专利名称：一种治疗肿瘤的组合物的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种治疗肿瘤的组合物，具体涉及一种含有麝香酮和白术挥发油的组合物。
背景技术：
麝香酮是天然麝香的主要成分，其分子式为C16H3tlO,分子量为238，其具有麝香的特殊香味，不溶于水，溶于乙醇和油类溶剂。麝香酮对一些腹水瘤、实体瘤等无明显的抑制作用，但有研究表明，麝香酮对离体动物癌细胞有破坏作用，对动物肿瘤组织的细胞呼吸有明显的抑制作用，而动物体内抗肿瘤实验未能观察到疗效。白术为多年生草本，以根茎入药，具有健脾益气，燥湿利水，止汗，安胎的功效，其中的挥发油具有抗肿瘤的作用，据研究表明，白术挥发油的抗肿瘤有效成分可能存在与白术挥发油中极小的部位，其抑瘤率较低。在现有技术中，只是对麝香酮和苍术挥发油抗肿瘤的作用进行了单独的研究，这两者结合的抗肿瘤效果目前没有相关报道。
发明内容
本发明的目的是提供一种治疗肿瘤的组合物，该组合物大大提高了抗肿瘤效果，便于推广应用。研究表明，单用白术挥发油具有很好的抗肿瘤作用，单用麝香酮在体内无抑制肿瘤的作用，但是发明人在研究中发现，在白术挥发油中加入微量的麝香酮可以提高白术挥发油的抗肿瘤作用，麝香酮与白术挥发油的复配使两者起到了意料不到的效果，具体作用机理尚未可知。本发明具体技术方案如下
一种治疗肿瘤的组合物，其特征是以白术挥发油和麝香酮为药物有效成分，麝香酮和白术挥发油的质量比为1:10000 100000。本发明在白术挥发油中掺加麝香酮，麝香酮的添加量非常的少，仅占白术挥发油的0. 001-0. 01%。麝香酮的加入相当于增效剂，复合制剂在治疗肿瘤方面的效果有了很大的提高。麝香酮的加入量越大其治疗效果越好，考虑到麝香酮的价格很贵，因此优选麝香酮和白术挥发油的质量比为1:40000 70000。本发明的药物成分为白术挥发油和麝香酮，麝香酮在市场上有卖的，直接买成品即可，白术挥发油是从白术中提取出来的，在现有技术中也有相关提取白术挥发油的技术公开，已经是比较熟知的技术了，现今大体有三种提取白术挥发油的方法，第一种为水蒸气蒸馏法，步骤是将白术药粉加入4-10质量倍的水蒸馏提取2-8h，分离挥发油，即得。第二种为有机溶剂提取法，步骤为将白术药材粗粉加入6-16质量倍的有机溶剂(正己烷)中，回流提取2-4次，每次1-3小时，合并提取液，减压回收溶剂，分离挥发油，即得。第三种为超临界萃取法，步骤为将药材粗分适量置于萃取罐中，按CO2气瓶一冷却系统一高压泵一萃取罐一分离器I 一分离器II循环的流程进行萃取，萃取条件为压力15-40MPa，温度30-60°C，时间30-120min。以上3种提取方法挥发油提取率的关系为1>2>3，且经过成分分析和药理学试验证明其3种方法提取物的成分比例基本相同，抑制肿瘤效果无明显差异。所以，生产中可根据实际条件，任意选择提取方法。在得到白术挥发油和麝香酮药物有效成分后，再根据所要制成的剂型，按照现有技术的指导，加入所需量的辅料，即可制成相应的剂型，例如微乳剂、软胶囊剂、微囊剂等口服剂及注射剂。其中，微乳剂的辅料可在卵磷脂、豆磷脂、泊洛沙姆、阿拉伯胶、大豆油、吐温-80、甘油和抗氧剂中的至少一种中进行选择；软胶囊剂的辅料为大豆油、PEG(聚乙二醇)和抗氧剂中的至少一种；微囊剂的辅料可在明胶、阿拉伯胶、PVA (聚乙烯醇)、电解剂和固化剂中进行选择；注射剂的辅料可在注射用水、注射用油、注射用乳化剂和渗透压调节剂中选择。各辅料成分都是现有技术中常用的辅料，在此不再详述。辅料的量满足制剂要求即可，优选的，药物有效成分(白术挥发油和麝香酮的混合物)与辅料的质量比为1:1 50。本发明在白术挥发油中掺加了微量的麝香酮得到组合物，麝香酮和白术挥发油起到协同作用，经实验证实，麝香酮的加入大大提高了白术精油的抗肿瘤效果，所得组合物对肿瘤的治疗作用比单用白术挥发油提高了很多，效果显著，且本发明制剂制备工艺、所需设备简单，有利于推广大规模生产。
具体实施例方式下面通过具体实施例对本发明进行进一步的阐述，应该明白的是，下述说明主要是为了解释本发明，并不对其内容进行限定。下述实施例中用到的白术挥发油采用水蒸汽蒸馏法提取而得，麝香酮为在市场上购得。实施例1
取生白术饮片4Kg，粉碎成粗粉，加水(5倍量)提挥发油至尽(约他)，收集挥发油，备用。以白术挥发油和麝香酮为药物有效成分制成复合制剂，麝香酮与白术挥发油的质量比分别为 1 10000、1 20000、1 40000、1 60000、1 70000、1 100000。根据不同的需要可以将上述有效成分制成不同剂型的制剂，例如微乳剂、软胶囊剂、微囊剂等口服剂及注射剂等。这些剂型的制备及所用的辅料在现有技术中已经很普遍，因此本领域的技术人员完全可以按照现有技术的指导完成不同剂型的制备。一般，药物有效成分与辅料的质量比为1:1 50。在本实施例中，口服微乳剂的辅料可在吐温-80、阿拉伯胶、甘油、大豆油和抗氧剂中进行选择，其制备过程是精密量取細1吐温-80置于100 ml烧杯中，再加入2ml甘油、阿拉伯胶液細1和22ml纯化水，搅拌均勻得到水相，精密量取麝香酮和白术挥发油组合物与大豆油混合液8ml为油相缓慢注入水相中，继续搅拌均勻，然后经过高压乳勻机，即得麝香酮和白术挥发油组合物的微乳剂40ml。注射微乳剂的辅料可为卵磷脂、豆磷脂、泊洛沙姆、大豆油、甘油和抗氧剂中的至少一种，其制备过程是精密量取卵磷脂或豆磷脂置于100 ml烧杯中，再加入甘油适量于注射用水中至32ml，搅拌均勻得到水相，精密量取麝香酮和白术挥发油组合物与大豆油混合液8ml为油相缓慢注入水相中，继续搅拌均勻，然后经过高压乳勻机，即得麝香酮和白术挥发油组合物的微乳剂40ml。软胶囊剂的辅料可为大豆油、PEG (聚乙二醇)和抗氧剂中的至少一种，制备过程是内容物为麝香酮和白术挥发油组合物与大豆油和PEG的混合液，其组合物与大豆油的比为1:1. 5。囊材选用明胶甘油水(1 0. 5 0. 8)。考虑到胶囊的稳定性和美观性，在胶囊壳中可使用适量的遮光剂和着色剂。微囊剂的辅料为明胶、阿拉伯胶、PVA、电解剂和固化剂中的至少一种，制备过程是以上述口服微乳剂为囊心物，以明胶和阿拉伯胶为囊材，采用复凝聚法制备得麝香酮和白术挥发油组合物的微囊剂。下面以麝香酮与白术挥发油的质量比为1 :60000的复合制剂为例，研究其治疗肿
瘤的作用。一、对S180肉瘤小鼠模型的抑瘤作用1.材料
1. 1实验动物昆明种小鼠，体重18 22g，8 10周龄，雌雄各半，S180瘤种。1. 2实验仪器电子天平、ZeissLSM510型激光共聚焦显微镜、AO滑动式超薄切片机、多功能显微镜。
1.3实验药品白术精油(即白术挥发油，下同)、麝香酮与白术精油组合物、注射用环磷酰胺(CTX)、生理盐水、0. 2%戊巴比妥钠、10%EDTANa2 TNF-Q放射免疫试剂盒、IL-2放射免疫试剂盒、SABC-FITC免疫荧光化学试剂盒。方法
2.1 S180荷瘤小鼠模型的制备
无菌条件下，取传代第七天的S180肉瘤小鼠腹水，生理盐水稀释，制成2 X IO6个/ml的细胞悬液。取昆明小鼠，每只小鼠右侧腋部皮下注射瘤细胞悬液0. anl，制成S180肉瘤移植性肿瘤模型。2. 2动物分组及给药
接种24h后，将小鼠随机分组，每组20只，称重。第1组为模型组，给予生理盐水灌胃；第2组为CTX (环磷酰胺)阳性对照组，给予CTX，用生理盐水稀释后腹腔注射(剂量IOOmg/kg)；第3组为纯白术挥发油微乳组，第4组为麝香酮、白术挥发油组合物微乳小剂量组(10 μ 1/kg)，第5组为麝香酮、白术精油组合物微乳中剂量组(20 μ 1/kg)，第6组为麝香酮、白术精油组合物微乳大剂量组(40 μ Ι/kg)。白术挥发油微乳组给药剂量为(20 μ 1/kg)。麝香酮与白术挥发油组合物各组分别按剂量要求给予相当量的麝香酮与白术精油组合物微乳，生理盐水组则灌胃给予等量的生理盐水，灌胃给药14d。2. 3样本处理及观察方法
S180肉瘤小鼠第15d，称体重，0.洲戊巴比妥钠麻醉后下腔静脉取血，10%EDTANa2抗凝，1500r/min离心15min，取血浆，按放试剂盒说明操作、检测TNF-α及IL-2。颈椎脱臼处死小鼠，取瘤体、胸腺，称重，计算胸腺指数、肿瘤生长抑制率。取瘤体，10%福尔马林固定，常规石蜡切片。荧光免疫组织化学法进行肿瘤凋亡相关基因bcl-2染色，共聚焦显微镜观察，阳性细胞胞浆内可见鲜艳的绿色荧光颗粒，计数表达bcl-2基因的瘤细胞数，计算阳性细胞表达百分率。SABC-FITC法免疫荧光染色，根据SABC-FITC免疫荧光化学试剂盒说明操作，ZeissLSM510型激光共聚焦扫描显微镜观察，每张切片在高倍镜下随机观察5个视野，P53基因表达阳性细胞的胞浆内可见绿色荧光，计数并计算阳性细胞百分率。2. 4统计学处理
计量资料组间比较用SPSS14. 0统计软件进行配对t检验，以P<0. 05为具有显著性差
已结果
3. 1麝香酮、白术精油组合物对S180肉瘤小鼠瘤重的影响
实验结果显示，麝香酮与白术精油组合物三个剂量组、白术精油组和CTX对照组瘤重明显低于模型组(P<0. 05)，麝香酮与白术精油组合物三个剂量组、CTX对照组瘤重显著低于白术精油组(p<0.01)，但麝香酮与白术精油组合物三个剂量组之间无显著性差异；麝香酮与白术精油组合物三个剂量组、白术精油组和CTX对照组胸腺指数明显低于模型组(P<0. 01);麝香酮与白术精油组合物三个剂量组、CTX对照组胸腺指数显著低于白术精油组(P<0. 01)，但麝香酮与白术精油组合物三个剂量组之间无显著性差异。详见于表1。 3. 2小鼠S18tl实体瘤组织细胞形态学观察
白术精油组、麝香酮与白术精油组合物各剂量组的瘤组织、瘤细胞分布散在，其瘤体普遍小于模型组，瘤组织可见大片状坏死；瘤细胞明显少于模型组，且坏死区及周围可见大量淋巴细胞、浆细胞浸润，可见瘤细胞侵润至肌组织浅层，但淋巴结、神经组织、血管未见侵润。麝香酮与白术精油组合物各剂量组瘤体普遍小于白术精油组，瘤细胞明显少于白术精油组。CTX组瘤体虽较各实验组小，瘤组织可见大片状坏死，但坏死区及周围炎细胞少见。
3. 3麝香酮、白术精油组合物对S180肉瘤小鼠TNF_a、IL_2的影响
实验结果显示，麝香酮和白术精油组合物三个剂量组、白术精油组和CTX对照组小鼠TNF-α含量明显低于模型组(P<0. 05)，麝香酮与白术精油组合物三个剂量组小鼠TNF-α含量显著低于白术精油组(P<0. 05)，但麝香酮与白术精油组合物三个剂量组之间无显著性差异；麝香酮和白术精油组合物三个剂量组、白术精油组和CTX对照组小鼠IL-2含量明显高于模型组(P<0. 05)，麝香酮与白术精油组合物三个剂量组小鼠IL-2含量显著高于白术精油组(P<0. 05)，但麝香酮与白术精油组合物三个剂量组之间无显著性差异。详见于表2。
权利要求
1.一种治疗肿瘤的组合物，其特征是以白术挥发油和麝香酮为药物有效成分，麝香酮和白术挥发油的质量比为1:10000-100000。
2.根据权利要求1所述的组合物，其特征是麝香酮和白术挥发油的质量比为1:40000-70000。
3.根据权利要求1或2所述的组合物，其特征是还包括药学上可接受的辅料，药物有效成分与辅料的质量比为1:1-50。
4.根据权利要求3所述的组合物，其特征是所述剂型为微乳剂、软胶囊剂、微囊剂等口服剂及注射剂。
5.根据权利要求4所述的组合物，其特征是微乳剂的辅料为卵磷脂、豆磷脂、泊洛沙姆、阿拉伯胶、大豆油、吐温-80、甘油和抗氧剂中的至少一种；软胶囊剂的辅料为大豆油、聚乙二醇和抗氧剂中的至少一种；微囊剂的辅料为明胶、阿拉伯胶、聚乙烯醇、电解剂和固化剂中的至少一种；注射剂的辅料为注射用水、注射用油、注射用乳化剂和渗透压调节剂中的至少一种。
全文摘要
一种治疗肿瘤的组合物，以白术挥发油和麝香酮为药物有效成分，麝香酮和白术挥发油的质量比为1:10000-100000。本发明在白术挥发油中掺加了微量的麝香酮得到组合物，麝香酮和白术挥发油起到协同作用，经实验证实，麝香酮的加入大大提高了白术精油的抗肿瘤效果，所得组合物对肿瘤的治疗作用比单用白术挥发油提高了很多，效果显著，且本发明制剂制备工艺、所需设备简单，有利于推广大规模生产。
文档编号A61K31/122GK102552360SQ20121000722
公开日2012年7月11日 申请日期2012年1月11日 优先权日2012年1月11日
发明者牟洁, 郑广娟 申请人:山东医学高等专科学校