专利名称：油包油-油包油-油包水制备微球的方法
技术领域：
本发明涉及的是一种制药技术领域的制剂制备方法，尤其是一种油包油-油包油-油包水(W/O/O/O)的方法。
背景技术：
微球在医药和其它领域如农业等有着广泛的应用。如在医药领域有药物缓释微球，动脉栓塞微球等剂型；在农业同样有给牲畜用药的微球剂型。对于水溶性的药物用诸如W/O、W/O/W、W/O/O等微球的制备方法往往载药量不高，容易突释。尤其是随着基因重组技术用于治疗蛋白、多肽类药物的表达和生产的20多年以来，到目前为止，已有30多个蛋白多肽类药物药物产品投入临床使用，近200个在审批和研发过程中，涌现出一批诸如安进(Amgen)、基因技术(Genentech)等一批新的大型医药公司。相对于蛋白大分子药物本身的快速发展，其剂型技术进展缓慢。一方面，蛋白多肽类药物口服不吸收、体内半衰期短，需要注射给药；另一方面，许多何尔蒙、细胞因子类的蛋白多肽类药物治疗周期长，长期而频繁地注射成为必须，也影响患者顺应性的主要原因。缓释蛋白多肽类药物的剂型的研发，由于在制备微粒过程导致活性的损失诸如W/O/W法等。发展制备具有活性保护的蛋白微粒势在必行。而葡聚糖和PEG是常用来蛋白药物的冻干保护剂和分离纯化蛋白的试剂。Hennink利用修饰的葡聚糖制备蛋白缓释微球的报道，但是作者用到强氧化剂如过硫酸钾、过硫酸铵等，及聚合物引发剂使葡聚糖分子发生交联，这些难免不与蛋白发生反应，导致蛋白的失活或增加免疫原性。到目前还未见有W/O/O/O制备微球方法的报道。DNA、RNA及小干扰RNA，还有治疗细胞物质如胰岛细胞及干细胞等治疗物质的微囊化，都可以通过此法提高包封率及治疗效果。
经对现有技术文献的检索发现，[O’Donnell，P.B.，and McGinity，J.W.，Influece of processing on the stability and release prosperities ofbiodegradable microspheres containing thioridazine hydrochloride，European Journal of Pharmaceutics and Biopharmaceutics，1998，4583-94]，(O’Donnell，P.B.，and McGinity，J.W.，制备过程对盐酸甲硫哒嗪生物可降解微球的盐酸甲硫哒嗪的稳定性和释放的影响，欧洲生物药剂和药剂学杂志，1998，4583—94)。O’Donnell，P.B.等人在文献报道了W/O/W和W/O/O复乳法制备微球，同时在文献也出现W/O/O/O这样的字样，但是仔细阅读发现这是编辑打错或笔误导致的在该文中出现W/O/O/O，因为该文献只报道了这种常见W/O/W和W/O/O复乳法。该文献报道了W/O/W法药溶解在0.5ml蒸馏水中形成水相(W)。0.8g PLGA溶解在8ml的二氯甲烷中形成油相(O)。这两个溶液混和并用乳匀机乳化，使之形成初乳，然后把初乳添加到80ml含2％聚乙烯醇的水溶液中(W)，并搅拌3小时固化微球。W/O/O复乳法药的水溶液分散在PLGA的乙腈溶液中形成W/O的初乳，然后把形成的初乳再再0.5％的司盘80并搅拌固化微球，根本在该文献没有出现第三个油相。不过这两种方法都存在所包裹的药物容易突释，包封率不高，且存在不完全释放。对于文献报道的W/O/O法还存在对环境的污染等缺点，本发明了采用几种亲水性的油可以用来制备微球，且可以克服上述缺点的方法(W/O/O/O)。
发明的内容 本发明的目的在于克服现有技术中的不足，提供一种油包油—油包水制备微球的方法。使其制备的微球表面光滑圆整，均匀度好，溶液规整无粘连。可以大大提高对水溶性好的物质的在微球中等的包封率。
本发明是通过以下技术方案实现的，本发明将含有水溶性物质的水溶液添加到制备微球的材料有机溶剂中形成油包水，然后再把它添加到另一有机相形成油包油，最后把它们滴加到水相中固化，然后冻干收集微球。
本发明具体包括以下步骤 ①将水溶性的物质或添加各种保护该水溶性物质的物质形成水相； ②将微囊材料溶于有机溶剂中形成油相—1； ③将完成步骤①的溶液滴加到②的油相—1，并搅拌使之形成均匀的乳液； ④将完成步骤③的乳液滴加到另一油相(油相—2)，并搅拌使之形成微球； ⑤将完成步骤④的溶液滴加到另一油相—3中并搅拌，使微球固化并离心收集洗涤冻干得微球，所述微球含有药物、微囊材料、药用辅料，它们重量百分比含量为药物为0.01-50％、微囊材料为20-80％、药用辅料为0-10％。
所述的水溶性的物质为水溶性的药物指蛋白多肽类药物、DNA、RNA、等基因物质、抗体、疫苗、病毒和脂质体细胞、及化学试剂如各种水溶性的染料、或荧光物质。
所述的水溶性的物质，其重量百分比浓度为0.02％-50％(w/w)之间；以1％-30％(w/w)为佳。
所述的药用辅料为保护该水溶性物质的物质。
所述的保护该水溶性物质的物质为多糖类物质、多羟基类化合物、小糖类物质、氨基酸类物质、或无机盐类物质。
所述的多糖类物质为葡聚糖、海藻酸钠、壳聚糖、淀粉、纤维素、或环糊精物质； 所述的多羟基类化合物为聚乙二醇、聚乙烯醇、聚环氧乙烷、或聚吡咯烷酮； 所述的小糖类物质为蔗糖、海藻糖、甘露醇、山梨醇、或乳糖。
所述的无机盐类物质为锌盐、钙盐、铜盐、镁盐、或钼盐。
所述的氨基酸类物质为甘氨酸、赖氨酸、或组氨酸。
所述的保护该水溶性物质的物质的重量百分比浓度为0％-50％(w/w)；以1％-20％(w/w)为佳。
所述的油相—1为二氯甲烷、乙酸乙酯、乙腈、或它们混合物微囊材料的有机溶液。
所述的微囊材料为聚乳酸(PLA)、聚乳酸-聚羟基乙酸(PLGA)、PLA和PLGA的任意组合、硅像胶、聚四氟乙烯、聚氯乙烯、聚乙烯、聚丙烯、聚苯乙烯、聚对苯二甲酸乙二醇酯、聚碳酸酯、卡波母、透明质酸、明胶、胶原蛋白、聚氰基丙烯酸酯、聚膦腈、聚磷酸酯、纤维蛋白原、纤维蛋白、聚乙二醇-聚乳酸(PLA-PEG)、聚乙二醇-聚羟基乙酸(PLGA-PEG)、聚羟基乙酸-聚乙二醇-聚羟基乙酸(PLGA-PEG-PLGA)、聚乳酸-聚乙二醇-聚乳酸(PLA-PEG-PLA)、聚乳酸和聚乳酸-聚羟基乙酸的任意组合、聚碳酸酯、卡波母、透明质酸、明胶、胶原蛋白、聚乙交酯、聚乙二醇—聚己内酯(PEG-PCL)、聚己内酯聚—乙二醇—聚己内酯(PCL-PEG-PCL)、或聚己内酯(PCL)； 所述的微囊材料占整个微球的的百分含量为20—80％(w/w)，其中以50—80％(w/w)为佳； 所述的油相—2为乙醇、乙二醇、甘油、丙二醇及小分子的聚乙二醇或添加各种表面活性剂物质，及它们的混合物；以乙二醇和甘油及丙二醇的混合物为佳； 所述的油相—3为乙醇、乙醇和丙二醇的任意比例混和物； 所述的表面活性剂为聚乙烯醇(PVA)的浓度为0.5—10％(w/w)或含0.5—10％(w/w)氯化钠等盐溶液、聚乙二醇(PEG)的浓度为0.5—20％(w/w)或含0.5—10％(w/w)氯化钠等盐溶液、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)浓度为0.5—20％(w/w)或含0.5—10％(w/w)氯化钠等盐溶液、泊洛沙姆(poloxmer)浓度为0.5—20％(w/w)或含0.5—10％(w/w)氯化钠等盐溶液、聚三梨醇的浓度为0.5—20％(w/w)或含0.5—10％(w/w)氯化钠等盐溶液、或乙基纤维素(EC)浓度为0.5—20％(w/w)或含0.5—10％(w/w)氯化钠等盐溶液； 所述微球的粒径为0.1-500μm，以1-100μm为佳； 本发明所得到的微球，可以用于其所担载的治疗物质的缓释微球剂型、植入剂型或吸入剂型； 所述的吸入剂型，为载有治疗物质的多糖本身，其粒径为1μm-5μm。
本发明先分别将水溶性的物质或水溶性的物质和保护水溶性活性的物质溶解于水中形成溶液，再把它和油相—1相混形成均匀的乳液。然后将该乳液滴加到另一油相(油相—2)丙搅拌形成微球，再把微球滴加到水相中固化，固化后收集微球冻干。
本发明可以根据实际需要制备各种粒径(1μm-500μm)的微球方法。采用本发明方法制备的微粒表面光滑圆整，溶液规整无粘连，粒径可以根据需要进行调控从1μm到500μm。
本发明选择了合适的两个油相，可以提高水溶性的物质的包封率，及提高水溶性的物质的活性。可以避免这些对药物的治疗的作用影响，尤其是那些物理化学性质不稳定的，如生物大分子药物蛋白药物、多肽等。微粒的表面光滑圆整，溶液规整无粘连，粒径可以根据需要进行调控从1μm到500μm，径距分布较窄，其冻干粉剂为白色细腻，疏松，不塌陷，不粘连，再分散性良好。可以运用到各种药物缓释微球的制备及疫苗的佐剂。
具体实施例方式 下面对本发明的实施例作详细说明本实施例在以本发明技术方案为前提下进行实施，给出了详细的实施方式和具体的操作过程，但本发明的保护范围不限于下述的实施例。
实施例一载有水溶性的物质溶液PLGA微球的制备 (1)制备水溶性的物质溶液，把水溶性的物质直接溶解于水中或通过添加辅料使药物溶解于水中； 本实施例中，采用的水溶性的物质是肿瘤化疗类药物(肿瘤化疗药物选自阿霉素、环磷酰胺、更生霉素、博莱霉素、柔红霉素、阿霉素、表阿霉素、丝裂霉素、甲氨蝶呤、氟尿嘧啶、卡铂、卡莫司汀(BCNU)、司莫司汀、顺铂、依托泊苷、喜树碱及其衍生物、苯芥胆甾醇、紫杉醇及其衍生物、多西紫杉醇及其衍生物、长春碱、长春新碱、它莫西芬、依托泊苷、哌泊舒凡、环磷酰胺或氟他胺及其衍生物；缓释微球可载有上述药物中的一种或几种；)或抗生素类药物(抗生素类药物选自环孢素、左氧氟沙星、氧氟沙星、或盐酸依匹斯汀；缓释微球可载有上述药物中的一种或几种)。
本实施例中，采用的保护该水溶性物质的物质是葡聚糖、海藻酸钠、壳聚糖、淀粉、纤维素、环糊精、聚乙二醇、聚乙烯醇、聚环氧乙烷、聚吡咯烷酮、蔗糖、海藻糖、甘露醇、山梨醇、乳糖、甘氨酸、赖氨酸、锌盐、钙盐、铜盐、镁盐、钼盐、或组氨酸上述药物中的一种或几种； 本实施例中，具体配比为 (2)按照水溶性物质的溶液和PLGA的二氯甲烷、乙腈或乙酸乙酯溶液重量比为11、12、13、14、15、16、17、18、19、110等比例搅拌、漩涡或超声1—5分钟形成均匀得混悬液即油包固体(W/O1)乳液； (3)把步骤(1)得乳液滴加到油相—2并搅拌、漩涡或超声0.1—5分钟形成复乳； (4)把步骤(2)的复乳滴加到200ml的乙醇中并搅拌2—4小时； (5)把步骤(3)得到的离心收集微球，并用水洗涤3—5次，冻干后得到微球。
本实施例得到的微球，其具体的组分配比如下表 这种方法制备的微球可以用于需要长期治疗的疾病，尤其是需要局部治疗的疾病如肿瘤的血管栓塞微球。这种方法制备的微球包封率高最少可以达到70％以上，突释小和几乎没有不完全释放。
实施例二载有水溶性的物质溶液PLGA微球的制备 (1)制备水溶性的物质溶液，把水溶性的物质溶液直接溶解于水中或通过添加保护该水溶性物质的物质溶解于水中； 本实施例中，采用的水溶性的物质是促红细胞生成素(EPO)、重组人粒细胞集落刺激因子(G-CSF)、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、疫苗、干扰素(INF)、生长激素(GH)、胰岛素(Insulin)、表皮生长因子(EGF)、成纤维细胞生长因子(FGF)、转化生长因子(TGF-β)、胰岛素样生长因子(IGF)、血管内皮细胞生长因子(VEGF)、血小板生长因子(PDGF)、内皮生长因子(ECGF)、神经生长因子(NGF)、骨衍生性生长因子(BDGF)、骨形成蛋白(BMP)、组织多肽抗原(TPA)、抗体(antibody)、凝血因子VIII(VIII)、IX遗传因子、反义核苷酸(anti-RNA)、小分子RNA(RNAi)、SiRNA、基因(DNA)；缓释微球可载有上述药物中的一种或几种。
本实施例中，采用的保护该水溶性物质的物质是葡聚糖、海藻酸钠、壳聚糖、淀粉、纤维素、环糊精、聚乙二醇、聚乙烯醇、聚环氧乙烷、聚吡咯烷酮、蔗糖、海藻糖、甘露醇、山梨醇、乳糖、甘氨酸、赖氨酸、或组氨酸上述药物中的一种或几种； 具体配比为 (2)按照水溶性的物质和PLGA的二氯甲烷、乙腈或乙酸乙酯溶液为11、12、13、14、15、16、17、18、19、110等比例搅拌、漩涡或超声1—5分钟形成均匀得混悬液即油包水(W/O1)乳液； 步骤(3)、(4)、(5)与实施例一相同。
本实施例得到的微球，其具体的组分配比如下表 这种方法制备的微球可以用于需要频繁注射给药、长期治疗的疾病，尤其是需要局部治疗的疾病如肿瘤、各种病因引起的贫血、侏儒等重大疾病的治疗。这种方法制备的微球包封率高最少可以达到70％以上，突释小和几乎没有不完全释放，可以达到零级释放。
实施例三载有水溶性的物质溶液PLA微球的制备 步骤(1)与实施例一相同。
(2)按照水溶性的物质溶液和PLA的二氯甲烷、乙腈或乙酸乙酯溶液为11、12、13、14、15、16、17、18、19、110等比例搅拌、漩涡或超声1—5分钟形成均匀得混悬液即油包水(W/O1)乳液； 步骤(3)、(4)、(5)与实施例一相同。
本实施例得到的微球，其具体的组分配比如下表 这种方法制备的微球可以用于需要长期治疗的疾病，尤其是需要局部治疗的疾病如肿瘤的血管栓塞微球。这种方法制备的微球包封率高最少可以达到70％以上，突释小和几乎没有不完全释放。
实施例四载有水溶性的物质溶液PLA微球的制备 步骤(1)与实施例二相同。
(2)按照水溶性的物质溶液和PLA的二氯甲烷、乙腈或乙酸乙酯溶液为11、12、13、14、15、16、17、18、19、110等比例搅拌、漩涡或超声1—5分钟形成均匀得混悬液即油包水(W/O1)乳液； 步骤(3)、(4)、(5)与实施例一相同。
本实施例得到的微球，其具体的组分配比如下表 这种方法制备的微球可以用于需要频繁注射给药、长期治疗的疾病，尤其是需要局部治疗的疾病如肿瘤、各种病因引起的贫血、侏儒等重大疾病的治疗。这种方法制备的微球包封率高最少可以达到70％以上，突释小和几乎没有不完全释放，可以达到零级释放。
实施例五载有水溶性的物质溶液PGA微球的制备 步骤(1)与实施例一相同。
(2)按照水溶性的物质溶液和PGA的二氯甲烷、乙腈或乙酸乙酯溶液为11、12、13、14、15、16、17、18、19、110等比例搅拌、漩涡或超声1—5分钟形成均匀得混悬液即油包水(W/O1)乳液； 步骤(3)、(4)、(5)与实施例一相同。
本实施例得到的微球，其具体的组分配比如下表 这种方法制备的微球可以用于需要长期治疗的疾病，尤其是需要局部治疗的疾病如肿瘤的血管栓塞微球。这种方法制备的微球包封率高最少可以达到70％以上，突释小和几乎没有不完全释放。
实施例六载有水溶性的物质溶液PGA微球的制备 步骤(1)与实施例二相同。
(2)按照水溶性的物质溶液和PGA的二氯甲烷、乙腈或乙酸乙酯溶液为11、12、13、14、15、16、17、18、19、110等比例搅拌、漩涡或超声1—5分钟形成均匀得混悬液即油包水(W/O1)乳液； 步骤(3)、(4)、(5)与实施例一相同。
本实施例得到的微球，其具体的组分配比如下表 这种方法制备的微球可以用于需要频繁注射给药、长期治疗的疾病，尤其是需要局部治疗的疾病如肿瘤、各种病因引起的贫血、侏儒等重大疾病的治疗。这种方法制备的微球包封率高最少可以达到70％以上，突释小和几乎没有不完全释放，可以达到零级释放。
实施例七载有水溶性的物质溶液聚己内酯微球的制备 步骤(1)与实施例一相同。
(2)按照水溶性的物质溶液和聚己内酯的二氯甲烷、乙腈或乙酸乙酯溶液重量比为11、12、13、14、15、16、17、18、19、110等比例搅拌、漩涡或超声1—5分钟形成均匀得混悬液即油包固体(W/O1)乳液； 步骤(3)、(4)、(5)与实施例一相同。
本实施例得到的微球，其具体的组分配比如下表 这种方法制备的微球可以用于需要长期治疗的疾病，尤其是需要局部治疗的疾病如肿瘤的血管栓塞微球。这种方法制备的微球包封率高最少可以达到70％以上，突释小和几乎没有不完全释放。
实施例八载有水溶性的物质溶液聚己内酯微球的制备 步骤(1)与实施例二相同。
(2)按照水溶性的物质溶液和聚己内酯的二氯甲烷、乙腈或乙酸乙酯溶液为11、12、13、14、15、16、17、18、19、110等比例搅拌、漩涡或超声1—5分钟形成均匀得混悬液即油包水(W/O1)乳液； 步骤(3)、(4)、(5)与实施例一相同。
本实施例得到的微球，其具体的组分配比如下表 这种方法制备的微球可以用于需要频繁注射给药、长期治疗的疾病，尤其是需要局部治疗的疾病如肿瘤、各种病因引起的贫血、侏儒等重大疾病的治疗。这种方法制备的微球包封率高最少可以达到70％以上，突释小和几乎没有不完全释放，可以达到零级释放。
实施例九载有水溶性的物质溶液PLA—PEG微球的制备 步骤(1)与实施例一相同。
(2)按照水溶性的物质溶液和PLA—PEG的二氯甲烷、乙腈或乙酸乙酯溶液重量比为11、12、13、14、15、16、17、18、19、110等比例搅拌、漩涡或超声1—5分钟形成均匀得混悬液即油包固体(W/O1)乳液； 步骤(3)、(4)、(5)与实施例一相同。
本实施例得到的微球，其具体的组分配比如下表 这种方法制备的微球可以用于需要长期治疗的疾病，尤其是需要局部治疗的疾病如肿瘤的血管栓塞微球。这种方法制备的微球包封率高最少可以达到70％以上，突释小和几乎没有不完全释放。
实施例十载有水溶性的物质溶液PLA—PEG微球的制备 步骤(1)与实施例二相同。
(2)按照水溶性的物质溶液和PLA—PEG的二氯甲烷、乙腈或乙酸乙酯溶液为11、12、13、14、15、16、17、18、19、110等比例搅拌、漩涡或超声1—5分钟形成均匀得混悬液即油包水(W/O1)乳液； 步骤(3)、(4)、(5)与实施例一相同。
本实施例得到的微球，其具体的组分配比如下表 这种方法制备的微球可以用于需要频繁注射给药、长期治疗的疾病，尤其是需要局部治疗的疾病如肿瘤、各种病因引起的贫血、侏儒等重大疾病的治疗。这种方法制备的微球包封率高最少可以达到70％以上，突释小和几乎没有不完全释放，可以达到零级释放。
实施例十一载有水溶性的物质溶液PLGA—PEG微球的制备 步骤(1)与实施例一相同。
(2)按照水溶性的物质溶液和PLGA—PEG的二氯甲烷、乙腈或乙酸乙酯溶液重量比为11、12、13、14、15、16、17、18、19、110等比例搅拌、漩涡或超声1—5分钟形成均匀得混悬液即油包固体(W/O1)乳液； 步骤(3)、(4)、(5)与实施例一相同。
本实施例得到的微球，其具体的组分配比如下表 这种方法制备的微球可以用于需要长期治疗的疾病，尤其是需要局部治疗的疾病如肿瘤的血管栓塞微球。这种方法制备的微球包封率高最少可以达到70％以上，突释小和几乎没有不完全释放。
实施例十二载有水溶性的物质溶液PLGA—PEG微球的制备 步骤(1)与实施例二相同。
(2)按照水溶性的物质溶液和PLGA—PEG的二氯甲烷、乙腈或乙酸乙酯溶液为11、12、13、14、15、16、17、18、19、110等比例搅拌、漩涡或超声1—5分钟形成均匀得混悬液即油包水(W/O1)乳液； 步骤(3)、(4)、(5)与实施例一相同。
本实施例得到的微球，其具体的组分配比如下表 这种方法制备的微球可以用于需要频繁注射给药、长期治疗的疾病，尤其是需要局部治疗的疾病如肿瘤、各种病因引起的贫血、侏儒等重大疾病的治疗。这种方法制备的微球包封率高最少可以达到70％以上，突释小和几乎没有不完全释放，可以达到零级释放。
实施例十三载有水溶性的物质溶液PLA—PEG—PLA微球的制备 步骤(1)与实施例一相同。
(2)按照水溶性的物质溶液和PLA—PFG—PLA的二氯甲烷、乙腈或乙酸乙酯溶液重量比为11、12、13、14、15、16、17、18、19、1∶10等比例搅拌、漩涡或超声1—5分钟形成均匀得混悬液即油包固体(W/O1)乳液； 步骤(3)、(4)、(5)与实施例一相同。
本实施例得到的微球，其具体的组分配比如下表 这种方法制备的微球可以用于需要长期治疗的疾病，尤其是需要局部治疗的疾病如肿瘤的血管栓塞微球。这种方法制备的微球包封率高最少可以达到70％以上，突释小和几乎没有不完全释放。
实施例十四载有水溶性的物质溶液PLA—PEG—PLA微球的制备 步骤(1)与实施例二相同。
(2)按照水溶性的物质溶液和PEG—PLA—PEG的二氯甲烷、乙腈或乙酸乙酯溶液为11、12、13、14、15、16、17、18、19、110等比例搅拌、漩涡或超声1—5分钟形成均匀得混悬液油包水(W/O1)乳液； 步骤(3)、(4)、(5)与实施例一相同。
本实施例得到的微球，其具体的组分配比如下表 这种方法制备的微球可以用于需要频繁注射给药、长期治疗的疾病，尤其是需要局部治疗的疾病如肿瘤、各种病因引起的贫血、侏儒等重大疾病的治疗。这种方法制备的微球包封率高最少可以达到70％以上，突释小和几乎没有不完全释放，可以达到零级释放。
实施例十五载有水溶性的物质溶液PLGA—PEG—PLGA微球的制备 步骤(1)与实施例一相同。
(2)按照水溶性的物质溶液和PLGA—PEG—PLGA的二氯甲烷、乙腈或乙酸乙酯溶液为11、12、13、14、15、16、17、18、19、110等比例搅拌、漩涡或超声1—5分钟形成均匀得混悬液即油包固体(W/O1)乳液； 步骤(3)、(4)、(5)与实施例一相同。
本实施例得到的微球，其具体的组分配比如下表 这种方法制备的微球可以用于需要长期治疗的疾病，尤其是需要局部治疗的疾病如肿瘤的血管栓塞微球。这种方法制备的微球包封率高最少可以达到70％以上，突释小和几乎没有不完全释放。
实施例十六载有水溶性的物质溶液PLGA—PFG—PLGA微球的制备 步骤(1)与实施例二相同。
(2)按照水溶性的物质溶液和PLGA—PEG—PLGA的二氯甲烷、乙腈或乙酸乙酯溶液为11、12、13、14、15、16、17、18、19、110等比例搅拌、漩涡或超声1—5分钟形成均匀得混悬液即油包水(W/O1)乳液； 步骤(3)、(4)、(5)与实施例一相同。
本实施例得到的微球，其具体的组分配比如下表 这种方法制备的微球可以用于需要频繁注射给药、长期治疗的疾病，尤其是需要局部治疗的疾病如肿瘤、各种病因引起的贫血、侏儒等重大疾病的治疗。这种方法制备的微球包封率高最少可以达到70％以上，突释小和几乎没有不完全释放，可以达到零级释放。
实施例十七载有水溶性的物质溶液PEG—PLA—PEG微球的制备 步骤(1)与实施例一相同。
(2)按照水溶性的物质溶液和PFG—PLA—PEG的二氯甲烷、乙腈或乙酸乙酯溶液重量比为11、12、13、14、15、16、17、18、19、110等比例搅拌、漩涡或超声1—5分钟形成均匀得混悬液即油包固体(W/O1)乳液； 步骤(3)、(4)、(5)与实施例一相同。
本实施例得到的微球，其具体的组分配比如下表 这种方法制备的微球可以用于需要长期治疗的疾病，尤其是需要局部治疗的疾病如肿瘤的血管栓塞微球。这种方法制备的微球包封率高最少可以达到70％以上，突释小和几乎没有不完全释放。
实施例十八载有水溶性的物质溶液PEG—PLA—PEG微球的制备 步骤(1)与实施例二相同。
(2)按照水溶性的物质溶液和PEG—PLA—PEG的二氯甲烷、乙腈或乙酸乙酯溶液为11、12、13、14、15、16、17、18、19、110等比例搅拌、漩涡或超声1—5分钟形成均匀得混悬液即油包水(W/O1)乳液； 步骤(3)、(4)、(5)与实施例一相同。
本实施例得到的微球，其具体的组分配比如下表 这种方法制备的微球可以用于需要频繁注射给药、长期治疗的疾病，尤其是需要局部治疗的疾病如肿瘤、各种病因引起的贫血、侏儒等重大疾病的治疗。这种方法制备的微球包封率高最少可以达到70％以上，突释小和几乎没有不完全释放，可以达到零级释放。
实施例十九载有水溶性的物质溶液PEG—PLGA—PEG微球的制备 步骤(1)与实施例一相同。
(2)按照水溶性的物质溶液和PEG—PLGA—PFG的二氯甲烷、乙腈或乙酸乙酯溶液重量比为11、12、13、14、15、16、17、18、19、110等比例搅拌、漩涡或超声1—5分钟形成均匀得混悬液即油包固体(W/O1)乳液； 步骤(3)、(4)、(5)与实施例一相同。
本实施例得到的微球，其具体的组分配比如下表 这种方法制备的微球可以用于需要长期治疗的疾病，尤其是需要局部治疗的疾病如肿瘤的血管栓塞微球。这种方法制备的微球包封率高最少可以达到70％以上，突释小和几乎没有不完全释放。
实施例二十载有水溶性的物质溶液PEG—PLGA—PEG微球的制备 步骤(1)与实施例二相同。
(2)按照水溶性的物质溶液和PEG—PLGA—PEG的二氯甲烷、乙腈或乙酸乙酯溶液为11、12、13、14、15、16、17、18、19、110等比例搅拌、漩涡或超声1—5分钟形成均匀得混悬液即油包水(W/O1)乳液； 步骤(3)、(4)、(5)与实施例一相同。
本实施例得到的微球，其具体的组分配比如下表 这种方法制备的微球可以用于需要频繁注射给药、长期治疗的疾病，尤其是需要局部治疗的疾病如肿瘤、各种病因引起的贫血、侏儒等重大疾病的治疗。这种方法制备的微球包封率高最少可以达到70％以上，突释小和几乎没有不完全释放，可以达到零级释放。
实施例二十一载有水溶性的物质溶液透明质酸微球的制备 步骤(1)与实施例一相同。
(2)按照水溶性的物质溶液和透明质酸的二氯甲烷、乙腈或乙酸乙酯溶液重量比为11、12、13、14、15、16、17、18、19、110等比例搅拌、漩涡或超声1—5分钟形成均匀得混悬液即油包固体(W/O1)乳液； 步骤(3)、(4)、(5)与实施例一相同。
本实施例得到的微球，其具体的组分配比如下表 这种方法制备的微球可以用于需要长期治疗的疾病，尤其是需要局部治疗的疾病如肿瘤的血管栓塞微球。这种方法制备的微球包封率高最少可以达到70％以上，突释小和几乎没有不完全释放。
实施例二十二载有水溶性的物质溶液透明质酸微球的制备 步骤(1)与实施例二相同。
(2)按照水溶性的物质溶液和透明质酸的二氯甲烷、乙腈或乙酸乙酯溶液为11、12、13、14、15、16、17、18、19、110等比例搅拌、漩涡或超声1—5分钟形成均匀得混悬液即油包水(W/O1)乳液； 步骤(3)、(4)、(5)与实施例一相同。
本实施例得到的微球，其具体的组分配比如下表 这种方法制备的微球可以用于需要频繁注射给药、长期治疗的疾病，尤其是需要局部治疗的疾病如肿瘤、各种病因引起的贫血、侏儒等重大疾病的治疗。这种方法制备的微球包封率高最少可以达到70％以上，突释小和几乎没有不完全释放，可以达到零级释放。
实施例二十三载有水溶性的物质溶液透明质酸微球的制备 步骤(1)与实施例一相同。
(2)按照水溶性的物质溶液和明胶的二氯甲烷、乙腈或乙酸乙酯溶液重量比为11、12、13、14、15、16、17、18、19、110等比例搅拌、漩涡或超声1—5分钟形成均匀得混悬液即油包固体(W/O1)乳液； 步骤(3)、(4)、(5)与实施例一相同。
本实施例得到的微球，其具体的组分配比如下表 这种方法制备的微球可以用于需要长期治疗的疾病，尤其是需要局部治疗的疾病如肿瘤的血管栓塞微球。这种方法制备的微球包封率高最少可以达到70％以上，突释小和几乎没有不完全释放。
实施例二十四载有水溶性的物质溶液明胶微球的制备 步骤(1)与实施例二相同。
(2)按照水溶性的物质溶液和明胶的二氯甲烷、乙腈或乙酸乙酯溶液为11、12、13、14、15、16、17、18、19、110等比例搅拌、漩涡或超声1—5分钟形成均匀得混悬液即油包水(W/O1)乳液； 步骤(3)、(4)、(5)与实施例一相同。
本实施例得到的微球，其具体的组分配比如下表 这种方法制备的微球可以用于需要频繁注射给药、长期治疗的疾病，尤其是需要局部治疗的疾病如肿瘤、各种病因引起的贫血、侏儒等重大疾病的治疗。这种方法制备的微球包封率高最少可以达到70％以上，突释小和几乎没有不完全释放，可以达到零级释放。
权利要求
1、一种油包油—油包油—油包水制备微球的方法，其特征在于，包括以下步骤
①将水溶性的物质或添加各种保护该水溶性物质活性的物质形成水相；
②将微囊材料溶于有机溶剂中形成油相—1；
③将完成步骤①的溶液滴加到②的油相—1，并搅拌使之形成均匀的乳液；
④将完成步骤③的乳液滴加到另一油相—2，并搅拌使之形成微球；
⑤将完成步骤④的溶液滴加到另一油相—3中并搅拌，使微球固化并离心收集洗涤冻干得微球，所述微球含有药物、微囊材料、保护该水溶性物质的物质，它们重量百分比含量为药物为0.01-50％、微囊材料为20-80％、药用辅料为0-10％。
2、根据权利要求1所述的油包油—油包油—油包水制备微球的方法，其特征是，所述的水溶性的物质为水溶性的药物指蛋白多肽类药物、DNA、RNA、抗体、疫苗、病毒和脂质体细胞或化学试剂，其重量百分比浓度为0.02％-50％。
3、根据权利要求2所述的油包油—油包油—油包水制备微球的方法，其特征是，所述的水溶性的物质，其重量百分比浓度为1％-30％。
4、根据权利要求1所述的油包油—油包油—油包水制备微球的方法，其特征是，所述的保护该水溶性物质的物质为多糖类物质、多羟基类化合物、小糖类物质、氨基酸类物质、或无机盐类物质，保护该水溶性物质的物质的重量百分比浓度为0％-50％，其中
所述的多糖类物质为葡聚糖、海藻酸钠、壳聚糖、淀粉、纤维素、或环糊精物质；
所述的多羟基类化合物为聚乙二醇、聚乙烯醇、聚环氧乙烷、或聚吡咯烷酮；
所述的小糖类物质为蔗糖、海藻糖、甘露醇、山梨醇、或乳糖；
所述的无机盐类物质为锌盐、钙盐、铜盐、镁盐、或钼盐；
所述的氨基酸类物质为甘氨酸、赖氨酸、或组氨酸。
5、根据权利要求4所述的油包油—油包油—油包水制备微球的方法，其特征是，所述的保护该水溶性物质的物质的重量百分比浓度为1％-20％。
6、根据权利要求1所述的油包油—油包油—油包水制备微球的方法，其特征是，所述的油相—1为二氯甲烷、乙酸乙酯、乙腈、或它们混合物微囊材料的有机溶液。
7、根据权利要求1或6所述的油包油—油包油—油包水制备微球的方法，其特征是，所述的微囊材料为聚乳酸、聚乳酸-聚羟基乙酸、聚乳酸和聚乳酸-聚羟基乙酸的组合、硅像胶、聚四氟乙烯、聚氯乙烯、聚乙烯、聚丙烯、聚苯乙烯、聚对苯二甲酸乙二醇酯、聚碳酸酯、卡波母、透明质酸、明胶、胶原蛋白、聚氰基丙烯酸酯、聚膦腈、聚磷酸酯、纤维蛋白原、纤维蛋白、聚乙二醇-聚乳酸、聚乙二醇-聚羟基乙酸、聚羟基乙酸-聚乙二醇-聚羟基乙酸、聚乳酸-聚乙二醇-聚乳酸、聚乙交酯、聚乙二醇—聚己内酯、聚己内酯聚—乙二醇—聚己内酯、或聚己内酯中一种。
8、根据权利要求1所述的油包油—油包油—油包水制备微球的方法，其特征是，所述的微囊材料占整个微球的的重量百分含量为50—80％。
9、根据权利要求1所述的油包油—油包油—油包水制备微球的方法，其特征是，所述的油相—2为乙醇、乙二醇、甘油、丙二醇及小分子的聚乙二醇或添加各种表面活性剂物质，及它们的混合物，其中
所述的表面活性剂为聚乙烯醇的重量浓度为0.5—10％或含0.5—10％重量氯化钠盐溶液、聚乙二醇的重量浓度为0.5—20％或含0.5—10％重量氯化钠盐溶液、聚乙烯吡咯烷酮重量浓度为0.5—20％或含0.5—10％重量氯化钠盐溶液、泊洛沙姆重量浓度为0.5—20％或含0.5—10％重量氯化钠盐溶液、聚三梨醇重量浓度为0.5—20％或含0.5—10％重量氯化钠盐溶液、或乙基纤维素重量浓度为0.5—20％(w/w)或含0.5—10％重量氯化钠盐溶液。
10、根据权利要求1所述的油包油—油包油—油包水制备微球的方法，其特征是，所述的油相—3为乙醇、乙醇和丙二醇的任意比例混和物。
全文摘要
本发明涉及一种制药技术领域的油包油-油包油-油包水制备微球的方法，步骤①将水溶性的物质或添加各种保护该水溶性物质活性的物质形成水相；②将微囊材料溶于有机溶剂中形成油相-1；③将步骤①的溶液滴加到②的油相-1，并搅拌使之形成均匀的乳液；④将步骤③的乳液滴加到另一油相-2，并搅拌使之形成微球；⑤将步骤④的溶液滴加到另一油相-3中并搅拌，使微球固化并离心收集洗涤冻干得微球，所述微球重量百分比为药物为0.01-50％、微囊材料为20-80％、药用辅料为0-10％。本发明制备的微球表面光滑圆整，均匀度好，微球规整无粘连，粒径的大小可调，包封率高，突释和不完全释放小。
文档编号A61K9/19GK101474160SQ20091004500
公开日2009年7月8日 申请日期2009年1月8日 优先权日2009年1月8日
发明者拓 金, 袁伟恩, 飞 吴, 睿 刘, 黄碧兰 申请人:上海交通大学, 上海纳米技术及应用国家工程研究中心有限公司