专利名称：包含硫辛酸和羟基柠檬酸作为活性成分的药物联用物的制作方法
技术领域：
本发明的主题是新型药物联用物，所述新型药物联用物包含下述物质作为活性成分硫辛酸或一种药学上可接受的硫辛酸的盐；和羟基柠檬酸或一种药学上可接受的羟基柠檬酸的盐。该药物联用物具有特别高的抗肿瘤活性，可为单剂量单位形式或为套装形式(kit form)ο
背景技术：
硫辛酸是若干酶复合物的辅因子。硫辛酸也是强力抗氧化剂。它有助于保护细胞免受自由基的破坏。该产品被认为是药物的活性成分。特别推荐将其用于糖尿病性神经病变 (diabetes-related neuropathies)、线粒体肌病和多发性硬化症的治疗。该产品的耐受性好，毒性极低。举例来说，该产品可以600_1800mg/d的量进行给药。在对应于专利US 6448287的文件WO 00/48594中，在治疗癌症方面，特别推荐将硫辛酸或一种其水溶性盐单独使用，或者联合抗坏血酸使用。此外，对应于专利US 6951887的文件WO 00/24734也推荐在肿瘤性疾病 (neoplastic diseases)的治疗中使用硫辛酸衍生物或其药学上可接受的盐。然而，迄今为止，在癌症治疗的发展过程中，尚未出现基于硫辛酸或一种其衍生物或一种其药学上可接受的盐的药物。羟基柠檬酸是在天然状态的藤黄果(Malabar tamarind(Garcinia))的果皮中发现的天然产物。已知其钙盐(羟基柠檬酸钙)能够抑制脂肪酸的生物合成。因此，羟基柠檬酸钙被推荐与低脂肪膳食联合用于减肥，推荐剂量为500mg至 1500mg，一日三次，饭前服用。羟基柠檬酸钙在成人和儿童中具有十分出色的耐受性。同时，已知羟基柠檬酸钙增加肝细胞中脂肪酸的氧化，从而使所述脂肪酸转化为糖原。随后，所述糖原贮存到肌肉中以便在体育锻炼中使用。因此，羟基柠檬酸盐被用于多种食疗膳食中以治疗肥胖症。羟基柠檬酸钙尤其具有不改变血糖水平的优点。专利US 6，207，714强调可将羟基柠檬酸盐用作降糖药来治疗患有胰岛素抗药性糖尿病的个体。此外，文件W02004/100885在可用于治疗有氧糖酵解率高的癌细胞的大量化合物中提到了羟基柠檬酸盐。在本文中，已经发现硫辛酸或一种药学上可接受的硫辛酸的盐和羟基柠檬酸或一种药学上可接受的羟基柠檬酸的盐的联用物具有特别高的抗肿瘤活性，原因在于其组成中的活性成分的协同作用；这构成本发明的基础。具体而言，这种新型的联用物经证实能够以完全意想不到的方式抑制肿瘤的生长，在至少100天内，所述肿瘤的体积值稳定在基本上等于治疗开始时所述肿瘤体积值。令人惊喜的是，这种稳定肿瘤的效果强于用已知的抗癌药物取得的效果。因此，由于协同加强了每种活性成分的作用，作为本发明主题的联用物特别具有独创性。
发明内容
因此，根据第一方面，本申请旨在涵盖包含下列物质的药物联用物_第一，硫辛酸或一种药学上可接受的硫辛酸的盐；和-第二，羟基柠檬酸或一种药学上可接受的羟基柠檬酸的盐。在本说明书的上下文中，术语“硫辛酸”意在涵盖以酸的形式存在的化合物和以还原形式存在的化合物(亦称为二氢硫辛酸)。此外，硫辛酸和羟基柠檬酸分别具有1个和2个不对称碳原子。因此，所述硫辛酸和羟基柠檬酸可以对映异构体或非对映异构体的形式存在。所述对映异构体和非对映异构体及二者的混合物(包括外消旋混合物)构成本发明的一部分。优选地，将使用硫辛酸的 R型异构体和羟基柠檬酸的2S，3S型异构体。通常，作为本发明所述的药物联用物特征的两种活性成分可共同配制(单剂量单位)或分开配制(套装)。同样，共同配制或分开配制的两种活性成分通常可同时给药；或鉴于它们各自制剂的性质，相隔一定时间间隔分开给药，所述时间间隔有利于所述两种活性成分配伍作用的最佳化。药学上可接受的硫辛酸的盐可以是如专利US 6448287中记载的水溶性盐。药学上可接受的羟基柠檬酸的盐可以是碱金属(特别是钠)盐或碱土金属(特别是钙或镁)盐。本发明所述的药物联用物包含上述两种活性成分。根据一个具体的实施方式，该药物联用物不包含其它活性成分。或者，可预见在这些新型联用物中存在至少一种另外的活性成分。因此，可以明了的是，当上述两种活性成分与至少一种另外的活性成分联用时，本发明所述的包含上述两种活性成分的药物联用物的功效可以得到改善，所述另外的活性成分选自于由顺钼、辣椒素(capsaicin)、胆碱、米替福新和维生素B12组成的组。本文上下文中优选的多药物联用物具体为-三联用物，由上述两种活性成分与选自于顺钼和辣椒素的另外一种活性成分组成；-多联用物-由上述两种活性成分、辣椒素和顺钼组成；-或由上述两种活性成分、辣椒素、米替福新、胆碱和维生素B12组成。根据本发明目前优选的第一个实施方式，所述药物联用物由合并有上述活性成分的单剂量单位组成，所述活性成分通常处于药学上可接受的赋形剂中。根据第二个实施方式，所述药物联用物为套装的形式，所述套装包含-第一，硫辛酸或一种药学上可接受的硫辛酸的盐，通常处于药学上可接受的赋形剂中；和
-第二，羟基柠檬酸或一种药学上可接受的羟基柠檬酸的盐，通常处于药学上可接受的赋形剂中。各种赋形剂的性质和各自的用量可由本领域技术人员根据最终期望的剂型容易地决定，与所预想的实施方式无关。优选地，在单剂量单位情况下，所述活性成分将调配成适于口服给药的剂型。然而，也可预想到其他的给药途径，例如肌内给药、静脉内给药、局部给药或皮肤给药的途径。同样，优选地，在分开提供所述活性成分的情况下，它们可彼此独立，各自调配成适于口服给药的剂型。然而，对于所述两种剂型中的任意一种，可以独立地预想其他的给药途径。根据一个具体的特征，适于口服给药途径的剂型可选自于片剂、明胶胶囊剂、粉剂、颗粒剂、冻干剂、口服液剂(oral solutes)和糖浆剂。然而，目前适于口服给药途径的剂型优选为片剂。所述片剂可具有各种各样的性质，速释、控释或延释，并且任选地为泡腾形式或为口内崩散(orodispersible)的形式。通常，可根据给药途径和所治疗的患者调整剂量。因此，可经一次、两次或三次摄取来给予硫辛酸或一种药学上可接受的硫辛酸的盐，给药量为0. l-100mg/kg/天，优选l-60mg/kg/天，更优选Ι-lOmg/kg/天。可经一次、两次或三次摄取来给予羟基柠檬酸或一种药学上可接受的羟基柠檬酸的盐，给药量为0. l-100mg/kg/天，优选l-50mg/kg/天，更优选20_50mg/kg/天。举例来说，在本发明所述的药物联用物中，硫辛酸或一种药学上可接受的硫辛酸的盐可以20-800mg的量、优选20-150mg的量存在，而羟基柠檬酸可以200_1000mg的量、优选600-900mg的量存在，从而以一天两次或三次的比率进行给药(注意所标明的量以一天给药三次计)。因此，本发明示例性的联用物可包含处于药学上可接受的赋形剂中的30mg 硫辛酸和SOOmg羟基柠檬酸，该联用物可用作一天给药三次的组合物。本发明所述的药物联用物可按常规方法制备。该制备过程包括-将活性成分共同在药学上可接受的赋形剂中进行配制；-或者将每种活性成分在药学上可接受的赋形剂(可相同或不同)中分开进行配制。可用于该目的的配制技术为本领域技术人员所公知，所述配制技术实质上包括将活性成分与药学上可接受的赋形剂进行物理混合。考虑到已经记载了所述联用物具有高的抗肿瘤活性，本发明对生产用于治疗细胞增殖疾病的药物特别有用，所述细胞增殖疾病选自于由以下疾病组成的组乳腺癌、卵巢癌、宫颈癌、前列腺癌、睾丸癌、食道癌、胃癌、皮肤癌、肺癌、骨癌、结肠癌、胰腺癌、甲状腺癌、胆管癌、颊间隙癌(cancer of the buccal cavity)和咽癌(口腔区域)、唇癌、舌癌、口腔癌、咽癌或小肠癌、结肠直肠癌、大肠癌、直肠癌、脑癌及中枢神经系统癌、胶质母细胞瘤、神经母细胞瘤、角化棘皮瘤、表皮样癌、大细胞癌、腺癌(adenocarcinoma)、腺瘤 (adenoma)、滤泡癌、未分化性癌(undifferentiated carcinoma)、乳突状癌、精原细胞瘤、 黑色素瘤、肉瘤、膀胱癌、肝癌、肾癌、髓系疾病(myeloid disorders)、淋巴疾病、霍奇金病、 毛细胞癌(carcinoma with hairy cells)禾口白血病。当然，本发明所述药物联用物在治疗性处置中可用作其他抗肿瘤治疗的补充。
因此，根据第二方面，本申请旨在涵盖上述药物联用物在生产具有抗肿瘤活性的药物中的用途、特别是在生产用于治疗上述疾病的药物中的用途。最后，本申请旨在涵盖用于治疗上述疾病的方法，所述方法包括将治疗有效量的所述联用物给予对其有需要的患者。
现在将通过下列非限制性的实施例和附图来阐明本发明，各附图分别表示-图IA和图IB单独用硫辛酸处理的HT-29细胞系(图1A)或单独用羟基柠檬酸钙处理的HT-29细胞系(图1B)的细胞活力测试结果的图示；-图2A和图2B单独用硫辛酸处理的T_24细胞系(图2Α)或单独用羟基柠檬酸钙处理的Τ-24细胞系(图2Β)的细胞活力测试结果的图示；-图3Α到图3D经本发明所述的硫辛酸与羟基柠檬酸钙的联用物处理的ΗΤ-29和 Τ-24细胞系的细胞活力测试结果的图示，羟基柠檬酸钙使用三个递增的浓度；图4Α 用本发明所述的药物联用物对小鼠进行治疗的结果的图示；图4Β 研究中经治疗的小鼠存活量的图示，研究结果在图4Α中示出。
具体实施例方式所实施的试验本发明所述的治疗联用物显著的抗肿瘤活性将通过下文描述的试验证实。1-对人肿瘤细胞系进行的测试1.1-使用的细胞系人肿瘤细胞系和培养基从 ATCC (American Type Culture Collection,Manassas, Virginia, United States)获得。HT-29肿瘤细胞系是于1964年从44岁妇女的原发性结肠腺癌(colonic adenocarcinoma)中分离得到的(Fogh J.等，1977，J. Nat. Cancer. Inst. 59 :221_6)。Τ-24肿瘤细胞系是从81岁妇女体内分离得到的移行性(transitional)膀胱癌 (0' Toole CM.等，1983，Nature 301:429-30)。1. 2-培养条件将肿瘤细胞系在37°C、湿润的气氛(5% C02、95%空气)下进行单层培养。对于上述两个肿瘤细胞系，所使用的培养基是用10%的胎牛血清(Eurobio)和1/10000IU的青霉素和链霉素进行补充的DMEM Glutamax I (Invitrogen)。为进行试验，将所述人肿瘤细胞系用不含钙或镁的Hanks培养基中的胰蛋白酶溶液处10分钟，使其同培养瓶脱离。采用血细胞计数器对细胞进行计数，并通过台盼蓝拒染试验测定细胞活力。扩增肿瘤细胞系，然后以使细胞在5天的培养中均处于增殖期的浓度，将所述肿瘤细胞系接种到96孔微板(MTT)或6孔板(细胞计数)上。将所述肿瘤细胞系培养48小时后，然后在包含培养基而不含试验物质或参照物质的微板上开始处理。在阶段I期间(用单一活性成分进行试验)，在37°C、5% CO2条件下，将所述肿瘤细胞系在含有试验物质之一的培养基中培养5天。每种试验条件重复六次。通常，首先准备补充有血清的培养基的瓶，其中含有最高浓度的各试验分子。待测试的其他浓度通过连续稀释补充有血清的培养基获得。根据各种药物具体的不稳定性或敏感性来调整这个步骤。在研究的阶段II中(用所述两种活性成分的联用物进行试验)，遵循相同的条件制备培养基和培养细胞，并将所述活性成分联合添加到所述培养基中。用100 μ 1 (96孔板)或2ml (6孔板)包含试验物质或参照物质的、补充有血清的培养基，对所述肿瘤细胞系进行培养。在处理期间，每隔一天更换各培养孔中的培养基(补充有试验分子)。1. 3-细胞增殖和活力试验从接触的第一天开始，在开始接触包含不同测试浓度的试验物质和参照物质的培养基之后，每隔一天评价细胞的增殖和细胞活力。评价细胞活力有两种不同的方式-直接评价，在光学显微镜下通过统计计数(细胞数)评价；和-间接评价，通过基于线粒体脱氢酶降解四唑盐的比色法(MTT法)评价。各孔的光密度(OD)用设定在适当波长的微板读数器读取。1.4-对结果的展示针对各活性成分、各测试浓度和各组合，测量三个细胞活力值，并特别用光学读数仪的校准范围(calibration ranges)进行校正。然后，用三个细胞活力测定值的平均值除以在不含活性成分的对照培养基中平行进行的活力测量结果的平均值。下面的表1概括了单独用硫辛酸或单独用羟基柠檬酸钙处理的HT-29细胞系在光学显微镜下或通过发光标记(luminescent labeling)得到的活力测量结果(细胞数/MTT 法)的计算值。这些值还以坐标图的形式记录在图IA和图IB中。表1 :72小时后活的HT-29细胞的比率
权利要求
1.一种药物联用物，其特征在于，所述药物联用物包含如下物质作为活性成分 -硫辛酸或一种药学上可接受的硫辛酸的盐；以及-羟基柠檬酸或一种药学上可接受的羟基柠檬酸的盐；将所述活性成分共同配制或分开配制成具有抗肿瘤活性的组合物，用于配伍使用、同时使用或分开使用。
2.如权利要求1所述的药物联用物，其特征在于，所述羟基柠檬酸的盐为碱金属盐或碱土金属盐。
3.如权利要求1或2所述的药物联用物，其特征在于，所述羟基柠檬酸的盐为钙盐。
4.如权利要求1至3任一项所述的药物联用物，其特征在于 -所述活性成分以适于口服给药的剂型共同提供；或-所述活性成分各自以适于口服给药的剂型彼此独立地分开提供。
5.如权利要求4所述的药物联用物，其特征在于，所述适于口服给药的剂型选自于片剂、明胶胶囊剂、粉剂、颗粒剂、冻干剂、口服液剂和糖浆剂。
6.如权利要求1至5任一项所述的药物联用物，其特征在于，所述药物联用物为单剂量单位形式，其中，所述活性成分共同为片剂形式。
7.如权利要求1到6任一项所述的药物联用物，其特征在于，所述药物联用物包含 -硫辛酸或一种药学上可接受的硫辛酸的盐，其量为20-800mg，优选20-150mg ； -羟基柠檬酸或一种药学上可接受的羟基柠檬酸的盐，其量为200-1000mg，优选600-900mg。
8.如权利要求1至7任一项所述的药物联用物，所述药物联用物用作具有抗肿瘤活性的组合物。
9.如权利要求1至8任一项所述的药物联用物，其特征在于，所述药物联用物包含至少一种另外的活性成分，所述另外的活性成分选自于由顺钼、辣椒素、胆碱、米替福新和维生素B12所组成的组。
10.如权利要求9所述的药物联用物，其特征在于，所述药物联用物包含另外的活性成分，所述另外的活性成分选自于顺钼和辣椒素。
11.如权利要求9所述的药物联用物，其特征在于，所述药物联用物包含下列两种另外的活性成分顺钼和辣椒素。
12.如权利要求9所述的药物联用物，其特征在于，所述药物联用物包含下列四种另外的活性成分辣椒素、维生素B12、胆碱和米替福新。
13.如权利要求1至12任一项所述的药物联用物在生产具有抗肿瘤活性的药物中的用途。
全文摘要
本发明涉及一种新型的药物联用物及其在生产具有抗肿瘤活性的药物中的用途。根据本发明，此药物联用物包括如下物质作为活性成分-硫辛酸或一种药学上可接受的硫辛酸的盐；以及-羟基柠檬酸或一种药学上可接受的羟基柠檬酸的盐；并且将所述活性成分共同配制或分开配制，以便配伍使用、同时使用或分开使用。
文档编号A61K33/24GK102292081SQ200980153775
公开日2011年12月21日 申请日期2009年11月2日 优先权日2008年11月3日
发明者劳伦特·施瓦茨, 阿德琳·瓜伊斯-韦尔涅 申请人:劳伦特·施瓦茨, 博锐博思公司