专利名称：一种含有倍半萜葡萄糖苷和黄酮类成分组合物的制备的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种中药材的提取物及该提取物的制备方法，特别涉及一种短葶山麦冬须根的提取物及该提取物的制备方法。
背景技术：
短葶山麦冬来源为百合科山麦冬属植物短葶山麦冬Liriope muscari (Decn.) Baily的干燥块根。短葶山麦冬喜温暖气候、较潮湿和荫蔽的环境，野生于海拔2000m以下的坡阴湿处，常在有阔叶林的山间分布得较多，针叶林地则很少。在我国分布于主要分布于福建泉州市洛江区及莆田市仙游县等地，具有养阴生津、润肺清心的功效，用于治疗肺燥干咳，阴虚痨嗽，喉痹咽痛，津伤口渴，心烦失眠，肠燥便秘。传统上一般以短葶山麦冬的块根入药，而块根上连带的大量须根在山麦冬药材采集时作为废物被弃用。但是据我们的研究发现须根中也含有大量的有效成分，并且须根中的有效成分含量较块根中高。因此，为了开发新的药用资源，我们发明了从短葶山麦冬须根中制备倍半萜葡萄糖苷和黄酮类成分的方法，希望能废物利用。
发明内容
本发明人在对短葶山麦冬须根中的倍半萜葡萄糖苷和黄酮类提取物进行研究中， 发现所得到的含有倍半萜葡萄糖苷和黄酮类提取物，因而完成了本发明的内容。本发明提供了一种来自短葶山麦冬须根中的倍半萜葡萄糖苷和黄酮类成分提取物，其中至少含有倍半萜葡萄糖苷成分，该提取物中倍半萜葡萄糖苷的含量以重量百分数计至少不低于5 %，优选30 %，但不超过80 %。本发明还提供了来自短葶山麦冬须根的上述提取物的提取方法，以得到倍半萜葡萄糖苷和黄酮类成分提取物。根据本发明提供的倍半萜葡萄糖苷和黄酮类提取物，其中至少含有倍半萜葡萄糖苷，每克提取物中含有的倍半萜葡萄糖苷和黄酮类成分以倍半萜葡萄糖苷计不少于500毫克。尤其是，每克提取物中含有倍半萜葡萄糖苷不少于50毫克。本发明的提取物可以来自任何含有所述倍半萜葡萄糖苷和黄酮类成分的原料药， 优选来自短葶山麦冬须根原料药中倍半萜葡萄糖苷和黄酮类成分。通过对成分的试验摸索，本发明尤其提供了应用大孔吸附树脂和水饱和正丁醇的提取方法得到的短葶山麦冬须根提取物，具有比较高的倍半萜葡萄糖苷和黄酮类有效成分含量，并且保持了天然原料的成分。本发明所称“倍半萜葡萄糖苷类”是指含有21个碳原子的化合物。根据前面所述，本发明的提取物来自短葶山麦冬须根，除含有倍半萜葡萄糖苷类成分外，还可以包括任何黄酮类部位。本发明的提取物可以是通过任何可行的方法得到，优选地可以是采用大孔吸附树脂吸附精制得到，使产物具有比较高的纯度和收率。
本发明采用原料生药，是未加工的短葶山麦冬须根生药，可进行除去杂质、清洗、 干燥等加工作为前期处理，提取方法如下短葶山麦冬须根药材粉碎，加入生药量6 10倍量的50 95%的甲醇或乙醇进行浸渍或加热回流提取1 3次；合并提取液，减压回收溶剂；将得到的浓缩液注入大孔吸附树脂柱，先用4 8倍量柱体积的纯净水洗脱至无糖反应，然后用4 10倍量柱体积 10% 50%溶剂洗脱至无皂苷反应，再用4 10倍量柱体积30% 95%溶剂洗脱，优选 80% 95%浓度洗脱，合并洗脱液，减压回收溶剂，用水饱和正丁醇进行萃取，萃取液浓缩， 干燥，得到化合物倍半萜葡萄糖苷和黄酮类成分为主的组分。结构鉴定倍半萜葡萄糖苷类化合物1 1β，6β-二羟基-cis-桉-3-烯-6-0-i3_D-吡喃葡萄糖苷。白色粉末，mp 169-171 °C。易溶于甲醇等极性溶剂。ESI-MS (m/z)谱给出 423 (M+Na+)分子离子峰，推断分子量为400。1H-NMR(DMSO-CI6)谱中，高场区给出两个双峰形式的甲基质子信号δ 0. 91 (3Η，d， J = 6. 5Ηζ)，δ 0. 85 (3H，d，J = 6.0Hz)和两个单峰形式的甲基质子信号δ 1.64(3H, s)， δ 1. 10 (3Η，s) ； δ 5. 19 (br. s)为烯氢信号，δ 4. 23 (1Η，d，J = 7. 7Hz)为葡萄糖端基质子信号，为-0- β -D构型，δ 3. 67 4. 24处，给出多个H，为葡萄糖中H质子信号。13C-NMR(DMS0-d6)谱中共出现21个碳原子，提示可能为倍半萜葡萄糖苷类。 δ 105. 30(C-1，) ,77. 47(C_5，),77. 05(C_3，), 74. 90(C_2，) ,71. 90(C_4，) ,61. 85(C_6，)。 δ 133. 55、120. 09为双键上的碳信号。综合以上分析，得出其分子式为C21H36O7，参考文献[1]，确认此化合物结构如
图1所示，为1 β，6 β - 二羟基-Cis-桉-3-烯-6-0- β -D-吡喃葡萄糖苷。化合物2 1 β，6 α - 二羟基-cis-桉_3_烯-6_0_ β β -D-吡喃葡萄糖苷。白色粉末，易溶于甲醇等极性溶剂。ESI-MS (m/z)谱给出423 (Μ+Na+)分子离子峰， 推断分子量为400。在1H-NMR(DMSO-CI6)谱中，高场区给出两个双峰形式的甲基质子信号δ 0. 95 (3Η， d，J = 6. 5Hz)，δ 0· 87 (3Η，d，J = 6. OHz)和两个单峰形式的甲基质子信号δ 1. 79 (3Η，s)， δ 0. 86 (3Η，s) ； δ 5. 08 (br. s)为烯氢信号；δ 4. 25 (1Η，d，J = 7. OHz)为葡萄糖端基质子信号，为-Ο-β-D构型，δ 2. 86 3. 10处，给出多个H，为葡萄糖中H质子信号。13C-NMR(DMS0-d6)谱中共出现21个碳原子，δ 60 80处有7个碳，δ 102. 50为糖的端基碳原子，进一步说明化合物可能为倍半萜葡萄糖苷类。S 135. 53、118.42为双键上的碳信号。ROESY谱中，Me-14 β与Η_5 β，Η_6 β与Η_5 β有相关点，推断该化合物的相对构型为1 β，6 α - 二羟基-cis-桉-3-烯-6-0- α -D-吡喃葡萄糖苷。综合以上分析，得出其分子式为C21H36O7，参考文献[2]，确认此化合物结构如图1所示，为1 β，6 α - 二羟基-cis-桉-3-烯-6-0- β -D-吡喃葡萄糖苷。化合物3 1，4-环氧-cis-桉-6-0-β-D-吡喃葡萄糖苷。白色粉末，易溶于甲醇等极性溶剂。ESI-MS (m/z)谱给出423 (Μ+Na+)分子离子峰， 推断分子量为400。
在1H-WR (DMSO-Cl6)谱中，δ 0. 89 (3Η, d, J = 6. OHz), δ 0. 87 (3Η, d, J = 6. OHz)和 δ 1.85(lH，m)是异丙基上质子信号；δ 1.40(3H,s), δ 1.06(3H,s)是以两个单峰形式的甲基质子信号；S 4. 19(lH，d，J = 7. 7Hz)为葡萄糖端基质子信号，为_0_ β-D构型，δ 3. 01 3. 70处，给出多个H，为葡萄糖中H质子信号。13C-NMR (DMS0-d6)谱中共出现21个碳原子，提示可能为倍半萜葡萄糖苷类。 δ 102. 76(C-1，) ,77. 44(C_5，),77. 16(C_3，), 74. 46 (C~2' ),70. 65(C_4，) ,61. 72(C_6，)。 δ 87. 66,85. 47,76. 21为与氧相连的碳，但该化合物苷元部分中只含有2个氧原子，提示分子式中可能存在一个氧桥。与已知化合物[1]对比，C-I和C-4的化学位移均向低场移动，说明C-I和C-4之间形成氧桥。 依据H-H cosy谱、HSQC谱及HMBC谱，归属该化合物的氢谱和碳谱数据。综合以上分析，参考文献[1]，得出其分子式为C21H36O7,确认此化合物结构如图3所示，为1，4-环氧-Cis-桉-6-0- β -D-吡喃葡萄糖苷，经检索文献，未见相关报道，化合物3 为一新化合物。化合物4 1 α，6 β - 二羟基 _5，lO-bis-印i_ 桉 _4 (15)烯-6-0- β -D-吡喃葡萄糖苷。白色粉末，易溶于甲醇等极性溶剂。ESI-MS (m/z)谱给出423 (Μ+Na+)分子离子峰， 推断分子量为400。在1H-WR (DMS0-d6)谱中，δ 1. 07 (3Η, d, J = 6. 4Hz)，δ 0. 98 (3Η, d, J = 6. 4Hz) 和δ 2. 25 (1Η，br. s)是异丙基上质子信号；δ 0. 99 (3Η，s)是以单峰形式的甲基质子信号； δ 4. 61 (1Η，d，J = 7. 7Hz)为葡萄糖端基质子信号，为_0_β -D构型。13C-NMR (DMS0-d6)谱中共出现21个碳原子，提示可能为倍半萜葡萄+糖苷类。化合物4与化合物2的区别在于双键的位置不同，即C-4和C-15之间形成双键。 δ 100. 39(C-1，) ,76. 50(C_5，), 75. 60(C_3，), 74. 92(C_2，), 70. 67 (C-4 ‘ ) ,61. 76(C_6，)。综合以上分析，参考已知化合物[3]，得出其分子式为C21H36O7,确认此化合物结构如图1所示，为1 α，6 β - 二羟基-5，10-bis-epi-桉_4 (15)烯-6-0- β -D-吡喃葡萄糖苷，化合物4首次从短葶山麦冬植物中分离得到。Table INMR data for compounds l，2，3and 4( δ in DMS0_d6)
权利要求
1.倍半萜葡萄糖苷和黄酮类提取物，其特征在于所述提取物至少含有倍半萜葡萄糖苷，每克提取物中含有的倍半萜葡萄糖苷和黄酮类成分以倍半萜葡萄糖苷计不少于500毫克。
2.如权利要求1所述的倍半萜葡萄糖苷和黄酮类提取物，其中，每克提取物中含有倍半萜葡萄糖苷不少于300毫克。
3.如权利要求2所述的提取物，其中含有倍半萜葡萄糖苷和黄酮类提取物来自短葶山麦冬须根原料药。
4.如权利要求1-3中任一项所述的倍半萜葡萄糖苷和黄酮类提取物的制备方法，其特征在于该方法为取短葶山麦冬须根，加入生药量6 10倍量的50 95%的甲醇或乙醇进行浸渍或加热回流提取1 3次；合并提取液，减压回收溶剂；将得到的浓缩液注入大孔吸附树脂柱，先用4 8倍量柱体积的纯净水洗脱至无糖反应，然后用4 10倍量柱体积 10% 50%醇溶剂洗脱至无皂苷反应，再用4 10倍量柱体积30% 95%醇溶剂洗脱至无倍半萜葡萄糖苷和黄酮类反应，合并洗脱液，减压回收溶剂，用水饱和正丁醇进行萃取， 萃取液浓缩，干燥，粉碎。
5.如权利要求4所述的制备方法，其特征在于该方法为取短葶山麦冬须根，加入生药量10倍量的50%的乙醇加热回流提取2小时，滤过，滤液备用；残渣再加8倍量的50%的乙醇加热回流提取两次，每次1小时，滤过，合并三次滤液，减压浓缩，浓缩液放置至室温， 注入AB-8大孔吸附树脂柱，先用8倍柱体积的纯净水洗脱至无糖反应，然后用10倍量柱体积50%乙醇洗脱至无皂苷反应，再用10倍柱体积的90%乙醇洗脱，合并洗脱液，减压回收溶剂，用水饱和正丁醇进行萃取，萃取液浓缩，干燥，粉碎。
6.如权利要求5所述的制备方法，其特征在于该方法为取短葶山麦冬须根，加入生药量8倍量的80%的乙醇加热回流提取2小时，滤过，滤液备用；残渣再加6倍量的80%的乙醇加热回流提取两次，每次1小时，滤过，合并三次滤液，减压浓缩至相对密度为1. 25 1. 30，浓缩液放置至室温，注入AB-8大孔吸附树脂柱，先用6倍柱体积的纯净水洗脱至无糖反应，然后用8倍量柱体积50%乙醇洗脱至无皂苷反应，再用6倍柱体积的80%乙醇洗脱， 合并洗脱液，减压回收溶剂，用水饱和正丁醇进行萃取，萃取液浓缩，干燥，粉碎即得。
7.如权利要求7所述的药物组合物，其中倍半萜葡萄糖苷和黄酮类提取物的重量比例至少不低于10%。
8.如权利要求7或8所述的药物组合物，其中倍半萜葡萄糖苷和黄酮类提取物的重量比例为10% 95%。
全文摘要
本发明提供了一种来自短葶山麦冬须根中倍半萜葡萄糖苷和黄酮类提取物以及该提取物的制备方法。其制备方法为短葶山麦冬须根用一定浓度的醇溶剂提取，回收提取溶剂并浓缩至一定的相对密度，通过大孔吸附树脂，先用水洗脱至无糖反应，然后用低浓度的醇溶剂洗脱至无皂苷反应，再用较高浓度的醇溶剂进行洗脱，合并洗脱液，减压回收溶剂，用水饱和正丁醇进行萃取，萃取液浓缩，干燥，粉碎而得。本发明的提取方法简单实用，提纯效果良好；本发明可利用废物短葶山麦冬须根、节约资源，成本低廉。
文档编号A61P1/10GK102380034SQ20111033873
公开日2012年3月21日 申请日期2011年11月1日 优先权日2011年11月1日
发明者刘子沐, 张海鸣, 杜树山, 林瑞超, 王刚力, 王成芳, 费超 申请人:北京师范大学