专利名称：一种三七三醇组皂苷提取物及其制备工艺的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种中药提取物及其制备方法，特别涉及中药三七的提取物三七三醇 皂苷提取物及其制备。
背景技术：
三七又名田七，为五加科人参属植物，是中医治疗心、脑血管疾病及各种血症的
“圣药”。《本草纲目》1578年明代李时珍著“味微甘而苦，颇似人参之味......故能治一
切血病。”《本草纲目拾遗》1765年清代赵学敏著“人参补气第一，三七补血第一，味同而功 亦等，故称人参三七，为中药之最珍贵者。”《中药大辞典》(1997年版)“三七功用补血，去 瘀损，止血衄，能通能补，功效最良，是方药中之最珍贵者。三七生吃，去瘀生新，消肿定痛， 并有止血不留瘀血，行血不伤新的优点；熟服可补益健体。”三七的药理作用主要表现为具有保护心脏，明显提高心肌供氧能力，增加冠脉流 量，防治脑缺血，降血压，扩张心脏血管，耐缺氧，改善心肌微循环，抗心律失常，抑制动脉硬 化和抗休克等作用；具有良好的止血功效，能增加血小板数目，提高造血功能，有明显的活 血和溶血作用；有明显的镇痛作用表现在还能提高脑力活动，增强学习和记忆能力；具有 延缓衰老及抗疲劳作用。此外，三七还有促进蛋白质和DNA、RNA的合成，保护肝脏，双向调 节血糖等功能。三七的药理试验及临床应用从本世纪三十年代开始，特别是近20多年来，国内外 学者对三七进行了广泛的药理研究和临床实验，取得了大量的新成果，使三七的医学应用 领域得到了有力的拓展。现代药理研究表明，三七含有多种类型的化学成分，皂苷为三七的主要有效成分 之一，具有多种药理活性，皂苷为达玛烷型。三七中总皂苷含量可达8% 12%，其中所含 单体有人参皂苷Rbl、Rb2、Re、Rd、Re、Rf、Rgl、Rg2、Rh等9种，但以Rbl和Rgl为主。皂苷 元为人参二醇和人参三醇，以人参三醇含量为高。但Rbl的苷元为20 (S)-原人参二醇，Rgl 的苷元为20 (S)-原人参三醇。以三七单体皂苷Rgl为代表的原人参三醇皂苷具有兴奋中枢神经、增强记忆、恢 复疲劳，促进DNA，RNA合成，抗血小板凝集等作用，该成分在三七中含量为1.9%。三七中 Rgl还具有免疫调节剂的作用，能使过高或过低的免疫反应恢复到正常，并活化人体内的淋 巴球细胞，但不干扰人体正常的免疫反应。三七皂苷Rgl还可提高大鼠肠上皮细胞线粒体 编码基因COX I，COX II的表达，对失血性休克肠上皮细胞线粒体损伤有明显的保护作用。 Rgl可以抑制肿瘤坏死因子平滑肌血管增生，藉以抑制肿瘤细胞汲取养分，达到抑制肿瘤生 长的目的。Rgl和雌激素即女性荷尔蒙(Estrogen)有类似相同的结构，可以和雌激素受体 结合，和雌激素产生竞争抑制，减少雌激素和受体结合所引起的乳癌及其降低发生率，同时 Rbl也具有相同的作用，也具有抑制血管新生的功能。以Rbl为代表的原人参二醇皂苷，促进神经纤维的形成并维持其功能，防止性功 能减退，抑制中枢神经系统，具有抗紧张、抑制中枢的镇静、安神、解热、促进睡眠作用；促进血清蛋白合成，促进胆留醇的合成与分解，抑制中性脂肪分解，抗溶血。该成分在三七中含 量达1.8%。三七花中的人参皂苷Rbl，Rb3，Rc和Rg3可以协同大肠癌治疗药物氟嘧啶二酮 (5-Fluorouracil)诱导大肠癌细胞细胞凋亡，以补氟嘧啶二酮无法诱导细胞凋亡之不足。三七中其它成分的作用如下人参皂苷Rb2抑制中枢神经，促进DNA，RNA合成，抗溶血，抗糖尿病。人参皂苷Rc 抑制中枢神经，促进DNA，RNA合成，促进血清蛋白合成。人参皂苷Rd增强免疫功能，抑制癌 细胞成长。人参皂苷Rh2促进癌细胞转化为非癌细胞。四环三萜达玛烷型原人参三醇组皂 苷人参皂甙Re抑制中枢神经，促进DNA，RNA合成。人参皂苷Rg2抗血小板凝集。人参皂苷 Rhl促进癌细胞转化为非癌细胞。三七皂苷Rl诱导白血病细胞分化。由于三七具有以上的优点，现在对三七的开发利用也成为医药领域内的热点。中 国专利200410073881. 6公开了一种三七三醇组皂苷组合物及制备方法。该专利采用大孔 吸附树脂分离，不能将三七三醇和三七二醇进行有效的分离，提取物中Rbl的含量过高。中国专利200610066204.0公开了一种用于治疗心血管疾病的三七总皂苷组合 物。该专利的提取工艺采用D型大孔吸附树脂分离，在该专利的工艺条件下提取的三七总 皂苷组合物Rgl35% -50%, Rbl20% -35%。三七三醇和三七二醇没有进行有效的分离， 三七二醇的含量过高。由于以上方法均使用大孔吸附树脂分离，三七三醇和三七二醇分离效果不佳。因 此，需要对现有提取技术进行改进，使三七三醇和三七二醇能够进行有效的分离，制备出 三七三醇含量高的提取物。
发明内容
为解决上述问题，本发明人在对三七三醇皂苷进行研究过程中，采用柱层析硅胶 柱分离，试验出一组新的三七三醇皂甙提取物及其制备方法，能够实现三七三醇和三七二 醇的有效分离。本发明的目的是提供一种治疗心脑血管疾病的含有三七三醇组皂苷提取物的中 药组合物。为实现所述上述目的，本发明采用以下技术方案一种三七三醇组皂苷提取物，其中含Rgl (C42H72O14)含量范围40 70%，三七皂苷 Rl (C47H80O18)含量范围10 30%，人参皂苷Re (C48H82O18)含量范围5 10%。优选地，Rgl含量范围50 65%，三七皂苷Rl含量范围15 25%，人参皂苷Re 含量范围5 10%。上述Rgl (C42H72O14)，三七皂苷Rl (C47H80O18)和人参皂苷Re含量总和小于100 %。优选地，本发明提取物中将总皂苷含量控制在80%以上；更优选地，将总皂苷含 量控制在85%以上。优选地，本发明提取物中Rbl不多于10% ；更优选地，Rbl不多于8%。优选地，本发明提取物中总皂苷含量控制在80%以上，Rbl不多于10%。优选地，本发明提取物中总皂苷含量控制在85%以上，Rbl不多于8%。上述三七三醇组皂苷提取物性状为淡黄色或棕褐色粉末，味苦；水分不超过
410%。本发明的另一个目的是提供一种治疗心脑血管疾病的含有上述三七三醇组皂苷 提取物的药物。所述的药物由上述三七三醇组皂苷提取物及药学上可接受的辅料制成。所述药物可接受的辅料可以选自甘露醇、山梨醇、焦亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、硫代 硫酸钠、盐酸半胱氨酸、巯基乙酸、蛋氨酸、维生素C、EDTA 二钠、EDTA钙钠，一价碱金属的碳 酸盐、醋酸盐、磷酸盐或其水溶液、盐酸、醋酸、硫酸、磷酸、氨基酸、氯化钠、氯化钾、乳酸钠、 木糖醇、麦芽糖、葡萄糖、果糖、右旋糖苷、甘氨酸、淀粉、蔗糖、乳糖、甘露糖醇、硅衍生物、纤 维素及其衍生物、藻酸盐、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、甘油、土温80、琼脂、碳酸钙、碳酸氢钙、表 面活性剂、聚乙二醇、环糊精、β-环糊精、磷脂类材料、高岭土、滑石粉、硬脂酸钙、硬脂酸镁寸。本发明的药物组合物可以是任何可药用的剂型，这些剂型包括本发明药物的活性组分可以加入制备不同剂型时所需的各种常规辅料，如崩解 剂、润滑剂、粘合剂等以常规的中药制剂方法制备成任何一种常用剂型，如粉针剂、片剂、丸 剂、散剂、颗粒剂、胶囊剂、糖浆、滴丸剂、口服液及其它药学上可以接受的剂型，如口含剂、 冲齐 、膏剂、丹剂、混悬剂、溶液剂、注射剂、栓剂、软膏剂、硬膏剂、霜剂、喷雾剂、滴剂、贴剂寸。本发明的另一目的是提供一种三七三醇组皂苷提取物的制备方法。本发明所述的 三七三醇组皂苷的制备方法包括以下步骤a.取三七，粉碎成粗颗粒，加4-40倍量45% -95%乙醇煎煮两次，每次1_3小时；b.合并煎液，70°C以下减压浓缩至药材量的1. 5倍体积；c.静置至室温，4000-6000rpm，20min，离心或100-300目过滤，分离出上清液；d.将上清液在70°C以下减压浓缩至干粉；优选地，55 70°C浓缩至干；e.干粉和硅胶重量比1 1 3拌样；上200 300目硅胶柱，样品与分离硅胶 重量比1 50 150，上样流速为0. 5BV/h;f.用乙酸乙酯和无水乙醇体积比3 5 1为洗脱剂，5-10倍柱体积流速1 1. 5BV/h洗脱，薄层层析法判断洗脱终点；g.洗脱液70°C以下真空减压浓缩至干或常规方法冻干、喷干，即得。由于三七的地下部分以含人参皂苷rgl和rbl为主，三七的地上部分只分离到原 人参二醇的皂苷，未发现五环三萜皂苷，因此本发明所用的材料优选的是三七根。上述制备方法中，优选步骤a中加6-8倍量70 %乙醇煎煮两次；更优选地，将原料 加乙醇提取时，第一次加6倍量70%乙醇，煎煮2. 5小时；第二次加5倍量70%乙醇，煎煮 2小时。上述制备方法中，优选步骤b、d、g中在55_70°C浓缩；优选地，70°C减压浓缩。步骤f中所述的薄层层析条件氯仿乙酸乙酯甲醇水体积比 15 40 22 10，下层展开后，用喷10%硫酸乙醇加热105°C显色。本发明所述的制备方法所提取的活性成分，Rgl和Rl的含量大大提高，能够实现 三醇组和二醇组的分离；Rbl含量微量；总皂苷提取物中成分明确，结构明确的成分占85% 以上；成品脱色后颜色比现有工艺浅，适宜做粉针。这些三七三醇皂苷提取物具有纯度高， 疗效好，质量稳定，同时制备方法分离效果佳，含量高，工艺简单，操作方便，成本低廉，适合
5工业化生产。
具体实施例方式本实施例是为了便于理解本发明，而不以任何方式限制本发明的权利要求和核心 内容实施例1取三七20. 0g，粉碎成粗颗粒，加6倍量70%乙醇回流提取2次，第一次2. 5小时， 第二次2小时合并提取液，提取液于60°C减压浓缩至药材的1. 5倍，4200rpm，20min，离心， 上清液60°C减压浓缩至干，干粉和硅胶比例1 1拌样；然后上200 300目硅胶柱；样品 与分离硅胶比例1 80，上样流速为0.5BV/h;用乙酸乙酯与无水乙醇体积比4 1为洗脱 齐IJ，5倍柱体积流速lBV/h洗脱，薄层判断洗脱终点。洗脱液70°C真空减压浓缩至干，即得。高效液相色谱法测定提取物含量
成分名称含量(百分比)~收率
Rgl61%Rl 19% __2.4%
Re5.4%
Rbl22%实施例2取三七20. Og粉碎成粗颗粒，加4倍量70%乙醇回流提取2次，第一次1小时，第 二次1小时合并提取液，提取液于55°C减压浓缩至药材的1. 5倍，4000rpm，20min，离心，上 清液60°C减压浓缩至干，干粉和硅胶比例1 1.5拌样；然后上200 300目硅胶柱；样品 与分离硅胶比例1 50，上样流速为0.5BV/h;用乙酸乙酯与无水乙醇体积比5 1为洗脱 齐U，10倍柱体积流速1. 5BV/h洗脱，薄层判断洗脱终点。洗脱液60°C真空减压浓缩至干，即 得。高效液相色谱法测定提取物含量
成分名称含量(百分比)WRgl65%2.7%
Rl23%
Re7^8%____
Rbl3.4%实施例3取三七100. 0g，粉碎成粗颗粒，加40倍量70%乙醇回流提取2次，第一次3小时， 第二次2小时合并提取液，提取液于65°C减压浓缩至药材的1. 5倍，6000rpm，20min，离心， 上清液65°C减压浓缩至干，干粉和硅胶比例1 3拌样；然后上300目硅胶柱，样品与分离 硅胶比例1 150，上样流速为0.5BV/h;用乙酸乙酯与无水乙醇体积比3 1，8倍柱体积 流速1. 5BV/h冲洗，薄层判断洗脱终点。洗脱液55°C真空减压浓缩至干，即得。
高效液相色谱法测定提取物含量
「0055权利要求
一种三七三醇组皂苷提取物，其特征在于，Rg1(C42H72O14)含量范围占总提取物40～70％，三七皂苷R1(C47H80O18)含量范围占总提取物10～30％，人参皂苷Re(C48H82O18)含量范围占总提取物5～10％。
2.根据权利要求1所述的三七三醇组皂苷提取物，其特征在于，Rgl含量占总提取物 50 65%，三七皂苷Rl含量占总提取物15 25%，人参皂苷Re含量占总提取物5 10%。
3.根据权利要求1所述的三七三醇组皂苷提取物，其特征在于，提取物中水分不超过 10. 0%。
4.根据权利要求1-3所述的任一三七三醇组皂苷提取物，其特征在于，三七总皂苷含 量在80%以上，三七总皂苷中Rbl不多于10%。
5.根据权利要求4所述的任一三七三醇组皂苷提取物，其特征在于，三七总皂苷含量 在85%以上，三七总皂苷中Rbl不多于8%。
6.权利要求1所述的三七三醇组皂苷提取物的制备方法，包括以下步骤将原料以乙 醇提取，提取液浓缩，浓缩物与硅胶拌样，样品再用硅胶柱分离，样品与分离用硅胶的重量 比例为1 80，洗脱，收集洗脱液，浓缩得到本发明的提取物。
7.根据权利要求6所述的三七三醇组皂苷提取物的制备方法，其特征在于，包括以下 步骤a.取三七，粉碎成粗颗粒，加乙醇煎煮两次，每次1-3小时；所述的将原料加乙醇提取 时，加4-40倍量45% -95%乙醇煎煮；b.合并煎液，55-70°C减压浓缩至药材量的1.5倍体积；c.静置至室温，离心或过滤，分离出上清液；d.将上清液在55-70°C减压浓缩至干粉；e.干粉和硅胶拌样；然后上200 300目硅胶柱，样品与分离硅胶重量比1 50-150; 干粉和硅胶重量比1 1-3拌样，上样流速为0.5BV/h;f.用乙酸乙酯和无水乙醇洗脱，薄层层析法判断洗脱终点；乙酸乙酯和无水乙醇体积 比3-5 1，5-10倍柱体积流速1-1. 5BV/h洗脱;所述的薄层层析条件氯仿乙酸乙酯甲醇水按体积比15 40 22 10，下层 展开后，用喷10%硫酸乙醇加热105°C显色；g.洗脱液55-70°C真空减压浓缩至干或冻干、喷干，即得。
8.根据权利要求11所述的三七三醇组皂苷提取物的制备方法，其特征在于，步骤a中 加6-8倍量70%乙醇煎煮，第一次加6倍量70%乙醇，煎煮2. 5小时；第二次加5倍量70% 乙醇，煎煮2小时。
9.根据权利要求11所述的三七三醇组皂苷提取物的制备方法，其特征在于，步骤a中 的原料为三七根。
10.权利要求1所述的三七三醇皂苷提取物所制成的药物。
全文摘要
本发明公开了一种三七三醇组皂苷提取物及其制备工艺，所述的提取物Rg1(C42H72O14)含量范围占总提取物40～70％，三七皂苷R1(C47H80O18)含量范围占总提取物10～30％，人参皂苷Re(C48H82O18)含量范围占总提取物5～10％。上述提取物的制备方法为将原料以乙醇提取，提取液浓缩，浓缩物与硅胶拌样，样品再用硅胶柱分离，样品与分离用硅胶的重量比例为1∶80，洗脱，收集洗脱液，浓缩得到本发明的提取物。本发明的提取物具有纯度高，疗效好，质量稳定，同时制备方法分离效果佳，含量高，工艺简单，操作方便，成本低廉，适合工业化生产。
文档编号A61P9/00GK101966217SQ200910069899
公开日2011年2月9日 申请日期2009年7月27日 优先权日2009年7月27日
发明者周水平, 张兰兰, 李瑞明, 林万里, 王玉 申请人:天津天士力制药股份有限公司