专利名称：：蓝萼香茶菜中二萜类化合物在制备抗肝炎病毒药物中的应用的制作方法
技术领域：
：本发明涉及医药
技术领域：
，是蓝萼香茶菜中二萜类化合物蓝萼乙素、蓝萼丙素、蓝萼丁素、蓝萼戊素和蓝萼己素用于制备抗肝炎药物的用途。
背景技术：
：蓝萼乙素(GlaucocalyxinB)、蓝萼丙素(GlaucocalyxinC)、蓝萼丁素(GlaucocalyxinD)、蓝萼戊素(GlaucocalyxinE)和蓝萼己素(GlaucocalyxinF)是从唇形科香茶菜属植物蓝萼香茶菜iaZ^os/ay";om'ca(Burm.f.)Haravar.g7awcoc一x(Maxim.)Hara的全草中分离得到的贝壳杉烷型二萜类化合物桂明玉，等。蓝萼香茶菜化学成分研究II，中国药学杂志，2000;35(6):375;ZhaoBaoXiang(项昭保)，HaiShengChen(陈海生)，etal.Twonewditerpenoidsfromi"Mos7'a力/om'cavar.g7awcoca/yx，ChineseChemicalLetter2008;19:852-854。它们的化学结构通式如下其中，基团R,选自H、COCH3;R2选自COCH3、H;113选自H、0;R4选自OH、O;Rs选自CH2、H;R6选自CH2、CH3;117选自O、H;R8选自0、OH;各化合物的基团搭配分别为蓝萼乙素RpHRfCOCH3;R3,R4-0;R5，R6-CH2;R7，Rs-0蓝萼丁素R!-COCH3R2=H;R3，R4-0;R5，R6=CH2;R7，R8=0蓝萼丙素R!-R2-H;R3，R4=0;R5，R6=CH2;R7，=H，Rs=OH蓝萼戊素R!-R2-H;R3，R^0;R5，-H，R^CH3;R7，R80蓝萼己素Rt-R2-H;R3-H;R4-0H;R5，-H，R^-CH3;R7，Rs-O至今未见有关上述化合物具有抗肝炎病毒作用的相关报道。发明内#本发明为二萜类化合物蓝萼乙素、蓝萼丙素、蓝萼丁素、蓝萼戊素和蓝萼己素提供一种制备抗肝炎药物的用途。本发明采用乙肝表面抗原(HBsAg)诊断试剂盒和乙肝核心抗原(HBeAg)诊断试剂盒对二萜类化合物蓝萼乙素、蓝萼丙素、蓝萼丁素、蓝萼戊素和蓝萼己素进行了抗乙肝表面抗原和乙肝核心抗原试验，结果发现，它们具有显著的抗乙肝病毒活性，因此可用于制备抗乙肝病毒的药物。本发明为寻求抗乙肝病毒药物提供了新的来源。具体实施例方式现结合体外实验，对本发明作详细描述。蓝萼乙素、蓝萼丙素、蓝萼丁素、蓝萼戊素和蓝萼己素抗乙肝病毒试验一、实验药物、试剂及材料1.化合物蓝萼乙素、蓝萼丙素、蓝萼丁素、蓝萼戊素和蓝萼己素从蓝萼香茶菜中提取分离方法见桂明玉，等。蓝萼香茶菜化学成分研究II，中国药学杂志，2000;35(6):375;ZhaoBaoXiang(项昭保)，HaiShengChen(陈海生)，etal.TwonewditerpenoidsfromiaWos7'a_/"/ow/cavar.g/awcoca/yx，ChineseChemicalLetter2008;19:852-854;ZhaoBaoXiang(项昭保)，HaiShengChen(陈海生)，etal.Diterpenoidsfrom及a6^w/"_/<3/om'caAsianJournalofChemistry2009;21:3;。2.立可读HBsAg诊断试剂盒(上海科华生物技术有限公司)3.立可读HBeAg诊断试剂盒(上海科华生物技术有限公司)4.细胞培养液，配制，其含10%胎牛血清，0.03%谷氨酰胺，G418390jig/ml，卡那霉素50U/ml，调pH至7.2;5.细胞消化液，配制，其含0.25%胰蛋白酶，用磷酸缓冲液配制；6.细胞系HepG2215，由提供，其为HBV-DNA克隆转染人肝癌细胞的2.2.15细胞系。二、实验方法按试剂盒的说明书操作。取处于对数生长期的H邻G2215细亂调整细胞浓度为2X105个/ml，取100lU种96孔板；药物不同浓度稀释培养24小时后加药，8天后取上清测表面抗原(HBsAg)和核心抗原(HBeAg)。(1)每孔加入待测标本50lU，设阴、阳性对照各2孔，每孔加入阴性对照(或阳性对照)各一滴，并设空白对照一孔。(2)每孔加入酶结合物1滴(空白对照孔除外)，充分混匀，封板，置37C孵育30分钟；(3)弃去孔内液体，洗涤液注满各孔，静置5秒，甩干，重复五次后拍干；(4)每孔加显色剂A液、B液各1滴，充分混匀，封板，置37C辉育15分钟；(5)每孔加入终止液1滴，混匀；(6)用酶标仪读数，取波长450nm，参考波长630nm，读取各孔读数。三.实验结果结果见表l、表2。表1蓝萼乙素、蓝萼丙素、蓝萼丁素、蓝萼戊素和蓝萼己素对乙肝表面抗原<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>由表1可见，蓝萼乙素、蓝萼丙素、蓝萼丁素、蓝萼戊素和蓝萼己素具有显著抑制乙肝表面抗原作用，说明它们具有抗肝炎病毒和保肝作用。表2蓝萼乙素、蓝萼丙素、蓝萼丁素、蓝萼戊素和蓝萼己素对乙肝核心抗原(HBeAg)抑制活'it(0/。)HBeAg10ug/ml20ug/ml50Pg/ml100ug/ml蓝萼乙素22.0838.2646.0649.70蓝萼丙素011.3823.1542.86蓝萼丁素15.2435.5645.7848.56蓝萼戊素24.0736.2444.0749.70蓝萼己素010.3520.1040.82由表2可见，蓝萼乙素、蓝萼丙素、蓝萼丁素、蓝萼戊素和蓝萼己素具有显著抑制乙肝核心抗原作用，说明它们具有抗肝炎病毒和保肝作用。上述实验结果表明，蓝萼乙素、蓝萼丙素、蓝萼丁素、蓝萼戊素和蓝萼己素具有显著的抗乙肝病毒活性，因此可用于制备抗肝炎病毒和保肝的药物。权利要求1、二萜类化合物蓝萼乙素、蓝萼丙素、蓝萼丁素、蓝萼戊素和蓝萼己素在制备抗肝炎药物的应用，所说二萜类化合物的化学结构通式如下其中，基团R1选自H、COCH3；R2选自COCH3、H；R3选自H、O；R4选自OH、O；R5选自CH2、H；R6选自CH2、CH3；R7选自O、H；R8选自O、OH；各化合物的基团搭配分别为蓝萼乙素R1＝HR2＝COCH3；R3，R4＝O；R5，R6＝CH2；R7，R8＝O；蓝萼丁素R1＝COCH3R2＝H；R3，R4＝O；R5，R6＝CH2；R7，R8＝O；蓝萼丙素R1＝R2＝H；R3，R4＝O；R5，R6＝CH2；R7，＝H，R8＝OH；蓝萼戊素R1＝R2＝H；R3，R4＝O；R5，＝H，R6＝CH3；R7，R8＝O；蓝萼己素R1＝R2＝H；R3＝H；R4＝OH；R5，＝H，R6＝CH3；R7，R8＝O。全文摘要本发明涉及医药
技术领域：
，是蓝萼香茶菜中二萜类化合物蓝萼乙素、蓝萼丙素、蓝萼丁素、蓝萼戊素和蓝萼己素用于制备抗肝炎药物的用途。本发明采用乙肝表面抗原(HBsAg)诊断试剂盒和乙肝核心抗原(HBeAg)诊断试剂盒对二萜类化合物蓝萼乙素、蓝萼丙素、蓝萼丁素、蓝萼戊素和蓝萼己素进行了抗乙肝表面抗原和乙肝核心抗原试验，结果发现，它们具有显著的抗乙肝病毒活性，因此可用于制备抗乙肝病毒的药物。文档编号A61P31/12GK101548965SQ20091004488公开日2009年10月7日申请日期2009年1月5日优先权日2009年1月5日发明者刘建国,赵卫权,金永生,陈海生,项昭保申请人:中国人民解放军第二军医大学