专利名称：含笑内酯的制备方法及其用途的制作方法
技术领域：
本发明属于药物技术领域，具体地说，本发明涉及一种含笑内酯的制备方法及其以该药物为有效成分的治疗癌症或辅助治疗肿瘤的药物组合物及其用途，以及该药物化合物和组合物在制备抗癌或辅助抗癌药物中的应用。
背景技术：
肿瘤极大威胁着人类健康，我国现有癌症患者约200万人，每年新发160万例，这是一个不小的群体，抗肿瘤研究是当今生命科学领域极具挑战性且意义重大的领域。过去的治疗方法侧重于对癌细胞的铲除和杀伤，目前，临床上常用的抗肿瘤药物主要是细胞毒类药物，这类抗癌药具有选择性差、毒副作用强、易产生耐药性等缺点，是典型的双面刃药物，而且难以根除癌症，不少癌症的复发比例较高。恶性肿瘤的高复发率一直是困扰肿瘤医生的难题，越来越多的研究证实肿瘤细胞群体中存在少数能使群体扩增的肿瘤干细胞。它们通常处于慢周期状态，对化疗药物敏感性低，是肿瘤复发的根源。因此肿瘤干细胞的发现给肿瘤治疗带来新的靶标，针对肿瘤干细胞的药物研究为彻底治愈癌症提供可能。近年来，从天然产物中寻找抗癌活性化合物已经成为抗癌药物的开发热点，前20 年间，全世界推出的药物小分子新化学实体中，有61 %可追溯到天然产物。天然产物在某些治疗领域出现率非常高78%的抗菌化合物和74%的抗肿瘤化合物都是天然产物，或从某个天然产物衍生而来，实践证明，天然产物在抗癌药物发现中的独特作用重新引起高度重视。传统治疗肿瘤的化疗药物均存在耐药问题，尤其是肿瘤干细胞更不敏感。抗癌中药博大精深，高效低毒，从中有可能筛选出高效杀伤肿瘤干细胞，从而治疗恶性肿瘤的药物。倍半萜内酯类化合物小白菊内酯(Parthenolide)是从小白菊中提取的化合物， 最初被用来治疗皮肤感染、风湿病以及偏头痛。近期研究表明，小白菊内酯可抑制前列腺癌、乳腺癌、胃癌、白血病癌、肾癌、肺癌、结肠腺癌、成神经管细胞瘤等癌细胞的生长，在动物模型上小白菊内酯还能治疗紫外线引起的皮肤癌。对其作用机理研究发现，小白菊内酯能抑制转录因子NF- κ B的激活，其活性可能主要来源于p65/NF- κ B亚基的Cys38上的巯基与含笑内酯发生了 Michael加成反应，由于NF-κ B是调控肿瘤侵袭、转移、药物抗性的重要基因，抑制NF-K B的激活有可能提高肿瘤对于抑瘤剂所引起的细胞凋亡的敏感性。最近，纽约罗切斯特大学医学院的Jordan，C. Τ.博士及其同事发现小白菊内酯能够在基本不损伤正常干细胞的情况下，针对性地消灭引发急性和慢性骨髓性白血病的干细胞，从而有可能根本上遏制白血病复发，小白菊内酯这一独特的作用机制，已引起人们的广泛关注。含笑内酯属愈创木烷型倍半萜内酯类化合物，文献报道[J. NatJrod. 1993，56， 90-98 ；Bioorg. Med. Chem. Lett. 2003，11，1503-1510]的合成方法收率低(13 26% )、副反应多，而且在反应中使用的催化剂为三氟化硼乙醚络合物，三氟化硼易燃、剧毒、强腐蚀性，这就大大限制了工业上的应用。含笑内酯的制备方法需要进一步改善，提高其制备效率，而且本发明还发现了含笑内酯的新的药用用途。
发明内容
含笑内酯的结构如下结构式⑴，分子式为C15H2tlO3,分子量为M8，性状为白色无
定型粉末。本发明提供了制备含笑内酯的制备方法和含笑内酯的新的药用用途。具体地，本发明提供了一种制备上式(I)的含笑内酯的方法，该方法包括在适当的有机溶剂中使小白菊内酯在适当的酸催化剂的催化下制备得到含笑内酯。优选地，上述制备含笑内酯的方法包括如下步骤称取适量小白菊内酯和酸催化剂，加入适当的有机溶剂，搅拌反应0.5 48小时， 将反应液倾入适量冰水中，萃取，洗涤，干燥，减压浓缩得含笑内酯。更优选地，上述制备含笑内酯的方法包括如下步骤称取适量小白菊内酯和酸催化剂，加入适当的有机溶剂，在适当温度(_5°C IlO0C )下，搅拌0. 5 48小时，将反应液倾入适量冰水中，乙酸乙酯萃取，有机层依次用适量饱和碳酸氢钠和饱和食盐水洗涤，适量无水硫酸钠干燥，减压浓缩得含笑内酯。为获得纯化含笑内酯，可以通过硅胶柱层析纯化得含笑内酯纯品。上述方法中，有机溶剂优选选自四氢呋喃、乙醚、苯、甲苯、二氯甲烷和氯仿中一种或多种。酸催化剂优选选自甲基磺酸、对甲基苯磺酸、三氟乙酸和乙酸中的一种或多种。上述方法中，有机溶剂优选为甲苯、四氢呋喃或二氯甲烷中的一种。上述方法中，酸催化剂优选为对甲基苯磺酸。本发明还提供了含笑内酯制备治疗癌症的药物的用途，其中癌症优选为白血病。本发明还提供了一种治疗癌症的药物组合物，该组合物中含有有效量的含笑内酯以及药学上可接受的载体，其中癌症优选为白血病。本发明还提供了一种含有含笑内酯的组合物制备治疗癌症或辅助治疗癌症的药物的用途，其中癌症优选为白血病。本发明的含笑内酯在制备成治疗癌症的药物后，可以直接使用含笑内酯化合物， 或者以含笑内酯的药物组合物的形式使用。该药物组合物含有0. 1-99%、优选为0. 5-90% 重量的含笑内酯化合物，其余为药物学上可接受的、对人和动物无毒和惰性的可药用载体和/或赋形剂。所述的药用载体或赋形剂是一种或多种固体、半固体和液体稀释剂、填料以及药物制品辅剂。将本发明的药物组合物以单位体重服用量的形式使用。本发明的药物可经注射和口服两种形式给药，注射可以是静脉注射或肌肉注射。有益效果本发明提供的含笑内酯的制备方法解决了含笑内酯制备产率低的技术缺陷，使得含笑内酯的产率达到了 60%以上，本发明还发现含笑内酯的新的药物用途，含笑内酯在治疗白血病方面同小白菊内酯的效果几乎等同，而且其对正常细胞无明显杀伤作用。
具体实施例方式为了理解本发明，下面以实施例进一步说明本发明，但不限制本发明。实施例1 含笑内酯的制备室温下，将500mg小白菊内酯、对甲基苯磺酸溶解于50mL甲苯中，回流反应 12小时，将反应液倾入适量冰水中，用乙酸乙酯萃取，然后将乙酸乙酯层分别用200mL的 5%碳酸氢钠和300mL饱和食盐水洗涤，然后用无水硫酸钠干燥，减压浓缩得含笑内酯的粗品，然后用硅胶柱层析(石油醚乙酸乙酯=80 20)得300mg含笑内酯，收率为60%。制备得到的含笑内酯的谱图数据如下1H NMR (CDCl3,400MHz) δ 6. 14 (d，J = 3. 2Hz，1Η)，5. 45 (d，J = 2. 8Hz，1Η)，3. 76 (t， J = 10. 4Hz, 1H)，2· 61-2. 68 (m, 3H)，1. 98-2. 36 (m, 6H)，1. 67-1. 77 (m, 2H)，1. 62(s，3H)， 1. 28(s，3H) ； 13C NMR(CDCl3, 100MHz) δ 168. 8，137. 8，130. 8，129. 9，118. 6,83. 5,79. 2， 57. 6,48. 5,37. 2,33. 9,29. 1,24. 8,22. 9,21. 7。谱图数据表明实施例1的方法制备得到的化合物是结构式(I)的含笑内酯。实施例2 含笑内酯的药理作用2. 1体外细胞测试取白血病干细胞标记的癌细胞，将细胞配成2X 105/mL细胞悬液，加入96孔板圆底细胞培养板内，分别加入小白菊内酯(阳性对照)、含笑内酯(实施例 1制备产品)，使其浓度均为25. 0μΜ,50.0μ Μ,每一测试浓度5孔，置37°C、5% CO2饱和湿度条件下培养18小时，用MTT法在酶联检测仪570nm波长测得吸光度(A)值。计算出本发明化合物对白血病细胞的抑制作用。表1加入含笑内酯后，癌症干细胞和正常细胞的存活率(％ )
权利要求
1.一种制备含笑内酯的方法，该方法包括在适当有机溶剂中使小白菊内酯在酸催化剂的催化下制备得到含笑内酯。
2.根据权利要求1所述的方法，该方法包括如下步骤称取适量小白菊内酯和酸催化剂，加入适当的有机溶剂，搅拌反应0. 5 48小时，将反应液倾入适量冰水中，萃取，洗涤，干燥，减压浓缩得含笑内酯。
3.根据权利要求1或2所述的方法，该方法包括如下步骤称取适量小白菊内酯和酸催化剂，加入适当的有机溶剂，在-5°C 110°C下，搅拌反应 0. 5 48小时，将反应液倾入适量冰水中，乙酸乙酯萃取，有机层依次用适量饱和碳酸氢钠和饱和食盐水洗涤，适量无水硫酸钠干燥，减压浓缩得含笑内酯。
4.根据权利要求2或3所述的方法，该方法还包括纯化步骤将浓缩得到的含笑内酯通过硅胶柱层析纯化得含笑内酯纯品。
5.根据权利要求1-4任一项所述的方法，其中有机溶剂选自苯、甲苯、二氯甲烷、氯仿、 四氢呋喃和乙醚中的一种或多种，优选为甲苯、二氯甲烷和四氢呋喃中的一种。
6.根据权利要求1-4任一项所述的方法，其中酸催化剂选自甲基磺酸、对甲基苯磺酸、 三氟乙酸和乙酸中的一种或多种，优选为对甲基苯磺酸。
7.一种含笑内酯制备治疗癌症的药物的用途。
8.根据权利要求7所述的用途，其中癌症为白血病。
9.一种治疗癌症的药物组合物，该组合物中含有有效量的含笑内酯以及药学上可接受的载体，其中癌症优选为白血病。
10.权利要求9所述的组合物制备治疗癌症或辅助治疗癌症的药物的用途，其中癌症优选为白血病。
全文摘要
本发明涉及一种含笑内酯的制备方法及其用途，制备方法是以小白菊内酯为原料，适当的酸为催化剂，在一定的溶剂和反应温度下，即可得到本发明含笑内酯；本发明还提供了含笑内酯的药用用途，含有治疗有效量的含笑内酯及药学上可接受的载体的药物组合物在制备治疗癌症药物中的应用。本发明的制备方法解决了含笑内酯制备产率低的技术缺陷，使得含笑内酯的产率达到了60％以上，而且含笑内酯在治疗白血病方面同小白菊内酯的效果几乎等同，而且其对正常细胞无明显杀伤作用。
文档编号A61P35/02GK102234258SQ20101015368
公开日2011年11月9日 申请日期2010年4月23日 优先权日2010年4月23日
发明者张泉, 张福武, 翟佳黛, 范洪霞, 陈悦, 马维维 申请人:南开大学, 天津尚德药缘科技有限公司