61，(1997)，218mg， 1. 35mmol)于DMF(IOmL)中的溶液。将所得悬浮液在相同温度下搅拌30分钟，然后用 SEMCl (0. 24mL，1. 4mmol)处理。将所得溶液在室温下搅拌30分钟并倾注于冰上。将混合物 用乙醚(3X20mL)萃取，将乙醚层合并、干燥(Na2SO4)并真空浓缩。将获得的残余物在二氧 化硅上进行色谱分离(10% EtOAc/己烷)，得到标题化合物(227mg，58% )。质谱(ESI，m/ ζ) =C10H18ClN3O3Si 的计算值292. 0 和 294. 0 (Μ+Η)，实测值291. 5 和 293. 6。b) 4- (4-丨「5-氯-1- (2~三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-IH-「1, 2,41 -三唑_3_搦 某1-氨某丨-3-环己-1-烯某-苯某)-哌啶-1-甲酸叔丁酯
乙醚(IOmL)中并超声处理5分钟。通过吸滤收集形成的固体，得到标题化合物(56mg， 68%)。1H-WR(CD3ODdOOMHz) δ 8. 53 (br s，1H)，8. 20 (d，1H，J = 8. 4Hz)，7. 21 (dd，1H，J =8. 4,2. 1Ηζ)，7. ll(d，lH，J = 2. 1Hz), 5. 83 (br s，1H)，3. 45 (m，2H)，3. 19 (m，2H)，2. 98 (m， lH)，2.28(m，4H)，2. 14(m，2H)，和 1.95-1.75(m，6H)。质谱(ESI，m/z) :C2tlH25N5O 的计算值: 352. 4 (Μ+Η)，实测值352. 2。实例505-氯-4Η_「1, 2,41 -三唑_3_甲酸(2_环己烯基哌啶基-苯基-酰 胺三氟乙酸盐
111 向4-(4-{[5-氯-1-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-IH-[1，2，4]-三唑-3-羰 基]-氨基}-3_环己-1-烯基-苯基)_哌啶-1-甲酸叔丁酯(如前面的步骤中制备， 63. 3mg，0. 102mmol)于 DCM (0. 5mL)和 EtOH (11 μ L)中的溶液中加入 TFA (0. ImL)。将所得混 合物在室温下搅拌12小时后，再加入0. lmLTFA。将反应混合物在室温下再搅拌5小时，蒸 发溶剂，将标题化合物通过RP-HPLC (C18)纯化(用20-70% CH3CN于0. TFA/H20中的溶
向4-(4-{[5_氯-l-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-1Η-[1，2，4]三唑_3_甲 酸甲酯(如前面的步骤中制备，227mg，0. 780mmol)于Et0H(2mL)中的溶液中加入2N K0H(0.4mL，0.8mmol)。将所得溶液在室温下搅拌20分钟并真空浓缩。将获得的残余物悬 浮于乙醚(IOmL)中，超声处理5分钟。然后除去乙醚，将所得残余物真空干燥4小时，得到 4- (4- {[5-氯-1-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-IH-[1，2,4]三唑-3-甲酸钾盐(223mg, 91% )，其无需任何进一步纯化就直接用于下一步骤。将4-(4-{[5-氯-1-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-IH-[1，2，4]-三唑-3-甲 酸钾盐(如上制备，35mg，0. I(Mimol)、DIEA (34 μ L，0. lOmmol)、4_(4_ 氨基-3-环己-1-烯 基-苯基)-哌啶-1-甲酸叔丁酯(如实例14的步骤(b)中制备，35.6mg，0. IOOmmol)和 PyBroP(69. 9mg,0. 150mmol)于DCM(2mL)中的混合物在室温下搅拌12小时。将反应混合 物用DCM(5mL)稀释，用饱和NaHCO3水溶液(IOmL)和水(IOmL)洗涤。分离有机层、干燥 (Na2SO4)并真空浓缩。将产物在二氧化硅上进行色谱纯化(20-40% EtOAc/己烷)，得到标 题化合物(52mg，85% )。1H-NMR(CDCl3 ；400MHz) δ 9. 60 (s, 1H)，8· 29 (d, 1H, J = 8. 4Hz)， 7. 18(dd，lH，J = 8. 4,2. 2Hz), 7. 13 (d, 1H, J = 2. 2Hz), 5. 99(s,2H) ,5. 84 (br s，1H)， 4. 18-4. 25 (m, 2H)，3. 72-3. 76 (m, 2H)，2. 58-2. 67 (m, 2H)，2. 51-2. 64 (m, 1H)，2. 18-2. 33 (m, 4H)，1. 78-1. 92 (m, 6H)，1. 55-1. 65 (m, 2H)，1. 49 (s,9H)，0. 93-0. 98 (m, 2H)，0. 10 (s,9H)。c) 5-氯-IH-「1，2，4-1-三哔_3_甲酸(2_环己烯基_4_哌啶-4-基-苯 基)_酰胺三氟乙酸盐 a)_顺式/反式2,6- 二甲某_4_氧代-哌啶甲酸叔丁酯 将顺式/ 反式-2，6- 二甲基哌啶酮(Coll. Czech. Chem. Commun. 31 (11)， 4432-41, (1966), 1. 27g, 10. Ommol)于乙醚(IOOmL)中的溶液用 INNaOH 水溶液(llmL， llmmol)和(BOC)20(2. 18g，10. Ommol)处理。将所得混合物在室温下搅拌48小时。将乙 醚层分离、干燥并浓缩。将残余物在二氧化硅上进行色谱纯化(10%Et0Ac-己烷)，得到标 题化合物(1. IOg, 50% ) =LC-MS (ESI, m/z) =C12H21NO3 的计算值=128. 1 (M-B0C+2H)，实测值 128.1。b) 4-(4-氨基-苯基)-顺式/反式2,6- 二甲基-哌啶甲酸叔丁酯 将顺式/反式N-Boc-2，6- 二甲基哌啶酮(如前面的步骤中制备，1. 14g， 5. OOmmol)于THF(20mL)中的溶液冷却至_78°C，并在氩气下用LDA(于环己烷、THF和乙苯 中的1. 5M溶液，4. 4mL，6. 5mmol)进行处理。将所得混合物在相同温度下搅拌30分钟，用N-苯基三氟甲磺酰亚胺(2. 34g，
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液洗脱 20 分钟)，得到标题化合物(30mg,58% )。1H-WR(CD3C)D ；400MHz) δ 8. 14 (d，1H，J =8. 4Hz)，7. 20 (dd, 1H, J = 8. 4，2. 1Hz)，7. 13 (d, 1H, J = 2. 1Hz)，5. 82 (br s，1H)，3. 45 (m, 2H)，3· 19(m，2H)，2· 98 (m, 1Η)，2· 28(m，4H)，2· 14(m，2H)，和 1. 95-1. 75(m，6H)。质谱(ESI, m/z) =C20H24ClN5O 的计算值386. 1 和 388. 1 (M+H)，实测值386. 2 和 388. 1。
实例 515-氰棊_-IH-咪P半-2-甲酸「2-环己-1-烯基I-(顺式-2,6-，二甲基-哌啶-4-棊)_-苯棊1-酰胺双三三氟,乙_盐，禾口
5-氰棊--IH-咪唑-2-甲酸「2-环己-1-烯基反式-2,6-，二甲某-哌
啶-4-基)-苯基1 -酰胺双三氟乙酸盐
6. 55mmol)于THF(20mL)中的溶液处理。将反应混合物再搅拌30分钟并让其升温至室 温。在室温下30分钟后，将反应混合物真空浓缩，将残余物溶解于乙醚(20mL)中并用冷水 (2X IOmL)洗涤。将乙醚层干燥(Na2SO4)和浓缩，得到顺式/反式_2，6-二甲基-4-三氟 甲磺酰氧基-3，6-二氢-2H-吡啶-1-甲酸叔丁酯(890mg，49% )，其可直接用于下一步骤。随后根据实例35步骤(b)的Suzuki偶联方法，用4_氨基苯基硼酸(219mg， 1. OOmmol)和顺式/反式_2，6- 二甲基-4-三氟甲磺酰氧基-3,6- 二氢-2H-吡啶-1-甲 酸叔丁酯(如上制备，321mg，l. OOmmol)制备本标题化合物。进行硅胶色谱纯化(10_20% EtOAc/己烷)，得到4- (4-氨基-苯基)-2，6- 二甲基-3，6- 二氢-2H-吡啶-1-甲酸叔丁 酯(172mg,57% )质谱(ESI，m/z) =C18H26N2O2 的计算值:303. 2 (M+H)，实测值303. 1。将4-(4-氨基-苯基)-2，6-二甲基-3，6-二氢-2H-吡啶-1-甲酸叔丁酯(如上 制备，380mg，1. 25mmol)于 MeOH(IOmL)中的溶液于 20psi 下在 10% Pd/C(190mg)上氢化 1 小时。将溶液通过Celite垫过滤并浓缩，得到标题化合物(360mg，94%)。质谱(ESI，m/ z) =C18H28N2O2 的计算值305. 2 (Μ+Η)，实测值305. 6。c) 4-(4-氨基-3-环己-1-烯基-苯基)_顺式/反式2,6_ 二甲基-哌啶甲 酸叔丁酯 向4-(4-氨基-苯基)-2，6- 二甲基-哌啶甲酸叔丁酯(如前面的步骤中制 备，334mg，1. 09mmol)于DCM(IOmL)中的溶液中加入NBS(195mg, 1. 09mmol)，并将反应混合 物在室温下搅拌12小时。将反应混合物用DCM(IOmL)稀释，用饱和NaHCO3水溶液(IOmL) 和水(IOmL)洗涤。分离有机层、干燥(Na2SO4)并真空浓缩，得到4-(4-氨基-3-溴-苯 基)-顺式/反式-2，6_ 二甲基-哌啶-1-甲酸叔丁酯(367mg，87%)。质谱(ESI，m/z) C18H27BrN2O2 的计算值327. 0 和 329. 0 (M-t-Bu+H)，实测值327. 0 和 328. 9。然后根据实例12步骤(d)的Suzuki偶联方法，用环己-1-烯基硼酸(157mg， 1. 25mmol)和4-(4-氨基-3-溴-苯基)-2，6-二甲基-哌啶-1-甲酸叔丁酯(如上制备， 382mg, 1. OOmmol)制备标题化合物，将其在二氧化硅上进行色谱纯化(20% EtOAc/己烷)， 得到254mg(66 % )化合物。质谱(ESI, m/z) =C24H36N2O2的计算值:384· 2_)，实测值 385. 1。d) 4- (4- {Γ4-氰基-1- (2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-IH-咪唑_2_羰基1 -氨 某1 -3-环F1 -1-烯某-苯某)-顺式-2，6- 二甲某-_定-1-甲酸叔丁酯和4- (4- {「4- M 基-1- (2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-IH-咪唑-2-羰基1 -氨基丨-3-环己-1-烯基-苯 某)-反式-2，6- 二甲某-哌啶-1-甲酸叔丁酯 将4-氰基-1- (2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-IH-咪唑_2_甲酸钾盐(如实例3 的步骤(d)中制备，384mg, 1. OOmmo 1) ,DIEA (0. 34 μ L, 2. Ommo 1)、4_ (4-氨基-3-环己-1-烯 基-苯基)-2，6- 二甲基-哌啶-1-甲酸叔丁酯(如前面的步骤中制备，384mg，1. OOmmol) 禾口 PyBroP (699mg，l. 50mmol)于DCM(20mL)中的混合物在室温下搅拌12小时。将反应混合 物用DCM(IOmL)稀释，用饱和NaHCO3水溶液(IOmL)和水(IOmL)洗涤。分离有机层、干燥 (Na2SO4)并真空浓缩，得到上面两种标题化合物的混合物(321mg，50.7%)。将该混合物在 二氧化硅上进行色谱纯化(10-20% EtOAc/己烷)，得到各标题化合物。4-(4-{[4-氰基-l-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)_1Η_咪唑_2_羰基]-氨 基}-3_环己-1-烯基-苯基)-反式-2，6-二甲基-哌啶-1-甲酸叔丁酯(31mg)。质谱 (ESI, m/z) =C35H51N5O4Si 的计算值634. 3 (M+H)，实测值634. 1。4-(4-{[4-氰基-l-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)_1Η_咪唑_2_羰基]-氨 基}-3_环己-1-烯基-苯基)-顺式-2，6-二甲基-哌啶-1-甲酸叔丁酯，带10% 4- (4- {[4-氰基-1- (2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-IH-咪唑-2-羰基]-氨基} _3_环 己-1-烯基-苯基)-反式-2，6-二甲基-哌啶-1-甲酸叔丁酯(290mg)杂质。质谱(ESI， m/z) =C35H51N5O4Si 的计算值634· 3 (M+H)，实测值634. 1。e) 5-氰基_1Η_咪哔_2_甲酸「2_环己烯基(顺式_2，6_ 二甲基-哌 啶-4-基)_苯基1-酰胺双三氟乙酸盐和5-氰基-IH-咪哔-2-甲酸「2-环己-1-烯 基-4-(反式-2，6- 二甲基-哌啶-4-基)-苯基1 -酰胺双三氟乙酸盐 本标题化合物是按照实例14步骤(b)中的方法，用290mg (0. 457mmol)的 4- (4- {[4-氰基-1- (2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-IH-咪唑-2-羰基]-氨基} _3_环 己-1-烯基-苯基)-顺式-2，6- 二甲基-哌啶-1-甲酸叔丁酯和31mg(0. 048mmol)的31 二氧龙环-4-羰某)-哌啶-4-某1 _苯某丨_酰胺
酰基)-哌啶-4-基1-苯基丨-酰胺
a) 5-氰基-IH-咪唑 _2_ 甲酸{2_ 环己 烯基 「1_ (R) - (+) 2, 2_
向(R)-(+)-2，2_ 二甲基-1，3- 二 氧戊环-4-甲酸甲酯(0. 16mL, 1. Ommo 1)于 MeOH(2mL)中的溶液中加入2N KOH(0. 5mL，lmmol)。将所得溶液在室温下搅拌20分钟并真
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甲基-「1,
4- (4- {[4-氰基-1- (2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-IH-咪唑-2-羰基]-氨基} _3_环 己-1-烯基-苯基)-反式-2，6- 二甲基-哌啶-1-甲酸叔丁酯制备而得。5-氰基-IH-咪唑-2-甲酸[2_环己烯基_4_(顺式_2，6_ 二甲基-哌 唆-4-基)_ 苯基]-酰胺双三氟乙酸盐(93mg,32% ) =1H-WR(CD3ODdOOMHz) δ 8. 17 (d, 1H, J = 8. 4Hz) ,8. 03 (s, 1H), 7. 22 (d, 1H, J = 8·4Ηζ)，7· 11 (s，1Η)，5· 72 (br s，1H)， 3. 87 (m, 1H)，3. 78 (m, 1H)，3. 45 (m, 1H)，3. 23 (m, 1H)，3. 07 (m, 1H)，2. 22 (m, 4H)，2. 19 (m, 2H)，1. 75-1. 92(m，4H)，1. 56 (m, 3H)，1. 37(m，6H)。质谱，ESI，m/z) =C24H29N5O 的计算值: 404. 2 (M+H)，实测值404. 2。5-氰基-IH-咪唑-2-甲酸[2-环己烯基_4_ (反式_2，6- 二甲基-哌 啶-4-基)-苯基]-酰胺双三氟乙酸盐(17. 3mg，56%) ο 1H-NMR(CDCl3 ；400MHz) δ 13. 9 (br s，1H)，10. 3 (br s, 1H)，9. 98 (s, 1H)，8. 41 (d, 1H, J = 8. 4Hz)，7. 75 (br s，1H)，7. 26 (dd, 1H, J =8. 4，2. OHz)，7. 15 (d, 1H, J = 2Hz)，5. 92 (brs, 1H)，4. 12 (m, 1H)，3. 59 (m, 1H)，3. 1-3. 3 (m, 4H)，2. 25-2. 42 (m, 6H)，2. 05-1. 78 (m, 6H)，1. 62 (d, 3H, J = 7. IHz)，1. 43 (d, 3H, J = 6. 3Hz)。 质谱(ESI，m/z) =C24H29N5O 的计算值404. 2 (M+H)，实测值404. 2。实例525-氰某-IH-咪唑-2-甲酸{2-环己 烯基-4_「1_ (R) - (+) - (2, 3_ 二羟基-丙空浓缩。将获得的残余物悬浮于乙醚(IOmL)中并超声处理5分钟。然后除去乙醚，将所得 残余物真空干燥4小时，得到(R)-(+)-2，2-二甲基-1，3-二氧戊环-4-甲酸钾盐(173mg， 94% )，其无需纯化就直接用于下一步骤。向4-氰基-IH-咪唑-2-甲酸(2-环己烯基_4_哌啶_4_基-苯基)_酰胺 三氟乙酸盐(如实例14的步骤(b)中制备，40mg，0. 08mmol)于DCM(1.5mL)中的溶液中 加入(R)-(+)-2，2-二甲基-1，3-二氧戊环-4-甲酸钾盐(如上制备，18mg，0. 090mmol)、 EDCI (18. 8mg，0. 0900mmol)、HOBt (13. 2mg，0. 0900mmol)和 DIEA(42y L，0. 24mmol)的混合 物。将所得混合物在室温下搅拌6小时。加入水(IOmL)，将DCM层分离、干燥(Na2SO4)并浓 缩。将获得的残余物在二氧化硅上进行色谱纯化(2%Me0H/DCM)，得到标题化合物(47mg， 97% ) ο 质谱(ESI，m/z) =C28H33N5O4 的计算值504. 2 (M+H)，实测值503. 9。b) 5-氰某-IH-咪唑-2-甲酸{2-环己 烯基 「1_(R) -(+) ~(2,3~ 二羟基-丙 酰基)-哌啶-4-基1-苯基丨-酰胺 向 5-氰基-IH-咪唑-2-甲酸{2-环己-1-烯基-4-[l_(R)-(2，2-二甲基 _[1，3] 二氧戊环-4-羰基)-哌啶-4-基]-苯基}-酰胺(如前面的步骤中制备，45mg，0. 090mmol) 于MeOH(ImL)中的溶液中加入2NHC1水溶液(2mL)。将所得混合物在室温下搅拌12小时。 真空去除溶剂，并将所得残余物干燥4小时。加入乙醚(IOmL)并超声处理5分钟。真空去 除乙醚，将残余物干燥12小时，得到标题化合物(21.3mg,52% )0 1H-WR(DMSOdOOMHz) δ 14. 1 (br s, 1H)，9. 85 (s, 1H)，8. 32 (s, 1H)，7. 92 (d, 1H, J = 8. 4Hz)，7. 18 (dd, 1H, J = 8. 4，2. IHz)，7. 13 (d, 1H, J = 2. IHz)，5. 72 (br s, 1H) ,4. 51 (m, 1H)，4. 33 (m, 1H)，4. 15 (m, 1H)，3. 55 (m, 1H)，3. 43 (m, 1H)，3. 08 (m, 1H)，2. 81 (m, 1H)，2. 63 (m, 1H)，2. 12-2. 24 (m, 4H)， 1. 31-1. 38 (m，10H)。质谱(ESI，m/z) =C25H29N5O4 的计算值464. 2 (M+H)，实测值464. 1。实例535-氰基-IH-咪唑-2-甲酸「2-环己烯基_4-(1_甲氧基-哌啶基)-苯 基1-酰胺三氟乙酸盐 a)4-(l~甲氧基-1,2,3,6-四氢-吡啶基)-苯胺 将N-甲氧基哌啶酮(J. Org. Chem.，26，1867，(1961), 650mg, 5. OOmmol)于 THF(20mL)中的溶液冷却至_78°C，在氩气下用LDA(于环己烷、THF和乙苯中的1. 5M溶液， 4. 3mL，6. 4mmol)进行处理。将所得混合物在相同温度下搅拌30分钟，并用N-苯基三氟 甲磺酰亚胺(2. 3g，6.4mmol)于THF(20mL)中的溶液处理。将反应混合物再搅拌30分钟 并让其升温至室温。在室温下30分钟后，将反应混合物真空浓缩，将获得的残余物溶解于 EtOAc (20mL)中并用冷水(2 X IOmL)洗涤。将EtOAc层干燥(Na2SO4)和浓缩，得到呈白色 泡沫的三氟甲磺酸1-甲氧基-1，2，3，6-四氢-吡啶-4-基酯(980mg，71%),其可直接用 于下一步骤。随后按照实例35步骤(b)的Suzuki偶联方法，用4_氨基苯基硼酸(219mg， 1. OOmmol)和三氟甲磺酸1_甲氧基_1，2，3，6_四氢-吡啶_4_基酯(如上制备， 261mg, 1. OOmmol)制备本标题化合物。进行硅胶色谱纯化(20-50% EtOAc/己烷)，得到 60mg(29% )化合物。质谱(ESI, m/z) =C12H16N2O 的计算值205. 1 (M+H)，实测值205. 2。b) 2-环己-1-烯基-4-(l-甲氧基-哌啶-4-基)-苯胺 将4-(1_甲氧基-1，2，3，6-四氢-吡啶_4_基)-苯胺(如前面的步骤中制备， 40. 8mg，0. 200mmol)于 MeOH(5mL)中的溶液于 20psi 下在 10% Pd/C(20. 4mg)上氢化 1 小 时。将溶液通过Celite垫过滤并浓缩，得到4-(1_甲氧基-哌啶-4-基)-苯胺(38mg， 92% )，其无需纯化就直接用于下一步骤。向4-(1-甲氧基-哌啶-4-基)-苯胺(如上制备，42mg，0. 20mmol)于DCM(2mL) 中的溶液中加入NBS (36. 2mg,0. 20mmol)，将该反应混合物在室温下搅拌12小时。将反应 混合物用DCM(IOmL)稀释，用饱和NaHCO3水溶液(IOmL)和水(IOmL)洗涤。分离有机层、 干燥(Na2SO4)并真空浓缩，得到2-溴-4- (1-甲氧基-1，2，3，6-四氢-吡啶-4-基)-苯胺 (43mg，74. 5% )，其无需纯化就用于下一步骤。随后按照实例12步骤(d)的Suzuki偶联方法，用环己-1-烯基硼酸(27. 9mg， 1. OOmmol)和2-溴-4- (1-甲氧基-1，2，3，6-四氢-吡啶_4_基)-苯胺(如上制备，44mg， 0. 15mmol)制备标题化合物，将其在二氧化硅上进行色谱纯化(20-50% EtOAc/己烷)，得 到2-环己-1-烯基-4-(1-甲氧基-哌啶-4-基)-苯胺(33mg，74% )。质谱(ESI，m/z) C18H26N2O 的计算值287. 2 (M+H)，实测值286. 8。
118
c) 4-氰基-1- (2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-IH-咪唑_2_甲酸「2_环己M 基-4- (i-甲氧基-哌啶-4-基)_苯基]_酰胺 向4-氰基-1- (2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-IH-咪唑_2_甲酸[2_环己烯 基-4-(1-甲氧基-哌啶-4-基)-苯基]-酰胺(如前面的步骤中制备，31mg，0. 020mmol)于 DCM(0. 5mL)和EtOH(11 μ L)中的溶液中加入TFA (0. ImL)。将所得溶液在室温下搅拌6小 时。将反应混合物真空浓缩，将所得残余物干燥1小时，悬浮于乙醚(IOmL)中并超声处理5 分钟。通过吸滤收集形成的固体，得到标题化合物(17. 3mg,58% )。1H-NMR(DMSC) ；400MHz) δ 9. 70 (s，1Η)，8. 30 (s, 1H)，7. 83 (d, 1H, J = 8. 4Hz)，7. 14 (d, 1H, J = 8. 4Hz)，7. 05 (s, 1H)， 5. 71 (br s, 1H)，3. 30-3. 55 (m, 5H)，2. 41-2. 62 (m, 2H)，2. 12-2. 19 (m, 4H)，1. 60-1. 85 (m, 8H)。质谱(ESI，m/z) =C23H27N5O2 的计算值406. 2 (M+H)，实测值406. 1。实例544-氰基-IH-咪唑-2-甲酸「6-(4,4_二甲基-环己-1-烯基)_1' ,2' ,3' ,4', 5'，6'-六氢-「2，4' 1联吡啶-5-某1-酰胺三氟乙酸盐 将4-氰基-l-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-1Η-咪唑-2-甲酸钾盐(如实 例 3 的步骤(d)中制备，35. 6mg，0. IOOmmol)、DIEA (0. 34 μ L，0. 20mmol)、2_ 环己-1-烯 基-4-(l-甲氧基-哌啶-4-基)-苯胺(如前面的步骤中制备，28.6mg，0. Immo 1)和 PyBroP(69. 9mg,0. 150mmol)于DCM(2mL)中的混合物在室温下搅拌12小时。将反应混合 物用DCM(IOmL)稀释，用饱和NaHCO3水溶液(IOmL)和水(IOmL)洗涤。分离有机层、干燥 (Na2SO4)并真空浓缩。将产物在二氧化硅上进行色谱纯化(20-40% EtOAc/己烷)，得到标题 化合物(26mg,48% )。质谱(ESI，m/z) =C29H41N5O3Si 的计算值536. 3 (M+H)，实测值536. 2。d) 5-氰基-IH-咪唑-2-甲酸「2_环己烯基(1_甲氧基-哌啶基)-苯 基1-酰胺三氟乙酸盐 a)5_ 硝某-3'，6' -二氢 H_「2，4' 1 联吡啶 -甲酸叔丁酯 将202mg (0. 994mmol) 2_溴_5_硝基吡啶于4mL甲苯和2mL EtOH中的溶液用 338mg(l. 09mmol)4-三氟甲磺酰氧基-3,6- 二氢-2H-吡啶-1-甲酸叔丁酯(Synthesis, 993，(1991))和1.49mL(2. 981mmol)2M Na2CO3水溶液处理。将混合物通过超声脱气，置 于氩气下，用80. 3mg(0. 00700mmol)Pd(PPh3)4处理，并加热至80°C保持4小时。将混合 物用EtOAc稀释并用水洗涤。将有机层用MgSO4干燥并进行真空浓缩。将所得残余物 在50-g Varian MegaBond Elut 二氧化硅柱上，用10-25 % EtOAc-己烷进行色谱纯化， 得到226mg(75% )呈浅黄色固体的标题化合物质谱(ESI，m/z) =C15H19N3O4的计算值 306. 1(M+H)，实测值305. 7。b)5_ 氨某-3' ,4' ,5' ,6'-四氢 H_「2，4' 1 联吡啶 -甲酸叔丁酯 在室温下，将226mg(0. 740mmol)5-硝基-3'，6' -二氢 _2 ‘ H_[2，4']联批 啶-1'-甲酸叔丁酯(如前面的步骤中制备)于15mL MeOH中的溶液用IlOmglO% Pd/ C (Degussa E101-NE/W型，Aldrich, 50重量％的水)和1大气压H2处理18小时。将混合 物通过Celite过滤，将滤饼用MeOH洗涤。浓缩得到220mg(107% )呈无色玻璃状固体的标 题化合物。质谱(ESI，m/z) =C15H23N3O2 的计算值278. 2 (M+H)，实测值278. 0。c)5_氨基-6-溴-3' ,4' ,5' ,6'-四氢 H-「2,4' 1 联吡啶 -甲酸叔 丁酯 在室温下，将220mg(0.793mmol)5-氨基-3'，4'，5'，6'-四氢-2' H-[2, 4']联吡啶-1'-甲酸叔丁酯(如前面的步骤中制备)于IOmL CH2Cl2中的溶液用 134mg(0. 753mmol)N-溴琥珀酰亚胺处理20分钟。将混合物用CH2Cl2稀释，用饱和NaHCO3 水溶液洗涤。将有机层用MgSO4干燥并进行真空浓缩。在50-g Varian MegaBond Elut 二 氧化硅柱上用10-35% EtOAc-己烷对残余物进行色谱纯化，得到209mg(74% )呈无色玻 璃状固体的标题化合物。1H-NMR(CDCl3 ；400MHz) δ 6. 97 (d, 1H, J = 8. OHz) ,6. 91 (d, 1H, J =8. 0Hz)，4. 28-4. 15 (br s，2H)，4. 06-3. 90 (m, 2H)，2. 85-2. 75 (m, 2H)，2. 77-2. 68 (m, 1H)， 1. 92-1. 83 (m, 2H)，1. 68-1. 54 (m, 2H)，1. 47 (s,9H)。d) 5-氨基-6-(4,4-二甲基-环己-1-烯基)-3' ,4' ,5' ,6'-四氢 H-「2, 4' 1联吡啶-1'-甲酸叔丁酯 将209mg(0. 587mmol)5-氨基-6-溴-3'，4'，5'，6'-四氢-2' H_[2，4'] 联吡啶-Γ -甲酸叔丁酯(如前面的步骤中制备)于5mL甲苯和2. 5mL EtOH中的溶液 用 99. 3mg (0. 645mmol)4,4- 二环己-1-烯基硼酸和 2. 34mL (4. 69mmol)2M Na2CO3 水溶液处 理。将混合物通过超声脱气，置于氩气下，用47. 4mg (0. 0410mmol) Pd (PPh3) 4处理，并加热至 80°C16小时。将混合物用EtOAc稀释并用水洗涤。将水层用另外的EtOAc萃取，将合并的 有机层用MgSO4干燥并真空浓缩。在50-g Varian MegaBond Elut 二氧化硅柱上用25% EtOAc-己烷对残余物进行色谱纯化，得到150mg(66% )呈白色泡沫状固体的标题化合物。 质谱(ESI，m/z) =C23H35N3O2 的计算值386. 3 (M+H)，实测值386. 3。e) 5-丨「4_氰基-1-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-IH-咪唑-2-羰基1 -氨 基}-6-(4,4_ 二甲基-环己-1-烯基)-3' ,4' ,5' ,6'-四氢-2' H_「2,4' 1 联吡 啶-1'-甲酸叔丁酯 在室温下，将215mg(0. 339mmol) 5-{[4-氰基-1_(2_三甲基硅烷基-乙氧基甲 基)-1Η-咪唑-2-羰基]-氨基}-6-(4，4_ 二甲基-环己-1-烯基)-3'，4'，5'，6'-四 氢-2' H-[2，4']联吡啶-Γ -甲酸叔丁酯(如前面的步骤中制备)于IOmLCH2Cl2 中的溶液用三滴MeOH和3mL TFA处理4小时。加入MeOH(IOmL)并真空蒸发溶剂。在 50-g Varian MegaBond Elut 二氧化硅柱上用10 % MeOH-CH2Cl2对残余物进行色谱纯化， 得到 2IOmg(97% )呈白色固体的标题化合物。1H-NMR(CD3C)D ；400MHz) δ8. 59(d，lH，J =8. 4Hz)，8. 04 (s，1H)，7. 28 (d, 1H, J = 8. 4Hz)，6. 02-5. 93 (m, 1H)，3. 58-3. 48 (m, 2H)， 3.32-3.03(m，3H)，2.54-2.42(m，2H)，2.23-2.02(m，6H)，l. ll(s，6H)。质谱(ESI, m/z) C23H28N6O 的计算值405. 2 (M+H)，实测值405. 2。实例554-氰基-IH-咪唑-2-甲酸「Γ -(2-二甲氨基-乙酰基)-6-(4,4-二甲基-环 P1-I-烯某)-1' ’ 2'，3'，4'，5'，6'-六氢-「2，4' 1联吡啶-5-某1-酰胺三氟乙酸 在室温下，将150mg(0. 389mmol)5-氨基-6-(4，4-二甲基-环己-1-烯基)-3'， 4'，5'，6'-四氢-2' H-[2，4']联吡啶-甲酸叔丁酯(如前面的步骤中制备) 于15mL CH2Cl2中的溶液用131mg (0. 428mmol) 4-氰基-1-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲 基)-IH-咪唑-2-甲酸钾盐(如实例3的步骤(b)中制备)、272mg(0. 584mmol)PyBroP和 203 μ L(l. 17mmol)DIEA处理3小时。将混合物用CH2Cl2稀释，用饱和NaHCO3水溶液洗涤。 将有机层用MgSO4干燥并进行真空浓缩。在50-g Varian MegaBond Elut 二氧化硅柱上用 50% EtOAc-己烷对残余物进行色谱纯化，得到215mg(87% )呈白色固体的标题化合物。质 谱(ESI, m/z) =C34H50N6O4Si 的计算值:635· 4_)，实测值635. 3。f)4_ 氰基-IH-咪唑-2-甲酸「6-(4,4_ 二甲基-环己-1-烯基)-Γ ,2' ,3', 4'，5'，6'-六氢-「2，4' 1联吡啶-5-某1-酰胺三氟乙酸盐 在室温下，将 70. 0mg(0. 135mmol)4-氰基-IH-咪唑-2-甲酸[6-(4，4-二甲 基-环己-1-烯基)-1'，2'，3'，4'，5'，6'-六氢-[2，4']联吡啶_5_基]-酰胺 (如实例54的步骤(f)中制备)于IOmL CH2Cl2中的溶液用32. 7mg(0. 162mmol)甲磺酸 2-甲磺酰基-乙酯(如实例40的步骤(a)中制备)和70. 5μ L(0. 405mmol)DIEA处理6 小时。将混合物用CH2Cl2稀释并用水洗涤。将有机层用MgSO4干燥并进行真空浓缩。将 残余物通过RP-HPLC (C18)纯化(用20-60% CH3CN于0. 1 % TFA/H20中的溶液洗脱30分 钟)，得到 48mg(85% )呈白色固体的标题化合物。1H-NMR(CD3C)D ；400MHz) δ 8. 65 (d, 1H， J = 8. 4Hz), 8. 05 (s, 1H), 7. 34 (d, 1Η, J = 8. 4Hz)，6. 05-5. 98 (m，1Η)，3. 85-3. 66 (m，6Η)， 在室温下，将20. 9mg(0. 203mmol)N, N- 二甲基甘氨酸于4mL CH2Cl2中的悬浮液用 49. 8mg(0. 197mmol)双(2-氧代-3-噁唑烷基)次磷酰氯(BOP-Cl)和 75 μ L(0. 54mmol) Et3N处理1小时。随后将混合物在室温下用70. Omg(0. 135mmol)4-氰基-IH-咪唑-2-甲 酸[6-(4，4_ 二甲基-环己-1-烯基)-1'，2'，3'，4'，5'，6'-六氢-[2，4']联 吡啶-5-基]-酰胺三氟乙酸盐(如实例54的步骤(f)中制备)处理18小时。将混 合物用CH2Cl2稀释并用水洗涤。将有机层用MgSO4干燥并进行真空浓缩。将残余物通 过RP-HPLC(C 18)纯化(用10-80 % CH3CN于0. 1 % TFA/H20中的溶液洗脱30分钟)，得 到 34. 9mg(53% )呈白色固体的标题化合物。1H-NMR(CD3C)D ；400MHz) δ 8. 38 (d, 1H, J = 8. 4Hz)，8. 05 (s，1H)，7. 33 (d, 1H, J = 8. 4Hz)，6. 05-5. 98 (m, 1H)，4. 68 (d, 1H, J = 15. 2Hz)， 3. 82 (d, 1H, J = 15. 2Hz)，3. 16-3. 05 (m, 1H)，3. 01-2. 94 (m, 6H)，2. 52-2. 40 (m, 2H)，2. 39 (s, 6H), 2. 17-2. 10 (m, 2H), 2. 09-1. 87 (m, 2H)，1. 67-1. 59 (m, 2H)，1. 12(s，6H)。质谱(ESI，m/z) C27H35N7O2 的计算值490. 3 (M+H)，实测值490. 4。实例564-氰基-IH-咪唑-2-甲酸「6-(4,4_ 二甲基-环己烯基)-Γ ~(2~甲磺酰 某-乙某)-1' ’ 2’，3' ,4' ,5' ,6'-六氢_「2，4' 1联吡啶-5-某酰胺三氟乙酸盐
1233. 29-3. 21 (m, 2H)，3. 20-3. 01 (m, 1H)，3. 14 (s,3H)，2. 53-2. 45 (m, 2H)，2. 30-2. 15 (m, 4H)， 2. 15-2. 10(m，2H)，1. 62(t，2H，J = 6. 4Hz)，1. ll(s，6H)。质谱(ESI, m/z) =C26H34N6O3S 的计 算值511. 2(M+H)，实测值511. 3。实例575-氰基-IH-咪唑-2-甲酸{4_「(2_氨基甲基-丙酰基)-哌啶基1 环 己-1-烯基-苯基丨-酰胺三氟乙酸盐 a) {2-Γ4-(4_丨「4_氰基(2_三甲基硅烷基-乙氧基甲基)_1Η_咪唑_2_羰 基1 -氨基丨-3-环己-1-烯基-苯基)-哌啶-1-基1 -1,1- 二甲基-2-氧代-乙基丨-氨 基甲酸叔丁酯 向4- (4- {[4-氰基-1- (2_三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-IH-咪唑_2_羰基]-氨 基} -3-环己-1-烯基-苯基)-哌啶-1-甲酸叔丁酯(231mg, 0. 380mmol)(如实例14的步 骤(a)中制备)于2. 5mL DCM和0. 4mL EtOH中的溶液中加入700 μ L TFA,并将所得溶液在 25°C下搅拌3小时。将反应混合物用4mL EtOH稀释，然后浓缩得到5-氰基-1-(2-三甲基 硅烷基_乙氧基甲基)-IH-咪唑-2-甲酸(2-环己-1-烯基-4-哌啶-4-基-苯基)-酰胺 三氟乙酸盐与原料的大约2 1混合物(通过1H-NMR和LC/MS测得)，其无需进一步纯化 就用于下一步骤。将该混合物溶于3mL DCM中加入到2-叔丁氧基羰基氨基-2-甲基-丙酸 (53mg, 0. 70mmol)、DIEA (122 μ L, 0. 700mmol)和 PyBroP (144mg, 0. 300mmol)于 3mL DCM 中的 溶液中，在25°C下搅拌反应过夜。将反应混合物用EtOAc (25mL)稀释，用饱和NaHCO3水溶液 (lX25mL)和盐水(25mL)洗涤，并将有机层用Na2SO4干燥然后浓缩。通过制备型TLC(50% EtOAc-己烷)纯化残余物，得到40mg(15% )呈白色固体的标题化合物。质谱(ESI，m/z) C37H55N6O5Si 的计算值691· 3(M+H)，实测值691. 1。b)5~氰基-IH-咪唑-2-甲酸{4_「1-(2_氨基_2_甲基-丙酰基)-哌 啶-4-某1 -2-环己-1-烯某-苯某丨-酰胺三氟乙酸盐
向{2-[4-(4-{[4_氰基-l-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-1Η-咪唑-2-羰 基]-氨基}-3_环己-1-烯基-苯基)_哌啶-1-基]-1，1-二甲基-2-氧代-乙基}-氨 基甲酸叔丁酯(40mg，0. 050mmol)于2mL DCM和20 μ L EtOH中的溶液中加入1. 5mL TFA。 将溶液在25°C下搅拌3小时，用2mL EtOH稀释并真空浓缩。在乙醚中研磨残余物，得 IlJ 8. 4mg(29 % )呈白色固体的标题化合物。1H-WR(CD3ODdOOMHz) 5 8. 10(d, 1H, J = 8. 4Hz)，8. 00 (s，1H)，7. 16 (d, 1H, J = 8. 4Hz)，7. 07 (s, 1H)，5. 79 (s, 1H)，4. 55-4. 48 (m, 1H)， 3. 30 (s，6H)，2. 89-2. 87 (m, 2H)，2. 40-2. 25 (m, 4H)，1. 96-1. 93 (m, 2H)，1. 86-1. 83 (m, 6H)， 1. 64-1. 61 (m，2H)。质谱(ESI, m/z) =C26H33N6O2 的计算值461. 2 (M+H)，实测值461. 3。实例585-氰基-IH-咪唑-2-甲酸「6-环己-1-烯基-1' _(2_甲磺酰基-乙基)‘, 2'，3'，4'，5'，6'-六氢-「2，4' 1 联吡啶-5-某 酰胺 向5-氨基-6-溴-3' ,4' ,5' ,6'-四氢 H-[2,4']联吡啶-1'-甲酸 叔丁酯(331mg，0. 93mmol)(如实例54的步骤(c)中制备)和环己烯-I-基硼酸(141mg， 1. llmmol)于 5mL EtOH、IOmL 甲苯和 5mL 2M Na2CO3 中的混合物中加入 Pd(PPh3)4(107mg， 0. 0930mmol)，并在80°C下加热16小时。将反应混合物用IOOmL乙醚和IOOmL盐水稀释， 分离各层。将有机层干燥(Na2SO4)并真空浓缩。通过柱色谱法(硅胶，30-60%乙醚-己 烷)纯化残余物，得到248mg(74%)呈浅褐色油状的标题化合物。LC-MS(ESI，m/z) C21H32N3O2 (M+H)的计算值358. 2，实测值358. 1。b) 5-丨「4_氰基-1-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-IH-咪唑-2-羰基1 -氨 某1-6-环己-1_烯某-3' ,4' ,5' ,6'-四氢-2' H_「2，4' 1联吡啶-1 ‘-甲酸叔丁 向4-氰基-1-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-IH-咪唑-2-甲酸钾盐(296mg，
0.970mmol)(如实例3的步骤(d)中制备)于8mL DCM中的溶液中加入DIEA(291 μ L，
1.72mmol)和 PyBroP (512mg，1. lOmmol)，在 25°C下搅拌反应 15 分钟。加入 5-氨基-6-环 己-1-烯基-3'，4'，5'，6'-四氢-2' H-[2，4']联吡啶 -甲酸叔丁酯(233mg， 0. 65mmol)(如前面的步骤中制备)于4mLDCM中的溶液，并在25°C下搅拌反应过夜。将反应 混合物用EtOAc (25mL)稀释，用NaHCO3 (1 X 25mL)和盐水(25mL)洗涤，并将有机层用Na2SO4 干燥然后浓缩。通过快速色谱法(硅胶，5% MeOH-CHCl3)纯化残余物，得到167mg(40% ) 呈白色固体的标题化合物。质谱(ESI，m/z) =C32H46N6O4Si的计算值:607· 3_)，实测值 607. 3。c) 5-氰基-IH-咪唑-2-甲酸(6-环己-1-烯基-1' ,2' ,3' ,4'，5' ,6'-六 M~f2,4' 1联吡啶-5-某)-酰胺三氟乙酸盐 本标题化合物是采用类似于实例14的步骤(b)的方法，从5-{[4-氰基-1-(2-三 甲基硅烷基-乙氧基甲基)-1Η-咪唑-2-羰基]-氨基}-6_环己-1-烯基-3' ,4'， 5'，6'-四氢-2' H-[2，4']联吡啶-Γ -甲酸叔丁酯(167mg，0. 27mmol)制备，得至IJ 57mg(43% )呈白色固体的标题化合物。LC-MS (ESI，m/z) =C21H24N6O 的计算值377. 2 (M+H)， 实测值377. 2。d) 5-氰基-IH-咪唑-2-甲酸「6-环己-1-烯基-1' _ (2_甲磺酰基-乙基)‘, 2'，3'，4'，5'，6'-六氢-「2，4' 1 联吡啶-5-某 酰胺向5-氰基-IH-咪唑-2-甲酸(6-环己-1-烯基-1'，2' ,3' ,4' ,5' ,6'-六 氢-[2，4']联吡啶-5-基)-酰胺三氟乙酸盐(57mg，0. llmmol)于5mL DCM中的浆液中 加入0记六(50.4“1^，0.290讓01)，然后加入30.511^(0. 150mmol)甲磺酸2-甲磺酰基-乙 酯(如实例40的步骤(a)中制备)。让反应搅拌过夜，用20mL DCM稀释，用饱和NaHCO3 水溶液(lX20mL)洗涤并用Na2SO4干燥。通过制备型TLC (硅胶，40 % EtOAc-己烷)纯 化，得到22. 3mg(40% )呈白色固体的标题化合物。1H-WR(DMSOdOOMHz) δ 10. 02 (s, 1H) ,8. 24 (s, 1H) ,8. ll(d，lH，J = 8. 4Hz)，7. 18 (d, 1H, J = 8. 4Hz)，5. 96 (s，1H)，3. 04 (s， 3H)，3· 02-2. 99(m，3H)，2· 73(t，2H，J = 2. 7Ηζ)，2· 39-2. 37 (m，2Η)，2. 11-2. 05(m，4H)，1. 85-1. 64 (m，10H)。质谱(ESI，m/z) =C24H31N6O3S 的计算值483· 2 (M+H)，实测值483. 3。实例59下面描述了用于合成实例3中所述中间体的替代方法。4-氰基-l-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-1Η-咪唑-2-甲酸钾盐 a) IH-咪唑土甲腈将配有机械搅拌器、温度传感器、冷凝器和带氮气入口的加料漏斗的22L四颈圆 底烧瓶装入 IH-咪唑-4-甲醛(Aldrich,l. IOkg, 11. 5mol)和吡啶(3. 0L, 3. Omol) 将反 应烧瓶用冰浴冷却至8°C，缓慢分批加入盐酸羟胺(871g，12.5mol)以保持内部温度低于 30°C。将反应物冷却至环境温度并在环境温度下搅拌2小时。将所得的粘稠的黄色溶液用 加热套加热至80°C，在200分钟里滴加乙酸酐(2. 04L, 21. 6mol)，以保持在加入期间温度低 于110°C。将反应混合物在100°C下加热30分钟，之后让其冷却至环境温度，然后在冰浴中 进一步冷却。通过以使得内部温度保持低于30°C的速率加入25wt% NaOH(5. 5L)，将pH调 节至8.0(pH计)。然后将反应混合物转移至22L分液漏斗并用乙酸乙酯(6. 0L)萃取。将 合并的有机层用盐水(2X4. 0L)洗涤，用MgSO4干燥，过滤，并在35°C下减压浓缩至干燥，得 到呈黄色半固体的粗产物。将所得半固体物质悬浮于甲苯(3. 0L)中并搅拌1小时，之后将 其过滤得到浅黄色固体，将其再悬浮于甲苯(3. 0L)中并搅拌1小时。将所得浆液过滤，将 滤饼用甲苯(2X500mL)洗涤，得到呈浅黄色固体的标题化合物(870g，82%)。1H和13C核 磁共振谱与确定的结构一致。b)l-(2_三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-1Η-咪唑-4-甲腈和3_(2_三甲基硅烷 基_乙氧基甲基)-3H-咪唑-4-甲腈
0988] 将配有机械搅拌器、温度传感器和带氮气入口的加料漏斗的22L四颈圆底烧瓶装 入IH-咪唑-4-甲腈(830g，8. 91mol，如前面的步骤中制备)、碳酸钾(2. 47kg，17. 8mol)和 丙酮(6.0L)。开始搅动并将混合物用冰浴冷却至10°C。通过加料漏斗在210分钟里加入 SEMCl (1. 50kg, 9. OOmol)，以保持内部温度低于15°C。随后让反应物升温至环境温度并在环 境温度下搅拌过夜(20小时)。然后将反应混合物在冰浴中冷却至10°C，通过在30分钟里 缓慢加入水(8. 0L)猝灭，以保持内部温度低于30°C。将所得混合物转移至22L分液漏斗， 用乙酸乙酯(2X7. 0L)萃取。将合并的有机相在35°C下减压浓缩，得到呈深棕色油状的粗 产物，将该粗产物通过硅胶柱(16. 5 X 20cm，2. 4kg硅胶)用2 1庚烷/乙酸乙酯(15L)作为洗脱液进行纯化。将含有产物的级分合并，在35°C下减压浓缩，得到呈浅褐色油状的 标题化合物的混合物[1785g，90%)。1H核磁共振谱与确定的结构一致，且表明存在比率为 64 36的区域异构体。c) 2-溴-1-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-IH-咪唑-4-甲腈 将配有机械搅拌器、温度传感器和带氮气入口的冷凝器的22L四颈圆底烧瓶装入 1-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-IH-咪唑-4-甲腈和3- (2-三甲基硅烷基-乙氧基甲 基)-3H-咪唑-4-甲腈(600g，2. 69mol，如前面的步骤中制备)和四氯化碳(1. 8L)的混合 物。开始搅动并将混合物加热至60°C。此时，将N-溴琥珀酰亚胺(502g，2.82mol)在30分 钟里分几批加入，这导致放热达到74°C。让反应冷却至60°C并在60°C下进一步搅拌1小 时。让反应缓慢冷却至环境温度，将所得浆液过滤并将滤液用饱和NaHCO3溶液(4. 0L)洗 涤。使有机相通过硅胶柱(8\15_，硅胶60(^)，用2 1的庚烷/乙酸乙酯(6. 0L)作为 洗脱液。将含有产物的级分(根据TLC分析)合并，减压浓缩得到晶状浅黄色固体，然后将 其滤出，用庚烷(500mL)洗涤，得到呈晶状白色固体的标题化合物[593g，73%)。1H和13C 核磁共振谱与确定的结构一致，且显示没有微量区域异构体的迹象。d)4_氰基-l-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-1Η-咪唑-2-甲酸乙酯 将配有机械搅拌器、温度传感器和带氮气入口的加料漏斗的12L四颈圆底烧瓶 装入2-溴-l-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-1Η-咪唑-4-甲腈(390g，1.29mol，如前 面的步骤中制备)和无水四氢呋喃(4.0L)。开始搅动，并用干冰/丙酮浴将反应混合物 冷却至_50°C。通过加料漏斗在30分钟里加入异丙基氯化镁(2. OM的THF溶液，760mL， 1. 52mol)，以保持内部温度低于-40°C。将反应物在_43°C下再搅拌30分钟，之后将其冷却 至-78V。通过加料漏斗在10分钟里加入氯甲酸乙酯(210mL，2. 20mol)，以保持内部温度 低于-60°C。在-70°C下再搅拌反应40分钟，到时间时移除干冰/丙酮浴，并让反应混合物 在1. 5小时里升温至环境温度。将反应混合物在冰浴中冷却至0°C，并通过以使得内部温 度保持低于10°C的速率缓慢加入饱和氯化铵溶液(1.8L)进行猝灭。将反应混合物转移至 12L分液漏斗，用乙酸乙酯(4. 0L)稀释，并分离各层。将有机层用盐水(2X2. 0L)洗涤，并 在35°C下减压浓缩得到褐色油状物。将粗油状物溶解于二氯甲烷(300mL)中，通过色谱法 (15 X 22cm，1.5kg硅胶，10 1至4 1的庚烷/乙酸乙酯)纯化，得到黄色油状物，将该 黄色油状物溶解于EtOAc (IOOmL)中，用庚烷(2. 0L)稀释并在冰箱中保存5小时。将所得 浆液过滤，得到呈晶状白色固体的标题化合物(141g，37%)。1H和13C核磁共振谱与确定的 结构一致。e)4_氰基-l-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-1Η-咪唑-2-甲酸钾盐
128 将配有机械搅拌器、温度传感器和带氮气入口的加料漏斗的5-L三颈圆底烧瓶装 入5[400g，1.35mol)和乙醇(4.0L)。开始搅动，并在所有固体都溶解后施加水浴。通过加 料漏斗在15分钟里加入6N KOH(214. OmL, 1. 29mol)溶液，以保持内部温度低于25°C，在室 温下搅拌反应5分钟。随后将溶液在20°C下减压浓缩至干燥，得到白色固体物质。将所得 固体物质悬浮于甲基叔丁基醚(MTBE，4.0L)中并搅拌30分钟，之后将所得浆液过滤，并将 滤饼用MTBE(1. 0L)洗涤，得到呈白色固体的标题化合物，将其在环境温度下进一步真空干 燥4天(366g，89%)。1H核磁共振、13C核磁共振和质谱与确定的结构一致。C11H16KN3O3Si的 计算值-.C A3. 25 ；H, 5. 28 ；N, 13. 76。实测值=C, 42. 77 ；H, 5. 15 ；N, 13. 37。卡尔-费休法测 得1· 3% H2O0实验材料和方法。本文图.IA中示出的实例38&，4-氰基4-[2-(1-环己烯-1-基)-4-[1-[(二甲氨 基)乙酰基]-4-哌啶基]苯基]-IH-咪唑-2-甲酰胺一盐酸盐(本文中称为“JNJ-141”) 是如本文所述制备。激酶测定。如Schalk-Hihi C 等人，J Biol Chem 2007 ;208 :40854093 中所述，从杆状病毒系 统表达和纯化 CSF-IR (CSF-1R 538-972)和 CSF-1R 样酪氨酸激酶 3 (FLT3 [FLT3 571-993]) 的完整胞质区(涵括酪氨酸激酶结构域)。干细胞因子受体酪氨酸激酶(KIT)购自 ProQinase (德国汉堡)。AXL 受体酪氨酸激酶(AXL)购自 Upstate (Lake Placid, NY)。神 经营养蛋白受体酪氨酸激酶 A(TRKA)购自 Invitrogen (Carlsbad，CA)。CSF-IR 555-568 肽(SYEGNSYTFIDPTQ)由 AnaSpec (San Jose, CA)合成和纯化。CSF-1R 用测量 CSF-1R 555-568肽在Y561处的CSF-IR磷酸化的荧光偏振竞争性免疫测定法进行测定。反应混 合物(IOyL)含有 IOOmM HEPES pH7.5、lmM DTT、0. 01 % 吐温-20 (ν/ν)、2% DMS0、308 μ M CSF-IR 555-568 肽、ImM ATP、5mM MgCl2 和 0. 7nM CSF-IR0 反应用 ATP 引发，在室温下温育 80分钟，通过添加5. 4mM EDTA猝灭。将10 μ L荧光偏振缓冲液/示踪物/磷酸-Y抗体混 合物(酪氨酸激酶检测试剂盒，Green Ρ2837, Invitrogen,Madison WI)加入到该经猝灭的 反应物中，在 30 分钟后用 Analyst reader (Molecular Devices)在 485/530nm 的激发 / 发 射下测量荧光偏振。如对CSF-IR所述，用荧光偏振竞争法测定FLT3、KIT、TRKA和AXL，不 同的是使用聚Glu4Tyr (Sigma，St Louis, MO)作为通用底物。在使用之前，将AXL通过与 ImM ATPUOmM MgCl2UOOmM HEPESpH 7. 5—起在室温下温育60分钟来进行磷酸化，并将其 在-70°C下保存。FLT3 反应含有 IOnM FLT3U13yM ATP 和 20 μ g/ml 聚 Glu4Tyr，反应 25 分钟。KIT 反应含有 InM KIT、50 μ M ATP 和 100 μ g/ml 聚 Glu4Tyr，反应 30 分钟。TRKA 反 应含有 5nM TRKA、20yM ATP 和 20 μ g/ml 聚 Glu4Tyr，反应 30 分钟。AXL 反应含有 0. 5nM AXL,20 μ M ATP 和 25 μ g/ml 聚 Glu4Tyr,反应 11 分钟。FLT3、KIT、TRKA 和 AXL 的 ATP Km 值 (米氏常数)分别为5(^] 、44“]\1、29“]\1和 16 μ M。用 InvitrogenSelectScreen 激酶谱 型分析服务(Kinase Profiling Service)测定60种激酶在1和0. 1 μ M下的LCK IC50和
129抑制。用 Millipore 激酶谱型分析服务(Millipore KinaseProfiler Assay Service)测 定另外的51种激酶。细胞测定如先前在 Baumann CA 等人，J Biochem Biophys Methods2004 ;60 :69_79 中所 述，用经转染而过度表达野生型CSF-IR的HEK293细胞及ELISA和免疫印迹分析，测量对 CSF-I-诱导的CSF-IR磷酸化的抑制。采用类似的方法，测量对经转染而过度表达野生型 FLT3的Baf3细胞中FLT3配体诱导的FLT3磷酸化的抑制。将经转染而过度表达野生型FLT3 的Baf3细胞用于研究对细胞中FLT3激酶活性的抑制。(Yee，KffH,等人，Blood, 2002年10 月15日，第100卷，第8期，第2941-2949页)。在用FLT3-L刺激后，对FLT3的磷酸化状态 进行评估。将细胞与梯度浓度的JNJ-141或DMSO溶媒温育1小时后，将其接种于具有0. 5% 血清和0. 01ng/mL IL-3的RPMI 1640中16小时。将细胞在37°C下用100ng/mL FLT3-L处 理10分钟并立即溶解。用夹心型ELISA对磷酸化的FLT3进行定量。将澄清的裂解物转移 至包被有50ng/孔FLT3抗体的微量滴定板(Santa Cruz Biotechnology Corp,Santa Cruz, CA ；sc-480)并用 SeaBlock试剂(Pierce Chemicals,Rockford, IL)封闭。将裂解物在 4°C 温育2小时。将洗涤过的板在室温下与HRP缀合的磷酸酪氨酸抗体(克隆4G10，Upstate Biotechnology)的1 8000稀释液温育1小时。在最后的洗涤后，在Berthold Orion微
孔板光度计上按照生产商的说明书完成采用SuperSignal Pico试剂(Pierce Chemical, Rockford, IL)进行的信号检测。抑制和IC5tl数据分析是用GraphPad prism 软件，以多参 数、S型剂量-响应(可变斜率)方程采用非线性回归拟合来进行。GAS6-诱导的AXL磷酸化是用经转染而过度表达AXL的HEK293细胞来测量。将 HEK293E细胞工程改造成能表达全长Axl，随后用于测定JNJ-141对Gas6介导的Axl磷酸 化的抑制。将附加型表达载体pCEP4-His6用于在HEK293E细胞中过度表达全长人Axl。 将人GAS6从由GAS6/HEK293E细胞系产生的调理培养基纯化(Fisher Pff等人，Biochem. J. (2005)387,727-735)。将 Axl/HEK293E 细胞用 JNJ-141 预处理 40 分钟，然后用 200ng/ml 人GAS6刺激10分钟。将细胞用RIPA缓冲液(Santa Cruz sc-24948)溶解，将Axl用人Axl 抗体(Santa Cruz，sc-1096)进行免疫沉淀过夜，收集至A/G琼脂糖(Santa Cruz sc-2003) 上。将免疫沉淀物在4-12% NuPAGE凝胶上分离并转移至硝化纤维。用HRP缀合的磷酸酪 氨酸抗体(克隆4G10，Upstate)或人Axl抗体探测洗涤过的免疫沉淀物的复制印迹，以确 认总Axl的上样相等。用SuperSignai8West化学发光底物检测蛋白质。用UVP生物成像 系统和LabWorks软件，通过扫描测光密度法对χ光胶片进行定量。抑制和IC5tl数据分析是 用GraphPad Prism 软件，以多参数、S型剂量_响应(可变斜率)方程采用非线性回归拟 合来进行。使用有关CSF-I驱动的小鼠巨噬细胞增殖和CSF-I-诱导的人单核细胞MCP-I 产生的测定法，来检验对CSF-IR的功能性抑制。使用得自StemCell Technologies的 RosetteSep 人单核细胞富集混合物(目录号15068)，通过负选择从人血液分离单核细 胞，将单核细胞在圆底96孔聚丙烯板(Corning 3790)中培养(2 X IO5/孔)30分钟，该板 具有含10%热灭活的FBS和梯度浓度的JNJ-141的RMPI 1640。然后用lOOng/ml重组人 CSF-I (R&D Systems)刺激细胞16小时，用特异性ELISA (R&DSystems)检测培养上清液的MCP-1。小鼠巨噬细胞衍生自从 B6C3F1 小鼠(Harlan Industries, Indianapolis, IN)的 股骨冲洗出的骨髓。将悬浮(IXlO6个细胞/ml)于培养基(含有10%FBS、2mM谷氨酰胺、 100IU/ml 青霉素和 100ug/ml 链霉素以及 50ng/ml 重组小鼠 CSF-I (R&D Systems)的 EMEM) 中的骨髓细胞在37°C和5% CO2下于组织培养瓶(Falcon)中培养过夜。将未贴壁的细胞重 新接种到IOOmm细菌学培养皿(Falcon 351029) (10ml/培养皿)中，在三天和六天后更换 培养基。在第七天，将骨髓衍生的巨噬细胞(BMDM)用CellstripperTM(CellGro，Mediatech， Inc. ,Herndon,VA)收获，重悬于无CSF-I的培养基中，并以每孔5000个细胞的密度接种于 Costar 96孔组织培养板中。过夜培养后，将各孔调节成含有5ng/ml CSF-IU μ M吲哚美 辛和梯度浓度的JNJ-141。二十四小时后，将各孔进一步调节成含有溴脱氧尿苷(BrDU)再 保持6小时。通过ELISA(Exalpha Corp. ffatertown,MA)对BrDU向增殖的巨噬细胞的DNA 中的掺入进行定量，用GraphPad Prism 软件和四参数logistics方程计算抑制BrDU掺入 达百分之五十的JNJ-141浓度。分别使用MV-4-11AML细胞系(ATCC号CRL_9591)、M07e红白血病细胞系(DSMZ 号ACC 104)和TF-I髓细胞性白血病细胞系(ATCC号CRL_2003)对依赖于ITD_FLT3、KIT 和TRKA的细胞增殖进行评估。由于组成型活性ITD-FLT3突变体的表达，MV-4-11细胞是 生长因子非依赖性的(Quentmeier H等人，Leukemia2003 ；17 :120_124)。M07e细胞能表达 KIT 并响应 SCF 而增殖(B Lange 等人，Blood 1987 ；70 192-199)。TF-1 细胞能表达 TRKA 并 响应NGF而增殖(B Lange等人，Blood 1987;70:192-199)。将细胞与梯度浓度的JNJ-141 一起分配至Costar 96孔组织培养板(10，000个细胞/孔)中。将M07e和TF-I培养物调 节成分别含有25ng/ml SCF或1. 4ng/ml NGF。在72小时培养时间后，用CellTiterGlo 试剂(Promega)测定相对细胞数。根据第3天与第O天的荧光差值计算MV-4-11的生长情 况。根据在生长因子存在和不存在下所培养的细胞的荧光差值计算M07e和TF-I的生长情 况。IC5tl值是用GraphPad Prism 软件，以多参数、S型剂量-响应(可变斜率)方程采用 非线性回归拟合来测定。如 Maier JA 等人，Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters2006 ； 16 3646-3650中所述，测定对细胞LCK的抑制。将Jurkat细胞(IO5个细胞/孔)(ATCC TIB-152)(克隆E6-1)在圆底96孔聚丙烯板中用梯度浓度的JNJ-141预处理1小时。将细 胞转移至预包被有⑶3 ε抗体(MAB100R&D Systems)的培养皿中。随后加入PMA至终浓度 为lOng/ml，并将细胞在37°C下温育过夜。收获二十四小时培养物上清液，通过ELISA(R&D Systems)测定IL-2蛋白的表达。用CellTiter-Glo 试剂确定细胞活力。动物研究将动物圈养在经美国实验动物评估和认可委员会(AmericanAssociation for Assessment and Accreditation of Laboratory Animal Care (AAALAC))完全认可的设施 中，并且涉及动物的研究过程均遵照关于试验动物护理和使用的NIH指南(NIH Guide for the Care and Use ofLaboratory Animals)来进行。JNJ-141的体内药效动力学活性向各由六只8周龄的B6C3F1小鼠(Taconic Farms)组成的各组口服给予10或20mg/kg的溶媒(20%羟丙基-β -环糊精(HP β⑶)水溶 液)或JNJ-141。八小时后，经由尾部静脉给小鼠施予盐水或0. 8 μ g重组小鼠CSF-I (Cell Biosciences Inc，Norwood，ΜΑ)。在尾部静脉注射十五分钟后，处死小鼠并分离脾脏，用干冰速冻。将该冷冻组织用Iml Trizol (Invitrogen) /每50mg组织进行均化，根据Trizol 的技术说明书纯化RNA，用6. 8孔尼茨(Kunitz)单位的无RNA酶的DNA酶((Qiagen， Valencia, CA)处理以降解污染性基因组DNA。用RNeasy柱(Qiagen)进一步纯化RNA。使 用逆转录酶 qPCR 主混合物(Reverse Transciptase qPCR Master Mix) (Eurogentec)和大 约 50ng 1 ^在25“1^反应体积中进行肌- 0 。小鼠 c_fos mRNA (part#Mm00487425)或 18S rRNA(part#4333760F)的引物探针组得自 Applied Biosystems，Inc.，(Foster City，CA)。 用ABI Prism 7000序列检测系统进行扩增和检测。使用从用溶媒处理的、CSF-I诱导的小 鼠分离的RNA产生c-fos mRNA和18s rRNA的标准曲线，并将其用于计算所有其他样品中 的相对表达水平。将c-fos mRNA值相对18S rRNA含量进行归一化。将盐水(无CSF-1) 处理组的取平均值的、经归一化的c-fos含量赋值为1，所有其他组以“诱导倍数”表示。NCI-H460人肺肿瘤异种移植物模型将NCI-H460人肺恶性肿瘤细胞(ATCC号 HTB-177)以IX IO7个细胞/mL悬浮于无菌PBS中，并取IOOuL皮下注射于得自Charles River Laboratories (Wilmington,ΜΑ)的雌性无胸腺裸鼠(CD_l，nu/nu，9 至 10 周龄)的左 腹股沟区中。三天后，将小鼠随机分成四组(每组15只)，用管饲法以25、50和100mg/kg 的剂量给予溶媒或JNJ-141。在非周末期间每天给予两次，在周末每天给予一次，连续进行 25天。用电子游标卡尺，采用公式(LXW)2/2(其中L=肿瘤长度(mm)，W=肿瘤宽度(最 短距离，单位mm))确定肿瘤体积。在实验终止时，在CO2麻醉下通过心脏穿刺收集血样于肝 素锂包被的管子中。通过在4°C下离心(3000rpm)10分钟获得血浆，冷冻保藏于-80°C下直 至用特异性ELISA (R&D Systems)分析人和小鼠CSF-1。将每例肿瘤的一半浸入Tissue-Tek O.C.T.(最佳切片温度)介质(VWR，West Chester,PA)中，速冻并进行处理以进行肿瘤脉管 系统的免疫组织化学染色。将每例肿瘤的另一半在10%福尔马林中固定并包埋于石蜡中， 以进行TAM的免疫组织化学量化定量。将五ym切片用大鼠抗小鼠F4/80(克隆Cl :A3_1， Serotec)和包括生物素化的兔抗大鼠免疫球蛋白(Dako Cytomation,目录号E0468)的 HRP检测系统以及具有标记聚合物-HRP (Dako Cytomation,目录号K4003)和DAB的抗兔 Envision进行染色。对于每例肿瘤，以200x倍放大倍数评估三个巨噬细胞密度最高的区 域。借助于Image Pro Plus软件测定每个视野中F4/80染色细胞阳性的百分比，并对每例 肿瘤的该三个视野求平均值。为了评估肿瘤血管密度，将8 μ m恒冷箱切片在冷丙酮中固定 5分钟并风干。将切片在PBS洗涤，用5%山羊血清的PBS溶液封闭，并用抗生物素蛋白-生 物素溶液(SP-2001, Vector Corporation, Burlingame, CA)进一步封闭。洗涤后，将切片 用含有 10 μ g/ml 大鼠抗小鼠 CD31(RM5200,Caltag Laboratories,Burlingame,CA)的 PBS 覆盖60分钟，洗涤并用ABC-AP Rat试剂盒(AK-5004，Vector Corporation)染色。将左旋 咪唑与基质(substrate)以抑制内源性碱性磷酸酶。将大鼠IgG(Caltag Labs, R2a00)用 作阴性对照，并且在所有情况下均是阴性的。将切片进行稍作复染，并用4x倍物镜获取照 片。用Image Pro Plus (Phase 3Image)计算脉管所占的肿瘤横截面积的百分比。大鼠MRMT-I骨转移模型已经描述了将大鼠乳腺MRMT-I腺癌细胞接种进 胚骨，作为骨转移模型(Medhurst SJ 等人，Pain2002 ；96 129-40)。由 MDS Pharma Services (Bothel, WA)进行了该模型的改建(Roudier MP 等人，Clin Exp Metastasis 2006，23 167-75)。使大约 125-150 克的雌性 Sprague-Dawley 大鼠(Harlan Sprague Dawley, Inc.，Indianapolis, IN)适应环境一周。用氯胺酮/赛拉嗪麻醉这些大鼠，将右腿部刮毛并用氯己定和70%乙醇(S0P-SUR026)擦拭。在胫骨上半部上的皮肤中产生Icm的 头-尾切口(rostral-caudal incision).用钝器解剖法暴露胫骨近端，并用通过23号针 头引导的Hamilton注射器将3μ 1的盐水(假手术)或含有3 X IO4个MRMT-I细胞的盐水 注射进每只大鼠的右边胫骨近端的髓腔中。用骨蜡封闭注射部位。用外科手术钉缝合伤口。 从第3天开始用溶媒(0.5%羟丙基甲基纤维素)或JNJ-141(20或60mg/kg)，每日两次， 隔10小时通过管饲法给动物施药。给第四组每隔一日皮下施用盐水中的0. 03mg/kg唑来 膦酸盐，以作为对照。每组对八只大鼠进行给药。在第17天处死大鼠。切除右胫骨以及周 围的肿瘤组织，用 MX-20X-射线系统(Faxitron X-ray Corporation, Wheeling, IL)制作 X 射线显微照片。如下对X射线显微照片进行肿瘤诱导的骨质溶解的评分0，没有破坏迹象； 1，一至三个小的射线可透的病损；2，三至六个病损并丢失骨髓骨；3，丢失骨髓骨并且皮质 骨溶蚀；4，全厚度单皮质骨丢失；5，全厚度双皮质骨丢失和/或骨骼断裂移位。将放射照 片用于从每组中选择代表性的骨进行微CT成像。将所有胫骨固定于10%中性缓冲福尔马 林中两天，脱钙并切片用于组织病理学评价。如此前在Liu，C.等人，1987. Histochemistry 86 559-565中所述，进行TRAP染色。对于每份胫骨，在具有最高破骨细胞频率的三个200 倍视野中，对肿瘤相关的TRAP+破骨细胞数目进行计数。用半定量三点评分法对各处理组 就骨小梁体积(3，>40面积；2，> 10% <40%面积(正常)；1，1-10%面积；0，无)和肿 瘤体积(3，大；2，适度；1，小；0，无)进行比较。疼痛行为评价在手术前以及在第5、7、10、14和16天，对动物进行触觉异常性疼痛 的行为分析。将在手术前测定的触觉异常性疼痛的行为测试用于将动物随机分配到各处理 组。让大鼠适应von Frey测试装置，通过将一系列经校准的尼龙纤维穿过笼底并压向后爪 的跖面，来测定触觉(即机械)异常性疼痛。在测试过程中大鼠自由活动并不用手触过。von Frey纤丝的直径对应所施加力的对数标度，因而对应所感觉到的强度的线性区间标度。根 据 Chaplan 的“上下(up-down) ”方法(Chaplan SR 等人，J Neurosci Methods 199453(1) 55-63)测定缩回阈值，该方法涉及使用渐次变大和变小的纤维以使得能确定50%缩回阈 值。简而言之，当大鼠响应压力而提起其爪子时，记录纤丝的尺寸，接着使用刺激较弱的纤 丝。反之，在没有响应时，使用较强刺激。因而产生了一系列相似应答，并用响应变量电子 表格计算出50%响应阈值。触觉异常性疼痛的显著差异是基于组平均值的比较。继发性骨肿瘤疼痛和骨质溶解的2472肉瘤模型在成年雄性C3H/HeJ小鼠 (Jackson Laboratories, Bar Harbor, ME, USA)上进行实验，小鼠在进行肿瘤细胞注射时 大约7-8周龄，重25-30g。在用氯胺酮/赛拉嗪(2 1比例；肌内注射(i.m.))诱导全身 麻醉后，进行关节切开术。将针头插入髓腔内，以产生用于肉瘤细胞进入的通道。然后使 用气动式牙科高速手持件产生一凹陷。给小鼠注射Hanks缓冲盐水(HBSS) (20ul，Sigma, St. Louis, MO, USA)或含有 2472 肉瘤系(ATCC, Rockville, MD, USA)的 HBSS0 用牙科汞齐 填料密封注射部位，以将细胞封闭在髓腔内，然后用无菌水(低渗溶液)冲洗。最后，用缝 合夹实现切口闭合。在第5天移除缝合夹以便不干扰行为测试。利用Faxitron分析(MX-20型标本X射线摄影系统(Faxitron X-ray Corporation，Wheeling，IL)和柯达胶片(Kodak film Min-R 2000,Rochester, NY))，以放 射学方法对肿瘤诱导的骨重组(骨质溶解)的程度进行评估。以0至5的标度对荷瘤股骨 的X射线照片进行评分(0)没有破坏迹象的正常骨；(1)小的骨破坏凹陷(数目为1-3)；(2)凹陷增多的外观(3-6)以及骨髓骨丢失；(3)骨髓骨丢失以及皮质骨丢失；(4)全厚度 的单皮质骨丢失；(5)全厚度的双皮质骨丢失以及骨骼断裂移位。将多个行为测量结果用于评估骨癌疼痛的程度。自发性疼痛反应行为在2分钟的观察期间，记录代表疼痛反应行为的自发性退 缩和防卫的次数。退缩定义为动物提起其后爪的次数，防卫定义为动物保持后爪提起同时 不动的次数。触诊诱导的疼痛反应行为通过对股骨远端进行通常非有害的触诊，每秒钟一次， 持续2分钟，来评价膝关节处的机械异常性疼痛。在2分钟的触诊后，将小鼠置于观察箱中， 如上所述对其触诊诱导的防卫和退缩行为另外测量2分钟。强迫行走防卫强迫行走防卫是用Roto-Rod(IITC，Woodland Hills, CA)确定。 Roto-Rod机器具有旋转杆并配有速度、加速度和灵敏度控制。动物将会被置于4倍速度、 加速度8. O、灵敏度2. 5的杆上。以0-5的标度评定强迫行走防卫(5)正常使用，(4)有些 蹒跚，但不明显，(3)明显蹒跚，(2)明显蹒跚并且肢体的防卫延长，(1)部分地不能使用肢 体，(0)完全不能使用。统计分析通过ANOVA和Durmett t_检验对处理动物和对照动物之间的差异进行 统计分析，？值< 0. 05 (双尾检验)认为是在统计学上显著。将GraphPad Prism Version 4. O用于数据的所有统计分析和图形显示。结果。JNJ-141是CSF-IR和FLT3的强效抑制剂，激酶选择谱较窄。在酶测定法中， JNJ-141抑制了人CSF-IR激酶，IC50值为0. 00069 μ Μ。检验了对CSF-IR的特异性以及对 110种其他激酶的特异性。有九十三种激酶在ΙμΜ时受抑制低于50%。在剩下的十七种 激酶中，五种的 IC5tl值低于 0. 1 μ Μ，包括KIT (0. 005 μ Μ) ,AXL (0. 012 μ Μ) ,TRKA (0. 015 μ Μ)、 FLT3 (0· 030 μ Μ)和 LCK (0· 088 μ Μ)。将JNJ-141在细胞测定中进一步进行了表征。结果示于表1中。 较低的纳摩尔浓度抑制了重组HEK细胞中的CSF-IR自磷酸化(图1B)以及小鼠 巨噬细胞的CSF-IR依赖性增殖和人单核细胞的MCP-I表达(表1)。相对于CSF-IR抑制， 大约高七倍浓度的JNJ-141抑制了 MV-4-11细胞的FLT3依赖性增殖和重组Baf3细胞中 的FLT3自磷酸化。大约高十五倍的浓度抑制了 M07e细胞的KIT依赖性增殖。在亚微摩 尔浓度的JNJ-28312141下TF-I细胞的TRKA依赖性增殖也被抑制。相比于CSF_1R、FLT3、 KIT和TRKA细胞效价，AXL自磷酸化和LCK依赖性IL-2产生的细胞IC5tl值大于一微摩尔。 JNJ-141 (5 μ Μ)没有抑制H460、MDA-MB-231或Α375腺癌细胞的生长因子非依赖性增殖。总 体来说，数据确定了 JNJ-141为CSF-IR的强效选择性抑制剂，另外在纳摩尔浓度下对FLT3、 KIT和TRKA也有细胞抑制作用。JNJ-141的体内药效动力学活性为了确认体内CSF-IR抑制作用，基于所报道的 CSF-I 升高巨噬细胞 c-fos mRNA 的能力(Orlofsky A 等人，EMBO J 1987;6:2947-52) 开发了一种简单的药效动力学模型。因为巨噬细胞大量存在于脾脏中，因此在静脉注射 重组CSF-I后对小鼠脾脏中的c-fos mRNA进行了评估。在十五分钟内CSF-I诱导了脾 c-fos mRNA增加10倍至50倍，但到第30分钟恢复至基线。诱导是剂量依赖性的(ED5tl为 大约0. 8yg/小鼠)，并且在投与0. 2mg CSF-I中和性单克隆5A1抗体(BD Biosciences Pharmingen)(腹膜内)的小鼠中100%被阻断。当在用0. 8 μ g CSF-I攻击前八小时经口 给予10或20mg/kg JNJ-141时，c-fos mRNA诱导分别降低33%和79%，如图2所示。JNJ-141对H460肺腺癌异种移植物的生长抑制作用将JNJ-141用于检验CSF-IR 依赖性巨噬细胞能支持实体瘤生长的假设。基于三个标准选择H460肺腺癌异种移植物作 为模型。首先，在H460细胞中或在异种移植物中通过RT-PCR无法检测到人CSF-IR表达，
135并且H460细胞在培养物中的生长不受JNJ-141抑制(参见上面的表1)。其次，H460肿瘤 的裂解物含有大量(35ng/g湿重)的人CSF-1，并且H460肿瘤产生出聚集有大量巨噬细胞 的基质(参见图4)。最后，活的H460细胞局限于邻近渗入的蛇形脉管基质的区域，表明了 基质依赖性的肿瘤生长。总起来看，这些肿瘤特性使得有机会来研究CSF-IR依赖性巨噬细 胞对肿瘤生长的推定的贡献。JNJ-141剂量依赖性地减少了 H460异种移植物的生长速率(参见图3A)。在研究 结束时，对于以25、50和100mg/kg给药，最终肿瘤重量分别减少了 21%、32%和45% (参 见图3B)。在为期25天的处理过程中，没有观察到明显的毒性或对体重的不利影响(参见 图 3C)。JNJ-141减少了肿瘤相关的巨噬细胞和血管分布。 为了在细胞水平上研究JNJ-141的作用机理，通过图像分析定量TAMS。F4/80阳 性巨噬细胞在用溶媒处理过的小鼠的肿瘤基质中丰富(图4A)，并存在于肿瘤细胞占优势 的区域内(尽管数目较少)。JNJ-141以剂量依赖性方式有效地减少了肿瘤相关的巨噬细 胞(表2和图4B)，在100mg/kg剂量下观察到大约97%的减少。剩下的阳性细胞小且圆， 缺乏成熟的组织巨噬细胞的形态。为了确定巨噬细胞计数减少是否与肿瘤微脉管密度减少相关联，对肿瘤进行染色 并进行CD31+微脉管系统的定量(图4C和4D)。在用溶媒处理过的小鼠中，CD31+微脉管 系统存在于整个肿瘤基质(图4C)。用JNJ-141处理导致了肿瘤血管分布的剂量依赖性减 少，在最高剂量下观察到66%的减少(表2和图4D)。骨转移的大鼠模型中JNJ-141对破骨细胞形成和骨质溶解的抑制肺癌和乳癌常常与溶解性骨骼转移相关(Roodman GD.，NEJM 2004 ；350 =1655-64)。因为无CSF-I的小鼠 缺乏破骨细胞，因此检验了 口服JNJ-141在得到很好表征的大鼠同系MRMT乳腺癌骨转移模 型中的效果(Medhurst SJ等人，Pain 2002 ；96 129-40) 0将JNJ-141的效果与双膦酸酯、 唑来膦酸盐进行了比较。在将MRMT乳腺癌细胞接种进胫骨后，在骨髓腔和周围的骨膜中均 形成了肿瘤。到第17天，X射线显微照相术(结果在表3中示出)和显微计算机辅助断层 摄影技术(参见图5)揭示了在用溶媒处理的大鼠中存在骨小梁大量损失和全厚度骨皮质 病变。
形成鲜明的对照的是，用JNJ-141处理有效地保持了骨。到第17天，在给予20
或60mg/kg JNJ-141的十四只大鼠中有三只仍无法通过X射线显微照相术检测到溶蚀，而
十四只大鼠中有十一只可辨别出一至三个小的射线可透的病变。JNJ-141对X射线照片评
分的影响与施用唑来膦酸盐后的相类似。组织学检查确认了在用溶媒处理过的负荷MRMT
肿瘤的大鼠中存在广泛的骨小梁丢失病变(图6和表3)。JNJ-141防止了肿瘤相关的溶蚀，
总体的骨小梁评分与假手术(无肿瘤)大鼠没有差别。全厚度皮质骨病变在溶媒处理组中
是常见的，但在用JNJ-141或唑来膦酸盐处理的大鼠中没有观察到。不管什么处理，几乎所
有接种肿瘤的大鼠的髓腔都充满了坏死的肿瘤，而活性肿瘤包封了胫骨。在第17天评估得知，JNJ-141和唑来膦酸盐均减少了包封的肿瘤的总体尺寸。在溶媒处理的大鼠中，大的多 核化TRAP+破骨细胞在肿瘤中丰富，并内衬于残留的皮质骨上(图6)。使用唑来膦酸盐，肿 瘤相关的破骨细胞减少64%，在低倍放大条件下保持可见。相比之下，在用JNJ-141处理的 大鼠中，难以发现肿瘤相关的破骨细胞。JNJ-141减少了肿瘤相关的破骨细胞达95%以上， 剩余的少数破骨细胞小并且通常是单核的。JNJ-141防止了转移性骨痛的发生在最终时间点时，与用介质接种的动物相比，将 MRMT-I细胞接种进胫骨近端显著增加了用MRMT-I细胞接种的动物中的机械性异常性疼 痛；p<0.01。用吗啡处理患病动物自第二个时间点起逆转了异常性疼痛，而与用肿瘤接种 的动物相比较，用20mpk或60mpk的JNJ-141处理在最终时间点减少了异常性疼痛(ρ分别 小于0. 05和0. 01)。与用肿瘤接种的动物相比较，唑来膦酸盐处理也减少了异常性疼痛，但 该效果未达到统计学显著性。图7中的数值表示组平均值士 SEM。骨转移的小鼠模型中JNJ-141对骨质溶解和疼痛相关行为的抑制将同系NCTC 2472溶骨肉瘤细胞接种进C3H/HeJ小鼠的股骨中，可提供已得到很好表征的具有疼痛和溶 骨终点的骨转移模型(Sevcik MA等人，Pain 2005 ；115 128-41) 0 JNJ-141在该模型中以 剂量依赖性方式防止了肿瘤相关的骨质溶蚀(表4)。骨质溶解的防止伴随着在骨肿瘤界 面处出现抗酒石酸盐酸性磷酸酶(TRACP)阳性破骨细胞数目的减少。在溶媒处理组中，疼 痛相关行为(包括自发的和触诊诱导的防卫(SG，PIG)和退缩(SF，PIF))在肿瘤接种后七 天明显并随时间而发展(图8和表4)。JNJ-141以剂量依赖的方式防止了疼痛相关行为的 逐渐增加。到第15天，在用120mg/kg JNJ-141处理的小鼠中扣诊诱导的退缩减少了大约 50% (表 4)。表4 JNJ-141在肿瘤诱导的骨疼的啮齿动物模型中的功效 a在第0天用盐水(假手术)或IO5个NCTC 2472细胞接种股骨后，在第3天开始 给药，每日两次，直至在第15天结束研究。b基于X射线显微照片的目测评分(标度0-5)。[1044]^每个高倍视野的计数。破骨细胞定义为抗酒石酸盐酸性磷酸酶(TRACP)阳性细 胞，巨噬细胞定义为CD68阳性细胞。<1在2分钟的观察时间内叩诊诱导的(PIF)或自发性(SF)退缩的次数。e在2分钟的观察时间内动物保持后爪提起(防卫)同时不动的时间(sec ；SG = 自发防卫；PIG =叩诊诱导的防卫。*相对于对照ρ < 0. 05 ;**相对于对照ρ < 0. 01 如本文所描述的实验中所证明，JNJ-141是一种强效CSF-IR抑制剂，能够阻断体 外单核细胞/巨噬细胞的增殖和趋化因子表达，以及能防止体内CSF-I诱导的c-fos mRNA 表达。对111种各式各样的重组激酶的测定鉴定了另外五种潜在的酪氨酸激酶靶标(即 KIT、FLT3、TRKA, LCK和AXL)，其可受低于IOOnM的浓度抑制。然而，其中亚微摩尔浓度的 JNJ-141抑制了依赖于KIT、FLT3和TRKA的细胞功能，但需要微摩尔浓度才能抑制AXL和 LCK依赖性细胞活性。需要相对较高浓度的JNJ-141才能影响细胞AXL和LCK测定，这可反 映出纯化的重组激酶与它们的天然细胞对等物之间的构象差异。总体来说，JNJ-141的激 酶谱对预防和治疗原发性和继发性骨癌来说是有吸引力的，因为CSF-IR依赖性巨噬细胞 和破骨细胞据信可分别支持肿瘤的生长和介导转移性骨疾病中的骨质溶解。此外，对FLT3、 KIT和TRKA的抑制可有助于所需的JNJ-141的治疗活性。肥大细胞依赖KIT来存活并且与 巨噬细胞一起促进肿瘤血管生成和恶性发展(Soucek L等人，Nature Medicine2007 ；10 1211-1218)。另外，肥大细胞与骨丢失相关(Chiappetta N 和 Gruber B, Semin Arthritis Rheum 2006 ；36 :32_6)，KIT 在某些骨肉瘤(Entz-Werle N 等人，Int J Cancer 2007 ；120 2510-6)和胃肠间质瘤(Demetri GD.，Seminars in Oncology 2001 ；28 19-26)上过度表 达并可驱动这些瘤。因而，抑制KIT可有助于减缓肿瘤生长和骨质溶解，并且可引起某些原 发性和继发性骨肿瘤的退化。与FMS相似，FLT3由巨噬细胞和破骨细胞祖细胞高度表达， 并且在某些环境下可增强或取代FMS (Lean JM等人，Blood 2001;98:2707-13)。因此抑制 FLT3可有助于JNJ-141的骨保护活性，以及有助于抑制肿瘤血管生成。TRKA是神经生长因 子(NGF)的专有受体。TRKA和NGF为伤害性感受器的生长和存活所必需，中和NGF的抗体 可在继发性骨癌模型中显著减少疼痛相关的行为(Halvorson KG等人，Cancer Res 2005 ； 65 9426-35)。小鼠中所得的这些数据表明，JNJ-141抑制TRKA可有助于减少MRM-I和2472 肉瘤模型中的肿瘤介导的伤害感受，有可能为遭受与原发性或继发性骨癌相关的严重疼痛 影响的患者缓解疼痛。JNJ-141对H460细胞不太可能有直接作用，因为JNJ-141在比体内 所达到的浓度高的浓度(5μΜ)下没有影响Η460细胞在培养物中的血清依赖性增殖。在本文所描述的实验中，在用JNJ-141处理过的小鼠中，肿瘤相关的巨噬细胞的 耗减较完全(>97%)。CSF-I抑制可通过若干种机制影响巨噬细胞数目。CSF-I对巨噬 细胞具有直接的趋化活性(Webb SE等人，J Cell Science 1996;109:793-803)并可诱导 巨噬细胞表达趋化肽，即单核细胞趋化蛋白_1(CCL2) (Baran CP等人，Am J Respir Crit Care Med2007 ；176 :78_89)。在CSF-I的影响下，募集的巨噬细胞或它们的前体原位增殖， 并且CSF-I即使在低的浓度下也是强效的巨噬细胞存活和分化因子(Chitu V等人，Curr Opin Immunol 2006 ； 18 39-48) 因此，JNJ-141可减少单核细胞和巨噬细胞祖细胞募集至 生长中的H460肿瘤，这些细胞一旦被募集就不能存活、增殖和分化。GM-CSF、IL_3、VEGF,
139CCL2和其他未确定的生长因子途径能支持巨噬细胞的募集和存活(Takahashi K.，J Clin Exp Hematopathology 2001;41:1-33)。即使有这些潜在的众多途径，JNJ-141对TAM的近 乎定量的减少也是惊人的。TAM和肿瘤生长的减少与肿瘤脉管密度减少66%相关联。据报道，TAM可表达大 量的支持血管生成的生长因子和蛋白酶(如VEGF、bFGF、IL-8、尿激酶、MMP-2和MMP-9等) (Mantovani A.等人，Trends in Immunology 2002;23:549-555)。用 JNJ-141 获得的结果 与越来越多的认为TAM是最佳肿瘤血管生成所必须的文献相一致。肠胃外给药的氯膦酸盐 脂质体(一种选择性巨噬细胞毒素)据报道可分别减缓F9畸胎癌和A673横纹肌肉瘤异种 移植物生长达 75%和 66% (van Rooijen N 等人，Methods Enzymol 2003;373:3-16)。生 长抑制伴随着肿瘤相关的F4/80+巨噬细胞的耗减和肿瘤脉管系统的显著减少。在A673肿 瘤中，CDl+微脉管系统密度的减少优于用抗VEGF所实现的减少。更近些时候，鉴定了一亚群的单核细胞，其能表达Tie2并且为最佳肿瘤血管生成 所需(De Palma M等人，Cancer Cell 2005;8:211-226)。该亚群的选择性缺失导致了裸 鼠中神经胶质瘤异种移植物的退化。其他研究更具体地将CSF-1/CSF-1R与肿瘤生长和血 管生成相关联(参见本文的“背景技术”，以及Nowickki A等人，Int J Cancer 1996 ；65 112-119 ；Okazaki T 等人，J Immunol 2005 ； 174 7531-7538 ；Aharinejad S 等人，Cancer Res 2002 ；62 :5317_5324 ；Aharinejad S 等人，Cancer Res2004 ；64 :5378_5384 ；Paulus P 等人，Cancer Res 2006 ；66 :4349_56)。在CSF-I缺陷型啮齿动物中破骨细胞几乎不存在，这确定了 CSF-I在正常的破骨 细胞形成中的关键作用(Pollard, J. W.等人，Adv in DevelBiochem 1995 ；4 153-193 ；Van Wesenbeeck L 等人，PNAS2002 ；99 14303-14308)。破骨细胞形成失调发生在关节炎和转移性骨疾病中。中和性CSF-IR抗体在关节 炎的小鼠模型中显著停止了骨质溶解，这确定了 CSF-I在免疫介导的破骨细胞形成中的作 用(Kitaura H 等人，J Clin Invest ；2005 ；115 :3418_27)。本文所描述的实验证明，在同系乳癌骨转移模型中可见JNJ-141几乎完全抑制了 破骨细胞形成和骨溶蚀。这些数据充实了先前的一个报道，该报道说明另选的CSF-IR激 酶抑制剂Ki20227在骨转移和骨溶蚀的黑素瘤模型中能保护骨质(参见Ohno H等人，Mol Cancer Ther2006 ；5 :2634_2643)。在本文所描述的实验中得出的数据也支持CSF-I在肿瘤诱导的破骨细胞形成中 的关键作用以及JNJ-141在治疗几乎85%的晚期乳癌患者(会被诊断有骨转移并有骨折、 骨痛和高钙血症的风险)中的治疗用途。高剂量的双膦酸盐(帕米膦酸和唑来膦酸盐)被指出可在患有骨转移的个体中防 止骨骼事件(参见，Body J. J.，Clin Cancer Res 2006 ； 12 (20Suppl) 6258s_6263s)，并且 denosumaMRANKL抗体)在临床试验中具有有前景的抗再吸收活性(参见，Body J. J等人， Clin Cancer Res2006 ;12 :1221_1228)。然而，作用时间短并且可容易逆转的CSF-1R抑制 剂(例如JNJ-141)可作为双膦酸盐(其与骨结合的半寿期为几个月，这是一个可有助于骨 坏死的特点，尤其是随着患者预期寿命延长)的有吸引力的替代药物。JNJ-141似乎可减缓软组织转移和骨骼转移两者的生长速率，这由在本文所述的 实验中所见的H460和MRMT肿瘤的生长抑制得到证实。这与唑来膦酸盐相反，唑来膦酸盐似乎不会影响软组织转移的生长(Mundy GR等人，Semin Oncol 2001 ；28(suppl6) 35-44)。JNJ-141减缓了实体瘤的生长并防止了骨骼转移对骨质的溶蚀。JNJ-141对 CSF-IR的抑制将可用于在各种情形下治疗癌症。例如，JNJ-141将可用于联合疗法，因为据 证实抗CSF-I的中和性抗体可减少化学抗性基因的肿瘤表达(Paulus P等人，Cancer Res 2006 ；66 :4349-56)，并且移除巨噬细胞衍生的生长和存活因子可延缓化学疗法后的肿瘤 恢复。另外，因为CSF-IR具有致癌潜能(Kirma N等人，Cancer Res2004 ；64 4162-70), 并在多种癌上表达(Kascinshi B.，Cancer Treat Res2002 ；107 :285_82)，在某些情况下， CSF-IR抑制剂可具有直接的抗癌活性。此外，瘤内趋化性研究和实况视频显微镜检查已证 实，肿瘤细胞通过依赖于EGF和CSF-I两者的过程与巨噬细胞一起移动(Wyckoff J等人， Cancer Res 2004 ；64 :7022_7029)，并且小鼠的遗传学分析已确定了 CSF-I在乳腺癌向肺 的自发性转移中的关键作用(Lin EY等人，J ExpMed 2001;193:727-739)。尽管已证实在 某些肿瘤中循环肿瘤细胞数目可精确预测存活情况(Budd GT等人，Clin Cancer Res2006 ； 12 :6403-6409)，但当前还没有针对转移过程的疗法。干预CSF-I依赖性肿瘤细胞外出可最 终减缓会导致晚期癌患者死亡的持续转移播散。治疗/预防方法本文所用的术语“癌”指一亚组或多亚组的细胞在多细胞生物体中的有害细胞增 殖，这种增殖会导致对所述多细胞生物体的损害(即不适或预期寿命缩短)。本文所用的 “细胞增殖疾病，，包括肿瘤件疾病。本文所用的“肿瘤件疾病”指由非ιΗ常的或不警控制的 细胞生长引起的肿瘤。本文所用的术语“骨癌”应意指在骨组织中起源的癌(在本文中称为“原发件骨 癌”)和从别的地方i千移至骨的癌细胞(在本文中称为“继发件骨癌”或“转移件骨癌”。原发性骨癌细胞包括(但不限于)骨肉瘤细胞、来自Ewing肿瘤家族的细胞、软骨 肉瘤细胞、恶性巨细胞肿瘤细胞、恶性纤维组织细胞瘤细胞和釉质上皮瘤。骨癌的类型包括(但不限于)骨肉瘤，其为骨的癌性肿瘤，通常是手臂、腿或骨盆 的癌性肿瘤(最常见的原发性癌)；软骨肉瘤，其为软骨的癌(第二最常见的原发性癌)； Ewing肉瘤，其为通常在腿骨和上肢骨的骨腔中发展的肿瘤；纤维肉瘤和恶性纤维组织细 胞瘤，其为在诸如腱、韧带、脂肪、肌肉之类的软组织中发展并转移至腿骨、上肢骨和颂骨的 癌；巨细胞瘤，其为仅在约10%的时间为恶性的并且最常见于上肢骨或腿骨中的原发性骨 肿瘤；以及脊索瘤，其为通常出现在颅骨和脊柱中的原发性骨肿瘤。继发性骨癌或转移性骨癌细胞(在本文中也称为“骨转移”)是已从诸如乳腺、肺、 前列腺和肾脏之类的其他组织转移而来的癌细胞。这类癌另外也称为”转移至骨”的癌起源 器官或组织的癌一例如迁移至骨的肺癌。旨在将这类癌包括在本文的“骨癌”的定义内。本发明提供用于治疗患有骨癌以及与骨癌相关的骨丢失和骨痛的受试者的治疗 方法，以及用于在有发展骨癌以及与骨癌相关的骨丢失和骨痛的风险(或易于发展骨癌以 及与骨癌相关的骨丢失和骨痛)的受试者中进行预防的预防方法，所述方法包括施用式I 化合物，优选实例38a。本文所用的术语“受试者”指已成为治疗、观察或试验对象的动物，优选哺乳动物， 最优选人。在一个实施例中，本发明提供在有需要的受试者中治疗骨癌(包括原发性骨癌和继发性骨癌，优选继发性骨癌)的方法，所述方法包括给受试者施用治疗有效量的药物组 合物，所述药物组合物包含式I化合物，优选实例38a，以及可药用载体。所述治疗剂的施用 可在骨癌特征性症状显现的同时进行。优选地，所述继发性骨癌包括来自乳腺、肺和前列腺 癌的骨转移，最优选乳腺癌转移。在另一个实施例中，本发明提供在有需要的受试者中治疗与骨癌(包括原发性骨 癌和继发性骨癌，优选继发性骨癌)相关的骨丢失和骨痛的方法，所述方法包括给所述受 试者施用治疗有效量的药物组合物，所述药物组合物包含式I化合物，优选实例38a，以及 可药用载体。所述治疗剂的施用可在骨癌特征性症状显现的同时进行以对抗骨丢失和骨 痛。优选地，所述继发性骨癌包括来自乳腺、肺和前列腺癌的置_，最优选乳腺癌转移。在一个实施例中，本发明提供在有需要的受试者中预防骨癌(包括原发性骨癌和 继发性骨癌，优选继发性骨癌)的方法，所述方法包括给所述受试者施用预防有效量的药 物组合物，所述药物组合物包含可药用载体和式I化合物，优选实例38a，和可药用载体。所 述预防剂的施用可在骨癌特征性症状显现之前进行，使得该疾病得以预防，或其发展受到 延缓。优选地，所述继发性骨癌包括来自乳腺、肺和前列腺癌的置_，最优选乳腺癌转移。在另一个实施例中，本发明提供在有需要的受试者中预防与骨癌(包括原发性 骨癌和继发性骨癌，优选继发性骨癌)相关的骨丢失的方法，所述方法包括给所述受试者 施用预防有效量的药物组合物，所述药物组合物包含可药用载体和式I化合物，优选实例 38a，和可药用载体。所述预防剂的施用可在骨癌特征性的骨丢失症状显现之前进行，使得 该疾病得以预防，或其发展受到延缓。优选地，所述继发性骨癌包括来自乳腺、肺和前列腺 癌的骨转移，最优选乳腺癌转移。在另一个实施例中，本发明提供在有需要的受试者中预防与骨癌(包括原发性骨 癌和继发性骨癌，优选继发性骨癌)相关的骨痛的方法，所述方法包括给所述受试者施用 预防有效量的药物组合物，所述药物组合物包含可药用载体和式I化合物，优选实例38a， 和可药用载体。所述预防剂的施用可在骨癌特征性的骨痛症状显现之前进行，使得该疾病 得以预防，或其发展受到延缓。优选地，所述继发性骨癌包括来自乳腺、肺和前列腺癌的1 _，最优选乳腺癌转移。术语“MM^M”指可在受试者中抑制或延缓疾病的发作的活性化合物或药剂 的量，其中抑制或延缓疾病的发作是研究人员、兽医、医生或其他临床医师正在寻求的。本文所用的术语“治疗有效量”指在警试者中引起牛物学响应或医学响应的活件 化合物或药剂的量，其中引起生物学响应或医学响应是研究人员、兽医、医生或其他临床医 师正在寻求的，其包括缓解所治疗病患或疾病的症状。用于确定包含本发明化合物的药物组合物的治疗或预防有效剂量的方法在本文 中有公开并且是本领域已知的。在本发明预防和治疗方法的又一方面，本发明涵盖用于治疗患有骨癌(包括原发 性骨癌和继发性骨癌，优选继发性骨癌)以及与所述骨癌相关的骨丢失和骨痛的患者的联 合疗法，或用于在有发展骨癌(包括原发性骨癌和继发性骨癌，优选继发性骨癌)以及与所 述骨癌相关的骨丢失和骨痛的风险(或易于发展骨癌，包括原发性骨癌和继发性骨癌，优 选继发性骨癌，以及与所述骨癌相关的骨丢失和骨痛)的患者中进行预防的联合疗法。优 选地，所述继发性骨癌包括来自乳腺、肺和前列腺癌的骨转移,最优选乳腺癌转移。
142[1077]该联合疗法包括给所述患者施用治疗或预防有效量的药物组合物和一种或多种 其他抗细胞增殖疗法(包括化学疗法、放射疗法、基因疗法和免疫疗法)，所述药物组合物 包含本发明化合物和可药用载体。本t所用的“化学疗法”指渉及化学治疗剂的疗法。有多种化学治疗剂可用于本 文所公开的联合治疗方法。可考虑的示例性化学治疗剂包括(但不限于)钼化合物(如， 顺钼、卡钼、奥沙利钼)；紫杉烷化合物(如，紫杉醇、多烯紫杉醇)；喜树碱化合物(依立替 康、托泊替康)；长春花生物碱(如，长春新碱、长春碱、长春瑞滨)；抗肿瘤核苷衍生物(如， 5-氟尿嘧啶、亚叶酸、吉西他滨、卡培他滨)；烷化剂(如，环磷酰胺、卡莫司汀、洛莫司汀、噻 替哌)；表鬼臼毒素类/鬼臼毒素类(如，依托泊苷、替尼泊苷)；芳香酶抑制剂(如，阿那曲 唑、来曲唑、依西美坦)；抗雌激素化合物(如，他莫昔芬、氟维司群)、抗叶酸剂(如，培美曲 塞二钠)；低甲基化剂(如，氮杂胞苷)；生物制剂(如，吉姆单抗、西妥昔单抗、利妥昔单抗、 帕妥珠单抗、曲妥单抗、贝伐单抗、埃罗替尼)；抗生素/蒽环类抗生素(如，伊达比星、放线 菌素D、博来霉素、柔红霉素、多柔比星、丝裂霉素C、更生霉素、去甲柔红霉素、道诺霉素)； 抗代谢剂(如，氨喋呤、氯法拉滨、阿糖胞苷、甲氨蝶呤)；微管蛋白结合剂(如，考布他汀、 秋水仙碱、诺考达唑)；拓扑异构酶抑制剂(如，喜树碱)。另外可用的药剂包括维拉帕米， 其为钙拮抗剂，发现可用于与抗肿瘤剂联合以在对所接受的化学治疗剂有抗性的肿瘤细胞 中建立化学敏感性以及加强这类化合物在药物敏感的恶性肿瘤中的功效(参见，Simpson WG, Cell Calcium. 1985Dec ；6 (6) :449_67)。另外，尚未出现的化学治疗剂也认为可用于与 本发明化合物联合。本文所用的“放射疗法”指包括将有需要的警试者暴露于辐射的疗法。这种疗法 是本领域技术人员已知的。放射疗法的合适方案将与其中放射疗法单独使用或与其他化学 疗法联合使用的临床疗法中已经采用的那些方案相似。本文所用的“基因疗法”指靶向渉及肿瘤发展的特定基因的疗法。可能的基因 疗法策略包括缺陷型癌抑制基因的恢复、用对应于编码生长因子及其受体的基因的反义 基因进行细胞转导或转染、基于RNA的策略例如核酶、RNA诱饵、反义信使RNA和小干扰 RNA(SiRNA)分子和所谓的'自杀基因'。本文所用的“免疫疗法”指靶向渉及肿瘤发展的特定蛋白质的疗法,其是通过这类 蛋白的特异性抗体来进行。例如，已将抗血管内皮生长因子的单克隆抗体用于治疗癌症。如果除了包含本发明化合物的药物组合物外还使用第二药物组合物，则可将两种 药剂在大致相同的时间以任一顺序依次同时施用(例如以单独的或整体的组合物施用)， 或以单独的给药方案施用。在后一种情形中，两种药物组合物将在一定时期内，以足以确保 可实现有利或协同效果的量和方式施用。应当理解，优选的施用方法和顺序以及该组合的 每种组分各自的剂量和给药方案将取决于与本发明药物组合物协同施用的具体化学治疗 剂、它们的施用途径、所治疗的具体肿瘤以及所治疗的具体宿主。本领域普通技术人员将理解，合适的化学治疗剂的剂量将通常类似于或低于其中 化学治疗剂单独施用或与其他化学疗法联合施用的临床疗法中已经采用的剂量。最佳的施 用方法和顺序以及剂量和给药方案可由本领域技术人员用常规的方法以及在考虑本文所 列信息情况下容易地确定。剂量可每疗程施用例如一次、两次或更多次，该疗程可例如每7、14、21或28天重复进行。可将本发明的药物组合物系统地施用给受试者，例如以静脉内、口服、皮下、肌内、 真皮内或非肠道的方式施用。也可将本发明的药物组合物局部地施用给受试者。局部递送 系统的非限制性例子包括使用管腔内的医疗器械，包括血管内药物递送导管、丝线、药理学 支架和腔内敷膜。还可将本发明的药物组合物与靶向剂联合施用给受试者，以在靶标部位实现高的 局部浓度。此外，可将本发明的药物组合物配制成快速释放或缓慢释放，以使药物或药剂与 靶组织保持接触数小时至数周的时间。本t所用的术语“纟目合物”旨在涵盖包含规定量的规定成分的产品，以及通过组合 规定量的规定成分而直接或间接得到的任何产品。本文所用的短语“E^fflffi”指当施用给动物或人(如果适用的话)时，不会产生 不利的、变应性的或其他不利的反应的分子实体和组合物。兽用用途同样包括在本发明内， “可药用”制剂包括用于临床和/或兽用用途两者的制剂。本发明的药物组合物包含根据常规的药物配混技术与药用载体紧密混合的式I 化合物(作为活性成分)，取决于给药(如口服或诸如肌内注射之类的肠胃外给药)所需的 制剂形式，所述载体可采取各种各样的形式。本发明的药物组合物可含有约0. Img至lOOOmg，优选约100至500mg的式I化合 物，并且可以配成任何适合于所选给药模式的形式。_包括必要的且惰性的药用赋形剂，包括但不限于粘结剂、悬浮剂、润滑剂、矫 味剂、甜味剂、防腐剂、染料和包衣材料。适用于口服给药的组合物包括固体形式，例如丸 剂、片剂、小胶囊剂、胶囊剂(各包括速释型、定时释放型和持续释放型)、颗粒剂和散剂；以 及液体形式，如溶液剂、糖浆剂、酏剂、乳剂和混悬剂。可用于肠胃外给药的形式包括无菌溶 液剂、乳剂和混悬剂。在制备口服剂型的组合物时，可以采用任何常用的药用介质。因而，对于液体口 服制剂，例如混悬剂、酏剂和溶液剂，合适的载体和添加剂包括水、二醇类、油类、醇类、调味 剂、防腐剂、着色剂等；对于固体口服制剂，例如散剂、胶囊剂、小胶囊剂、软胶囊剂和片剂， 合适的载体和添加剂包括淀粉、糖、稀释剂、粒化剂、润滑剂、粘结剂、崩解剂等。由于其在给 药方面的方便性，片剂和胶囊剂代表了最有利的口服单位剂型，在该情形中显然采用固体 药用载体。如果需要，片剂可通过标准技术包糖衣或包肠溶衣。对于肠胃外给药剂型，载体将通常包含无菌水，不过还可包含其它成分，例如用于 诸如帮助溶解或防腐之类的目的。还可以制备可注射混悬剂，在该情形中，可以采用合适的液态载体、悬浮剂等。本发明的药物组合物还包括用于缓慢释放式I化合物的药物组合物。该组合物包 含缓释载体(通常为聚合物型载体)和式I化合物。缓释的可生物降解载体是本领域所熟知的。这些是可形成颗粒的材料，所形成的 颗粒在其中封闭有活性化合物并在合适的环境(如水性、酸性、碱性环境等)下缓慢降解/ 溶解，从而在体液中降解/溶解并释放出其中的活性化合物。颗粒优选为纳米颗粒(即，直 径范围为约1至500nm，优选直径为约50-200nm，最优选直径为约IOOnm)。在制备用于缓释的制剂时，将缓释载体(通常为聚合物型载体)和本发明化合物
144首先溶解或扩散于有机溶剂中。然后将获得的有机溶剂加至水溶液中以获得水包油型乳 剂。优选的是，该水溶液包含表面活性剂。随后，将有机溶剂从该水包油乳剂蒸发，以获得 含有缓释载体和本发明化合物的颗粒的胶态悬浮液。本文的药物组合物每剂量单位(如每片、每粒胶囊、每份散剂、每支注射剂、每茶 匙等)将包含为递送上述有效剂量所需的活性成分量。本文的药物组合物每单位剂量单 位(如每片、每粒胶囊、每份散剂、每支注射剂、每只栓剂、每茶匙等)将含有约0. Olmg至 200mg/kg体重/天，优选约0. 03至约100mg/kg体重/天，最优选约2至40mg/kg/天。最优选的是，JNJ-141的制剂包含硅化微晶纤维素、交联羧甲基纤维素钠、硬脂酸 镁、丁基化羟基苯甲醚和丁基化羟基甲苯。该组合物可按照每天1到5次的给药方案进行施用。然而，取决于患者的要求、正 在治疗的病症的严重性和所采用的具体的式I化合物，剂量可以变化。可以采用每日给药 或周其月后给药(post-periodic dosing)。优选的是，本发明的药物组合物为单位剂型，例如片剂、丸剂、胶囊剂、散剂、颗粒 剂、肠胃外用无菌溶液剂或混悬剂、计量气雾剂或液体喷雾剂、滴剂、安瓿剂、自动注射装置 或栓剂；用于口服给药、肠胃外给药、鼻内给药、舌下或直肠给药，或用于通过吸入或吹入给 药。或者，药物组合物可以适用于每周一次或每月一次给药的形式呈现；例如活性化合物的 不溶性盐(如癸酸盐)可适于提供用于肌内注射的贮库型制剂(cbpot pr印aration)。为制备诸如片剂之类的固体组合物，将主要的活性成分与药用载体(如常规的制 片成分，例如玉米淀粉、乳糖、蔗糖、山梨醇、滑石粉、硬脂酸、硬脂酸镁、磷酸二钙或树胶) 以及其它药用稀释剂(如水)混合，以形成含有本发明化合物或其可药用盐的均勻混合物 的固体预配制组合物。当将这些预配制组合物称为均勻时，是意指活性成分在整个组合物 中均勻分散，以便该组合物可容易细分成等效剂型，例如片剂、丸剂和胶囊剂。然后将这种 预配制组合物细分成含有0. 1至约500mg本发明活性成分的上述类型的单位剂型。可对本发明的药物组合物的片剂或丸剂进行包衣或以别的方式进行配混，以提供 具有长效作用优点的剂型。例如，片剂或丸剂可包含内剂量组分和外剂量组分，后者为覆盖 前者的包层的形式。这两种组分可通过肠溶层分开，该肠溶层起到防止在胃中崩解的作用， 进而使内组分完整地进入十二指肠或得以延迟释放。有多种材料可用于这种肠溶层或包 衣，这类材料包括多种聚合酸与诸如紫胶、乙酰基醇和醋酸纤维素之类的材料。可掺入式I化合物以供口服或注射给药的液体形式包括水溶液剂、适当调味的糖 浆剂、水性或油性混悬剂和具有食用油(例如棉籽油、芝蔴油、椰子油或花生油)的调味乳 剂，以及酏剂和类似的药用溶媒。适用于水性混悬剂的合适分散剂或悬浮剂包括合成胶或 天然胶(例如黄蓍胶、阿拉伯树胶、藻酸盐、葡聚糖、羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、聚乙烯 基-吡咯烷酮或明胶。适当调味的悬浮剂或分散剂中的液体形式还可包括合成的和天然的 胶，例如黄蓍胶、阿拉伯树胶、甲基纤维素等。对于肠胃外给药，无菌混悬剂和溶液剂是所需 的。当需要进行静脉内给药时，采用通常包含合适防腐剂的等渗制剂。有利的是，用于本发明的药物组合物可以单份日剂量施用，或总的日剂量可以每 日二次、三次或四次的分开剂量施用。本领域技术人员可容易地确定待施用的最佳剂量，并 且最佳剂量将随所使用的具体化合物、给药模式、制剂强度、给药模式和疾病状况的进展而 变化。此外，与正在治疗的具体患者相关的因素，包括患者年龄、体重、饮食以及给药时间，将导致需要调节剂量。施用本发明化合物的另一备选方法可以是通过将化合物缀合至靶向剂，该靶向剂 将缀合物引导至其预定的作用部位，即引导至骨肿瘤细胞、继发性骨肿瘤细胞或骨肿瘤相 关的巨噬细胞或破骨细胞。抗体和非抗体靶向剂两者均可使用。因为靶向剂与其相应的 结合伴侣之间有特异性的相互作用，所以可将本发明化合物以高的局部浓度施用在靶标部 位处或附近，因而可更有效地在靶标部位对疾病进行治疗。例如，可将双膦酸酯基团加至 JNJ-141，以便将其引导至骨。当诸如抗体或生长因子之类的蛋白质或多糖用作靶向剂时，它们优选以可注射组 合物的形式施用。就骨癌而言，腔内给药可能是优选的。缀合至靶向剂的本发明化合物的治疗有效剂量取决于个体、骨癌类型和状态以及 其他临床因素。该有效剂量可用得自动物模型的数据(包括本文给出的那些)而容易地确定。虽然上述说明书以提供实例用于说明目的的方式教导了本发明的原理，但应当理 解本发明的实践涵盖了在如下权利要求书和它们的等同物范围内的所有常见变型形式、修 改形式和/或修饰形式。
14权利要求
一种在有需要的受试者中治疗骨癌的方法，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的药物组合物，所述药物组合物包含可药用载体和式I化合物或其溶剂化物、水合物、互变异构体或可药用盐其中A为苯基或吡啶基，其任一者可被氯、氟、甲基、 N3、 NH2、 NH(烷基)、 N(烷基)2、 S(烷基)、 O(烷基)或4 氨基苯基中的一者取代；W为吡咯基、咪唑基、异噁唑基、噁唑基、1，2，4 三唑基或呋喃基，其任一者可通过任何碳原子连接，其中所述吡咯基、咪唑基、异噁唑基、噁唑基、1，2，4 三唑基或呋喃基可含有一个连接至任何其他碳的 Cl、 CN、 NO2、 OMe或 CF3取代基；R2为环烷基、噻吩基、二氢砜代吡喃基、苯基、呋喃基、四氢吡啶基或二氢吡喃基，其任一者可独立地由每个如下基团中的一者或两者取代氯、氟和C(1 3)烷基，前提条件是，四氢吡啶基通过碳 碳键连接至环A；X为Z为CH或N；D1和D2各自为氢或合在一起形成连接氧的双键；D3和D4各自为氢或合在一起形成连接氧的双键；D5为氢或 CH3，其中所述 CH3可相对地取向为顺式或反式；Ra和Rb独立地为氢、环烷基、卤代烷基、芳基、芳烷基、杂芳基或杂芳烷基；E为N、S、O、SO或SO2，前提条件是，如果同时满足以下三个条件则E不可以为NQa不存在；Qb不存在；且R3为其中与E的连接点为N的氨基或环氨基；Qa为不存在、 CH2 、 CH2CH2 或C(O)；Qb为不存在、 NH 、 CH2 、 CH2CH2 或C(O)，前提条件是，如果Qa为C(O)则Qb不可以为C(O)，另外的前提条件是，如果E为N且Qa不存在则Qb不可以为 NH ，进一步的前提条件是，如果R3为其中与Qb的连接点为N的氨基或环氨基则Qb不可以为 NH ；R3为氢、羟烷基氨基、(羟烷基)2氨基、烷基氨基、氨基烷基、二羟基烷基、烷氧基、二烷基氨基、羟烷基、 COOH、 CONH2、 CN、 SO2 烷基 R4、 NH2，或含有至少一个杂原子N并且可任选含有选自S、SO2、N和O的额外杂部分的5或6元环，并且所述5或6元环可以是饱和、部分不饱和或芳族的，其中所述5或6元环中的芳族氮可以作为N 氧化物存在，并且所述5或6元环可任选被甲基、卤素、烷基氨基或烷氧基取代；R3也可以不存在，前提条件是当E为氮时R3不能不存在；R4为氢、 OH、烷氧基、羧基、甲酰胺基或氨甲酰基。FPA00001176816600011.tif,FPA00001176816600012.tif
2.根据权利要求1所述的方法，其中 A为苯基或吡啶基； X为 并且相对于-NHCO-W为对位取向。
3.根据权利要求2所述的方法，其中W为3H-2-咪唑基-4-甲腈t
4.根据权利要求3所述的方法，其中R2为可被-
5.根据权利要求4所述的方法，其中 X为-个或两个甲基取代的环己烯基。 Z为 CH ；D1 和 D2 各自为氢； D3 和 D4 各自为氢； D5为-CH3，其中所述-CH3可相对地取向为顺式或反式； E为 N； Qb为 不存在、-CH2-, -CH2CH2-或C (0)，前提条件是，如果Qa为C (0)则Qb不可以为C (0)，另 外的前提条件是，如果R3为其中与Qb的连接点为N的氨基或环氨基则Qb不可以为-NH-；并 且R3为氢、羟烷基氨基、(羟烷基)2氨基、烷基氨基、氨基烷基、二羟基烷基、烷氧基、二烷 基氨基、羟烷基、-C00H、-CONH2, -CN、_S02_CH3、_NH2、吡啶基、吡啶基-N-氧化物或吗啉基。
6.根据权利要求5所述的方法，其中 X为或
7. 或其溶剂化物、水合物、互变异构体或可药用盐。
8.根据权利要求7所述的方法，其中所述骨癌为继发性骨癌。
9.一种在有需要的受试者中预防骨癌的方法，所述方法包括向所述受试者施用预防有 效量的药物组合物，所述药物组合物包含可药用载体和式I化合物或其溶剂化物、水合物、 互变异构体或可药用盐 其中 A为苯基或吡啶基，其任一者可被氯、氟、甲基、-N3、-NH2, -NH(烷基)、-N(烷基)2、-S (烷 基)、-0 (烷基)或4-氨基苯基中的一者取代； W为吡咯基、咪唑基、异噁唑基、噁唑基、1，2，4-三唑基或呋喃基，其任一者可通过任何碳原 子连接，其中所述吡咯基、咪唑基、异噁唑基、噁唑基、1，2，4-三唑基或呋喃基可含有一个连 接至任何其他碳的-Cl、-CN、-NO2、-OMe或-CF3取代基； R2为:环烷基、噻吩基、二氢砜代吡喃基、苯基、呋喃基、四氢吡啶基或二氢吡喃基，其任一者 可独立地由每个如下基团中的一者或两者取代氯、氟和C(1_3)烷基，前提条件是，四氢吡啶 基通过碳_碳键连接至所述环A ； X为Z为CH 或 N ； D1 和 D2各自为氢或合在一起形成连接氧的双键； D3 和 D4各自为氢或合在一起形成连接氧的双键； D5为氢或-CH3，其中所述-CH3可相对地取向为顺式或反式； Ra和Rb独立地为氢、环烷基、商代烷基、芳基、芳烷基、杂芳基或杂芳烷基； E为N、S、0、S0或SO2,前提条件是，如果同时满足以下三个条件则E不可以为N =Qa不存在； Qb不存在；且R3为其中与E的连接点为N的氨基或环氨基； Qa为不存在、-CH2-、-CH2CH2-或 C (0)； Qb为不存在、-NH-、-CH2-、-CH2CH2-或C (0)，前提条件是，如果Qa为C (0)则Qb不可以为C (0)， 另外的前提条件是，如果E为N且Qa不存在则Qb不可以为-NH-，进一步的前提条件是，如 果R3为其中与Qb的连接点为N的氨基或环氨基则Qb不可以为-NH-； R3为:氢、羟烷基氨基、(羟烷基)2氨基、烷基氨基、氨基烷基、二羟基烷基、烷氧基、二烷基氨 基、羟烷基、-C00H、-CONH2, -CN、-SO2-烷基-R4、-NH2,或含有至少一个杂原子N并且可任选 含有选自S、SO2、N和0的额外杂部分的5或6元环，并且所述5或6元环可以是饱和、部分 不饱和或芳族的，其中所述5或6元环中的芳族氮可以作为N-氧化物存在，并且所述5或 6元环可任选被甲基、商素、烷基氨基或烷氧基取代；R3也可以不存在，前提条件是当E为氮 时R3不能不存在； R4为:氢、-0H、烷氧基、羧基、甲酰胺基或氨甲酰基。
10.根据权利要求9所述的方法，其中 A为苯基或吡啶基； X为并且相对于-NHCO-W为对位取向。
11.根据权利要求10所述的方法，其中W为3H-2-咪唑基-4-甲腈。
12.根据权利要求11所述的方法，其中R2为可被一个或两个甲基取代的环己烯基。
13.根据权利要求12所述的方法，其中 X为 D1 和 D2 各自为氢； D3 和 D4 各自为氢； D5为-CH3，其中所述-CH3可相对地取向为顺式或反式； E为 N； Qb为不存在、-CH2-, -CH2CH2-或C (0)，前提条件是，如果Qa为C (0)则Qb不可以为C (0)，另 外的前提条件是，如果R3为其中与Qb的连接点为N的氨基或环氨基则Qb不可以为-NH-；并 且R3为氢、羟烷基氨基、(羟烷基)2氨基、烷基氨基、氨基烷基、二羟基烷基、烷氧基、二烷 基氨基、羟烷基、-C00H、-CONH2, -CN、_S02_CH3、_NH2、吡啶基、吡啶基-N-氧化物或吗啉基。
14.根据权利要求13所述的方法，其中 X为
15.根据权利要求14所述的方法，其中所述式I化合物为 或其溶剂化物、水合物、互变异构体或可药用盐。
16.根据权利要求15所述的方法，其中所述骨癌为继发性骨癌。
17.一种在有需要的受试者中预防与骨癌相关的骨丢失的方法，所述方法包括向所述 受试者施用预防有效量的药物组合物，所述药物组合物包含可药用载体和式I化合物或其 溶剂化物、水合物、互变异构体或可药用盐χ仗其中 A为 苯基或吡啶基，其任一者可被氯、氟、甲基、-N3、-NH2, -NH(烷基)、-N(烷基)2、-S (烧 基)、-0 (烷基)或4-氨基苯基中的一者取代； W为吡咯基、咪唑基、异噁唑基、噁唑基、1，2，4-三唑基或呋喃基，其任一者可通过任何碳原 子连接，其中所述吡咯基、咪唑基、异噁唑基、噁唑基、1，2，4-三唑基或呋喃基可含有一个连 接至任何其他碳的-Cl、-CN、-NO2、-OMe或-CF3取代基； R2为:环烷基、噻吩基、二氢砜代吡喃基、苯基、呋喃基、四氢吡啶基或二氢吡喃基，其任一者 可独立地由每个如下基团中的一者或两者取代氯、氟和C(1_3)烷基，前提条件是，四氢吡唳 基通过碳_碳键连接至所述环A ； X为 D1 和 D2各自为氢或合在一起形成连接氧的双键； D3 和 D4各自为氢或合在一起形成连接氧的双键； D5为氢或-CH3，其中所述-CH3可相对地取向为顺式或反式； Ra和Rb独立地为氢、环烷基、商代烷基、芳基、芳烷基、杂芳基或杂芳烷基； E为N、S、0、S0或SO2,前提条件是，如果同时满足以下三个条件则E不可以为N =Qa不存在； Qb不存在；且R3为其中与E的连接点为N的氨基或环氨基； Qa为不存在、-CH2-、-CH2CH2-或 C (0)； Qb为不存在、-NH-、-CH2-、-CH2CH2-或C (0)，前提条件是，如果Qa为C (0)则Qb不可以为C (0)， 另外的前提条件是，如果E为N且Qa不存在则Qb不可以为-NH-，进一步的前提条件是，如 果R3为其中与Qb的连接点为N的氨基或环氨基则Qb不可以为-NH-； R3为:氢、羟烷基氨基、(羟烷基)2氨基、烷基氨基、氨基烷基、二羟基烷基、烷氧基、二烷基氨 基、羟烷基、-C00H、-CONH2, -CN、-SO2-烷基-R4、-NH2,或含有至少一个杂原子N并且可任选 含有选自S、SO2、N和0的额外杂部分的5或6元环，并且所述5或6元环可以是饱和、部分 不饱和或芳族的，其中所述5或6元环中的芳族氮可以作为N-氧化物存在，并且所述5或 6元环可任选由甲基、商素、烷基氨基或烷氧基取代；R3也可以不存在，前提条件是当E为氮 时R3不能不存在； R4为:氢、-0H、烷氧基、羧基、甲酰胺基或氨甲酰基。
18.根据权利要求17所述的方法，其中 A为苯基或吡啶基； X为并且相对于-NHCO-W为对位取向。9
19.根据权利要求18所述的方法，其中W为3H-2-咪唑基-4-甲腈。
20.根据权利要求19所述的方法，其中R2为可被一个或两个甲基取代的环己烯基。
21.根据权利要求20所述的方法，其中 X为 或Z为 CH ；D1 和 D2 各自为氢； D3 和 D4 各自为氢； D5为-CH3，其中所述-CH3可相对地取向为顺式或反式； E为 N； Qb为不存在、-CH2-, -CH2CH2-或C (0)，前提条件是，如果Qa为C (0)则Qb不可以为C (0)，另 外的前提条件是，如果R3为其中与Qb的连接点为N的氨基或环氨基则Qb不可以为-NH-；并 且R3为氢、羟烷基氨基、(羟烷基)2氨基、烷基氨基、氨基烷基、二羟基烷基、烷氧基、二烷 基氨基、羟烷基、-C00H、-CONH2, -CN、_S02_CH3、_NH2、吡啶基、吡啶基-N-氧化物或吗啉基。
22.根据权利要求21所述的方法，其中 X为
23.根据权利要求22所述的方法，其中所述式I化合物为 或其溶剂化物、水合物、互变异构体或可药用盐。
24.根据权利要求23所述的方法，其中所述骨癌为继发性骨癌。
25.一种在有需要的受试者中治疗与骨癌相关的骨丢失的方法，所述方法包括向所述 受试者施用治疗有效量的药物组合物，所述药物组合物包含可药用载体和式I化合物或其 溶剂化物、水合物、互变异构体或可药用盐其中 A为 苯基或吡啶基，其任一者可被氯、氟、甲基、-N3、-NH2, -NH(烷基)、-N(烷基)2、-S (烷 基)、-0 (烷基)或4-氨基苯基中的一者取代； W为吡咯基、咪唑基、异噁唑基、噁唑基、1，2，4-三唑基或呋喃基，其任一者可通过任何碳原 子连接，其中所述吡咯基、咪唑基、异噁唑基、噁唑基、1，2，4-三唑基或呋喃基可含有一个连 接至任何其他碳的-Cl、-CN、-NO2、-OMe或-CF3取代基； R2为:环烷基、噻吩基、二氢砜代吡喃基、苯基、呋喃基、四氢吡啶基或二氢吡喃基，其任一者 可独立地由每个如下基团中的一者或两者取代氯、氟和C(1_3)烷基，前提条件是，四氢吡啶 基通过碳_碳键连接至所述环A ； X为 各自为氢或合在一起形成连接氧的双键； D3 和 D4各自为氢或合在一起形成连接氧的双键； D5为氢或-CH3，其中所述-CH3可相对地取向为顺式或反式； Ra和Rb独立地为氢、环烷基、商代烷基、芳基、芳烷基、杂芳基或杂芳烷基； E为N、S、0、S0或SO2,前提条件是，如果同时满足以下三个条件则E不可以为N =Qa不存在； Qb不存在；且R3为其中与E的连接点为N的氨基或环氨基； Qa为不存在、-CH2-、-CH2CH2-或 C (0)； Qb为不存在、-NH-、-CH2-、-CH2CH2-或C (0)，前提条件是，如果Qa为C (0)则Qb不可以为C (0)， 另外的前提条件是，如果E为N且Qa不存在则Qb不可以为-NH-，进一步的前提条件是，如 果R3为其中与Qb的连接点为N的氨基或环氨基则Qb不可以为-NH-； R3为:氢、羟烷基氨基、(羟烷基)2氨基、烷基氨基、氨基烷基、二羟基烷基、烷氧基、二烷基氨 基、羟烷基、-C00H、-CONH2, -CN、-SO2-烷基-R4、-NH2,或含有至少一个杂原子N并且可任选 含有选自S、SO2、N和0的额外杂部分的5或6元环，并且所述5或6元环可以是饱和、部分 不饱和或芳族的，其中所述5或6元环中的芳族氮可以作为N-氧化物存在，并且所述5或 6元环可任选被甲基、商素、烷基氨基或烷氧基取代；R3也可以不存在，前提条件是当E为氮 时R3不能不存在； R4为:氢、-0H、烷氧基、羧基、甲酰胺基或氨甲酰基。
26.根据权利要求25所述的方法，其中 A为苯基或吡啶基； X为 并且相对于-NHCO-W为对位取向。
27.根据权利要求26所述的方法，其中W为3H-2-咪唑基-4-甲腈。
28.根据权利要求27所述的方法，其中R2为可被一个或两个甲基取代的环己烯基。
29.根据权利要求28所述的方法，其中 X为Z为 CH ； D1 和 D2 各自为氢； D3 和 D4 各自为氢； D5为-CH3，其中所述-CH3可相对地取向为顺式或反式； E为 N； Qb为不存在、-CH2-, -CH2CH2-或C (0)，前提条件是，如果Qa为C (0)则Qb不可以为C (0)，另 外的前提条件是，如果R3为其中与Qb的连接点为N的氨基或环氨基则Qb不可以为-NH-；并 且R3为氢、羟烷基氨基、(羟烷基)2氨基、烷基氨基、氨基烷基、二羟基烷基、烷氧基、二烷 基氨基、羟烷基、-C00H、-CONH2, -CN、_S02_CH3、_NH2、吡啶基、吡啶基-N-氧化物或吗啉基。 30.根据权利要求29所述的方法，其中 X为
30.
31.根据权利要求30所述的方法，其中所述式I化合物为或其溶剂化物、水合物、互变异构体或可药用盐。
32.根据权利要求31所述的方法，其中所述骨癌为继发性骨癌。
33.一种在有需要的受试者中治疗与骨癌相关的骨痛的方法，所述方法包括向所述受 试者施用治疗有效量的药物组合物，所述药物组合物包含可药用载体和式I化合物或其溶 剂化物、水合物、互变异构体或可药用盐其中 A为 苯基或吡啶基，其任一者可被氯、氟、甲基、-N3、-NH2, -NH(烷基)、-Ν(烷基)2、-S (烷 基)、-O (烷基)或4-氨基苯基中的一者取代； W为吡咯基、咪唑基、异噁唑基、噁唑基、1，2，4-三唑基或呋喃基，其任一者可通过任何碳原 子连接，其中所述吡咯基、咪唑基、异噁唑基、噁唑基、1，2，4-三唑基或呋喃基可含有一个连 接至任何其他碳的-Cl、-CN、-NO2、-OMe或-CF3取代基； R2为:环烷基、噻吩基、二氢砜代吡喃基、苯基、呋喃基、四氢吡啶基或二氢吡喃基，其任一者 可独立地由每个如下基团中的一者或两者取代氯、氟和C(1_3)烷基，前提条件是，四氢吡啶 基通过碳_碳键连接至所述环A ； CH 或 N ； D1 和 D2各自为氢或合在一起形成连接氧的双键； D3 和 D4各自为氢或合在一起形成连接氧的双键； D5为氢或-CH3，其中所述-CH3可相对地取向为顺式或反式； Ra和Rb独立地为氢、环烷基、商代烷基、芳基、芳烷基、杂芳基或杂芳烷基； E为N、S、0、S0或SO2,前提条件是，如果同时满足以下三个条件则E不可以为N =Qa不存在； Qb不存在；且R3为其中与E的连接点为N的氨基或环氨基； Qa为不存在、-CH2-、-CH2CH2-或 C (0)； Qb为不存在、-NH-、-CH2-、-CH2CH2-或C (0)，前提条件是，如果Qa为C (0)则Qb不可以为C (0)， 另外的前提条件是，如果E为N且Qa不存在则Qb不可以为-NH-，进一步的前提条件是，如 果R3为其中与Qb的连接点为N的氨基或环氨基则Qb不可以为-NH-； R3为:氢、羟烷基氨基、(羟烷基)2氨基、烷基氨基、氨基烷基、二羟基烷基、烷氧基、二烷基氨 基、羟烷基、-C00H、-CONH2, -CN、-SO2-烷基-R4、-NH2,或含有至少一个杂原子N并且可任选 含有选自S、SO2、N和0的额外杂部分的5或6元环，并且所述5或6元环可以是饱和、部分 不饱和或芳族的，其中所述5或6元环中的芳族氮可以作为N-氧化物存在，并且所述5或 6元环可任选由甲基、商素、烷基氨基或烷氧基取代；R3也可以不存在，前提条件是当E为氮 时R3不能不存在； R4为:氢、-0H、烷氧基、羧基、甲酰胺基或氨甲酰基。 34.根据权利要求33所述的方法，其中
34. 并且相对于-NHCO-W为对位取向。
35.根据权利要求34所述的方法，其中W为3H-2-咪唑基-4-甲腈。
36.根据权利要求35所述的方法，其中R2为可被一个或两个甲基取代的环己烯基。
37.根据权利要求36所述的方法，其中 X为或 D1 和 D2 各自为氢； D3 和 D4 各自为氢； D5为-CH3，其中所述-CH3可相对地取向为顺式或反式； E为 N； Qb为不存在、-CH2-, -CH2CH2-或C (0)，前提条件是，如果Qa为C (0)则Qb不可以为C (0)，另 外的前提条件是，如果R3为其中与Qb的连接点为N的氨基或环氨基则Qb不可以为-NH-；并 且R3为氢、羟烷基氨基、(羟烷基)2氨基、烷基氨基、氨基烷基、二羟基烷基、烷氧基、二烷 基氨基、羟烷基、-C00H、-CONH2, -CN、_S02_CH3、_NH2、吡啶基、吡啶基-N-氧化物或吗啉基。 38.根据权利要求37所述的方法，其中 X为
38.
39.根据权利要求38所述的方法，其中所述式I化合物为 或其溶剂化物、水合物、互变异构体或可药用盐。
40.根据权利要求39所述的方法，其中所述骨癌为继发性骨癌。
41.一种在有需要的受试者中预防与骨癌相关的骨痛的方法，所述方法包括向所述受 试者施用预防有效量的药物组合物，所述药物组合物包含可药用载体和式I化合物或其溶 剂化物、水合物、互变异构体或可药用盐其中 A为 苯基或吡啶基，其任一者可被氯、氟、甲基、-N3、-NH2, -NH(烷基)、-Ν(烷基)2、-S (烷 基)、-0 (烷基)或4-氨基苯基中的一者取代； W为吡咯基、咪唑基、异噁唑基、噁唑基、1，2，4-三唑基或呋喃基，其任一者可通过任何碳原 子连接，其中所述吡咯基、咪唑基、异噁唑基、噁唑基、1，2，4-三唑基或呋喃基可含有一个连 接至任何其他碳的-Cl、-CN、-NO2、-OMe或-CF3取代基； R2为:环烷基、噻吩基、二氢砜代吡喃基、苯基、呋喃基、四氢吡啶基或二氢吡喃基，其任一者 可独立地由每个如下基团中的一者或两者取代氯、氟和C(1_3)烷基，前提条件是，四氢吡啶 基通过碳_碳键连接至所述环A ； 各自为氢或合在一起形成连接氧的双键； D3 和 D4各自为氢或合在一起形成连接氧的双键； D5为氢或-CH3，其中所述-CH3可相对地取向为顺式或反式； Ra和Rb独立地为氢、环烷基、商代烷基、芳基、芳烷基、杂芳基或杂芳烷基； E为N、S、0、S0或SO2,前提条件是，如果同时满足以下三个条件则E不可以为N =Qa不存在； Qb不存在；且R3为其中与E的连接点为N的氨基或环氨基； Qa为不存在、-CH2-、-CH2CH2-或 C (0)； Qb为不存在、-NH-、-CH2-、-CH2CH2-或C (0)，前提条件是，如果Qa为C (0)则Qb不可以为C (0)， 另外的前提条件是，如果E为N且Qa不存在则Qb不可以为-NH-，进一步的前提条件是，如 果R3为其中与Qb的连接点为N的氨基或环氨基则Qb不可以为-NH-； R3为:
42.氢、羟烷基氨基、(羟烷基)2氨基、烷基氨基、氨基烷基、二羟基烷基、烷氧基、二烷基氨 基、羟烷基、-C00H、-CONH2, -CN、-SO2-烷基-R4、-NH2,或含有至少一个杂原子N并且可任选 含有选自S、SO2、N和0的额外杂部分的5或6元环，并且所述5或6元环可以是饱和、部分 不饱和或芳族的，其中所述5或6元环中的芳族氮可以作为N-氧化物存在，并且所述5或 6元环可任选由甲基、商素、烷基氨基或烷氧基取代；R3也可以不存在，前提条件是当E为氮 时R3不能不存在； R4为:氢、-0H、烷氧基、羧基、甲酰胺基或氨甲酰基。 42.根据权利要求41所述的方法，其中18CN 101917994 A权禾1J 要求书17/21页D:D'D2 D3QbR3〇D1、R ΜRa、Nι或 RbX为并且相对于-NHCO-W为对位取向。
43.根据权利要求42所述的方法，其中W为3H-2-咪唑基-4-甲腈。
44.根据权利要求43所述的方法，其中R2为可被一个或两个甲基取代的环己烯基。
45.根据权利要求44所述的方法，其中 X为 D1 和 D2 各自为氢； D3 和 D4 各自为氢； D5为-CH3，其中所述-CH3可相对地取向为顺式或反式； E为 N； Qb为
46.不存在、-CH2-, -CH2CH2-或C (0)，前提条件是，如果Qa为C (0)则Qb不可以为C (0)，另 外的前提条件是，如果R3为其中与Qb的连接点为N的氨基或环氨基则Qb不可以为-NH-；并 且R3为氢、羟烷基氨基、(羟烷基)2氨基、烷基氨基、氨基烷基、二羟基烷基、烷氧基、二烷 基氨基、羟烷基、-C00H、-CONH2, -CN、_S02_CH3、_NH2、吡啶基、吡啶基-N-氧化物或吗啉基。 46.根据权利要求45所述的方法，其中 X为
47.根据权利要求46所述的方法，其中所述式I化合物为或其溶剂化物、水合物、互变异构体或可药用盐。
48.根据权利要求47所述的方法，其中所述骨癌为继发性骨癌。
49.一种在有需要的受试者中治疗骨癌的方法，所述方法包括向所述受试者施用治疗 有效量的药物组合物，所述药物组合物包含可药用载体和下式化合物或其溶剂化物、水合 物、互变异构体或可药用盐，和可药用载体
50.根据权利要求49所述的方法，还包括施用化学治疗剂。
51.根据权利要求49所述的方法，其中所述药物组合物是通过从管腔内医疗装置释放 所述化合物通过可控递送来给予。
52.根据权利要求49所述的方法，其中所述药物组合物还包含靶向剂。
53.一种在有需要的受试者中预防骨癌的方法，所述方法包括向所述受试者施用预防 有效量的药物组合物，所述药物组合物包含可药用载体和下式化合物或其溶剂化物、水合 物、互变异构体或可药用盐，和可药用载体
54.根据权利要求53所述的方法，还包括施用化学治疗剂。
55.根据权利要求53所述的方法，其中所述药物组合物是通过从管腔内医疗装置释放 所述化合物通过可控递送来给药。
56.根据权利要求53所述的方法，其中所述药物组合物还包含靶向剂。
57.一种在有需要的受试者中治疗与骨癌相关的骨丢失的方法，所述方法包括向所述 受试者施用治疗有效量的药物组合物，所述药物组合物包含可药用载体和下式化合物或其 溶剂化物、水合物、互变异构体或可药用盐，和可药用载体
58.根据权利要求57所述的方法，还包括施用化学治疗剂。
59.根据权利要求57所述的方法，其中所述药物组合物是通过从管腔内医疗装置释放 所述化合物通过可控递送来给药。
60.根据权利要求57所述的方法，其中所述药物组合物还包含靶向剂。
61.一种在有需要的受试者中治疗与骨癌相关的骨痛的方法，所述方法包括向所述受 试者施用治疗有效量的药物组合物，所述药物组合物包含可药用载体和下式化合物或其溶 剂化物、水合物、互变异构体或可药用盐，和可药用载体
62.根据权利要求61所述的方法，还包括施用化学治疗剂。
63.根据权利要求61所述的方法，其中所述药物组合物是通过从管腔内医疗装置释放 所述化合物通过可控递送来给药。
64.根据权利要求61所述的方法，其中所述药物组合物还包含靶向剂。
65.一种在有需要的受试者中预防与骨癌相关的骨痛的方法，所述方法包括向所述受 试者施用预防有效量的药物组合物，所述药物组合物包含可药用载体和下式化合物或其溶 剂化物、水合物、互变异构体或可药用盐，和可药用载体
66.根据权利要求65所述的方法，还包括施用化学治疗剂。
67.根据权利要求65所述的方法，其中所述药物组合物是通过从管腔内医疗装置释放 所述化合物通过可控递送来给药。
68.根据权利要求65所述的方法，其中所述药物组合物还包含靶向剂。
69.一种在有需要的受试者中预防与骨癌相关的骨丢失的方法，所述方法包括向所述 受试者施用预防有效量的药物组合物，所述药物组合物包含可药用载体和下式化合物或其 溶剂化物、水合物、互变异构体或可药用盐，和可药用载体
70.根据权利要求69所述的方法，还包括施用化学治疗剂。
71.根据权利要求69所述的方法，其中所述药物组合物是通过从管腔内医疗装置释放 所述化合物通过可控递送来给药。
72.根据权利要求69所述的方法，其中所述药物组合物还包含靶向剂。
全文摘要
本发明提供用于治疗患有骨癌以及与骨癌相关的骨丢失和骨痛的受试者的治疗方法，以及用于在有发展骨癌以及与骨癌相关的骨丢失和骨痛的风险(或易于发展骨癌以及与骨癌相关的骨丢失和骨痛)的受试者中进行预防的预防方法，所述方法包括施用式I化合物或其溶剂化物、水合物、互变异构体或可药用盐。
文档编号A61K31/4439GK101917994SQ200880123752
公开日2010年12月15日 申请日期2008年10月29日 优先权日2007年11月2日
发明者C·L·曼泰 申请人:詹森药业有限公司