专利名称：一种准噶尔乌头总生物碱的提取方法
技术领域：
本发明涉及一种准噶尔乌头总生物碱的提取方法，属于医药领域。
背景技术：
准噶尔乌头(AconUm/ soongaricum Stapf.)为毛茛科乌头属植物,分布于新疆天山山脉海拔1700 2500 m的山坡草地、灌丛和林橼。在西北地区准噶尔乌头被当作中药川乌和草乌的替代品而使用，同时也是哈萨克民族医学的传统药材，主要用于止痛、除湿、 祛风寒。其块根还被收载于前苏联的国家药典中，酊剂外用可作为神经痛、牙痛、关节炎及其它各种疼痛时的镇痛剂。对于乌头类药材，大量的临床使用经验、科学研究和实验数据表明，乌头类药材之所以具有止痛、除湿、祛风寒等临床疗效是因为药材中含有大量的生物碱类化学成分的原因，生物碱成分是乌头类药材的活性有效成分。因此，对乌头类药材的新药研发都是针对其中所含生物碱成分而展开的，从药材中提取出的生物碱成分的纯度将直接影响临床治疗疾病的效果，有效成分含量越高、杂质越少、疗效越高，反之亦然。通过薄层色谱(TLC)和高效液相色谱(HPLC)可以判断准噶尔乌头根、茎和叶各部位所含主要生物碱的种类。其中，TLC实验结果表明，准噶尔乌头药材的根、茎、叶主要含有生物碱成分，具体所含物质类别和名称见附图
I和图2所示(图I展开剂为石油醚一丙酮一氨水10:10:0. 4、图2展开剂为氯仿一甲醇一氨水22. 5:1:0. 4)。在TLC上(见附图I和图
2)从左至右依次点样顺序为准噶尔乌头根、茎、叶提取部位，以及12-表-欧乌碱、宋果灵、 尼奥灵、准噶尔碱和欧乌碱等8个样品点，分别使用石油醚-丙酮-氨水和氯仿-甲醇-氨水溶剂配比体系进行展开。可以看出，准噶尔乌头中所含成分均为生物碱类物质(碘化铋钾试剂显色，其为生物碱的特征显色剂，显示红色斑点者为生物碱成分)。因此，TLC结果可以确定在准噶尔乌头的根中含有12-表-欧乌碱、宋果灵、尼奥灵、准噶尔碱和欧乌碱五种成分；莖中含有12-表-欧乌碱、尼奥灵、准噶尔碱和欧乌碱；叶中含有准噶尔碱和欧乌碱。另外，也通过HPLC方法对准噶尔乌头进行了分析，同样确定出准噶尔乌头根中的生物碱包括准噶尔碱、欧乌碱、尼奥灵、12-表-欧乌碱、14-乙酰尼奥灵、宋果灵、6-0-去甲基尼奥灵。空白溶液的HPLC色谱图见附图3，混合对照品的HPLC色谱图见附图4。其中，色谱条件为日立液相色谱系统(日本)是由单泵(L-2130)和一个二极管阵列检测器 (L-2455)以及D-2000组成的工作站；采用Inertsil NH2柱(150 X 4. 6mm，5Mm);检测波长为270 nm;流速1.0 ml/min;进样量10 ML ;柱温30°C;流动相为正己烷和无水乙醇(92:8)。 可见准噶尔乌头中主要含有以上七种生物碱成分(见附图5 图9)。对于中药和天然植物药的新药研发，我们国家制定了《药品注册管理办法》，在附件一中明确将中药分为九类。其中，对于有效部位入药的要求描述为“未在国内上市销售的中药、天然药物中提取的有效部位制成的制剂是指从中药、天然药物中提取的一类或数类成份制成的制剂，其有效部位的含量应占提取物的50%以上”，可见，要开发一种天然植物药的有效部位，必须使其含量占到提取物的50%以上，这样的有效部位才符合国家的新药注册标准。之前，已经有对准噶尔乌头乙醇提取物中生物碱的含量进行了检测，采用紫外光谱对经过酸性染料络合的生物碱进行分析，检测出准噶尔乌头根、茎、叶乙醇提取物中生物碱含量，结果如表I所示。结果表明，准噶尔乌头中所含生物碱含量很低，必须要经过多种手段纯化处理，减少杂质，浓缩生物碱，才能提高含量，使其达到管理办法的要求。
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权利要求
1.一种准噶尔乌头总生物碱的提取方法，其特征在于，包括以下步骤(O药材准备将准噶尔乌头干燥根粉碎，过10 40目筛；(2)提取在准噶尔乌头药材粉末中加入3 6倍体积量的70% 100%的低级醇溶液， 在60°C 100°C温度回流提取8h 12h，冷却后过滤得到提取液，提取液用无机碱溶液调 pH值至9 10 ;其中，所述低级醇溶液用稀盐酸调pH值为2 3 ;所述低级醇溶液为乙醇溶液或甲醇溶液；所述无机碱溶液为氨水或氢氧化钠溶液；(3)萃取将步骤(2)得到的提取液用等体积的萃取剂萃取3次，合并3次的萃取液，减压回收溶剂至干，得到固体物质组分A即准噶尔乌头总生物碱；其中，所述萃取剂为乙酸乙酯和/或氯仿。
2.根据权利要求I所述的提取方法，其特征在于，所述准噶尔乌头总生物碱通过大孔吸附树脂纯化组分A用40% 70%的乙醇溶液溶解，将乙醇溶解液加入大孔吸附树脂色谱柱中，先用纯水洗脱，然后用20% 50%的乙醇溶液洗脱，最后用60% 100%的乙醇溶液洗脱，收集60% 100%乙醇溶液洗脱液，减压回收溶剂至干，得到进一步纯化的准噶尔乌头总生物碱组分B。
3.根据权利要求2所述的提取方法，其特征在于，所述准噶尔乌头总生物碱通过聚酰胺纯化组分B用有机溶剂溶解，将溶解液加入到聚酰胺色谱柱上，先用石油醚和丙酮混合溶剂I进行洗脱，然后用石油醚和丙酮混合溶剂II进行洗脱，收集石油醚和丙酮混合溶剂 II洗脱液，减压回收溶剂至干，得到进一步纯化的准噶尔乌头总生物碱组分C ;其中，石油醚和丙酮混合溶剂I中石油醚和丙酮体积比为8 15:1，石油醚和丙酮混合溶剂II中石油醚和丙酮体积比为2 6:1。
4.根据权利要求3所述的提取方法，其特征在于，所述准噶尔乌头总生物碱通过阳离子交换树脂纯化用稀盐酸调节70% 100%的低级醇溶液pH值至2 3，将其加入组分C 中，至整个溶液PH值为2，将所得溶液加入到阳离子交换树脂色谱柱中，先用去离子水冲洗该色谱柱至中性，然后用浓度为5% 40%的无机碱溶液洗脱，再将树脂从色谱柱中取出， 用70% 100%的低级醇溶液在60V 100°C回流提取4h 10h，收集提取液，减压回收溶剂至干，得到进一步纯化的准噶尔乌头总生物碱组分D。
5.根据权利要求2所述的提取方法，其特征在于所述填料大孔吸附树脂的体积应为溶解组分A的40% 70%乙醇溶液体积的4 8倍；所述纯水用量为2 6倍色谱柱体积； 所用20% 50%的乙醇溶液用量为2 5倍色谱柱体积；所用60% 100%的乙醇溶液用量为2 6倍色谱柱体积。
6.根据权利要求3所述的提取方法，其特征在于所述有机溶剂选自乙酸乙酯、氯仿和丙酮中的一种或多种；所述填料聚酰胺的体积应为有机溶剂体积的4 10倍，石油醚和丙酮混合溶剂I用量为I 5倍量色谱柱体积；所述石油醚和丙酮混合溶剂II用量为4 8 倍量色谱柱体积。
7.根据权利要求4所述的提取方法，其特征在于所述阳离子交换树脂为强酸型聚苯乙烯阳离子交换树脂；所述无机碱溶液为氨水和氢氧化钠溶液；所述阳离子交换树脂质量为组分C质量的5 10倍；所述无机碱溶液体积为树脂体积的I 4倍；所述70% 100% 的低级醇溶液体积为树脂体积的I 5倍。
8.根据权利要求2所述的提取方法，其特征在于，包括以下步骤(O药材准备将准噶尔乌头干燥根粉碎，过20目筛；(2)提取在准噶尔乌头药材粉末中加入5倍体积量的浓度为95%的乙醇溶液，在70°C 温度下回流提取8 h，期间每隔30min搅拌均匀一次，冷却后过滤得到提取液，提取液用氨水调PH值至9 10 ;其中，所述乙醇溶液用稀盐酸调pH值为2 3 ;(3)萃取将步骤(2)得到的提取液用等体积的乙酸乙酯萃取3次，合并3次的乙酸乙酯萃取液，减压回收溶剂至干，得到固体物质组分A即准噶尔乌头总生物碱；(4)大孔吸附树脂纯化组分A用50%的乙醇溶液溶解，将乙醇溶解液加入大孔吸附树脂色谱柱中，先用纯水洗脱，然后用50%的乙醇溶液洗脱，最后用75%的乙醇溶液洗脱， 收集75%乙醇溶液洗脱液，减压回收溶剂，得到固体状物质即为生物碱组分B;其中，所述填料大孔吸附树脂的体积应为溶解组分A的50%乙醇溶液体积的6倍；所述纯水量用量为 3倍色谱柱体积；所用50%的乙醇洗脱用量为3倍色谱柱体积；所用75%的乙醇洗脱用量为4倍色谱柱体积。
9.根据权利要求6所述的提取方法，其特征在于所述有机溶剂为乙酸乙酯；所述填料聚酰胺的体积应为乙酸乙酯体积的8倍，石油醚和丙酮混合溶剂I用量为2倍量色谱柱体积，其中石油醚和丙酮体积比为10:1 ;所述石油醚和丙酮混合溶剂用量II为5倍量色谱柱体积的，其中石油醚和丙酮体积比为4:1。
10.根据权利要求7所述的提取方法，其特征在于，所述准噶尔乌头总生物碱通过阳离子交换树脂纯化用稀盐酸调节95%的乙醇溶液pH值至2 3，将其加入组分C中，使整个溶液PH为2，将所得溶液加入到强酸型聚苯乙烯阳离子交换树脂中，先用去离子水冲洗该色谱柱至中性，然后用浓度为10 %的氨水洗脱，再将树脂从色谱柱中取出，用80 %的乙醇溶液在80°C回流提取5 h，收集乙醇提取液，减压回收溶剂，得到固体物质即本发明的准噶尔乌头总生物碱；其中，所述树脂质量为组分C质量的9倍；所述氨水体积为树脂体积的I 倍；所述80%的乙醇溶液体积为树脂体积的3倍。
全文摘要
本发明公开了一种准噶尔乌头总生物碱的提取方法，包括以下步骤药材准备、提取、萃取、大孔吸附树脂纯化、聚酰胺纯化和阳离子交换树脂。本发明提供了一套优化组合的生物碱制备方法，将准噶尔乌头提取物中生物碱的含量从0.167％～0.24％大大提升了，专属性强，发明所建立起来的制备方法可以获得纯度较高、杂质较少、符合国家《药品注册管理办法》要求的准噶尔乌头生物碱有效部位。
文档编号A61K125/00GK102579612SQ20121008402
公开日2012年7月18日 申请日期2012年3月27日 优先权日2012年3月27日
发明者刘悦, 张帆, 杨丽娟, 蔡冬梅 申请人:新疆医科大学