专利名称：一种中药组合物及其制备方法
技术领域：
本发明涉及生物医药领域，特别涉及一种中药组合物及其制备方法。
技术背景
生物类黄酮(bioflavonoids)是自然界中存在的酚类物质，亦称维生素P，常与维 生素C伴存，属植物次级代谢产物。类黄酮是自然界药用植物中主要活性成分之一，具有调 节血脂(闫祥华等，2000)、消除氧自由基、抗氧化(姚新生，1996 ；周荣汉，1993 ；谷利伟等， 1997 ；Torel等，1986 ；胡春，1996)、抗肿瘤(毛雪石，徐世平，1995 ；Barnes等，1990)、抗病 毒(Simoes等，1990 ；Hu等，1994)等生理活性。
在癌症发生之初，正常的细胞经常因受到各种化学如内源性的自由基或环境中的 化学物质、物理如X射线或紫外线以及生物如某些病毒或细菌等致癌因素的侵害，发生 DNA损伤。类黄酮化合物可以抵御这些致癌因素导致的DNA损伤。例如，黄酮、黄酮醇、黄 烷酮以及黄烷醇化合物能够通过螯合钙黄绿素中的铁离子，抑制H2A诱导的Jurkat细胞的 DNA损伤；没食子儿茶素没食子酸酯可通过抑制一氧化氮合成酶的表达，降低紫外线。照射 对HaCa T细胞DNA的损伤作用；鸡豆黄素A和大豆黄素能明显抑制MMTV乳腺瘤病毒导致的 小鼠乳腺癌发生。同时，类黄酮化合物还有助于损伤DNA的修复，如柚皮素可诱导人前列腺 癌LNCaP细胞中对DNA修复起关键作用的8-羟基脱氧鸟苷DNA糖苷酶1 (hOGGl)和DNA聚 合酶(DNApolfl)的mRNA表达，对硫酸亚铁引起的细胞DNA损伤具有修复诱导作用。在癌症 促进阶段，如果携带损伤DNA的细胞无法自我修复，并且逃过细胞凋亡过程，那么基因突变 导致的细胞肿瘤化进程将被启动，并在许多肿瘤促进因子，如炎症因子、各种激素及生长因 子的促使下，发展为肿瘤细胞。研究结果表明，类黄酮化合物具有明显的抗炎症活性，其抗 炎机制主要包括抑制炎症相关酶的基因表达，如一氧化氮合成酶和环氧合酶-2 ；抑制转 录因子激活如蛋白激酶C、磷脂酶C/A2、磷酸二酯酶、转录因子AP-I和C/EBPd ；调控促炎基 因表达，通过JNK/SAPK、ERK以及p38MAH(途径抑制各种促炎基因表达；抑制黏附分子表达， 通过抑制NFKB的激活降低黏附分子表达。此外，有研究报道，类黄酮化合物还具有拮抗激 素和生长因子的活性。Smkla和Gupta的研究发现，芹菜素除通过诱导胰岛素样生长因子 结合蛋白3(IGFBP-;3)表达，调控胰岛素样生长因子(IGF)信号途径外，还可通过抑制胰岛 素样生长因子-I受体(IGF-IR)的自磷酸化并促进Akt蛋白的去磷酸化，实现对胰岛素样 生长因子OI (IGF-I)诱导人前列腺癌DU145细胞增殖的显著抑制。这一分子机制也在前列 腺癌PC-3细胞移植瘤体内研究结果的证实。针对四种人骨髓瘤细胞系，Liu等的研究结果 表明，黄芩素能够抑制白介素-6 (IL-6)介导的Jak、STAT3、MAPK以及Akt等信号蛋白的磷 酸化，表现出显著的癌细胞抑制活性。Oh等的研究结果则证明，染料木黄酮能够抑制表皮生 长因子(EGF)和二氢睾酮(DHT)对LNCaP前列腺癌细胞中磷酸化Akt蛋白和雄激素受体的 诱导表达F9。Brunelli等将两种类黄酮化合物8-prenylapigenin和isocannf Iavin B分 别作用雌激素依赖的T47-D乳腺癌细胞和非雌激素依赖的MDA-MB-231乳腺癌细胞，结果发 现相对MDA-MB-231细胞，T47-D细胞对8-prenylapigenin的双相增殖作用更为敏感，同时isocannflavin B可使该细胞表现出明显的自吞噬现象。在癌症发展形成阶段，迅速增殖的 恶性肿瘤细胞可以通过侵袭作用进人组织血管或淋巴管，转移到其他器官，并通过促进血 管发生获得更多营养继续增殖形成恶性实体瘤组织。在这一过程中，类黄酮化合物也表现 出多种抗癌活性，包括诱导肿瘤细胞分化、诱导细胞周期停滞及凋亡、抑制肿瘤细胞侵袭和 转移、抑制血管发生等。在诱导肿瘤细胞分化方面，汉黄芩素可通过HiC 8磷酸化途径诱导 U-937白血病细胞表现出明显的细胞分化形态；通过比较蛋白组学方法，槲皮素被证明可 通过转谷氨酰胺酶-2诱导B16-FI0鼠黑素瘤细胞分化；研究工作还发现，高良姜素可通过 p21wafl途径诱导人食管鳞癌KYSE-5细胞分化。在诱导肿瘤细胞周期停滞及凋亡方面，一 种新发现的类黄酮化合物protoapigenone，则被证明能够通过抑制p-Cdk2、Cdk2、p-CyClin Bl以及CyclinBl的表达，诱导p_Cdk25C的表达，使两株人卵巢癌细胞MDAH-2774和SK0V3 的细胞周期停滞于s期和G2/M期，并使SK0V3发生细胞凋亡；但是，protoapigenone对正常 卵巢上皮细胞HOSE 6-3和HOSE 11-12无明显作用。花青素和飞燕草素可以通过NFKB途 径诱导人前列腺癌PC-3细胞在体内外发生G2/M周期停滞和细胞凋亡，这与芹菜素通过阻 断Akt途径引发PC-3细胞凋亡的分子机制有所不同。有研究发现，黄酮化合物，如木犀草 素、芹菜素、白杨素和黄酮醇化合物，如槲皮素、山奈酚、杨梅素对人食管鳞癌细胞KYSE-510 和食管腺癌细胞0E33的体外抑制活性及分子机制。结果表明，上述两类化合物可通过增加 p63和p73蛋白翻译或蛋白稳定性，调控p2lwaft GADD45/3、14-3-3trcycIin B1和PIG3等 基因的表达，导致KYSE-510和0E33细胞发生G2/M周期停滞和细胞凋亡。在抑制肿瘤血管 发生、侵袭及转移方面，芹菜素可以明显抑制MMP-9介导的肿瘤细胞向基底膜的侵袭和转 移，并通过调节低氧诱导因子-I (HIF-I)表达，降低人A549肺癌细胞中VEGF的表达，从而 抑制裸鼠体内肿瘤血管的发生。同时，芹菜素的血管发生抑制活性，则被证明是通过PI3K/ Akt/p70S6Kl和HDM2/p53途径实现的，这个途径与木犀草素发挥血管发生抑制活性的分子 途径相同。
生物类黄酮中，柑橘类黄酮是提纯自柑橘属的一类重要活性物质，其广泛存在于 甜橙、酸橙、柠檬、枸橼、宽皮橘、葡萄柚等柑橘属的果实、树皮、树叶及花中，具有抗氧化、降 低脂质过氧化反应、防治心脑血管系统疾病和呼吸系统疾病及抗衰老等作用。随着研究方 法和技术的不断提高，研究人员又发现柑橘类黄酮还具有抗自由基、防癌、抗癌等生理作 用。其中，柑橘皮含有大量柑橘类黄酮，为柑桔皮干重的2. 689%，而国内柑橘果皮除少数用 于中药和制取香精油外，大部分未加以利用。
目前，市售的生物类黄酮功能食品种类如柑桔精冲剂、生物类黄酮口香糖、生物 类黄酮牙膏和含片等，生物类黄酮含量较低且制备工艺复杂。我国近年来柑橘年产量均 在2000万吨以上，柑桔皮占柑桔果实重量的40-50 %，大量的柑橘皮未经充分利用，不仅造 成资源的浪费，而且胡乱堆放带来环境污染。因此，从废弃的柑橘皮中提纯柑橘类黄酮，加 工成中药组合物及其制剂，用于制备治疗高血压或高血脂、抗衰老、提高免疫力药品或保健 品，具有重要意义。发明内容
本发明提供了一种含有柑橘类黄酮中药组合物的制备方法。该制备方法从废弃 柑橘皮中提纯柑橘类黄酮，添加骨糊和两味中药材，利用生物酶解技术制得所述中药组合物。该中药组合物中柑橘类黄酮的含量提高至2.8%，对高血压、高血脂的治疗效果显著(P < 0. 05)，可有效抗衰老、提高免疫力。
为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案
本发明提供了一种中药组合物的制备方法，原料为柑橘皮3000-4000重量份，山 药10-20重量份，茯苓10-20重量份，动物骨头10-20重量份；
步骤1 将山药和茯苓粉碎，加5倍重量份的去离子水常压煎煮池，过滤取滤渣，再 加3倍重量份的去离子水常压煎煮池，过滤取滤液，制得山药与茯苓煎煮液；
步骤2 将动物骨头粉碎，加10倍重量份的去离子水，常压煎煮10_14h，制得骨 糊；
步骤3 将所述山药与茯苓煎煮液、所述骨糊混合，在45-55°C用盐酸与醋酸按 照体积比1 3配制成的混合酸液调节pH值为2-3，加入0.5-1重量份的胃蛋白酶酶解 8-12h ；再加热至72-73°C，用所述混合酸液调节pH值为5_6，降温至45_55°C，加入0. 65-1 重量份的α -淀粉酶酶解8_12h，浓缩，粉碎制得中药混合细粉；
步骤4 将所述柑橘皮粉碎，用乙醇超声提取，过滤后收集滤液浓缩，加入氢氧化 钠溶液调节PH值为12-13浸提，过滤收集滤液，加入酸液调节pH值为4-5，过滤收集沉淀；
步骤5 将所述中药混合细粉与所述沉淀混合，制得所述中药组合物。
作为优选，动物骨头为猪、牛或羊的四肢骨。
作为优选，步骤4还包括对所述沉淀进行纯化处理。
优选地，所述步骤4还包括灭菌。
本发明还提供了按照上述制备方法制得的中药组合物。
本发明还提供了所述中药组合物在制备治疗高血压或高血脂、抗衰老、提高免疫 力的药品或保健品的用途。
本发明还提供了一种中药制剂，包括本发明提供的中药组合物以及药学上可接受 的辅料。
作为优选，该药学上可接受的辅料包括淀粉、滑石粉、硬脂酸镁、糊精、蔗糖、环糊 精、苯甲酸钠中的一种或两者以上混合物。
作为优选，该药学上可接受的辅料为淀粉。
作为优选，本发明提供的中药制剂具体为片剂或胶囊剂。
柑橘类黄酮之所以具有突出的抗氧化性和消除自由基的能力，是由其结构决定 的。基本结构为
权利要求
1.一种中药组合物的制备方法，其特征在于，原料为柑橘皮3000-4000重量份，山药 10-20重量份，茯苓10-20重量份，动物骨头10-20重量份；步骤1 将山药和茯苓粉碎，加入5倍重量份的去离子水常压煎煮池，过滤取滤渣，加入 3倍重量份的去离子水常压煎煮池，过滤取滤液，制得山药与茯苓煎煮液；步骤2 将动物骨头粉碎，加10倍重量份的去离子水，常压煎煮10-14h，制得骨糊；步骤3 将所述山药与茯苓煎煮液、所述骨糊混合，在45-55°C用盐酸与醋酸按照体积 比1 3配制成的混合酸液调节pH值为2-3，加入0.5-1重量份的胃蛋白酶酶解8-12h;再 加热至72-73°C，用所述混合酸液调节pH值为5-6，降温至45_55°C，加入0. 65-1重量份的 α -淀粉酶酶解8-12h，浓缩，粉碎制得中药混合细粉；步骤4 将所述柑橘皮粉碎，用乙醇超声提取，过滤后收集滤液浓缩，加入氢氧化钠溶 液调节PH值为12-13浸提，过滤收集滤液，加入酸液调节pH值为4-5，过滤收集沉淀；步骤5 将所述中药混合细粉与所述沉淀混合，制得所述中药组合物。
2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述动物骨头为猪、牛或羊的四肢骨。
3.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤4还包括对所述沉淀进行纯化 处理。
4.按照权利要求1至3中任一项所述制备方法制得的中药组合物。
5.如权利要求4所述的中药组合物在制备治疗高血压或高血脂、抗衰老、提高免疫力 的药品或保健品的用途。
6.一种中药制剂，其特征在于，包括如权利要求4所述中药组合物以及药学上可接受 的辅料。
7.如权利要求6所述的中药制剂，具体为片剂或胶囊剂。
全文摘要
本发明公开了一种中药组合物的制备方法，将山药和茯苓制成山药和茯苓煎煮液，再混合动物骨头熬制成的骨糊，采用生物酶解技术，制得中药混合细粉，再添加从废弃柑橘皮中提纯的柑橘类黄酮，制得所述含有柑桔类黄酮的中药组合物，将中药组合物中柑橘类黄酮的含量提高至2.8％，降低了铅、总砷、总汞等重金属的含量，对人体无毒副作用，且微生物各项指标均达到合格标准。将崩解时限控制在30min以内，起效迅速；疗效显著，在临床治疗试验中，本发明提供的中药胶囊剂或片剂降血压的显效率在94.53％，降血脂的显效率在93.48％，抗衰老的总有效率在92.92％，提高免疫力的总有效率在92.06％。
文档编号A61K35/32GK102028849SQ20101061776
公开日2011年4月27日 申请日期2010年12月31日 优先权日2010年12月31日
发明者王中华 申请人:湖南佳信佰生物技术有限公司