专利名称：4-叔丁基-5-(1,2,4-三唑-1-基)-2-苄亚氨基噻唑的医药用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及一类化合物的医药用途，具体是4-叔丁基-5-(1，2，4-三 唑-1-基)-2-苄亚氨基噻唑的医药用途。
背景技术：
专利(CN101602761)描述了 4_叔丁基_5_ (1，2，4_三唑-1-基)_2_苄亚氨基噻唑的制备与杀菌活性。4-叔丁基-5- (1，2,4-三唑-1-基)-2-苄亚氨基噻唑的医药用途没 有研究报道。
发明内容
本发明的目的在于提供一类化学结构式⑴所示的4-叔丁基-5-(1，2，4-三 唑-1-基)-2-苄亚氨基噻唑的医药用途。 其中，I式中X1选自氢，羟基，甲氧基，硝基，氨基和氯；X2选自氢，硝基，氨基， 氯，溴和碘；χ3选自氢，甲基，乙基，硝基，甲氧基，氯，溴，氨基和二甲氨基；χ4选自氢，硝 基，氨基，氯，溴和碘。本发明的目的还在于提供所述4-叔丁基-5- (1，2,4-三唑基)_2_苄亚氨基 噻唑对于人宫颈癌细胞、人肝癌细胞、人鼻咽癌细胞等具有良好的抑制活性，在制备抗肿瘤 药中应用。本发明与现有技术相比具有如下优点首次发现4-叔丁基-5-(1，2，4-三唑基)_2_苄亚氨基噻唑对于人宫颈癌细 胞、人肝癌细胞、人鼻咽癌细胞等具有良好的抑制活性，可用于制备抗肿瘤药物。
具体实施例方式以下实施例旨在说明本发明而不是对本发明的进一步限定。实施例1 94-叔丁基-5-(1，2，4-三唑-1-基)-2-苄亚氨基噻唑抗肿瘤活性本发明优选化合物4_叔丁基-5-(1，2，4-三唑-1-基)-2-(2_羟基苄亚氨 基)噻唑；4-叔丁基-5-(1，2，4-三唑-1-基)-2-(2_羟基-5-溴苄亚氨基)噻唑；4-叔丁基-5- (1，2，4-三唑-1-基)-2- (2-羟基-3，5- 二溴苄亚氨基)噻唑；4-叔丁 基-5-(l，2，4-三唑-1-基)-2-(2_羟基-3，5- 二氯苄亚氨基)噻唑；4-叔丁基_5_(1， 2，4_三唑-1-基)-2-(2_羟基-3，5-二碘苄亚氨基)噻唑；4-叔丁基-5-(l，2，4-三 唑-1-基)-2-(4-二甲氨基苄亚氨基)噻唑；4-叔丁基-5-(1，2，4-三唑-1-基)-2-(4-甲 氧基苄亚氨基)噻唑；4-叔丁基-5-(1，2，4-三唑-1-基)-2-(4-乙氧基苄亚氨基)噻唑； 4-叔丁基-5- (1，2，4-三唑-1-基)-2- (2,4- 二氯苄亚氨基)噻唑。1.抗肿瘤活性原理MTT法生物活性测试又称MTT比色法，是一种检测细胞存活和生长的方法。MTT 分析法以活细胞代谢物还原剂噻唑蓝[3-(4，5- 二甲基-2-噻唑)-2，5_ 二苯基溴化四氮 R^ ；3- (4, 5-dimethylthiazol-2-yl) -2, 5-diphenyl-tetrazolium bromide, MTT]为基石出。 MTT为黄色化合物，是一种接受氢离子的染料，可作用于活细胞线粒体中的呼吸链，在琥珀 酸脱氢酶和细胞色素C的作用下四氮唑环(tetrazolium)开裂，生成蓝色水不溶性的甲瓒 (Formazan)结晶并沉积在细胞中，甲瓒结晶的生成量仅与活细胞数目成正比(死细胞中琥 珀酸脱氢酶消失，不能将MTT还原)。二甲基亚砜(DMSO)能溶解细胞中的甲瓒，用酶联免 疫检测仪在570nm波长处测定其光吸收值，可间接反映活细胞数量。在一定细胞数范围内， MTT结晶形成的量与细胞数成正比。2.抗肿瘤活性实验 试样4_叔丁基-5-(1，2，4-三唑-1-基)-2-苄亚氨基噻唑。细胞系宫颈癌细胞系HeLa ；肝癌细胞系Bel 7402 ；鼻咽癌细胞系CNE 2(中南大 学湘雅医学院细胞库提供)。试剂噻唑蓝(MTT)、RPMI 1640培养液、新生牛血清、抗生素(美国英杰生命技术 公司)；胰酶(美国AMRESC0公司)；96孔培养板(美国英杰生命技术公司)；二甲基亚砜 (美国Sigma公司)。仪器HFSafe-1500型超净工作台、HF151UV型CO2培养箱(上海力申科学仪器有 限公司)；XSP-15C型倒置显微镜(上海长方光学仪器有限公司)；Multiskan MK3型酶标仪 (美国Thermo公司)；超纯水制备仪(美国Milli-Q公司)。实验操作试样对于hela细胞、Bel 7402细胞和CNE 2细胞的测试。每种细胞 的实验操作过程相同，一次实验过程中，每种试样设置5个浓度梯度，每个浓度四个平行试 样，并通过空白组对照得出结论。1)倒掉长满癌细胞的培养瓶中的培养基，加入5mL PBS清洗，倒掉PBS，加入ImL 胰酶，放入37°C、5% CO2培养箱。2)取出培养瓶，加入RPMI 1640培养基，用吸管反复吸打吹散细胞。3)细胞悬液接种于96孔培养板，第1孔不加细胞悬液，其余每板100 μ L (约10000 个细胞)，放入37°C、5% CO2培养箱中培养中48小时。4)试样配置。用DMSO作为溶剂，配置浓度梯度为0. 5 μ mol/mL、0. 25 μ mol/mL、 0. 1 μ mol/mL、0. 05 μ mol/mL、0. 0025 μ mol/mL 的溶液。5)吸取每孔内的悬浮液，加入试样，放入37°C、5% CO2培养箱中培养中48小时。 每组实验平行3次。6)取出上药48小时的96孔培养板，吸出每孔培养液，每孔120μ L PBS清洗一次，加入每孔20 μ L 5mg/mLMTT液，放入37°C、5% CO2培养箱中培养中3 4小时。7)吸出孔内MTT后，加入每孔150 μ L DMSO液(包括第1空)，将培养板置于微孔
板扳荡器上振荡，使结晶物溶解。
8)酶标仪检测各孔OD值(检测波长570nm)。3.抗肿瘤活性评价1)细胞抑制率计算细胞抑制率(％ )=(正常OD值-加药OD值)/正常OD值X 100%2) IC5。值计算试样浓度对数值与细胞抑制率线性回归，计算试样对细胞的半数抑制浓度IC5tl
值。试样对于hela细胞、Bel 7402细胞和CNE 2细胞的IC5tl见表1。表1 4-叔丁基-5-(1，2，4-三唑-1-基)-2-苄亚氨基噻唑对于hela细胞、Bel 7402细胞和CNE 2细胞的抑制活性 测试结果显示，被测试的4-叔丁基-5- (1，2，4-三唑-1-基)~2~苄亚氨基噻唑对于人宫颈癌细胞(hela细胞)、人肝癌细胞(Bel 7402细胞)、人鼻咽癌细胞(CNE 2细胞) 等具有良好的抑制活性，可用于制备抗肿瘤药物。
权利要求
一类化学结构式(I)所示的4-叔丁基-5-(1，2，4-三唑-1-基)-2-苄亚氨基噻唑的医药用途。其特征在于，其中，I式中X1选自氢，羟基，甲氧基，硝基，氨基和氯；X2选自氢，硝基，氨基，氯，溴和碘；X3选自氢，甲基，乙基，硝基，甲氧基，氯，溴，氨基和二甲氨基；X4选自氢，硝基，氨基，氯，溴和碘。4-叔丁基-5-(1，2，4-三唑-1-基)-2-苄亚氨基噻唑(I)对于人宫颈癌细胞、人肝癌细胞、人鼻咽癌细胞等具有良好的抑制活性，可用于制备抗肿瘤药物。F2009102267285C00011.tif
全文摘要
本发明公开了一类化学结构式(I)所示的4-叔丁基-5-(1，2，4-三唑-1-基)-2-苄亚氨基噻唑的医药用途。其中，I式中X1选自氢，羟基，甲氧基，硝基，氨基和氯；X2选自氢，硝基，氨基，氯，溴和碘；X3选自氢，甲基，乙基，硝基，甲氧基，氯，溴，氨基和二甲氨基；X4选自氢，硝基，氨基，氯，溴和碘。4-叔丁基-5-(1，2，4-三唑-1-基)-2-苄亚氨基噻唑(I)对于人宫颈癌细胞、人肝癌细胞、人鼻咽癌细胞等具有良好的抑制活性，可用于制备抗肿瘤药物。
文档编号A61K31/427GK101836979SQ200910226728
公开日2010年9月22日 申请日期2009年12月25日 优先权日2009年12月25日
发明者向建南, 夏曙, 李珺姊, 胡艾希, 覃智 申请人:湖南大学