专利名称：对错误折叠的朊病毒蛋白具有特异性的抗体和表位的制作方法
技术领域：
本发明涉及对错误折叠的朊病毒蛋白具有特异性的抗体和表位。更具体地，本发明提供对错误折叠的朊病毒蛋白的YML表位具有特异性的抗体和表位。
背景技术：
朊病毒病(例如，克罗伊茨费尔特-雅各布病、牛海绵样脑病、瘙痒病，以及鹿和马鹿的慢性萎縮病)一般特征为正常的细胞朊病毒蛋白(PrPう由模板指导转变成异常的蛋白酶抗性同エ型(PrPse)。ー些朊病毒病可以是遗传性的，并且可在PNRP基因中包含突变，而另ー些则是偶发性的或感染性的。已经鉴定了多种可遗传形式的突变，并且所述突变可致使PrPG更易于转变成异常且与疾病相关的PrPse形式。 PNRP基因的翻译产物一般由253个(在人中)、254个(在仓鼠中)或256个(在绵羊中)氨基酸组成，并且可发生若干翻译后修饰(例如，Pucket, C.等，Am. J. Hum. 49 320-329 (1991))。例如，在仓鼠中，在N端切除22个氨基酸的信号肽，添加糖基磷脂酰肌醇(GPI)锚定后从C端去除23个氨基酸，以及将连接天冬酰氨的寡糖附着到以ニ硫键形成的环的 181 和 197位残基上(例如，Stahl，N.等，Biochemistry 29:5405-5412(1990) ；Safar,J.等，Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87 :6377, (1990)) 在朊病毒相关的脑病中，PrPc(正常的细胞同エ型)转变成名为PrPse的改变形式，后者可基于例如ー个或多个以下特征而在实验上将其与PrPG区分开(I)PrPsc在生理溶剂中不能溶解，而是形成聚集体；(2)PrPsc对蛋白酶K的蛋白水解降解具有部分抗性，因为在PrPe完全降解的条件下蛋白酶K消化仅除去了N端 67个氨基酸，产生称为PrP27-30的N端截短形式；(3) PrPse在蛋白质构象上有改变，从PrPe的α -螺旋变成了富含β -折叠片ニ级结构的改变形式(例如，Cohen等Science264 :530-531(1994)) ο结构在PrPG到PrPse同エ型的转变中起作用，这是众所周知的，然而PrPse同エ型的详细结构细节了解得比较晚，这一部分是因为与PrPse聚集体的增溶作用和无序结构相关的困难。在人PrPG中，结构元件包括β链I (128-131位残基)、α螺旋I (144-154位残基)、β链2 (161-164位残基)、α螺旋2 (173-194位残基)和α螺旋3 (200-228位残基)(Riek 等，1996, Nature 382 :180 ；Zahn 2000, Proc. Natl Acad. Sci 97 :145-150)。Knaus等,2001 (Nature Structural Biology 8 :770-774)通过描述瓶病毒蛋白中经过一些结构元件的相互作用和重排进行寡聚化的可能机制而增进了这ー认识。因为PrPe和PrPse同エ型具有相同的氨基酸序列，所以在健康个体中刺激免疫应答或提供与两种同エ型均相互作用的治疗剂可能至少是无效的，并可能对受试者有害。已经报道，朊病毒蛋白的正常细胞同エ型(PrPう免疫原性很弱。此外，已经报道，尽管对PrPe具有偏好反应性的抗体干扰朊病毒在体外和体内的繁殖，但这种基本普遍的细胞表面蛋白的免疫识别可能是有害的。疾病中朊病毒蛋白的转变与某些细胞表面表位的丢失以及其他表位的获得相关。Paramithiotis 等(Nat Med 20039 =893-899)描述了三肽基序 YYR。US 7041807 描述了哺乳动物朊病毒蛋白的YYR表位的抗体，并讨论了 YYX表位。US 6765088讨论了牛PrP的片段的抗体。US 5846533描述了对PrPse蛋白具有特异性的抗体，其通过噬菌体展示方法产生。发明概述本发明的一部分提供对错误折叠的朊病毒蛋白具有特异性的抗体和表位，例如对错误折叠的朊病毒蛋白的YML表位具有特异性的抗体和表位。一方面，本发明提供与错误折叠的PrP中的YML表位结合的抗体或其片段。在一个实施方案中，所述抗体选择性结合PrP'在一个实施方案中，所述抗体不特异性结合PrPe。
在一个实施方案中，表位存在于选自以下的ー个或多个序列中GGYMLGS、GGYMLG、GYMLGS, GGYML, YMLGS, GYML 和 YMLG (SEQ ID NO :8_14)。在一个实施方案中，所述抗体是单克隆抗体。在一个实施方案中，所述抗体是多克隆抗体。在一个实施方案中，所述抗体是IgG、IgM、IgE、IgD或IgA。在一个实施方案中，可通过培养在加拿大国际保藏机构(InternationalDepositary Authority of Canada)以登录号260210-01保藏的杂交瘤来产生所述抗体。另ー方面，本发明提供免疫缀合物，其包含与错误折叠的PrP的YML表位结合的抗体或其片段，以及与之缀合的选自ー种或多种检测标记和细胞毒素的试剂。另ー方面，本发明提供针对与错误折叠PrP选择性结合的抗体的免疫原性肽，所述肽包含YML序列。在一个实施方案中，所述肽可用于产生选择性结合错误折叠的PrP的抗体，所述错误折叠的 PrP 选自 SEQ ID NO :7、SEQ ID NO :8、SEQ ID NO :9、SEQ ID NO :10、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO: 12、SEQ ID NO :13 或 SEQ ID NO :14 序列中的ー个或多个。在一个实施方案中，所述肽不是全长PrP蛋白质。在一个实施方案中，所述肽可进ー步包含免疫原性载体，以增强所述肽的免疫原性。另ー方面，本发明提供组合物，其包含与错误折叠的PrP的YML表位结合的抗体或其片段。另ー方面，本发明提供包含免疫缀合物的组合物，所述免疫缀合物包含与错误折叠PrP的YML表位结合的抗体或其片段，以及与之缀合的选自ー种或多种可检测标记和细胞毒素的试剂。另ー方面，本发明提供包含针对抗体(其选择性结合错误折叠PrP)的肽的组合物，所述肽包含YML序列。在另ー实施方案中，所述肽可选自SEQ ID NO 7, SEQ ID NO :8、SEQ ID N0:9、SEQ ID NO :10、SEQ ID NO 1USEQ ID NO 12, SEQ ID NO :13 或 SEQ ID NO:14序列中的ー个或多个。在一个实施方案中，所述肽可进ー步包含免疫原性载体，以增强所述肽的免疫原性。在一个实施方案中，所述组合物可以是药物组合物。在一个实施方案中，所述组合物可进ー步包含药物载体。另ー方面，本发明提供所述抗体或其片段、所述免疫缀合物、所述肽或所述组合物用于治疗与错误折叠PrP相关的疾病或病症的用途。另ー方面，本发明提供包含所述肽或免疫缀合物的疫苗用于治疗与错误折叠PrP相关的疾病或病症的用途。另ー方面，本发明提供所述抗体或其片段、所述免疫缀合物、所述肽或所述组合物用于治疗PrPse相关疾病或病症的用途。另ー方面，本发明提供包含所述肽或免疫缀合物的疫苗用于治疗PrPse相关疾病或病症的用途。在一个实施方案中，所述疾病或病症可选自Gerstmann-StrSussler.-Scheinker病(GSS)、家族性克罗伊茨费尔特-雅各布病、偶发性克罗伊茨费尔特-雅各布病、医源性克罗伊茨费尔特-雅各布病、变型克罗伊茨费尔特-雅各布病、致命性家族性失眠症、瘙痒病、库鲁病、海绵状脑病、传染性水貂脑病、慢性萎缩病、猫科海绵状脑病和外来有蹄类脑病。 另ー方面，本发明提供所述抗体或其片段、所述免疫缀合物、所述肽或所述组合物用于治疗包含表达错误折叠PrP之致瘤细胞的肿瘤的用途。另ー方面，本发明提供包含所述肽或免疫缀合物的疫苗用于治疗包含表达错误折叠PrP之致瘤细胞的肿瘤的用途。在一个实施方案中，所述肿瘤可具有YML+表型。另ー方面，本发明提供治疗或预防与错误折叠PrP相关的疾病或病症的方法，所述方法包括向有此需要的受试者施用治疗有效量的所述抗体或其片段、所述免疫缀合物、所述肽或所述组合物。另一方面，本发明提供对患有与错误折置PrP相关的疾病或病症或有患病风险的受试者进行免疫的方法，所述方法包括向有此需要的受试者施用治疗有效量的包含所述肽的疫苗。在一个实施方案中，所述疾病或病症与PrPse相关。在一个实施方案中，所述疾病或病症选自Gerstmann-StrMusslgr -Scheinker 病(GSS)、家族性克罗伊茨费尔特-雅各布病、偶发性克罗伊茨费尔特-雅各布病、医源性克罗伊茨费尔特-雅各布病、变型克罗伊茨费尔特-雅各布病、致命性家族性失眠症、瘙痒病、库鲁病、海绵状脑病、传染性水貂脑病、慢性萎缩病、猫科海绵状脑病和外来有蹄类脑病。另ー方面，本发明提供治疗包含表达错误折叠PrP之致瘤细胞的肿瘤的方法，所述方法包括向有此需要的受试者施用治疗有效量的所述抗体或其片段、所述免疫缀合物、所述肽或所述组合物。在一个实施方案中，所述肿瘤可具有YML+表型。另ー方面，本发明提供杂交瘤细胞系，其产生与错误折叠的PrP的YML表位结合的单克隆抗体。在一个实施方案中，所述错误折叠的PrP是PrPse。在一个实施方案中，所述杂交瘤细胞系是International Depositary Authorityof Canada在登录号260210-01下保藏的杂交瘤，及其后代和衍生物。在另ー实施方案中，所述YML表位存在于序列GGYMLGS、GGYMLG, GYMLGS, GGYML,YMLGS、GYML 和 YMLG(SEQ ID NO :8_14)中。另ー方面，本发明提供检测生物样品中错误折叠的PrP的方法，其包括(a)使生物样品与所述抗体或其片段或所述免疫缀合物在在允许所述抗体或所述免疫缀合物与所述错误折叠PrP之间形成复合物的条件下接触，和(b)检测所述复合物，作为该生物样品中存在错误折叠的PrP的指示。在一个实施方案中，通过免疫印迹检测所述复合物。在一个实施方案中，所述错误折叠的PrP是PrPsc。另ー方面，本发明提供产生与错误折叠PrP的YML表位结合的抗体的方法，所述方法包括(a)将产生与错误折叠PrP的YML表位结合的单克隆抗体的杂交瘤细胞系在使抗体释放到培养物上清液的条件下进行培养；和(b)从上清液中分离抗体。在一个实施方案中，培养的杂交瘤是登录号为260210-01的杂交瘤。另ー方面，本发明提供产生与错误折叠PrP的YML表位结合的抗体的方法，所述方法包括(a)用所述肽对受试者进行免疫；和(b)从该受试者的组织中分离所述抗体，或从 由该组织制备的杂交瘤中分离所述抗体。另ー方面，本发明提供检测生物样品中错误折叠PrP的存在情况的试剂盒，其包含(a)与错误折叠PrP的YML表位特异性结合的ー种或多种抗体或抗血清；和(b)其使用说明书。在一个实施方案中,所述试剂盒还包含一种或多种检测试剂。本发明内容不一定描述了本发明的全部特征。根据下文对本发明具体实施方案描述的综述，本发明的其他方面、特征和优点对本领域技术人员而言会是很明显的。附图
简述本发明的这些特征及其他特征在下文描述中会变得更明显，其中參考以下附图图I显示了使用磁珠偶联的PrP特异单克隆抗体和对照(包括识别朊病毒蛋白的两种同エ型的抗体，和不识别朊病毒蛋白任一同エ型的其他抗体)对小鼠和仓鼠的脑匀浆物进行免疫沉淀，然后使用识别PrPG和PrPse的单克隆抗体(与生物素偶联的6D11)进行检测。仓鼠WT-正常仓鼠的脑匀浆；RML-来自RML小鼠(适应朊病毒感染的小鼠)的脑匀浆；Tg20-来自PrPG过表达小鼠品系的脑匀浆；K/0-来自PrPG-/_小鼠的脑匀浆；WT-来自野生型(未感染的，正常的)小鼠的脑匀浆；263K-来自263K仓鼠(适应朊病毒感染的仓鼠)的脑匀浆；对照-PrPse蛋白。8B4珠子-利用8B4抗体偶联珠子(识别PrPG和PrPsc)免疫沉淀的脑匀浆；1A1珠子-利用IAl抗体偶联珠子(识别PrPse蛋白)免疫沉淀的脑匀浆；4E4珠子-利用4E4抗体偶联珠子(识别不相关蛋白质)免疫沉淀的脑匀浆；IgM同种型珠子-利用IgM同种型阴性对照抗体免疫沉淀的脑匀浆；仅珠子-仅利用珠子(无抗体)免疫沉淀的脑匀浆。图2显示A)人，B)绵羊，C)小鼠，D)仓鼠，E)牛和F)马鹿朊病毒蛋白的氨基酸序列(SEQ ID NO :1-6)。图3显示图2的人、绵羊、小鼠、仓鼠和牛序列的Clustal W比对。图4提供了利用同种型对照抗体(黒色阴影)或PrP抗体6D11或YML特异性抗体IAl(黑线，如指示)检测正常和肿瘤细胞的结果的流式细胞术柱状图。图5显示IAl抗体对携带B16-F10肿瘤的小鼠的治疗效果。发明详述在下文的描述中，广泛使用大量术语，提供以下定义便于理解本发明的多个方面。说明书中实例(包括术语的实例)的使用仅为说明目的，并不g在限制本文本发明实施方案的范围和含义。数值范围包括限定该范围的数值。在本说明书中，“包含”用作开放式术语，基本等同于短语“包括但不限干”，“包括”也具有相同的含义。“朊病毒”指主要由(或者也可能仅由)单个蛋白质(即“朊病毒蛋白”或“PrP”)组成的物质。错误折叠的朊病毒蛋白(错误折叠的PrP)已经牵涉到多种疾病。正常的细胞朊病毒蛋白通常称为PrPG，而错误折叠的蛋白酶抗性同エ型称为PrPSe。已经在许多物种中鉴定到了 PrP，包括哺乳动物和鸟类。在SEQ ID NO :1_6中描述了示例性哺乳动物PrP。术语“表位”指蛋白质中氨基酸的排列或其上的修饰(例如糖基化)。氨基酸可以线性形式排列，如蛋白质的ー级序列，或者一旦蛋白质部分或完全形成构型，其可以是紧密接近的ニ级或三级排列。表位可与抗体、抗体片段、肽、肽模拟物等特异性结合，或与配体特异性结合。表位可具有一定范围的大小，例如线性表位可以小至两个氨基酸，或可以更大，从约3个氨基酸到约20个氨基酸。在一些实施方案中，表位长度可以从约5个氨基酸至约10个或约15个氨基酸。氨基酸ニ级或三级排列的表位可包括少至两个氨基酸，或可以更 大，从约3个氨基酸到约20个氨基酸。在一些实施方案中，ニ级或三级表位的长度可以是与表位内ー些或其他氨基酸邻近的约5个氨基酸至约10个或约15个氨基酸。“同エ型”是同一蛋白质的若干不同形式中的任ー种。变体形式可由ー个或多个单核苷酸多态性引起(例如，导致单个氨基酸改变)，或可以是由剪接变体引起，例如包括或排除翻译蛋白质中的氨基酸序列。变体也可由蛋白质折叠的差异引起，以至于在一个同エ型中“掩埋”在3维结构中的一个或多个表位暴露在蛋白质的第二个同エ型中。这些折叠变体可能是因序列不同、翻译后修饰或其他影响(如特定同エ型的存在)造成。朊病毒蛋白是相同氨基酸序列存在于两种结构同エ型中的蛋白质的实例PrPe( ‘正常的’、‘未受影响的’、‘天然的’或‘野生型’同エ型)和PrPSc;同エ型(‘疾病状态的’、‘受影响的’、‘错误折叠的’或‘异常的’同エ型)。朊病毒蛋白的错误折叠特异表位的暴露提供了ー个或多个朊病毒特异的表位，其允许区分朊病毒蛋白的PrPG和错误折叠同エ型，例如PrPse同エ型。这些表位可用作诊断靶标(例如，用于基于ELISA或流式细胞计量术的诊断方法，其利用来自患有或怀疑患有朊病毒相关疾病或病症的受试者的生物样品进行)。这些表位还可用作治疗或预防靶标。例如，可在药物组合物中使用ー个或多个表位，用于在其所施用的受试者中诱导免疫力，以防止可见于朊病毒相关疾病或病症中的朊病毒错误折叠的增多。作为另ー实例，ー个或多个表位可特异性地被免疫分子(如抗体)结合，所述免疫分子已被修饰成向包含错误折叠的朊病毒蛋白的细胞或组织输递治疗剂。Pruisner 1993 (Dev. Biol Stand. 80 :31_44)提供了动物和人的一些瓶病毒疾病和病症(或者称为传染性海绵状脑病；TSE)的综述。在人或动物中发现的与朊病毒蛋白错误折叠相关的疾病或病症(“朊病毒相关的”或“朊病毒错误折叠相关的”)包括但不限于Gerstmann-StrSussler-Scheinker病(GSS)、家族性克罗伊茨费尔特-雅各布病、偶发性克罗伊茨费尔特-雅各布病、医源性克罗伊茨费尔特-雅各布病、变型克罗伊茨费尔特-雅各布病、致命性家族性失眠症、瘙痒病(例如绵羊或山羊中)、库鲁病、牛海绵状脑病(疯牛病)、传染性水貂脑病、慢性萎縮病(例如，鹿、马鹿和驼鹿中)、猫科海绵状脑病、外来有蹄类脑病(例如，尼牙薮羚、羚羊、大弯角羚(great kudu)中)、鸵鸟的海绵状脑病。与朊病毒蛋白错误折叠相关的疾病或病症还包括癌症，尤其是与具有PrP+表型的细胞类型相关的癌症，其最终可呈现仅与错误折置的PrP相关的表面表位，如YML表位。PrP的球形结构域中存在两条β链。β I链(使用人序列编号的残基128-131)包含YML (SEQ ID NO: 7)序列。在天然PrPG同エ型(天然结构的PrPG)中，β链I包埋在PrPG同エ型的三维结构内部，并且对干与免疫细胞、抗体或其他分子的相互作用而言是溶剂无法接近的。不受任何特定假说的束缚，在对产生错误折叠形式的构象转变进行诱导后(例如,通过低pH处理、暴露在PrPse同エ型中、或诱导PrPG到PrPse重排的其他已知方法)，β链I可暴露于溶剂并可用干与免疫细胞、抗体或其他分子的相互作用。包含YML序列和哺乳动物PrP氨基酸序列β链I的ー些或全部氨基酸以及在一些实施方案中还包含β链I侧翼额外氨基酸的氨基酸序列包括但不限于GGYMLGS (SEQ IDNO8)、GGYMLG(SEQ ID NO :9)、GYMLGS(SEQ ID NO :10)、GGYML(SEQ ID NO :11)、YMLGS(SEQID NO :12)、GYML(SEQ ID NO : 13)、YMLG(SEQ ID NO :14)和 YML(SEQ ID NO :7)。
因此，本发明提供包含SEQ ID NO :7_14之ー个或多于ー个氨基酸肽。更一般地，本文所用的肽是包含并呈现YML序列为表位的那些肽，所述表位用于产生选择性结合YML的抗体。此类肽可包括全长PrP蛋白质，但是其必须处于错误折叠的形式，以便YML表位呈递到抗体生产宿主中。在实践中，含有YML的肽一般由不多于约50个氨基酸残基组成，例如由不多于约40个残基、30个残基、20个残基或15个残基组成，其中最大残基数的选择是基于期望以免疫原形式呈现YML表位，同时将与其产生相关的成本降至最低。除了 YML序列以外，肽会包含少量残基，其足以呈现YML作为可用于产生抗体的免疫原性表位。例如，含有YML的肽通常需要至少约5个残基、6个残基或7个残基。如本文指出，肽可偶联到用于增强其在抗体生产宿主中的免疫原性的任何试剂上。可使用包含YML表位的免疫原肽(如包含SEQ ID NO :7_14之一个或多个的肽)在受试者中诱导对错误折叠PrP (如PrPse同エ型)具有特异性的免疫应答。例如，此类肽可用于免疫小鼠或其他动物，以产生对错误折叠的PrP(如PrPse同エ型)具有特异性的多克隆(抗血清)或单克隆抗体。此类抗体可用于例如在免疫測定中检测生物样品中错误折叠的PrP，如PrPse。可在药物制剂中提供此类肽。阐明本领域技术人员已知的肽合成技术和方法一般原则的标准參考文献包括，例如Chan 等，Fmoc Solid Phase Peptide Syntnesis, Oxford University Press, Oxford,United Kingdom,2005 ；Peptide and Protein Drug Analysis,编辑 Reid, R. , MarcelDekker, Inc. , 2000 ；Epitope Mapping,编辑 Westwood 等，Oxford University Press,Oxford, United Kingdom, 2000 ;Sambrook 等，Molecular Cloning A Laboratory Manual,第 3版,Cold Spring Harbor Press, Cold Spring Harbor, NY 2001 ;和 Ausubel 等，CurrentProtocols in Molecular Biology, Greene Publishing Associates and John Wiley &Sons, NY,1994)。当其序列可与同一种、属、科或目中发现的其他序列区分开时，则可特异性地鉴定蛋白质或多肽，或者蛋白质或多肽的片段或部分。可通过比较序列来鉴定该区別。可使用BLAST 算法完成序列比较(Altschul 等 1009. J. Mol Biol 215 :403-410)。BLAST 检索允许将查询序列与特定序列或序列组进行比较，或与更大的序列文库或数据库(例如，GenBank或GenP^t)进行比较，并且不仅鉴定显示100%同一性的序列，还鉴定具有更低程度同一性的那些序列。对于具有多个同エ型的蛋白质，当同エ型与来自相同或不同物种的其他同エ型区分开时，可通过特异检测ー个同エ型上存在而在ー个或多个其他同エ型上缺少或不可检测的结构、序列或基序来特异性地鉴定同エ型。本领域技术人员应理解的是，序列内氨基酸的任何数字标号与该具体序列相关。同样，根据序列编号方式和所选序列，相同的位置可指定为不同的数字标号。此外，序列变异(如插入或缺失)可改变相对位置，并因此改变ニ级或三级结构的位点上和位点周围的特定氨基酸的数字标号。例如，SEQ ID NO :1-6代表的序列均代表来自人、小鼠、绵羊、牛、仓鼠或马鹿的哺乳动物朊病毒蛋白的氨基酸序列。然而，如图3所示，序列之间存在ー些序列差异，编号差异，或序列及编号差异。对本领域技术人员同样显而易见的是，朊病毒蛋白表位、序列和结构元件的相对位置在各种物种中是相同的。可对核酸样品或蛋白质样品进行测序(例如，使用标准方法，如本文中提到的那些方法)，或在包含ー种或多种朊病毒氨基酸或核酸序列(突变体或正常的，全长、部分或片段)的序列数据库BLAST检索中使用本文列出的任何序列或任何这些序列的片段，从而鉴定代表朊病毒蛋白序列(正常或野生型，或者有或没有与ー些朊病毒错误折叠相关疾病或病症相关的突变)的其他序列。BLAST 也可用于在其他物种中鉴定朊病毒蛋白序列，或朊病毒蛋白样序列。用于描述本发明肽化合物的命名法遵循常规实践，其中氨基出现在每一氨基酸残基的左边，而羧基出现在右边。在代表本发明选定的特定实施方案的序列中，尽管未明确显示，但均应理解成氨基和羧基末端基团处于它们在生理PH值下所采取的形式，除非另有说明。一般根据下表I通过单字母或三字母的名称(对应于氨基酸的惯用名)代表每ー氨基酸残基表I通常见于肽中的20种标准L-氨基酸的命名法和缩写
三字母縮写单字母縮写 丙氨酸AlaA
半胱氨酸C
天冬氨酸 AspD
谷氨酸Gk；E
苯丙氨酸 PheF
甘氨酸Gl^G
组氨酸HisH
异亮氨酸 HeI
赖氨酸LysK
权利要求
1.与错误折叠的PrP的YML表位结合的抗体或其片段。
2.权利要求I的抗体，其中所述抗体与PrPse选择性结合。
3.权利要求I或2的抗体，其中所述抗体不与PrPe特异性结合。
4.权利要求I到3任ー项的抗体，其中所述表位存在于选自以下ー个或多个的序列中GGYMLGS, GGYMLG, GYMLGS, GGYML, YMLGS, GYML 和 YMLG (SEQ ID NO :8_14)。
5.权利要求I到4任ー项的抗体，其中所述抗体是单克隆抗体。
6.权利要求I到5任ー项的抗体，其中所述抗体是多克隆抗体。
7.权利要求I到6任ー项的抗体,其中所述抗体是IgG、IgM、IgE、IgD或IgA。
8.权利要求I到7任ー项的抗体，其通过培养以登录号260210-01保藏于加拿大国际保藏机构的杂交瘤而产生。
9.免疫缀合物，其包含权利要求I到8任ー项的抗体，以及与之缀合的选自ー种或多种检测标记和细胞毒素的试剂。
10.针对与错误折叠的PrP选择性结合之抗体的免疫原性肽，所述肽包含YML序列。
11.权利要求10的肽，其中所述肽选自SEQID NO:7、SEQ ID NO :8、SEQ ID NO :9、SEQID NO 10,SEQ ID NO :11、SEQ ID NO 12,SEQ ID NO :13 或 SEQ ID NO :14 序列中的ー个或多个。
12.权利要求10的肽，其还包含免疫原性载体，以增强所述肽的免疫原性。
13.包含权利要求I到8任一项所述抗体的组合物。
14.包含权利要求9所述免疫缀合物的组合物。
15.包含权利要求10到12任一项所述肽的组合物。
16.权利要求13到15任一项的组合物，其中所述组合物是药物组合物。
17.权利要求16的组合物，其还包含药物载体。
18.权利要求I到8任ー项的抗体、权利要求9的免疫缀合物、权利要求10到12任一项的肽或权利要求13到17任一项的组合物用于治疗与错误折叠PrP相关的疾病或病症的用途。
19.包含权利要求10到12任一项所述肽或权利要求9所述免疫缀合物的疫苗用于治疗与错误折叠PrP相关的疾病或病症的用途。
20.权利要求18或权利要求19的用途，其用于治疗与PrPse相关的疾病或病症。
21.权利要求18到20任ー项的用途，其中所述疾病或病症选自Gerstmann-Straussler-Scheinker病(GSS)、家族性克罗伊茨费尔特_雅各布病、偶发性克罗伊茨费尔特-雅各布病、医源性克罗伊茨费尔特-雅各布病、变型克罗伊茨费尔特-雅各布病、致命性家族性失眠症、瘙痒病、库鲁病、海绵状脑病、传染性水貂脑病、慢性萎缩病、猫科海绵状脑病和外来有蹄类脑病。
22.权利要求18或权利要求19的用途，其用于治疗包含表达错误折叠PrP之致瘤细胞的肿瘤。
23.权利要求22的用途，其中所述肿瘤具有YML+表型。
24.用于治疗或预防与错误折叠PrP相关的疾病或病症的方法，所述方法包括向有此需要的受试者施用治疗有效量的权利要求I到8任一项所述抗体、权利要求9所述免疫缀合物、权利要求10到12任一项所述肽或权利要求13到17任ー项所述组合物。
25.对患有或有风险发生与错误折叠PrP相关的疾病或病症的受试者进行免疫的方法，所述方法包括向有此需要的受试者施用治疗有效量的包含权利要求10到12任ー项所述肽的疫苗。
26.权利要求24或25的方法，其中所述疾病或病症与PrPse相关。
27.权利要求24到26任ー项的方法，其中所述疾病或病症选自Gerstmann-Straussler-Scheinker病(GSS)、家族性克罗伊茨费尔特_雅各布病、偶发性克罗伊茨费尔特-雅各布病、医源性克罗伊茨费尔特-雅各布病、变型克罗伊茨费尔特-雅各布病、致命性家族性失眠症、瘙痒病、库鲁病、海绵状脑病、传染性水貂脑病、慢性萎缩病、猫科海绵状脑病和外来有蹄类脑病。
28.权利要求24或权利要求25的方法，其用于治疗包含表达错误折叠PrP之致瘤细胞的肿瘤。
29.权利要求28的方法，其中所述肿瘤具有YML+表型。
30.杂交瘤细胞系，其产生与错误折叠PrP的YML表位结合的单克隆抗体。
31.权利要求30的杂交瘤细胞系，其中所述错误折叠的PrP是PrPSe。
32.权利要求30的杂交瘤细胞系，其为以登录号260210-01保藏于加拿大国际保藏机构的杂交瘤及其后代和衍生物。
33.权利要求30的杂交瘤细胞系，其中所述YML表位存在于序列GGYMLGS(SEQ ID NO:8)中。
34.用于检测样品中错误折叠的PrP的方法，其包括 (a)使生物样品与权利要求I到8任一项所述抗体或权利要求9所述免疫缀合物在允许所述抗体或所述免疫缀合物与所述错误折叠PrP之间形成复合物的条件下接触，和 (b)检测所述复合物作为该生物样品中存在错误折叠PrP的指标。
35.权利要求34的方法，其中通过免疫印迹检测所述复合物。
36.权利要求34或35的方法，其中所述错误折叠的PrP是PrP'
37.产生与错误折叠PrP的YML表位结合的抗体的方法，所述方法包括 (a)将权利要求30到33任一项所述杂交瘤细胞系在使抗体被释放到培养上清液中的条件下进行培养；和 (b)从所述上清液中分离所述抗体。
38.权利要求37的方法，其中所培养的杂交瘤是登录号260210-01的杂交瘤。
39.产生与错误折叠PrP的YML表位结合的抗体的方法，所述方法包括 (a)用权利要求10到12任一项的肽免疫受试者；和 (b)从该受试者的组织中分离所述抗体，或从由所述组织制备的杂交瘤中分离所述抗体。
40.用于检测生物样品中错误折叠PrP的存在情况的试剂盒，其包含 (a)与错误折叠PrP的YML表位特异性结合的ー种或多种抗体或抗血清；和 (b)其使用说明。
41.权利要求40的试剂盒，其还包含一种或多种检测试剂。
全文摘要
本发明涉及对错误折叠的朊病毒蛋白(PrP，例如PrPSc)具有特异性的抗体和免疫原性肽及其用途。所述免疫原性肽包含酪氨酸-甲硫氨酸-亮氨酸(YML)氨基酸序列。所述抗体或肽可用于治疗或预防与错误折叠的PrP相关的疾病或病症，包括癌症。特别地，使用由GGYMLGS序列(即SEQ ID NO 8)组成的肽(其对应于识别错误折叠PrP但不识别正常PrP的人PrP 1A1的126至132位残基)产生了名为“1A1”的IgM单克隆抗体。
文档编号A61K39/385GK102695722SQ201080019395
公开日2012年9月26日 申请日期2010年3月2日 优先权日2009年3月2日
发明者尼尔·R·卡什曼 申请人:不列颠哥伦比亚大学