专利名称：具有抗肿瘤活性的新藤黄酸复合物、制备方法及其制剂和用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及新颖的以新藤黄酸为主要活性成分的化合物制备和以该化合物复合物为活性成分的药物组合物的制备及其制剂，以及该药物组合物在治疗各种肿瘤中的应用。
背景技术：
藤黄为藤黄科植物藤黄树分泌的干燥树脂，性寒，味酸、辛、涩、有毒。藤黄为美国药典所收载，其活性成分主要为藤黄酸和新藤黄酸。1984年吕归宝等首次从藤黄树脂中分离得到另一种新的酸性成分，并将其命名为新藤黄酸(Neogambogic acid)。以后对新藤黄酸的研究工作不断深化。曲宝玺等通过实验表明新藤黄酸对S180、ARS腹水癌、Lewis肺癌、白血病P388、肺腺癌等实体癌均有较好的抑制作用，并有一定的选择性抗转移作用，毒性实验还表明新藤黄酸具有比藤黄酸毒性低的特点。因此将其作为抗肿瘤药物和目前市场上常用的抗癌药物相比具有特殊优势。
现有的专利技术中，公开号CN1309125A(申请号01108049.3)，中国药科大学的专利《具抗癌活性的藤黄酸类化合物的复合物及其制备方法》主要提出以藤黄酸类化合物和金属离子、C1-C8含N有机碱、氨基酸形成复合物的制备方法。金彪等人提出了藤黄酸类化合物(含新藤黄酸)与含N有机碱如普鲁卡因、月桂胺、葡甲胺、氨基葡萄糖等形成盐类化合物及其制备方法(申请号02124510.X，
公开日2003年1月15日；公开号CN 1470516A，申请号02126647.6；公开号CN 1498889A，申请号021148321.3)。王树龙的专利提出新藤黄酸系列衍生物主要以脂化物、酰胺类化合物(申请号200410033298.2，
公开日2005年1月12日)。虽然以上的专利解决了新藤黄酸的水溶性问题，但是其稳定性和有效性稍有欠缺。本发明所涉及的新藤黄酸复合物不仅解决了水溶性的问题，而且将新藤黄酸与具有碱性的抗肿瘤药、抗病毒药形成复合物后其抗肿瘤作用明显增强。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是针对现有技术的不足，，提出了一类新颖的以新藤黄酸化合物与具有碱性的抗肿瘤药、抗病毒药形成药用复合物的制备方法及其各种药物组合物制剂，该类药物制剂可用于各类肿瘤的治疗。
本发明所要解决的技术问题是通过以下技术方案来实现的。
具有抗肿瘤活性的新藤黄酸复合物，其特征是具有下述通式的新藤黄酸类化合物的药用复合物 式中B表示具有碱性的抗病毒药、抗肿瘤化合物药物单体或其它碱性化合物。
所述的新藤黄酸复合物，其特征在于B表示吗啉胍、金刚烷胺、阿糖胞苷、苦参碱或者喜树碱系列、长春新碱系列。
新藤黄酸复合物的制备方法，其特征在于新藤黄酸与具有碱性的抗病毒药、抗肿瘤化合物药物单体或其它碱性化合物以1∶0.5～2.0的摩尔比例，在水和/或醇等有机溶剂中反应。
所述新藤黄酸复合物的制备方法，其特征在于新藤黄酸以1∶0.5～2.0的摩尔比例，与吗啉胍或金刚烷胺或阿糖胞苷或苦参碱或喜树碱系列或长春新碱系列反应。
所述的具有抗肿瘤活性的新藤黄酸复合物的药物组合物制剂，其特征在于，它是新藤黄酸复合物与其它在药学上可以接受的药物载体混合形成的药物组合物制剂，其剂型是药剂学上所说的如下剂型包括片剂、胶囊剂、软胶囊剂、微囊、喷雾剂、凝胶剂、凝胶吸入剂、口服液、混悬剂、冲剂、贴剂、软膏、丸剂、散剂、巴布剂、注射剂、输液剂、冻干注射剂、脂质体注射剂、靶向给药注射剂、栓剂、缓、控释制剂。
所述的药物组合物制剂，其特征在于，它是新藤黄酸与具碱性抗病毒药、抗肿瘤化合物药物单体形成的复合物与填充剂、崩解剂组配的片剂型或胶囊剂；或者是新藤黄酸及新藤黄酸与具碱性的抗病毒药、抗肿瘤化合物药物单体形成的药用复合物与填充剂、羟丙甲纤维素K4M组配的缓释片剂或胶囊剂；或者是新藤黄酸复合物分散于油相中得到新藤黄酸复合物软胶囊；或者是新藤黄酸复合物与增溶剂或助溶剂形成的注射剂；或者是新藤黄酸复合物形成的冻干注射用粉针剂；或者是新藤黄酸复合物分散于油相中得到的注射用乳剂，或者是混悬型注射液，所述的混悬型注射液是将新藤黄酸复合物微粉和聚山梨酯80混研后，溶解到含磷酸二氢钾、磷酸二氢钠、尼泊金酯和羧甲基纤维素钠的水溶液，经研磨制得。
所述的药物组合物制剂，其特征在于，所述的填充剂是蔗糖、乳糖、微晶纤维素、糊精、淀粉或磷酸钙；所述的崩解剂是羟丙纤维素、羧甲基淀粉钠、交联聚维酮或交联羧甲基纤维素钠；所述的油相是大豆油、聚乙二醇400、棉籽油、花生油、麻油、玉米油或橄榄油；在所述的油相中可以加增溶剂或助溶剂、以及抗氧化剂。
所述的药物组合物制剂，其特征在于，所述的增溶剂是聚氧乙烯醚蓖麻油、吐温、普流罗尼；所述的助溶剂是精氨酸、赖氨酸、复合氨基酸(精氨酸+赖氨酸)、鸟氨酸、组氨酸、色氨酸、去乙酰壳聚糖、Na2HPO4葡甲胺、二乙胺、三乙胺、尿素、氨基葡萄糖、烟酰胺、脯氨酸、枸橼酸及其钠盐。
所述的具有抗肿瘤活性的新藤黄酸复合物在治疗肝癌、肠癌、肺癌、胃癌、乳腺癌、卵巢癌、白血病等肿瘤中的应用。
所述的具有抗肿瘤活性的新藤黄酸复合物的药物组合物制剂在治疗肝癌、肠癌、肺癌、胃癌、乳腺癌、卵巢癌、白血病等肿瘤中的应用。
发明人认为，因新藤黄酸水溶性差，因此对其研究主要在于解决水溶性。但就药物而言，解决药物的水溶性不是唯一的途径。提高其水溶性、稳定性、且用药安全有效才是现代新药开发的关键。本发明与以往新藤黄类盐或复合物不同，它采用新藤黄酸与抗肿瘤药物、抗病毒药或对活性有利的碱性物质形成复合物，不仅其抗肿瘤活性不逊于藤黄酸类化合物及以往的藤黄酸类化合物的复合物(尤其以新藤黄酸吗啉胍复合物、新藤黄酸金刚烷胺复合物、新藤黄酸喜树碱复合物为突出)，且在小白鼠体内抑瘤试验中表明，其具有更好的抑瘤率和存活率，同时小白鼠毒性试验发现其刺激性小、毒性低，有良好的药物开发研究价值。
本发明所要解决的技术问题还可以通过以下的技术方案进一步实现。除了提供以上具有抗肿瘤活性的新藤黄酸复合物，还提供了在药学上可以接受的药物载体混合形成的药物组合物制剂。上述的药学上可接受的载体是指药学领域的药物载体，例如稀释剂、赋形剂和水等，填充剂如淀粉、蔗糖、乳糖、微晶纤维素等；粘合剂如纤维素衍生物、藻酸盐、明胶、琼脂和聚乙烯吡咯烷酮；润湿剂如吐温、甘油；崩解剂如羧甲基淀粉钠、羟丙纤维素、交联羧甲基纤维素、琼脂、碳酸钙和碳酸氢钠；吸收促进剂如季胺化合物；表面活性剂如十六烷醇、十二烷基硫酸钠；吸收载体如高岭土和皂粘土；润滑剂如滑石粉、硬脂酸镁和钙、微粉硅胶和聚乙二醇等；香味剂、甜味剂等。
本发明所要解决的技术问题还可以通过以下的技术方案来进一步实现。以上所述药物组合物制剂，其特点是，所述的药物组合物可以用来治疗肝癌、肺癌、肠癌及其他肿瘤。
本发明的药用组合物优选含有重量比为0.1～99.5％的新藤黄酸复合的活性成分，最优选含有重量比为0.5～97％的新藤黄酸复合物的活性成分。
本发明提供的复合物及药用组合物可根据用药途径、患者年龄、体重、体表面积、性别、所治疗疾病的类型和严重程度等变化，其日剂量可以是0.01～100mg/m2体表面积，优选为0.1～100mg/m2体表面积。可以一次或多次施用。
具体实施例方式
下面的实施例可以使本专业技术人员更全面地理解本发明，但不以任何方式限制本发明。
实施例1新藤黄酸吗啉胍复合物的制备取新藤黄酸10克置适宜容器中，加水，加入吗啉胍2.5克搅匀至溶解，减压条件下抽去水得到浅黄色固体12克。
实施例2新藤黄酸金刚烷胺复合物的制备取新藤黄酸10克置适宜容器中，加水，加入金刚烷胺2.5克搅匀至溶解，减压条件下抽去水得到浅黄色固体12克。
实施例3新藤黄酸喜树碱复合物的制备取新藤黄酸10克置适宜容器中，加水，加入喜树碱2.5克搅匀至溶解，减压条件下抽去水得到浅黄色固体12克。
实施例4新藤黄酸长春新碱复合物的制备取新藤黄酸10克置适宜容器中，加水，加入长春新碱2.5克搅匀至溶解，减压条件下抽去水得到浅黄色固体12克。
实施例5新藤黄酸吗啉胍复合物粉针剂的制备实施例1复合物 10克甘露醇 30克取实施例1复合物置适宜容器中，加注射用水约1600ml，加入甘露醇搅拌均匀，加注射用水至2000ml，用0.22μm的微孔滤膜过滤，无菌条件下，灌装于10ml西林瓶中，每瓶10ml，部分塞上丁橡胶塞，装盘，送入冻干箱中，插入共晶点及温度探头，关闭箱门，开启冻干机，利用导热油对板层制冷，使品温下降，当品温达到共晶点(约-25℃)时，继续制冷，当品温达到-35℃以上时，停板冷，开启冷凝器，当冷凝器温度达-45℃时，开启真空系统，开启升温升华至干燥，最后干燥温度为35℃，停机，密塞，放气，出箱，扎盖，即可。
实施例6新藤黄酸吗啉胍复合物片剂的制备实施例1复合物 10克微晶纤维素40克乳糖 50克羧甲基淀粉钠 6克10％淀粉浆适量硬脂酸镁 1克取实施例1复合物过160目筛，微晶纤维素，乳糖，羧甲基淀粉钠分别过100目筛，将复合物与上述辅料混合均匀，以10％淀粉浆为粘合剂制软材，过20目筛制颗粒，湿颗粒于50℃烘箱可鼓风干燥；干颗粒过20目筛整粒，与硬脂酸镁混匀，压片。
实施例7 新藤黄酸吗啉胍复合物胶囊剂的制备实施例1复合物10克微晶纤维素 40克乳糖 50克羧甲基淀粉钠 6克10％淀粉浆 适量硬脂酸镁 1克微粉硅胶 1克取实施例1复合物过160目筛，微晶纤维素，乳糖，羧甲基淀粉钠分别过100目筛，将复合物与上述辅料混合均匀，以10％淀粉浆为粘合剂制软材，过20目筛制颗粒，湿颗粒于50℃烘箱可鼓风干燥；干颗粒过20目筛整粒，与硬脂酸镁和微粉硅胶混匀，灌装于胶囊中。
实施例8 新藤黄酸金刚烷胺复合物粉针剂的制备实施例2复合物10克甘露醇 30克取实施例2复合物置适宜容器中，加注射用水约1600ml，加入甘露醇搅拌均匀，加注射用水至2000ml，用0.22μm的微孔滤膜过滤，无菌条件下，灌装于10ml西林瓶中，每瓶10ml，部分塞上丁橡胶塞，装盘，送入冻干箱中，插入共晶点及温度探头，关闭箱门，开启冻干机，利用导热油对板层制冷，使品温下降，当品温达到共晶点(约-23℃)时，继续制冷，当品温达到-35℃以上时，停板冷，开启冷凝器，当冷凝器温度达-45℃时，开启真空系统，开启升温升华至干燥，最后干燥温度为35℃，停机，密塞，放气，出箱，扎盖，即可。
实施例9 新藤黄酸吗啉胍复合物对小鼠的移植性肿瘤S180、EC及Heps实体瘤的影响实验用体重18-22g的昆明种小鼠，按移植性肿瘤研究法分别接种S180、EC及Heps实体瘤，接种4h称重，每个瘤种各接种50只，并随机分为五组，每组10只，雌雄各半，实施例1复合物设三个剂量组(8，4，2mg/kg)，5-Fu(30mg/kg)组作为阳性对照组，生理盐水组(0.4ml/20g)作为阴性对照组，于接种肿瘤细胞后的第24h静脉注射给药，每2天一次，共给药4次，于停药后第2天称重，处死小鼠并分离瘤块，称重并进行统计学处理(t检验)。研究结果见表1、2、3。
表1 实施例1复合物iv对小鼠的移植性肿瘤S180的抑制作用(x±SD，n＝10)
**P＜0.01 与生理盐水对照组相比表2 实施例1复合物iv对小鼠的移植性肿瘤EC的抑制作用(x±SD，n＝10)
**P＜0.01 与生理盐水对照组相比表3 实施例1复合物iv对小鼠的移植性肿瘤Heps的抑制作用(x±SD，n＝10)
**P＜0.01 与生理盐水对照组相比结果表明与空白对照组相比iv注射实施例1复合物能显著地抑制小鼠的移植性肿瘤S180、EC及Heps实体瘤的肿瘤生长作用，并对小鼠的体重增长无明显影响。而5-Fu组有严重影响小鼠的体重生长作用。iv注射实施例1复合物对小鼠移植性肿瘤Heps的抑制作用最强。
实施例10 新藤黄酸吗啉胍复合物对小鼠的移植性肿瘤的生命延长作用(I)实施例1复合物ip对小鼠的移植性Heps腹水瘤的生命延长作用取已接种Heps小鼠，于接种后的第一天，称体重，随机分为5组，每组10只，雌雄各半，设实施例1复合物三个剂量组(1.5，0.75，0.5mg/kg)，5-Fu(30mg/kg)组作为阳性对照组和空白对照组。接种24h后给药，腹腔注射，每2天一次，共给药4次，在给药期间及停药后每天记录死亡鼠数并计算存活天数(存活超过60天的小鼠按60天计)及存活率(存活60天以上，且无症状小鼠)。所得数据进行统计学处理。研究结果见表4。
实验结果表明，与空白对照组相比，实施例1复合物三个剂量组及5-Fu组都有非常显著延长Heps小鼠的存活天数作用(P＜0.01)。实施例1复合物高剂量(1.5mg/kg)延长Heps小鼠的存活天数优于5-Fu(30mg/kg)。
表4 实施例1复合物ip对小鼠的移植性Heps腹水瘤的生命延长作用(x±SD，n＝10)
**P＜0.01与空白对照组相比；#P＜0.05与5-Fu组组相比(II)实施例1复合物ip对腹水型小鼠移植性S180腹水瘤和艾氏EAC腹水瘤的生命延长作用取已接种肿瘤细胞的小鼠，于接种后的第一天，称体重，随机分为5组，每组10只，雌雄各半，设实施例1复合物三个剂量组(1.5，0.75，0.5mg/kg)，5-Fu(30mg/kg)组作为阳性对照组和空白对照组。接种24h后给药，腹腔注射，每2天一次，共给药4次，在给药期间及停药后每天记录死亡鼠数并计算存活天数(存活超过60天的小鼠按60天计)及存活率(存活60天以上，且无症状小鼠)。所得数据进行统计学处理。研究结果见表5、6。
表5 实施例1复合物ip对S180腹水瘤小鼠生命延长作用(x±SD，n＝10)
**P＜0.01；**P＜0.05。
3、植物黄酮类化合物对MDCK细胞病毒感染的治疗作用将MDCK细胞在96孔板长成单层后，接种200μL100TCID50的禽流感病毒于各孔中，放入37℃5％CO2培养箱中感染2h后去病毒液，用无菌PBS洗三次以去除游离的残余病毒，再按表2加不同浓度的植物黄酮类化合物，每孔200μL，每个浓度设8个复孔，放入37℃5％CO2培养箱继续培养。每12h观察细胞生长情况，设正常细胞对照组和病毒对照组。待正常细胞对照组细胞生长正常，病毒对照组细胞CPE达(+++)以上时判定结果，拍照。实验重复三次，每次实验结束时将细胞板反复冻融三次，使细胞裂解，病毒释放，分别收集每次实验各浓度组细胞裂解液于EP管中，-20℃中冻存，进行血凝试验，测其效价以判定病毒的增殖程度，结果如表2所示。
结果表明，当植物黄酮类化合物浓度为0.5μg/ml时，MDCK细胞的CPE达(++++)，可见细胞完全脱落并聚集；浓度为16μg/ml时，CPE为(++)；浓度为31.25μg/ml时，细胞形态与正常对照细胞无异。经计算，植物黄酮类化合物对病毒感染细胞治疗作用的EC50为4.01±0.58μg/ml，TI值为124.69。血凝测定显示与病毒对照组相比，2μg/ml即能有效抑制病毒的增殖(P＜0.05)，随着浓度的增加，其抑制效果愈加明显，至31.25μg/ml时已能完全抑制细胞病变的发生。
表2.植物黄酮类化合物对MDCK细胞病毒感染的治疗作用结果及对外周血中白细胞数的影响(x±SD，n＝10)
**P＜0.01 与生理盐水对照组相比结果表明与生理盐水对照组相比，实施例1复合物设三个剂量组(8，4，2mg/kg)及5-Fu组都有非常显著地抑制小鼠Heps肿瘤生长作用(P＜0.01)，5-Fu具有明显地抑制小鼠体重增长及明显地降低小鼠外周血中白细胞作用(P＜0.01)，但在有效剂量范围内实施例1复合物对小鼠体重增长及小鼠外周血中白细胞数无明显影响。
新藤黄酸金刚烷胺复合物、新藤黄酸喜树碱复合物、新藤黄酸长春新碱复合物的药理实验也有上述实验的效果。
权利要求
1.具有抗肿瘤活性的新藤黄酸复合物，其特征是具有下述通式的新藤黄酸类化合物的药用复合物 式中B表示具有碱性的抗病毒药、抗肿瘤化合物药物单体或其它碱性化合物。
2.如权利要求1所述的新藤黄酸复合物，其特征在于B表示吗啉胍、金刚烷胺、阿糖胞苷、苦参碱或者喜树碱系列、长春新碱系列。
3.新藤黄酸复合物的制备方法，其特征在于新藤黄酸与具有碱性的抗病毒药、抗肿瘤化合物药物单体或其它碱性化合物以1∶0.5～2.0的摩尔比例，在水和/或醇等有机溶剂中反应。
4.根据权利要求3所述新藤黄酸复合物的制备方法，其特征在于新藤黄酸以1∶0.5～2.0的摩尔比例，与吗啉胍或金刚烷胺或阿糖胞苷或苦参碱或喜树碱系列或长春新碱系列反应。
5.根据权利要求1所述的具有抗肿瘤活性的新藤黄酸复合物的药物组合物制剂，其特征在于，它是新藤黄酸复合物与其它在药学上可以接受的药物载体混合形成的药物组合物制剂，其剂型是药剂学上所说的如下剂型包括片剂、胶囊剂、软胶囊剂、微囊、喷雾剂、凝胶剂、凝胶吸入剂、口服液、混悬剂、冲剂、贴剂、软膏、丸剂、散剂、巴布剂、注射剂、输液剂、冻干注射剂、脂质体注射剂、靶向给药注射剂、栓剂、缓、控释制剂。
6.根据权利要求5所述的药物组合物制剂，其特征在于，它是新藤黄酸与具碱性抗病毒药、抗肿瘤化合物药物单体形成的复合物与填充剂、崩解剂组配的片剂型或胶囊剂；或者是新藤黄酸及新藤黄酸与具碱性的抗病毒药、抗肿瘤化合物药物单体形成的药用复合物与填充剂、羟丙甲纤维素K4M组配的缓释片剂或胶囊剂；或者是新藤黄酸复合物分散于油相中得到新藤黄酸复合物软胶囊；或者是新藤黄酸复合物与增溶剂或助溶剂形成的注射剂；或者是新藤黄酸复合物形成的冻干注射用粉针剂；或者是新藤黄酸复合物分散于油相中得到的注射用乳剂，或者是混悬型注射液，所述的混悬型注射液是将新藤黄酸复合物微粉和聚山梨酯80混研后，溶解到含磷酸二氢钾、磷酸二氢钠、尼泊金酯和羧甲基纤维素钠的水溶液，经研磨制得。
7.根据权利要求6所述的药物组合物制剂，其特征在于，所述的填充剂是蔗糖、乳糖、微晶纤维素、糊精、淀粉或磷酸钙；所述的崩解剂是羟丙纤维素、羧甲基淀粉钠、交联聚维酮或交联羧甲基纤维素钠；所述的油相是大豆油、聚乙二醇400、棉籽油、花生油、麻油、玉米油或橄榄油；在所述的油相中可以加增溶剂或助溶剂、以及抗氧化剂。
8.根据权利6或7所述的药物组合物制剂，其特征在于，所述的增溶剂是聚氧乙烯醚蓖麻油、吐温、普流罗尼；所述的助溶剂是精氨酸、赖氨酸、复合氨基酸(精氨酸+赖氨酸)、鸟氨酸、组氨酸、色氨酸、去乙酰壳聚糖、Na2HPO4葡甲胺、二乙胺、三乙胺、尿素、氨基葡萄糖、烟酰胺、脯氨酸、枸橼酸及其钠盐。
9.权利要求1或2所述的具有抗肿瘤活性的新藤黄酸复合物在治疗肝癌、肠癌、肺癌、胃癌、乳腺癌、卵巢癌、白血病等肿瘤中的应用。
10.权利要求5-8所述的具有抗肿瘤活性的新藤黄酸复合物的药物组合物制剂在治疗肝癌、肠癌、肺癌、胃癌、乳腺癌、卵巢癌、白血病等肿瘤中的应用。
全文摘要
本发明涉及新藤黄酸与具有碱性的抗病毒药、抗肿瘤药形成复合物、组合物制剂及其制备方法，该新藤黄酸复合物比藤黄酸类化合物在水溶解性、稳定性以及治疗肝癌、肠癌、肺癌和其他肿瘤方面更为突出，且刺激性和毒性更小。本发明还提供了该类复合物的各种制剂及其生产工艺。
文档编号A61K31/7068GK1718184SQ200510039060
公开日2006年1月11日 申请日期2005年4月22日 优先权日2005年4月22日
发明者王效山, 黄鹏, 冯传平 申请人:王效山